本發(fā)明涉及免疫學(xué)領(lǐng)域，具體地，涉及gas7腫瘤抗原及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：隨著環(huán)境條件的改變以及老齡化人口的增多，近年來腫瘤的發(fā)病率逐漸提高。腫瘤已經(jīng)成為威脅人類健康的重要因素。當(dāng)前，腫瘤的免疫治療已經(jīng)成為全世界研究的熱點(diǎn)。腫瘤的免疫治療是指利用人體的免疫系統(tǒng)對抗腫瘤。機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤的免疫反應(yīng)主要是由cd8陽性的細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞(cd8+ctl)介導(dǎo)產(chǎn)生的。主動的免疫治療是將腫瘤抗原(蛋白質(zhì)、多肽、dna、rna)甚至腫瘤細(xì)胞裂解物等與適宜的載體結(jié)合，輔以適當(dāng)?shù)淖魟゛l(oh)3，免疫機(jī)體旨在誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生持久的免疫反應(yīng)。而被動的免疫治療則主要利用腫瘤特異性的抗體或者培養(yǎng)的效應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)生抗腫瘤的免疫反應(yīng)。黑色素腫瘤是一種皮下腫瘤。當(dāng)前對于黑色素腫瘤的治療主要采用小分子靶向治療、腫瘤的被動免疫治療等。小分子靶向治療：黑色素瘤細(xì)胞存在braf、nras和ckit等基因變異,針對其表達(dá)產(chǎn)物的多種拮抗性藥物已經(jīng)開始應(yīng)用于臨床治療，如braf抑制劑vemurafenib以及ckit抑制劑nilotinib。然而，小分子靶向治療存在如下問題：1，耐藥問題，患者在經(jīng)過藥物治療一段時間后對拮抗性藥物產(chǎn)生耐藥性；2，不良反應(yīng)，患者在藥物治療的過程中出現(xiàn)的關(guān)節(jié)痛、惡心等問題。腫瘤的被動免疫治療：主要是利用單克隆抗體阻斷抑制性受體ctla4與b7，pd1與pdl1或者pdl2分子的作用，減弱甚至阻斷調(diào)節(jié)性t細(xì)胞對t細(xì)胞活化的抑制作用，從而增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。腫瘤的被動免疫治療存在如下問題：1、阻斷ctla4可能導(dǎo)致機(jī)體的免疫反應(yīng)對于正常組織造成一定的損害,引起自身免疫性疾??；2、免疫相關(guān)的不良反應(yīng)的出現(xiàn)，伴隨著臟器的累積，嚴(yán)重者可能會危及生命。黑色素瘤的腫瘤抗原主要包括分化抗原(如melan-a/mart-1,gp100等)、突變抗原(如gas7等)、腫瘤睪丸抗原(mage、ny-eso等)等類型。腫瘤分化抗原是在腫瘤和正常細(xì)胞中都有表達(dá)的抗原，只是量的差異。腫瘤睪丸抗原是在睪丸組織和某些腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的抗原。許多腫瘤抗原在腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)，但是在正常細(xì)胞中也有低水平的表達(dá)。這些在正常細(xì)胞中也有表達(dá)的抗原會激起機(jī)體產(chǎn)生中樞耐受以及外周免疫耐受的機(jī)制，從而使得對這些抗原具有低親和力的tcr(t細(xì)胞受體)的t細(xì)胞得以存活，而對這些抗原具有高親和力的tcr的t細(xì)胞則被誘導(dǎo)凋亡。這是腫瘤細(xì)胞獲得免疫逃逸的機(jī)制之一。除了這些抗原之外，腫瘤細(xì)胞還表達(dá)一些腫瘤新生抗原(突變抗原)，這些抗原在正常細(xì)胞中不表達(dá)。新生抗原所誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫反應(yīng)不會損傷正常的細(xì)胞，且不會誘導(dǎo)產(chǎn)生中樞或者外周免疫耐受，因此是基于t細(xì)胞免疫治療腫瘤的理想的靶標(biāo)。盡管腫瘤新生抗原是最理想的靶標(biāo)，但由于腫瘤的異質(zhì)性以及與機(jī)體相互作用的復(fù)雜性，腫瘤細(xì)胞突變產(chǎn)生某一確定的新生抗原的幾率較低。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)一種能夠有效增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)的活性的抗原肽。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種能夠有效增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)的活性的抗原肽。本發(fā)明第一方面提供了一種gas7蛋白的抗原肽，所述抗原肽由7-25個氨基酸組成，并且所述抗原肽是t細(xì)胞識別表位。在另一優(yōu)選例中，所述抗原肽可引發(fā)針對表達(dá)gas7蛋白的腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)。在另一優(yōu)選例中，所述抗原肽由8-20個(較佳地，9-15個，更佳地，9、10個)氨基酸組成。在另一優(yōu)選例中，所述的抗原肽選自如seqidno.:1-17所示的短肽。在另一優(yōu)選例中，所述抗原肽還如表1所示：表1在另一優(yōu)選例中，所述抗原肽選自下組：seqidnos.:2、3、5、6、7、9、10、12、13、15、17、或其組合。在另一優(yōu)選例中，所述抗原肽選自下組：seqidnos.:2、3、5、6、7、9、15、17、或其組合。