技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及附加糖鏈的多肽、和含有所述多肽的醫(yī)藥組合物。
背景技術(shù)：
：生長(zhǎng)抑素是存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)及周邊組織兩者中的環(huán)肽。生長(zhǎng)抑素最初分離自哺乳類(lèi)的下丘腦，被鑒定為來(lái)自腦下垂體前葉的生長(zhǎng)激素分泌物的重要抑制劑。該肽廣泛地分布于例如下丘腦、胰腺、消化道等中，經(jīng)由與生長(zhǎng)抑素受體的結(jié)合而發(fā)揮作用。此外，生長(zhǎng)抑素因抑制腦下垂體中的生長(zhǎng)激素(GH)的分泌、抑制促甲狀腺激素(TSH)分泌，以及抑制消化道中的胃泌素、選擇素、膽囊收縮素(CCK)、VIP(VasoactiveIntestinalPoly-peptide，血管活性腸肽)、以及胰腺中的胰高血糖素和胰島素等各種激素的分泌而為人知曉。另外，還已知生長(zhǎng)抑素具有抑制消化道蠕動(dòng)的作用。具有結(jié)構(gòu)式：Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe--Thr-Ser-Cys(序列編號(hào)1)的天然的生長(zhǎng)抑素(也作為生長(zhǎng)激素釋放抑制因子(SRIF)而為人知曉)最初是由Guillemin及合作研究者分離。該生長(zhǎng)抑素通過(guò)與受體家族相互作用而發(fā)揮其效果。已知生長(zhǎng)抑素受體(SSTR)具有1至5的亞型(SSTR1～SSTR5)，其中SSTR2分布于GH分泌性人腦下垂體腺瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腦下垂體前葉、視網(wǎng)膜、腎上腺髓質(zhì)、胃、十二指腸黏膜、小腸、結(jié)腸的各組織、以及胰腺蘭氏小島的胰高血糖素分泌性A細(xì)胞中。此外，已知每個(gè)這些受體也在各種腫瘤中進(jìn)行表達(dá)，例如據(jù)報(bào)道：在功能性腦下垂體腺瘤中，SSTR1與SSTR5進(jìn)行表達(dá)；在胃腸道腫瘤中，除了SSTR2以外，SSTR1、SSTR3也進(jìn)行表達(dá)；在嗜鉻細(xì)胞瘤中，SSTR3進(jìn)行表達(dá)；在前列腺癌中，SSTR1和SSTR5進(jìn)行表達(dá)；在結(jié)腸直腸癌中，SSTR5進(jìn)行表達(dá)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1)。此外，SSTR4據(jù)報(bào)道可作為具有拮抗性調(diào)節(jié)作用的受體而發(fā)揮功能、以及有可能在青光眼相關(guān)的疾病的治療中較為重要(非專(zhuān)利文獻(xiàn)2)。正因?yàn)槿绱耍L(zhǎng)抑素及其類(lèi)似物對(duì)于生長(zhǎng)抑素相關(guān)疾病或各種腫瘤是潛在地有用的治療藥。另一方面，天然存在的生長(zhǎng)抑素由于血中半衰期為較短的2～3分鐘，所以表現(xiàn)出生物利用度較小和作用的持續(xù)時(shí)間較短這兩個(gè)不理想的性質(zhì)，因此作為治療劑的使用或應(yīng)用受限。基于該理由，為找出在效力、活體穩(wěn)定性、作用的持續(xù)時(shí)間、或考慮生長(zhǎng)激素、胰島素或胰高血糖素的釋放抑制的選擇性中任一方面均優(yōu)異的生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物，業(yè)界不斷開(kāi)發(fā)出各種生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物。作為可在臨床上利用的最先得到承認(rèn)的生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物，報(bào)道有奧曲肽(Octreotide)(專(zhuān)利文獻(xiàn)1和專(zhuān)利文獻(xiàn)2)，已知該奧曲肽對(duì)生長(zhǎng)抑素受體SSTR2、SSTR3、及SSTR5具有親和性。奧曲肽是開(kāi)發(fā)為由8個(gè)氨基酸組成的環(huán)狀肽，該奧曲肽具有作為顯示生長(zhǎng)抑素的生物活性的重要部分的4個(gè)氨基酸(Phe-Trp-Lys-Thr)的序列，具有在該序列的兩末端形成雙硫(S-S)鍵的Cys，和具有在兩末端的Cys的外側(cè)的進(jìn)一步的D-Phe與Thr(ol)。該奧曲肽可通過(guò)利用其氨基酸序列使血中半衰期提高，而獲得作用的持續(xù)性，此外，與生長(zhǎng)抑素相比，對(duì)生長(zhǎng)激素(GH)的選擇性較高，這使得其具有強(qiáng)效的作用。包括這種奧曲肽在內(nèi)的生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物可用于患有激素分泌性及激素依賴性腫瘤的患者的治療。目前已利用奧曲肽治療與作為神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤的轉(zhuǎn)移性類(lèi)癌腫瘤相關(guān)的癥狀(潮紅、腹瀉、心臟瓣膜疾病和腹痛)和與血管活性腸肽(VIP)分泌腺瘤相關(guān)的癥狀(水性腹瀉)。例如，在類(lèi)癌及VIP產(chǎn)生性腫瘤中，奧曲肽抑制其活性因子的分泌和作用。因此，在以大量分泌性腹瀉為特征的VIP產(chǎn)生性腫瘤中，生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物可以通過(guò)抑制VIP分泌，以及通過(guò)直接影響腸道分泌，而使其腹瀉減輕。然而，另一方面，有報(bào)道指出許多神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤對(duì)諸如奧曲肽等生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物具有耐性(非專(zhuān)利文獻(xiàn)3)。此外，還有報(bào)告指出將奧曲肽用于肢端肥大癥的治療，但對(duì)于約三分之一的肢端肥大癥患者并無(wú)效果。進(jìn)一步，有報(bào)告指出對(duì)于大半的類(lèi)癌腫瘤患者，奧曲肽僅在給藥初期發(fā)揮效果，若給藥時(shí)間延長(zhǎng)，則會(huì)引起急速減敏(tachyphylaxis)(速增耐性、急速免疫)。進(jìn)一步，有報(bào)道指出對(duì)于抑制初期的庫(kù)欣氏病(Cushing'sdisease)患者產(chǎn)生促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH，adrenocorticotrophichormone)，奧曲肽并未顯示出任何效果。由于如上所述的問(wèn)題，對(duì)于表達(dá)多種生長(zhǎng)抑素受體的腫瘤，期望開(kāi)發(fā)出可以如天然的生長(zhǎng)抑素般以較高的親和性與多種受體亞型結(jié)合的生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物，且有提示指出這種對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性的生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物有可能對(duì)用之前的生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物無(wú)治療效果的患者或具有耐性的患者也具有效果(非專(zhuān)利文獻(xiàn)4)。因此，期望開(kāi)發(fā)出具有與天然存在的生長(zhǎng)抑素類(lèi)似的結(jié)構(gòu)、同樣地對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性、且與生長(zhǎng)抑素相比具有延長(zhǎng)的血中半衰期的生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物。另一方面，已明確糖鏈在活體內(nèi)擔(dān)負(fù)的各種作用，為使血中的半衰期延長(zhǎng)，還提出有對(duì)奧曲肽附加糖鏈的方法(例如，專(zhuān)利文獻(xiàn)3)。然而，由于其結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和多樣性使得研究進(jìn)展緩慢，糖鏈的種類(lèi)或附加糖鏈的位置不能說(shuō)已達(dá)到最適合。尚未報(bào)道有克服了之前的生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物的問(wèn)題的附加糖鏈的多肽。[現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)][專(zhuān)利文獻(xiàn)][專(zhuān)利文獻(xiàn)1]美國(guó)專(zhuān)利第4,310,518號(hào)[專(zhuān)利文獻(xiàn)2]美國(guó)專(zhuān)利第4,235,886號(hào)[專(zhuān)利文獻(xiàn)3]日本專(zhuān)利特開(kāi)平03-014599號(hào)[非專(zhuān)利文獻(xiàn)][非專(zhuān)利文獻(xiàn)1]CurrrentOpinioninPharmacology,2004,Vol.4,pp.608-613[非專(zhuān)利文獻(xiàn)2]J.Med.Chem.2003,Vol.46,pp.5587-5596[非專(zhuān)利文獻(xiàn)3]MolEndocrinol,2010,Vol.24(1),pp.240-249[非專(zhuān)利文獻(xiàn)4]MolecularandCellularEndocrinology,Vol.286,2008,pp.69-74技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：[發(fā)明將要解決的問(wèn)題]本發(fā)明的目的在于提供一種附加糖鏈的多肽，所述附加糖鏈的多肽對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性，且與生長(zhǎng)抑素相比血中穩(wěn)定性提高。[解決問(wèn)題的技術(shù)手段]本發(fā)明的發(fā)明人等為解決上述問(wèn)題而反復(fù)進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了可以維持對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性，且血中穩(wěn)定性提高的附加糖鏈的多肽。即，本發(fā)明涉及附加糖鏈的多肽，其特征在于，其是在選自由以下的(A)～(F)所組成的組中多肽中，至少2個(gè)氨基酸經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換的附加糖鏈的多肽：(A)由以序列編號(hào)1表示的氨基酸序列構(gòu)成的SRIF14；(B)由以序列編號(hào)1表示的氨基酸序列構(gòu)成的SRIF14中缺失、經(jīng)置換或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸的多肽；(C)SRIF14的類(lèi)似物；(D)相對(duì)于由以序列編號(hào)1表示的氨基酸序列構(gòu)成的SRIF14，具有80％以上的同源性的多肽；(E)在(A)～(D)中，在N末端側(cè)進(jìn)一步含有N個(gè)(其中，N為1以上20以下的整數(shù))氨基酸的多肽；和(F)在(A)～(D)中，在C末端側(cè)進(jìn)一步含有M個(gè)(其中，M為1以上6以下的整數(shù))氨基酸的多肽；且對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性。此處，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：上述經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換的氨基酸的至少1個(gè)為相當(dāng)于SRIF14中的第19位的氨基酸。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：在所述多肽(E)中，至少2個(gè)氨基酸經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換，此處，所述經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換的氨基酸中的至少1個(gè)存在于所述多肽(E)的N末端側(cè)的所述N個(gè)氨基酸中的任一個(gè)。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：在所述多肽(F)中，至少2個(gè)氨基酸經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換，此處，所述經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換的氨基酸中的至少1個(gè)存在于所述多肽(F)的C末端側(cè)的所述M個(gè)氨基酸中的任一個(gè)。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：在所述多肽(E)中，至少2個(gè)氨基酸經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換，進(jìn)一步，附加于N末端側(cè)的所述N個(gè)氨基酸的序列以X-Y-表示，其中，X表示L個(gè)(其中，L為1以上6以下的整數(shù))任意的氨基酸的序列，且Y為選自由以下的(1)～(15)所組成的組中的序列：(1)Lys、(2)Arg-Lys、(3)Glu-Arg-Lys、(4)Arg-Glu-Arg-Lys、(5)Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(6)Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(7)Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(8)Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(9)Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg--Lys、(10)Asn-Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(11)Ser-Asn-Pro--Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(12)Asn-Ser-Asn-Pro-Ala-Met-Ala--Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(13)Ala-Asn-Ser-Asn-Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg--Glu-Arg-Lys、(14)Ser-Ala-Asn-Ser-Asn-Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg--Glu-Arg-Lys、及(15)在上述序列(2)～(14)中，缺失、經(jīng)置換或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸的序列。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：所述經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換的氨基酸中的至少1個(gè)存在于L個(gè)氨基酸中的任一個(gè)，所述L個(gè)氨基酸是指表示附加于所述多肽(E)的N末端側(cè)的所述N個(gè)氨基酸的序列的X-Y-中的X。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：附加于N末端側(cè)的所述N個(gè)氨基酸經(jīng)由連接子(linker)而連接至所述N末端側(cè)。此外，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的另一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽是在選自由以下的(A)～(F)所組成的組中的多肽中，至少2個(gè)氨基酸經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換的附加糖鏈的多肽：(A)由以序列編號(hào)2表示的氨基酸序列構(gòu)成的SRIF28；(B)由以序列編號(hào)2表示的氨基酸序列構(gòu)成的SRIF28中缺失、經(jīng)置換或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸的多肽；(C)SRIF28的類(lèi)似物；(D)相對(duì)于由以序列編號(hào)2表示的氨基酸序列構(gòu)成的SRIF28，具有80％以上的同源性的多肽；(E)在(A)～(D)的N末端側(cè)進(jìn)一步含有J個(gè)(其中，J為1以上15以下的整數(shù))氨基酸的多肽；及(F)在(A)～(D)的C末端側(cè)進(jìn)一步含有K個(gè)(其中，K為1以上6以下的整數(shù))氨基酸的多肽；且對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于所述經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換的氨基酸中的至少1個(gè)為選自由下述所組成的組中的至少1個(gè)氨基酸：相當(dāng)于SRIF28中的第1位的氨基酸、相當(dāng)于SRIF28中的第5位的氨基酸、相當(dāng)于SRIF28中的第9位的氨基酸、相當(dāng)于SRIF28中的第12位的氨基酸、相當(dāng)于SRIF28中的第13位的氨基酸、相當(dāng)于SRIF28中的第14位的氨基酸、和相當(dāng)于SRIF28中的第19位之氨基酸。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：在所述多肽(E)中，至少2個(gè)氨基酸經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換，其中，所述經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換的氨基酸中的至少1個(gè)存在于所述多肽(E)的N末端側(cè)的所述J個(gè)氨基酸中。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：在所述多肽(F)中，至少2個(gè)氨基酸經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換，其中，所述經(jīng)附加糖鏈的氨基酸置換的氨基酸中的至少1個(gè)存在于所述多肽(F)的C末端側(cè)的所述K個(gè)氨基酸中。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：與SRIF28相比，它具有增大的血中穩(wěn)定性。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：與SRIF28相比，它具有增大了10倍以上的血中半衰期。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：所述對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性對(duì)選自由SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4、和SSTR5所組成的組中的至少2種以上受體具有親和性。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：對(duì)至少SSTR1和SSTR4中的任一種具有親和性。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：對(duì)SSTR1和SSTR4都具有親和性。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：所述附加糖鏈的多肽對(duì)SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4、和SSTR5都具有親和性。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：所述各附加糖鏈的氨基酸為附加糖鏈的Asn或附加糖鏈的Cys。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：在所述各附加糖鏈的氨基酸中，糖鏈與氨基酸不經(jīng)由連接子而結(jié)合。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：在所述各附加糖鏈的氨基酸中，糖鏈包含4個(gè)以上的糖。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：在所述各附加糖鏈的氨基酸中，糖鏈為雙觸角(biantennary)復(fù)合型糖鏈、三觸角復(fù)合型糖鏈、或四觸角復(fù)合型糖鏈。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：在所述各附加糖鏈的氨基酸中，糖鏈為雙觸角復(fù)合型糖鏈。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：所述雙觸角復(fù)合型糖鏈為選自由二唾液酸糖鏈、單唾液酸糖鏈、去唾液酸糖鏈、二乙酰葡糖胺(diGlcNAc)糖鏈、和二甘露糖糖鏈所組成的組中的糖鏈。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：在所述各附加糖鏈的氨基酸中，糖鏈為下述式所表示的糖鏈，[化學(xué)式1][式中，R1及R2相同或不同，且表示下述式：[化學(xué)式2]Ac表示乙?；鵠。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：所述糖鏈在非還原末端具有至少1個(gè)唾液酸，且所述唾液酸的羧基由碳數(shù)1～30的烷基氨基、芐基、氨基、或氨基乙基氨基修飾。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：它具有多個(gè)附加糖鏈的氨基酸，其中所述各附加糖鏈的氨基酸中的糖鏈均相同。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，所述附加糖鏈的多肽的特征在于：它具有相當(dāng)于SRIF28中的17位的Cys和28位的Cys的Cys，且進(jìn)一步，這些Cys相互以雙硫鍵結(jié)合。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：所述附加糖鏈的多肽的C末端被酰胺化。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：在所述附加糖鏈的多肽的N末端導(dǎo)入有疊氮基。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：所述附加糖鏈的多肽被標(biāo)記。此外，本發(fā)明的另一方面涉及醫(yī)藥組合物，所述醫(yī)藥組合物的特征在于包含：(I)以上所描述的附加糖鏈的多肽和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、和(II)藥學(xué)上可接受的載體。此外，在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：在所述附加糖鏈的多肽中，糖鏈實(shí)質(zhì)上是均一的。此外，在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：所述醫(yī)藥組合物用于治療或預(yù)防與生長(zhǎng)抑素相關(guān)的疾病。此外，在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：所述與生長(zhǎng)抑素相關(guān)的疾病為選自由下述疾病所組成的組中的至少1種疾?。褐朔蚀蟀Y、巨人癥、阿爾茨海默病及其他形式的癡呆癥、癌、激素產(chǎn)生性腫瘤(hormoneproducingtumor)、內(nèi)分泌腫瘤、類(lèi)癌、血管活性腸肽瘤、胰島瘤、胰高血糖素瘤、庫(kù)欣氏病、激素分泌異常、糖尿病及其并發(fā)癥、疼痛、關(guān)節(jié)炎、腹瀉、胃潰瘍、炎癥性腸病、腸易激綜合癥、消化道阻塞、腸梗阻(ileus)、術(shù)后再狹窄、放射線損傷、眼疾病、干眼病、青光眼、角膜實(shí)質(zhì)炎、虹膜炎、白內(nèi)障、和結(jié)膜炎。此外，本發(fā)明的另一方面涉及與生長(zhǎng)抑素相關(guān)的疾病的治療或預(yù)防方法，其特征在于：施用有效量的以上所描述的附加糖鏈的多肽。此外，在本發(fā)明的治療或預(yù)防方法的一個(gè)實(shí)施方案中，特征在于：所述與生長(zhǎng)抑素相關(guān)的疾病為選自由下述疾病所組成的組中的至少1種疾?。褐朔蚀蟀Y、巨人癥、阿爾茨海默病及其他形式的癡呆癥、癌、激素產(chǎn)生性腫瘤、內(nèi)分泌腫瘤、類(lèi)癌、血管活性腸肽瘤、胰島瘤、胰高血糖素瘤、庫(kù)欣氏病、激素分泌異常、糖尿病及其并發(fā)癥、疼痛、關(guān)節(jié)炎、腹瀉、胃潰瘍、炎癥性腸病、腸易激綜合癥、消化道阻塞、腸梗阻、術(shù)后再狹窄、放射線損傷、眼疾病、干眼病、青光眼、角膜實(shí)質(zhì)炎、虹膜炎、白內(nèi)障、和結(jié)膜炎。發(fā)明效果本發(fā)明的附加糖鏈的多肽對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性，且通過(guò)在多肽中具有至少2個(gè)糖鏈，使得與生長(zhǎng)抑素相比具有顯著提高的血中穩(wěn)定性。此外，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽由于具有上述特征而可以用于治療生長(zhǎng)抑素相關(guān)疾病。此外，由于本發(fā)明的附加糖鏈的生長(zhǎng)抑素中所附加的糖鏈在活體內(nèi)容易分解，因此不會(huì)因其累積而對(duì)活體產(chǎn)生藥物損害。此外，本發(fā)明的附加糖鏈的生長(zhǎng)抑素中所附加的糖鏈的部分或全部為存在于包括人的哺乳類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)等活體內(nèi)的糖鏈或其變體，當(dāng)施用至體內(nèi)時(shí)，表現(xiàn)副作用或抗原性的可能性也較低。對(duì)發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)或產(chǎn)生抗體，和因此無(wú)法獲得藥效等的擔(dān)憂較少。進(jìn)一步，由于本發(fā)明中所使用的糖鏈多是相對(duì)較短的，因此可不經(jīng)過(guò)復(fù)雜的制造步驟而獲得均一的結(jié)構(gòu)。因此，可以大規(guī)模且穩(wěn)定地獲得具有生長(zhǎng)抑素活性的醫(yī)藥品級(jí)別的高品質(zhì)的附加糖鏈的多肽。附圖說(shuō)明圖1A～圖1D顯示了本發(fā)明的實(shí)施方案的附加糖鏈的多肽的各化合物名稱(chēng)、和具有所述化合物名稱(chēng)的附加糖鏈的多肽的氨基酸序列信息。此外，圖1E是顯示使用SRIF14、SRIF28、和本發(fā)明的實(shí)施方案的附加糖鏈的多肽對(duì)生長(zhǎng)抑素受體表達(dá)細(xì)胞進(jìn)行處理時(shí)，關(guān)于cAMP產(chǎn)生抑制作用(激動(dòng)劑(agonist)活性)的IC50值的圖。圖2是顯示將SRIF28和S1C(disialo)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用或皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖2中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖3是顯示將SRIF28、S1C(disialo)-SRIF28、N5C(disialo)-SRIF28、和S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用和皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖3中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖4是顯示將SRIF28、S1C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)·R13C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖4中，左側(cè)之圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖5是顯示將S1C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)·N5C(disia-lo)·A9C(disialo)-SRIF28、3C(disialo)-SRIF28、5C(disialo)-SRIF28、和10C(disialo)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖5中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為表示進(jìn)行皮下施用時(shí)多肽的血漿濃度的變化的圖。圖6是顯示將S1C(disialo)-SRIF28、N5C(disialo)-SRIF28、A9C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF28、N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)·N5C(disia-lo)·A9C(disialo)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖6中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖7是顯示將S1C(disialo)-SRIF28、S1-2C(disialo)-SRIF28、S1-3C(disialo)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖7中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖8是顯示將S1C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo(amide))-SRIF28、S1C(disialo(aminoethylamide))-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度之變化的圖。圖8中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖9是顯示將S1C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)-D-Trp22-SRIF28、S1C(disialo(Bn))-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖9中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖10是顯示將S1C(disialo)-SRIF28、R13C(disialo)-SRIF28、K14C(disialo)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖10中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖11是顯示將S1C(disialo)-SRIF28、E12C(disialo)-SRIF28、N19C(disialo)-SRIF28、29C(disialo)-SRIF28、S1C(monosialo)-SRIF28、S1C(asialo)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖11中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖12是顯示將S1C(disialo)-SRIF28、K14C(disialo)-SRIF28、C(disialo)-SRIF14向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖12中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖13是顯示將C(disialo)-SRIF14、C(disialo)-C12連接子-SRIF14、C(disialo)-PEG連接子-SRIF14向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖13中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖14是顯示將SRIF28、S1C(disialo)-SRIF28、S1C(asialo)-SRIF28、S1C(diGlcNAc)-SRIF28、S1C(diMan)-SRIF28、S1C(GlcNAc)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖14中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖15是顯示將S1C(disialo)-SRIF28、S1C(trisialo)-SRIF28、S1C(tetrasialo)-SRIF28、S1-2C(disialo)-SRIF28、S1C(Asn(disialo))-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖15中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖16是顯示將SRIF28、S1C(disialo)-SRIF28、S1-2C(disialo)-SRIF28、S1-3C(disialo)-SRIF28、S1-4C(disialo)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖16中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖17是顯示將SRIF14、C(disialo)-SRIF14、C(disialo)-K-SRIF14、C(disialo)-R-K-SRIF14、2C(disialo)-R-K-SRIF14、3C(disialo)-R-K-SRIF14向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖17中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖18是表示將S1C(asialo)-SRIF28、S1-2C(asialo)-SRIF28、S1-3C(asialo)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖18中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖19是顯示將S1C(disialo)-SRIF28、S1-2C(disialo)-SRIF28、S1-2C(asialo)-SRIF28、S1-2C(disialo(amide))-SRIF28、S1-2C(disialo(Bn))--SRIF28、C(disialo(aminoethylamide))-S1C(disialo)-SRIF28向大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用及皮下施用時(shí)血漿濃度的變化的圖。圖19中，左側(cè)的圖為顯示進(jìn)行靜脈內(nèi)施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖，右側(cè)的圖為顯示進(jìn)行皮下施用時(shí)各多肽的血漿濃度的變化的圖。圖20是顯示對(duì)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的附加糖鏈的多肽，使用大鼠血漿進(jìn)行血漿中穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果的圖。具體實(shí)施方式在本說(shuō)明書(shū)中，“生長(zhǎng)抑素”是指由14個(gè)氨基酸的序列構(gòu)成的SRIF14、或由28個(gè)氨基酸的序列構(gòu)成的SRIF28。而且，在本說(shuō)明書(shū)中，將SRIF28的氨基酸序列中的N末端的Ser設(shè)為第1位，將C末端的Cys設(shè)為第28位。其中，SRIF14與SRIF28的氨基酸序列中的第15位至第28位的氨基酸序列完全一致。而且，SRIF28的氨基酸序列的第15位為Ala，將SRIF14的氨基酸序列(序列編號(hào)1)中的N末端的Ala設(shè)為第15位以與SRIF28的第15位對(duì)應(yīng)。而且，SRIF14和SRIF28在第17位的Cys與第28位的Cys間具有雙硫鍵。SRIF14具有下述的氨基酸序列(序列編號(hào)1)。再者，在下述氨基酸序列中，“Ala15”中的15表示第15位的Ala。Ala15-Gly16-Cys17-Lys18-Asn19-Phe20-Phe21-Trp22-Lys23-Thr24-Phe25-Thr26-Ser27-Cys28SRIF28具有下述的氨基酸序列(序列編號(hào)2)。Ser1-Ala2-Asn3-Ser4-Asn5-Pro6-Ala7-Met8-Ala9-Pro10-Arg11-Glu12-Arg13-Lys14-Ala15-Gly16-Cys17-Lys18-Asn19-Phe20-Phe21-Trp22-Lys23-Thr24-Phe25-Thr26-Ser27-Cys28在本說(shuō)明書(shū)中，“氨基酸”，在其最廣泛的含義上使用，不僅包括天然的氨基酸，還包括如氨基酸變異體和衍生物等非天然氨基酸?？紤]到該廣泛的定義，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，本說(shuō)明書(shū)中的氨基酸的實(shí)例包括：例如天然蛋白原性L-氨基酸；D-氨基酸；諸如氨基酸變異體和衍生物等經(jīng)化學(xué)修飾的氨基酸；正亮氨酸、β-丙氨酸、鳥(niǎo)氨酸等天然非蛋白原性氨基酸；和具有作為氨基酸的特征的本領(lǐng)域所公知的特性的化學(xué)合成的化合物等。非天然氨基酸的實(shí)例包括：α-甲基氨基酸(諸如α-甲基丙氨酸等)、D-氨基酸、組氨酸式的氨基酸(諸如2-氨基-組氨酸、β-羥基-組氨酸、高組氨酸(homohistidine)、α-氟甲基-組氨酸和α-甲基-組氨酸等)、側(cè)鏈中具有多余的亞甲基的氨基酸(“高”氨基酸)和側(cè)鏈中的羧酸官能團(tuán)氨基酸被磺酸基置換的氨基酸(諸如磺丙氨酸等)。已知對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性的某些生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物包含非天然氨基酸。在優(yōu)選的方面中，本發(fā)明的化合物中所含的氨基酸僅由天然氨基酸組成。在本說(shuō)明書(shū)中，當(dāng)1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、被置換或附加時(shí)，對(duì)于被置換等的氨基酸的數(shù)目沒(méi)有特別限定，只要可保持對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性即可，被置換等的氨基酸的數(shù)目為1～9個(gè)，優(yōu)選為1～5個(gè)，更優(yōu)選為約1～3個(gè)，或者為整個(gè)長(zhǎng)度的20％以下，優(yōu)選為10％以下。被置換或附加的氨基酸可為天然氨基酸、非天然氨基酸或氨基酸類(lèi)似物，優(yōu)選為天然氨基酸。1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、被置換或附加所得的生長(zhǎng)抑素肽的實(shí)例包括：第22位的Trp被D型的Trp(D-Trp)置換所得的生長(zhǎng)抑素肽、使第19位的Asn缺失所得的生長(zhǎng)抑素肽(J.Med.Chem,2001,44,2238-2246)、第25位的Phe被Tyr置換所得的生長(zhǎng)抑素肽、第8位的Met被Leu置換所得的生長(zhǎng)抑素肽(Endocrinology,1982,10:1049-1051)等。在本發(fā)明中，所謂“SRIF14或SRIF28的類(lèi)似物”，是指結(jié)構(gòu)上與生長(zhǎng)抑素類(lèi)似的多肽和/或具有與生長(zhǎng)抑素重復(fù)的結(jié)構(gòu)的多肽，例如：生長(zhǎng)抑素的1個(gè)或多個(gè)氨基酸被保守性(conservatively)置換的多肽、生長(zhǎng)抑素改性物、對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性的生長(zhǎng)抑素片段、對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性的延長(zhǎng)的生長(zhǎng)抑素。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂“1個(gè)或多個(gè)氨基酸被保守性置換”，是指在氨基酸置換中原來(lái)的氨基酸與所置換的氨基酸的親水性指數(shù)和/或疏水性指數(shù)是類(lèi)似的置換，且在這樣的置換前后，對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性不會(huì)產(chǎn)生明顯的降低或消失。