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一種從血漿中提取微小RNA的方法及其試劑盒與流程

文檔序號:12577465閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種從血漿中提取微小RNA的方法,其特征在于,包括如下步驟:

步驟1:在血漿樣品中加入裂解液進行裂解,得到裂解混合物,再在裂解混合物中加入去蛋白液進行蛋白降解,得到第一混合液;

步驟2:在第一混合液中加入RNA抽提試劑進行RNA抽提,得到抽提混合物,再在抽提混合物中加入氯仿震蕩混合,并進行低溫離心分離,所得上層液體為第二混合液;

步驟3:在第二混合液中加入沉淀劑和助沉劑進行RNA沉淀,得到沉淀混合物,將沉淀混合物進行低溫離心分離,所得沉淀物為第一沉淀;

步驟4:將第一沉淀用洗滌液進行洗滌,得到洗滌混合物,將洗滌混合物進行低溫離心分離,所得沉淀物為第二沉淀,將第二沉淀用RNase-free的水進行溶解,所得溶液即為含有微小RNA的提取樣品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,在步驟1中,所述裂解液為質(zhì)量濃度為10%的十二烷基硫酸鈉溶液,所述去蛋白液為20mg/ml的蛋白酶K溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,在步驟2中,所述RNA抽提試劑為Trizol試劑,低溫離心溫度為2~6℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,在步驟3中,所述沉淀劑為異丙醇,所述助沉劑為糖原,低溫離心溫度為2~6℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,在步驟4中,所述洗滌液為體積百分比為70%~80%的乙醇溶液,低溫離心溫度為2~6℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,在步驟1中,所述血漿樣品與裂解液的體積比為1:1;在步驟2中,所述RNA抽提試劑與第一混合液的體積比為2:1,所述氯仿與所述抽提混合物的體積比為1:5;在步驟3中,所述沉淀劑與第二混合液的體積比為1:1。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,在步驟1之前還包括由血液制備血漿的步驟。

8.一種從血漿中提取微小RNA的試劑盒,其特征在于,包括裂解液、去蛋白液、RNA抽提試劑、沉淀劑、助沉劑和洗滌液,其中,所述沉淀劑為異丙醇,所述助沉劑為15mg/ml的糖原溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒,其特征在于,所述裂解液為質(zhì)量濃度為10%的十二烷基硫酸鈉溶液,所述去蛋白液為20mg/ml的蛋白酶K溶液,所述RNA抽提試劑為Trizol試劑,所述洗滌液為體積百分比為70%~80%的乙醇溶液。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒,其特征在于,還包括氯仿和RNase-free的水。

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