本發(fā)明涉及環(huán)境毒理學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

雖然在實(shí)驗(yàn)室研究中，發(fā)展了化學(xué)品對嚙齒類小腦的發(fā)育的影響的評價(jià)方法，但是在子宮內(nèi)操作胚胎十分困難，不利于方法的廣泛利用性。而在硬骨魚類中，由于甲狀腺系統(tǒng)本身和調(diào)控機(jī)制的差異，很難將甲狀腺干擾的研究在各個(gè)魚種進(jìn)行統(tǒng)一，且由于甲狀腺系統(tǒng)與哺乳動物的差異，很難類推到人類。

兩棲動物除了下丘腦分泌的是crh(corticotropinreleasinghormone，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素)而不是哺乳動物中的trh(thyrotropin-releasinghormone，促甲狀腺激素釋放激素)外，甲狀腺系統(tǒng)的構(gòu)成與哺乳動物中非常一致。因此兩棲動物可以提供最敏感的模型來研究脊椎動物包括人類的的甲狀腺干擾。

一般兩棲類的發(fā)育時(shí)期包括：(1)早期胚胎-蝌蚪，(2)變態(tài)前期(premetamorphosis)，(3)前變態(tài)期(prometamorphosis)，(4)變態(tài)/幼蛙，(5)成蛙(性成熟)。早期胚胎期一般指從受精到變態(tài)前期，指1-46期，變態(tài)期發(fā)生重大的形態(tài)變化，對應(yīng)哺乳動物的胚后發(fā)育過程。兩棲類的變態(tài)期分為三個(gè)期：前變態(tài)期，變態(tài)前期和變態(tài)高峰期，前變態(tài)期指胚胎到早期蝌蚪發(fā)育時(shí)期，該時(shí)期沒有th(thyroidhormones，甲狀腺激素)的分泌，指47-53期，一些提前發(fā)育的形態(tài)在該時(shí)期進(jìn)行如后肢腿芽的發(fā)育。而更詳細(xì)的形態(tài)發(fā)生，如趾的分化，和后肢的快速生長在變態(tài)前期(prometamorphosis)進(jìn)行，即54-58期，該時(shí)期甲狀腺激素的水平逐漸升高，變態(tài)高峰期(climaxofmorphosis)th水平急劇升高，伴隨前肢發(fā)育，鰓和尾的吸收，還有一些器官的重塑。

無尾兩棲動物經(jīng)歷一個(gè)由甲狀腺激素調(diào)控的變態(tài)發(fā)育過程，這一變態(tài)過程對具有甲狀腺干擾活性的化學(xué)物質(zhì)——甲狀腺干擾物敏感，最直觀的現(xiàn)象是變態(tài)提前或變態(tài)延遲。另外，甲狀腺組織學(xué)結(jié)構(gòu)、甲狀腺激素及相關(guān)激素水平、相關(guān)基因表達(dá)水平等指標(biāo)發(fā)生變化。因此，兩棲動物變態(tài)可用來初步測試化學(xué)品的甲狀腺干擾作用，反映化學(xué)品對兩棲動物及其它脊椎動物甲狀腺系統(tǒng)的影響。

目前，利用無尾兩棲動物檢測甲狀腺干擾的方法敏感性較低，需要用較大濃度的化學(xué)污染物進(jìn)行暴露才能顯現(xiàn)出干擾效應(yīng)，而加入高濃度的化學(xué)污染物會對檢測試驗(yàn)的結(jié)果造成很大的誤差，導(dǎo)致檢測結(jié)果并不準(zhǔn)確。因此，研發(fā)一種快速高效，敏感性高，誤差小的檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法尤為重要。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法，本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供上述檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法在檢測甲狀腺干擾中的應(yīng)用，以緩解現(xiàn)有技術(shù)中存在的敏感性低，誤差大，檢測結(jié)果不準(zhǔn)確的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供的一種檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法，所述體內(nèi)篩查方法包括：將nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪暴露于化學(xué)污染物后，檢測所述非洲爪蟾蝌蚪的變態(tài)發(fā)育指標(biāo)，并通過所述變態(tài)發(fā)育指標(biāo)確定所述化學(xué)污染物對所述甲狀腺系統(tǒng)的干擾作用。