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂“生長(zhǎng)抑素改性物”，是指包括生長(zhǎng)抑素的天然存在的變異體、或?qū)ιL(zhǎng)抑素進(jìn)行人工改性而成的化合物在內(nèi)的生長(zhǎng)抑素改性物，這樣的改性的實(shí)例包括：例如生長(zhǎng)抑素的1個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的烷基化、?；?例如乙?；?、酰胺化、羧基化、酯形成、雙硫鍵形成、糖基化、脂質(zhì)化、磷酸化、羥基化、標(biāo)記成分的結(jié)合等。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂“對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性的生長(zhǎng)抑素片段”，是指自生長(zhǎng)抑素的N末端和/或C末端缺失1個(gè)以上的氨基酸、且維持對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性的肽。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂“對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性的延長(zhǎng)的生長(zhǎng)抑素”，是指在SRIF28或SRIF14的N末端和/或C末端附加有1個(gè)以上的氨基酸、且維持對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性的肽。本發(fā)明的附加糖鏈的多肽包括：在由與以序列編號(hào)1表示的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列組成的多肽、由與以序列編號(hào)2表示的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列組成的多肽、或在這些多肽的N末端或C末端進(jìn)一步附加有氨基酸的多肽中，至少1個(gè)氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換，且所述多肽對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性的附加糖鏈的多肽。與序列編號(hào)1或序列編號(hào)2具有同源性的多肽優(yōu)選具有80％以上、85％以上、90％以上、95％以上的同源性，只要對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性即可。本發(fā)明的附加糖鏈的多肽還包括在如上所述的SRIF14或SRIF28的N末端和/或C末端進(jìn)一步附加有氨基酸的多肽。在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中，對(duì)于進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端的氨基酸并沒(méi)有特別限制，只要能維持對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性即可，例如可附加1個(gè)以上20個(gè)以下的氨基酸。此處，進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端的氨基酸可以X-Y-表示。而且，Y為直接結(jié)合至SRIF14多肽的N末端氨基酸的氨基酸，Y由以下的(1)～(15)中的任意氨基酸序列構(gòu)成：(1)Lys、(2)Arg-Lys、(3)Glu-Arg-Lys、(4)Arg-Glu-Arg-Lys、(5)Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(6)Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(7)Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(8)Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(9)Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(10)Asn-Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(11)Ser-Asn-Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(12)Asn-Ser-Asn-Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(13)Ala-Asn-Ser-Asn-Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、(14)Ser-Ala-Asn-Ser-Asn-Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys、和(15)在上述序列(2)～(14)中，1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、被置換或附加的序列。此外，X為1個(gè)以上6個(gè)以下的任意的氨基酸，表示1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)或6個(gè)任意的氨基酸。X優(yōu)選為附加糖鏈的氨基酸，更優(yōu)選為附加糖鏈的Asn或附加糖鏈的Cys。在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中，對(duì)于進(jìn)一步附加至SRIF28的N末端的氨基酸并沒(méi)有特別限制，只要能維持對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性即可，例如可以附加1個(gè)以上15個(gè)以下的任意的氨基酸，可附加1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)、6個(gè)、7個(gè)、8個(gè)、9個(gè)、10個(gè)、11個(gè)、12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、或15個(gè)任意的氨基酸。進(jìn)一步附加至SRIF28的N末端的氨基酸優(yōu)選為附加糖鏈的氨基酸，更優(yōu)選為附加糖鏈的Asn或附加糖鏈的Cys。此外，所述1個(gè)以上15個(gè)以下的任意的氨基酸全部都可以為附加糖鏈的氨基酸。在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中，對(duì)于進(jìn)一步附加至SRIF14或SRIF28的C末端的氨基酸并沒(méi)有特別限制，只要能維持對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性即可，例如可附加1個(gè)以上6個(gè)以下的任意的氨基酸，可附加1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)或6個(gè)任意的氨基酸。進(jìn)一步附加至SRIF14或SRIF28的C末端的氨基酸優(yōu)選為附加糖鏈的氨基酸，更優(yōu)選為附加糖鏈的Asn或附加糖鏈的Cys。此外，1個(gè)以上6個(gè)以下的任意的氨基酸全部都可以為附加糖鏈的氨基酸。在本說(shuō)明書(shū)中，“在生長(zhǎng)抑素的N末端側(cè)(SRIF28的第1位或SRIF14的第15位)進(jìn)一步附加有1個(gè)或多個(gè)氨基酸的肽”，在SRIF28的情況中，是指在作為N末端的第1位的Ser上進(jìn)一步附加有任意的氨基酸或附加糖鏈的氨基酸的肽。此外，在SRIF14的情況中，是指在作為N末端的第15位的Ala上進(jìn)一步附加有任意的氨基酸或附加糖鏈的氨基酸的肽。同樣地，“在C末端側(cè)(SRIF28或SRIF14的第28位)進(jìn)一步附加有1個(gè)或多個(gè)氨基酸的肽”，是指在SRIF28或SRIF14的第28位的Cys上進(jìn)一步附加任意的氨基酸或附加糖鏈的氨基酸的肽。本發(fā)明的附加糖鏈的多肽也可以在其N(xiāo)末端或C末端經(jīng)由連接子進(jìn)一步附加氨基酸。這樣的連接子的實(shí)例包括：例如兩末端具有氨基和羧基以使其能夠與氨基酸形成肽鍵的烷基鏈或聚乙二醇鏈等。這樣的連接子的實(shí)例包括：例如-NH-(CH2)n-CO-(式中，n為整數(shù)，n并沒(méi)有特別限定，只要不阻礙目標(biāo)的連接子功能即可，但優(yōu)選為表示1～15的整數(shù))或-NH-(CH2CH2O)m-CH2CH2-CO-(式中，m為整數(shù)，m并沒(méi)有特別限定只要不阻礙目標(biāo)的連接子功能即可，但優(yōu)選為表示1～7的整數(shù))等。更具體地說(shuō)，實(shí)例可以包括：-NH-(CH2)11-CO-(C12連接子)或-NH-(CH2CH2O)3-CH2CH2-CO-(PEG連接子)等。此外，經(jīng)由連接子而附加至附加糖鏈的多肽的氨基酸并無(wú)特別限定，但優(yōu)選為附加糖鏈的氨基酸。附加糖鏈的氨基酸實(shí)例可以包括：附加糖鏈的Asn或附加糖鏈的Cys。此外，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，附加糖鏈的多肽也可在其N(xiāo)末端導(dǎo)入疊氮基。優(yōu)選使附加糖鏈的多肽的N末端疊氮化，因?yàn)檫@樣可利用疊氮化物-炔[3+2]環(huán)加成反應(yīng)或Staudinger反應(yīng)等有選擇地導(dǎo)入各種分子。使附加糖鏈的多肽疊氮化的方法并無(wú)特別限制，例如可以通過(guò)使用縮合劑使固相合成中在樹(shù)脂上合成的糖肽的N末端與疊氮基取代的脂肪酸縮合而獲得。疊氮基取代的脂肪酸可以包括：4-疊氮基丁酸、5-疊氮基-戊酸(5-Azido-pentanoicacid)、6-疊氮基己酸。此外，于本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，附加糖鏈的多肽也可在其N(xiāo)末端附加標(biāo)記化合物。本發(fā)明中所使用的標(biāo)記化合物的實(shí)例包括但并不限于以下：例如生物素(Biotin)、螢光色素、金屬離子螯合劑等?？墒箻?biāo)記化合物與糖肽的N末端直接結(jié)合，也可經(jīng)由連接子而與糖肽的N末端結(jié)合。例如，通過(guò)將生物素作為標(biāo)記化合物而附加至糖肽的N末端，可以利用與抗生物素蛋白的較強(qiáng)的結(jié)合，而應(yīng)用于研究用試劑、臨床檢查藥、或?qū)棷煼?missiletherapy)。而且，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽上附加標(biāo)記化合物可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法進(jìn)行。例如，可以使用縮合劑使固相合成中的樹(shù)脂上的附加糖鏈的多肽的N末端與標(biāo)記化合物縮合。本發(fā)明的“附加糖鏈的多肽”的特征在于：至少2個(gè)氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換。在本說(shuō)明書(shū)中，“附加糖鏈的多肽”包括生長(zhǎng)抑素的至少2個(gè)氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換的多肽、上述生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物中至少2個(gè)氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換的多肽等，即便分別進(jìn)一步使除附加糖鏈的氨基酸以外的其他氨基酸中的1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、經(jīng)置換或附加，這樣的多肽也包括在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽內(nèi)。這些肽的C末端被酰胺化的肽(諸如，具有Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys--NH2(序列編號(hào)3)的氨基酸序列的SRIF14NH2、或具有Ser-Ala-Asn-Ser--Asn-Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-NH2(序列編號(hào)4)的氨基酸序列的SRIF28NH2)的至少2個(gè)氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換的肽也包括在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽內(nèi)。進(jìn)一步，這些肽的鹽也包括在附加糖鏈的多肽內(nèi)。在本說(shuō)明書(shū)中，鹽可為任意的酸加成鹽或堿加成鹽。通常用以形成酸加成鹽的酸為鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸等無(wú)機(jī)酸以及對(duì)甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、對(duì)溴苯基磺酸、甲酸、琥珀酸、檸檬酸、苯甲酸、乙酸等有機(jī)酸。堿加成鹽包括由諸如氫氧化銨或堿金屬氫氧化物或堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽、重碳酸鹽等無(wú)機(jī)堿衍生的鹽。優(yōu)選為藥學(xué)上可接受的鹽。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂“附加糖鏈的氨基酸”，是指結(jié)合有糖鏈的氨基酸，此處，糖鏈與氨基酸也可以經(jīng)由連接子而結(jié)合。糖鏈與氨基酸的結(jié)合部位并無(wú)特別限制，但優(yōu)選為在糖鏈的還原末端結(jié)合氨基酸。結(jié)合糖鏈的氨基酸的類(lèi)型并無(wú)特別限定，可以使用任意的天然氨基酸和非天然氨基酸。就附加糖鏈的氨基酸具有與在活體內(nèi)以糖肽(糖蛋白)的形式存在的那些肽相同或類(lèi)似的結(jié)構(gòu)的觀點(diǎn)來(lái)說(shuō)，附加糖鏈的氨基酸優(yōu)選為附加糖鏈(如N-結(jié)合型糖鏈等)的Asn、附加糖鏈(如O-結(jié)合型糖鏈等)的Ser和Thr，特別優(yōu)選為附加糖鏈的Asn。此外，當(dāng)糖鏈與氨基酸經(jīng)由連接子而結(jié)合時(shí)，就容易與連接子結(jié)合的觀點(diǎn)而言，附加糖鏈的氨基酸的氨基酸優(yōu)選為：諸如天冬氨酸或谷氨酸等分子內(nèi)具有2個(gè)以上羧基的氨基酸；諸如賴氨酸、精氨酸、組氨酸和色氨酸等分子內(nèi)具有2個(gè)以上氨基的氨基酸；諸如絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸等分子內(nèi)具有羥基的氨基酸；諸如半胱氨酸等分子內(nèi)具有硫醇基的氨基酸；諸如天冬酰氨、谷氨酰胺等分子內(nèi)具有酰氨基的氨基酸。尤其是就反應(yīng)性的觀點(diǎn)而言，優(yōu)選為天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰氨、谷氨酰胺。而且，對(duì)于本發(fā)明的任意的附加糖鏈的多肽，認(rèn)為如果糖鏈結(jié)構(gòu)、糖鏈以外的結(jié)構(gòu)、糖鏈的附加部位和糖鏈的附加數(shù)目相同，那么無(wú)論附加糖鏈的氨基酸為附加糖鏈的Asn(不經(jīng)由連接子)或是附加糖鏈的Cys(經(jīng)由連接子)，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的血中半衰期都沒(méi)有大的差異。當(dāng)糖鏈與氨基酸經(jīng)由連接子而結(jié)合時(shí)，可以廣泛地使用本領(lǐng)域中所使用的連接子，所述連接子的實(shí)例包括：例如-NH-(CO)-(CH2)a-CH2-(式中，a為整數(shù)，且并無(wú)限定，只要不阻礙目標(biāo)的連接子功能即可，但優(yōu)選為表示0～4的整數(shù))、C1-10聚亞甲基、-CH2-R-(其中，R為通過(guò)使選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、碳環(huán)基、取代的碳環(huán)基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基所組成的組中的基團(tuán)中的1個(gè)氫原子脫離而生成的基團(tuán))、-(CO)-(CH2)a-(CO)-(式中，a為整數(shù)，且并無(wú)限定，只要不阻礙目標(biāo)的連接子功能即可，但優(yōu)選為表示0～4的整數(shù))等。在附加糖鏈的氨基酸中，當(dāng)糖鏈與生長(zhǎng)抑素骨架上的氨基酸經(jīng)由連接子而結(jié)合時(shí)，優(yōu)選的是連接子在糖鏈側(cè)的末端包含氨基酸。氨基酸的類(lèi)型并無(wú)特別限定，但優(yōu)選的實(shí)例可以包括Asn。而且，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的制造方法并不受其描述(諸如，“氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換的附加糖鏈的多肽”的描述)的任何限定，利用下述的A法或B法中的任一方法所制造的附加糖鏈的多肽均包含在“氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換的附加糖鏈的多肽”中。此外，只要最終的結(jié)構(gòu)一致，則例如下述附加糖鏈的多肽也包含在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽內(nèi)：使未結(jié)合有氨基酸的糖鏈直接或經(jīng)由連接子而結(jié)合至肽上的氨基酸而形成的附加糖鏈的多肽；在附加糖鏈的多肽中，通過(guò)對(duì)所附加的糖鏈進(jìn)一步附加糖或糖鏈而使已附加的糖鏈延長(zhǎng)的附加糖鏈的多肽；使1個(gè)或多個(gè)氨基酸與附加糖鏈的氨基酸的氨基和/或羧基結(jié)合，進(jìn)一步使其與1個(gè)或多個(gè)生長(zhǎng)抑素片段連接而形成的附加糖鏈的多肽；和使結(jié)合有氨基酸的糖鏈經(jīng)由連接子而結(jié)合至肽上的氨基酸而形成的附加糖鏈的多肽等。在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中，被附加糖鏈的氨基酸置換的氨基酸的數(shù)目可以根據(jù)諸如血中穩(wěn)定性或生長(zhǎng)激素等的分泌抑制等生物活性、最終的附加糖鏈的多肽中所存在的氨基酸的數(shù)目或糖鏈附加前后附加糖鏈的多肽的分子量等而適當(dāng)調(diào)節(jié)。例如，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽在其氨基酸序列中可以有2～15個(gè)氨基酸置換為附加糖鏈的氨基酸。而且，就血中穩(wěn)定性的觀點(diǎn)而言，只要可以獲得所期望的活性，則優(yōu)選為置換2個(gè)以上的氨基酸，例如、優(yōu)選為置換2～10個(gè)氨基酸，更優(yōu)選為置換2～3個(gè)氨基酸。通常，在生長(zhǎng)抑素的1個(gè)氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換所得的附加糖鏈的多肽中，當(dāng)將附加糖鏈的氨基酸以外的1個(gè)以上氨基酸進(jìn)一步以附加糖鏈的氨基酸置換時(shí)，血中穩(wěn)定性將增大。另一方面，雖然有對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性減少的傾向，但由于附加糖鏈的多肽的血中穩(wěn)定性增大，因此可以補(bǔ)償或增大減少的生長(zhǎng)抑素活性。此外，當(dāng)附加糖鏈的多肽中具有多個(gè)糖鏈時(shí)，在附加糖鏈的多肽的氨基酸序列中，每個(gè)糖鏈可以附加至連續(xù)的氨基酸，也可以附加至具有間隔的氨基酸。優(yōu)選將糖鏈配置得較密，因?yàn)檫@樣血漿濃度不會(huì)急劇上升。當(dāng)將糖鏈配置得較密時(shí)，例如可在SRIF14或SRIF28的N末端附加約2～15個(gè)的連續(xù)的附加糖鏈的氨基酸。此外，就生物利用度的觀點(diǎn)而言，優(yōu)選的附加糖鏈的位置是隔開(kāi)間隔地附加多個(gè)糖鏈，而不是較密地附加至連續(xù)的氨基酸。在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中，將氨基酸以附加糖鏈的氨基酸置換的部位可以根據(jù)對(duì)至少1種生長(zhǎng)抑素受體具有親和性的觀點(diǎn)而適當(dāng)調(diào)節(jié)，且優(yōu)選地，可以根據(jù)對(duì)多種生長(zhǎng)抑素受體具有親和性的觀點(diǎn)而適當(dāng)調(diào)節(jié)。在本發(fā)明的一方面中，就附加糖鏈的多肽對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性中的對(duì)SSTR1～SSTR5中的多種受體具有親和性來(lái)說(shuō)，將氨基酸以附加糖鏈的氨基酸置換的部位可以包括：例如相當(dāng)于SRIF14中的第19位的氨基酸，進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的附加在自N末端側(cè)起第1個(gè)、第2個(gè)、第3個(gè)、第6個(gè)、第10個(gè)、和第14個(gè)的氨基酸，和進(jìn)一步附加至SRIF14的C末端側(cè)的氨基酸中的附加在自C末端側(cè)起第1個(gè)和第2個(gè)的氨基酸。優(yōu)選地可以包括：進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的附加在自N末端側(cè)起第3個(gè)、第6個(gè)、第10個(gè)、和第14個(gè)的氨基酸。此外，同樣地，就對(duì)SSTR1～SSTR5中的多種受體具有親和性來(lái)說(shuō)，將氨基酸以附加糖鏈的氨基酸置換的部位可以包括：相當(dāng)于SRIF28中的第1位、第5位、第9位、第12位、第13位、第14位、和第19位的氨基酸，和進(jìn)一步附加至SRIF28的C末端的氨基酸中的自C末端側(cè)起附加在第1個(gè)、和第2個(gè)的氨基酸。優(yōu)選地可以包括：相當(dāng)于SRIF28的第1位、第5位、第9位、和第12位的氨基酸。此外，就附加糖鏈的多肽對(duì)多種生長(zhǎng)抑素受體具有親和性來(lái)說(shuō)，尤其是將本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的2個(gè)以上氨基酸以附加糖鏈的氨基酸置換的實(shí)例可以包括：例如進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第10個(gè)和第14個(gè)的氨基酸；進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第6個(gè)和第10個(gè)的氨基酸；進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第2個(gè)和第14個(gè)的氨基酸；進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第14個(gè)和第15個(gè)的氨基酸；進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第14個(gè)、第15個(gè)、和第16個(gè)的氨基酸；進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第6個(gè)、第10個(gè)、和第14個(gè)的氨基酸。優(yōu)選地，它可以包括：例如將以下氨基酸置換：進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第10個(gè)和第14個(gè)的氨基酸；進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第6位和第10個(gè)的氨基酸；進(jìn)一步附加在SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第14個(gè)和第15個(gè)的氨基酸；進(jìn)一步附加在SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第14個(gè)、第15個(gè)、和第16個(gè)的氨基酸；進(jìn)一步附加在SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第6個(gè)、第10個(gè)、和第14個(gè)的氨基酸。此外，同樣地，就附加糖鏈的多肽對(duì)多種生長(zhǎng)抑素受體具有親和性來(lái)說(shuō)，將2個(gè)以上氨基酸以附加糖鏈的氨基酸置換的實(shí)例可以包括以下等氨基酸的置換：相當(dāng)于SRIF28中的第1位和第5位的氨基酸；相當(dāng)于第5位和第9位的氨基酸；相當(dāng)于第1位和第13位的氨基酸；相當(dāng)于第1位的氨基酸和進(jìn)一步附加至第1位的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第1個(gè)的氨基酸；相當(dāng)于第1位的氨基酸和進(jìn)一步附加至第1位的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第1個(gè)和第2個(gè)的氨基酸；相當(dāng)于第1位、第5位、和第9位的氨基酸；優(yōu)選地，相當(dāng)于第1位和第5位的氨基酸的置換；相當(dāng)于第5位和第9位的氨基酸的置換；相當(dāng)于第1位的氨基酸與進(jìn)一步附加至第1位的N末端側(cè)的氨基酸中的附加在第1個(gè)的氨基酸；相當(dāng)于第1位的氨基酸與進(jìn)一步附加至第1位的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第1個(gè)和第2個(gè)的氨基酸；相當(dāng)于第1位、第5位、和第9位的氨基酸。在本發(fā)明的一方面中，就附加糖鏈的多肽的血中穩(wěn)定性來(lái)說(shuō)，將氨基酸以附加糖鏈的氨基酸置換的部位可以包括：例如相當(dāng)于SRIF14中的第19位的氨基酸，進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第1個(gè)、第2個(gè)、第3個(gè)、第6個(gè)、第10個(gè)、第14個(gè)的氨基酸，進(jìn)一步附加至SRIF14的C末端側(cè)的氨基酸中的自C末端側(cè)起附加在第1個(gè)、和第2個(gè)的氨基酸。優(yōu)選地，將氨基酸以附加糖鏈的氨基酸置換的部位可以包括：相當(dāng)于SRIF14中的第19位的氨基酸，進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第1個(gè)和第2個(gè)的氨基酸，進(jìn)一步附加至SRIF14的C末端側(cè)的氨基酸中的自C末端側(cè)起附加在第1個(gè)、和第2個(gè)的氨基酸。更優(yōu)選為相當(dāng)于SRIF14中的第19位的氨基酸，進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端側(cè)的氨基酸中的自N末端側(cè)起附加在第1個(gè)的氨基酸，和進(jìn)一步附加在SRIF14的C末端側(cè)的氨基酸中的自C末端側(cè)起附加在第1個(gè)的氨基酸。此外，同樣地，就附加糖鏈的多肽的血中穩(wěn)定性來(lái)說(shuō)，例如為選自由相當(dāng)于SRIF28中的第1位、第5位、第9位、第12位、第13位、第14位、和第19位的氨基酸，以及進(jìn)一步附加至SRIF28的C末端的氨基酸中的自C末端側(cè)起附加在第1個(gè)、和第2個(gè)的氨基酸所組成的組中的1個(gè)以上的氨基酸；優(yōu)選為選自由相當(dāng)于SRIF28中的第13位、第14位、和第19位的氨基酸，以及進(jìn)一步附加至SRIF28的C末端的氨基酸中的自C末端側(cè)起附加在第1個(gè)、和第2個(gè)的氨基酸所組成的組中的1個(gè)以上的氨基酸；特別優(yōu)選為選自由相當(dāng)于SRIF28中的第14位、和第19位的氨基酸，以及進(jìn)一步附加在SRIF28的C末端的氨基酸中的自C末端側(cè)起附加在第1個(gè)的氨基酸所組成的組中的1個(gè)以上的氨基酸。尤其是將與SRIF28的N末端相距較遠(yuǎn)的部位的氨基酸置換也是優(yōu)選的。此處，所謂“相當(dāng)于特定的氨基酸的氨基酸”，只要在附加糖鏈的多肽中無(wú)氨基酸的附加、缺失等，則是指與SRIF14或SRIF28的氨基酸序列對(duì)應(yīng)的同一位置的氨基酸。此外，如果在附加糖鏈的多肽的氨基酸序列內(nèi)存在氨基酸的附加、缺失時(shí)，則是指位于考慮到因氨基酸附加、缺失而引起的氨基酸序列上的移動(dòng)的位置的氨基酸。例如，在第1位至第4位具有序列Ser1-Ala2-Asn3-Ser4-的附加糖鏈的多肽中，當(dāng)在第2位和第3位的氨基酸之間附加1個(gè)氨基酸(Trp)時(shí)(Ser-Ala-Trp-Asn-Ser-)，所謂相當(dāng)于第3位的氨基酸(Asn)的氨基酸，是指附加糖鏈的多肽中因Trp的插入而向C末端側(cè)移動(dòng)1位的氨基酸(Asn)。在本發(fā)明的一方面中，由附加糖鏈的氨基酸置換的氨基酸優(yōu)選為選自除相當(dāng)于SRIF28中的第17位、第21位、第22位、第23位、和第28位的氨基酸以外的氨基酸中的1個(gè)以上的氨基酸，特別更優(yōu)選為選自除相當(dāng)于SRIF28中的第17位、第22位、第23位、和第28位的氨基酸以外的氨基酸中的1個(gè)以上的氨基酸。在本發(fā)明的一方面中，當(dāng)2個(gè)以上氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換時(shí)，將氨基酸以附加糖鏈的氨基酸置換的部位可采用上述任意組合，但并不限定于此。例如下述等組合也包含在本發(fā)明的一優(yōu)選的方面中：1個(gè)部位選自上述優(yōu)選的部位，其他部位選自SRIF14或SRIF28的任意的部位的組合；1個(gè)部位選自上述優(yōu)選的部位，其他部位選自進(jìn)一步附加至生長(zhǎng)抑素的N末端(SRIF28中的第1位、或SRIF14中的第15位)或C末端的1個(gè)或多個(gè)氨基酸的任意的部位的組合。此外，更優(yōu)選地是在附加糖鏈的多肽中，2個(gè)以上的氨基酸在上述特定的氨基酸處被置換為附加糖鏈的氨基酸。此外，進(jìn)一步優(yōu)選的是附加糖鏈的多肽中所包含的所有附加糖鏈的氨基酸均在上述特定的氨基酸處置換為附加糖鏈的氨基酸。在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中，2個(gè)氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換的附加糖鏈的多肽中的2個(gè)被置換的氨基酸的組合例如可以是選自由下述所組成的組中的2個(gè)氨基酸：SRIF14中相當(dāng)于第19位的氨基酸，進(jìn)一步附加至SRIF14的N末端的氨基酸中的自N末端側(cè)起第1個(gè)、第2個(gè)、第3個(gè)、第6個(gè)、第10個(gè)、第14個(gè)氨基酸，進(jìn)一步附加至SRIF14的C末端側(cè)的氨基酸中的自C末端側(cè)起第1個(gè)、和第2個(gè)氨基酸。此外，同樣可列舉選自由下述所組成的組中的2個(gè)氨基酸：SRIF28中相當(dāng)于第1位、第5位、第9位、第12位、第13位、第14位、和第19位的氨基酸，以及進(jìn)一步附加至SRIF28的C末端的第1個(gè)氨基酸和進(jìn)一步附加至SRIF28的C末端的第2個(gè)氨基酸。3個(gè)氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換的附加糖鏈的多肽、或4個(gè)以上的氨基酸被附加糖鏈的氨基酸置換的附加糖鏈的多肽的置換位置也同樣可以包括選自由上述特定的氨基酸所組成的組中的3個(gè)或4個(gè)以上氨基酸的組合。然而，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽并不限定于上述所列舉的組合，只要對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性，且具有與天然存在的生長(zhǎng)抑素相比提高的血中穩(wěn)定性，則也包含上述以外的組合。在本發(fā)明的一方面中，附加糖鏈的氨基酸以外的產(chǎn)生氨基酸的缺失、置換或附加的部位例如優(yōu)選為選自除相當(dāng)于SRIF28中的第17位、第22位、第23位和第28位的氨基酸以外的氨基酸中的1個(gè)以上的氨基酸。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂“糖鏈”，是指1個(gè)以上的單元糖(單糖和/或其衍生物)連接而成的化合物。當(dāng)存在2個(gè)以上的單元糖連接時(shí)，各單元糖通過(guò)脫水縮合而在彼此之間產(chǎn)生糖苷鍵而彼此結(jié)合。這樣的糖鏈包括但不限于，諸如活體中所含的一系列的單糖類(lèi)和多糖類(lèi)(葡萄糖、半乳糖、甘露糖、海藻糖、木糖、N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、唾液酸和它們的復(fù)合物和衍生物)，以及諸如分解的多糖、糖蛋白、蛋白多糖(Proteoglycan)、糖胺聚糖(glycosaminoglycan)、糖脂(glycolipids)等自復(fù)合活體分子分解或衍生的糖鏈等。糖鏈可以為直鏈型，也可以為支鏈型。此外，在本說(shuō)明書(shū)中，“糖鏈”也包括糖鏈的衍生物，糖鏈的衍生物包括但不限于構(gòu)成糖鏈的糖為下述糖的糖鏈：例如具有羧基的糖(例如，C-1位經(jīng)氧化而成為羧酸的醛糖酸(例如，D-葡萄糖經(jīng)氧化而成的D-葡萄糖酸)、末端的C原子成為羧酸的糖醛酸(D-葡萄糖經(jīng)氧化而成的D-葡糖醛酸))、具有氨基或氨基的衍生物(例如，經(jīng)乙酰化的氨基)的糖(例如，N-乙酰基-D-葡糖胺、N-乙?；?D-半乳糖胺等)、同時(shí)具有氨基和羧基的糖(例如，N-乙酰神經(jīng)胺糖酸(唾液酸)、N-乙酰胞壁酸等)、經(jīng)脫氧化的糖(例如，2-脫氧-D-核糖)、含有硫酸基的硫酸化糖、含有磷酸基的磷酸化糖等。在本發(fā)明中，優(yōu)選的糖鏈為，將該糖鏈附加至生長(zhǎng)抑素(當(dāng)以附加糖鏈的氨基酸的形式與生長(zhǎng)抑素的氨基酸進(jìn)行置換時(shí))時(shí)，可使生長(zhǎng)抑素的血中穩(wěn)定性增大，且不使對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的親和性消失的糖鏈。在本發(fā)明的某方面中，優(yōu)選的糖鏈為，將該糖鏈附加至生長(zhǎng)抑素(當(dāng)以附加糖鏈的氨基酸的形式與生長(zhǎng)抑素的氨基酸進(jìn)行置換時(shí))時(shí)，可維持對(duì)生長(zhǎng)抑素的多種受體的親和性的糖鏈，進(jìn)一步優(yōu)選為可維持對(duì)生長(zhǎng)抑素的全部受體的親和性的糖鏈。本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中的糖鏈并無(wú)特別限定，可以為在活體內(nèi)以復(fù)合糖類(lèi)(糖肽(或糖蛋白)、蛋白多糖、糖脂等)的形式存在的糖鏈，也可以為在活體內(nèi)不以復(fù)合糖類(lèi)的形式存在的糖鏈。就將本發(fā)明的附加糖鏈的多肽施用至活體來(lái)說(shuō)，優(yōu)選的是在活體內(nèi)以復(fù)合糖類(lèi)的形式存在的糖鏈。這樣的糖鏈的實(shí)例包括：N-結(jié)合型糖鏈、O-結(jié)合型糖鏈等，所述N-結(jié)合型糖鏈、O-結(jié)合型糖鏈等是在活體內(nèi)結(jié)合至肽(或蛋白質(zhì))的作為糖肽(或糖蛋白)形式的糖鏈。優(yōu)選使用N-結(jié)合型糖鏈。N-結(jié)合型糖鏈例如可以包括：高甘露糖(highmannoside)型、復(fù)合(complex)型、混成(hybrid)型，特別優(yōu)選為復(fù)合型。本發(fā)明中所使用的優(yōu)選的復(fù)合型糖鏈的實(shí)例包括例如下述通式所表示的糖鏈：[化學(xué)式3][式中，R1和R2相同或不同，且表示下述式：[化學(xué)式4]Ac表示乙?；鵠。此外，在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中，即便糖鏈為在活體內(nèi)以復(fù)合糖類(lèi)的形式存在的糖鏈，也可以以O(shè)-結(jié)合型和N-結(jié)合型以外的方法與生長(zhǎng)抑素肽結(jié)合。例如，如上所述，糖鏈經(jīng)由連接子結(jié)合至Cys或Lys的那些方法也包含在本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中。在本發(fā)明的一方面中，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中的糖鏈優(yōu)選為由4個(gè)以上、例如5個(gè)以上、7個(gè)以上、特別是9個(gè)以上、11個(gè)以上的糖組成的糖鏈。在本發(fā)明的一優(yōu)選的方面中，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中的糖鏈為由5～11個(gè)、9～11個(gè)或11個(gè)糖組成的糖鏈。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的方面中，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中的糖鏈為雙觸角的復(fù)合型糖鏈。復(fù)合型糖鏈的特征在于：其包含2種以上的單糖，且具有以下所示的基本結(jié)構(gòu)與以Galβ1-4GlcNAc所表示的乳糖胺結(jié)構(gòu)。[化學(xué)式5]所謂雙觸角復(fù)合型糖鏈，是指在基本結(jié)構(gòu)的末端的2個(gè)甘露糖上分別結(jié)合有由0～3糖組成的單觸角糖鏈的那些糖鏈。雙鏈復(fù)合型糖鏈的實(shí)例優(yōu)選為例如以下所示的二唾液酸糖鏈、[化學(xué)式6]單唾液酸糖鏈、[化學(xué)式7][化學(xué)式7A]去唾液酸糖鏈：[化學(xué)式8]二乙酰葡糖胺糖鏈：[化學(xué)式9]二甘露糖糖鏈：[化學(xué)式10]等，更優(yōu)選為二唾液酸糖鏈。此外，本發(fā)明的復(fù)合型糖鏈除上述的雙觸角復(fù)合型糖鏈以外，還包含三觸角的復(fù)合型糖鏈(三分支型復(fù)合型糖鏈)、四觸角的復(fù)合型糖鏈(四分支型復(fù)合型糖鏈)。例如，三觸角、四觸角的復(fù)合型糖鏈可以包括以下的結(jié)構(gòu)式所表示的三唾液酸糖鏈：[化學(xué)式-1][化學(xué)式-2]和下述結(jié)構(gòu)式所表示的四唾液酸糖鏈：[化學(xué)式-3]此外，三觸角復(fù)合型糖鏈和四觸角復(fù)合型糖鏈，也可以包括：自這些三唾液酸糖鏈或四唾液酸糖鏈的非還原末端失去1個(gè)或多個(gè)糖的糖鏈。進(jìn)一步，本發(fā)明的復(fù)合型糖鏈還包含附有海藻糖的那些糖鏈。附有海藻糖的復(fù)合型糖鏈，可以包括以下的結(jié)構(gòu)式所表示的含有海藻糖的復(fù)合型糖鏈：[化學(xué)式-4][化學(xué)式-5][化學(xué)式-6][化學(xué)式-7][化學(xué)式-8]此外，也可以包括自這些含有海藻糖的復(fù)合型糖鏈的非還原末端失去1個(gè)或多個(gè)糖的糖鏈。此外，在本說(shuō)明書(shū)中，“二唾液酸糖鏈”、“雙觸角復(fù)合型糖鏈”、“單唾液酸糖鏈”、“去唾液酸糖鏈”、“二乙酰葡糖胺糖鏈”、“二甘露糖糖鏈”、“三觸角復(fù)合型糖鏈”、“四觸角復(fù)合型糖鏈”、“含有海藻糖的復(fù)合型糖鏈”除包括上述化學(xué)式所表示的那些糖鏈以外，也包含結(jié)合形式與化學(xué)式所示的實(shí)例不同的那些糖鏈，這樣的糖鏈也可優(yōu)選地用作本發(fā)明的糖鏈。這樣的糖鏈的實(shí)例包括：例如在二唾液酸糖鏈或單唾液酸糖鏈中，唾液酸與半乳糖以(α2→3)鍵結(jié)合的二唾液酸糖鏈或單唾液酸糖鏈。此外，當(dāng)糖鏈?zhǔn)翘擎湹姆沁€原末端具有唾液酸的糖鏈時(shí)，也可使用唾液酸的羧基經(jīng)修飾的糖鏈。唾液酸的羧基的修飾優(yōu)選為使羧基的負(fù)電荷消失或轉(zhuǎn)換為正電荷的基團(tuán)，例如所述基團(tuán)可以包括：碳數(shù)1～30的烷基氨基、芐基、氨基、氨基乙基氨基等。這些修飾基的導(dǎo)入將使唾液酸的羧基的負(fù)電荷消失(芐基、氨基等)或轉(zhuǎn)換為正電荷(氨基乙基氨基等)，因此可以考慮控制附加糖鏈的多肽的血中清除率或體內(nèi)分布。此外，本發(fā)明中所使用的高甘露糖型糖鏈?zhǔn)窃谏鲜龅膹?fù)合型糖鏈的基本結(jié)構(gòu)上進(jìn)一步結(jié)合了2個(gè)以上的甘露糖的糖鏈。由于高甘露糖型糖鏈的體積較大，所以通過(guò)使高甘露糖型糖鏈結(jié)合至肽，可使血中穩(wěn)定性進(jìn)一步提高。優(yōu)選為諸如哺乳類(lèi)的高甘露糖型糖鏈等包含5～9個(gè)甘露糖的糖鏈，但也可以為諸如酵母的高甘露糖型糖鏈等包含更多的甘露糖的糖鏈。優(yōu)選地用于本發(fā)明的高甘露糖型糖鏈可以包括例如：高甘露糖-5(M-5)：[化學(xué)式11]和高甘露糖-9(M-9)：[化學(xué)式12]等。在本發(fā)明中，優(yōu)選的糖鏈可以包括，例如與在人體內(nèi)以與蛋白質(zhì)結(jié)合的糖蛋白的形式存在的糖鏈(例如，“FEBSLETTERSVol.50,No.3,Feb.1975”中所記載的糖鏈)具有相同結(jié)構(gòu)的糖鏈(所構(gòu)成的糖的類(lèi)型和它們的結(jié)合形式相同的糖鏈)、或自其非還原末端失去1個(gè)或多個(gè)糖的糖鏈，以下描述了這些糖鏈。