本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類嘧啶并1,2,4–三氮唑結(jié)構(gòu)單元的化合物、制備方法及其在制備以組蛋白賴氨酸特異性去甲基化酶(以下簡稱LSD1)為靶標(biāo)的抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

腫瘤是嚴(yán)重威脅著人類疾病，盡管已上市的抗腫瘤藥物很多，但這些藥物中依然存在一些不足，比如產(chǎn)生較大毒副作用、靶向性弱以及容易產(chǎn)生耐藥性等。靶向藥物不僅效果好而且副作用比常規(guī)的治療方法小得多，因此，其研發(fā)越來越受到重視。

共價修飾在表觀遺傳中非常重要，組蛋白共價修飾包括組蛋白磷酸化、乙?；?、泛素化、甲基化等，目前對組蛋白修飾機制中的乙酰化與甲基化研究比較多。組蛋白甲基化在2004年之前被認(rèn)為永久不可逆的，LSD1是被首次發(fā)現(xiàn)可逆催化去除組蛋白H3K4和H3K9的單、雙甲基化，進(jìn)而調(diào)節(jié)組蛋白與其他蛋白的相互作用。

LSD1在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)量明顯高于正常細(xì)胞，包括前列腺癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、眼癌等。實驗證明，一方面可以通過RNAi技術(shù)在細(xì)胞水平降低LSD1表達(dá)量；另一方面，利用小分子抑制劑在細(xì)胞水平降低LSD1的活化能抑制細(xì)胞增殖；同時誘導(dǎo)一些細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)。LSD1抑制劑作為表觀遺傳學(xué)用于闡述生物學(xué)功能的研究工具，因此，其可以作為用于腫瘤預(yù)防和治療的表觀遺傳學(xué)藥物，已引起科學(xué)界的研究熱潮。

另外，已有報道證實，嘧啶并1,2,4–三氮唑類化合物有廣泛的生物活性，例如抗腫瘤、抗炎、抗病毒以及抗菌等。但是將嘧啶并1,2,4–三氮唑類化合物與LSD1相聯(lián)系起到抗腫瘤作用的報道很少，所以該方向具有非常重要的研究價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的一方面在于提供該類化合物的制備方法，及其在LSD1抑制劑和抗腫瘤藥物中的應(yīng)用；另一方面是提供嘧啶并1,2,4–三氮唑類化合物，為尋找針對LSD1為靶點的新型抗腫瘤藥物開辟新途徑。

本發(fā)明所涉及的結(jié)構(gòu)通式為：

R為下列基團：

此類嘧啶并1,2,4–三氮唑類化合物的制備路線如下：

(1)化合物3的制備方法：

丙酮中，將2-氨基-5-巰基-1，2，4-三氮唑(1)在堿性條件下與芐氯(2a)或2-氯甲基苯并咪唑(2b)反應(yīng)，薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)體系，待反應(yīng)完全，所得產(chǎn)物經(jīng)抽濾，柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得化合物3a或3b。所用的堿為三乙胺或碳酸鉀、碳酸鈉中的一種，反應(yīng)溫度60-70℃。

(2)化合物4的制備方法：

冰醋酸中，將化合物3加入反應(yīng)瓶中，隨后緩慢滴加乙酰乙酸乙酯，反應(yīng)溫度110-120℃。薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)體系，待反應(yīng)完全，將體系倒入冰水中，清洗，干燥，得到化合物4a或4b。

(3)化合物5的制備方法：

將化合物4加入至反應(yīng)瓶中，緩慢滴加三氯氧磷，反應(yīng)溫度80-90℃。薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)體系，待反應(yīng)完全，將反應(yīng)體系緩慢滴加入冰水中，經(jīng)清洗，萃取，干燥，抽濾，得化合物5a或5b。

(4)化合物6的制備方法：

乙醇中，將化合物5加入反應(yīng)瓶后，加入R-H，常溫反應(yīng)。薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)體系，待反應(yīng)完全，固體析出，抽濾，濾餅，得化合物6。

R基團同上。

本發(fā)明優(yōu)點：將嘧啶并1,2,4–三氮唑類化合物與LSD1化合物結(jié)合制備系列具有抗腫瘤活性化合物。合成方法可行，收率高，總收率達(dá)69％以上。將該類化合物可以應(yīng)用于以組蛋白賴氨酸特異性去甲基化酶(以下簡稱LSD1)為靶標(biāo)的抗腫瘤藥物中，為針對LSD1為靶點的新型抗腫瘤藥物開辟了新途徑。

