一種總蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物制劑領域，具體涉及天然活性成分總蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液及制 備方法。
【背景技術】
[0002] 華蟾素提取自中藥中華大蟾蜍皮，系采用傳統(tǒng)方法水提醇沉法值得的中藥注射 液，華蟾素注射液抗腫瘤療效顯著。經(jīng)研宄發(fā)現(xiàn)，華蟾素注射液中富含水溶性吲哚類生物堿 (如5-羥色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼、蟾蜍硫黃等）類、氨基酸等成分，而具抗腫瘤活性的總 蟾毒內(nèi)酯類（蟾毒配基類、蟾蜍毒素類）含量卻極低。臨床認為華蟾素局部靜脈刺激反應、 心律失常、皮膚反應、哮喘等均為水溶性吲哚類生物堿成分的藥理作用所致，且目前尚無生 物堿類具有抗腫瘤活性的研宄報道，因此，提取富集華蟾素中的內(nèi)酯類成分和去除生物堿 及其他雜質成分成了研宄的重點。
[0003] 對華蟾素提取液進行分離純化，得華蟾素有效部位一一總蟾毒內(nèi)酯，主要含有 蟾毒配基（resibufogenin)、華蟾酥毒基（cinobufagin)、蟾毒靈（bufalin)、蟾毒它靈 (Bufotalin)、日蟾毒它靈 _3_ 半辛二酸醋（Gamabufotalin-3-hydrogen Suberate)、蟾餘 靈-3-丁二酰精氨酸酯、華蟾毒精-3-丁二酰精氨酸酯等內(nèi)酯類成分。研宄表明，總蟾毒內(nèi) 脂具有明顯的抗腫瘤作用，而且還能將腫瘤細胞轉化為正常細胞（誘導腫瘤細胞分化）、誘 導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞新生血管形成、降低腫瘤轉移等作用。目前，臨床上已有類 似總蟾毒內(nèi)脂類注射劑且已廣泛應用于中晚期腫瘤和慢性乙型肝炎病人。但在臨床應用過 程中常出現(xiàn)靜脈輸注不暢、輸液部位紅腫、靜脈內(nèi)疼痛等血管刺激性不良反應，最終制約了 其進一步發(fā)展。
[0004] 脂質體（Lipsome)是磷脂、膽固醇等兩性物質分散于水中形成的內(nèi)部為水相的脂 質雙分子層閉合囊泡。作為抗癌藥物的載體，可以提高藥物治療指數(shù)，降低抗癌藥物毒性和 減少抗癌藥物副作用。由于它的組成是細胞膜的成分，因此可以體內(nèi)正常代謝和消除。脂質 體的靶向性可顯著降低藥物對非靶器官的毒副作用從而增強療效。因此，脂質體載藥有明 顯的優(yōu)越性，成為藥劑研宄的重點和熱點。但是脂質體性質不穩(wěn)定，易受周圍環(huán)境的影響， 并且在儲存的過程中，容易發(fā)生藥物的滲漏現(xiàn)象。而脂質體注射液的應用，大大提高了制劑 的穩(wěn)定性和生物利用度，提高了產(chǎn)品的質量，減少了毒副反應，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了以總蟾毒內(nèi)酯為模型藥物，采用脂質體包裹的辦法將其制成注射 液。以期改善總蟾毒內(nèi)酯毒性強、半衰期短等缺陷；此外，本發(fā)明的另一目的在于提供一種 總蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液的制備方法。
[0006] 為解決上述技術問題，本發(fā)明所采取的技術方案是：
[0007] 本發(fā)明首先公開了一種總蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液，它包括有效量的總蟾毒內(nèi)酯、 磷脂、膽固醇、抗氧化劑、PBS液、有機溶劑和等滲注射用水。
[0008] 各組分的用量為：總蟾毒內(nèi)酯500mg - 5g，磷脂2. 5g-200g，膽固醇IOOmg - 50g， 抗氧化劑Img - 10g，注射用水適量。同時滿足總蟾毒內(nèi)酯、磷脂、膽固醇三者的重量比為 1 : 5 ~40 : 1 ~10〇
[0009] 優(yōu)選的組分用量配比為總蟾毒內(nèi)酯、磷脂、膽固醇三者的重量比為1 : 20 : 5。
[0010] 其中所述的磷脂為天然磷脂中的大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃磷脂、氫化大豆 磷脂中的一種或多種；合成磷脂中的二月桂酰磷脂酰膽堿、二豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰 磷脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂磷脂酰甘油的一種或多種。優(yōu)選為大豆磷脂。
[0011] 所述的抗氧化劑可以是維生素 E，其與磷脂的重量比為1 : 1000~1 : 10,優(yōu)選 為 1:100〇