進(jìn)一步地，所述化學(xué)污染物的暴露方式為在飼養(yǎng)用水中添加所述化學(xué)污染物。

進(jìn)一步地，所述化學(xué)污染物包括甲巰咪唑或高氯酸鈉中的一種或兩種。

進(jìn)一步地，所述甲巰咪唑的暴露濃度為1-10mg/l，所述高氯酸鈉的暴露濃度為32-125μg/l。

進(jìn)一步地，所述暴露于化學(xué)污染物的時(shí)間為28天。

進(jìn)一步地，所述變態(tài)發(fā)育指標(biāo)包括變態(tài)發(fā)育期。

進(jìn)一步地，所述變態(tài)發(fā)育指標(biāo)還包括后肢長度、口至泄殖孔長度及體重。

進(jìn)一步地，在所述nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪暴露于化學(xué)污染物的第7天，統(tǒng)計(jì)所述nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪的變態(tài)發(fā)育期。

進(jìn)一步地，在所述nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪暴露于化學(xué)污染物的第28天，統(tǒng)計(jì)所述nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪的變態(tài)發(fā)育期、后肢長度、口至泄殖孔長度及體重。

另外，本發(fā)明還提供了上述的檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法在檢測甲狀腺干擾中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法，利用將nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪暴露于化學(xué)污染物，檢測所述非洲爪蟾蝌蚪的變態(tài)發(fā)育指標(biāo)，快速高效，敏感性高，誤差小，檢測結(jié)果準(zhǔn)確。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實(shí)施方式，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例2提供的nf48期非洲爪蟾蝌蚪暴露甲巰咪唑一周后發(fā)育期組成；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例2提供的nf48期非洲爪蟾蝌蚪暴露甲巰咪唑終點(diǎn)發(fā)育期組成；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例3提供的nf48期非洲爪蟾蝌蚪暴露高氯酸鈉一周后發(fā)育期組成；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例3提供的nf48期非洲爪蟾蝌蚪暴露高氯酸鈉終點(diǎn)發(fā)育期組成；

圖5為本發(fā)明對比例1提供的nf51期非洲爪蟾蝌蚪暴露甲巰咪唑一周后發(fā)育期組成；

圖6為本發(fā)明對比例1提供的nf51期非洲爪蟾蝌蚪暴露甲巰咪唑終點(diǎn)發(fā)育期組成；

圖7為本發(fā)明對比例2提供的nf51期非洲爪蟾蝌蚪暴露高氯酸鈉一周后發(fā)育期組成；

圖8為本發(fā)明對比例2提供的nf51期非洲爪蟾蝌蚪暴露高氯酸鈉終點(diǎn)發(fā)育期組成；

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明提供了一種檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法，包括：將nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪暴露于化學(xué)污染物后，檢測非洲爪蟾蝌蚪的變態(tài)發(fā)育指標(biāo)，并通過變態(tài)發(fā)育指標(biāo)確定化學(xué)污染物對所述甲狀腺系統(tǒng)的干擾作用。

在本發(fā)明中，化學(xué)污染物的暴露方式為在飼養(yǎng)用水中添加所述化學(xué)污染物。

對添加了化學(xué)污染物的飼養(yǎng)水進(jìn)行換水的方式，例如可為，但不限于循環(huán)水系統(tǒng)或者半靜態(tài)暴露方式。

在本發(fā)明中，化學(xué)污染物包括甲巰咪唑或高氯酸鈉中的一種或兩種。

高氯酸鹽是一種典型干擾na+/i-轉(zhuǎn)運(yùn)體nis的物質(zhì)，作為固體推進(jìn)劑的氧化劑在大炮、煙火、安全氣囊和其它產(chǎn)品中大量使用，而且由于其在環(huán)境中的穩(wěn)定性，高氯酸鹽在世界范圍內(nèi)廣泛分布于飲用水、灌溉水以及食物中，因此在人群中普遍檢出了高氯酸鹽的存在。因?yàn)閶雰簩谞钕偌に厝狈Ψ浅Ｃ舾?，而且母乳中高氯酸鹽的含量非常高，所以推測高氯酸鈉可能會引起人群中早期嬰兒發(fā)育過程甲狀腺激素的含量的異常。因此非常有必要評價(jià)高氯酸鹽對脊椎動物甲狀腺的干擾作用。