具體實施方式

為了對本發(fā)明進(jìn)行更好的解釋，實施例如下：

實施例1

化合物3a的制備

將2-氨基-5-巰基-1，2，4-三氮唑(1g，8.61mmoL)和碳酸鈉(1.37g,12.92mmoL)加入至反應(yīng)瓶中后，加入20mL丙酮，緩慢滴加芐氯(1.13mL，9.47mmoL)在60℃下回流反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，直接抽濾，濾液經(jīng)柱層析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)得到純品。產(chǎn)率67.57％，白色固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.41-7.18(m,5H),4.34(s,2H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ152.19,147.08,136.55,128.79,128.43,127.48,35.41.HRMS(ESI):m/z calcd for C₉H₉N₄S(M-H)^-,205.0548；found,205.0548.

化合物4a的制備

將化合物3a(1g，4.85mmoL)加入至反應(yīng)瓶，加入冰醋酸20mL后，緩慢滴加乙酰乙酸乙酯(612.57μL，4.85mmoL)在120℃加熱回流，TLC監(jiān)測反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系，投入冰水中，有大量白色固體析出，直接抽濾得白色固體。將固體置于60℃烘箱中干燥6h得純品化合物4a。產(chǎn)率84.83％，白色固體。熔點240-245℃。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.17(s,1H),7.44(d,J＝7.1Hz,2H),7.32(t,J＝7.3Hz,2H),7.26(d,J＝7.2Hz,1H),5.80(s,1H),4.43(s,2H),2.29(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ161.92,154.75,151.09,150.63,137.35,128.77,128.38,127.22,98.46,34.48,18.43.HRMS(ESI):m/z calcd forC₁₃H₁₁N₄OS(M-H)^-,271.0654；found,271.0660.

化合物5a的制備

將化合物4a(1.12g，4.11mmoL)加入至反應(yīng)瓶中，緩慢滴加20mL三氯氧磷，在90℃加熱回流，TLC監(jiān)測反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系小心緩慢滴加入冰水中，期間會放出大量的熱，會有淡黃色固體析出即化合物Ⅳ，用二氯甲烷萃取，無水硫酸鎂干燥2h后，抽濾，濃縮得純品化合物5a。產(chǎn)率91.98％，淺綠色固體。HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂ClN₄S(M-H)^-,291.0471；found,291.0463.

化合物6a的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)和3,4,5-三甲氧基苯胺(94.51mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6a。白色固體。熔點：196-207℃。產(chǎn)率79.12％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.95(s,1H),7.48(d,J＝7.2Hz,2H),7.32(t,J＝7.4Hz,2H),7.26(d,J＝7.2Hz,1H),6.76(s,2H),6.40(s,1H),4.54(s,2H),3.78(s,6H),3.69(s,3H),2.40(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.46,164.00,155.76,153.24,145.14,138.02,135.67,132.32,128.90,128.43,127.21,102.55,89.64,60.08,56.02,34.49,24.66.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₂H₂₂N₅O₃S(M-H)^-,436.1443；found,436.1451.

實施例2 化合物6b的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，滴加過量氨水，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6b。黃色固體。熔點：196-201℃。產(chǎn)率89％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.93(s,2H),7.55-7.43(m,2H),7.37-7.28(m,2H),7.24(dd,J＝8.4,6.1Hz,1H),6.12(s,1H),4.49(s,2H),2.37(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.29,162.84,155.87,147.50,138.07,128.92,128.38,127.16,90.25,34.36,24.37.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M-H)^-,270.0813；found,270.0821.

實施例3 化合物6c的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶，加入2mL乙醇，滴加苯胺(70.65μL，773.81μmoL)，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6c。白色固體。熔點：189-192℃。產(chǎn)率89％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.71(s,1H),7.51-7.44(m,4H),7.36-7.27(m,5H),7.26-7.20(m,1H),6.30(s,1H),4.54(s,2H),2.51(s,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ166.54,164.77,155.92,144.35,137.57,135.76,130.02,129.11,128.53,127.36,126.92,123.82,89.01,35.80,25.41.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₉H₁₆N₅S(M-H)^-,346.1126；found,346.1135.