本發(fā)明第二方面提供了一種分離的衍生多肽，所述衍生多肽是在本發(fā)明第一方面所述抗原肽的基礎(chǔ)上分別經(jīng)過1個、2個或3個氨基酸取代，和/或1個、2個或3個氨基酸插入，和/或1個、2個或3個氨基酸缺失，且具有增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)活性的多肽。本發(fā)明第三方面提供了一種分離的肽集合，其特征在于，所述的肽集合由選自下組的肽或多肽構(gòu)成：至少兩種選自本發(fā)明第一方面所述的抗原肽或其衍生多肽。在另一優(yōu)選例中，所述的肽集合中至少含有2、3或4種選自本發(fā)明第一方面所述的抗原肽或其衍生多肽，優(yōu)選地，所述肽集合至少含有2、3或4種選自seqidno.:1-17的抗原肽或其衍生多肽。在另一優(yōu)選例中，所述的肽集合由基礎(chǔ)肽和其對應(yīng)的突變肽組成。在另一優(yōu)選例中，所述基礎(chǔ)肽選自下組：seqidnos.:1、4、8、11、14、或16。在另一優(yōu)選例中，所述突變肽選自下組：seqidnos.:2、3、5、6、7、9、10、12、13、15、或17。在另一優(yōu)選例中，所述的肽集合中至少含有seqidno.:1和seqidno.:2-3任一所示的短肽。在另一優(yōu)選例中，所述的肽集合中至少含有seqidno.:4和seqidno.:5-7任一所示的短肽。在另一優(yōu)選例中，所述的肽集合中至少含有seqidno.:8和seqidno.:9所示的短肽。在另一優(yōu)選例中，所述的肽集合中至少含有seqidno.:14和seqidno.:15所示的短肽。在另一優(yōu)選例中，所述的肽集合中至少含有seqidno.:16和seqidno.:17所示的短肽。本發(fā)明第四方面提供了一種融合載體蛋白，所述的融合載體蛋白具有以下結(jié)構(gòu)：本發(fā)明第一方面所述的抗原肽-載體蛋白；或載體蛋白-本發(fā)明第一方面所述的抗原肽。其中，“-”表示肽鍵或肽接頭。在另一優(yōu)選例中，所述的載體蛋白選自下組：bsa、tetanustoxoid(破傷風(fēng)類毒素)、klh、bcg、或其組合。本發(fā)明第五方面提供了一種pmhc復(fù)合物，所述復(fù)合物包含本發(fā)明第一方面所述的抗原肽。在另一優(yōu)選例中，所述pmhc復(fù)合物中的肽的氨基酸序列為seqidno:1-17。在另一優(yōu)選例中，mhc分子的類型是hla-a*0201。在另一優(yōu)選例中，所述pmhc復(fù)合物為多聚體。在另一優(yōu)選例中，所述pmhc復(fù)合物是可溶的。在另一優(yōu)選例中，所述pmhc復(fù)合物是生物素化的。本發(fā)明第六方面提供了一種分離的細(xì)胞，所述細(xì)胞表面呈遞本發(fā)明第五方面所述pmhc復(fù)合物。本發(fā)明第七方面提供了一種核酸分子，所述核酸分子包含編碼本發(fā)明第一方面所述抗原肽或其衍生多肽的核酸序列或其互補(bǔ)序列。本發(fā)明第八方面提供了一種載體，所述載體含有本發(fā)明第七方面所述的核酸分子。本發(fā)明第九方面提供了一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞中含有本發(fā)明第八方面所述的載體。本發(fā)明第十方面提供了一種分子，所述分子能夠結(jié)合本發(fā)明第一方面所述的抗原肽或其衍生多肽；和/或本發(fā)明第五方面所述的pmhc復(fù)合物。在另一優(yōu)選例中，所述分子能夠特異性結(jié)合本發(fā)明第一方面所述的抗原肽或其衍生多肽；和/或本發(fā)明第五方面所述的pmhc復(fù)合物。在另一優(yōu)選例中，所述分子為t細(xì)胞受體。在另一優(yōu)選例中，所述分子為抗體或其結(jié)合片段。另一優(yōu)選例中，所述抗體為單克隆抗體。本發(fā)明第十一方面提供了一種分離的單克隆t細(xì)胞，所述t細(xì)胞結(jié)合本發(fā)明第五方面所述pmhc復(fù)合物。在另一優(yōu)選例中，所述t細(xì)胞特異性結(jié)合本發(fā)明第五方面所述pmhc復(fù)合物。本發(fā)明第十二方面提供了本發(fā)明第一方面所述的抗原肽或其衍生多肽、本發(fā)明第三方面所述的肽集合、或本發(fā)明第四方面所述的融合載體蛋白的用途，用于制備增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)的藥物。在另一優(yōu)選例中，所述藥物用于治療選自下組的腫瘤：皮膚癌、卵巢癌、骨肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、子宮內(nèi)膜癌、或其組合。本發(fā)明第十三方面提供了本發(fā)明第一方面所述的抗原肽或其衍生多肽、本發(fā)明第三方面所述的肽集合、或本發(fā)明第四方面所述的融合載體蛋白的用途，(a)用于制備預(yù)防和/或治療黑色素瘤的藥物組合物；(b)作為抗原用于制備檢測試劑；和/或(c)作為免疫原用于制備治療藥物。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物中含有本發(fā)明第一方面所述抗原肽或其衍生多肽、本發(fā)明第三方面所述的肽集合、或本發(fā)明第四方面所述的融合載體蛋白，和藥學(xué)上可接受的載體。在另一優(yōu)選例中，所述藥物包括疫苗組合物。本發(fā)明第十四方面提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物含有本發(fā)明第一方面所述抗原肽或其衍生多肽、本發(fā)明第三方面所述的肽集合、或本發(fā)明第四方面所述的融合載體蛋白，和藥學(xué)上可接受的載體。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物包括疫苗組合物。