在本發(fā)明中，甲巰咪唑的暴露濃度為1-10mg/l，高氯酸鈉的暴露濃度為32-125μg/l。

其中，甲巰咪唑的暴露濃度例如可以為，但不限于1mg/l、2mg/l、3mg/l、4mg/l、5mg/l、6mg/l、7mg/l、8mg/l、9mg/l或者10mg/l。高氯酸鈉的暴露濃度例如可以為，但不限于32μg/l、40μg/l、50μg/l、63μg/l、70μg/l、80μg/l、90μg/l、100μg/l、110μg/l或125μg/l。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，甲巰咪唑的暴露濃度為1mg/l、5mg/l、10mg/l；高氯酸鈉的暴露濃度為32μg/l、63μg/l、125μg/l。

在本發(fā)明中，暴露于化學(xué)污染物的時(shí)間為28天。

在本發(fā)明中，變態(tài)發(fā)育指標(biāo)包括變態(tài)發(fā)育期，還包括后肢長度、口至泄殖孔長度及體重。

其中，口至泄殖孔長度又稱為吻泄長。

在本發(fā)明中，在nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪暴露于化學(xué)污染物的第7天，統(tǒng)計(jì)nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪的變態(tài)發(fā)育期。

其中，通過非洲爪蟾蝌蚪所處的變態(tài)發(fā)育期判斷變態(tài)發(fā)育是否受到影響，如果變態(tài)發(fā)育受到抑制，則說明化學(xué)污染物對甲狀腺系統(tǒng)產(chǎn)生干擾效應(yīng)。

在本發(fā)明中，在nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪暴露于化學(xué)污染物的第28天，統(tǒng)計(jì)nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪的變態(tài)發(fā)育期、后肢長度、口至泄殖孔長度及體重。

其中，通過非洲爪蟾蝌蚪所處的變態(tài)發(fā)育期判斷變態(tài)發(fā)育是否受到影響，如果變態(tài)發(fā)育受到抑制，則說明化學(xué)污染物對甲狀腺系統(tǒng)產(chǎn)生干擾效應(yīng)。同時(shí)，通過非洲爪蟾蝌蚪后肢長度、口至泄殖孔長度及體重的變化判斷化學(xué)污染物是否對非洲爪蟾蝌蚪的甲狀腺系統(tǒng)造成影響。

本發(fā)明提供的檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法，快速高效，敏感性高，誤差小，檢測結(jié)果準(zhǔn)確。

另外，本發(fā)明還提供了上述的檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法在檢測甲狀腺干擾中的應(yīng)用。

為了有助于更清楚的理解本發(fā)明的內(nèi)容，現(xiàn)結(jié)合具體的實(shí)施例詳細(xì)介紹如下。如未明確指出，以下實(shí)施例中涉及的實(shí)驗(yàn)操作方法為本領(lǐng)域常規(guī)的分子生物學(xué)操作方法，涉及的試劑均為分析純級試劑，涉及的試劑或儀器均可從正規(guī)渠道商購獲得。

(一)本發(fā)明所用的實(shí)驗(yàn)試劑與儀器：

甲巰咪唑(methimazole，cas:60-56-0；99％,sigma-aldrich,德國)；高氯酸鈉(sodiumperchlorate,>99％,cas：7601-89-0,acros,美國)；ms-222(3-aminobenzoicacidethylester,cas:886-86-2,98％，sigma-aldrich,美國)；人絨毛膜促性腺激素(hcg，煙臺北方制藥有限公司，山東)；苦味酸、甲醛、冰醋酸、氯化鈉、石蠟、乙醇等化學(xué)試劑均為分析純，北京化學(xué)試劑公司；石蠟切片脫蠟染色套裝(北京東方柏林生物科技有限公司，北京)。