[0012] 本發(fā)明提供的總蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液，具有以下優(yōu)點：
[0013] 1.本發(fā)明提供的總蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液降低總蟾毒內(nèi)酯的毒性、延長藥物在體 內(nèi)的作用時間以及局部聚集量，進而提高藥物在體內(nèi)的生物利用度；
[0014] 2.本發(fā)明還公開了一種總蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液的制備方法，包括以下步驟：
[0015] (1)備置下述重量或體積的原料：
[0016]
[0017] (2)將總蟾毒內(nèi)醋、磷脂、膽固醇、維生素 E溶于有機溶劑中并混合均勻；用旋轉蒸 發(fā)儀將溶液中的有機溶劑減壓除去，在玻璃壁上形成脂質薄膜；
[0018] (3)加入磷酸緩沖液，攪拌30min，在室溫下放置2h，使薄膜吸脹；再在室溫下攪拌 2h，得到脂質體混懸液；得到的脂質體混懸液經(jīng)過高壓乳勻或者超聲波分散處理，均化脂質 體；
[0019] (4)將得到的總蟾毒內(nèi)醋脂質體在4000r/min離心15min，收集上清液加等滲注射 用水溶液至1000 mL ;
[0020] (5)經(jīng)超濾膜除去細菌和熱源、灌封，每支2mL，流通蒸汽消毒30min，即得總蟾毒 內(nèi)酯脂質體注射液，在〇- 4°C儲存。
[0021] 上述脂質體的磷酸緩沖液的pH為6- 8。
[0022] 上述制備脂質體的有機溶劑可以是氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙醚中的一種或多種， 優(yōu)選為丙酮。
[0023] 本發(fā)明的總蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液，既能顯著提高總蟾毒內(nèi)酯的水溶性，又能降 低其血管刺激性，減少它的毒副作用。并且脂質體制成注射劑后，大大提高了制劑的穩(wěn)定性 和生物利用度，提高了產(chǎn)品質量。
[0024] 本發(fā)明所制備的蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液用反透析法檢測，以包封率做質量評價， 所測得的總蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液的包封率為59. 85% -88. 99%;最優(yōu)的，所測得的蟾毒內(nèi) 酯非離子表面活性劑泡囊包封率為88. 99%。
[0025] 本發(fā)明中所述磷脂、膽固醇、抗氧化劑及有機溶劑的不同種類及其不同用量對蟾 毒內(nèi)酯脂質體注射液的包封率、載藥量起重要影響作用。其中，總蟾毒內(nèi)酯、磷脂、膽固醇、 抗氧化劑三者的重量比為1 : 20 : 5 :0. 2,且磷脂為大豆磷脂，抗氧化劑為維生素 E，制備 過程中所用有機溶劑為乙醚，以上所制備的總蟾毒脂質體注射液質量評價較好；優(yōu)選的制 備方法和工藝所制得的總蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液包封率為88. 99%，質量評價最好。因為， 總蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液的包封率越大，載藥量越大，其藥物的靶向性越好；單位投藥量包 封率越大，其可作用于病灶的藥量越大，效果越好。
[0026] 改變磷脂、抗氧化劑等的種類或用量，或者改變有機溶劑種類，所制備的蟾毒內(nèi)酯 脂質體注射液的包封率顯著降低。例如，在其他條件均一致的情況下，僅改變磷脂的種類， 磷脂分別為大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、二硬脂磷脂酰甘油，所制得的蟾毒內(nèi)酯脂質體注射液的 質量評價存在明顯差異，包封率為68. 98% -88. 99%。
【具體實施方式】
[0027] 下面結合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而 更為清楚。但是應理解所述實施例僅是范例性的，不對本發(fā)明的范圍構成任何限制。本領 域技術人員應該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術方案的細節(jié) 和形式進行修改或替換，但這些修改或替換均落入本發(fā)明的保護范圍。
[0028] 實施例1總蟾毒內(nèi)酯固體脂質體注射液的制備
[0029] 將總蟾毒內(nèi)酯lg、大豆磷脂20g、膽固醇5g、維生素 E0. 2g溶于適量丙酮中并混合 均勻；用旋轉蒸發(fā)儀將溶液中的有機溶劑減壓除去，在玻璃壁上形成脂質薄膜；加入PH7.4 磷酸緩沖液，攪拌30min，在室溫下放置2h，使薄膜吸脹；再在