本發(fā)明涉及檢測試劑盒領域，具體地說涉及一種用于糖尿病腎病早期診斷的試劑盒。

背景技術：

糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物作用受損，或兩者兼有引起。糖尿病時長期存在的高血糖，導致各種組織，特別是眼、腎、心臟、血管、神經(jīng)的慢性損害、功能障礙。糖尿病腎病是糖尿病最主要且危害最大的并發(fā)癥之一，是引起歐美等發(fā)達國家終末期腎病的首要原因(約44％)，也是導致我國終末期腎病的第二位原因，其起病隱匿，早期經(jīng)治療后多可逆轉，晚期則發(fā)展成終末期腎病，如今糖尿病、腎病的發(fā)病率還在不斷地上升。

目前傳統(tǒng)的糖尿病腎病早期診斷方法均存在不足，國內(nèi)外用于預測糖尿病、腎病及其發(fā)展趨勢的傳統(tǒng)檢測方法為血肌酐檢查、尿微量白蛋白檢查或尿微量白蛋白與肌酐比(acr)檢查，這種傳統(tǒng)的血肌酐判斷腎臟疾病的方法漏診率較高；而對于尿微量白蛋白的診斷方法，事實上幾乎所有1型及大部分2型糖尿病患者出現(xiàn)微量白蛋白尿時已有不同程度的腎臟損害，且很多患者有進行性腎臟損害，而尿白蛋白卻沒有增加，因此該方法特異度和敏感度均不夠。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種能夠提高早期糖尿病腎病檢出率的用于糖尿病腎病早期診斷的試劑盒。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明采用如下技術方案：一種用于糖尿病腎病早期診斷的試劑盒，包括尿微量白蛋白測試條、結合珠蛋白測試條以及肌酐測試條。

進一步地，所述尿微量白蛋白測試條包括第一底板以及從一端到另一端依次設置在所述第一底板上的第一玻璃纖維膜、第一硝酸纖維素膜和第一吸水紙，且所述第一玻璃纖維膜的另一端搭在所述第一硝酸纖維素膜的一端，所述第一吸水紙的一端搭在所述第一硝酸纖維素膜的另一端，所述第一玻璃纖維膜上噴涂有膠體金-鼠抗人白蛋白單克隆抗體，所述第一硝酸纖維素膜上包被有羊抗鼠igg抗體和重組人白蛋白。

進一步地，所述結合珠蛋白測試條包括第二底板以及從一端到另一端依次設置在所述第二底板上的第二玻璃纖維膜、第二硝酸纖維素膜和第二吸水紙，且所述第二玻璃纖維膜的另一端搭在所述第二硝酸纖維素膜的一端，所述第二吸水紙的一端搭在所述第二硝酸纖維素膜的另一端，所述第二玻璃纖維膜上噴涂有膠體金-鼠抗人結合珠蛋白單克隆抗體b，所述第二硝酸纖維素膜上包被有羊抗鼠igg抗體和鼠抗人結合珠蛋白單克隆抗體a。

進一步地，所述肌酐測試條包括第三底板以及設置在所述第三底板上的試劑層墊，所述試劑層墊中含有肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、4-氨基安替比林、過氧化物酶和toos。

進一步地，所述第一玻璃纖維膜上鼠抗人白蛋白單克隆抗體的含量為0.36μg，所述第一硝酸纖維素膜分為c區(qū)域和t區(qū)域，所述第一硝酸纖維素膜的c區(qū)域包被的羊抗鼠igg抗體的濃度為0.5mg/ml，t區(qū)域包被的重組人白蛋白的濃度為0.5mg/ml，包被量均為1μl/cm。

進一步地，所述第二玻璃纖維膜上鼠抗人結合珠蛋白單克隆抗體b的含量為0.5μg，所述第二硝酸纖維素膜分為c區(qū)域和t區(qū)域，所述第二硝酸纖維素膜的c區(qū)域包被的羊抗鼠igg抗體的濃度為0.5mg/ml，t區(qū)域包被的鼠抗人結合珠蛋白單克隆抗體a的濃度為1.5mg/ml，包被量均為1μl/cm。

進一步地，所述試劑層墊中含有1.5u肌酐酶、0.8u肌酸酶、0.65u肌氨酸氧化酶、2.5u過氧化物酶、10μg4-氨基安替比林和12.5μgtoos。

本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：

本發(fā)明能夠實現(xiàn)一份樣本同時檢測尿微量白蛋白、結合珠蛋白與肌酐三項指標，可將早期糖尿病腎病檢出率提高至95％以上。

本發(fā)明檢測的三項指標全部采用干式快速檢測方案，便于操作，迅速出結果。

附圖說明

圖1是本發(fā)明一實施例中尿微量白蛋白測試條的結構示意圖。

圖2是本發(fā)明一實施例中肌酐測試條的結構示意圖。

圖3是本發(fā)明一實施例的結構示意圖。

附圖中各部件的標記為：1第一底板、2第一玻璃纖維膜、3第一硝酸纖維素膜、4第一吸水紙、01尿微量白蛋白加樣孔、02結合珠蛋白加樣孔、03肌酐加樣孔、5第三底板、6試劑層墊。