體式顯微鏡(型號xtl0745，重慶光電儀器有限公司，重慶)；組織切片機(jī)(leica，德國)；電子天平(ja2003b，上海越平科技儀器有限公司)；移液器(eppendorf，德國)。

實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)動物的飼養(yǎng)及繁殖

飼養(yǎng)條件

水質(zhì)條件如下：活性炭過濾的自來水總余氯為0，碘濃度2-4μg/l，ph值6.5-7.0，溶解氧濃度>5mg/l，水硬度(以caco3計(jì))約150mg/l。

光照條件：全波長熒光燈營造自然光照條件，明暗光周期12h/12h。

溫度條件：水的溫度保持在22±1℃。

非洲爪蟾成蛙餌料：切碎的豬肝：兩棲類專用飼料(香港，中國)為1:1，每周3次。

非洲爪蟾蝌蚪餌料：活豐年蟲，每天喂食3次。

誘導(dǎo)繁殖

非洲爪蟾系本單位自養(yǎng)，最早種蛙購自美國nasco。取非洲爪蟾成年雌蛙和雄蛙注射hcg誘導(dǎo)繁殖(雄：300iu，雌：700iu)。受精卵在22±1℃的去氯自來水中孵化，5天后發(fā)育成蝌蚪。

實(shí)施例2甲巰咪唑?qū)f48期非洲爪蟾甲狀腺干擾實(shí)驗(yàn)

將甲巰咪唑的儲備液稀釋到去氯自來水中，配制1mg/l、5mg/l和10mg/l系列濃度的測試液，同時(shí)設(shè)置空白對照。挑選nf48時(shí)期非洲爪蟾蝌蚪，隨機(jī)分配至各處理缸中，每缸20只蝌蚪，18l暴露液，每個(gè)處理兩個(gè)平行。采用半靜態(tài)方式進(jìn)行暴露，每周換水2-3次。nf48期蝌蚪暴露4周，暴露一周時(shí)統(tǒng)計(jì)發(fā)育期組成，暴露終止時(shí)，在ms-222中將蝌蚪麻醉后，測量蝌蚪后肢長度、口至泄殖孔的長度、發(fā)育時(shí)期、體重；取下頜放于固定液中，待做甲狀腺組織學(xué)結(jié)構(gòu)分析。

每天喂食活豐年蟲三次。水溫22±1℃，明暗光周期12小時(shí)：12小時(shí)，水面光強(qiáng)600-1000lux。

采用spss16.0，卡方檢驗(yàn)分析各處理組之間的蝌蚪發(fā)育時(shí)期組成與對照組有無顯著性差異以(p<0.05)。

結(jié)果如圖1所示，nf48期蝌蚪暴露甲巰咪唑(1mg/l、5mg/l和10mg/l)7天后，用spss軟件統(tǒng)計(jì)蝌蚪發(fā)育時(shí)期的分布。卡方檢驗(yàn)結(jié)果顯示，nf48期蝌蚪暴露試驗(yàn)中，1mg/l就能夠顯著的抑制蝌蚪的發(fā)育時(shí)期發(fā)育(p<0.05)。

如圖2所示，在暴露終止時(shí)，nf48期蝌蚪暴露甲巰咪唑(1mg/l、5mg/l和10mg/l)4周后，1mg/l就能夠顯著的抑制蝌蚪的時(shí)期發(fā)育(p<0.05)。

在暴露終止時(shí)，nf48期蝌蚪暴露甲巰咪唑(1mg/l、5mg/l和10mg/l)4周后，one-wayanovas統(tǒng)計(jì)顯示，10mg/l甲巰咪唑顯著的抑制了蝌蚪的吻泄長的發(fā)育和體重的增加(p<0.05)，5mg/l和10mg/l甲巰咪唑顯著的抑制了蝌蚪后肢的生長，表現(xiàn)在后肢/吻泄長小于對照組(p<0.05)。如表1所示。

表1nf48期蝌蚪暴露甲巰咪唑終點(diǎn)時(shí)吻泄長(svl)，后肢長/吻泄長(hll/svl)及體重(n＝40)