[化學(xué)式13][化學(xué)式14][化學(xué)式15][化學(xué)式16]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的方面中，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中的附加糖鏈的氨基酸中的糖鏈的結(jié)構(gòu)可以是實(shí)質(zhì)上相同，或也可以具有不同的糖鏈結(jié)構(gòu)。當(dāng)附加糖鏈的多肽中的糖鏈的結(jié)構(gòu)是實(shí)質(zhì)上相同時(shí)，例如優(yōu)選為90％以上相同、或99％以上相同，最優(yōu)選為糖鏈的結(jié)構(gòu)完全相同。而且，在本說(shuō)明書(shū)中，所謂糖肽中的糖鏈的結(jié)構(gòu)相同，是指在附加有2條以上的糖鏈的附加糖鏈的多肽中，當(dāng)對(duì)所述糖鏈彼此進(jìn)行比較時(shí)，構(gòu)成糖鏈的糖的類(lèi)型、結(jié)合順序、和結(jié)合形式在糖肽內(nèi)相同。此外，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的方面中，優(yōu)選的是本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的糖鏈?zhǔn)蔷坏?。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂附加糖鏈的多肽中的糖鏈?zhǔn)蔷坏?，是指?dāng)在附加糖鏈的多肽間對(duì)糖鏈進(jìn)行比較時(shí)，肽中的糖鏈的附加部位、構(gòu)成糖鏈的各糖的類(lèi)型、結(jié)合順序、和糖之間的結(jié)合形式在糖肽間相同，是指至少90％以上、優(yōu)選為95％以上、更優(yōu)選為99％以上的糖鏈的結(jié)構(gòu)是均一的。尤其是包含糖肽間糖鏈均勻的糖肽的組合物等具有恒定的性質(zhì)，尤其在醫(yī)藥品的制造或分析(assay)等領(lǐng)域中是優(yōu)選的。均一的糖鏈的比例例如可以通過(guò)使用HPLC、毛細(xì)管電泳(capillaryelectrophoresis)、NMR、質(zhì)譜分析等方法而測(cè)定。在本發(fā)明中，優(yōu)選的附加糖鏈的多肽例如為下述的實(shí)施例20～25、28、29、32～35、49～51、63～64、和66～68中所制造的附加糖鏈的多肽(序列編號(hào)21～26、29、30、33、34、88、89、125、127、129、148、149、157、164、和169)。即，優(yōu)選的是，在以下的SRIF28的氨基酸序列：Ser1-Ala2-Asn3-Ser4-Asn5-Pro6-Ala7-Met8-Ala9-Pro10-Arg11-Glu12-Arg13-Lys14-Ala15-Gly16-Cys17-Lys18-Asn19-Phe20-Phe21-Trp22-Lys23-Thr24-Phe25-Thr26-Ser27-Cys28(序列編號(hào)2)中：(a1)將第1位的Ser置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys，且在N末端側(cè)進(jìn)一步附加有1個(gè)附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例20)(序列編號(hào)21)；(a2)將第1位的Ser和第5位的Asn置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例21)(序列編號(hào)22)；(a3)將第1位的Ser和第13位的Arg置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例22)(序列編號(hào)23)；(a4)將第5位的Asn和第9位的Ala置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例23)(序列編號(hào)24)；(a5)將第1位的Ser置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys，且在N末端側(cè)進(jìn)一步附加有2個(gè)附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例24)(序列編號(hào)25)；(a6)將第1位的Ser、第5位的Asn、和第9位的Ala置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例25)(序列編號(hào)26)；(a7)將第1位的Ser置換為附加去唾液酸糖鏈的Cys，且在N末端側(cè)進(jìn)一步附加有1個(gè)附加去唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例28)(序列編號(hào)29)；(a8)將第1位的Ser置換為附加去唾液酸糖鏈的Cys，且在N末端側(cè)進(jìn)一步附加有2個(gè)附加去唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例29)(序列編號(hào)30)；(a9)將第1位的Ser置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys，且將第19位的Asn置換為附加GlcNAc的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例32)(序列編號(hào)33)；(a10)將第1位的Ser置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys，且將19位的Asn置換為附加二甘露糖糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例33)(序列編號(hào)34)；(a11)將第1位的Ser置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys，且在N末端側(cè)進(jìn)一步附加有4個(gè)附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例34)(序列編號(hào)88)；(a12)將第1位的Ser置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys，且在N末端側(cè)進(jìn)一步附加有9個(gè)附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例35)(序列編號(hào)89)；(a13)將第1位的Ser和第12位的Glu置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例49)(序列編號(hào)125)；(a14)將第1位的Ser置換為將糖鏈上的唾液酸的羧基轉(zhuǎn)換為羧酰胺的附加二唾液酸糖鏈的Cys，且在N末端側(cè)進(jìn)一步附加有1個(gè)將糖鏈上的唾液酸的羧基轉(zhuǎn)換為羧酰胺的附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例63)(序列編號(hào)148)；(a15)將第1位的Ser置換為糖鏈上的唾液酸的羧基被芐基保護(hù)的附加二唾液酸糖鏈的Cys，且在N末端側(cè)進(jìn)一步附加有1個(gè)糖鏈上的唾液酸的羧基被芐基保護(hù)的附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例64)(序列編號(hào)149)；(a16)將第1位的Ser置換為附加二唾液酸的糖鏈的Asn，且將第19位的Asn置換為附加二甘露糖糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例66)(序列編號(hào)157)；(a17)將第1位的Ser置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys，且在N末端側(cè)進(jìn)一步附加有1個(gè)糖鏈上的唾液酸的羧基與1,2-乙二胺的一末端形成酰胺鍵的附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例67)(序列編號(hào)164)；(a18)將第1位的Ser置換為附加二唾液酸糖鏈的Cys，且在N末端側(cè)進(jìn)一步附加有3個(gè)附加二唾液酸糖鏈的Cys的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例68)(序列編號(hào)169)。此外，優(yōu)選的是，在SRIF14的氨基酸序列：Ala15-Gly16-Cys17-Lys18-Asn19-Phe20-Phe21-Trp22-Lys23-Thr24-Phe25-Thr26-Ser27-Cys28(序列編號(hào)1)中：(a19)在第15位的Ala的N末端側(cè)進(jìn)一步附加有附加二唾液酸糖鏈的Cys-附加二唾液酸糖鏈的Cys-Arg-Lys-的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例50)(序列編號(hào)127)；(a20)在第15位的Ala的N末端側(cè)進(jìn)一步附加有附加二唾液酸糖鏈的Cys-附加二唾液酸糖鏈的Cys-附加二唾液酸糖鏈的Cys-Arg-Lys-的附加糖鏈的多肽(實(shí)施例51)(序列編號(hào)129)。本發(fā)明的附加糖鏈的多肽可以通過(guò)在本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的肽合成方法中并入糖鏈附加步驟而制造。附加糖鏈時(shí)，也可使用利用以轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(transglutaminase)為代表的酶的方法，但在這種情況時(shí)，由于存在需要大量的進(jìn)行附加的糖鏈、最終步驟后的純化的繁雜、糖鏈的附加位置和能夠附加的糖鏈?zhǔn)芟拗频葐?wèn)題，因此盡管可以用于分析用途等的少量的合成，但對(duì)于醫(yī)藥品制造等大規(guī)模的制造而言，不能說(shuō)該方法是實(shí)用的方法。作為本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的簡(jiǎn)便的制造方法且糖鏈的結(jié)構(gòu)均一的附加糖鏈的多肽的穩(wěn)定的制造方法的具體實(shí)例，以下例示如下方法：使用附加糖鏈的Asn作為附加糖鏈之氨基酸，應(yīng)用固相合成、液相合成等公知的肽合成方法而制造附加糖鏈的多肽的方法(A法)；和根據(jù)公知的肽合成方法制造生長(zhǎng)抑素的任意的氨基酸被Cys置換的肽，然后，通過(guò)化學(xué)合成對(duì)Cys附加糖鏈，而制造附加糖鏈的多肽的方法(B法)。通過(guò)參考這些制造方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠制造各種附加糖鏈的多肽，所獲得的附加糖鏈的多肽及其制造方法尤其在醫(yī)藥品制造的領(lǐng)域中是非常有用的。此外，這些A法和B法也可以以2種以上的組合而進(jìn)行。如果是用于分析等的少量的合成，則也可以進(jìn)一步在上述的方法中組合利用轉(zhuǎn)移酶的糖鏈伸長(zhǎng)反應(yīng)。而且，A法記載在國(guó)際公開(kāi)第2004/005330號(hào)說(shuō)明書(shū)(US2005222382(A1))中，B法記載在國(guó)際公開(kāi)第2005/010053號(hào)說(shuō)明書(shū)(US2007060543(A1))，通過(guò)引用將其公開(kāi)內(nèi)容全部并入本說(shuō)明書(shū)中。此外，關(guān)于A法和B法中所使用的糖鏈結(jié)構(gòu)均勻的糖鏈的制造，記載在國(guó)際公開(kāi)第03/008431號(hào)(US2004181054(A1))、國(guó)際公開(kāi)第2004/058984號(hào)(US2006228784(A1))、國(guó)際公開(kāi)第2004/058824號(hào)(US2006009421(A1))、國(guó)際公開(kāi)第2004/070046號(hào)(US2006205039(A1))、國(guó)際公開(kāi)第2007/011055號(hào)等中，通過(guò)引用將其公開(kāi)內(nèi)容全部并入本說(shuō)明書(shū)中。制造附加糖鏈的多肽的方法(A法)附加糖鏈的多肽例如可以通過(guò)概略過(guò)程示于以下的使用附加糖鏈的Asn的固相合成而制造。(1)使氨基氮經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的氨基酸的羧基與樹(shù)脂(resin)結(jié)合。在這種情況時(shí)，由于氨基酸之氨基氮由脂溶性保護(hù)基保護(hù)，所以可以防止氨基酸之間的自縮合，使樹(shù)脂與氨基酸反應(yīng)而結(jié)合。(2)使所獲得的反應(yīng)物的脂溶性保護(hù)基脫離而形成游離氨基。(3)使該游離氨基、與氨基氮經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的任意的氨基酸的羧基進(jìn)行酰胺化反應(yīng)。(4)使上述脂溶性保護(hù)基脫離而形成游離氨基。(5)通過(guò)重復(fù)進(jìn)行1次以上的上述步驟(3)和(4)，獲得任意數(shù)目的任意氨基酸連接而成的末端結(jié)合有樹(shù)脂，其他端具有游離氨基的肽。(6)最后，通過(guò)利用酸切斷樹(shù)脂，可以獲得具有所期望的氨基酸序列的肽。其中，如果在(1)中，使用氨基氮經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的附加糖鏈的Asn代替氨基氮經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的氨基酸，使所述天冬酰氨酸部分的羧基與樹(shù)脂的羥基反應(yīng)，則可獲得在C末端具有附加糖鏈的Asn的肽。此外，如果在(2)之后、或者在重復(fù)進(jìn)行(3)和(4)1次以上的任意次數(shù)之后，在(3)中，使用氨基氮經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的附加糖鏈的Asn代替氨基氮經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的氨基酸，則可以在任意的部位附加糖鏈。這樣，通過(guò)在(1)和(3)中的任意步驟中，2次以上代替氨基氮經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的氨基酸而使用氨基氮經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的附加糖鏈的Asn，可獲得在任意的2個(gè)以上的部位附加有糖鏈的肽。如果在使附加糖鏈的氨基酸結(jié)合之后，使脂溶性保護(hù)基脫離而形成游離氨基，然后立即進(jìn)行步驟(6)，則可以獲得N末端具有附加糖鏈的Asn的肽。作為樹(shù)脂(resin)，只要為通常在固相合成中所使用的樹(shù)脂(resin)即可，例如可使用用氯官能化的2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(Merck公司制造)、或用氨基官能化的Amino-PEGA樹(shù)脂(Merck公司制造)、具有羥基的NovaSynTGT醇樹(shù)脂(Merck公司制造)、Wang樹(shù)脂(Merck公司制造)、HMPA-PEGA樹(shù)脂(Merck公司制造)等。此外，也可以使Amino-PEGA樹(shù)脂與氨基酸之間存在連接子，這樣的連接子的實(shí)例包括：例如4-羥甲基苯氧基乙酸(HMPA)、4-(4-羥甲基-3-甲氧基苯氧基)-丁基乙酸(HMPB)等。也可以使用預(yù)先使C末端的氨基酸與樹(shù)脂結(jié)合的H-Cys(Trt)-TritylNovaPEG樹(shù)脂(Merck公司制造)等。此外，當(dāng)將C末端進(jìn)行酰胺化時(shí)，優(yōu)選使用例如用氨基官能化的Rink-Amide-PEGAResin(Merck公司制造)。通過(guò)利用酸切斷該樹(shù)脂和肽，可以使肽的C末端氨基酸酰胺化。在樹(shù)脂與氨基氮經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的氨基酸的結(jié)合中，例如為了使用具有羥基的樹(shù)脂或用氯官能化的樹(shù)脂，氨基酸的羧基經(jīng)由酯鍵與樹(shù)脂結(jié)合。此外，在使用用氨基官能化的樹(shù)脂時(shí)，氨基酸的羧基經(jīng)由酰胺鍵與樹(shù)脂結(jié)合。而且，優(yōu)選的是2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂，因?yàn)楫?dāng)在固相合成中使肽鏈延長(zhǎng)時(shí)，它可防止位于末端的Cys外消旋化。可以使用任意氨基酸作為所述氨基酸，例如可以列舉：作為天然氨基酸的絲氨酸(Ser)、天冬酰胺(Asn)、纈氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、異亮氨酸(Ile)、丙氨酸(Ala)、酪氨酸(Tyr)、甘氨酸(Gly)、賴氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、組氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、蘇氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、蛋氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、脯氨酸(Pro)。此外，也可以使用上述天然氨基酸的D型氨基酸。脂溶性保護(hù)基的實(shí)例可以包括：例如9-芴甲氧羰基(Fmoc)、三丁氧基羰基(Boc)、芐基、烯丙基、烯丙氧基羰基、乙?；然谔妓狨セ蝓０返谋Ｗo(hù)基等。為將脂溶性保護(hù)基導(dǎo)入至氨基酸中，例如當(dāng)導(dǎo)入Fmoc基時(shí)，可以通過(guò)添加9-芴甲基-N-丁二酰亞氨基碳酸酯和碳酸氫鈉并使它們進(jìn)行反應(yīng)而導(dǎo)入。反應(yīng)可以在0～50℃、優(yōu)選在室溫下進(jìn)行約1～5小時(shí)。作為經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的氨基酸，也可以使用市售的那些。市售的經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的氨基酸的實(shí)例可以包括：Fmoc-Ser-OH、Fmoc-Asn-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Tyr-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Lys-OH、Fmoc-Arg-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Asp-OH、Fmoc-Glu-OH、Fmoc-Gln-OH、Fmoc-Thr-OH、Fmoc-Cys-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-Pro-OH。此外，作為經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)且側(cè)鏈中導(dǎo)入有所述保護(hù)基的氨基酸，可以包括：例如Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Cys(StBu)-OH、Fmoc-Cys(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH。此外，如果期望在附加糖鏈的多肽的氨基酸序列中附加連接子，可以通過(guò)在固相合成的過(guò)程中，使用經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的連接子來(lái)代替上述經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的氨基酸，而在優(yōu)選的位置插入連接子。當(dāng)使用2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂時(shí)，可以通過(guò)使用二異丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺、吡啶、2,4,6-三甲基吡啶等堿而進(jìn)行酯化。此外，當(dāng)使用具有羥基的樹(shù)脂時(shí)，作為酯化催化劑，例如可使用1-均三甲苯磺酰基-3-硝基-1,2,4-三唑(MSNT)、二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、二異丙基碳二亞胺(DIC)等公知的脫水縮合劑。氨基酸與脫水縮合劑的使用比例是相對(duì)于前者的1重量份，后者通常為1～10重量份，優(yōu)選為2～5重量份。酯化反應(yīng)優(yōu)選通過(guò)例如在固相管柱中添入樹(shù)脂，利用溶劑將該樹(shù)脂洗凈，然后添加氨基酸溶液來(lái)進(jìn)行。洗凈用溶劑的實(shí)例可以包括：例如二甲基甲酰胺(DMF)、2-丙醇、二氯甲烷等。溶解氨基酸的溶劑的實(shí)例可以包括：例如二甲基亞砜(DMSO)、DMF、二氯甲烷等。酯化反應(yīng)可以在0～50℃、優(yōu)選在室溫下進(jìn)行約10分鐘～30小時(shí)、優(yōu)選為15分鐘～24小時(shí)。此時(shí)，也優(yōu)選的是，使用乙酸酐等使固相上的未反應(yīng)的羥基乙?；M(jìn)行封端。脂溶性保護(hù)基的脫離例如可以通過(guò)利用堿進(jìn)行處理來(lái)進(jìn)行。堿的實(shí)例可以包括：例如哌啶、嗎啉等。此時(shí)，優(yōu)選在溶劑的存在下進(jìn)行。溶劑的實(shí)例可以包括：例如DMSO、DMF、甲醇等。游離氨基與氨基氮經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的任意的氨基酸的羧基的酰胺化反應(yīng)優(yōu)選在活化劑(activator)和溶劑的存在下進(jìn)行?；罨瘎┑膶?shí)例可以包括：例如二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(WSC/HCl)、疊氮基磷酸二苯酯(DPPA)、羰基二咪唑(CDI)、氰基磷酸二乙酯(DEPC)、苯并三唑-1-基-氧基-三吡咯烷基鏻(DIPCI)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基-三吡咯烷基鏻(PyBOP)、1-羥基苯并三唑(HOBt)、羥基琥珀酰亞胺(HOSu)、二甲基氨基吡啶(DMAP)、1-羥基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAt)、羥基鄰苯二甲酰亞胺(HOPht)、五氟苯酚(Pfp-OH)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)、1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-5-氯-1H-苯并三唑鎓3-氧化物六氟磷酸鹽(HCTU)、O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟膦酸鹽(HATU)、O-苯并三唑-1-基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)、3,4-二氫-3-羥基-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪(Dhbt)等?；罨瘎┑氖褂昧?jī)?yōu)選為相對(duì)于氨基氮經(jīng)脂溶性的保護(hù)基保護(hù)的任意的氨基酸的1～20當(dāng)量，更優(yōu)選為1～10當(dāng)量，進(jìn)一步優(yōu)選為1～5當(dāng)量。溶劑的實(shí)例可以包括：例如DMSO、DMF、二氯甲烷等。反應(yīng)可以在0～50℃、優(yōu)選在室溫下進(jìn)行約10～30小時(shí)、優(yōu)選為約15分鐘～24小時(shí)。脂溶性保護(hù)基的脫離可以以與上述相同的方式進(jìn)行。為了自樹(shù)脂(resin)切斷肽鏈，優(yōu)選利用酸進(jìn)行處理。酸的實(shí)例可以包括：例如三氟乙酸(TFA)、氟化氫(HF)等。這樣，可以獲得將所期望的位置以附加糖鏈的Asn置換的附加糖鏈的多肽。此外，如下文所描述的，使如這樣的經(jīng)純化的附加糖鏈的多肽在經(jīng)脫保護(hù)的Cys之間形成雙硫鍵。而且，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)固相合成中所使用的附加糖鏈的Asn中的糖鏈上的非還原末端包含唾液酸時(shí)，為防止因酸處理而將唾液酸切斷，優(yōu)選將所述唾液酸的羧基通過(guò)保護(hù)基進(jìn)行保護(hù)。作為保護(hù)基，例如可以列舉：芐基、烯丙基、二苯基甲基等。保護(hù)基的導(dǎo)入和保護(hù)基的脫離的方法可以通過(guò)公知的方法來(lái)進(jìn)行。此外，保護(hù)基的脫離優(yōu)選在將通過(guò)固相合成所制造的附加糖鏈的多肽自樹(shù)脂切斷之后進(jìn)行。自樹(shù)脂切斷之后，如果通過(guò)在附加糖鏈的多肽中形成雙硫鍵而使附加糖鏈的多肽環(huán)化，保護(hù)基的脫離可以在雙硫鍵形成步驟之前進(jìn)行，也可在雙硫鍵形成步驟之后進(jìn)行。制造附加糖鏈的多肽的方法(B法)附加糖鏈的多肽也可以通過(guò)下述方法而制造：首先合成肽鏈，然后對(duì)所合成的肽鏈附加糖鏈。具體的說(shuō)，通過(guò)固相合成法、液相合成法、利用細(xì)胞進(jìn)行合成的方法、對(duì)天然存在的肽進(jìn)行分離萃取的方法等，制造在將要附加糖鏈的位置含有Cys的肽。此處，對(duì)于諸如位于預(yù)定形成雙硫鍵的位置的Cys等不附加糖鏈的Cys，利用例如乙酰胺甲基(Acm)進(jìn)行保護(hù)。此外，當(dāng)將不附加糖鏈且也不用于形成雙硫鍵的Cys導(dǎo)入至附加糖鏈的多肽中時(shí)，可在糖鏈附加步驟和雙硫鍵形成步驟期間，通過(guò)用保護(hù)基對(duì)Cys進(jìn)行保護(hù)，然后進(jìn)行脫保護(hù)而導(dǎo)入Cys。作為這樣的保護(hù)基，例如可列舉：叔丁基(tBu)或4-甲氧基芐基。此外，當(dāng)對(duì)附加糖鏈的多肽中的Cys附加不同的糖鏈時(shí)，可以通過(guò)使首先導(dǎo)入糖鏈的Cys無(wú)保護(hù)，并將其次導(dǎo)入不同糖鏈的Cys用StBu等加以保護(hù)來(lái)導(dǎo)入不同的糖鏈。具體地說(shuō)，可以在通過(guò)例如固相合成等合成肽時(shí)，使第一將要導(dǎo)入糖鏈的Cys無(wú)保護(hù)，且使用Fmoc-Cys(StBu)-OH等使第二將要導(dǎo)入糖鏈的Cys成為具有保護(hù)基的Cys。然后，在保持StBu等保護(hù)基的狀態(tài)下，對(duì)無(wú)保護(hù)的Cys導(dǎo)入糖鏈。接著，將StBu基等脫保護(hù)，以對(duì)由此成為無(wú)保護(hù)的Cys導(dǎo)入不同的糖鏈。而且，第一將要導(dǎo)入糖鏈的Cys和第二將要導(dǎo)入糖鏈的Cys可以是1個(gè)或多個(gè)。而且，關(guān)于StBu基的脫保護(hù)，可通過(guò)使用三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)、二硫蘇糖醇(DTT)、三丁基膦等還原劑進(jìn)行反應(yīng)而脫保護(hù)。上述反應(yīng)可以通常在0～80℃、優(yōu)選在5～60℃、進(jìn)一步優(yōu)選在10～35℃下進(jìn)行。反應(yīng)時(shí)間通常優(yōu)選為30分鐘～5小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，可適當(dāng)?shù)乩霉姆椒?例如，高效液相層析法(HPLC))進(jìn)行純化。當(dāng)導(dǎo)入不同的糖鏈時(shí)，優(yōu)選的是，自對(duì)Cys的脫保護(hù)步驟中的還原條件或諸如HPLC等純化步驟中的酸性條件更穩(wěn)定的糖鏈開(kāi)始導(dǎo)入。尤其是在導(dǎo)入含有唾液酸的糖鏈時(shí)，優(yōu)選的是，首先自不含唾液酸的糖鏈或唾液酸殘基數(shù)目較少的糖鏈開(kāi)始導(dǎo)入。此外，當(dāng)期望在附加糖鏈的多肽的氨基酸序列中附加連接子時(shí)，例如可以在固相合成的過(guò)程中，通過(guò)使用經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的連接子來(lái)代替經(jīng)脂溶性保護(hù)基保護(hù)的氨基酸，而在所合成的多肽的優(yōu)選的位置插入連接子。其次，通過(guò)使鹵乙?；瘡?fù)合型糖鏈衍生物與上述所獲得的含有無(wú)保護(hù)的Cys的肽反應(yīng)，而使糖鏈與無(wú)保護(hù)的Cys的硫醇基反應(yīng)而結(jié)合至肽。上述反應(yīng)可在磷酸緩沖液、三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液、檸檬酸緩沖液、或它們的混合溶液中，在通常0～80℃、優(yōu)選在10～60℃、進(jìn)一步優(yōu)選在15～35℃下進(jìn)行。反應(yīng)時(shí)間通常為10分鐘～24小時(shí)，優(yōu)選通常為約30分鐘～5小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，可適當(dāng)?shù)乩霉姆椒?例如，HPLC)進(jìn)行純化。鹵乙?；瘡?fù)合型糖鏈衍生物例如為將復(fù)合型天冬酰氨結(jié)合型糖鏈的第1位的碳上結(jié)合的羥基用-NH-(CH2)a-(CO)-CH2X(其中X為鹵素原子，a為整數(shù)，且并無(wú)限定，只要不阻礙目標(biāo)的連接子功能即可，優(yōu)選為表示0～4的整數(shù))置換而成的化合物。具體而言，使鹵乙?；瘡?fù)合型糖鏈衍生物與含有Cys的肽在磷酸緩沖液中、室溫下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，通過(guò)利用HPLC進(jìn)行純化，可以獲得經(jīng)附加糖鏈的Cys置換的附加糖鏈的多肽。此外，也可以在諸如DMSO、DMF、甲醇、乙腈等的有機(jī)溶劑與上述緩沖液的混合溶液中進(jìn)行反應(yīng)。此時(shí)，關(guān)于有機(jī)溶劑的比率，可以以0～99％(v/v)的范圍添加至上述緩沖液中。對(duì)于在緩沖液中的溶解性較低的含有無(wú)保護(hù)的Cys的肽，添加這樣的有機(jī)溶劑可以提高在反應(yīng)溶液中的溶解性，因此是優(yōu)選的?；蛘?，也可以在諸如DMSO、DMF、甲醇、乙腈等的有機(jī)溶劑或它們的混合溶液中進(jìn)行反應(yīng)。此時(shí)，優(yōu)選在堿的存在下進(jìn)行。作為堿，例如可列舉：DIPEA、三乙胺、吡啶、2,4,6-三甲基吡啶等。此外，也可以在將胍鹽酸鹽或尿素添加至緩沖溶液而形成的混合溶液中進(jìn)行反應(yīng)。而且，可以將胍鹽酸鹽或尿素添加至上述緩沖液中，以使最終濃度為1M～8M。通過(guò)添加胍鹽酸鹽或尿素，也可以提高在緩沖液中的溶解性較低的肽的溶解性，因此是優(yōu)選的。進(jìn)一步，為防止含有無(wú)保護(hù)的Cys的肽經(jīng)由雙硫鍵形成二聚物，也可以將三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)或二硫蘇糖醇(DTT)添加至緩沖液中進(jìn)行反應(yīng)?？梢詫CEP或DTT添加至緩沖液中，以使最終濃度成為10μM～10mM。此外，使糖鏈與目標(biāo)的Cys結(jié)合之后，對(duì)經(jīng)Acm等保護(hù)的Cys的保護(hù)基進(jìn)行脫保護(hù)。在保護(hù)基為Acm基時(shí)，可通過(guò)在水、甲醇、乙酸、或它們的混合溶液中使用碘、乙酸汞(II)、硝酸銀(I)、或乙酸銀(I)等進(jìn)行反應(yīng)而脫保護(hù)。上述反應(yīng)可以通常在0～80℃、優(yōu)選在5～60℃、進(jìn)一步優(yōu)選在10～35℃下進(jìn)行。反應(yīng)時(shí)間通常優(yōu)選為5分鐘～24小時(shí)左右。反應(yīng)結(jié)束后，可以用DTT或鹽酸等進(jìn)行處理，然后適當(dāng)?shù)乩霉姆椒?例如，HPLC)進(jìn)行純化。這樣，可以獲得在所期望的位置以附加糖鏈的Cys置換的附加糖鏈的多肽。此外，如下文所描述的，如這樣的經(jīng)純化的附加糖鏈的多肽使經(jīng)脫保護(hù)的Cys之間形成雙硫鍵。此外，在制造肽序列中具有多條諸如二唾液酸糖鏈或單唾液酸糖鏈等含有唾液酸的糖鏈的附加糖鏈的多肽時(shí)，可以使用所導(dǎo)入的糖鏈上的唾液酸的羧基經(jīng)芐基(Bn)、烯丙基、二苯基甲基、苯甲酰甲基等保護(hù)的含有唾液酸的糖鏈。當(dāng)導(dǎo)入唾液酸的羧基經(jīng)保護(hù)的糖鏈時(shí)，可在下述的附加糖鏈的多肽中的雙硫鍵形成步驟后，進(jìn)行唾液酸保護(hù)基的脫保護(hù)步驟。這樣，通過(guò)利用芐基等對(duì)唾液酸的羧基進(jìn)行保護(hù)，使得制造步驟中利用HPLC等的分離、純化步驟變得容易。此外，對(duì)唾液酸的羧基加以保護(hù)也可以防止對(duì)酸不穩(wěn)定的唾液酸的脫離。糖鏈上的唾液酸的羧基的保護(hù)反應(yīng)可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法進(jìn)行。此外，在形成有雙硫鍵的附加糖鏈的多肽中，唾液酸的羧基的保護(hù)基可以通過(guò)在堿性條件下水解而進(jìn)行脫保護(hù)。上述反應(yīng)可以通常在0～50℃、優(yōu)選在0～40℃、進(jìn)一步優(yōu)選在0～30℃下進(jìn)行。反應(yīng)時(shí)間通常優(yōu)選為約5分鐘～5小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，可以用磷酸或乙酸等弱酸進(jìn)行中和，之后適當(dāng)?shù)乩霉姆椒?例如，HPLC)進(jìn)行純化。此外，通過(guò)上述A法和B法制作的附加糖鏈的多肽可以利用使用空氣和/或氧氣、碘、DMSO、經(jīng)氧化和還原的谷胱甘肽的混合物、鐵氰化鉀(potassiumferricyanide)、埃爾曼試劑(Ellman'sReagent)(5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸))、三氟乙酸鉈(III)、和烷基三氯硅烷亞砜等的本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法而形成Cys之間的雙硫鍵。而且，在形成Cys-Cys間的雙硫鍵時(shí)，對(duì)于不希望形成雙硫鍵的附加糖鏈的多肽中的Cys通過(guò)保護(hù)基加以保護(hù)。作為這樣的保護(hù)基，可以使用Acm、tBu、4-甲氧基芐基、4-甲基芐基等在氧化條件下穩(wěn)定的保護(hù)基。此外，在B法中，雙硫鍵的形成也可以在導(dǎo)入糖鏈之前進(jìn)行。但是，當(dāng)對(duì)將要進(jìn)行雙硫鍵結(jié)合的Cys導(dǎo)入有保護(hù)基時(shí)，脫保護(hù)的步驟將在雙硫鍵形成步驟之前。(活性)本發(fā)明的附加糖鏈的多肽對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂“對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性”，是指對(duì)生長(zhǎng)抑素受體SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4、和SSTR5中的至少一種具有親和性。本發(fā)明的附加糖鏈的多肽優(yōu)選對(duì)2種以上的生長(zhǎng)抑素受體具有親和性，更優(yōu)選對(duì)3種以上的受體具有親和性，進(jìn)一步優(yōu)選對(duì)4種以上之受體具有親和性，最優(yōu)選地，與天然的生長(zhǎng)抑素(SRIF28和SRIF14)同樣地對(duì)SSTR1～SSTR5的5種受體全部具有親和性。特別優(yōu)選的是，對(duì)至少SSTR1和SSTR4中的任一種具有親和性，且對(duì)其他SSTR具有親和性。這樣，通過(guò)對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有親和性，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽對(duì)生長(zhǎng)抑素受體具有生長(zhǎng)抑素活性(激動(dòng)劑(agonist)活性)和拮抗物(antagonist)活性。例如，對(duì)各生長(zhǎng)抑素受體的親和性可以使用例如體外(invitro)的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)等進(jìn)行測(cè)定。在利用競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)的親和性的測(cè)定中，可以通過(guò)使標(biāo)記配體與試驗(yàn)物質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)性地與受體結(jié)合，求出由試驗(yàn)物質(zhì)施用引起的標(biāo)記配體的游離，來(lái)測(cè)定試驗(yàn)物質(zhì)的親和性(例如，50％抑制濃度：IC50值或結(jié)合抑制常數(shù)：Ki值)。例如，生長(zhǎng)抑素活性(激動(dòng)劑活性)可以通過(guò)如實(shí)施例69-3和69-4所示的使用生長(zhǎng)抑素受體表達(dá)細(xì)胞的體外的cAMP產(chǎn)生抑制試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。cAMP產(chǎn)生抑制試驗(yàn)可以通過(guò)用附加糖鏈的多肽或者作為對(duì)照化合物的SRIF14或SRIF28處理生長(zhǎng)抑素受體表達(dá)細(xì)胞，培養(yǎng)一定時(shí)間后，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)積累的cAMP量，并與對(duì)照化合物進(jìn)行比較而進(jìn)行評(píng)價(jià)。cAMP量的測(cè)定可以通過(guò)諸如酶免疫測(cè)定法(EIA，enzymeimmunoassay)等公知的方法測(cè)定。例如，生長(zhǎng)抑素活性(激動(dòng)劑活性)可以通過(guò)如實(shí)施例89和實(shí)施例90所示的體內(nèi)(invivo)的GH產(chǎn)生抑制試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。GH產(chǎn)生抑制試驗(yàn)例如可以以如下所述的方式實(shí)施。對(duì)未禁食狀態(tài)下的大鼠皮下施用附加糖鏈的多肽。對(duì)大鼠在全身麻醉下施用GH游離促進(jìn)劑，然后進(jìn)行約5分鐘的采血。以所采集的血液作為血漿樣品，通過(guò)酶免疫測(cè)定法(EIA)等公知的方法測(cè)定GH濃度。此外，自施用有不含附加糖鏈的多肽的生理鹽水的大鼠獲得血漿樣品作為對(duì)照，通過(guò)對(duì)所測(cè)定的GH濃度進(jìn)行比較，可對(duì)生長(zhǎng)抑素活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。本發(fā)明的附加糖鏈的多肽即便因在其結(jié)構(gòu)上附加糖鏈而導(dǎo)致對(duì)各受體的親和性的一定程度地衰減，但由于血中半衰期延長(zhǎng)，因此也可以維持與未附加糖鏈的天然存在的生長(zhǎng)抑素(以下，可以稱(chēng)為“未附加糖鏈的生長(zhǎng)抑素”)同等的生長(zhǎng)抑素活性，在優(yōu)選的情況下可以具有增大的生長(zhǎng)抑素活性?？紤]到該血中半衰期的延長(zhǎng)，例如在通過(guò)實(shí)施例69-1中記載的方法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽對(duì)各受體的Ki值與不具有糖鏈的SRIF14的Ki值的比率優(yōu)選在1000:1～0.3:1的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在100:1～0.3:1的范圍內(nèi)，進(jìn)一步優(yōu)選在10:1～0.3:1的范圍內(nèi)。本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的血中穩(wěn)定性優(yōu)選與天然存在的生長(zhǎng)抑素(未附加糖鏈的生長(zhǎng)抑素)同等或其以上。血中穩(wěn)定性可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法進(jìn)行測(cè)定，例如可以以血漿中的穩(wěn)定性或血中半衰期、AUC(藥物血漿濃度-時(shí)間曲線下的面積)等為指標(biāo)進(jìn)行判斷。此外，腎臟清除率或肝臟清除率的減小也有助于血中穩(wěn)定性的增大。本發(fā)明的附加糖鏈的多肽與不具有糖鏈的SRIF28相比，血中半衰期增大，例如在通過(guò)實(shí)施例70所示的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定時(shí)，其半衰期與SRIF28相比增大4倍以上、優(yōu)選為10倍以上、更優(yōu)選為20倍以上、進(jìn)一步優(yōu)選為30倍以上。此外，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽例如在通過(guò)實(shí)施例88所示的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，與SRIF28相比具有優(yōu)選為4倍以上、更優(yōu)選為10倍以上、進(jìn)一步優(yōu)選為20倍以上的血中穩(wěn)定性。(醫(yī)藥組合物)其次，對(duì)含有本發(fā)明的附加糖鏈的多肽作為有效成分的醫(yī)藥組合物進(jìn)行說(shuō)明。含有本發(fā)明的附加糖鏈的多肽作為有效成分的醫(yī)藥組合物對(duì)與生長(zhǎng)抑素相關(guān)的疾病的治療或預(yù)防是有效的。