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物是用于治療或預(yù)防腫瘤的瘤苗或疫苗組合物。在另一優(yōu)選例中，所述疫苗組合物為核酸疫苗組合物。在另一優(yōu)選例中，所述的疫苗組合物還含有佐劑。在另一優(yōu)選例中，所述佐劑包括氫氧化鋁。在另一優(yōu)選例中，所述疫苗組合物為單價(jià)或多價(jià)。本發(fā)明第十五方面提供了一種體外非治療性的檢測抗原肽是否具有增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)活性的方法，其特征在于，包括步驟：(a)提供第一腫瘤抗原和第二腫瘤抗原，其中所述的增強(qiáng)腫瘤免疫反應(yīng)是增強(qiáng)的、針對第一腫瘤抗原的腫瘤免疫應(yīng)答；所述的第一腫瘤抗原為來源于一哺乳動物的低免疫原性的天然多肽或其免疫原性片段，并且當(dāng)所述第一腫瘤抗原被免疫施用于所述的哺乳動物時，無法有效產(chǎn)生有效的針對所述第一腫瘤抗原的抗腫瘤免疫應(yīng)答；以及所述的第二腫瘤抗原是與所述第一腫瘤免疫抗原同源且交叉的多肽或其免疫原性片段；(b)分別比較所述第一腫瘤抗原和所述二腫瘤抗原的ic50或percentilerank，從而檢測所述抗原肽是否具有增強(qiáng)免疫反應(yīng)的活性。在另一優(yōu)選例中，所述第一腫瘤抗原和所述二腫瘤抗原的percentilerank≤2(較佳地，≤1.5，更佳地，0.1-1.4)時，則表明所述抗原肽具有增強(qiáng)免疫反應(yīng)的活性。在另一優(yōu)選例中，所述第一腫瘤抗原和所述二腫瘤抗原的ic50≤50(較佳地，≤35，更佳地，2-32)時，則表明所述抗原肽具有增強(qiáng)免疫反應(yīng)的活性。在另一優(yōu)選例中，所述的第一腫瘤抗原是來自所述哺乳動物的野生型腫瘤相關(guān)抗原(蛋白)的表位多肽(即多肽片段)。在另一優(yōu)選例中，所述的“同源的且交叉的”指所述的第二腫瘤抗原和所述的第一腫瘤抗原在每9個或10個氨基酸長度上具有平均1-2個氨基酸突變，因此不僅能夠引起針對第二腫瘤抗原的免疫應(yīng)答，而且能夠引起針對所述第一腫瘤抗原的交叉的免疫應(yīng)答反應(yīng)。在另一優(yōu)選例中，所述的第一腫瘤抗原和第二腫瘤抗原來自或衍生自同一腫瘤相關(guān)抗原。在另一優(yōu)選例中，所述的第一腫瘤抗原和第二腫瘤抗原來自或衍生自同一腫瘤相關(guān)抗原的同一區(qū)段。在另一優(yōu)選例中，所述的第一腫瘤抗原和第二腫瘤抗原為長度分別為n1和n2個氨基酸的表位多肽，其中n1和n2分別為6-200，較佳地7-100，更佳地8-50，最佳地8-25或8-12的正整數(shù)。在另一優(yōu)選例中，所述的第一腫瘤抗原為中樞耐受的腫瘤特異性表位。在另一優(yōu)選例中，所述第一腫瘤抗原來源于gas7的腫瘤相關(guān)抗原。在另一優(yōu)選例中，所述第一腫瘤抗原為基礎(chǔ)肽。在另一優(yōu)選例中，所述基礎(chǔ)肽選自下組：seqidnos.:1、4、8、11、14、或16。在另一優(yōu)選例中，所述第二種瘤抗原為突變肽。在另一優(yōu)選例中，所述突變肽選自下組：seqidnos.:2、3、5、6、7、9、10、12、13、15、或17。在另一優(yōu)選例中，所述的哺乳動物包括非人哺乳動物和人。在另一優(yōu)選例中，所述的哺乳動物包括靈長動物和嚙齒動物(如小鼠、大鼠)。在另一優(yōu)選例中，所述的“免疫施用”指將所述的腫瘤抗原直接或間接地施用于所述對象，從而引發(fā)免疫應(yīng)答反應(yīng)。在另一優(yōu)選例中，所述的“免疫施用”包括以疫苗組合物的形式進(jìn)行施用。在另一優(yōu)選例中，所述的疫苗組合物含有：(i)所述的腫瘤抗原(如第一腫瘤抗原或第二腫瘤抗原)；(ii)任選的佐劑；和(iii)藥學(xué)上或免疫學(xué)上可接受的載體。在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括步驟(c)：將篩選出的具有增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)的活性的第二腫瘤抗原免疫施用于所述的哺乳動物的對象，激發(fā)針對所述第二腫瘤抗原的免疫應(yīng)答，從而獲得經(jīng)初次免疫激發(fā)的哺乳動物對象；和(d)在上一步驟的免疫施用之后t天后，其中t為6-30，將所述的第一腫瘤抗原免疫施用于所述的經(jīng)初次免疫激發(fā)的哺乳動物對象，激發(fā)針對所述第一腫瘤抗原的免疫應(yīng)答，從而獲得經(jīng)再次免疫激發(fā)的哺乳動物對象，其中在所述再次免疫激發(fā)的哺乳動物對象中，產(chǎn)生了增強(qiáng)的針對第二腫瘤抗原的腫瘤免疫應(yīng)答。在另一優(yōu)選例中，所述的“增強(qiáng)的針對第一腫瘤抗原的腫瘤免疫應(yīng)答”指與用所述第一腫瘤抗原進(jìn)行初次免疫施用并用所述第一腫瘤抗原再次免疫施用的對照中的針對第一腫瘤抗原的腫瘤免疫應(yīng)答水平y(tǒng)c相比，步驟(c)中用所述第二腫瘤抗原進(jìn)行初次免疫施用并用所述第一腫瘤抗原再次免疫施用的哺乳動物對象中的針對第一腫瘤抗原的腫瘤免疫應(yīng)答水平y(tǒng)v顯著高于yc。在另一優(yōu)選例中，所述的“yv顯著高于yc”指yv/yc的比值r1≥1.5，較佳地≥2，更佳地≥5，更佳地≥10，最佳地≥20。在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤免疫應(yīng)答水平為免疫的哺乳動物t細(xì)胞中抗原特異性cd8+t細(xì)胞的數(shù)量和/或比例。更佳地，所述的腫瘤免疫應(yīng)答水平包括：用第一種抗原體外刺激哺乳動物t細(xì)胞后檢測細(xì)胞因子(如伽瑪干擾素)的分泌水平，或者用主要組織相容性復(fù)合體(mhc)-抗原表位多肽的四聚體或者多聚體經(jīng)流式細(xì)胞儀分析抗原特異性cd8+t細(xì)胞的數(shù)量和比例。