實施例4 化合物6d的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)和對甲基苯胺(55.28mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6d。白色固體。熔點：240-247℃。產(chǎn)率89％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.03(s,1H),7.51(d,J＝6.1Hz,2H),7.30(s,7H),6.36(s,1H),4.57(s,2H),2.45(s,3H),2.36(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ165.10,159.74,152.19,146.52,137.51,136.70,132.89,130.08,128.88,128.41,127.29,124.97,90.27,34.51,21.74,20.54.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₀H₁₈N₅S(M-H)^-,360.1283；found,360.1292.

實施例5化合物6e的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)和對氟苯胺(57.32mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6e。黃色固體。熔點：227-231℃。產(chǎn)率92％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.01(s,1H),7.49(m,4H),7.41-7.22(m,5H),6.37(s,1H),4.57(s,2H),2.45(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ165.20,161.90,160.23,159.47,152.44,146.64,137.60,132.00,128.95,128.48,127.50(J＝8Hz),127.36,116.54(J＝23Hz),90.38,34.58,22.00.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₉H₁₅FN₅S(M-H)^-,364.1032；found,364.1041.

實施例6 化合物6f的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)和對氨基苯甲酸(70.75mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6f。黃色固體。熔點：186-190℃。產(chǎn)率：93％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.89(s,1H),10.32(s,1H),8.02(d,J＝8.6Hz,2H),7.57(d,J＝8.5Hz,2H),7.49(d,J＝7.2Hz,2H),7.32(t,J＝7.4Hz,2H),7.25(t,J＝7.2Hz,1H),6.62(s,1H),4.56(s,2H),2.44(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ166.69,164.70,164.32,155.79,143.96,141.24,137.94,130.68,128.89,128.43,127.30,127.23,122.76,90.48,34.57,24.71.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₀H₁₆N₅O₂S(M-H)^-,390.1025；found,390.1036.

實施例7 化合物6g的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)和哌嗪(88.87mg，1.03μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6g。黃色固體。熔點：173-176℃。產(chǎn)率76％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.46(d,J＝7.2Hz,2H),7.31(t,J＝7.4Hz,2H),7.24(t,J＝7.3Hz,1H),6.46(s,1H),4.45(s,2H),3.67(t,J＝4Hz,4H),2.86(m,J＝4Hz,4H),2.43(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ169.05,168.97,162.35,154.11,143.21,134.00,133.57,132.37,99.52,54.04,50.30,39.61,29.71.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₇H₂₁N₆S(M+H)⁺,341.1548；found,341.1542.

實施例8 化合物6h的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶，加入2mL乙醇，滴加嗎啉(89.89μL，1.03μmoL)，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6h。白色固體。熔點：204-207℃。產(chǎn)率89％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.45(d,J＝7.2Hz,2H),7.32(t,J＝7.4Hz,2H),7.24(t,J＝7.3Hz,1H),6.50(s,1H),4.45(s,2H),3.77(s,4H),3.75(s,4H),2.45(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.01,163.91,157.00,148.66,137.90,128.73,128.34,127.13,94.33,65.49,s 47.76,34.39,24.48.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₇H₂₀N₅OS(M+H)⁺,342.1389；found,342.1381.

實施例8 化合物6i的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，滴加羥乙基哌嗪(130.79μL，1.03μmoL)，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6i。黃色固體。熔點：136-142℃。產(chǎn)率77％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.46(d,J＝7.2Hz,2H),7.32(t,J＝7.4Hz,2H),7.24(t,J＝7.3Hz,1H),6.48(s,1H),4.48(s,1H),4.45(s,2H),3.75(d,J＝4.5Hz,4H),3.55(d,J＝3.0Hz,2H),2.62(d,J＝4.5Hz,4H),2.47(t,J＝6.1Hz,2H),2.44(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ163.89,163.77,157.06,148.64,137.93,128.77,128.33,127.13,94.40,59.98,58.47,52.44,47.46,34.37,24.46.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₉H₂₅N₆OS(M+H)⁺,385.1811；found,385.1802.