如上所述，生長(zhǎng)抑素已知具有各種作用，與這些作用相關(guān)的疾病也多種多樣。例如，與生長(zhǎng)抑素相關(guān)的疾病中，例如包括肢端肥大癥、巨人癥、阿爾茨海默病及其他形式的癡呆癥、癌、激素產(chǎn)生性腫瘤、內(nèi)分泌腫瘤(例如，類(lèi)癌、血管活性腸肽瘤、胰島瘤、胰高血糖素瘤)、庫(kù)欣氏病、激素分泌異常、糖尿病及其并發(fā)癥、疼痛、關(guān)節(jié)炎、腹瀉、胃潰瘍、炎癥性腸病、腸易激綜合癥、消化道阻塞、腸梗阻、術(shù)后再狹窄、放射線損傷、眼疾病(例如，干眼病、青光眼、角膜實(shí)質(zhì)炎、虹膜炎、白內(nèi)障、結(jié)膜炎)等。含有本發(fā)明的附加糖鏈的多肽作為有效成分的醫(yī)藥組合物對(duì)上述疾病尤其是肢端肥大癥、癡呆癥、癌、激素產(chǎn)生性腫瘤、內(nèi)分泌腫瘤、庫(kù)欣氏病、激素分泌異常、糖尿病并發(fā)癥、腹瀉、消化道阻塞、腸梗阻、放射線損傷、眼疾病、以及各種腫瘤或腸相關(guān)疾病、伴隨激素產(chǎn)生過(guò)剩的消化系統(tǒng)癥狀的治療或預(yù)防是有效的。上述醫(yī)藥組合物使用通常所用的填充劑、增量劑、結(jié)合劑(binder)、保濕劑、崩解劑、表面活性劑、潤(rùn)滑劑等稀釋劑或賦形劑，而制成通常的醫(yī)藥組合物的形式的制劑。作為此種醫(yī)藥組合物，例如可以列舉：片劑、丸劑、散劑、液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、膠囊劑、栓劑、吸入劑、滴眼劑、注射劑等。醫(yī)藥組合物中所含的本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的量并無(wú)特別限定，可自較廣的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇，但通常在醫(yī)藥組合物中，優(yōu)選含有1～70重量％的本發(fā)明的附加糖鏈的多肽。含有本發(fā)明的附加糖鏈的多肽作為有效成分的醫(yī)藥組合物可以進(jìn)一步含有其他有效成分，或也可以與含有其他有效成分的醫(yī)藥組合物組合使用。此外，含有本發(fā)明的附加糖鏈的多肽作為有效成分的醫(yī)藥組合物可以以藥學(xué)上可接受的鹽的形式含有附加糖鏈的多肽，也可以進(jìn)一步含有不同的1種以上的本發(fā)明的附加糖鏈的多肽作為有效成分。此外，也可以與含有不同的1種以上的本發(fā)明的附加糖鏈的多肽作為有效成分的醫(yī)藥組合物組合使用。此外，作為醫(yī)藥組合物中可含有之其他成分，可以列舉本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的藥學(xué)上可接受的載體等。此外，作為使用本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的治療，例如可以包括放射線治療，此外，在用于遍及全身地測(cè)定表達(dá)SSTR1～SSTR5中任一種的細(xì)胞和組織的分布的閃爍掃描術(shù)(scintigraphy)中也是有用的。利用放射性掃描或磁共振的體外成像的使用，可以使體內(nèi)的半定量檢測(cè)成為可能。經(jīng)放射性標(biāo)記的附加糖鏈的多肽例如可以用于對(duì)人體內(nèi)，在健康狀態(tài)下不含實(shí)質(zhì)的量的SSTR1～SSTR5的組織內(nèi)表達(dá)SSTR1～SSTR5中的任一種的惡性腫瘤進(jìn)行治療性處置。此外，可以將經(jīng)標(biāo)記的附加糖鏈的多肽制成含有對(duì)于用于閃爍掃描術(shù)或用于抑制腫瘤有效的量的組合物而施用。這樣的標(biāo)記的實(shí)例是碘(123I、125I、131I)、銦(111In)、碳(11C)、氟(18F)、锝(99mTc)、釔(90Y)等不同的同位素或螢光標(biāo)記。標(biāo)記可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法實(shí)施，所述標(biāo)記可以包含在附加糖鏈的多肽中、或者直接與附加糖鏈的多肽結(jié)合、或者與適當(dāng)?shù)幕衔锝Y(jié)合然后再結(jié)合至附加糖鏈的多肽。例如，在酪氨酸的碘化中，可以通過(guò)使用氯胺-T的方法等來(lái)進(jìn)行標(biāo)記。根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的施用方法，并無(wú)特別限制，可以利用與各種制劑形態(tài)、患者的年齡、性別、疾病的狀態(tài)、其他條件對(duì)應(yīng)的方法進(jìn)行施用。用于片劑、丸劑、液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑和膠囊劑的施用方法包括例如經(jīng)口施用。此外，在注射劑的情況時(shí)，可單獨(dú)或與葡萄糖、氨基酸等通常的補(bǔ)液混合后施用至靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮內(nèi)、皮下或腹腔內(nèi)。在栓劑的情況時(shí)，施用至直腸內(nèi)。在滴眼劑的情況時(shí)，應(yīng)用于結(jié)膜囊等眼組織。在吸入劑的情況時(shí)，應(yīng)用于支氣管或肺。上述醫(yī)藥組合物的施用量可以根據(jù)用法、患者的年齡、性別、疾病的程度、其他條件來(lái)適當(dāng)選擇，例如，相對(duì)于體重1kg，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的施用量可以為0.1～900nmol、優(yōu)選為1～100nmol、更優(yōu)選為1～10nmol。上述醫(yī)藥組合物的施用次數(shù)可以根據(jù)用法、患者的年齡、性別、疾病的程度、其他條件來(lái)適當(dāng)選擇，例如3次/1天、2次/1天、1次/1天，進(jìn)一步根據(jù)其血中穩(wěn)定性，也可以選擇頻度更少的施用次數(shù)(例如，1次/周、1次/月等)。優(yōu)選地，上述醫(yī)藥組合物的施用次數(shù)為1次以下/1天。本發(fā)明的附加糖鏈的多肽中所附加的糖鏈可以通過(guò)體內(nèi)的代謝系統(tǒng)容易地分解。此外，在本發(fā)明的一方面中，所述糖鏈具有在活體內(nèi)以糖肽(或糖蛋白)的形式結(jié)合而存在的結(jié)構(gòu)。因此，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽和含有所述肽作為有效成分的醫(yī)藥組合物具有諸如在施用至活體內(nèi)時(shí)諸如不會(huì)顯示副作用或抗原性，較少的因過(guò)敏反應(yīng)或產(chǎn)生抗體而無(wú)法獲得藥效的擔(dān)憂等優(yōu)點(diǎn)。進(jìn)一步，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽可以穩(wěn)定且簡(jiǎn)便地大量供給，就提供品質(zhì)穩(wěn)定的高品質(zhì)醫(yī)藥品而言是非常有用的。此外，本發(fā)明還提供了與生長(zhǎng)抑素相關(guān)的疾病的治療或預(yù)防方法，其特征在于：施用有效量的本發(fā)明的附加糖鏈的多肽。而且，本說(shuō)明書(shū)中所用的用語(yǔ)是用來(lái)說(shuō)明特定的實(shí)施方案，并沒(méi)有試圖限制本發(fā)明。此外，本說(shuō)明書(shū)中所使用的“包含”的用語(yǔ)，除根據(jù)文中前后邏輯明顯應(yīng)作不同理解的情形以外，均意指存在所描述的事項(xiàng)(構(gòu)件、步驟、要素、數(shù)字等)，且不排除存在其以外的事項(xiàng)(構(gòu)件、步驟、要素、數(shù)字等)。只要沒(méi)有不同的定義，則本文中所使用的全部用語(yǔ)(包含技術(shù)用語(yǔ)和科學(xué)用語(yǔ))都與本發(fā)明所屬的領(lǐng)域的技術(shù)人員所廣泛理解的意思是一樣的。本文中所使用的用語(yǔ)只要未明示出不同的定義，則應(yīng)解釋為具有與本說(shuō)明書(shū)和相關(guān)
技術(shù)領(lǐng)域：
中的含義一致的含義，不應(yīng)解釋為理想化或以過(guò)度形式化的含義。本發(fā)明的實(shí)施方案可以參照示意圖進(jìn)行說(shuō)明，但在示意圖的情況時(shí)，存在為使說(shuō)明較為清楚而夸張地描繪的情況。使用第一、第二等用語(yǔ)是為了表達(dá)多種要素，應(yīng)該理解這些要素不應(yīng)受這些用語(yǔ)的限定。使用這些用語(yǔ)僅是為了將一個(gè)要素與其他要素進(jìn)行區(qū)別，例如在不背離本發(fā)明的范圍的情況下，可以將第一要素記為第二要素，同樣地，可以將第二要素記為第一要素。以下，將參照實(shí)施例更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明。然而，本發(fā)明可以通過(guò)各種方面而具體表現(xiàn)，不應(yīng)被解釋為限定于本文中所記載的實(shí)施例。[實(shí)施例]而且，以下對(duì)本說(shuō)明書(shū)中的附加糖鏈的多肽的表示方法進(jìn)行說(shuō)明。例如，記作S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF28的情況時(shí)，表示SRIF28的多肽的第1位的Ser(S1)與第5位的Asn兩者均由附加二唾液酸糖鏈的Cys(C(disialo))置換。此外，記作S1C(disialo)-D-Trp22-SRIF28的情況時(shí)，表示SRIF28的多肽的第1位的Ser(S1)由附加二唾液酸糖鏈的Cys(C(disialo))置換，進(jìn)一步，第22位的Trp由D-Trp置換。此外，記作C(disialo)-R-K-SRIF14的情況時(shí)，表示在SRIF14的N末端側(cè)附加有附加糖鏈的Cys-Arg-Lys-。此外，記作29C(disialo)-SRIF28或30C(disialo)-SRIF28的情況時(shí)，表示在SRIF28的C末端即第28位的Cys上進(jìn)一步附加有1個(gè)附加二唾液酸糖鏈的Cys(29C(disialo)-SRIF28)、或在SRIF28的C末端即第28位的Cys上進(jìn)一步附加有-W-附加二唾液酸糖鏈的Cys(W表示結(jié)合至第28位的Cys的任意氨基酸)(30C(disialo)-SRIF28)。此外，記作S1-2C(disialo)-SRIF28的情況時(shí)，表示將存在于SRIF28的多肽的N末端的第1位的Ser置換為連續(xù)的2個(gè)附加二唾液酸糖鏈的Cys。同時(shí)，“disialo”表示二唾液酸糖鏈，“monosialo”表示單唾液酸糖鏈，“asialo”表示去唾液酸糖鏈，“diGlcNAc”表示二乙酰葡糖胺糖鏈，“GlcNAc”表示N-乙酰葡糖胺，“diMan”表示二甘露糖糖鏈，“trisialo”表示三唾液酸糖鏈，“tetrasialo”表示四唾液酸糖鏈。此外，記作(disialo(aminoethylamide))的情況時(shí)，表示二唾液酸糖鏈的唾液酸的羧基經(jīng)氨基乙基氨基修飾。代替“aminoethylamide”的“Bn”、“amide”、“hexadecylamide”分別表示糖鏈上之唾液酸的羧基經(jīng)芐基、氨基、十六烷基氨基保護(hù)。實(shí)施例1S1C(disialo)-SRIF28的合成1-1硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將下述式(1)所表示的肽1(序列編號(hào)38)(APC公司制造)(60.6mg，18.3μmol)與下述式(a)所表示的化合物a(溴乙酰胺化的低聚糖：大?；瘜W(xué)株式會(huì)社制造)(85.8mg，36.6μmol，相對(duì)于肽1為2.0當(dāng)量)溶解在33mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，5.5mL)中，在室溫下反應(yīng)30分鐘。[化學(xué)式17][化學(xué)式18]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％乙酸(AcOH)水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝90:10→75:25，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(2)所表示的糖肽2(序列編號(hào)39)(60.5mg，10.9μmol，產(chǎn)率59％)。[化學(xué)式19]ESI-MS:C229H358N50O102S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1858.3、[M+4H]4+1394.0、[M+5H]5+1115.4，實(shí)測(cè)值：1858.1、1393.8、1115.2。1-2Acm基的脫保護(hù)向利用上述1-1中記載的方法獲得的糖肽2(51.2mg，9.19μmol)中添加乙酸銀(I)(18.8mg，113μmol)的水溶液(3.7mL)，在室溫下反應(yīng)40分鐘。添加溶解在200mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為7.4，3.7mL)的DTT(43.6mg，282μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(0.92mL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝90:10→75:25，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(3)所表示的糖肽3(序列編號(hào)40)(29.2mg，5.38μmol，產(chǎn)率58％)。[化學(xué)式20]ESI-MS:C223H348N48O100S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1810.9、[M+4H]4+1358.4、[M+5H]5+1086.9、[M+6H]6+906.0，實(shí)測(cè)值：1810.7、1358.3、1086.6、905.7。1-3雙硫鍵的形成將利用上述1-2中記載的方法獲得的糖肽3(29.2mg，5.38μmol)溶解在100mM之Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，10.8mL)中，在室溫下反應(yīng)2天。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝77:23→64:36，17分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得包含下述式(4)所表示的化合物(S1C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)5)的級(jí)分。[化學(xué)式21]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝90:10→75：25，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)該級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步純化，以獲得S1C(disialo)-SRIF28(17.2mg，3.17μmol，產(chǎn)率59％)。ESI-MS:C223H346N48O100S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1810.2、[M+4H]4+1357.9、[M+5H]5+1086.5，實(shí)測(cè)值：1810.0、1357.5、1086.4。實(shí)施例2N5C(disialo)-SRIF28之合成使用下述式(5)所表示的化合物(肽5)(序列編號(hào)41)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(6)所表示的化合物(N5C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)6)。[化學(xué)式22][化學(xué)式23]實(shí)施例3A9C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(7)所表示的化合物(肽7)(序列編號(hào)42)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(8)所表示的化合物(A9C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)7)。[化學(xué)式24][化學(xué)式25]實(shí)施例4E12C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(9)所表示的化合物(肽9)(序列編號(hào)43)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(10)所表示的化合物(E12C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)8)。[化學(xué)式26][化學(xué)式27]實(shí)施例5R13C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(11)所表示的化合物(肽11)(序列編號(hào)44)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(12)所表示的化合物(R13C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)9)。[化學(xué)式28][化學(xué)式29]實(shí)施例6K14C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(13)所表示的化合物(肽13)(序列編號(hào)45)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(14)所表示的化合物(K14C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)10)。[化學(xué)式30][化學(xué)式31]實(shí)施例7A15C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(15)所表示的化合物(肽15)(序列編號(hào)46)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(16)所表示的化合物(A15C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)11)。[化學(xué)式32][化學(xué)式33]實(shí)施例8G16C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(17)所表示的化合物(肽17)(序列編號(hào)47)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(18)所表示的化合物(G16C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)12)。[化學(xué)式34][化學(xué)式35]實(shí)施例9K18C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(19)所表示的化合物(肽19)(序列編號(hào)48)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(20)所表示的化合物(K18C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)13)。[化學(xué)式36][化學(xué)式37]實(shí)施例10N19C(disialo)-SRIF28之合成使用下述式(21)所表示的化合物(肽21)(序列編號(hào)49)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(22)所表示的化合物(N19C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)14)。[化學(xué)式38][化學(xué)式39]實(shí)施例11F21C(disialo)-SRIF28之合成使用下述式(23)所表示的化合物(肽23)(序列編號(hào)50)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(24)所表示的化合物(F21C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)15)。[化學(xué)式40][化學(xué)式41]實(shí)施例12T26C(disialo)-SRIF28之合成使用下述式(25)所表示的化合物(肽25)(序列編號(hào)51)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(26)所表示的化合物(T26C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)16)。[化學(xué)式42][化學(xué)式43]實(shí)施例1329C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(27)所表示的化合物(肽27)(序列編號(hào)52)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(28)所表示的化合物(29C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)17)。[化學(xué)式44][化學(xué)式45]實(shí)施例1430C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(29)所表示的化合物(肽29)(序列編號(hào)53)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(30)所表示的化合物(30C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)18)。[化學(xué)式46][化學(xué)式47]實(shí)施例15S1C(disialo)-D-Trp22-SRIF28的合成使用下述式(31)所表示的化合物(肽31)(序列編號(hào)54)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(32)所表示的化合物(S1C(disialo)-D-Trp22-SRIF28)(序列編號(hào)19)。[化學(xué)式48][化學(xué)式49]實(shí)施例16A9C(disialo)-D-Trp22-SRIF28的合成使用下述式(33)所表示的化合物(肽33)(序列編號(hào)55)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(34)所表示的化合物(A9C(disialo)-D-Trp22-SRIF28)(序列編號(hào)20)。[化學(xué)式50][化學(xué)式51]實(shí)施例17C(disialo)-SRIF14的合成使用下述式(35)所表示的化合物(肽35)(序列編號(hào)56)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(36)所表示的化合物(C(disialo)-SRIF14)(序列編號(hào)35)。[化學(xué)式52][化學(xué)式53]實(shí)施例18C(disialo)-R-K-SRIF14的合成使用下述式(37)所表示的化合物(肽37)(序列編號(hào)57)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(38)所表示的化合物(C(disialo)-R-K-SRIF14)(序列編號(hào)36)。[化學(xué)式54][化學(xué)式55]實(shí)施例19C(disialo)-C12linker-SRIF14的合成19-1肽的合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加Fmoc-Cys(Acm)-OH(49.7mg，120μmol)與DIPEA(104.5μL，600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷及DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法合成下述式(39)所表示的處于結(jié)合至樹(shù)脂的狀態(tài)的經(jīng)保護(hù)的肽39(序列編號(hào)58)?？s合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。[化學(xué)式56]通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，使用HCTU作為縮合劑，使Fmoc-12-氨基十二烷酸和Fmoc-Cys(Trt)-OH依次縮合?？s合后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。由此，使氨基酸側(cè)鏈的保護(hù)基(Acm基以外)脫離，并且將肽與樹(shù)脂切斷。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝60:40→36.2:63.8，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽的一部分進(jìn)行純化，以獲得下述式(40)所表示之化合物(肽40)(序列編號(hào)59)(11.2mg)。[化學(xué)式57]ESI-MS:C97H144N22O23S3的(m/z)的計(jì)算值：[M+2H]2+1042.3、[M+3H]3+695.2，實(shí)測(cè)值：1042.0、695.0。19-2硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將利用上述19-1中記載的方法獲得的肽40(6.8mg，3.3μmol)與上述式(a)所表示的化合物a(19.1mg，8.15μmol)溶解在包含7M胍鹽酸鹽和330μMTCEP的0.2M磷酸緩沖液(pH值為7.4，0.96mL)中，在室溫下反應(yīng)2小時(shí)。利用HPLC確認(rèn)原料消失之后，使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→50:50，25分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(41)所表示的化合物(糖肽41)(序列編號(hào)60)(7.1mg，1.6μmol，產(chǎn)率50％)。[化學(xué)式58]ESI-MS:C183H283N29O85S3的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1449.5、[M+4H]4+1087.4、[M+5H]5+870.1，實(shí)測(cè)值：1449.3、1087.2、870.0。19-3Acm基的脫保護(hù)向利用上述19-2中記載的方法獲得的糖肽41(10.3mg，2.37μmol)中添加乙酸銀(I)(9.7mg，58μmol)的水溶液(0.95mL)，在室溫下反應(yīng)30分鐘。添加溶解在100mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，0.95mL)的DTT(22.3mg，145μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(0.95mL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→50:50，25分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，而獲得下述式42所表示的糖肽42(序列編號(hào)61)(5.8mg，1.4μmol，產(chǎn)率59％)。[化學(xué)式59]ESI-MS:C177H273N27O83S3的(m/z)計(jì)算值：[M+3H]3+1402.1、[M+4H]4+1051.8、[M+5H]5+841.7，實(shí)測(cè)值：1401.9、1051.7、841.5。19-4雙硫鍵的形成將利用上述19-3中記載的方法獲得的糖肽42(5.8mg，1.4μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，3.5mL)中，在室溫下反應(yīng)30小時(shí)。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝70:30→50:50，25分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得包含下述式43所表示的化合物(C(disialo)-C12linker-SRIF14)(序列編號(hào)37)的級(jí)分。[化學(xué)式60]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→50:50，25分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)該級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步純化，以獲得C(disialo)-C12linker-SRIF14(3.6mg，0.86μmol，產(chǎn)率61％)。ESI-MS:C177H271N27O83S3的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1401.5、[M+4H]4+1051.3、[M+5H]5+841.3，實(shí)測(cè)值：1401.2、1051.2、841.1。實(shí)施例20S1-2C(disialo)-SRIF28的合成20-1肽的合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加Fmoc-Cys(Acm)-OH(49.7mg，120μmol)和DI-PEA(104.5μL，600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷和DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法將經(jīng)保護(hù)的肽合成在樹(shù)脂上?？s合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝72:28→68.5:31.5，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽的一部分進(jìn)行純化，以獲得下述式(44)所表示的肽44(序列編號(hào)62)(30.7mg)。[化學(xué)式61]ESI-MS:C146H224N44O41S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1138.3、[M+4H]4+854.0、[M+5H]5+683.4，實(shí)測(cè)值：1138.2、853.9、683.1。20-2硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將利用上述20-1中記載的方法獲得的肽44(45.8mg，13.4μmol)與上述式(a)所表示的化合物a(125.8mg，53.7μmol，相對(duì)于肽44為4.0當(dāng)量)溶解在33mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，4.0mL)中，在室溫下反應(yīng)30分鐘。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝83:17→72:28，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式45所表示的糖肽45(序列編號(hào)63)(44.5mg，5.61μmol，產(chǎn)率42％)。[化學(xué)式62]ESI-MS:C318H502N58O165S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+5H]5+1588.6、[M+6H]6+1324.0、[M+7H]7+1135.0、[M+8H]8+993.3、[M+9H]9+883.0，實(shí)測(cè)值：1588.6、1324.0、1135.0、993.2、883.0。20-3Acm基的脫保護(hù)向利用上述20-2中記載的方法獲得的糖肽45(44.5mg，5.61μmol)中添加乙酸銀(I)(14.8mg，88.7μmol)水溶液(2.2mL)，在室溫下反應(yīng)30分鐘。添加溶解在200mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，2.2mL)的DTT(33.2mg，215μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(561μL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝83:17→72:28，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(46)所表示的糖肽46(序列編號(hào)64)(34.4mg，4.41μmol，產(chǎn)率79％)。[化學(xué)式63]ESI-MS:C312H492N56O163S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1950.0、[M+5H]5+1560.2、[M+6H]6+1300.3，實(shí)測(cè)值：1949.8、1560.1、1300.2。20-4雙硫鍵的形成將利用上述20-3中記載的方法獲得的糖肽46(34.4mg，4.41μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，8.8mL)中，在室溫下反應(yīng)2天。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝77:23→65:35，16分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得包含下述式(47)所表示的化合物(S1-2C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)21)的級(jí)分。[化學(xué)式64]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝83:17→72:28，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)該級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步純化，以獲得S1-2C(disialo)-SRIF28(20.1mg，2.58μmol，產(chǎn)率58％)。ESI-MS:C312H490N56O163S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1949.5、[M+5H]5+1559.8、[M+6H]6+1300.0，實(shí)測(cè)值：1949.4、1559.7、1299.9。實(shí)施例21S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(48)所表示的化合物(肽48)(序列編號(hào)65)代替肽44，除此以外，以與實(shí)施例20相同的方式合成下述式(49)所表示的化合物(S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)22)。[化學(xué)式65][化學(xué)式66]實(shí)施例22S1C(disialo)·R13C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(50)所表示的化合物(肽50)(序列編號(hào)66)代替肽44，除此以外，以與實(shí)施例20相同的方式合成下述式(51)所表示的化合物(S1C(disialo)·R13C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)23)。[化學(xué)式67][化學(xué)式68]實(shí)施例23N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(52)所表示的化合物(肽52)(序列編號(hào)67)代替肽44，除此以外，以與實(shí)施例20相同的方式合成下述式(53)所表示的化合物(N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)24)。[化學(xué)式69][化學(xué)式70]實(shí)施例24S1-3C(disialo)-SRIF28的合成24-1肽的合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加Fmoc-Cys(Acm)-OH(49.7mg，120μmol)與DIPEA(104.5μL、600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷和DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法將經(jīng)保護(hù)的肽合成在樹(shù)脂上?？s合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ50×250mm，流速：43.7mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝73:27→65:35，14分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽的一部分進(jìn)行純化，以獲得下述式(54)所表示的肽54(序列編號(hào)68)(41.7mg)。[化學(xué)式71]ESI-MS:C149H229N45O42S6的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1172.7、[M+4H]4+879.8、[M+5H]5+704.0，實(shí)測(cè)值：1172.5、879.4、703.9。24-2硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將利用上述24-1中記載的方法獲得的肽54(10.7mg，3.04μmol)與上述式(a)所表示的化合物a(36.6mg，15.6μmol，相對(duì)于肽54為5.2當(dāng)量)溶解在包含10μMTCEP的33mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，0.91mL)中，在室溫下反應(yīng)100分鐘。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→70:30，5分鐘，然后A:B＝70:30→65:35，12分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(55)所表示的糖肽55(序列編號(hào)69)(11.7mg，1.14μmol，產(chǎn)率38％)。[化學(xué)式72]ESI-MS:C407H646N66O228S6的(m/z)的計(jì)算值：[M+5H]5+2061.8、[M+6H]6+1718.4、[M+7H]7+1473.0、[M+8H]8+1289.0、[M+9H]9+1145.9、[M+10H]10+1031.4，實(shí)測(cè)值：2061.8、1718.2、1472.9、1289.0、1145.8、1031.3。24-3Acm基的脫保護(hù)向利用上述24-2中記載的方法獲得的糖肽55(11.7mg，1.14μmol)中添加乙酸銀(I)(4.7mg，28μmol)的水溶液(0.46mL)，在室溫下反應(yīng)2小時(shí)。添加溶解在200mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為7.4，0.46mL)的DTT(11.3mg，73μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(0.11mL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→70:30，5分鐘，然后70:30→55:45，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(56)所表示的糖肽56(序列編號(hào)70)(7.4mg，0.73μmol，產(chǎn)率64％)。[化學(xué)式73]ESI-MS:C401H636N64O226S6的(m/z)的計(jì)算值：[M+6H]6+1694.7、[M+7H]7+1452.7、[M+8H]8+1271.3、[M+9H]9+1130.1、[M+10H]10+1017.2，實(shí)測(cè)值：1694.6、1452.5、1271.4、1130.0、1017.2。24-4雙硫鍵的形成將利用上述24-3中記載的方法獲得的糖肽56(7.4mg，0.73μmol)溶解在100mMTris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，1.8mL)中，在室溫下反應(yīng)25小時(shí)。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→70:30，5分鐘，然后70:30→69.3:30.7，5分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得包含下述式(57)所表示的化合物(S1-3C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)25)的級(jí)分。[化學(xué)式74]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→40:60，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)該級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步純化，以獲得S1-3C(disialo)-SRIF28(4.7mg，0.46μmol，產(chǎn)率63％)。