本發(fā)明涉及一種中藥提取工藝，具體涉及一種膜分離制備華蟾素的方法。
背景技術(shù)：
：華蟾素來源于中華大蟾蜍(BufobufogargarizansCantor)或黑眶蟾蜍(BufomelanostictusSchneider)的皮經(jīng)過提取分離得到，是我國自行研制的二類新藥和國家中藥保護(hù)品種，具有調(diào)節(jié)免疫、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、抗乙肝病毒的藥理作用，在抗腫瘤、治療慢性乙型肝炎以及其他疾病的臨床治療上已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用。華蟾素注射液、口服液、片劑均為我國自行研制、獨(dú)家生產(chǎn)的國家中藥保護(hù)品種。在多年的研究和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)積累中發(fā)現(xiàn)，華蟾素的提取工藝對(duì)臨床療效的影響起著至關(guān)重要的作用。目前已報(bào)道的華蟾素提取工藝主要有水提醇沉法、醇提水沉法，但這些傳統(tǒng)方法對(duì)華蟾素有效成分的提取效率低，從而導(dǎo)致生產(chǎn)成本偏高，因此需要探索一種基于膜分離技術(shù)制備華蟾素的工藝來提高有效成分含量，提高生產(chǎn)效率。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種膜分離制備華蟾素的方法，以達(dá)到提高有效成分含量，提高生產(chǎn)效率的目的。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：一種膜分離制備華蟾素的方法，其包括以下步驟：S1：取干蟾皮，洗凈晾干，剪碎，得凈蟾皮；S2：將凈蟾皮加入熱回流提取罐中，加入提取溶劑，熱回流提取3次，合并提取液，得華蟾素醇提液；S3：將華蟾素醇提液減壓濃縮回收乙醇，濃縮至濃縮設(shè)備收液器無溶劑冷凝時(shí)停止?jié)饪s，得華蟾素醇提浸膏；S4：向華蟾素醇提浸膏加入蒸餾水，過濾，得華蟾素浸膏水溶液；S5：華蟾素浸膏水溶液放入膜分離裝置中，開泵預(yù)平衡，超濾液和截留液返回循環(huán)藥液，待藥液循環(huán)平衡30min，至藥液全部濾過，收集超濾液；S6：將S5所得超濾液進(jìn)行減壓濃縮，在80℃濃縮收膏，得華蟾素提取物。優(yōu)選的是，所述的膜分離制備華蟾素的方法，其中，S2中，所述提取溶劑為75％的乙醇溶液。優(yōu)選的是，所述的膜分離制備華蟾素的方法，其中，S2中，所述凈蟾皮與提取溶劑的質(zhì)量比為1∶5-10。優(yōu)選的是，所述的膜分離制備華蟾素的方法，其中，S3中，濃縮溫度為45-55℃，濃縮時(shí)的真空度為-0.07～-0.09MPa。優(yōu)選的是，所述的膜分離制備華蟾素的方法，其中，S4中，所述蒸餾水的加入量是華蟾素醇提浸膏質(zhì)量的5倍。優(yōu)選的是，所述的膜分離制備華蟾素的方法，其中，S5中，超濾膜截留分子量為800，操作壓力為0.6-0.8MPa，分子截留溫度為20-40℃。優(yōu)選的是，所述的膜分離制備華蟾素的方法，其中，S6中，減壓濃縮的真空度為-0.08MPa。本發(fā)明的有益效果是：本案通過對(duì)現(xiàn)有華蟾素的提取工藝的改進(jìn)，引入了膜分離提取技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)有效物質(zhì)的高效提取，提高了產(chǎn)率，滿足了工業(yè)化生產(chǎn)的需要，為膜分離提取技術(shù)在華蟾素生產(chǎn)中的應(yīng)用打下基礎(chǔ)。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實(shí)施。1、本案方法(1)取干蟾皮，洗凈后晾干，剪碎，得凈蟾皮；(2)將凈蟾皮加入熱回流提取罐中，加入75％的乙醇溶液為提取溶劑，蟾皮：溶劑＝1:5-10(w/w)，80℃熱回流提取3次，合并提取液，得華蟾素醇提液；(3)將華蟾素醇提液減壓濃縮回收乙醇，濃縮溫度45-55℃，真空度-0.07～-0.09MPa，濃縮至濃縮設(shè)備受液器無溶劑冷凝時(shí)停止?jié)饪s，得華蟾素醇提浸膏；(4)向華蟾素醇提浸膏加入5倍量(w/w)的蒸餾水，過濾，得華蟾素浸膏水溶液；(5)華蟾素浸膏水溶液放入膜分離裝置中，開泵預(yù)平衡，超濾液和截留液返回循環(huán)藥液，待藥液循環(huán)平衡30min，至藥液全部濾過，收集超濾液；超濾膜截留分子量為800(g/mol)，操作壓力0.8MPa，分子截留溫度30℃；因?yàn)槿A蟾素中有效成分的(數(shù)均)分子量均在800以下，而醇提的雜質(zhì)主要為蛋白質(zhì)、脂肪、多糖等大分子物質(zhì)，因此選擇超濾膜的截留分子量為800；(6)將步驟(5)所收集的超濾液減壓濃縮，真空度-0.08MPa，80℃濃縮收膏，得華蟾素提取物；(7)重復(fù)5次實(shí)驗(yàn)，按照3.2測(cè)定提取液中吲哚類生物堿的含量。2、傳統(tǒng)水煎提取方法取干蟾皮100g，洗凈，加水5～6倍，煎煮二次，第一次45分鐘，第二次30分鐘，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1～1.2(85±5℃)，冷卻至40℃，加乙醇使含醇量達(dá)60％，攪勻，靜置24小時(shí)，取上清液回收乙醇至無醇味，加乙醇使含醇量達(dá)85％，攪勻，靜置48小時(shí)，濾過，回收乙醇至無醇味，得華蟾素提取物。重復(fù)5次實(shí)驗(yàn)，按照3.2測(cè)定提取液中吲哚類生物堿的含量。3、檢測(cè)方法(國家藥品標(biāo)準(zhǔn))3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線：取5-羥色胺鹽酸鹽對(duì)照品15.03mg，置100ml量瓶中，用純化水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加純化水至刻度，搖勻，得對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，分別置10ml量瓶中，加15％對(duì)二甲氨基苯甲醛鹽酸(2→3)溶液5ml，搖勻，加純化水至刻度，搖勻，室溫放置35min，照分光光度法(《中國藥典》2010版，附錄VB)，以純化水為空白，在555nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。所得曲線的回歸方程為Y＝0.0389X+0.0276，R＝0.9994，表明吲哚類生物堿在0.139～0.608μg·ml-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。3.2華蟾素浸膏中吲哚類生物堿含量測(cè)定精密量取華蟾素浸膏適量，離心，稀釋至合適倍數(shù)，然后按3.1項(xiàng)下規(guī)定的方法，自“加15％對(duì)二甲氨基苯甲醛鹽酸(2→3)溶液”起，依法測(cè)定吸收度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算得出供試品溶液吲哚類生物堿的含量。4、制備方法比較表1100g原料所得提取物中吲哚類生物堿的含量比較序號(hào)本案方法(mg)傳統(tǒng)方法(mg)159.5923.76260.8621.40360.6422.04459.6121.12560.8020.22平均值60.3021.71由表1可見，本案方法可顯著提高華蟾素提取物吲哚類生物堿的含量，顯著提高華蟾素提取物中有效成分的含量。盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實(shí)施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)。當(dāng)前第1頁1 2 3