實(shí)施例3高氯酸鈉對nf48期非洲爪蟾甲狀腺干擾實(shí)驗(yàn)

nf48期蝌蚪暴露高氯酸鈉(32μg/l、63μg/l、125μg/l)一周后發(fā)育時(shí)期分布，用卡方統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，nf48期蝌蚪暴露一周后，所有劑量均顯著的抑制了蝌蚪的發(fā)育期分布(p<0.05)，如圖3所示。

在暴露終止時(shí)，nf48期蝌蚪暴露高氯酸鈉(32μg/l、63μg/l、125μg/l)4周后，用卡方統(tǒng)計(jì)結(jié)果蝌蚪的發(fā)育期分布顯示，32μg/l、63μg/l、125μg/l高氯酸鈉顯著得抑制了蝌蚪的變態(tài)發(fā)育(p<0.05)，對照組蝌蚪的發(fā)育期在nf55±1期，而32μg/l、63μg/l、125μg/l高氯酸鈉暴露后nf56期蝌蚪所占的比例越來越少，而較低發(fā)育期的蝌蚪所占比較增加，如圖4所示。

在暴露終止時(shí)，nf48期蝌蚪暴露4周后，較高劑量63μg/l、125μg/l顯著的抑制了蝌蚪后肢的生長，表現(xiàn)在后肢/吻泄長的值小于對照組(p<0.05)，對濕體重和吻泄長這兩個(gè)指標(biāo)沒有顯著性的影響。如表2所示。

表2nf48期蝌蚪暴露高氯酸鈉終點(diǎn)時(shí)吻泄長(svl)，后肢長/吻泄長(hll/svl)及體重(n＝40)

對比例1甲巰咪唑?qū)f51期非洲爪蟾甲狀腺干擾實(shí)驗(yàn)

將甲巰咪唑的儲備液稀釋到去氯自來水中，配制1mg/l、5mg/l和10mg/l系列濃度的測試液，同時(shí)設(shè)置空白對照。挑選nf51期非洲爪蟾蝌蚪，隨機(jī)分配至各處理缸中，每缸20只蝌蚪，18l暴露液，每個(gè)處理兩個(gè)平行。采用半靜態(tài)方式進(jìn)行暴露，每周換水2-3次。nf51期蝌蚪暴露3周，暴露一周時(shí)統(tǒng)計(jì)發(fā)育期組成，暴露終止時(shí)，在ms-222中將蝌蚪麻醉后，測量蝌蚪后肢長度、口至泄殖孔的長度、發(fā)育時(shí)期、體重；取下頜放于固定液中，待做甲狀腺組織學(xué)結(jié)構(gòu)分析。

每天喂食活豐年蟲三次。水溫22±1℃，明暗光周期12小時(shí)：12小時(shí)，水面光強(qiáng)600-1000lux。

采用spss16.0，卡方檢驗(yàn)分析各處理組之間的蝌蚪發(fā)育時(shí)期組成與對照組有無顯著性差異以(p<0.05)。

結(jié)果如圖5所示，在暴露終止時(shí)，nf51期蝌蚪暴露甲巰咪唑(1mg/l、5mg/l和10mg/l)3周后，用卡方統(tǒng)計(jì)發(fā)育時(shí)期分布結(jié)果顯示，5mg/l和10mg/l濃度的甲巰咪唑才抑制了蝌蚪的變態(tài)發(fā)育(p<0.05)。

如圖6所示，在暴露終止時(shí)，nf51期蝌蚪暴露甲巰咪唑(1mg/l、5mg/l和10mg/l)3周后，one-wayanovas統(tǒng)計(jì)顯示，10mg/l甲巰咪唑才能顯著的抑制蝌蚪的吻泄長的發(fā)育和體重的增加(p<0.05)，5mg/l和10mg/l甲巰咪唑顯著的抑制了蝌蚪后肢的生長，表現(xiàn)在后肢/吻泄長小于對照組(p<0.05)，如表3所示。

表3nf51期蝌蚪暴露甲巰咪唑終點(diǎn)時(shí)吻泄長(svl)，后肢長/吻泄長(hll/svl)及體重(n＝40)