ESI-MS:C401H634N64O226S6的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+3387.7、[M+4H]4+2541.0、[M+5H]5+2033.0、[M+6H]6+1694.3、[M+7H]7+1452.4，實(shí)測(cè)值：3387.6、2540.9、2032.7、1694.2、1452.3。實(shí)施例25S1C(disialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(58)所表示的肽58(序列編號(hào)71)代替肽54，除此以外，以與實(shí)施例24相同的方式合成下述式(59)所表示的化合物(S1C(disialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)26)。[化學(xué)式75][化學(xué)式76]實(shí)施例26S1C(monosialo)-SRIF28的合成使用下述式(b)所表示的化合物b(溴乙酰胺化的低聚糖：大冢化學(xué)株式會(huì)社制造)代替化合物a，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(60)所表示的化合物(S1C(monosialo)-SRIF28)(序列編號(hào)27)。[化學(xué)式77][化學(xué)式78]在最終產(chǎn)物中，具有下述式b1的糖鏈的附加糖鏈的多肽與具有下述式b2的糖鏈的附加糖鏈的多肽的比為45:55。而且，通過(guò)使用結(jié)構(gòu)相同的單唾液酸糖鏈衍生物，可以制造具有實(shí)質(zhì)上均勻的糖鏈結(jié)構(gòu)的附加糖鏈的多肽。[化學(xué)式79]實(shí)施例27S1C(asialo)-SRIF28的合成使用下述式(c)所表示的化合物c(經(jīng)溴乙酰胺化的低聚糖：大?；瘜W(xué)株式會(huì)社制造)代替化合物a，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(61)所表示的化合物(S1C(asialo)-SRIF28)(序列編號(hào)28)。[化學(xué)式80][化學(xué)式81]實(shí)施例28S1-2C(asialo)-SRIF28的合成28-1硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將肽44(21.2mg，6.21μmol)與化合物c(44.5mg，25.3μmol，相對(duì)于肽44為4.1當(dāng)量)溶解在33mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，1.9mL)中，在室溫下反應(yīng)1小時(shí)。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝77:23→62:38，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(62)所表示的糖肽62(序列編號(hào)72)(24.0mg，3.54μmol，產(chǎn)率57％)。[化學(xué)式82]ESI-MS:C274H434N54O133S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1694.3、[M+5H]5+1355.6、[M+6H]6+1129.8，實(shí)測(cè)值：1694.3、1355.6、1130.0。28-2Acm基的脫保護(hù)向利用上述28-1中記載的方法獲得的糖肽62(24.0mg，3.54μmol)中添加乙酸銀(I)(6.0mg，36μmol)的水溶液(1.4mL)，在室溫下反應(yīng)3小時(shí)。添加溶解在500mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，0.57mL)的DTT(14.0mg，90.8μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(0.35mL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝75:25→65:35，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(63)所表示的糖肽63(序列編號(hào)73)(20.1mg，3.03μmol，產(chǎn)率86％)。[化學(xué)式83]ESI-MS:C268H424N52O131S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1658.7、[M+5H]5+1327.2，實(shí)測(cè)值：1658.8、1327.0。28-3雙硫鍵的形成將利用上述28-2中記載的方法獲得的糖肽63(20.1mg，3.03μmol)溶解在100mM之Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，6.1mL)中，在室溫下反應(yīng)2天。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝77:23→65:35，16分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得包含下述式(64)所表示的化合物(S1-2C(asialo)-SRIF28)(序列編號(hào)29)的級(jí)分。[化學(xué)式84]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝92:8→80:20，16分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)該級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步純化，以獲得S1-2C(asialo)-SRIF28(11.0mg，1.66μmol，產(chǎn)率55％)。ESI-MS:C268H422N52O131S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1658.2、[M+5H]5+1326.8、[M+6H]6+1105.8、[M+7H]7+948.0、[M+8H]8+829.6，實(shí)測(cè)值：1658.1、1326.7、1105.6、947.8、829.4。實(shí)施例29S1-3C(asialo)-SRIF28的合成29-1硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將肽54(21.3mg，6.06μmol)與化合物c(53.4mg，30.3μmol，相對(duì)于肽54為5.0當(dāng)量)溶解在33mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，1.8mL)中，在室溫下反應(yīng)1小時(shí)。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝75:25→70:30，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(65)所表示的糖肽65(序列編號(hào)74)(39.3mg，4.59μmol，產(chǎn)率76％)。[化學(xué)式85]ESI-MS:C341H544N60O180S6的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+2140.2、[M+5H]5+1712.3、[M+6H]6+1427.1，實(shí)測(cè)值：2140.2、1712.4、1427.2。29-2Acm基的脫保護(hù)向利用上述29-1中記載的方法獲得的糖肽65(39.3mg，4.59μmol)中添加乙酸銀(I)(18.7mg，112μmol)的水溶液(1.8mL)，在室溫下反應(yīng)90分鐘。添加溶解在200mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，1.8mL)的DTT(43.4mg，28.1μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(0.46mL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝75:25→68:32，18分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(66)所表示的糖肽66(序列編號(hào)75)(27.6mg，3.28μmol，產(chǎn)率71％)。[化學(xué)式86]ESI-MS:C335H534N58O178S6的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+2104.6、[M+5H]5+1683.9、[M+6H]6+1403.4，實(shí)測(cè)值：2104.6、1684.0、1403.3。29-3雙硫鍵的形成將利用上述29-2中記載的方法獲得的糖肽66(27.6mg，3.28μmol)溶解在100mM之Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，8.2mL)中，在室溫下反應(yīng)2天。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝72:28→70.5:29.5，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得包含下述式(67)所表示的化合物(S1-3C(asialo)-SRIF28)(序列編號(hào)30)的級(jí)分。[化學(xué)式87]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝96:4→82:18，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)該級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步純化，以獲得S1-3C(asialo)-SRIF28(14.5mg，1.72μmol，產(chǎn)率52％)。ESI-MS:C335H532N58O178S6的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+2104.1、[M+5H]5+1683.5、[M+6H]6+1403.1，實(shí)測(cè)值：2103.7、1683.3、1403.0。實(shí)施例30N5N(disialo)-SRIF28的合成30-1糖肽的固相合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加Fmoc-Cys(Trt)-OH(72.5mg，120μmol)與DIPEA(104.6μL，600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷和DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法，合成下述式(68)所表示的處于結(jié)合至樹(shù)脂的狀態(tài)的經(jīng)保護(hù)的肽68(序列編號(hào)76)?？s合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。[化學(xué)式88]接著，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，將下述式(d)所表示的化合物d(大?；瘜W(xué)株式會(huì)社制造)(411.9mg，150.4μmol)、DMSO-DMF(1/1，v/v，871μL)溶液、TBTU(64.2mg，200μmol)、和DIPEA(52.3μL，300μmol)依次添加于樹(shù)脂中，在室溫下振蕩3小時(shí)而使之縮合。[化89]利用DMF洗凈后，重復(fù)1次該縮合操作。利用DMF和二氯甲烷對(duì)樹(shù)脂進(jìn)行洗凈后，用DMF中的20％的哌啶振蕩20分鐘而使Fmoc基脫保護(hù)并利用DMF對(duì)樹(shù)脂進(jìn)行洗凈，以使經(jīng)保護(hù)的下述式(69)所表示的化合物(肽69)(序列編號(hào)77)在樹(shù)脂上合成。[化學(xué)式90]在該樹(shù)脂上，使用HOBt/DIC作為縮合劑，使Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ala、Fmoc-Ser(tBu)-OH依次縮合?？s合后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，A:B＝70:30]對(duì)該粗肽進(jìn)行純化，以獲得下述式(70)所表示的糖肽70(序列編號(hào)78)(29.1mg，5.26μmol)。[化學(xué)式91]ESI-MS:C235H357N47O100S3的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1846.6、[M+4H]4+1385.2、[M+5H]5+1108.4，實(shí)測(cè)值：1846.5、1385.1、1108.3。30-2雙硫鍵的形成利用上述30-1中記載的方法獲得的糖肽70(12.2mg，2.20μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，5.5mL)中，在室溫下反應(yīng)2天。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→66:35，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(71)所表示的糖肽71(序列編號(hào)79)(8.3mg，1.5μmol，產(chǎn)率68％)。[化學(xué)式92]ESI-MS:C235H355N47O100S3的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1846.5、[M+4H]4+1384.7、[M+5H]5+1108.0，實(shí)測(cè)值：1846.5、1384.7、1108.1。30-3芐基的脫保護(hù)將利用上述30-2中記載的方法獲得的糖肽71(7.5mg，1.4μmol)溶解在50mM氫氧化鈉水溶液(20.6mL)中，在0℃下反應(yīng)80分鐘。添加200mM乙酸水溶液(5.1mL)，使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝73:27→66.3:33.7，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)混合溶液進(jìn)行純化，以獲得包含下述式(72)所表示的化合物(N5N(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)31)的級(jí)分。[化學(xué)式93]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→60:40，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)該組分進(jìn)行進(jìn)一步純化，以獲得N5N(disialo)-SRIF28(1.4mg，產(chǎn)率19％)。ESI-MS:C221H343N47O100S3的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1785.9、[M+4H]4+1339.6、[M+5H]5+1071.9，實(shí)測(cè)值：1785.7、1339.5、1071.8。實(shí)施例31S1N(disialo)-SRIF28的合成31-1糖肽的固相合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加Fmoc-Cys(Trt)-OH(72.5mg，120μmol)與DIPEA(104.6μL，600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷和DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法，合成下述式(73)所表示的處于結(jié)合至樹(shù)脂的狀態(tài)的經(jīng)保護(hù)的肽73(序列編號(hào)80)?？s合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。[化學(xué)式94]接著，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，將化合物d(420.2mg，153.3μmol)、DMSO-DMF(1/1，v/v，871μL)溶液、TBTU(64.2mg，200μmol)、和DIPEA(52.3μL，300μmol)依次添加至樹(shù)脂中，在室溫下振蕩2小時(shí)而使之縮合。利用DMF洗凈后，重復(fù)1次該縮合操作。利用DMF和二氯甲烷對(duì)樹(shù)脂進(jìn)行洗凈后，用DMF中的20％的哌啶振蕩20分鐘而使Fmoc基脫保護(hù)并利用DMF對(duì)樹(shù)脂進(jìn)行洗凈，以使經(jīng)保護(hù)的下述式(74)所表示的肽74(序列編號(hào)81)在樹(shù)脂上合成。[化學(xué)式95]利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。在濾液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，A:B＝71:29]對(duì)該粗肽進(jìn)行純化，以獲得下述式(75)所表示的糖肽75(序列編號(hào)82)(65.7mg，11.8μmol)。[化學(xué)式96]ESI-MS:C236H358N48O100S3的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1392.0、[M+5H]5+1113.8，實(shí)測(cè)值：1391.9、1113.8。31-2雙硫鍵之形成將利用上述31-1中記載的方法獲得的糖肽75(20.3mg，3.65μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，9.0mL)中，在室溫下反應(yīng)2天。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝72:28→67:33，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，進(jìn)一步獲得下述式(76)所表示的糖肽76(序列編號(hào)83)(17.0mg，3.06μmol，產(chǎn)率84％)。[化學(xué)式97]ESI-MS:C236H356N48O100S3的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1391.5、[M+5H]5+1113.4，實(shí)測(cè)值：1391.3、1113.2。31-3芐基的脫保護(hù)將利用上述31-2中記載的方法獲得的糖肽76(7.0mg，1.3μmol)溶解在50mM氫氧化鈉水溶液(19.1mL)中，在0℃下反應(yīng)1小時(shí)。添加200mM乙酸水溶液(9.6mL)，使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝85:15→77.5:22.5，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)混合溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(77)所表示的化合物(S1N(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)32)(2.7mg，0.50μmol，產(chǎn)率40％)。[化學(xué)式98]ESI-MS:C222H344N48O100S3的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1794.9、[M+4H]4+1346.4、[M+5H]5+1077.3、[M+6H]6+897.9，實(shí)測(cè)值：1794.7、1346.2、1077.2、897.7。實(shí)施例32S1C(disialo)·N19C(GlcNAc)-SRIF28的合成32-1肽的合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加Fmoc-Cys(Acm)-OH(49.7mg，120μmol)與DIPEA(104.5μL，600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷和DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法將經(jīng)保護(hù)的肽合成在樹(shù)脂上。縮合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀之形式獲得粗肽。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝72:28→64:36，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽的一部分進(jìn)行純化，以獲得下述式(78)所表示的肽78(序列編號(hào)84)(28.9mg)。[化學(xué)式99]ESI-MS:C146H226N42O39S6的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1129.7、[M+4H]4+847.5，實(shí)測(cè)值：1129.5、847.4。32-2硫醇的糖鏈修飾與StBu基的脫保護(hù)將利用上述32-1中記載的方法獲得的肽78(10.0mg，2.95μmol)與下述式(e)所表示的化合物e(經(jīng)溴乙酰胺化的單糖：大?；瘜W(xué)株式會(huì)社制造)(2.0mg，5.90μmol，相對(duì)于肽78為2.0當(dāng)量)溶解在包含20μMTCEP的33mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，0.89mL)中，在室溫下反應(yīng)2小時(shí)。[化學(xué)式100]反應(yīng)后，添加溶解在0.1M磷酸緩沖液(pH值為7.4，3.0mL)的DTT(45.5mg，295μmol)，于室溫下反應(yīng)3小時(shí)。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝75:25→65:35，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(79)所表示的糖肽79(序列編號(hào)85)(6.8mg，1.9μmol，產(chǎn)率64％)。[化學(xué)式101]ESI-MS:C152H234N44O45S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1187.0、[M+4H]4+890.5，實(shí)測(cè)值：1187.0、890.5。32-3硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將利用上述32-2中記載的方法獲得的肽79(6.8mg，1.9μmol)與上述式(a)所表示的化合物a(22.4mg，9.56μmol，相對(duì)于肽79為5.0當(dāng)量)溶解在包含7.6mMDTT的0.1M磷酸緩沖液(pH值為7.4，2.0mL)中，在室溫下反應(yīng)2小時(shí)。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝85:15→65:35，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(80)所表示的糖肽80(序列編號(hào)86)(3.4mg，0.58μmol，產(chǎn)率31％)。[化學(xué)式102]ESI-MS:C238H373N51O107S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+5H]5+1165.2、[M+6H]6+971.2、[M+7H]7+832.6、[M+8H]8+728.6，實(shí)測(cè)值：1165.2、971.1、832.6、728.6。32-4Acm基的脫保護(hù)向利用上述32-3中記載的方法獲得的糖肽80(3.8mg，0.65μmol)中添加乙酸銀(I)(2.7mg，16μmol)的水溶液(262μL)，在室溫下反應(yīng)1小時(shí)。添加溶解在100mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，426μL)的DTT(10.0mg，64.8μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(66μL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱:SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝90:10→60:40，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(81)所表示的糖肽81(序列編號(hào)87)(2.5mg，0.44μmol，產(chǎn)率67％)。[化學(xué)式103]ESI-MS:C232H363N49O105S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1894.0、[M+4H]4+1420.7、[M+5H]5+1136.8，實(shí)測(cè)值：1893.8、1420.6、1136.7。32-4雙硫鍵的形成將利用上述32-3中記載的方法獲得的糖肽81(2.5mg，0.44μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，1.1mL)中，在室溫下反應(yīng)一整夜。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝90:10→70:30，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(82)所表示的化合物(S1C(disialo)·N19C(GlcNAc)-SRIF28)(序列編號(hào)33)(1.5mg，0.26μmol，產(chǎn)率59％)。[化學(xué)式104]ESI-MS:C232H361N49O105S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1893.3、[M+4H]4+1420.2、[M+5H]5+1136.4，實(shí)測(cè)值：1893.5、1420.1、1136.3。實(shí)施例33S1C(disialo)·N19C(diMan)-SRIF28的合成使用下述式(f)所表示的化合物f(經(jīng)溴乙酰胺化的低聚糖：大?；瘜W(xué)株式會(huì)社制造)代替化合物e，除此以外，以與實(shí)施例32相同的方式合成下述式(83)所表示的化合物(S1C(disialo)·N19C(diMan)-SRIF28)(序列編號(hào)34)。[化學(xué)式105][化學(xué)式106]實(shí)施例34S1-5C(disialo)-SRIF28的合成34-1肽的合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加Fmoc-Cys(Acm)-OH(49.7mg，120μmol)與DIPEA(104.5μL，600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷和DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法將經(jīng)保護(hù)的肽合成在樹(shù)脂上?？s合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，在濾液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。利用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ50×250mm，流速：43.7mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝73:27→65:35，35分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽進(jìn)行純化，以獲得下述式(84)所表示的肽84(序列編號(hào)90)。[化學(xué)式107]ESI-MS:C155H239N47O44S8的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1241.5、[M+4H]4+931.3、[M+5H]5+745.3，實(shí)測(cè)值：1241.2、931.2、745.1。34-2硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將利用上述34-1中記載的方法獲得的肽84(33.7mg，9.06μmol)與上述式(a)所表示的化合物a(經(jīng)溴乙酰胺化的低聚糖：大冢化學(xué)株式會(huì)社制造)(160.9mg，68.6μmol，相對(duì)于肽84為7.5當(dāng)量)溶解在包含10μMTCEP的33mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，2.7mL)中，在室溫下反應(yīng)一整夜。使用HPLC[管柱：SHISEIDOProteonavi(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→78.4:21.6，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(85)所表示的糖肽85(序列編號(hào)91)(35.1mg，2.33μmol，產(chǎn)率26％)。ESI-MS:C585H934N82O354S8的(m/z)的計(jì)算值：[M+6H]6+2507.1、[M+7H]7+2149.1、[M+8H]8+1880.6，實(shí)測(cè)值：2506.9、2149.0、1880.6。[化學(xué)式108]34-3Acm基的脫保護(hù)向利用上述34-2中記載的方法獲得的糖肽85(20.6mg，1.37μmol)中添加乙酸銀(I)(5.6mg，34μmol)的水溶液(0.55mL)，在室溫下反應(yīng)50分鐘。然后，添加溶解在200mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，0.55mL)的DTT(13.8mg，89μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(137μL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOProteonavi(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→73.6:26.4，16分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(86)所表示的糖肽86(序列編號(hào)92)(13.6mg，0.913μmol，產(chǎn)率67％)。[化學(xué)式109]ESI-MS:C579H924N80O352S8的(m/z)的計(jì)算值：[M+6H]6+2483.4、[M+7H]7+2128.8、[M+8H]8+1862.8，實(shí)測(cè)值：2483.2、2128.8、1862.9。34-4雙硫鍵的形成將利用上述34-3中記載的方法獲得的糖肽86(13.6mg，0.913μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，2.2mL)中，在室溫下反應(yīng)2天。然后，使用HPLC[管柱：Proteonavi(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:10mM乙酸銨水溶液，B:10mM乙酸銨-乙腈(1/9，v/v)，梯度A:B＝78:22→70.8:29.2，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(87)所表示的S1-5C(disialo)-SRIF28(序列編號(hào)88)(10.4mg，0.698μmol，產(chǎn)率76％)。[化學(xué)式110]ESI-MS:C579H922N80O352S8的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]5+3724.1、[M+5H]5+2979.5、[M+6H]6+2483.1、[M+7H]7+2128.5、[M+8H]8+1862.6，實(shí)測(cè)值：3723.7、2979.1、2482.9、2128.2、1862.4。實(shí)施例35S1-10C(disialo)-SRIF28的合成35-1肽的合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加Fmoc-Cys(Acm)-OH(49.7mg，120μmol)與DIPEA(104.5μL，600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷和DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法將經(jīng)保護(hù)的肽合成在樹(shù)脂上。縮合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝69:31→66.6:33.4，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽進(jìn)行純化，以獲得下述式(88)所表示的肽88(序列編號(hào)93)(16.8mg)。[化學(xué)式111]ESI-MS:C170H264N52O49S13的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1413.4、[M+4H]4+1060.3、[M+5H]5+848.4，實(shí)測(cè)值：1412.9、1060.2、848.1。35-2經(jīng)溴乙酰胺化的具有芐基保護(hù)基的二唾液酸糖鏈的合成向化合物a(28.9mg，12.3μmol)中依次添加DMF(0.58mL)、溴化鋰(21.5mg，248μmol)、芐基溴(14.6μL，122μmol)，在30℃下反應(yīng)20小時(shí)。進(jìn)一步添加芐基溴(14.6μL，122μmol)反應(yīng)20小時(shí)。向反應(yīng)液中添加甲苯(30mL)，離心分離(10,000xg，10分鐘)之后，將沉淀物溶解在水(100μL)中，使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：8.0mL/分鐘，展開(kāi)劑水：乙腈＝95:5→70:30，20分鐘，線性梯度洗脫]進(jìn)行純化，以獲得下述式(g)所表示的化合物g(經(jīng)溴乙酰胺化的二唾液酸糖鏈：7.6mg，3.0μmol，產(chǎn)率24％)。[化學(xué)式112]MALDI-MS:C100H152BrN7O62的(m/z)的計(jì)算值：[M+Na]+2544.8，實(shí)測(cè)值：2544.4。35-3硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將利用上述35-1中記載的方法獲得的肽88(8.1mg，1.9μmol)與利用上述35-2中記載的方法獲得的化合物g(58.0mg)溶解在包含2.3M胍鹽酸鹽的66mM磷酸緩沖液(pH值為6.8，0.57mL)中，在室溫下反應(yīng)一整夜。利用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝80:20→74.7:25.3，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(89)所表示的糖肽89(序列編號(hào)94)(12.3mg，0.429μmol，產(chǎn)率23％)。[化學(xué)式113]ESI-MS:C1170H1774N122O669S13的(m/z)的計(jì)算值：[M+8H]8+3584.7、[M+9H]9+3186.5、[M+10H]10+2868.0、[M+11H]11+2607.4、[M+12H]12+2390.2、[M+13H]13+2206.4、[M+14H]14+2048.9，實(shí)測(cè)值：3585.0、3186.6、2867.9、2607.6、2390.1、2206.4、2048.9。35-4Acm基的脫保護(hù)向利用上述35-3中記載的方法獲得的糖肽89(49.8mg，1.74μmol)中添加乙酸銀(I)(10.2mg)的水溶液(0.70mL)，在室溫下反應(yīng)1小時(shí)。添加DTT(16.6mg)的200mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，0.70mL)溶液和100mM抗壞血酸水溶液(0.17mL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝78:22→73:27，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，一獲得下述式(90)所表示的糖肽90(序列編號(hào)95)(33.0mg，1.16μmol，產(chǎn)率67％)。[化學(xué)式114]ESI-MS:C1164H1764N120O867S13的(m/z)的計(jì)算值：[M+9H]9+3170.8、[M+10H]10+2853.8、[M+11H]11+2594.4、[M+12H]12+2378.3、[M+13H]13+2195.4、[M+14H]14+2038.7、[M+15H]15+1902.9，實(shí)測(cè)值：3170.9、2853.7、2594.4、2378.3、2195.4、2038.7、1902.9。35-5雙硫鍵的形成將利用上述35-4中記載的方法獲得的糖肽90(2.1mg，0.074μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，185μL)中，在室溫下反應(yīng)2天。然后，使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ4.6×250mm，流速：0.7mL/分鐘，展開(kāi)劑A:10mM乙酸銨水溶液，B:10mM乙酸銨-乙腈(1/9，v/v)，梯度A:B＝69:31→65:35，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(91)所表示的糖肽91(序列編號(hào)96)(1.0mg，0.035μmol，產(chǎn)率47％)。[化學(xué)式115]ESI-MS:C1164H1762N120O667S13的(m/z)的計(jì)算值：[M+8H]8+3566.7、[M+9H]9+3170.5、[M+10H]10+2853.6，實(shí)測(cè)值：3566.6、3170.4、2853.6。35-6芐基的脫保護(hù)將利用上述35-5中記載的方法獲得的糖肽91(17.1mg，0.599μmol)溶解在50mM氫氧化鈉水溶液(12mL)中，在0℃下反應(yīng)90分鐘。添加100mM乙酸水溶液12mL，使用HPLC[管柱：SHISEIDOProteonavi，φ4.6×250mm，流速：0.7mL/分鐘，展開(kāi)劑A:10mM乙酸銨水溶液，B:10mM乙酸銨-乙腈(1/9，v/v)，梯度A:B＝72:18→80:20，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)混合溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(92)所表示的糖肽92(序列編號(hào)89)(5.8mg，0.22μmol，產(chǎn)率37％)。[化學(xué)式116]ESI-MS:C1024H1642N120O667S13的(m/z)的計(jì)算值：[M+7H]7+3818.6、[M+8H]8+3341.4、[M+9H]9+2970.3、[M+10H]10+2673.3，實(shí)測(cè)值：3818.3、3341.0、2970.1、2673.1。實(shí)施例36C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(93)所表示的化合物(肽93)(序列編號(hào)97)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(94)所表示的化合物(C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)98)。[化學(xué)式117][化學(xué)式118]實(shí)施例37R11C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(95)所表示的化合物(肽95)(序列編號(hào)99)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(96)所表示的化合物(R11C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)100)。[化學(xué)式119][化學(xué)式120]實(shí)施例38F20C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(97)所表示的化合物(肽97)(序列編號(hào)101)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(98)所表示的化合物(F20C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)102)。[化學(xué)式121][化學(xué)式122]實(shí)施例39T24C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(99)所表示的化合物(肽99)(序列編號(hào)103)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(100)所表示的化合物(T24C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)104)。