實施例9 化合物6j的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)和吡嗪酰肼(75.06mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6j。黃色固體。熔點：196-200℃。產(chǎn)率90％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.38(s,1H),10.45(s,1H),9.25(d,J＝1.2Hz,1H),8.96(s,1H),8.83(s,1H),7.51(d,J＝7.1Hz,3H),7.32(t,J＝7.3Hz,2H),7.26(t,J＝7.3Hz,1H),6.36(s,1H),4.55(s,2H),2.40(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ148.19,143.96,143.58,137.91,128.93,128.44,127.25,34.41.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₈H₁₇N₈OS(M+H)⁺,393.1246；found,393.1235.

實施例10 化合物6k的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，滴加N-(3-氨丙基)嗎啉(151.83μL，1.03μmoL)，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6k。白色固體。熔點：193-196℃。產(chǎn)率85％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.36(t,J＝5.7Hz,1H),7.51-7.42(m,2H),7.35-7.28(m,2H),7.27-7.20(m,1H),6.30(s,1H),4.50(s,2H),3.61(t,J＝4.5Hz,4H),3.42(q,J＝6.3Hz,2H),2.45-2.29(m,9H),1.78(m,2H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ163.98,163.29,155.48,146.31,137.87,128.79,128.34,127.12,87.75,65.96,55.93,53.21,40.56,34.38,24.62,24.38.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₀H₂₇N₆OS(M+H)⁺,399.1967；found,399.1960.

實施例11 化合物6L的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，滴加1-(3-氨基丙基)咪唑(77.97μL，619.05μmoL)，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6L。白色固體。熔點：209-213℃。產(chǎn)率91％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.23(t,J＝6.0Hz,1H),7.67(s,1H),7.52-7.42(m,2H),7.31(m,2H),7.25(m,1H),7.22(s,1H),6.91(s,1H),6.20(s,1H),4.50(s,2H),4.06(t,J＝7.0Hz,2H),3.33(m,2H),2.41(s,3H),2.06(p,J＝6.9Hz,2H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ163.96,163.39,155.52,146.23,137.96,137.25,128.83,128.32,127.11,119.25,87.79,43.48,34.39,29.69,24.61.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₉H₂₂N₇S(M+H)⁺,380.1657；found,380.1649.

實施例12 化合物6m的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)和叔丁醇鉀(86.83mg，773.81μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，滴加1-(2-羥乙基)吡咯烷(90.48μL，773.81μmoL)，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6m。黃色固體。熔點：197-200。產(chǎn)率69％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.51-7.42(m,2H),7.32-7.25(m,2H),7.25-7.19(m,1H),6.25(s,1H),4.53(s,2H),4.49(t,J＝6.1Hz,2H),3.09(t,J＝6.1Hz,2H),2.75-2.63(m,4H),2.62(s,3H),1.90-1.76(m,4H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ167.76,166.15,157.16,154.17,137.49,129.17,128.48,127.32,90.14,70.10,54.76,53.78,35.69,29.70,25.49,23.61.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₉H₂₄N₅OS(M+H)⁺,370.1702；found,370.1695.

實施例13 化合物6n的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，滴加3-氨基丙醇(47.33μL，619.05μmoL)，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6n。白色固體。熔點：199-203℃。產(chǎn)率74％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.07(t,J＝6.0Hz,1H),7.47(d,J＝7.2Hz,2H),7.31(t,J＝7.3Hz,2H),7.25(d,J＝7.2Hz,1H),6.29(s,1H),4.62(t,J＝4.9Hz,1H),4.49(s,2H),3.51(m,2H),3.42(m,2H),2.41(s,3H),1.84–1.69(m,2H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ163.94,163.35,155.52,146.28,137.96,128.85,128.32,127.10,87.71,58.25,34.38,31.22,24.62.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₆H₂₀N₅OS(M+H)⁺,330.1389；found,330.1379.

實施例14 化合物6o的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)和4-哌啶基哌啶(104.18mg，619.05μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6o。黃色固體。熔點：186-189℃。產(chǎn)率71％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.44(d,J＝7.2Hz,2H),7.28(d,J＝7.0Hz,2H),7.21(t,J＝7.3Hz,1H),6.03(s,1H),4.47(s,2H),3.14(s,1H),2.97(m,6H),2.50(s,3H),2.29(d,J＝12.0Hz,2H),2.00-1.83(m,6H),1.58(s,2H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ165.89,164.46,157.48,148.64,137.57,128.99,128.52,127.34,94.52,62.96,50.00,47.14,35.57,26.18,25.11,23.89,23.17.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₃H₃₁N₆S(M+H)⁺,423.2331；found,423.2323.