在另一優(yōu)選例中，所述的t為4-45，較佳地t為5-30，更佳地t為6-25，最佳地t為7-21。本發(fā)明第十六方面提供了一種預(yù)防或治療黑色素瘤的方法，包括給需要的對象施用適量的本發(fā)明第一方面所述的抗原肽或其衍生多肽、本發(fā)明第三方面所述的肽集合、本發(fā)明第四方面所述的融合載體蛋白、或本發(fā)明第十四方面所述的藥物組合物。應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附圖說明圖1顯示了佐劑al(oh)3與抗原肽免疫h(yuǎn)la-a2小鼠后檢測的免疫反應(yīng)的情況。佐劑al(oh)3與抗原肽免疫h(yuǎn)la-a2小鼠兩次。第一天對小鼠第一次免疫，第八天對小鼠第二次免疫，在第十五天的時候處死小鼠，取脾臟細(xì)胞，在體外用對應(yīng)的天然抗原和突變抗原及性能刺激(10-6m)，檢測ifnγ+cd8+t細(xì)胞比例，根據(jù)其數(shù)值做出統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖2顯示了將樹突狀細(xì)胞(dc)荷載抗原肽與佐劑al(oh)3混合抗原肽聯(lián)合使用進(jìn)行小鼠免疫后檢測的小鼠反應(yīng)的情況。在第一天的時候用dc荷載突變抗原肽免疫h(yuǎn)la-a2小鼠，在第五天的時候用佐劑al(oh)3混合原始抗原肽進(jìn)行第二次免疫，在第十二天的時候用佐劑al(oh)3混合原始抗原肽進(jìn)行第三次免疫，在第十六天的時候處死小鼠，取脾臟細(xì)胞，在體外用對應(yīng)的天然抗原和突變抗原刺激(10-6m)，檢測ifnγ+cd8+t細(xì)胞比例，根據(jù)其數(shù)值做出統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖3顯示了在抗原肽免疫的時候通過野生型李斯特菌(lm-wt)感染，給予小鼠一炎癥性環(huán)境后，根據(jù)檢測到的小鼠的免疫反應(yīng)情況作圖表。在第一天用抗原肽免疫小鼠的時候，通過尾靜脈注射5000cfu的野生型李斯特菌，通過李斯特菌感染小鼠提供炎癥性環(huán)境，在第八天的時候處死小鼠，取脾臟細(xì)胞，在體外用對應(yīng)的天然抗原和突變抗原刺激(10-6m)，檢測ifnγ+cd8+t細(xì)胞比例，根據(jù)其數(shù)值做出統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖4顯示了在抗原肽免疫小鼠的時候通過淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(lcmv)感染，引起炎癥反應(yīng)，檢測小鼠在這種條件下的免疫反應(yīng)情況。在第一天用抗原肽免疫小鼠的時候，通過腹腔注射2x105pfu的病毒，在第八天的時候處死小鼠，取脾臟細(xì)胞在體外用對應(yīng)的天然抗原和突變抗原刺激(10-6m)，檢測ifnγ+cd8+t細(xì)胞比例，根據(jù)其數(shù)值做出統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖5a顯示了用樹突狀細(xì)胞(dc)荷載抗原肽與佐劑al(oh)3混合抗原肽聯(lián)合使用，對小鼠免疫后檢測小鼠的反應(yīng)情況。在第一天的時候用dc荷載突變抗原肽g3-1免疫h(yuǎn)la-a2小鼠，在第五天的時候用佐劑al(oh)3混合原始抗原肽g3進(jìn)行第二次免疫，在第十二天的時候用佐劑al(oh)3混合原始抗原肽g3進(jìn)行第三次免疫，在第十六天的時候處死小鼠，取脾臟細(xì)胞在體外用對應(yīng)的天然抗原肽刺激(10-6m)，檢測ifnγ+cd8+t細(xì)胞比例，根據(jù)其數(shù)值做出統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖5b顯示了佐劑al(oh)3與抗原肽免疫h(yuǎn)la-a2小鼠后的免疫反應(yīng)情況。佐劑al(oh)3與突變抗原肽免疫h(yuǎn)la-a2小鼠兩次。第一天免疫小鼠，用佐劑al(oh)3混合突變抗原肽g7-22的組合進(jìn)行免疫，在第八天的時候?qū)π∈蟮诙蚊庖?，同樣使用佐劑al(oh)3混合突變抗原肽g7-22的組合，在第十五天的時候處死小鼠，取脾臟細(xì)胞在體外用對應(yīng)的天然抗原肽刺激(10-6m)，檢測ifnγ+cd8+t細(xì)胞比例，根據(jù)其數(shù)值做出統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖6顯示了用dc荷載突變肽g1-2免疫小鼠以及佐劑al(oh)3混合突變抗原肽免疫小鼠后的免疫反應(yīng)的對比情況。第一天用佐劑混合突變抗原肽g1-2進(jìn)行第一次免疫，在第八天的時候?qū)τ诘谝淮蚊庖吆蟮男∈笸瑯佑米魟┗旌贤蛔兛乖膅1-2進(jìn)行第二次免疫，同一天用dc荷載突變肽g1-2進(jìn)行另一批對照小鼠的第一次免疫，在對照小鼠第一次免疫后的第八天處死小鼠，取脾臟細(xì)胞在體外用天然抗原肽g1刺激(10-6m)，檢測ifnγ+cd8+t細(xì)胞比例，根據(jù)其數(shù)值做出統(tǒng)計(jì)結(jié)果。具體實(shí)施方式發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，意外的發(fā)現(xiàn)，通過大量篩選和實(shí)驗(yàn)，篩出了一系列可引發(fā)針對表達(dá)gas7蛋白的腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)的抗原肽。