[化學(xué)式123][化學(xué)式124]實(shí)施例40F25C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(101)所表示的化合物(肽101)(序列編號(hào)105)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(102)所表示的化合物(F25C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)106)。[化學(xué)式125][化學(xué)式126]實(shí)施例41S27C(disialo)-SRIF28的合成使用下述式(103)所表示的化合物(肽103)(序列編號(hào)107)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(104)所表示的化合物(S27C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)108)。[化學(xué)式127][化學(xué)式128]實(shí)施例42C(disialo)-K-SRIF14的合成使用下述式(105)所表示的化合物(肽105)(序列編號(hào)109)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(106)所表示的化合物(C(disialo)-K-SRIF14)(序列編號(hào)110)。[化學(xué)式129][化學(xué)式130]實(shí)施例43S1C(disialo)-F25Y-SRIF28的合成43-1肽的合成使用下述式(107)所表示的化合物(肽107)(序列編號(hào)111)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(108)所表示的化合物(S1C(disialo)-F25Y-SRIF28)(序列編號(hào)112)。[化學(xué)式131][化學(xué)式132]實(shí)施例44S1C(disialo)-SRIF28-酰胺的合成使用下述式(109)所表示的化合物(肽109)(序列編號(hào)113)代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(110)所表示的化合物(S1C(disialo)-SRIF28-酰胺)(序列編號(hào)114)。[化學(xué)式133][化學(xué)式134]實(shí)施例45C(disialo)-PEGlinker-SRIF14的合成45-1肽的合成通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將利用上述19-1中記載的方法獲得的結(jié)合至樹(shù)脂的經(jīng)保護(hù)的肽39(序列編號(hào)58)(50μmol)的Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用HCTU作為縮合劑，使Fmoc-NH-(PEG)2-COOH(Merck公司制造)和Fmoc-Cys(Trt)-OH依次縮合。通過(guò)利用DMF中的20％的之哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝74:26→69:31，1分鐘，然后69:31→62:38，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽的一部分進(jìn)行純化，以獲得下述式(111)所表示的化合物(肽111)(序列編號(hào)115)(43.1mg)。[化學(xué)式135]ESI-MS:C94H138N22O26S3的(m/z)的計(jì)算值：[M+2H]2+1045.2、[M+3H]3+697.1，實(shí)測(cè)值：1045.0、697.0。45-2C(disialo)-PEGlinker-SRIF14的合成使用利用上述45-1中記載的方法獲得的肽111代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(112)所表示的化合物(C(disialo)-PEGlinker-SRIF14)(序列編號(hào)116)。[化學(xué)式136]實(shí)施例46Biotin-S1C(disialo)-SRIF28的合成46-1肽的合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加包含F(xiàn)moc-Cys(Acm)-OH(49.7mg，120μmol)與DIPEA(104.5μL，600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷和DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法合成下述式(113)所表示的處于結(jié)合至樹(shù)脂的狀態(tài)的經(jīng)保護(hù)的肽113(序列編號(hào)117)?？s合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。[化學(xué)式137]通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用HCTU作為縮合劑，使生物素縮合。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，自室溫下振蕩3小時(shí)。由此，使氨基酸側(cè)鏈的保護(hù)基(Acm基以外)脫離，并且將肽與樹(shù)脂切斷。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。利用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝75:25→61:39，18分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽進(jìn)行純化，以獲得下述式(114)所表示飛肽114(序列編號(hào)118)。[化學(xué)式138]ESI-MS:C153H233N45O42S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1179.4、[M+4H]4+884.8、[M+5H]5+708.0，實(shí)測(cè)值：1179.2、884.4、707.9。46-2Biotin-S1C(disialo)-SRIF28的合成使用利用上述46-1中記載的方法獲得的肽114代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(115)所表示的化合物(Biotin-S1C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)119)。[化學(xué)式139]實(shí)施例47Biotin-PEGlinker-S1C(disialo)-SRIF28的合成47-1肽的合成通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將上述46-1中獲得的結(jié)合至樹(shù)脂的經(jīng)保護(hù)的肽113(序列編號(hào)117)的Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用HCTU作為縮合劑，使Fmoc-NH-(PEG)2-COOH(Merck公司制造)和生物素依次縮合。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。利用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A：0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝75:25→61:39，22分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽進(jìn)行純化，以獲得下述式(116)所表示的肽116(序列編號(hào)120)。[化學(xué)式140]ESI-MS:C162H250N46O46S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1247.1、[M+4H]4+935.6、[M+5H]5+748.7，實(shí)測(cè)值：1246.9、935.4、748.6。47-2Biotin-PEGlinker-S1C(disialo)-SRIF28的合成使用利用上述47-1中記載的方法獲得的肽116代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(117)所表示的化合物(Biotin-PEGlinker-S1C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)121)。[化學(xué)式141]實(shí)施例48Azido-S1C(disialo)-SRIF28的合成48-1肽的合成通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將上述46-1中獲得的結(jié)合至樹(shù)脂的經(jīng)保護(hù)的肽113(序列編號(hào)117)的Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用HCTU作為縮合劑，使5-疊氮基-戊酸(5-Azido-pentanoicacid)縮合。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。利用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝70:30→60:40，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽進(jìn)行純化，以獲得下述式(118)所表示的肽118(序列編號(hào)122)。[化學(xué)式142]ESI-MS:C148H226N46O41S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1145.6、[M+4H]4+859.5、[M+5H]5+687.8，實(shí)測(cè)值：1145.5、859.2、687.5。48-2Azido-S1C(disialo)-SRIF28的合成使用利用上述48-1中記載的方法獲得的肽118代替肽1，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(119)所表示的化合物(Azido-S1C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)123)。[化學(xué)式143]實(shí)施例49S1C(disialo)·E12C(disialo)-SRIF28的合成合成并使用下述式(120)所表示的化合物(肽120)(序列編號(hào)124)代替肽44，除此以外，以與實(shí)施例20相同的方式合成下述式(121)所表示的化合物(S1C(disialo)·E12C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)125)。[化學(xué)式144][化學(xué)式145]實(shí)施例502C(disialo)-R-K-SRIF14的合成合成并使用下述式(122)所表示的化合物(肽122)(序列編號(hào)126)代替肽44，除此以外，以與實(shí)施例20相同的方式合成下述式(123)所表示的化合物(2C(disialo)-R-K-SRIF14)(序列編號(hào)127)。[化學(xué)式146][化學(xué)式147]實(shí)施例513C(disialo)-R-K-SRIF14的合成合成并使用下述式(124)所表示的化合物(肽124)(序列編號(hào)128)代替肽54，除此以外，以與實(shí)施例24相同的方式合成下述式(125)所表示的化合物(3C(disialo)-R-K-SRIF14)(序列編號(hào)129)。[化學(xué)式148][化學(xué)式149]實(shí)施例52S1C(diGlcNAc)-SRIF28的合成52-1硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將肽1(序列編號(hào)38)(APC公司制造)(25.0mg，7.56μmol)與下述式(h)所表示的化合物h(經(jīng)溴乙酰胺化的低聚糖：大冢化學(xué)株式會(huì)社制造)(15.6mg，15.1μmol，相對(duì)于肽1為2.0當(dāng)量)溶解在33mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，2.3mL)中，在室溫下反應(yīng)30分鐘。[化學(xué)式150]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，A:B＝75:25→62:38，13分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(126)所表示的糖肽126(序列編號(hào)130)(25.6mg，6.01μmol，產(chǎn)率79％)。[化學(xué)式151]ESI-MS:C195H304N48O76S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1556.0、[M+4H]4+1167.3，實(shí)測(cè)值：1555.7、1167.0。52-2Acm基的脫保護(hù)在利用上述52-1中記載的方法中獲得的糖肽126(28.3mg，6.07μmol)中添加乙酸銀(I)(12.5mg，74.5μmol)的水溶液(2.4mL)，在室溫下反應(yīng)30分鐘。添加溶解在200mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為7.4，2.4mL)的DTT(28.8mg，187μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(0.6mL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/min，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝73:27→60:40，13分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(127)所表示的糖肽127(序列編號(hào)131)(19.8mg，4.38μmol，產(chǎn)率72％)。[化學(xué)式152]ESI-MS:C189H294N46O74S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1508.6、[M+4H]4+1131.7、[M+5H]5+905.6，實(shí)測(cè)值：1508.3、1131.5、905.4。52-3雙硫鍵的形成將利用上述52-2中記載的方法獲得的糖肽127(19.8mg，4.38μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，8.8mL)中，在室溫下反應(yīng)2天。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝73:27→60:40，13分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行粗純化，以獲得包含下述式(128)所表示的化合物(S1C(diGlcNAc)-SRIF28)(序列編號(hào)132)的級(jí)分。[化學(xué)式153]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝90:10→78:22，12分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)該級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步純化，以獲得S1C(diGlcNAc)-SRIF28(11.9mg，2.63μmol，產(chǎn)率60％)。ESI-MS:C189H292N46O74S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1508.0、[M+4H]4+1131.2、[M+5H]5+905.2，實(shí)測(cè)值：1507.7、1131.0、905.0。實(shí)施例53S1C(diMan)-SRIF28的合成使用化合物f代替化合物h，除此以外，以與實(shí)施例52相同的方式合成下述式(129)所表示的化合物(S1C(diMan)-SRIF28)(序列編號(hào)133)。[化學(xué)式154]實(shí)施例54N19C(diMan)-SRIF28的合成使用肽21代替肽1，使用化合物f代替化合物h，除此以外，以與實(shí)施例52相同的方式合成下述式(130)所表示的化合物(N19C(diMan)-SRIF28)(序列編號(hào)134)。[化學(xué)式155]實(shí)施例55S1C(GlcNAc)-SRIF28的合成使用化合物e代替化合物h，除此以外，以與實(shí)施例52相同的方式合成下述式(131)所表示的化合物(S1C(GlcNAc)-SRIF28)(序列編號(hào)135)。[化學(xué)式156]實(shí)施例56N19C(GlcNAc)-SRIF28的合成使用肽21代替肽1，使用化合物e代替化合物h，除此以外，以與實(shí)施例52相同的方式合成下述式(132)所表示的化合物(N19C(GlcNAc)-SRIF28)(序列編號(hào)136)。[化學(xué)式157]實(shí)施例57S1C(trisialo)-SRIF28的合成使用下述式(i)所表示的化合物i(經(jīng)溴乙酰胺化的低聚糖：大冢化學(xué)株式會(huì)社制造)代替化合物a，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(133)所表示的化合物(S1C(trisialo)-SRIF28)(序列編號(hào)137)。[化學(xué)式158][化學(xué)式159]實(shí)施例58S1C(tetrasialo)-SRIF28的合成使用下述式(j)所表示的化合物j(經(jīng)溴乙酰胺化的低聚糖：大冢化學(xué)株式會(huì)社制造)代替化合物a，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(134)所表示的化合物(S1C(tetrasialo)-SRIF28)(序列編號(hào)138)。[化學(xué)式160][化學(xué)式161]實(shí)施例59S1C(disialo(aminoethylamide))-SRIF28的合成59-1經(jīng)溴乙酰胺化的二唾液酸糖鏈衍生物的合成向下述式(k)所表示的化合物k(大?；瘜W(xué)株式會(huì)社制造)(204.1mg，92.1μmol)中添加水(2mL)、N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(tert-ButylN-(2-Aminoethyl)carbamate)(0.29mL，0.18mmol)，在室溫下攪拌1小時(shí)。冷凍干燥后，向所獲得的冷凍干燥物中添加DMF(5mL)、HATU(349mg，921μmol)、DIPEA(161μL，921μmol)，在37℃下反應(yīng)18小時(shí)。向溶液中添加甲苯(50mL)，過(guò)濾回收所析出的沉淀物。將沉淀物溶解在DMF(5mL)中，使用凝膠過(guò)濾純化[管柱：SephadexG-25，φ20×200mm，流速：30mL/h]進(jìn)行純化，將目標(biāo)級(jí)分回收并進(jìn)行冷凍干燥，以獲得下述式(l)所表示的化合物l(152.4mg，60.8μmol，產(chǎn)率66％)。[化學(xué)式162][化學(xué)式163]MALDI-MS:C98H166N10O64的(m/z)的計(jì)算值：[M+Na]+2530.0，實(shí)測(cè)值：2529.4。將化合物l(100mg，39.8μmol)與碳酸氫銨(31.4mg，398μmol)溶解在水(1mL)中，在室溫下反應(yīng)7天。冷凍干燥后，向所獲得的冷凍干燥物中依次添加水(1mL)、DCC(41.0mg，199μmol)、溶解在DMF(1mL)中的溴乙酸(27.7mg，199μmol)。在冰浴冷卻下反應(yīng)1小時(shí)后，使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：8.0mL/分鐘，展開(kāi)劑水：乙腈＝84:16]對(duì)溶液進(jìn)行純化以獲得下述式(m)所表示的化合物m(經(jīng)溴乙酰胺化的二唾液酸糖鏈衍生物:100mg，38.2μmol，產(chǎn)率96％)。[化學(xué)式164]MALDI-MS:C100H168BrN11O64的(m/z)(m/z)的計(jì)算值：[M+Na]+2648.9，實(shí)測(cè)值：2648.5。59-2硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將利用上述59-1中記載的方法獲得的化合物m(14.2mg，5.40μmol)與肽1(15.0mg，4.53μmol)溶解在33mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，1.3mL)中，在室溫下反應(yīng)30分鐘。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％乙酸(AcOH)水溶液，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝86:14→82:18，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(135)所表示的糖肽135(序列編號(hào)139)(13.4mg，2.29μmol，產(chǎn)率51％)。ESI-MS:C243H386N54O104S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1465.1、[M+5H]5+1172.2、[M+6H]6+977.0，實(shí)測(cè)值：1464.9、1172.1、977.1。[化學(xué)式165]59-3Boc基的脫保護(hù)將利用上述59-2中記載的方法獲得的糖肽135(13.4mg，2.29μmol)溶解在95％TFA水溶液(458μL)中，在室溫下振蕩5分鐘。添加50mM乙酸銨水溶液(pH值為6.8，33mL)之后，使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝73:27→65:35，10分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(136)所表示的糖肽136(序列編號(hào)140)(12.7mg，98μmol，產(chǎn)率98％)。[化學(xué)式166]ESI-MS:C233H370N54O100S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1415.1、[M+5H]5+1132.2、[M+6H]6+943.7、[M+7H]7+809.0，實(shí)測(cè)值：1414.9、1132.1、943.6、808.9。59-4Acm基的脫保護(hù)向利用上述59-3中記載的方法獲得的糖肽136(12.7mg，2.25μmol)中添加乙酸銀(I)(9.2mg，55μmol)的水溶液(0.9mL)，在室溫下反應(yīng)30分鐘。然后，添加溶解在200mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，0.9mL)的DTT(21.2mg，137μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(225μL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝73:27→60:40，13分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，而獲得下述式(136)所表示的糖肽137(序列編號(hào)141)(5.2mg，0.94μmol，產(chǎn)率42％)。[化學(xué)式167]ESI-MS:C227H360N52O98S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1379.5、[M+5H]5+1103.8、[M+6H]6+920.0、[M+7H]7+788.7，實(shí)測(cè)值：1379.4、1103.7、919.9、788.6。59-5雙硫鍵的形成將利用上述59-4中記載的方法獲得的糖肽137(5.2mg，0.94μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，1.9mL)中，在室溫下反應(yīng)2天。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝70:30→65:35，13分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得包含下述式(138)所表示的化合物(S1C(disialo(aminoethylamide))-SRIF28)(序列編號(hào)142)的級(jí)分。[化學(xué)式168]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝92:8→85:1514分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)該級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步純化，以獲得S1C(disialo(aminoethylamide))-SRIF28(3.8mg，0.69μmol，產(chǎn)率73％)。ESI-MS:C227H358N52O98S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1838.3、[M+4H]4+1379.0、[M+5H]5+1103.4、[M+6H]6+919.6、[M+7H]7+788.4，實(shí)測(cè)值：1838.0、1378.5、1103.2、919.5、788.2。實(shí)施例60S1C(disialo(amide))-SRIF28的合成60-1經(jīng)溴乙酰胺化的二唾液酸糖鏈衍生物的合成向化合物k(大?；瘜W(xué)株式會(huì)社制造)(152mg，68.6μmol)中依次添加DMF(1.9mL)、溴化鋰(357mg，4.12mmol)、2-氯苯乙酮(273mg，1.37mmol)，在37℃下反應(yīng)。10小時(shí)后，添加水(19mL)并通過(guò)過(guò)濾將析出物除去。向?yàn)V液中添加25％銨水(5mL)，在室溫下反應(yīng)18小時(shí)之后，添加100mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，80mL)進(jìn)行中和。使用HPLC[管柱：YMCHydrosphereC18(5μm)，φ20×250mm，流速：8.0mL/分鐘，展開(kāi)劑0.1％TFA水：乙腈＝98:2→92:8，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)溶液進(jìn)行純化并進(jìn)行冷凍干燥，以獲得下述式(n)所表示的化合物n(60.9mg，27.4μmol，產(chǎn)率40％)。MALDI-MS:C84H140N8O60的(m/z)的計(jì)算值：[M+Na]+2243.8，實(shí)測(cè)值：2243.6。[化學(xué)式169]將所獲得的中間體n(37.3mg，16.8μmol)與碳酸氫銨(13.3mg，168μmol)溶解在水(0.37mL)中，在室溫下反應(yīng)7天。冷凍干燥后，向所獲得的冷凍干燥物中依次添加水(0.37mL)、DCC(17.3mg，84μmol)、溶解在DMF(0.37mL)中的溴乙酸(11.7mg，84μmol)。使用HPLC[管柱：YMCHydrosphereC18(5μm)，φ20×250mm，流速：8.0mL/分鐘，展開(kāi)劑0.1％TFA水：乙腈＝98:2→92:8，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)冰浴冷卻下反應(yīng)1小時(shí)后的溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(o)所表示的化合物o(經(jīng)溴乙酰胺化的二唾液酸糖鏈衍生物：29.0mg，12.4μmol，產(chǎn)率74％)。[化學(xué)式170]MALDI-MS:C86H142BrN9O60的(m/z)的計(jì)算值：[M+Na]+2362.7，實(shí)測(cè)值：2362.5。60-2S1C(disialo(amide))-SRIF28的合成使用利用上述60-1中記載的方法獲得的化合物o代替化合物a，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(139)所表示的化合物(S1C(disialo(amide))-SRIF28)(序列編號(hào)143)。[化學(xué)式171]實(shí)施例61S1C(disialo(Bn))-SRIF28之合成使用化合物g代替化合物a，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(140)所表示的化合物(S1C(disialo(Bn))-SRIF28)(序列編號(hào)144)。[化學(xué)式172]實(shí)施例62S1C(disialo(hexadecylamide))-SRIF28的合成62-1經(jīng)溴乙酰胺化的二唾液酸糖鏈衍生物的合成向化合物k(大?；瘜W(xué)株式會(huì)社制造)(140mg，63.0μmol)中添加水(1.5mL)、甲醇(1.5mL)、十六烷基胺(300mg，126μmol)，在室溫下攪拌1小時(shí)。冷凍干燥后，向所獲得的冷凍干燥物中添加DMF(5mL)、HATU(239mg，630μmol)、和DIPEA(110μL，630μmol)，在37℃下反應(yīng)。18小時(shí)后，向溶液中添加二乙醚(100mL)，并過(guò)濾回收所析出的沉淀物。將該沉淀物溶解在DMF(5mL)中，使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：8.0mL/分鐘，展開(kāi)劑水：乙腈＝40:60→10:90，30分鐘，線性梯度洗脫]進(jìn)行純化，以獲得下述式(p)所表示的化合物p(71.1mg，26.6μmol，產(chǎn)率42％)。[化學(xué)式173]MALDI-MS:C116H204N8O60的(m/z)的計(jì)算值：[M+Na]+2692.3，實(shí)測(cè)值：2691.9。將所獲得的化合物p(71.7mg，26.6μmol)與碳酸氫銨(21.8mg，266μmol)溶解在水(0.7mL)和甲醇(0.7mL)中，在室溫下反應(yīng)。7天后，進(jìn)行冷凍干燥，向所獲得的冷凍干燥物中依次添加水(0.7mL)、甲醇(0.7mL)、DCC(27.4mg，133μmol)、溶解在DMF(0.7mL)中的溴乙酸(18.5mg，133μmol)。在冰浴冷卻下反應(yīng)1小時(shí)后，使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：8.0mL/分鐘，展開(kāi)劑水：乙腈＝40:60→10:90，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)溶液進(jìn)行純化以獲得下述式(q)所表示的化合物q(經(jīng)溴乙酰胺化的二唾液酸糖鏈：24.9mg，8.9μmol，產(chǎn)率33％)。[化學(xué)式174]MALDI-MS:C118H206BrN9O60的(m/z)的計(jì)算值：[M+Na]+2811.2，實(shí)測(cè)值：2811.0。62-2硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將肽1(10.4mg，3.14μmol)溶解在包含30μMTCEP的0.5M磷酸緩沖液(pH值為7.4，62μL)中。向該溶液中添加利用上述62-1中記載的方法獲得的化合物q(79.4mg，28.5μmol)的DMSO(3.7mL)溶液，在室溫下反應(yīng)20分鐘。使用HPLC[管柱：SHISEIDOProteonavi(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝50:50→22:78，14分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(141)所表示的糖肽141(序列編號(hào)145)(6.4mg，1.1μmol，產(chǎn)率35％)。[化學(xué)式175]ESI-MS:C261H424N52O100S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+2007.2、[M+4H]4+1505.7、[M+5H]5+1204.7、[M+6H]6+1004.1，實(shí)測(cè)值：2007.4、1505.5、1204.8、1004.0。62-3Acm基的脫保護(hù)向利用上述62-2中記載的方法獲得的糖肽141(6.4mg，1.1μmol)中添加乙酸銀(I)(3.8mg，23μmol)的水溶液(0.8mL)，在室溫下反應(yīng)40分鐘。然后，添加溶解在200mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，377μL)中的DTT(8.8mg，57μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(106μL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOProteonavi(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝48:52→38:62，3分鐘，然后38:62→30:70，8分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(142)所表示的糖肽142(序列編號(hào)146)(3.2mg，0.54μmol，產(chǎn)率49％)。[化學(xué)式176]ESI-MS:C255H414N50O98S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1959.9、[M+4H]4+1470.1、[M+5H]5+1176.3、[M+6H]6+980.4，實(shí)測(cè)值：1959.6、1469.9、1176.1、980.5。62-3雙硫鍵的形成將利用上述62-2中記載的方法獲得的糖肽142(3.2mg，0.54μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，1.1mL)中，在室溫下反應(yīng)2天。使用HPLC[管柱：SHISEIDOProteonavi(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝48:52→38:62，3分鐘，然后38:62→30:70，8分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(143)所表示的化合物(S1C(disialo(hexadecylamide))-SRIF28)(序列編號(hào)147)(2.8mg，0.48μmol，產(chǎn)率89％)。[化學(xué)式177]ESI-MS:C255H412N50O98S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1959.2、[M+4H]4+1469.6、[M+5H]5+1175.9、[M+6H]6+980.1，實(shí)測(cè)值：1958.9、1469.4、1175.7、979.9。實(shí)施例63S1-2C(disialo(amide))-SRIF28的合成使用化合物o代替化合物c，除此以外，以與實(shí)施例28相同的方式合成下述式(144)所表示的化合物(S1-2C(disialo(amide))-SRIF28)(序列編號(hào)148)。[化學(xué)式178]實(shí)施例64S1-2C(disialo(Bn))-SRIF28的合成使用化合物g代替化合物c，除此以外，以與實(shí)施例28相同的方式合成下述式(145)所表示的化合物(S1-2C(disialo(Bn))-SRIF28)(序列編號(hào)149)。[化學(xué)式179]實(shí)施例65S1C(Asn(disialo))-SRIF28的合成使用下述式(r)所表示的化合物r(經(jīng)溴乙?；母郊犹擎湹腁sn：大?；瘜W(xué)株式會(huì)社制造)代替化合物a，除此以外，以與實(shí)施例1相同的方式合成下述式(146)所表示的化合物(S1C(Asn(disialo))-SRIF28)(序列編號(hào)150)。[化學(xué)式180][化學(xué)式181]實(shí)施例66S1N(disialo)·N19C(diMan)-SRIF28的合成66-1糖肽的固相合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加Fmoc-Cys(Trt)-OH(72.5mg，120μmol)與DIPEA(104.6μL，600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷和DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法合成處于結(jié)合至樹(shù)脂的狀態(tài)的經(jīng)保護(hù)的下述式(147)所表示的肽147(序列編號(hào)151)?？s合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。[化學(xué)式182]其次，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，將化合物d(141.0mg，51.5μmol)、DMSO-DMF(1/1，v/v，1.1mL)溶液、TBTU(21.2mg，66.0μmol)、和DIPEA(17.2μL，98.7μmol)依次添加至樹(shù)脂中，在室溫下振蕩4小時(shí)而使之縮合。利用DMF洗凈后，重復(fù)1次該縮合操作。利用DMF和二氯甲烷對(duì)樹(shù)脂進(jìn)行洗凈后，用DMF中的20％的哌啶振蕩20分鐘而使Fmoc基脫保護(hù)并利用DMF對(duì)樹(shù)脂進(jìn)行洗凈，以合成下述式(148)所表示的處于結(jié)合至樹(shù)脂的狀態(tài)的經(jīng)保護(hù)的肽148(序列編號(hào)152)。[化學(xué)式183]利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，A:B＝70:30]對(duì)該粗肽進(jìn)行純化，以獲得下述式(149)所表示的糖肽149(序列編號(hào)153)(5.8mg，1.1μmol)。[化學(xué)式184]ESI-MS:C241H367N49O101S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1424.8、[M+5H]5+1140.0，實(shí)測(cè)值：1424.6、1139.9。66-2硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將利用上述66-1中記載的方法獲得的糖肽149(10.8mg，1.90μmol)與化合物f(5.3mg，5.1μmol)溶解在包含141μMTCEP的100mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，0.8mL)，在室溫下反應(yīng)24小時(shí)。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，A:B＝75:25→60:40，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(150)所表示的糖肽150(序列編號(hào)154)(4.9mg，0.74μmol，產(chǎn)率39％)。[化學(xué)式185]ESI-MS:C277H426N52O127S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+2216.0、[M+4H]4+1662.2、[M+5H]5+1330.0，實(shí)測(cè)值：2215.6、1661.9、1330.1。66-3Acm基的脫保護(hù)向利用上述66-2中記載的方法獲得的糖肽150(4.9mg，0.74μmol)中添加乙酸銀(I)(1.5mg，9.0μmol)的水溶液(148μL)，在室溫下反應(yīng)1.5小時(shí)。添加溶解在200mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，145μL)中的DTT(3.5mg，23μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(37μL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝74:26→64:36，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(151)所表示的糖肽151(序列編號(hào)155)(3.7mg，0.57μmol，產(chǎn)率77％)。[化學(xué)式186]ESI-MS:C271H416N50O125S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+2168.6、[M+4H]4+1626.7、[M+5H]5+1301.5，實(shí)測(cè)值：2168.6、1626.4、1301.3。66-4雙硫鍵的形成將利用上述66-3中記載的方法獲得的糖肽151(3.7mg，0.54μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，1.4mL)中，在室溫下反應(yīng)31小時(shí)。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝75:25→60:40，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(152)所表示的糖肽152(序列編號(hào)156)(2.9mg，0.45μmol，產(chǎn)率78％)。