具體實施方式

下面將參考附圖并結合實施例來詳細說明本發(fā)明。

本發(fā)明一實施例的用于糖尿病腎病早期診斷的試劑盒，包括尿微量白蛋白測試條、結合珠蛋白測試條以及肌酐測試條。

發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)結合珠蛋白與糖尿病早期腎功能下降及其進行性惡化密切相關，可作為另一種指標來監(jiān)測糖尿病患者腎功能的改變。本發(fā)明通過同時檢測尿微量白蛋白與肌酐比和結合珠蛋白，可將早期糖尿病腎病檢出率提高至95％以上，意義重大。

在一實施例中，尿微量白蛋白測試條采用膠體金競爭法原理，參見圖1，所述尿微量白蛋白測試條包括第一底板1以及從一端到另一端依次設置在所述第一底板1上的第一玻璃纖維膜2、第一硝酸纖維素膜3和第一吸水紙4，且所述第一玻璃纖維膜2的另一端搭在所述第一硝酸纖維素膜3的一端，所述第一吸水紙4的一端搭在所述第一硝酸纖維素膜3的另一端，所述第一玻璃纖維膜2上噴涂有膠體金-鼠抗人白蛋白單克隆抗體，所述第一硝酸纖維素膜3上包被有羊抗鼠igg抗體和重組人白蛋白。

優(yōu)選的，所述第一玻璃纖維膜上鼠抗人白蛋白單克隆抗體的含量為0.36μg，所述第一硝酸纖維素膜分為c區(qū)域和t區(qū)域，所述第一硝酸纖維素膜的c區(qū)域包被的羊抗鼠igg抗體的濃度為0.5mg/ml，t區(qū)域包被的重組人白蛋白的濃度為0.5mg/ml，包被量均為1μl/cm。在實施本發(fā)明的過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，此條件下，尿微量白蛋白測試條能夠達到靈敏度0.5μg/ml，相對偏差b＜15％，變異系數(shù)cv＜10％。

與尿微量白蛋白測試條的結構類似，在一實施例中，所述結合珠蛋白測試條采用膠體金雙抗體夾心法原理，所述結合珠蛋白測試條包括第二底板以及從一端到另一端依次設置在所述第二底板上的第二玻璃纖維膜、第二硝酸纖維素膜和第二吸水紙，且所述第二玻璃纖維膜的另一端搭在所述第二硝酸纖維素膜的一端，所述第二吸水紙的一端搭在所述第二硝酸纖維素膜的另一端，為簡潔描述起見，不再附圖示意，所述第二玻璃纖維膜上噴涂有膠體金-鼠抗人結合珠蛋白單克隆抗體b，所述第二硝酸纖維素膜上包被有羊抗鼠igg抗體和鼠抗人結合珠蛋白單克隆抗體a。

優(yōu)選的，所述第二玻璃纖維膜上鼠抗人結合珠蛋白單克隆抗體b的含量為0.5μg，所述第二硝酸纖維素膜分為c區(qū)域和t區(qū)域，所述第二硝酸纖維素膜的c區(qū)域包被的羊抗鼠igg抗體的濃度為0.5mg/ml，t區(qū)域包被的鼠抗人結合珠蛋白單克隆抗體a的濃度為1.5mg/ml，包被量均為1μl/cm。在實施本發(fā)明的過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，此條件下，結合珠蛋白測試條能夠達到靈敏度5ng/ml，相對偏差b＜15％，變異系數(shù)cv＜10％。

具體實施中，所述第一玻璃纖維膜和第二玻璃纖維膜均為兩段式結構，其中前一段的另一端搭在后一段的一端?？拷跛崂w維素膜的一段被稱為金標墊，其主要作用是承載膠體金-抗體復合物，而遠離硝酸纖維素膜的一段被稱為樣品墊，這一段預先經(jīng)過緩沖液處理，其主要作用是在吸收樣本進行層析時緩沖尿樣間的基質(zhì)差異。

在一實施例中，所述肌酐測試條采用肌氨酸氧化酶法，參見圖2，所述肌酐測試條包括第三底板5以及設置在所述第三底板5上的試劑層墊6，所述試劑層墊中含有肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、4-氨基安替比林、過氧化物酶和toos。