具體地，發(fā)明人設(shè)計(jì)了一系列的野生型的抗原肽(基礎(chǔ)肽)及其相對應(yīng)的突變肽，通過組合使用基礎(chǔ)肽和突變肽，從而增強(qiáng)抗腫瘤的免疫反應(yīng)，有效激活識別天然腫瘤抗原的t細(xì)胞，并有效提高其親和力，誘導(dǎo)產(chǎn)生對于天然肽更強(qiáng)的的交叉免疫反應(yīng)。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。gas7蛋白(生長休止蛋白7)gas7(growtharrest-specific7gene)在神經(jīng)元的發(fā)育以及突觸神經(jīng)遞質(zhì)的釋放方面起到重要的作用。gas7在許多腫瘤如黑色素腫瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤中表達(dá)，這使得gas7作為一個潛在的靶點(diǎn)用于腫瘤的免疫治療方面的研究。與原始抗原相比，突變抗原能誘導(dǎo)產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫反應(yīng)，而原始抗原由于自身的免疫耐受性往往產(chǎn)生的免疫反應(yīng)較弱。gas7蛋白的抗原肽在本發(fā)明中，發(fā)明人篩出了一系列可引發(fā)針對表達(dá)gas7蛋白的腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)的抗原肽，包括野生型的抗原肽(基礎(chǔ)肽)和突變型的抗原肽,如seqidno.:1-17所示的抗原肽及其衍生多肽。如本文所用，術(shù)語“第二腫瘤抗原”指與所述第一腫瘤免疫抗原同源且交叉的多肽或其免疫原性片段。例如，當(dāng)seqidno.:1為第一腫瘤抗原時，一種第二腫瘤抗原是seqidno.:2或3。如本文所用，術(shù)語“抗原表位(肽)”指擬誘導(dǎo)動物產(chǎn)生免疫反應(yīng)的其它蛋白的一段肽。通常，抗原表位指免疫反應(yīng)擬靶向的肽段，較佳地來源于哺乳動物(如人)蛋白的一段肽。如本文所用，術(shù)語“野生型抗原”、“基礎(chǔ)肽”、“天然抗原”、“第一腫瘤抗原”、“原始抗原肽”、“原始肽”可互換使用，均指突變前的天然的抗原肽。如本文所用，術(shù)語“突變抗原”、“突變肽”、“第二種瘤抗原”可互換使用，均指在天然抗原肽的基礎(chǔ)上進(jìn)行1個或多個氨基酸突變，從而得到增強(qiáng)抗腫瘤的免疫反應(yīng)的突變的抗原肽。本發(fā)明還提供seqidno.：1-17所示的蛋白或肽的類似物。這些類似物與天然的肽差別可以是氨基酸序列上的差異，也可以是不影響序列的修飾形式上的差異，或者兼而有之。這些肽包括天然或誘導(dǎo)的遺傳變異體。誘導(dǎo)變異體可以通過各種技術(shù)得到，如通過輻射或暴露于誘變劑而產(chǎn)生隨機(jī)誘變，還可通過定點(diǎn)誘變法或其他已知分子生物學(xué)的技術(shù)。類似物還包括具有不同于天然l-氨基酸的殘基(如d-氨基酸)的類似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的類似物。應(yīng)理解，本發(fā)明的肽并不限于上述例舉的代表性的肽。修飾(通常不改變一級結(jié)構(gòu))形式包括：體內(nèi)或體外的肽的化學(xué)衍生形式如乙?；螋然?。修飾還包括糖基化，如那些在肽的合成和加工中或進(jìn)一步加工步驟中進(jìn)行糖基化修飾而產(chǎn)生的肽。這種修飾可以通過將肽暴露于進(jìn)行糖基化的酶(如哺乳動物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修飾形式還包括具有磷酸化氨基酸殘基(如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨酸，磷酸蘇氨酸)的序列。還包括被修飾從而提高了其抗蛋白水解性能或優(yōu)化了溶解性能的肽。在本發(fā)明中，“seqidno：1-17所示的蛋白保守性變異肽”指與seqidno：1-17的氨基酸序列相比，有至多3個，更佳地至多2個氨基酸被性質(zhì)相似或相近的氨基酸所替換而形成肽。這些保守性變異肽最好根據(jù)表4進(jìn)行氨基酸替換而產(chǎn)生。表4如本文所用，術(shù)語“肽集合”所述的肽集合由選自下組的肽或多肽構(gòu)成：至少兩種選自本發(fā)明第一方面所述的短肽或其衍生多肽。在一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的肽集合中至少含有2、3或4種選自本發(fā)明第一方面所述的短肽或其衍生多肽，優(yōu)選地，所述肽集合至少含有2、3或4種選自seqidno.:1-17所示的短肽或其衍生多肽。在一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的肽集合中至少含有seqidno.:1和seqidno.:2-3任一所示的短肽。在一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的肽集合中至少含有seqidno.:4和seqidno.:5-7任一所示的短肽。在一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的肽集合中至少含有seqidno.:8和seqidno.:9所示的短肽。在一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的肽集合中至少含有seqidno.:14和seqidno.:15所示的短肽。在一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的肽集合中至少含有seqidno.:16和seqidno.:17所示的短肽。如本文所用，“分離的”是指物質(zhì)從其原始環(huán)境中分離出來(如果是天然的物質(zhì)，原始環(huán)境即是天然環(huán)境)。如活體細(xì)胞內(nèi)的天然狀態(tài)下的多肽是沒有分離純化的，但同樣的多肽如從天然狀態(tài)中同存在的其他物質(zhì)中分開，則為分離純化的。