[化學(xué)式187]ESI-MS:C271H414N50O125S4的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+2167.9、[M+4H]4+1626.2、[M+5H]5+1301.1，實(shí)測(cè)值：2167.9、1626.0、1301.2。66-5芐基的脫保護(hù)將利用上述66-4中記載的方法獲得的糖肽152(2.9mg，0.45μmol)溶解在50mM氫氧化鈉水溶液(13.6mL)中，在0℃下反應(yīng)1小時(shí)。添加200mM乙酸水溶液(3.4mL)，使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝75:25→60:40，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)混合溶液進(jìn)行純化，以獲得包含下述式153所表示的化合物(S1N(disialo)·N19C(diMan)-SRIF28)(序列編號(hào)157)的級(jí)分。[化學(xué)式188]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ4.6×250mm，流速：0.7mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝95:5→85:15，2分鐘，然后85:15→65:35，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)該級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步純化，以獲得S1N(disialo)·N19C(diMan)-SRIF28(1.6mg，0.25μmol，產(chǎn)率57％)。ESI-MSC257H402N50O125S4的計(jì)算值：[M+3H]3+2107.8、[M+4H]4+1581.1、[M+5H]5+1265.1，實(shí)測(cè)值：2107.9、1580.9、1265.1。實(shí)施例67C(disialo(aminoethylamide))·S1C(disialo)-SRIF28的合成67-1肽的合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加Fmoc-Cys(Acm)-OH(49.7mg，120μmol)與DIPEA(104.5μL，600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷和DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法合成處于結(jié)合至樹(shù)脂的狀態(tài)的經(jīng)保護(hù)的下述式(154)所表示的肽154(序列編號(hào)158)?？s合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。[化學(xué)式189]取樹(shù)脂的一部分(50μmol)，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀的形式獲得粗肽。利用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝73:27→63:37，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽進(jìn)行純化，以獲得下述式(155)所表示的肽155(序列編號(hào)159)(30.4mg)。[化學(xué)式190]ESI-MS:C150H232N44O41S6的(m/z)(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1167.7、[M+4H]4+876.0，實(shí)測(cè)值：1167.5、875.9。67-2糖鏈衍生物中的Boc基的脫保護(hù)將化合物m(50.0mg，19.0μmol)溶解在TFA-H2O(95/5，v/v，2.5mL)溶液中，在室溫下進(jìn)行振蕩。10分鐘后，添加二乙醚(15mL)，對(duì)所析出的沉淀進(jìn)行離心分離(10,000xg，10分鐘)。將沉淀物溶解在水中進(jìn)行冷凍干燥，以獲得下述式(s)所表示的化合物s(經(jīng)溴乙酰胺化的二唾液酸糖鏈：46.0mg，18.9μmol，產(chǎn)率99％)。[化學(xué)式191]ESI-MS:C90H152BrN11O60的(m/z)的計(jì)算值：[M+2H]2+1215.1、[M+3H]3+810.4，實(shí)測(cè)值：1214.9、810.3。67-3硫醇的糖鏈修飾將利用上述67-1中記載的方法獲得的肽155(20.6mg，5.89μmol)與利用上述67-2中記載的方法獲得的化合物s(28.6mg，11.8μmol)溶解在33mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，1.8mL)中，在室溫下反應(yīng)30分鐘。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝74:26→64:36，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(156)所表示的糖肽156(序列編號(hào)160)(17.1mg，2.93μmol，產(chǎn)率50％)。[化學(xué)式192]ESI-MS:C240H383N55O101S6的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1950.1、[M+4H]4+1462.8、[M+5H]5+1170.5、[M+6H]6+975.6，實(shí)測(cè)值：1949.9、1462.6、1170.3、975.4。67-4StBu基的脫保護(hù)向上述67-3中記載的方法獲得的糖肽156(17.1mg，2.93μmol)中添加溶解在0.1M磷酸緩沖液(pH值為7.4，3.4mL)中的DTT(52.9mg，343μmol)，在室溫下反應(yīng)3小時(shí)。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝95:5→75:25，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(157)所表示的糖肽157(序列編號(hào)161)(8.6mg，1.5μmol，產(chǎn)率51％)。[化學(xué)式193]ESI-MS:C236H375N55O101S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1920.7、[M+4H]4+1440.8、[M+5H]5+1152.8、[M+6H]6+960.9、[M+7H]7+823.7，實(shí)測(cè)值：1920.5、1440.6、1152.7、960.6、823.6。67-5硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將利用上述67-4中記載的方法獲得的肽157(6.2mg，1.1μmol)與化合物a(3.8mg，1.6μmol)溶解在包含1.6mMDTT的0.36M磷酸緩沖液(pH值為7.4，339mL)中，在室溫下反應(yīng)2.5小時(shí)。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝90:10→75:25，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(158)所表示的糖肽158(序列編號(hào)162)(6.4mg，0.80μmol，產(chǎn)率73％)。[化學(xué)式194]ESI-MS:C322H514N62O163S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+2006.5、[M+5H]5+1605.4、[M+6H]6+1338.0，實(shí)測(cè)值：2006.6、1605.3、1338.0。67-6Acm基的脫保護(hù)向利用上述67-5中記載的方法獲得的糖肽158(8.2mg，1.0μmol)中添加乙酸銀(I)(2.1mg，13μmol)的水溶液(225μL)，在室溫下反應(yīng)1小時(shí)。添加溶解在100mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，204μL)中的DTT(4.8mg，31μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(51μL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝90:10→75:25，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(159)所表示的糖肽159(序列編號(hào)163)(5.5mg，0.70μmol，產(chǎn)率70％)。[化學(xué)式195]ESI-MS:C316H504N60O161S5的(m/z)的計(jì)算值：[M+4H]4+1971.0、[M+5H]5+1577.0、[M+6H]6+1314.3，實(shí)測(cè)值：1970.6、1576.8、1314.2。67-7雙硫鍵的形成將利用上述67-6中記載的方法獲得的糖肽159(5.4mg，0.69μmol)溶解在100mM在Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，1.7mL)中，在室溫下反應(yīng)一整夜。使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝75:25→65:35，30分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得包含下述式160所表示的化合物(C(disialo(aminoethylamide))·S1C(disialo)-SRIF28)(序列編號(hào)164)的級(jí)分。[化學(xué)式196]使用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝90:10→75:25，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)該級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步純化，以獲得C(disialo(aminoethylamide))·S1C(disialo)-SRIF28(3.1mg，0.40μmol，產(chǎn)率58％)。ESI-MS：C316H502N60O161S5的計(jì)算值：[M+4H]4+1970.5、[M+5H]5+1576.6、[M+6H]6+1314.0、[M+7H]7+1126.4、[M+8H]8+985.8、[M+9H]9+876.3，實(shí)測(cè)值：1970.3、1576.4、1313.9、1126.4、985.5、876.1。實(shí)施例68S1-4C(disialo)-SRIF28的合成68-1肽的合成取2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(100μmol)置于固相合成用管柱中，利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加Fmoc-Cys(Acm)-OH(49.7mg，120μmol)與DIPEA(104.5μL，600μmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液，振蕩1小時(shí)。利用二氯甲烷和DMF洗凈后，通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF洗凈后，使用Prelude(商標(biāo))肽合成機(jī)，以利用Fmoc法的肽固相合成法，合成下述式(161)所表示的處于結(jié)合至樹(shù)脂狀態(tài)的經(jīng)保護(hù)的肽161(序列編號(hào)165)?？s合反應(yīng)使用HCTU作為縮合劑在DMF中進(jìn)行。[化學(xué)式197]通過(guò)利用DMF中的20％的哌啶進(jìn)行處理而將Fmoc保護(hù)基除去。利用DMF和二氯甲烷洗凈后，添加TFA：水：三異丙基硅烷：乙二硫醇(＝90:2.5:5:2.5)，在室溫下振蕩3小時(shí)。將樹(shù)脂過(guò)濾除去，向?yàn)V液中添加經(jīng)冷卻的二乙醚，而以沉淀之形式獲得粗肽。利用HPLC[管柱：SHISEIDOCAPCELLPAKC18UG-120(5μm)，φ50×250mm，流速：43.7mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％TFA水，B:0.09％TFA/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝75:25→65:35，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)粗肽進(jìn)行純化，以獲得下述式(162)所表示的肽162(序列編號(hào)166)(127.2mg)。[化學(xué)式198]ESI-MS:C152H234N46O43S7的(m/z)的計(jì)算值：[M+3H]3+1207.1、[M+4H]4+905.6、[M+5H]5+724.6，實(shí)測(cè)值：1206.9、905.1、724.5。68-2硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)將利用上述68-1中記載的方法獲得的肽162(30.4mg，8.40μmol)與化合物a(128mg，54.7μmol)溶解在33mM磷酸緩沖液(pH值為7.4，2.5mL)中，在室溫下反應(yīng)一整夜。使用HPLC[管柱：SHISEIDOProteonavi(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝82:18→71:29，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(163)所表示的糖肽163(序列編號(hào)167)(30.9mg，2.44μmol，產(chǎn)率29％)。ESI-MS:C496H790N74O291S7的(m/z)的計(jì)算值：[M+6H]6+2112.7、[M+7H]7+1811.1，實(shí)測(cè)值：2112.8、1811.0。[化學(xué)式199]68-3Acm基的脫保護(hù)向利用上述68-2中記載的方法獲得的糖肽163(30.9mg，2.44μmol)中添加乙酸銀(I)(5.0mg，30μmol)的水溶液(0.98mL)，在室溫下反應(yīng)20分鐘。然后，添加溶解在200mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為7.4，0.98mL)中的DTT(11.8mg，76.5μmol)和100mM抗壞血酸水溶液(244μL)，迅速利用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用HPLC[管柱：SHISEIDOProteonavi(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:0.1％AcOH水，B:0.09％AcOH/10％水/90％乙腈，梯度A:B＝82:18→70:30，20分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)濾液進(jìn)行純化，以獲得下述式(164)所表示的糖肽164(序列編號(hào)168)(20.6mg，1.64μmol，產(chǎn)率67％)。[化學(xué)式200]ESI-MS:C490H780N72O289S7的(m/z)的計(jì)算值：[M+5H]5+2506.6、[M+6H]6+2089.0、[M+7H]7+1790.7，實(shí)測(cè)值：2506.5、2088.8、1790.4。68-4雙硫鍵的形成將利用上述68-3中記載的方法獲得的糖肽164(20.6mg，1.64μmol)溶解在100mM的Tris-鹽酸緩沖液(pH值為8.0)-DMSO(1/1，v/v，2.1mL)中，在室溫下反應(yīng)2天。然后，使用HPLC[管柱：SHISEIDOProteonavi(5μm)，φ20×250mm，流速：7.0mL/分鐘，展開(kāi)劑A:10mM乙酸銨水溶液，B:10mM乙酸銨-乙腈(1/9，v/v)，梯度A:B＝75:25→72:28，15分鐘，線性梯度洗脫]對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行純化，以獲得下述式(165)所表示的S1-4C(disialo)-SRIF28(序列編號(hào)169)(11.6mg，0.93μmol，產(chǎn)率57％)。[化學(xué)式201]ESI-MS:C490H778N72O289S7的(m/z)的計(jì)算值：[M+5H]5+2506.2、[M+6H]6+2088.7、[M+7H]7+1790.5，實(shí)測(cè)值：2506.1、2088.6、1790.4。表1-1至表1-7中示出利用實(shí)施例1～68中記載的方法獲得的附加糖鏈的SRIF肽的MS圖譜數(shù)據(jù)(ESI-MS)。分子量通過(guò)使用MassLynx4.1版(Waters公司制造)，進(jìn)行多價(jià)蛋白質(zhì)譜分析的去卷積(deconvolution)而獲得。[表1]表1-1[表2]表1-2[表3]表1-3[表4]表1-4[表5]表1-5[表6]表1-6[表7]表1-7實(shí)施例69-1受體結(jié)合親和性的計(jì)算利用下述的方法進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)，以計(jì)算受體結(jié)合親和性。競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)中所使用的試劑與其正式化學(xué)名如下所述。HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonicacid，4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)、BSA(bovineserumalbumin，牛血清白蛋白)。競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)委托RicercaBiosciences公司進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析。將所使用之受體亞型及受體膜標(biāo)本示于表2。各結(jié)合實(shí)驗(yàn)中共同地使用[125I]Tyr11-生長(zhǎng)抑素14(Tyr11-SRIF14)作為標(biāo)記配體，使用生長(zhǎng)抑素-14(SRIF14)作為非標(biāo)記配體，使用包含5mMMgCl2、1mMCaCl2、0.1％BSA且pH值為7.4的25mMHEPES作為緩沖液。試驗(yàn)物質(zhì)以0.01nM、0.1nM、1nM、10nM、100nM、或1000nM的濃度使用，與膜樣品混合而制成反應(yīng)液。此外，將反應(yīng)液中所添加的標(biāo)記配體和非標(biāo)記配體的濃度示于表2。關(guān)于反應(yīng)液的培養(yǎng)條件，對(duì)于SSTR2，在25℃下培養(yǎng)4小時(shí)，對(duì)于SSTR1、SSTR3、SSTR4、SSTR5，在25℃下培養(yǎng)2小時(shí)。各次實(shí)驗(yàn)分別使用SRIF14作為陽(yáng)性對(duì)照。數(shù)據(jù)分析使用MathIQTM(IDBusinessSolutions公司，UK)，利用非線性最小二乘法，基于結(jié)合抑制率的數(shù)值數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)而求出50％抑制濃度(IC50值)。結(jié)合抑制常數(shù)(Ki值)通過(guò)Cheng,Y等人的方法(BiochemPharmacol，22,3099-3108，1973)而計(jì)算出。[表8]表2將實(shí)施結(jié)合實(shí)驗(yàn)的化合物和結(jié)合實(shí)驗(yàn)的結(jié)果示于表3A。此外，以相同的方式對(duì)作為對(duì)照化合物的奧曲肽、SRIF14和SRIF28進(jìn)行評(píng)價(jià)。而且，關(guān)于奧曲肽，由于最高濃度是100nM，在SSTR1、和SSTR4下無(wú)法算出IC50值，因此顯示為>100nM。而且，圖1A和圖1B表示與表3A中的化合物名稱(chēng)對(duì)應(yīng)的附加糖鏈的肽(糖鏈附加體)的結(jié)構(gòu)的實(shí)例。[表9]表3A作為對(duì)照的奧曲肽與SSTR2、SSTR3、SSTR5的各受體結(jié)合，SRIF14和SRIF28與全部SSTR結(jié)合。如表3A所示，本發(fā)明的化合物與全部SSTR牢固地結(jié)合。陽(yáng)性對(duì)照的SRIF14對(duì)SSTR1的結(jié)合親和性以Ki值計(jì)為0.362nM，具有1條糖鏈的化合物為0.704～26.7nM，相對(duì)于此，本發(fā)明的具有2條糖鏈的化合物(實(shí)施例20～23、和28的化合物)為0.712～147nM，表現(xiàn)出同樣優(yōu)異的結(jié)合親和性。此外，本發(fā)明的具有3條糖鏈的化合物(實(shí)施例24、25、和29的化合物)也具有優(yōu)異的結(jié)合親和性，顯示為3.49nM、16.9nM、和57.3nM。此外，由于其血中半衰期延長(zhǎng)而生物利用度(生物利用率：BA)也大幅度增大，因此即便在結(jié)合親和性的Ki值稍高的情況時(shí)，也可以在活體內(nèi)對(duì)受體有效地發(fā)揮作用。同樣地，SRIF14對(duì)SSTR2、SSTR3和SSTR4的結(jié)合親和性以Ki值計(jì)分別為0.00755nM、0.0450nM、0.273nM，相對(duì)于此，本發(fā)明的具有2條以上糖鏈的化合物分別為0.0336～3.33nM、0.0604～3.77nM、0.702～40.5nM，均表現(xiàn)出優(yōu)異的結(jié)合親和性。此外，SRIF14對(duì)SSTR5的結(jié)合親和性為0.326nM，相對(duì)于此，本發(fā)明的具有2條以上糖鏈的化合物表現(xiàn)出高達(dá)8.33nM的結(jié)合親和性。由此可知，實(shí)施例20～23、和28為對(duì)SSTR1～SSTR5的全部受體具有親和性的2條糖鏈修飾體，實(shí)施例24、25、和29為對(duì)SSTR1～SSTR5的全部受體具有親和性的3條糖鏈修飾體。實(shí)施例69-2受體結(jié)合親和性的計(jì)算-2對(duì)表3B所示的各化合物，利用實(shí)施例69-1中記載的方法進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)，計(jì)算出受體結(jié)合親和性。此外，以相同的方式對(duì)作為對(duì)照化合物的SRIF14和SRIF28進(jìn)行評(píng)價(jià)。將結(jié)合實(shí)驗(yàn)的結(jié)果示于表3B。而且，圖1C和圖1D表示與表3B中的化合物名稱(chēng)對(duì)應(yīng)的附加糖鏈的肽的結(jié)構(gòu)的實(shí)例。[表10]表3B如表3B所示，作為對(duì)照的SRIF14和SRIF28與全部受體SSTR1～SSTR5結(jié)合。此處，由于試驗(yàn)實(shí)施次數(shù)等與實(shí)施例69-1不同，所以SRIF14對(duì)各受體之Ki值不同，為2.5倍至13.2倍的較高的數(shù)值。實(shí)施例1、7、8、9、26、27、32、33、34、35、36、37、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67和68的化合物對(duì)SSTR1的Ki值為1.46～100nM，同樣對(duì)SSTR2的Ki值為0.0536～6.58nM，對(duì)SSTR3的Ki值為0.160～13.8nM，對(duì)SSTR4的Ki值為1.39～172nM，對(duì)SSTR5的Ki值為0.310～95.0nM，對(duì)全部受體均表現(xiàn)出較高的結(jié)合親和性。實(shí)施例12的化合物對(duì)SSTR2和SSTR5的Ki值為SRIF14的280～1600倍，但對(duì)SSTR1、SSTR3和SSTR4為17.9、7.44、24.1nM的Ki值，可以認(rèn)為保持了結(jié)合親和性。實(shí)施例40的化合物對(duì)SSTR1、SSTR2、SSTR3的Ki值為SRIF14的310～5300倍，親和性顯著降低，但對(duì)SSTR4和SSTR5為110、33.0nM的Ki值，可以認(rèn)為保持了結(jié)合親和性。實(shí)施例51的化合物對(duì)SSTR2和SSTR4的Ki值為SRIF14的170倍和46倍以上，但對(duì)SSTR1、SSTR3、SSTR5分別為270nM、14.0nM、23.0nM的Ki值，可以認(rèn)為保持了結(jié)合親和性。實(shí)施例69-3使用受體表達(dá)細(xì)胞的激動(dòng)劑活性評(píng)價(jià)-1生長(zhǎng)抑素受體為G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)。SSTR1～SSTR5均經(jīng)由作為G蛋白的亞族的Gi/Go而抑制腺苷酸環(huán)化酶活性，從而使細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度降低。在本實(shí)驗(yàn)體系中，使用各生長(zhǎng)抑素受體表達(dá)細(xì)胞，來(lái)計(jì)算出試驗(yàn)物質(zhì)的cAMP產(chǎn)生抑制作用的IC50值，以對(duì)激動(dòng)劑活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。此外，以相同的方式對(duì)作為對(duì)照化合物的SRIF14、SRIF28進(jìn)行評(píng)價(jià)。本實(shí)驗(yàn)中所使用的試劑與其正式化學(xué)名如下所述。DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium，達(dá)爾伯克氏改良伊格爾氏培養(yǎng)基)、IBMX(3-isobutyl-1-methylxanthine，3-異丁基-1-甲基黃嘌呤)、HBSS(Hank'sBufferedSaltSolution，漢克氏平衡鹽緩沖溶)。對(duì)SSTR2～SSTR5的評(píng)價(jià)是在以下的條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。作為緩沖液，使用包含0.3％BSA、0.5mMIBMX的DMEM，以104cells/well(細(xì)胞/孔)接種表3C所示的受體表達(dá)細(xì)胞。試驗(yàn)物質(zhì)通過(guò)以0.00001nM、0.0001nM、0.001nM、0.01nM、0.1nM、1nM、10nM、100nM、或1000nM的濃度與10μM佛司可林(forskolin)混合而處理，在室溫下反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)后，利用0.2N的HCl使細(xì)胞溶解，使用Cayman公司的cyclicAMPEIA試劑盒(Cayman，582002)測(cè)定積累在細(xì)胞內(nèi)的cAMP量。對(duì)SSTR1的評(píng)價(jià)系委托Cerep公司進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。作為緩沖液，使用包含20mMHEPES(pH值為7.4)、500μMIBMX的HBSS，以104細(xì)胞/孔接種SSTR1受體表達(dá)細(xì)胞。試驗(yàn)物質(zhì)以0.001nM、0.01nM、0.1nM、1nM、10nM、或100nM的濃度與1μMNKH477混合而處理，在37℃下反應(yīng)20分鐘。反應(yīng)后，使用Cisbio公司的cAMPdynamic2試劑盒(cisbio，62AM4PE)測(cè)定積累在細(xì)胞內(nèi)的cAMP量。[表11]表3C將使用實(shí)施例1、18、27、28、59和60的化合物作為糖鏈附加體時(shí)的激動(dòng)劑活性評(píng)價(jià)試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果(IC50(nM))示于表3D和圖1E。關(guān)于對(duì)照化合物SRIF14和SRIF28的IC50，對(duì)SSTR1為0.83～0.89nM，且對(duì)SSTR2、SSTR3、SSTR4、SSTR5分別為0.0076～0.073nM、0.029～0.21nM、0.015～0.074nM、0.066～0.12nM。糖鏈附加體化合物對(duì)SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4、SSTR5的激動(dòng)劑活性的IC50為1.0～2.4nM、0.041～0.10nM、0.12～0.30nM、0.039～0.085nM、0.043～0.081nM，對(duì)SSTR1～SSTR5的全部受體均表現(xiàn)出優(yōu)異的激動(dòng)劑活性。根據(jù)實(shí)施例69-1和實(shí)施例69-2所示的結(jié)果，可以明確這些化合物具有受體結(jié)合能力，且可以明確這些化合物通過(guò)與受體結(jié)合而發(fā)揮激動(dòng)劑活性。[表12]表3D實(shí)施例69-4使用受體表達(dá)細(xì)胞的激動(dòng)劑活性評(píng)價(jià)-2使用表3E中記載的各化合物作為糖鏈附加體，以與實(shí)施例69-3相同的方式實(shí)施激動(dòng)劑活性評(píng)價(jià)試驗(yàn)。將實(shí)驗(yàn)結(jié)果示于表3E。而且，在表3E中，顯示“-(連字符)”的欄是表示未實(shí)施試驗(yàn)。[表13]表3E(-：未實(shí)施)實(shí)施例SSTR1SSTR2SSTR3SSTR4SSTR5-SRIF140.830.00760.0290.0150.12-SRIF28O.890.0730.210.0740.0664E12C(disialo)-SRIF282.3----10N19C(disialo)-SRIF2822----15S1C(disialo)-D-Trp22-SRIF283.5----17C(disialo)-SRlF14-0.0290.180.100.2319C(disialo)-C12linker-SRIF14---0.11-20S1—2C(disialo)-SRIF28--0.550.140.2221S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF28-0.0720.370.0410.09023N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28-0.0960.290.0910.1324S1-3C(disialo)-SRIF287.50.190.790.360.9725S1C(disialo)-N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28-1.42.4O.161.126S1C(monosialo)-SRIF281.50.0590.150.0460.06229S1-3C(asialo)-SRIF28-0.19-0.10-31S1N(disialo)-SRIF282.3----32S1C(disialo)·N19C(GlcNAc)-SRIF28-0.0800.0390.0330.08834S1-5C(disialo)-SRIF28180.812.00.27-42C(disialo)-K-SRIF14-0.0190.100.059-44S1C(disialo)-SRIF28-amide1.7----47C(disialo)-PEG2linker-SRIF14-0.0340.150.0660.18502C(disialo)-R-K-SRIF14-0.150.551.1-513C(disialo)-R-K-SRlF14-1.43.81.6-52S1C(diGlcNAc)-SRIF281.20.0450.140.0500.03353S1C(diMan)-SRIF281.20.0350.110.0430.03754N19C(diMan)-SRIF28---0.11-55S1C(GlcNAc)-SRIF281.40.0400.140.0490.03156N19C(GlcNAc)-SRIF28---0.092-57S1C(trisialo)-SRlF284.90.11O.380.0920.09658S1C(tetrasialo)-SRIF282.80.130.250.0810.1161S1C(disialo(Bn))-SRIF281.4----62SlC(disialo(hexadecylamide))-SRIF281.3----65S1C(Asn(disialo))-SRIF282.6--0.13-67C(disialo(aminoethylamide))·S1C(disialo)-SRIF28-0.0390.170.0470.034于表3E中，糖鏈附加體的化合物對(duì)SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4、SSTR5的激動(dòng)劑活性的IC50分別為1.2～22nM、0.019～1.4nM、0.039～3.8nM、0.033～1.6nM、0.031～1.1nM，對(duì)SSTR1～SSTR5的受體均表現(xiàn)出激動(dòng)劑活性。根據(jù)實(shí)施例69-1和實(shí)施例69-2所示的結(jié)果，可明確這些化合物具有受體結(jié)合親和性，這些化合物通過(guò)與受體結(jié)合而發(fā)揮激動(dòng)劑活性。實(shí)施例70使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)1為了確認(rèn)本發(fā)明的附加糖鏈的多肽(糖鏈附加體)與未附加糖鏈的SRIF28相比，具有諸如藥物血漿濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)、血中半衰期(t1/2)、平均滯留時(shí)間(MRT)、和生物利用度等改善的藥物動(dòng)力學(xué)特性，而使用大鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)施用和皮下施用的藥物動(dòng)力學(xué)分析。70-1施用液和試劑的制備將糖鏈附加體(S1C(disialo)-SRIF28)溶解于日本藥典生理鹽水(大冢制藥工廠公司制造)中制備40μM溶液，作為施用液。PBS溶液通過(guò)將1片磷酸鹽緩沖生理鹽水(Phosphatebufferedsaline)(Sigma公司制造的P4417)溶解在200mL超純水中而制備。EDTA-PBS通過(guò)利用PBS將EDTA-2Na(和光純藥工業(yè)公司制造)以成為2mg/mL的方式溶解而制備。含有抑肽酶的EDTA-PBS液通過(guò)利用EDTA-PBS將抑肽酶(和光純藥工業(yè)公司制造的010-11834)以成為0.142mg/mL的方式溶解而制備，并用作對(duì)所采集的血液的抗凝血?jiǎng)?0-2血漿樣品的制備將上述70-1中所制備的施用液，在未禁食狀態(tài)下以1mL/kg的用量使用注射筒和26G注射針(均為T(mén)ERUMO公司制造)施用至雄性的SD系大鼠(Crl:CD(SD)，CharlesRiverJapan股份有限公司，6周齡，n＝3，體重161.3～239.3g)的尾靜脈或背部皮下(以S1C(disialo)-SRIF28計(jì)算為40nmol/kg)。在施用前、施用后2分鐘、5分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)后，自大鼠頸部靜脈采血。將所采集的血液0.2mL與上述70-1中所制備的含有抑肽酶的EDTA-PBS液0.2mL迅速混合，在冰上放置30分鐘以上。離心分離(1,870×g，4℃，10分鐘)后，采集上清液250μL，作為血漿樣品。作為空白血漿，使用以相同的方式對(duì)自未經(jīng)處理的大鼠頸部靜脈所采集的血液進(jìn)行處理而獲得的血漿。血漿樣品在用于測(cè)定之前冷凍保存。而且，所用的吸頭(tip)和試管是BMEquipment公司的低吸附性產(chǎn)品。70-3血漿濃度測(cè)定使用PhoenixPharmaceuticals公司的生長(zhǎng)抑素EIA試劑盒(PhoenixPharmaceuticalsInc，EK-060-03)對(duì)上述70-2中獲得的血漿樣品中的S1C(disialo)-SRIF28的血漿濃度進(jìn)行測(cè)定。使用EIA試劑盒附帶的分析緩沖液，將血漿樣品稀釋5倍、20倍、100倍、400倍、1600倍，而制成測(cè)定樣品。用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)液以如下方式制備：首先，使用EIA試劑盒附帶的分析緩沖液，將上述70-2中獲得的以空白血漿與血漿樣品同樣地方式稀釋?zhuān)瞥蓸?biāo)準(zhǔn)液制備用的分析緩沖液(例如，當(dāng)將血漿樣品稀釋100倍的情況時(shí)，向EIA試劑盒附帶的分析緩沖液中添加1/100量的空白血漿而制成標(biāo)準(zhǔn)液制備用分析緩沖液)。利用PBS溶液對(duì)S1C(disialo)-SRIF28進(jìn)行稀釋而制備100μM溶液，由100μM溶液制備2μM溶液。使用標(biāo)準(zhǔn)液制備用分析緩沖液，將所獲得的2μMS1C(disialo)-SRIF28溶液分階段地稀釋?zhuān)苽?0nM、10nM、2nM、0.4nM、0.08nM、0.04nM的標(biāo)準(zhǔn)液。通過(guò)使所獲得的結(jié)果乘以稀釋率，進(jìn)一步乘以用作抗凝血?jiǎng)┨幚淼暮幸蛛拿傅腅DTA-PBS液的稀釋率2，而算出血漿濃度。作為對(duì)照，使用未附加糖鏈的SRIF28代替糖鏈附加體進(jìn)行相同的操作。將所獲得的血漿中的S1C(disialo)-SRIF28濃度變化示于圖2。70-4藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算根據(jù)所獲得的S1C(disialo)-SRIF28濃度變化，使用矩分析方法和梯形法則計(jì)算出AUC。此外，利用外推法求出靜脈內(nèi)施用時(shí)的預(yù)測(cè)的初期濃度(C0)，進(jìn)一步根據(jù)t1/2、MRT、和皮下施用時(shí)的實(shí)測(cè)值求出最高血漿濃度(Cmax)。將所獲得的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)示于表4。[表14]表4(t1/2min,AUC：min.nM,MRT：min,C0：nM,Cmax：nM)如根據(jù)圖2和表4所示的結(jié)果所表明的，S1C(disialo)-SRIF28與未附加糖鏈的SRIF28相比，t1/2和MRT顯著延長(zhǎng)，此外，確認(rèn)到AUC和Cmax的增加?？梢哉J(rèn)為這些情況是由于通過(guò)形成糖鏈附加體而對(duì)血液中的分解活性的抗性增加?？梢悦鞔_的是糖鏈附加體與非糖鏈附加體相比，活體中的穩(wěn)定性提高。此外，可以認(rèn)為AUC和Cmax增加的主要原因是本發(fā)明的生物利用度提高，以及在這些活體中的穩(wěn)定性提高。實(shí)施例71使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)2使用S1C(disialo)-SRIF28、N5C(disialo)-SRIF28和S1C(disialo)·N5C-(disialo)-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。作為對(duì)照，使用未附加糖鏈的SRIF28代替糖鏈附加體。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖3。實(shí)施例72使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)3使用S1C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)·R13C(disialo)-SRIF28和S1C(disialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。作為對(duì)照，使用未附加糖鏈的SRIF28代替糖鏈附加體。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖4。實(shí)施例73使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)4使用S1C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)--SRIF28、S1-3C(disialo)-SRIF28、S1-5C(disialo)-SRIF28、和S1-10C(di-sialo)-SRIF28作為糖鏈修飾體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖5。實(shí)施例74使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)5使用S1C(disialo)-SRIF28、N5C(disialo)-SRIF28、A9C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF28、N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28、和S1C(disialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖6。實(shí)施例75使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)6使用S1C(disialo)-SRIF28、S1-2C(disialo)-SRIF28、和S1-3C(disialo)--SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖7。根據(jù)實(shí)施例71～75的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)中獲得的血漿中的化合物濃度變化，以與實(shí)施例70相同的方式算出各化合物的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。