實施例15 化合物6p的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)和色胺(101.17mg，631.43μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6p。白色固體。熔點：203-207℃。產(chǎn)率90％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.83(s,1H),8.13(t,J＝6.1Hz,1H),7.59(d,J＝7.8Hz,1H),7.46(d,J＝7.1Hz,2H),7.38-7.28(m,3H),7.23(m,2H),7.07(t,J＝8,4.0Hz,1H),6.98(t,J＝7.4Hz,1H),6.18(s,1H),4.49(s,2H),3.65(m,2H),3.06(t,J＝7.2Hz,2H),2.32(s,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ163.91,163.17,146.23,137.95,136.15,128.83,128.33,127.11,123.03,120.90,118.21,118.10,111.28,110.90,87.84,42.18,34.37,24.49,24.43,13.99.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₃H₂₃N₆S(M+H)⁺,415.1705；found,415.1696.

實施例16 化合物6q的制備

將化合物5a(150mg，515.87μmoL)和氨基硫脲(47.01mg，515.87μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6q。黃色固體。熔點：227-231℃。產(chǎn)率92％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.39(s,1H),9.78(s,1H),8.15(s,1H),7.91(s,1H),7.49(d,J＝7.3Hz,2H),7.31(t,J＝7.3Hz,2H),7.25(t,J＝7.3Hz,1H),6.09(s,1H),4.51(s,2H),2.45(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ182.14,164.60,163.82,155.69,147.09,138.02,128.84,128.31,127.10,88.32,34.25,24.64.HRMS(ESI):m/z calcd for C14H14N7S2(M-H)-,344.0752；found,344.0760.

實施例17 化合物6r的制備

采用實施例1所述方法制備化合物5b。

將化合物4b(1.12g，4.11mmoL)加入至反應(yīng)瓶中，緩慢滴加20mL三氯氧磷，在90℃加熱回流，TLC監(jiān)測反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系小心緩慢滴加入冰水中，期間會放出大量的熱，會有淡黃色固體析出即化合物Ⅳ，用二氯甲烷萃取，無水硫酸鎂干燥2h后，抽濾，濃縮得純品化合物5b。產(chǎn)率91.98％，黃色固體。HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₄H₁₂ClN₆S(M-H)^-,331.0533；found,331.0524.

將化合物5b(150mg，453.45μmoL)和苯胺(42.23mg，453.45μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6r。白色固體。熔點：180-191℃。產(chǎn)率79％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.15(s,1H),7.50(m,6H),7.33(d,J＝7.0Hz,1H),7.18(dd,J＝6.0,3.1Hz,2H),6.34(s,1H),4.79(s,2H),2.38(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.03,163.80,155.80,150.66,144.94,136.53,129.48,126.12,124.44,122.01,114.75,89.29,28.00,24.60.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₀H₁₆N₇S(M-H)^-,386.1188；found,386.1196.

實施例18 化合物6s的制備

將化合物5b(150mg，453.45μmoL)和對甲苯胺(48.59mg，453.45μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6s。白色固體。熔點：240-247℃。產(chǎn)率86％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.41(s,1H),7.79(s,2H),7.53(s,2H),7.37(t,J＝6.7Hz,4H),6.37(s,1H),5.09(s,2H),2.41(s,3H),2.37(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ163.37,152.43,150.23,146.66,136.98,132.59,130.62,130.10,125.96,125.35,125.17,113.96,90.51,25.10,21.51,20.64.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₁H₁₈N₇S(M-H)^-,400.1344；found,400.1352.

實施例19 化合物6t的制備

將化合物5b(150mg，453.45μmoL)和對氟苯胺(50.39mg，453.45μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6t。白色固體。熔點：207-215℃。產(chǎn)率91％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.63(dd,J＝6.0,3.1Hz,2H),7.49(dd,J＝8.8,4.9Hz,2H),7.40-7.25(m,4H),6.27(s,1H),4.88(s,2H),2.37(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.13,163.35,161.32,158.90,155.72,150.82,145.29,134.10(J＝248Hz),127.05(J＝9Hz),123.35,116.30(J＝22Hz),114.48,89.29,27.21,24.54.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₀H₁₅FN₇S(M-H)^-,404.1094；found,404.1102.