如本文所用，“分離的肽”是指本發(fā)明多肽基本上不含天然與其相關(guān)的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質(zhì)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化本發(fā)明多肽。基本上純化的多肽(融合蛋白)在非還原聚丙烯酰胺凝膠上能產(chǎn)生單一的主帶。在本發(fā)明中，本發(fā)明多肽包括基礎(chǔ)肽和突變肽，具體地，本發(fā)明多肽包括seqidno.:1-17所示的抗原肽。本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優(yōu)選重組多肽。一旦鑒定獲得了相關(guān)的肽序列，就可以用重組法來大批量地獲得相關(guān)肽序列。這通常是將其克隆入載體，再轉(zhuǎn)入細(xì)胞，然后通過常規(guī)方法從增殖后的宿主細(xì)胞中分離得到相關(guān)肽(融合蛋白)。此外，還可用化學(xué)方法直接合成相關(guān)肽序列片段。gas7蛋白天然抗原及其同源且交叉的突變抗原的組合在本發(fā)明中，將gas7蛋白的天然抗原(野生型抗原)和系列突變抗原應(yīng)用于t細(xì)胞反應(yīng)的研究。例如，gas7蛋白263-272位的氨基酸序列kqlasryasv(g1)能被mhc分子hla-a2識別并遞呈給t細(xì)胞，從而引起強(qiáng)烈的抗原特異性cd8+t細(xì)胞反應(yīng)。在天然抗原g1序列基礎(chǔ)上根據(jù)氨基酸對應(yīng)位置進(jìn)行1個或2個或3個氨基酸突變，獲得一系列突變抗原。如表2所述，以g1及其代表性的突變抗原為例，所述g1及其代表性的突變抗原包括：表2天然抗原g1kqlasryasvseqidno.:1突變抗原g1-1kllasryasvseqidno.:2突變抗原g1-2fllasryasvseqidno.:3這組突變抗原和天然抗原對小鼠抗原遞呈細(xì)胞mhc分子hla-a2具有相似的親和力，而對cd8+t細(xì)胞受體的功能性親和力則不同。g1用于模擬第一(腫瘤)抗原，而g1-2是優(yōu)選的同源且交叉的第二(腫瘤)抗原。mhc細(xì)胞hla-a2人的hlai類分子參與將抗原肽遞程給cd8+細(xì)胞毒活性的t淋巴細(xì)胞的過程，這對于產(chǎn)生抗腫瘤的免疫反應(yīng)是至關(guān)重要的。此外，hla-a2是人群中表達(dá)頻率最高的hlai類分子，hla-a*02:01是hla-a2變異體中分布頻率最高的。因此，本發(fā)明采用hla-a2(hla-a*02:01)轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行抗原肽的免疫反應(yīng)強(qiáng)弱的鑒定。hla-a2轉(zhuǎn)基因小鼠在小鼠的脾臟等部位表達(dá)人類白細(xì)胞分化抗原。目前，這種轉(zhuǎn)基因小鼠作為人源化的小鼠模型用于檢測分析hla-a2限制性的免疫反應(yīng)。此外，由于免疫耐受的存在，機(jī)體對于原始肽的反應(yīng)水平較低，因此本發(fā)明采用突變肽免疫后，再用原始肽進(jìn)行增強(qiáng)免疫反應(yīng)，可顯著提高機(jī)體對于原始肽的免疫反應(yīng)。這種將突變肽與原始肽結(jié)合起來的方法用于研究抗原肽的反應(yīng)情況，為進(jìn)行腫瘤的免疫治療和預(yù)防的研究方面提供了參考依據(jù)和實(shí)驗(yàn)方法策略。藥物組合物和給藥方式本發(fā)明還提供了一種藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物可以是治療性的或預(yù)防性的(如疫苗)。本發(fā)明的藥物組合物包括有效量的本發(fā)明的表位肽或肽集合、或用該短肽致敏的樹突狀細(xì)胞或用樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的t細(xì)胞，以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。在本發(fā)明中，這些(疫苗)組合物包含免疫性抗原(包括本發(fā)明抗原肽、肽集合或其衍生物)，并且通常與“藥學(xué)上可接受的載體”組合，這些載體包括本身不誘導(dǎo)產(chǎn)生對接受該組合物的個體有害的抗體的任何載體。合適的載體的例子包括(但并不限于)蛋白質(zhì)、脂質(zhì)凝集物(如油滴或脂質(zhì)體)等。這些載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。另外，這些載體可起免疫刺激劑(“佐劑”)作用。此外，本發(fā)明的(疫苗)組合物還可含有額外的佐劑。代表性的疫苗佐劑包括(但并不限于)以下種類：無機(jī)佐劑，如氫氧化鋁，明礬等；合成佐劑，如人工合成的雙鏈多聚核苷酸(雙鏈多聚腺苷酸、尿苷酸)、左旋咪唑、異丙肌苷等；油劑，如弗氏佐劑、花生油乳化佐劑、礦物油、植物油等。通常，可將疫苗組合物或免疫原性組合物制成可注射劑，例如液體溶液或懸液；還可制成在注射前適合配入溶液或懸液、液體賦形劑的固體形式。該制劑還可乳化或包封在脂質(zhì)體中，以增強(qiáng)佐劑效果。組合物可制成單元或多元劑型。各劑型包含為了產(chǎn)生所期望的治療效應(yīng)而計(jì)算出預(yù)定量的活性物質(zhì)，以及合適的藥劑學(xué)賦形劑。配制好的藥物組合物可以通過常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括(但并不限于)：靜脈內(nèi)、瘤內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、癌旁、或局部給藥。