此外，使用所獲得的參數(shù)，根據(jù)以下的數(shù)學(xué)公式算出生物利用度。將結(jié)果示于表5A。BA(％)＝(AUC(sc)/Dose(sc))/(AUC(iv)/Dose(iv))AUC(sc)：皮下施用時(shí)的AUC(min·nM)Dose(sc)：皮下施用時(shí)的施用量(nmol/kg)AUC(iv)：靜脈內(nèi)施用時(shí)的AUC(min·nM)Dose(iv)：靜脈內(nèi)施用時(shí)的施用量(nmol/kg)[表15]表5A如根據(jù)表5A所示的結(jié)果所表明的，本發(fā)明的糖鏈附加體的生物利用度隨著修飾糖鏈的條數(shù)的增加而增加。即，非糖鏈附加體為5％，但附加1條糖鏈的附加糖鏈的多肽為37～60％，平均增加至50％。相對(duì)于此，有間隔地附加有2條糖鏈的附加糖鏈的多肽為77～85％，平均增加至81％，有間隔地附加有3條糖鏈的附加糖鏈的多肽增加至91％。此外，比較附加糖鏈的間隔較密的附加糖鏈的多肽發(fā)現(xiàn)，附加1條的增加了37％，相對(duì)于此，附加2條的增加了55％，附加3條的增加了69％，附加5條的增加了92％(實(shí)施例1、20、24、和34的化合物)。而且，對(duì)于附加有10條糖鏈的附加糖鏈的多肽，如圖5所示，因?yàn)闇y(cè)定時(shí)間內(nèi)維持血漿濃度的上升，所以無(wú)法測(cè)定AUC，因此無(wú)法算出生物利用度。根據(jù)這些結(jié)果，證明通過(guò)本發(fā)明的糖鏈修飾，生物利用度相對(duì)于未附加糖鏈的生長(zhǎng)抑素顯著提高，此外，與附加1條糖鏈的相比，通過(guò)附加2條以上的糖鏈可以獲得進(jìn)一步提高的生物利用度。皮下施用時(shí)生物利用度增加的主要原因存在各種藥物動(dòng)力學(xué)變動(dòng)因子。作為其中一個(gè)原因，可以考慮化合物的血中穩(wěn)定性、或向血中的(自施用部位的)轉(zhuǎn)移性。如表5A所示，可以確認(rèn)皮下施用時(shí)的AUC隨著修飾糖鏈條數(shù)的增加而增大(1條：2209min·nM，2條(有間隔)：3400min·nM，3條(有間隔)：4015min·nM)，該皮下施用時(shí)的AUC是用于推測(cè)皮下施用時(shí)的血中轉(zhuǎn)移性的指標(biāo)，因而推測(cè)血中轉(zhuǎn)移性的提高有助于生物利用度的增加。此外，隨著修飾糖鏈的條數(shù)增加，確認(rèn)到靜脈內(nèi)和皮下施用時(shí)的t1/2和MRT的延長(zhǎng)作用(例如靜脈內(nèi)施用時(shí)的t1/2:1條:19.0min、2條(有間隔)：27.2min，3條(有間隔)：39.8min)，推測(cè)血液中的穩(wěn)定性提高。另一方面，靜脈內(nèi)施用時(shí)的AUC并未與修飾糖鏈條數(shù)成比例的增大(1條：4453min·nM、2條(有間隔)：4198min·nM、3條(有間隔)：4402min·nM)，可以認(rèn)為因化合物的修飾糖鏈條數(shù)的增加而引起的血中穩(wěn)定性增加并不是有助于生物利用度的增加的唯一因素。關(guān)于皮下施用時(shí)的Cmax，與非糖鏈附加體相比，直至修飾糖鏈條數(shù)為2條為止均增加(0條：4.47nM、1條：30.5nM，2條(有間隔)：35.6nM)，但當(dāng)為3條(有間隔)(24.8nM)時(shí)反而減少。當(dāng)考慮自施用部位(本實(shí)施例中為皮下施用)的血中轉(zhuǎn)移時(shí)，作為AUC增加的主要原因，可以推測(cè)為迅速向血液中轉(zhuǎn)移、或者緩慢但持續(xù)向血液中轉(zhuǎn)移的兩種形式。前者具有避免在施用部位分解的優(yōu)點(diǎn)，但如果沒(méi)有穩(wěn)定性上的問(wèn)題，則推測(cè)后者的形式的血中轉(zhuǎn)移性更高。生物利用度較高的修飾有3條糖鏈的糖鏈附加題的Cmax減少的情況，可以認(rèn)為是顯示并非急遽而緩慢且持續(xù)的血中轉(zhuǎn)移性的結(jié)果。根據(jù)這情況，可以認(rèn)為本發(fā)明的修飾糖鏈條數(shù)的增加并不會(huì)引起血漿濃度急劇上升，而顯示出持續(xù)的血中轉(zhuǎn)移性(通常也可以稱(chēng)為吸收延遲效果)。如根據(jù)表5A所示的結(jié)果所表明的，作為修飾位置，在隔開(kāi)間隔是與較密時(shí)，t1/2和MRT并無(wú)顯著差異(例如靜脈內(nèi)施用時(shí)的t1/2是：2條(密)：28.8min，2條(有間隔)：27.2min，3條(密)：38.5min，3條(有間隔)：39.8min)。此外，關(guān)于AUC，在靜脈內(nèi)施用時(shí)，當(dāng)糖鏈修飾較密時(shí)AUC增大。即，在2條糖鏈的情況時(shí)，與隔開(kāi)間隔的化合物21、化合物22、化合物23的4029～4465min·nM相比，較密的化合物20為7306min·nM，在3條糖鏈的情況時(shí)，與隔開(kāi)間隔的化合物25的4402min·nM相比，較密的化合物24為5660min·nM。另一方面，糖鏈修飾位置隔開(kāi)間隔的與較密的相比，生物利用度提高。即，在2條糖鏈的情況時(shí)，與較密的化合物20的55％相比，隔開(kāi)間隔的化合物21、化合物22、化合物23為77～85％(平均值81％)，在3條糖鏈的情況時(shí)，與較密的化合物24的69％相比，隔開(kāi)間隔的化合物25為91％。根據(jù)這些情況，可以認(rèn)為作為本發(fā)明的進(jìn)行糖鏈修飾的位置，與較密地修飾多條相比，隔開(kāi)間隔地修飾多條的方式更有助于提高生物利用度。實(shí)施例76使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)7使用S1C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo(amide))-SRIF28、S1C(disialo-(aminoethylamide))-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖8。實(shí)施例77使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)8使用S1C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo(Bn))-SRIF28、S1C(disialo)--D-Trp22-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖9。實(shí)施例78使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)9使用S1C(disialo)-SRIF28、R13C(disialo)-SRIF28、K14C(disialo)-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖10。實(shí)施例79使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)10使用S1C(disialo)-SRIF28、E12C(disialo)-SRIF28、N19C(disialo)--SRIF28、29C(disialo)-SRIF28、S1C(monosialo)-SRIF28、S1C(asialo)-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖11。實(shí)施例80使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)11使用S1C(disialo)-SRIF28、K14C(disialo)-SRIF28、C(disialo)-SRIF14作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖12。實(shí)施例81使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)12使用C(disialo)-SRIF14、C(disialo)-C12linker-SRIF14、C(disialo)--PEGlinker-SRIF14作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖13。實(shí)施例82使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)13使用SRIF28、S1C(disialo)-SRIF28、S1C(asialo)-SRIF28、S1C(diGlcNAc)-SRIF28、S1C(diMan)-SRIF28、S1C(GlcNAc)-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖14。實(shí)施例83使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)14使用S1C(disialo)-SRIF28、S1C(tetrasialo)-SRIF28、S1C(tri-sialo)-SRIF28、S1C(Asn(disialo))-SRIF28、S1-2C(disialo)-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖15。實(shí)施例84使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)15使用SRIF28、S1C(disialo)-SRIF28、S1-2C(disialo)-SRIF28、S1-3C(disialo)-SRIF28、S1-4C(disialo)-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖16。實(shí)施例85使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)16使用SRIF14、C(disialo)-SRIF14、C(disialo)-K-SRIF14、C(disialo)-R-K--SRIF14、2C(disialo)-R-K-SRIF14、3C(disialo)-R-K-SRIF14作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖17。實(shí)施例86使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)17使用S1C(asialo)-SRIF28、S1-2C(asialo)-SRIF28、S1-3C(asialo)-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖18。實(shí)施例87使用大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)18使用S1C(disialo)-SRIF28、S1-2C(disialo)-SRIF28、S1-2C(asialo)--SRIF28、C(disialo(aminoethylamide)·S1C(disialo)-SRIF28、S1-2C(di-sialo(Bn))-SRIF28、S1-2C(disialo(amide))-SRIF28作為糖鏈附加體，除此以外，以與實(shí)施例70相同的方式實(shí)施藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。將所獲得的血漿中的化合物濃度變化示于圖19。根據(jù)實(shí)施例76～87的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)7～18中獲得的血漿中的化合物濃度變化，以與實(shí)施例70相同的方式，計(jì)算出各化合物的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。將所獲得的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)示于表5B～表5F。[表16]表5B如根據(jù)表5B所示的結(jié)果所表明的，S1C(disialo)-SRIF28、E12C(disialo)-SRIF28、R13C(disialo)-SRIF28、K14C(disialo)-SRIF28、N19C(disialo)-SRIF28、29C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)-D-Trp22-SRIF28在靜脈內(nèi)施用時(shí)，與非糖鏈附加體SRIF28相比t1/2延長(zhǎng)了13～18倍，AUC增加了8～23倍。此外，與非糖鏈附加體SRIF14相比，C(disialo)-SRIF14、C(disialo)-K-SRIF14、C(disialo)-R-K-SRIF14在靜脈內(nèi)施用時(shí)t1/2延長(zhǎng)了33～38倍，AUC增加了44～55倍。此外，C(disialo)-C12linker-SRIF14、C(disialo)-PEGlinker-SRIF14與非糖鏈附加體SRIF14相比，t1/2延長(zhǎng)了22～33倍，AUC增加了14～30倍。即，與實(shí)施例70的情況類(lèi)似，認(rèn)為這是因糖鏈修飾的血液中的穩(wěn)定性提高的結(jié)果。[表17]表5C如根據(jù)表5C所示的結(jié)果所表明的，當(dāng)將進(jìn)行修飾的糖鏈的大小變更為GlcNAc(單糖)、diMan(5糖)、diGlcNAc(7糖)、asialo(9糖)、monosialo(10糖)、disialo(11糖)、trisialo(14糖)、tetrasialo(17糖)時(shí)，根據(jù)進(jìn)行修飾的糖鏈的大小，在皮下施用時(shí)的t1/2、AUC、生物利用度分別增加了2～17倍、3～120倍、2～11倍。根據(jù)上述情況，可以明確的是通過(guò)變更進(jìn)行修飾的糖鏈的大小，不僅使血中穩(wěn)定性提高，且使其增加率具有變化。此外，已知在這些糖鏈中，二甘露糖糖鏈或去唾液酸糖鏈等可與特定的蛋白質(zhì)進(jìn)行相互作用，因此認(rèn)為它們對(duì)靶向特定蛋白質(zhì)、或者具有特定蛋白質(zhì)的器官或細(xì)胞是可利用的。此外，作為非還原末端的唾液酸的修飾，附加有例如通過(guò)對(duì)羧基導(dǎo)入氨基乙基酰胺(aminoethylamide)、酰胺(amide)、Bn等從而使電荷變更的糖鏈的S1C(disialo(aminoethylamide))-SRIF28、S1C(di-sialo(amide))-SRIF28、S1C(disialo(Bn))-SRIF28在靜脈內(nèi)施用時(shí)，與非糖鏈附加體相比，t1/2延長(zhǎng)了11～14倍，AUC增加了7～12倍，血中穩(wěn)定性提高。這些情況表明唾液酸的羧基會(huì)對(duì)血中滯留性造成很大影響，表明可以通過(guò)使羧基的負(fù)電荷消失(disialo(Bn)、disialo(amide))、或轉(zhuǎn)換成正電荷(disialo(aminoethylamide))而控制血中清除率或體內(nèi)分布的可能性(利用法)。[表18]表5D如根據(jù)表5D所示的結(jié)果所表明的，在SRIF14上修飾有1條二唾液酸糖鏈的C(disialo)-R-K-SRIF14、修飾有2條二唾液酸糖鏈的2C(disialo)-R-K-SRIF14、修飾有3條二唾液酸糖鏈的3C(disialo)-R-K-SRIF14在靜脈內(nèi)施用時(shí)，與非糖鏈附加體相比t1/2分別延長(zhǎng)了38倍、63倍、71倍，此外，AUC分別增加了55倍、42倍、36倍。同樣地，在SRIF28上修飾有1條二唾液酸糖鏈的S1C(disialo)-SRIF28、修飾有2條二唾液酸糖鏈的S1-2C(disialo)-SRIF28、修飾有3條二唾液酸糖鏈的S1-3C(disialo)-SRIF28、修飾有4條二唾液酸糖鏈的S1-4C(disialo)-SRIF28在靜脈內(nèi)施用時(shí)，與非糖鏈附加體相比t1/2分別延長(zhǎng)了13倍、21倍、30倍、48倍，此外，AUC分別增加了11倍、12倍、12倍、15倍?？梢悦鞔_，在SRIF14和SRIF28的任一種中，血中穩(wěn)定性均隨著進(jìn)行修飾的二唾液酸糖鏈的條數(shù)增加而提高。[表19]表5E如根據(jù)表5E所示的結(jié)果所表明的，在SRIF28上修飾有1條去唾液酸糖鏈的S1C(asialo)-SRIF28、修飾有2條去唾液酸糖鏈的S1-2C(asialo)-SRIF28、修飾有3條去唾液酸糖鏈的S1-3C(asialo)-SRIF28在靜脈內(nèi)施用時(shí)，與非糖鏈附加體相比t1/2分別延長(zhǎng)了10倍、6倍、5倍，此外，AUC分別增加了10倍、6倍、6倍。可以明確在進(jìn)行修飾的糖鏈為去唾液酸糖鏈的情況時(shí)，血中穩(wěn)定性也提高。[表20]表5F如根據(jù)表5F所示的結(jié)果所表明的，S1-2C(disialo)-SRIF28、S1-2C(asialo)-SRIF28、C(disialo(aminoethylamide))·S1C(disialo)-SRIF28、S1-2C(disialo(Bn))-SRIF28、S1-2C(disialo(amide))-SRIF28在靜脈內(nèi)施用時(shí)，與非糖鏈附加體相比t1/2分別延長(zhǎng)了6～21倍，AUC分別增加了6～12倍。即，通過(guò)對(duì)SRIF28修飾糖鏈，而使血中穩(wěn)定性提高。此外，隨著唾液酸糖鏈條數(shù)的增加，t1/2、AUC、Cmax、BA在靜脈內(nèi)施用和皮下施用時(shí)均增加。另一方面，當(dāng)使唾液酸的羧基的負(fù)電荷消失的情況(2C(disialo(Bn))、2C(disialo(amide)))時(shí)或鄰接地追加正電荷的情況(C(disialo(aminoethylamide))·S1C(disialo))時(shí)，盡管皮下施用時(shí)的t1/2延長(zhǎng)，但AUC或Cmax均不增加。由于唾液酸的羧基會(huì)對(duì)血中滯留性或血中轉(zhuǎn)移造成大的影響，因此表明了可以通過(guò)對(duì)糖鏈末端的電荷進(jìn)行轉(zhuǎn)換，而控制血中清除率或體內(nèi)分布的可能性(利用法)。實(shí)施例88使用大鼠血漿的血漿中穩(wěn)定性試驗(yàn)88-1處理液、試劑和大鼠血漿的制備將糖鏈附加體和未附加糖鏈的SRIF28溶解在PBS溶液中以制備2μM溶液，作為處理液。10％TFA是利用水將三氟乙酸(和光純藥工業(yè)公司制造的208-02746)以成為10v/v％的方式溶解而制備。大鼠血漿是由Wistar系大鼠(Crlj:Wistar，雄性，CharlesRiverJapan股份有限公司，7周齡)，作為加肝素的血漿(肝素：日本藥典肝素鈉注射液(持田制藥))而制備。88-2血漿添加樣品的制備向大鼠血漿0.27mL(n＝3)中迅速混合上述88-1中制備的糖鏈附加體處理液0.03mL而制成血漿添加樣品，在37℃恒溫槽中進(jìn)行保溫?；旌虾?，在0分鐘、和1～24小時(shí)期間隨著時(shí)間采集血漿添加樣品0.04mL，與0.01mL的10％TFA迅速混合。離心分離(20,000×g，4℃，10分鐘)后，采集上清液0.04mL，作為血漿中穩(wěn)定性測(cè)定樣品。取樣時(shí)間設(shè)定為0小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)，或0小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)。作為空白血漿，使用除使用PBS溶液作為處理液以外以相同的方式進(jìn)行處理而獲得的血漿。血漿樣品在用于測(cè)定之前冷凍保存。每次實(shí)驗(yàn)分別使用未附加糖鏈的SRIF28作為陽(yáng)性對(duì)照。88-3樣品中濃度測(cè)定和血漿中穩(wěn)定性指數(shù)的計(jì)算利用與實(shí)施例70-3的血漿濃度測(cè)定相同的方法，測(cè)定上述88-2中獲得的血漿中穩(wěn)定性測(cè)定樣品中所殘留的糖鏈附加體的濃度。將混合后0分鐘的糖鏈附加體濃度設(shè)為100％，以百分率(％)表示經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后的殘留率，根據(jù)以下的指數(shù)式(1)的消失速度常數(shù)，使用計(jì)算式(2)算出半衰期。然后，將每次實(shí)驗(yàn)的未附加糖鏈的SRIF28的半衰期設(shè)為1，計(jì)算出糖鏈附加體的血漿中穩(wěn)定性指數(shù)(PSindex)。將結(jié)果示于表6和圖20。此外，將血漿中穩(wěn)定性指數(shù)為20以上的糖鏈附加體記為＞20。而且，在圖20中，血漿中穩(wěn)定性指數(shù)超過(guò)20的糖鏈附加體，也以20作為上限而進(jìn)行記載。殘留率(％)＝100·e(k·t)(1)e：自然對(duì)數(shù)的底數(shù)k：消失速度常數(shù)t：時(shí)間(小時(shí))半衰期(小時(shí))＝0.693/k(2)[表21]表6實(shí)施例PS指數(shù)1S1C(disialo)-SRIF284.52N5C(disiaIo)-SRIF284.73A9C(disialo)-SRIF286.74E12C(disialo)-SRlF286.25R13C(disialo)-SRIF2815.96K14C(disialo)-SRIF2819.110N19C(disialo)-SRIF28＞201329C(disialo)-SRIF28＞201430C(disialo)-SRIF2816.815S1C(disialo)-D-Trp-SRIF2812.316A9C(disialo)-D-Trp-SRlF2817.221S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF2817.822S1C(disialo)·R13C(disialo)-SRIF28＞2024S1-3C(disialo)-SRIF28＞2025S1C(disialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28＞2026S1C(monosialo)-SRIF283.527S1C(asialo)-SRIF282.6-Octreotide＞20-SRlF281如根據(jù)圖20所示的結(jié)果所表明的，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽與SRIF28相比，血漿中穩(wěn)定性增加。即，在第1位、第5位、第9位、第12位附加有1條糖鏈的(實(shí)施例1、2、3、4的化合物)為SRIF28的4.5倍～6.7倍，在第13位附加有糖鏈的為SRIF28的15.9倍(實(shí)施例5的化合物)、在第14位附加有糖鏈的為SRIF28的19.1倍(實(shí)施例6的化合物)，在第30位附加有糖鏈的為SRIF28的16.8倍(實(shí)施例14的化合物)。此外，在第19位、C末端側(cè)進(jìn)一步附加有1個(gè)附加糖鏈的氨基酸的為20倍以上(實(shí)施例10、13的化合物)。表示隨著附加糖鏈的位置自第1位向C末端側(cè)移動(dòng)，血漿中穩(wěn)定性增加。實(shí)施例89使用大鼠的GH產(chǎn)生抑制試驗(yàn)如實(shí)施例69所示，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽對(duì)SSTR的各受體具有親和性。另一方面，也看到一些附加糖鏈的多肽對(duì)各SSTR的親和性衰減，但為證明即便在這種情況時(shí)，也由于實(shí)施例70～88中所示的血中半衰期的延長(zhǎng)或生物利用度的增大等而在活體內(nèi)對(duì)受體顯示藥學(xué)地有效的作用，而以使用大鼠的體內(nèi)試驗(yàn)的形式，實(shí)施本發(fā)明的附加糖鏈的多肽的施用對(duì)生長(zhǎng)激素(GH)產(chǎn)生的效果的評(píng)價(jià)試驗(yàn)?？烧J(rèn)為血液中的GH產(chǎn)生量的增加是經(jīng)由GH的旁分泌作用，在各種器官中引起細(xì)胞增殖或分化、生物合成系統(tǒng)活化或抑制，從而對(duì)活體反應(yīng)造成影響。自下丘腦釋放出的生長(zhǎng)抑素可以抑制自腦下垂體前葉向血液中分泌GH。本實(shí)驗(yàn)體系作為以血中GH產(chǎn)生量為指標(biāo)，可以評(píng)價(jià)糖鏈附加體對(duì)SSTR的藥理作用、和糖鏈附加體在施用后的血中殘留的試驗(yàn)體系而實(shí)施。89-1施用液和試劑的制備使用S1C(disialo)-SRIF28、N19C(disialo)-SRIF28、29C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF28和S1C(disialo)·N5C(disialo)·A9C(di-sialo)-SRIF28作為糖鏈附加體，溶解在日本藥典生理鹽水(大冢制藥工廠公司制造)中制備1～100μM溶液，作為施用液。此外，作為GH游離促進(jìn)劑，使用GRF(GH釋出激素，Growthhormonereleasingfactor)。GRF利用注射用水(Lot.09H18C，扶桑藥品工業(yè)公司制造)1mL將GRF注射液(注射用GRF住友50，Lot.2006C，大日本住友制藥公司制造)溶解后，以成為2μg/mL的方式利用生理鹽水稀釋25倍而制備。采血時(shí)，作為用作抗凝血?jiǎng)┑母嗡?，直接以原液的狀態(tài)使用日本藥典肝素鈉注射液(Lot.B084，持田制藥公司制造)。89-2血漿樣品的制備將上述89-1中所制備的施用液，在未禁食狀態(tài)下以1mL/kg的用量使用注射筒和26G注射針(均為T(mén)ERUMO公司制造)施用至雄性的SD系大鼠(Crl:CD(SD)，CharlesRiver日本股份有限公司，6周齡，n＝3，體重145.2～163.9g)的背部皮下。作為對(duì)照組，以相同的方式施用不含附加糖鏈的多肽的生理鹽水(媒介物組(vehiclegroup))。然后，即糖鏈附加體施用后5～6分鐘的期間，使用注射筒和注射針將作為全身麻醉劑的戊巴比妥鈉(Somunopentyl，Lot.0608101，共立制藥公司制造)以成為50mg/kg的方式施用至腹腔內(nèi)。在糖鏈附加體施用后1小時(shí)，即在麻醉下經(jīng)過(guò)50分鐘以上的狀態(tài)下，使用注射筒和注射針將作為GH游離促進(jìn)劑的GRF以1mL/kg的用量施用至尾靜脈。在GRF施用后5分鐘，使用添入有肝素的注射筒和注射針自大鼠頸部靜脈進(jìn)行采血。將0.4mL所采集的血液在冰上放置20分鐘以上之后，進(jìn)行離心分離(1，870×g，4℃，10分鐘)，采集上清液100μL，作為血漿樣品。作為空白血漿，使用對(duì)自未經(jīng)處置的大鼠頸部靜脈采集的之血液以相同的方式進(jìn)行處理而獲得的血漿。血漿樣品在用于測(cè)定之前冷凍保存。89-3血漿中GH濃度的測(cè)定使用SPI-Bio公司的大鼠生長(zhǎng)激素EIA試劑盒(RatGrowthHormoneEIAKit)(SPI-Bio，A05104)，對(duì)上述89-2中獲得的血漿樣品中的GH濃度進(jìn)行測(cè)定。使用EIA試劑盒附帶的分析緩沖液將血漿樣品稀釋20倍、100倍、500倍，作為測(cè)定樣品。用以制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)液依據(jù)隨附的說(shuō)明書(shū)通過(guò)利用蒸餾水制備40ng/mL溶液之后，再使用分析緩沖液分階段地稀釋?zhuān)苽?0ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.63ng/mL、0.31ng/mL。通過(guò)使所獲得的結(jié)果乘以稀釋率，而算出GH濃度。將所獲得的血漿樣品中GH濃度示于表7。[表22]表7實(shí)施例施用量GH(ng/mL)1S1C(disialo)-SRIF281nmol/kg4901S1C(disialo)-SRlF2810nmol/kg17.110N19C(disialo)-SRIF2810nmol/kg56310N19C(disialo)-SRIF28100nmol/kg1.51329C(disialo)-SRlF2810nmol/kg4971329C(disialo)-SRIF28100nmol/kg88.521S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF281nmol/kg77621S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF2810nmol/kg18125S1C(disialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF2810nmol/kg83325S1C(disialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28100nmol/kg151-媒介物-861如根據(jù)表7所示的結(jié)果所表明的，本發(fā)明的糖鏈附加體抑制了大鼠的GH產(chǎn)生。實(shí)施例21和實(shí)施例25的糖鏈附加體在通過(guò)實(shí)施例69-1的方法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，對(duì)各受體的Ki值與不具有糖鏈的SRIF14的Ki值的比分別顯示為在15.7:1～1.2:1(實(shí)施例21的化合物)和158:1～7.1:1(實(shí)施例25的化合物)的范圍內(nèi)。此外，實(shí)施例21和實(shí)施例25的糖鏈附加體在通過(guò)實(shí)施例70的方法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，血中半衰期分別顯示為增大25倍以上(實(shí)施例21的化合物)或30倍以上(實(shí)施例25的化合物)。另一方面，具有2條糖鏈的本實(shí)施例表明，糖鏈附加體在活體內(nèi)也可以有效地發(fā)揮藥學(xué)作用。此外，本發(fā)明的糖鏈附加體即便在GRF施用的1小時(shí)前施用的時(shí)，也具有GH產(chǎn)生的抑制作用。而且，在實(shí)施例1和實(shí)施例21與實(shí)施例25的糖鏈附加體間，對(duì)大鼠GH產(chǎn)生能力有效的施用量相差約10倍。這與通過(guò)實(shí)施例69-1的方法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，它們的受體親和性以Ki值計(jì)具有約10倍差的情況類(lèi)似。表明即使在糖鏈附加體的親和性稍微衰減時(shí)，也具有藥學(xué)活性。實(shí)施例90使用大鼠的GH產(chǎn)生抑制試驗(yàn)2以與實(shí)施例89-1～89-3相同的方式，實(shí)施以下所示的糖鏈附加體化合物的大鼠GH產(chǎn)生抑制試驗(yàn)。作為糖鏈附加體，使用S1C(disialo)-SRIF28、N5C(disialo)-SRIF28、A9C(disialo)-SRIF28、E12C(disialo)-SRIF28、R13C(disialo)-SRIF28、K14C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)-D-Trp22--SRIF28、S1C(disialo(Bn))-SRIF28、S1C(disialo(amide))-SRIF28、S1C(di-sialo(aminoethylamide))-SRIF28、S1C(monosialo)-SRIF28、S1C(asialo)--SRIF28、C(disialo)-R-K-SRIF14、S1-2C(asialo)-SRIF28、S1C(disialo)·N5C(di-sialo)-SRIF28、S1C(disialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28和S1-5C(di-sialo)-SRIF28。將所獲得的血漿樣品中GH濃度示于表8。[表23]表8如根據(jù)表8所示的結(jié)果所表明的，本發(fā)明的附加糖鏈的多肽抑制了大鼠的GH產(chǎn)生。在本試驗(yàn)體系中，S1C(disialo)-SRIF28自1nmol/kg起即開(kāi)始抑制GH產(chǎn)生，在3～10nmol/kg時(shí)表現(xiàn)出82～99％的GH產(chǎn)生抑制效果。可認(rèn)為這是由于如實(shí)施例69-1及69-2和實(shí)施例70～87所示的對(duì)SSTR1～SSTR5具有親和性，且血中滯留性提高的緣故。在實(shí)施例69-1和69-2中與S1C(disialo)-SRIF28顯示同等的親和性的N5C(disialo)-SRIF28、A9C(disialo)-SRIF28、E12C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)-D-Trp-SRIF28、S1C(disialo(Bn))-SRIF28和C(disialo)-R-K--SRIF14以10nmol/kg顯示95～99％的GH產(chǎn)生抑制效果，顯示出與S1C(disialo)-SRIF28同等的效果。根據(jù)實(shí)施例70～87的方法所示的結(jié)果，S1C(monosialo)-SRIF28、S1C(asialo)-SRIF28、S1-2C(asialo)-SRIF28和S1C(disialo(amide))-SRIF28的皮下施用時(shí)的AUC為S1C(disialo)-SRIF28的1/3～1/2，此外，S1C(disialo(aminoethylamide))-SRIF28為1/7。另一方面，通過(guò)實(shí)施例69-1和69-2所示的方法，這些均顯示出高于S1C(disialo)-SRIF28的親和性。因此，在本實(shí)驗(yàn)體系中，可以認(rèn)為S1C(monosialo)-SRIF28、S1C(asialo)-SRIF28、S1-2C(asialo)-SRIF28、S1C(disialo(aminoethyla-mide))-SRIF28和S1C(disialo(amide))-SRIF28以10nmol/kg抑制70～99％之GH產(chǎn)生，顯示出與S1C(disialo)-SRIF28同等的效果。通過(guò)實(shí)施例69-1和69-2所示的方法，R13C(disialo)-SRIF28、K14C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF28、S1C(di-sialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28和S1-5C(disialo)-SRIF28顯示出低于S1C(disialo)-SRIF28的親和性。另一方面，根據(jù)實(shí)施例70～87的方法所示的結(jié)果，這些化合物在皮下施用時(shí)的AUC提高至S1C(disialo)-SRIF28的1.8倍至3.1倍。在本實(shí)驗(yàn)體系中，R13C(disialo)-SRIF28、K14C(disialo)-SRIF28、S1C(disialo)·N5C(disialo)-SRIF28、S1C(di-sialo)·N5C(disialo)·A9C(disialo)-SRIF28和S1-5C(disialo)-SRIF28通過(guò)施用10或100nmol/kg而顯示出GH產(chǎn)生抑制活性。這些結(jié)果表明，即便在受體親和性降低的情況時(shí)，也可以通過(guò)血中穩(wěn)定性的增大來(lái)補(bǔ)償或增大生長(zhǎng)抑素的活性。實(shí)施例91消化道阻塞模型中的藥效試驗(yàn)如實(shí)施例89和實(shí)施例90所示，已證實(shí)本發(fā)明的附加糖鏈的多肽即便在大鼠活體內(nèi)，也可作為激動(dòng)劑而有效地發(fā)揮作用。接著，為證明它們即便在疾病模型中也顯示有效性，而實(shí)施大鼠消化道阻塞模型中的評(píng)價(jià)。在諸如腸梗阻等消化道阻塞中，因消化道之組織障礙、以及水或電解質(zhì)等的吸收能力降低而表現(xiàn)出腹脹感、嘔吐、腹痛等消化系統(tǒng)癥狀。已知該病理由消化道內(nèi)容物的通過(guò)障礙、或消化液或生理活性物質(zhì)釋放到消化道內(nèi)所引起。生長(zhǎng)抑素通過(guò)經(jīng)由在消化系統(tǒng)中表達(dá)的SSTR而抑制各種消化液的分泌、或促進(jìn)水/電解質(zhì)的吸收，來(lái)顯示使消化道內(nèi)容物減少等作用，且認(rèn)為對(duì)癥狀改善是有效的。本實(shí)驗(yàn)體系作為以腸道阻塞后的空腸中的腸液重量的變化為指標(biāo)，而對(duì)腸液的吸收促進(jìn)或分泌抑制作用進(jìn)行評(píng)價(jià)的試驗(yàn)體系而實(shí)施。此外，測(cè)定作為逸脫酶的淀粉酶(胰腺)、乳酸鹽脫氫酶(LDH，肝臟)和肌酸磷酸激酶(CPK，骨骼肌、心肌等)的血液參數(shù)作為組織障礙時(shí)的指標(biāo)。實(shí)施例91-1消化道阻塞模型的制作本試驗(yàn)系委托MitsubishiChemicalMedience公司實(shí)施。將雄性的SD系大鼠(Crl:CD(SD)CharlesRiver日本股份有限公司，8周齡，n＝5以上，體重251.1～278.1g)禁食12小時(shí)以上。通過(guò)使大鼠吸入2％異氟烷和笑氣：氧氣＝7:3而進(jìn)行麻醉誘導(dǎo)，手術(shù)過(guò)程中維持該狀態(tài)。將腹部正中切開(kāi)，用縫合線將距離十二指腸提肌約10cm處的空腸結(jié)扎。然后，將切開(kāi)部迅速縫合，禁食直至施用化合物為止。假處理(shamtreatment)組不對(duì)空腸進(jìn)行結(jié)扎，但將腹部正中切開(kāi)后進(jìn)行縫合切開(kāi)部的處理。實(shí)施例91-2化合物的制備和施用使用S1C(disialo)-SRIF28、C(disialo)-R-K-SRIF14、S1-2C(asialo)--SRIF28作為糖鏈附加體，溶解在日本藥典生理鹽水(大冢制藥工廠公司制造)中制備40μM溶液，作為施用液。自消化道阻塞手術(shù)起18小時(shí)后，以1mL/kg的用量使用注射筒和25G注射針(均為T(mén)ERUMO公司制造)對(duì)頸背部進(jìn)行皮下施用。作為媒介物組，以相同的方式施用不含附加糖鏈的多肽的生理鹽水。此外，施用奧曲肽作為對(duì)照組。實(shí)施例91-3腸液重量的測(cè)定在化合物施用1小時(shí)后，在吸入麻醉下將腹部正中切開(kāi)，自腹部大靜脈采集血液1.5mL。然后，摘出十二指腸提肌側(cè)的結(jié)扎空腸。用紙巾將空腸表面的液體和血液除去，將附著在空腸上的神經(jīng)、血管、脂肪切除之后，切取長(zhǎng)度6cm，測(cè)定濕重。然后，在36度下干燥24小時(shí)，測(cè)定干重。腸液重量(mg)通過(guò)濕重-干重而計(jì)算出。將所獲得的空腸的腸液重量示于表9。[表24]表9腸液重量(mg)假處理285±27媒介物481±31奧曲肽693±48S1C(disialo)-SRIF28630±83C(disialo)-R-K-SRIF14584±95S1-2C(asialo)-SRIF28566±34如由表9所明確的，媒介物與假處理相比，腸液重量顯著增加，確認(rèn)隨著進(jìn)行結(jié)扎而使消化道阻塞，產(chǎn)生腸液的分泌亢進(jìn)。生長(zhǎng)抑素或奧曲肽在此種消化道阻塞模型中具有抑制腸液向腸道內(nèi)分泌和促進(jìn)腸液吸收至腸組織側(cè)的作用已有揭示(ScandJGastroenterol.1995May；30(5)：464-9.)，在本實(shí)驗(yàn)體系中也確認(rèn)到奧曲肽具有該作用。S1C(disialo)-SRIF28、C(disialo)-R-K-SRIF14、S1-2C(asialo)-SRIF28中任一種與媒介物相比，均確認(rèn)到腸液重量的增加，明確了本發(fā)明的糖鏈附加體也顯示抑制腸液分泌、促進(jìn)水/電解質(zhì)的吸收等有效性。此外，可知與S1C(disialo)-SRIF28相比，S1-2C(asialo)-SRIF28在實(shí)施例86和87中皮下施用時(shí)的AUC為1/2，但在實(shí)施例69-1中，對(duì)SSTR1～SSTR5的親和性較S1C(disialo)-SRIF28高約1.7～2.9倍。可以認(rèn)為這是即便血漿濃度較低時(shí)，由于受體親和性提高因而本模型中的藥效也類(lèi)似的原因。此外，同樣地，可以認(rèn)為這是C(disialo)-R-K-SRIF14雖與S1C(disialo)-SRIF28的皮下施用時(shí)的AUC相比略少，但由于受體親和性高約0.7～2.4倍所以藥效類(lèi)似的原因。實(shí)施例91-4血液參數(shù)的測(cè)定使用實(shí)施例91-3中所采集的血液，使用自動(dòng)分析裝置7170(日立制作所)測(cè)定淀粉酶濃度(IU/L)、LDH濃度(IU/L)和CPK濃度(IU/L)。測(cè)定方法分別使用BG5B法、UV-rate法和JSCC法。將所獲得的結(jié)果示于表10。[表25]表10淀粉酶(IU/L)LDH(IU/L)CPK(IU/L)假處理669±164168±82353±68媒介物1672±743341±68377±57奧曲肽1732±774269±141472±215S1C(disialo)-SRIF281164±224338±97455±202C(disialo)-R-K-SRIF14985±238228±155415±137S1-2C(asialo)-SRIF281594±573318±44728±665根據(jù)表10可以明確，媒介物與假處理相比，淀粉酶活性、LDH活性增加，推測(cè)隨著消化道阻塞而產(chǎn)生消化系統(tǒng)的組織障礙。S1C(disialo)-SRIF28和C(disialo)-R-K-SRIF14與媒介物相比，淀粉酶活性具有較低的值。另一方面，奧曲肽的淀粉酶活性與媒介物同等。根據(jù)實(shí)施例69-1和69-2可以明確，S1C(disialo)-SRIF28、C(disialo)-R-K-SRIF14、和S1-2C(sialo)-SRIF28對(duì)SSTR1～SSTR5的全部受體具有結(jié)合親和性，相對(duì)于此，奧曲肽為對(duì)SSTR2、SSTR3、SSTR5具有特異性親和性的化合物。由于據(jù)報(bào)道大鼠胰腺中表達(dá)SSTR1～SSTR5的全部受體(JHistochemCyto-chem.2004Mar；52(3):391-400.)，所以可以想到糖鏈附加體通過(guò)作用于與奧曲肽不同的受體，而減輕組織障礙的可能性。此外，奧曲肽、C(disialo)-R-K-SRIF14與媒介物相比，LDH活性具有較低的值。此外，對(duì)于各參數(shù)均沒(méi)有因施用糖鏈附加體而惡化。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3