本發(fā)明涉及一種細(xì)菌采樣的方法，具體涉及一種用于細(xì)菌采樣的壓印法。

背景技術(shù)：

物體表面、醫(yī)務(wù)人員手上的細(xì)菌數(shù)及評(píng)價(jià)方法是國(guó)家按照《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》的常規(guī)檢測(cè)方法，根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求，各級(jí)各類醫(yī)院的所有臨床一線科室每月都需要采樣一次，并且每個(gè)科室的工作人員都需要進(jìn)行采樣檢測(cè)，采樣點(diǎn)多、頻率高、采樣過程復(fù)雜、影響采樣結(jié)果因素較多。

根據(jù)醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范的要求，消毒后后被檢者五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和液的無(wú)菌洗脫液浸濕的棉拭子，在雙手指曲面從指跟到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面積約30cm2，涂擦過程中同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，無(wú)特殊情況實(shí)驗(yàn)需要涂擦兩只手面積為60cm²；將棉拭子接觸操作者的部分剪去，投入10mL含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液試管里，及時(shí)送檢。

該過程工作量大，不利于提高醫(yī)務(wù)人員參與的積極性，間接降低了對(duì)手部衛(wèi)生及環(huán)境衛(wèi)生的監(jiān)管。同時(shí)程序繁瑣復(fù)雜不能夠保證每一步都是無(wú)菌操作，容易引起采樣結(jié)果不準(zhǔn)確。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

根據(jù)以上現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明的目的是提供一種用于細(xì)菌采樣的壓印法，能夠用于醫(yī)院手消毒效果的評(píng)價(jià)，還能應(yīng)用于物體表面細(xì)菌采樣，采樣快速，結(jié)果更準(zhǔn)確。

本發(fā)明所述的用于細(xì)菌采樣的壓印法，首先，配制中和液，然后將中和液與營(yíng)養(yǎng)瓊脂混合，滅菌，得混合液；將混合液倒入培養(yǎng)碟中，冷卻后采用壓印法進(jìn)行細(xì)菌采樣，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。

中和液與營(yíng)養(yǎng)瓊脂的混合液冷卻后形成培養(yǎng)基。

所述的中和液采用如下方法配制：將大豆卵磷脂、吐溫80、蛋白胨、氯化鈉、硫代硫酸鈉和甘氨酸加入到水中，然后加入pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH至7.2-7.4，得中和液。

所述的中和液中，各組分占水的質(zhì)量的百分比分別為：

大豆卵磷脂0.2-0.4％，吐溫80 0.3-1％，蛋白胨0.8-1.2％，氯化鈉0.5-0.85％，硫代硫酸鈉0.1-0.2％，甘氨酸0.3-0.4％。

所述的pH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉、鹽酸或檸檬酸的一種。配制中和液時(shí)，將大豆卵磷脂、吐溫80、蛋白胨、氯化鈉、硫代硫酸鈉和甘氨酸加入到水中后，根據(jù)不同的配方，采用的pH調(diào)節(jié)劑不同，根據(jù)測(cè)定的pH值，大于7.4時(shí)，采用檸檬酸或稀鹽酸作為pH調(diào)節(jié)劑，小于7.2時(shí)，采用氫氧化鈉作為pH調(diào)節(jié)劑。

所述的中和液與營(yíng)養(yǎng)瓊脂混合的體積比為1：4-5。

所述的混合液倒入培養(yǎng)碟時(shí)的溫度為40-45℃。

所述的混合液倒入培養(yǎng)碟中的高度高于培養(yǎng)碟底盒邊緣的最高點(diǎn)1-2mm。培養(yǎng)碟底盒邊緣的最高點(diǎn)為底盒上的圓環(huán)形平臺(tái)。

所述的滅菌為置于高壓蒸汽滅菌器中進(jìn)行滅菌，在121℃下滅菌半小時(shí)，高溫下同時(shí)可以使得營(yíng)養(yǎng)瓊脂溶解均勻。

所述的采用壓印法進(jìn)行細(xì)菌采樣的方法為：將培養(yǎng)碟中的培養(yǎng)基表面直接壓貼在手掌根部至指根10-20秒。

所述的培養(yǎng)為在35-37℃恒溫箱中培養(yǎng)24-48h，所述的計(jì)數(shù)方法為：菌落數(shù)(CFU/cm²)＝培養(yǎng)碟上菌落數(shù)/培養(yǎng)碟內(nèi)底盤面積(cm²)。

關(guān)于培養(yǎng)時(shí)間的確定，培養(yǎng)時(shí)間為24-48h，首次培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)于24h、30h、36h、42h、48h分別進(jìn)行計(jì)數(shù)，選取菌落數(shù)不變的時(shí)間點(diǎn)作為培養(yǎng)時(shí)間。

所述的培養(yǎng)碟包括盒蓋和底盒，底盒的周邊外沿設(shè)有圓環(huán)形平臺(tái)，圓環(huán)形平臺(tái)的內(nèi)側(cè)設(shè)鎖扣，底盒的內(nèi)底盤上設(shè)弧形凸起，弧形凸起的上方設(shè)網(wǎng)格線。