使用(疫苗)組合物時，是將安全有效量的本發(fā)明表位肽或肽集合施用于人，其中該安全有效量通常至少約1微克肽/千克體重，而且在大多數(shù)情況下不超過約8毫克肽/千克體重，較佳地該劑量是約1微克-1毫克肽/千克體重。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)包括：(1)本發(fā)明首次篩選了一系列可引發(fā)針對表達(dá)gas7蛋白的腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)的抗原肽。(2)本發(fā)明篩選出的抗原肽可以有效激發(fā)機(jī)體針對腫瘤抗原的免疫反應(yīng)。(3)本發(fā)明采用突變肽免疫后，再用原始肽進(jìn)行增強(qiáng)免疫反應(yīng)，可顯著提高機(jī)體對于原始肽的免疫反應(yīng)。這種將突變肽與原始肽結(jié)合起來的方法用于研究抗原肽的反應(yīng)情況，為使用gas7抗原肽用于黑色素腫瘤的免疫預(yù)防以及免疫治療方面提供了依據(jù)和參考。(4)本發(fā)明應(yīng)用hla-a2轉(zhuǎn)基因小鼠用于人的相關(guān)抗原肽的鑒定，這對于間接篩選人的優(yōu)勢抗原肽，進(jìn)而對于腫瘤等其他疾病的預(yù)防以及治療性研究方面具有重要的意義。(5)本發(fā)明應(yīng)用不同的免疫策略進(jìn)行g(shù)as7抗原肽的研究，包括抗原肽的鑒定以及提高對于原始肽交叉反應(yīng)的研究，這對于應(yīng)用這些抗原肽用于腫瘤的免疫治療以及免疫預(yù)防方面提供了基礎(chǔ)的研究與技術(shù)方法。此外，本發(fā)明還提供了應(yīng)用hla-a2轉(zhuǎn)基因小鼠用于鑒定人的抗原肽的模型，這對于探索篩選人的相關(guān)優(yōu)勢抗原，進(jìn)一步應(yīng)用于臨床等方面具有重要的意義。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如sambrook等人，分子克?。簩?shí)驗(yàn)室手冊(newyork:coldspringharborlaboratorypress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。所有試劑除非另外說明，否則均為市售。實(shí)驗(yàn)動物：hla-a2轉(zhuǎn)基因小鼠購于jacksonlaboratory公司。通用方法李斯特菌(lm)的培養(yǎng)和感染(1)從lm-wttsb固體平板上挑取兩個單克隆菌落，加至帶有3mltsb液體培養(yǎng)基的搖菌管中，37℃、230rpm進(jìn)行過夜培養(yǎng)。(2)在3ml液體培養(yǎng)基中加入150ul過夜培養(yǎng)的lm培養(yǎng)液，37℃、230rpm進(jìn)行培養(yǎng)。(3)檢測lm菌的od600值(4)12000rpm、4℃、5min離心收集細(xì)菌，并用預(yù)冷的1xpbs兩遍，最后重懸至1ml并使得od600～1/ml(5)用1xpbs作一系列的濃度梯度稀釋，共稀釋10-6，最后取200ul即5000cfu進(jìn)行尾靜脈注射淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(lcmv)的培養(yǎng)和感染。淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(lcmv)培養(yǎng)和感染將l-929細(xì)胞在mem培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基中添加的有谷氨酰胺、青霉素、鏈霉素、10％胎牛血清。儲存的病毒4×107pfu,按照1:33進(jìn)行稀釋，之后取1ml添加到培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中l(wèi)-929的細(xì)胞數(shù)在1-1.5×106范圍內(nèi)，37℃孵育1.5-2h，之后補(bǔ)加新鮮的mem培養(yǎng)基5ml，培養(yǎng)一周左右，收集病毒，通過空斑計(jì)數(shù)法計(jì)量病毒的滴度，lcmv感染小鼠，腹腔注射，劑量為2×105pfu/小鼠。al(oh)3與抗原肽混合后免疫小鼠的方法al(oh)313.0mg/ml儲存濃度；用1xpbs10倍稀釋(1.3mg/ml)；終濃度:10ug/ml。各抗原肽10ug/ul儲存濃度；50ug/小鼠f.p.25ul/后腳掌即50ul/小鼠.每只小鼠免疫量：1.0.3846ul10倍稀釋的al(oh)3和24.615ul1xpbs到25ul.混勻后室溫放置30min,作為溶液a。2.取5ul合成的抗原肽和20ulpbs至25ul，作為溶液b。3.將溶液a和b混勻，室溫放置30min。4.進(jìn)行footpad免疫。檢測方法(1)收集細(xì)胞于流式管中，加入facsbuffer1ml/管，4℃300g離心5分鐘棄上清；(2)fcblocker用facsbuffer稀釋，每管加入50μl，震蕩均勻，冰上避光靜置15min。(3)先染胞外marker：anti-cd8，anti-tcrβ；抗體用facsbuffer稀釋后，每管加入50μl，最終用1/200的比例進(jìn)行染色，振蕩均勻，冰上避光30分鐘。(4)加入1mlfacsbuffer/管，振蕩細(xì)胞洗一遍，4℃300g離心5分鐘棄上清。(5)輕輕振松細(xì)胞沉淀，加入1mlbd的破膜固定buffer，充分振蕩，冰上處理至少3h，中間每30min振蕩一次。(6)加入bd的1×perm/washbuffer1ml，充分振蕩洗一遍，4℃300g離心5分鐘棄上清；重復(fù)一遍此步驟。(7)加入fcblocker，用1×perm/washbuffer稀釋，方法與終濃度同步驟(2)。(8)染胞內(nèi)，anti-ifnγ，用1×perm/washbuffer稀釋，方法與染色比例同步驟(3)。(9)重復(fù)步驟(6)，洗兩遍。