1.一種用于核酸檢測(cè)的納米微粒檢測(cè)試紙的制備方法,包括步驟:
(1)提供指示探針
所述指示探針被設(shè)置用于與目標(biāo)核酸序列的第一互補(bǔ)結(jié)合區(qū)特異性結(jié)合,所述指示探針的5’端結(jié)合有顯色納米微球結(jié)合,所述指示探針的3’端結(jié)合有生物素;
(2)提供捕獲探針
所述捕獲探針被設(shè)置用于與目標(biāo)核酸序列的第二互補(bǔ)結(jié)合區(qū)特異性結(jié)合,并且所述第一互補(bǔ)結(jié)合區(qū)和所述第二互補(bǔ)結(jié)合區(qū)至少間隔3個(gè)核苷酸;
(3)試紙條的制備
所述試紙條包括依次排布的上樣區(qū)、檢測(cè)區(qū)、和吸水區(qū);所述檢測(cè)區(qū)靠近所述上樣區(qū)一側(cè)包括檢測(cè)線,所述檢測(cè)線固定有所述捕獲探針,所述檢測(cè)區(qū)靠近所述吸水區(qū)一側(cè)包括質(zhì)控線,所述質(zhì)控線固定有鏈霉親和素。
2.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述目標(biāo)核酸序列數(shù)目≥2個(gè);所述指示探針分別對(duì)應(yīng)于各目標(biāo)核酸序列,并且各指示探針5’端結(jié)合有不同顏色的顯色納米微球;所述捕獲探針分別對(duì)應(yīng)于各目標(biāo)核酸序列,并且各捕獲探針一次分別固定于所述檢測(cè)區(qū)的不同位置。
3.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述目標(biāo)核酸序列數(shù)目≥3個(gè),更優(yōu)選地所述目標(biāo)核酸序列數(shù)目≥5個(gè)。
4.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述指示探針包括10~50個(gè)核苷酸。
5.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述捕獲探針包括10~50個(gè)核苷酸。
6.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟(3)中,將所述捕獲探針固定于硝酸纖維素膜上靠近所述上樣區(qū)一側(cè)形成所述檢測(cè)線,將鏈霉親和素固定于硝酸纖維素膜上靠近所述吸水區(qū)一側(cè)形成所述質(zhì)控線。
7.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟(3)中,先使用CaCl2溶液在硝酸纖維素膜上劃線,兩條線之間的距離≥1.5mm,干燥后78℃~82℃烘烤15min~20min;然后將捕獲探針和鏈霉親和素溶于水后劃于CaCl2溶液的劃線上,干燥后60℃~65℃烘烤1h~2h。
8.如權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,所述步驟(3)中,CaCl2溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%~15%。
9.如權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,所述步驟(3)中,CaCl2溶液劃線寬度為1mm。
10.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟(3)中,CaCl2溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%。