實施例20 化合物6u的制備

將化合物5b(150mg，453.45μmoL)和對氯苯胺(57.85mg，453.45μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6u。白色固體。熔點：213-217℃。產(chǎn)率81％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.79(dd,J＝6.1,3.1Hz,2H),7.54(m,6H),6.45(s,1H),5.07(s,2H),2.39(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ163.11,161.84,153.87,150.47,145.79,134.79,131.02,130.63,129.53,126.89,125.94,113.95,90.39,25.12,22.77.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₀H₁₅ClN₇S(M-H)^-,420.0798；found,420.0808.

實施例21 化合物6v的制備

將化合物5b(150mg，453.45μmoL)和對溴苯胺(131.05mg，453.45μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6v。白色固體。熔點：289-292℃。產(chǎn)率78％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.43(s,1H),10.18(s,1H),7.66(d,J＝8.7Hz,2H),7.55-7.46(m,2H),7.42(d,J＝8.7Hz,2H),7.15(dd,J＝6.0,3.2Hz,2H),6.42(s,1H),4.77(s,2H),2.40(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.24,164.06,155.84,150.61,144.67,136.19,132.38,126.38,121.74,118.26,89.70,28.34,24.66.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₀H₁₆BrN₇S(M-H)^-,400.1344；found,400.1352.

實施例22 化合物6w的制備

將化合物5b(150mg，453.45μmoL)和對3，4，5-三甲氧基苯胺(83.08mg，453.45μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6w。白色固體。熔點：228-235℃。產(chǎn)率88％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.80(dd,J＝6.2,3.1Hz,2H),7.53(dd,J＝6.2,3.1Hz,2H),6.84(s,2H),6.52(s,1H),5.08(s,2H),3.81(s,6H),3.72(s,3H),2.41(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ163.05,153.24,150.54,145.99,136.19,131.32,130.66,125.93,113.97,103.01,90.51,60.09,56.07,25.16,22.84.HRMS(ESI):m/z calcd forC₂₃H₂₂N₇O₃S(M-H)^-,476.1505；found,476.1513.

實施例23 化合物6x的制備

將化合物5b(150mg，453.45μmoL)和對氰基苯胺(53.57mg，453.45μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6x。白色固體。熔點：236-239℃。產(chǎn)率89％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.96(d,J＝8.6Hz,2H),7.83-7.70(m,4H),7.51(dd,J＝6.1,3.1Hz,2H),6.68(s,1H),5.08(s,2H),2.42(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ163.02,154.48,150.51,144.49,140.88,133.59,130.55,125.86,124.23,118.54,113.88,107.87,91.25,25.04,23.34.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₁H₁₅N₈S(M-H)^-,411.1140；found,411.1149.

實施例24 化合物6y的制備

將化合物5b(150mg，453.45μmoL)和對氨基苯甲酸(62.19mg，453.45μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6y。白色固體。熔點：230-235℃。產(chǎn)率85％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.05(d,J＝8.5Hz,2H),7.80(dd,J＝6.1,3.1Hz,2H),7.66(d,J＝8.5Hz,2H),7.52(dd,J＝6.1,3.1Hz,2H),6.63(s,1H),5.09(s,2H),2.42(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ166.64,163.04,162.70,154.38,150.60,145.01,140.26,130.67,130.64,128.25,125.94,123.94,113.96,90.88,25.15,23.25.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₁H₁₆N₇O₂S(M-H)^-,430.1086；found,430.1094.

實施例25 化合物6z的制備

將化合物5b(150mg，453.45μmoL)和吡嗪酰肼(62.64mg，453.45μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6z。綠色固體。熔點：187-191℃。產(chǎn)率94％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.47(s,1H),9.26(d,J＝1.2Hz,1H),8.98(d,J＝2.4Hz,1H),8.85(s,1H),7.78(m,2H),7.60-7.40(m,2H),6.38(s,1H),5.04(s,2H),2.38(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.27,163.20,162.69,155.63,150.72,148.17,147.17,143.93,143.80,143.56,131.14,125.60,113.98,89.05,25.54,24.33.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₉H₁₅N₁₀OS(M-H)^-,431.1151；found,431.1161.