(10)每管加入300μlfacsbuffer，振松細(xì)胞后,用流式細(xì)胞分析儀fortessa或者lsrii檢測。實(shí)施例1gas7抗原肽的合成及其與mhc分子hla-a2結(jié)合親和力的測定通過大量篩選，篩出了一系列針對gas7的cd8+t細(xì)胞表位的天然抗原肽，并在天然抗原肽的一定的氨基酸位點(diǎn)上進(jìn)行突變，得到相對應(yīng)的突變肽。用iedbt細(xì)胞表位分析工具預(yù)測了這些天然抗原肽和突變抗原肽與hla-a2結(jié)合的親和力情況。之后，通過生物肽合成公司(金斯瑞公司)合成了gas7的突變肽以及天然抗原肽。合成的gas7抗原肽信息以及預(yù)測的抗原肽與hla-a2結(jié)合親的和力情況如表3所示。表3其中，g1、g2、g3、g4、g7-1、g7-2是原始肽，g1-1、g1-2、g2-1、g2-2、g2-3、g3-1、g3-2、g4-1、g4-2、g7-12、g7-22為突變肽，annic50值或者percentilerank(百分?jǐn)?shù)秩)值越低，代表結(jié)合性越好。從表3可以看出，g1組(g1、g1-1、g1-2)，g2組(g2、g2-1、g2-2、g2-3)，g3組的g3、g3-1以及g7-1、g7-12、g7-2會有較好的免疫反應(yīng)。實(shí)施例2使用不同的免疫策略免疫h(yuǎn)la-a2轉(zhuǎn)基因小鼠，從而檢測小鼠的免疫反應(yīng)情況策略a使用佐劑al(oh)3與抗原肽混合后免疫小鼠兩次，在第二次免疫后于固定的時間點(diǎn)(在第二次免疫后的第七天)檢測小鼠的免疫反應(yīng)情況，檢測結(jié)果如圖1所示。結(jié)果顯示，突變抗原肽g3-1以及g7-22的反應(yīng)水平顯著高于其他抗原肽。結(jié)果表明，突變抗原肽g3-1以及g7-22屬于反應(yīng)較好的一類突變抗原肽，可用于進(jìn)一步的研究分析。策略b發(fā)明人對dc(樹突狀細(xì)胞)荷載突變肽后，再用原始肽與佐劑al(oh)3混合免疫小鼠兩次后，在一定的時間點(diǎn)(在第二次免疫后的第七天)對小鼠的反應(yīng)情況進(jìn)行了研究。結(jié)果如圖2所示。結(jié)果顯示，分泌ifnγ的cd8陽性的細(xì)胞的比例(反應(yīng)水平)較低，結(jié)果表明，采用策略b鑒定的抗原肽的反應(yīng)水平較低，這種鑒定的方法不適于進(jìn)一步的研究探索。策略c采用給小鼠體外誘導(dǎo)成熟的dc荷載抗原肽后，給予小鼠李斯特菌(lm)感染或者淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(lcmv)感染，創(chuàng)造一個炎癥環(huán)境，從而檢測小鼠的抗原肽特異性的免疫反應(yīng)情況。結(jié)果如圖3和4所示。結(jié)果顯示，在不同的炎癥環(huán)境下，抗原肽的免疫反應(yīng)有所區(qū)別，其中，突變肽g3-1以及g1-2具有較好的免疫反應(yīng)，而原始肽g3和g1反應(yīng)水平較低。用以上不同的免疫策略進(jìn)行抗原肽免疫反應(yīng)強(qiáng)弱的鑒定，旨在進(jìn)一步篩出優(yōu)勢抗原肽群。經(jīng)測定，確認(rèn)突變肽g3-1、g1-2、g7-22、g7-12相較于其他突變肽能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較好的免疫反應(yīng)，屬于優(yōu)勢抗原肽群，可以用于進(jìn)一步的研究工作。實(shí)施例3不同免疫策略對于提高抗原肽的交叉反應(yīng)情況的檢測用流式細(xì)胞儀對在體外用抗原肽刺激脾臟細(xì)胞后產(chǎn)生ifnγ的cd8陽性的細(xì)胞比例進(jìn)行分析，并對下述三組(g3a/g72a、g3b/g72b、g3c/g72c)原始肽g3、g7-2的交叉反應(yīng)情況進(jìn)行檢測。g3a/g72a:dc荷載突變肽免疫一次后，檢測小鼠對于原始肽g3、g7-2的交叉免疫反應(yīng)情況。g3b/g72b：dc荷載突變肽免疫后，再用原始肽與佐劑al(oh)3混合免疫小鼠兩次后，檢測小鼠分別對原始肽g3、g7-2特異性的免疫反應(yīng)情況。g3c/g72c：佐劑al(oh)3與突變肽混合免疫小鼠兩次后，分別檢測對原始肽g3、g7-2特異性的免疫反應(yīng)情況。結(jié)果如圖5a和5b所示。結(jié)果顯示，相較于dc荷載突變抗原免疫一次再用原始肽加上佐劑al(oh)3混合后免疫小鼠兩次或者只是使用dc荷載突變抗原免疫一次，佐劑al(oh)3與突變肽混合后免疫小鼠兩次后能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生對于天然肽更強(qiáng)的交叉免疫反應(yīng)。發(fā)明人進(jìn)一步用dc-g1-2組對dc荷載g1-2免疫小鼠后，對天然肽g1的交叉反應(yīng)情況進(jìn)行檢測；用g1-2b組對佐劑al(oh)3與突變肽混合免疫小鼠兩次后，原始肽g3/g7-2特異性的反應(yīng)情況進(jìn)行檢測。結(jié)果如圖6所示。結(jié)果顯示，佐劑al(oh)3與突變肽混合免疫小鼠兩次后，誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生對天然肽的交叉反應(yīng)水平顯著高于dc直接荷載突變抗原產(chǎn)生對天然肽的交叉反應(yīng)水平。綜上，佐劑al(oh)3與突變肽混合免疫小鼠，能夠明顯提高小鼠對于天然肽的交叉免疫反應(yīng)水平，這一策略相較于dc荷載抗原肽直接免疫或者dc荷載突變肽后用佐劑al(oh)3混合天然肽進(jìn)行免疫兩次的方法更優(yōu)異，潛在的可以用于腫瘤的預(yù)防或者是免疫治療的相關(guān)研究。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。當(dāng)前第1頁12