具體實施中，各底板均采用pvc板制成。

優(yōu)選的，所述試劑層墊中含有1.5u肌酐酶、0.8u肌酸酶、0.65u肌氨酸氧化酶、2.5u過氧化物酶、10μg4-氨基安替比林和12.5μgtoos。在實施本發(fā)明的過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，此條件下，肌酐測試條能夠達到靈敏度0.05mg/ml，相對偏差b＜15％，變異系數(shù)cv＜10％。

參見圖3，試劑盒上對應于所述尿微量白蛋白測試條的位置處具有尿微量白蛋白加樣孔01，對應于所述結合珠蛋白測試條的位置處具有結合珠蛋白加樣孔02，對應于所述肌酐測試條的位置處具有肌酐加樣孔03，當在尿微量白蛋白加樣孔中加入尿樣時，樣本沿著試紙層析流動，樣本中含有的尿微量白蛋白與噴涂在第一玻璃纖維膜上的膠體金-鼠抗人白蛋白單克隆抗體結合，形成的復合物繼續(xù)沿著試紙層析，剩余未結合尿微量白蛋白的膠體金-鼠抗人白蛋白單克隆抗體與包被在第一硝酸纖維素膜的t區(qū)域的重組人白蛋白結合，形成一條紅色線條，樣本中尿微量白蛋白含量越高，紅色線條越淡。而無論樣本中尿微量白蛋白含量為多少，包被于第一硝酸纖維素膜的c區(qū)域的羊抗鼠igg抗體都會與膠體金-鼠抗人白蛋白單克隆抗體結合，形成一條紅色條帶。由于樣本中尿微量白蛋白的含量不同，t區(qū)域的紅色線條深淺也不同，二者存在一定的曲線關系，因此依據(jù)儀器分析可對尿微量白蛋白進行定量測試。

當在結合珠蛋白加樣孔中加入尿樣時，樣本沿著試紙層析流動，樣本中含有的結合珠蛋白與噴涂在第二玻璃纖維膜上的膠體金-鼠抗人結合珠蛋白單克隆抗體b結合，形成的復合物繼續(xù)沿著試紙層析，又與包被在第二硝酸纖維素膜的t區(qū)域的鼠抗人結合珠蛋白單克隆抗體a結合，形成一條紅色線條，而無論樣本中結合珠蛋白含量為多少，包被于第二硝酸纖維素膜的c區(qū)域的羊抗鼠igg抗體都會與膠體金-鼠抗人結合珠蛋白單克隆抗體b結合，形成一條紅色條帶。依據(jù)結合珠蛋白的含量不同，t區(qū)域的紅色線條深淺也不同，二者存在一定的曲線關系，因此依據(jù)儀器分析可對結合珠蛋白進行定量測試。

當在肌酐加樣孔中加入尿樣時，樣本中的肌酐被溶解出的肌酐酶轉化成肌酸，肌酸在肌酸酶的作用下被轉化成肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下與氧氣反應生成甘氨酸與過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶的作用下與4-氨基安替比林和toos反應生成紫色絡合物。尿樣中肌酐含量越高，生成的紫色越深，二者在一定范圍內(nèi)存在線性關系，因此根據(jù)儀器分析可進行定量測試。

本發(fā)明測試條的檢測方式可采用苦味酸速率法代替，肌酐試紙的試劑層墊上主要成分為堿性苦味酸試劑。肌酐與堿性苦味酸反應生成黃紅色復合物，根據(jù)肌酐和堿性苦味酸形成復合物的速度與非肌酐干擾物的不同，且肌酐的反應速度與濃度成正比的關系，利用儀器測試不同時間試劑墊顏色深淺的信號值，用速率法得出定量結果。

發(fā)明人對尿微量白蛋白、尿微量白蛋白/肌酐、結合珠蛋白和尿微量白蛋白/肌酐+結合珠蛋白四項測試進行了綜合對比，具體結果見下表1。

表1

結果表明，尿微量白蛋白對早期糖尿病腎病的檢出率最低，尤其是2型糖尿病腎??；尿微量白蛋白/肌酐的檢出率比尿微量白蛋白略高，但對2型糖尿病腎病檢出率基本沒有提升，因此整體檢出率依然偏低；結合珠蛋白作為近年來新發(fā)現(xiàn)的糖尿病腎病檢測指標，對于1型和2型糖尿病腎病均有著較高的檢出率；而本發(fā)明采用的尿微量白蛋白/肌酐和結合珠蛋白的綜合檢測形成互補，將早期糖尿病腎病的整體檢出率提升至95％以上。

應當理解本文所述的例子和實施方式僅為了說明，并不用于限制本發(fā)明，本領域技術人員可根據(jù)它做出各種修改或變化，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。