實施例26 化合物6aa的制備

將化合物5b(150mg，453.45μmoL)和來那度胺(136.30mg，453.45μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6aa。粉色固體。熔點：270-276℃。產(chǎn)率94％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.07(s,1H),7.91-7.67(m,5H),7.54(dd,J＝5.8,2.9Hz,2H),6.26-6.02(m,1H),5.20(dd,J＝13.1,4.8Hz,1H),5.07(s,2H),4.58(d,J＝17.6Hz,1H),4.51((m,2H),3.03-2.83(m,1H),2.60(m,1H),2.35(s,3H),2.31-2.16(m,1H),2.03(s,1H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ172.84,170.90,167.41,163.11,162.10,154.05,150.46,146.06,138.88,133.73,131.08,130.67,130.26,129.86,125.95,122.69,113.91,90.26,51.49,45.78,31.09,25.17,22.88,22.63.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₇H₂₂N₉O₃S(M-H)^-,552.1566；found,552.1578.

實施例27 化合物6ab的制備

將化合物5b(150mg，453.45μmoL)和氨魯米特(62.19mg，453.45μmoL)加入反應(yīng)瓶中，加入2mL乙醇，常溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，有大量固體析出。直接抽濾，得濾餅。將濾餅置于60℃烘箱干燥6h后得純化合物6ab。白色固體。熔點：212-218℃。產(chǎn)率82％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.96(s,1H),7.81(dd,J＝6.2,3.2Hz,2H),7.54(m,4H),7.45(d,J＝8.6Hz,2H),6.49(s,1H),5.09(s,2H),2.54(s,1H),2.41(s,4H),2.26(m,2H),2.02-1.82(m,2H),0.82(t,J＝7.3Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ175.49,172.69,162.87,162.30,154.25,150.59,138.21,134.75,130.62,127.40,125.86,124.84,113.91,90.06,50.03,32.00,29.07,26.01,25.11,23.14,8.92.HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₇H₂₅N₈O₂S(M-H)^-,525.1821；found,525.1831.

應(yīng)用例1LSD1抑制活性測定

1.實驗方法：

樣品為所合成的以上化合物、純化而得；樣品儲備液：稱取1-2mg樣品于1.5mL EP管中，用DMSO配制成濃度為20mM的溶液，4℃保存，實驗過程中，所需濃度用DMSO稀釋。將待測樣品和LSD1蛋白在室溫孵育后，加入LSD1底物H3K4me2并孵育反應(yīng)，之后加入熒光染料Amplex和辣根過氧化酶HRP室溫孵育，在酶標(biāo)儀上設(shè)定激發(fā)光530nm，發(fā)射光590nm來檢測熒光數(shù)值:

試驗結(jié)果用SPSS軟件計算IC₅₀值如下：

應(yīng)用例2腫瘤細(xì)胞毒的測定

1.實驗方法：

樣品為合成的上述化合物、純化而得；樣品儲備液：稱取1-2mg樣品置于1.5mL EP管中，然后用DMSO配制成濃度是10mM的溶液，4℃保存放置，實驗所需濃度利用培養(yǎng)基稀釋。

2.篩選：

取對數(shù)生長期的細(xì)胞，消化計數(shù)后，用培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度，以4000-8000個cell/孔接種至96孔板中，每孔100μL，培養(yǎng)24h后，棄去培養(yǎng)基，加入用培養(yǎng)基稀釋好的藥物，每個濃度設(shè)3個復(fù)孔，另設(shè)空白對照組及陽性對照組。藥物作用72h后，每孔加入20μL MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，吸去液體，加入150μL的DMSO，振蕩均勻，酶標(biāo)儀490nm處檢測吸光度值，計算抑制率，計算公式如下：抑制率(％)＝(空白組吸光度值-給藥組吸光度值/空白組吸光度值)×100％

3.實驗結(jié)果

表中為10μM條件下的抑制率，括號內(nèi)為IC₅₀單位為(μM)。

MGC-803為人胃癌細(xì)胞

EC-109為人食管癌細(xì)胞

A549為人肺癌細(xì)胞

PC-9為人肺癌細(xì)胞。