對比例2高氯酸鈉對nf51期非洲爪蟾甲狀腺干擾實(shí)驗(yàn)

如圖7所示，nf51期蝌蚪暴露高氯酸鈉(32μg/l、63μg/l、125μg/l)一周后發(fā)育時(shí)期分布，用卡方統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，nf51期蝌蚪暴露一周后，125μg/l濃度的高氯酸鈉才對蝌蚪變態(tài)發(fā)育有顯著性的抑制作用。

在暴露終止時(shí)，nf51期蝌蚪暴露3周后，較高劑量(63μg/l、125μg/l)才對發(fā)育時(shí)期的發(fā)育有顯著性影響，沒有檢測到最低劑32μg/l的抑制作用(p>0.05)，如圖8所示。

在暴露終止時(shí)，nf51期蝌蚪暴露高氯酸鈉(32μg/l、63μg/l、125μg/l)3周后，one-wayanova統(tǒng)計(jì)顯示，較高劑量63μg/l、125μg/l才能顯著的抑制蝌蚪后肢的生長，表現(xiàn)在后肢/吻泄長值小于對照組(p<0.05)，而對濕體重和吻泄長指標(biāo)沒有顯著性的影響。如表4所示。

表4nf51期蝌蚪暴露高氯酸鈉終點(diǎn)時(shí)吻泄長(svl)，后肢長/吻泄長(hll/svl)及體重(n＝40)

通過實(shí)施例1與對比例1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，1mg/l的甲流咪唑也顯著的抑制nf48期蝌蚪的發(fā)育時(shí)期發(fā)育，但在nf51期蝌蚪中并未產(chǎn)生影響，這顯示nf48期暴露可檢測出更低劑量甲巰咪唑的甲狀腺干擾效應(yīng)。進(jìn)而說明，本發(fā)明提供的通過將nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪暴露于化學(xué)污染物檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法，快速有效，且敏感性高。

進(jìn)一步地，由實(shí)施例1與對比例1的結(jié)果可以看到，無論是暴露nf48期蝌蚪還是nf51期蝌蚪，吻泄長、后肢/吻泄長、濕體重等指標(biāo)均只對高劑量的甲巰咪唑有反應(yīng)，顯示這些指標(biāo)用于評價(jià)甲狀腺干擾作用并非十分敏感。但是變態(tài)發(fā)育期數(shù)據(jù)用卡方檢驗(yàn)，不僅能夠檢出高濃度的效應(yīng)而且能檢出低濃度的效應(yīng)，顯示蝌蚪的發(fā)育期是更為敏感的評價(jià)指標(biāo)。就這個(gè)指標(biāo)而言，nf48期開始暴露的方法比nf51期開始暴露的方法敏感，如表5所示。

表5nf48期和nf51期暴露蝌蚪的敏感性比較

通過實(shí)施例2與對比例2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，32μg/l的高氯酸鈉也顯著的抑制nf48期蝌蚪的發(fā)育時(shí)期發(fā)育，但在nf51期蝌蚪中并未產(chǎn)生影響，這顯示nf48期暴露可檢測出更低劑量的高氯酸鈉的甲狀腺干擾作用。進(jìn)而說明，本發(fā)明提供的通過將nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪暴露于化學(xué)污染物檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法，快速有效，且敏感性高。

進(jìn)一步地，由實(shí)施例2與對比例2的結(jié)果可以看到，暴露于高氯酸鈉時(shí)，nf48期和nf51期暴露對吻泄長，后肢/吻泄長和濕體重等終點(diǎn)指標(biāo)方面的敏感性相當(dāng)。就變態(tài)發(fā)育期而言，nf48期開始暴露的方法比nf51期開始暴露的方法敏感。

綜上所述，本發(fā)明提供的通過將nf48階段的非洲爪蟾蝌蚪暴露于化學(xué)污染物檢測甲狀腺干擾的體內(nèi)篩查方法，快速有效，且敏感性高，并且，敏感性提高后的非洲爪蟾變態(tài)試驗(yàn)對于測試有弱甲狀腺干擾效應(yīng)的化合物具有重要的意義。

最后應(yīng)說明的是：以上各實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。