所述的網(wǎng)格線為凸起線。

圓環(huán)形平臺(tái)的設(shè)置，方便培養(yǎng)碟打開。中和液與營(yíng)養(yǎng)瓊脂冷卻后形成培養(yǎng)基，鎖扣的設(shè)置能夠加強(qiáng)培養(yǎng)基與底盒之間的牢固程度，保證培養(yǎng)碟在拿起時(shí)，培養(yǎng)基不至于脫落出來。底盒的內(nèi)底盤上設(shè)弧形凸起，弧形凸起的上方設(shè)網(wǎng)格線，所述的網(wǎng)格線為凸起線。網(wǎng)格線的設(shè)置能夠方便細(xì)菌的計(jì)數(shù)，結(jié)果的分析可按照菌落數(shù)除以底盒內(nèi)底盤的面積，也可直接讀取每個(gè)小格里的菌落數(shù)。網(wǎng)格線為凸起線能夠方便培養(yǎng)基的附著，在混合液倒入培養(yǎng)碟中時(shí)，培養(yǎng)液液面高于圓環(huán)形平臺(tái)時(shí)不至于溢出，從而使混合液倒入培養(yǎng)碟中的高度高于培養(yǎng)碟底盒上圓環(huán)形平臺(tái)1-2mm，保證培養(yǎng)基能夠充分接觸到手部或環(huán)境表面。

盒蓋為倒U形，邊緣的高度高于圓環(huán)形平臺(tái)的高度，避免細(xì)菌采樣完畢蓋上盒蓋時(shí)盒蓋的內(nèi)表面與培養(yǎng)基接觸，影響細(xì)菌計(jì)數(shù)。

盒蓋采用透明材質(zhì)制備，可以隨時(shí)觀察培養(yǎng)碟內(nèi)的情況，可以在封閉的情況下對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，保證分析結(jié)果更準(zhǔn)確。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

1、本發(fā)明所述方法，方便簡(jiǎn)單快捷，可有效提高工作效率，不僅可以用于醫(yī)院手消毒效果的評(píng)價(jià)，還能應(yīng)用于物體表面細(xì)菌采樣，具有很高的推廣價(jià)值。

2、采用本發(fā)明培養(yǎng)碟采樣時(shí)，能夠保證培養(yǎng)基充分接觸到手部或環(huán)境表面，培養(yǎng)計(jì)數(shù)過程封閉進(jìn)行，無(wú)污染發(fā)生，分析結(jié)果更準(zhǔn)確。

附圖說明

圖1是本發(fā)明中培養(yǎng)碟的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是本發(fā)明中培養(yǎng)碟的底盒的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖中：1、盒蓋；2、底盒；3、圓環(huán)形平臺(tái)；4、網(wǎng)格線；5、鎖扣；6、弧形凸起。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例做進(jìn)一步描述。

如圖1所示，所述的培養(yǎng)碟包括盒蓋1和底盒2，底盒2的周邊外沿設(shè)有圓環(huán)形平臺(tái)3，圓環(huán)形平臺(tái)3的內(nèi)側(cè)設(shè)鎖扣5，底盒2的內(nèi)底盤上設(shè)弧形凸起6，弧形凸起6的上方設(shè)網(wǎng)格線4。

所述的網(wǎng)格線4為凸起線。盒蓋采用透明材質(zhì)制備。

實(shí)施例1

所述的用于手部細(xì)菌采樣的壓印法，包括如下步驟：

(1)配制中和液，將大豆卵磷脂、吐溫80、蛋白胨、氯化鈉、硫代硫酸鈉和甘氨酸加入到水中，然后加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.3，得中和液。

中和液中，各組分占水的質(zhì)量的百分比分別為：大豆卵磷脂0.3％，吐溫80 0.3％，蛋白胨1％，氯化鈉0.5％，硫代硫酸鈉0.1％，甘氨酸0.3％。

(2)將中和液與溶解的營(yíng)養(yǎng)瓊脂混合均勻后，置于高壓蒸汽滅菌器進(jìn)行滅菌，得混合液。

(3)將混合液冷至42℃后，倒入培養(yǎng)碟中，冷卻待用，冷卻后的混合液成為培養(yǎng)基。

(4)將培養(yǎng)碟上的培養(yǎng)基表面直接壓貼在手掌根部至指根15秒后，培養(yǎng)24h，根據(jù)培養(yǎng)碟上的網(wǎng)格計(jì)數(shù)。

混合液倒入培養(yǎng)碟中的量高于圓環(huán)形平臺(tái)1mm。

中和液與溶解的營(yíng)養(yǎng)瓊脂的體積比為1：4。

實(shí)施例2

所述的用于物體表面細(xì)菌采樣的壓印法，包括如下步驟：

(1)配制中和液，將大豆卵磷脂、吐溫80、蛋白胨、氯化鈉、硫代硫酸鈉和甘氨酸加入到水中，然后加入稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至7.2，得中和液。

中和液中，各組分占水的質(zhì)量的百分比分別為：大豆卵磷脂0.2％，吐溫80 0.4％，蛋白胨0.8％，氯化鈉0.6％，硫代硫酸鈉0.15％，甘氨酸0.4％。

(2)將中和液與溶解的營(yíng)養(yǎng)瓊脂混合均勻后，置于高壓蒸汽滅菌器進(jìn)行滅菌，得混合液。

(3)將混合液冷至45℃后，倒入培養(yǎng)碟中，冷卻待用，冷卻后的混合液成為培養(yǎng)基。

(4)檢測(cè)時(shí)將培養(yǎng)碟的表面壓貼在被檢物體上20秒，培養(yǎng)48h，根據(jù)培養(yǎng)碟上的網(wǎng)格計(jì)數(shù)。

混合液倒入培養(yǎng)碟中的量高于圓環(huán)形平臺(tái)2mm。

中和液與溶解的營(yíng)養(yǎng)瓊脂的體積比為1：5。