本發(fā)明屬于生化行業(yè)領(lǐng)域，特別涉及一種利用酶解法制備肝素鈉的方法。
背景技術(shù)：
肝素是一種廣泛存在于哺乳動物組織中的黏多糖，主要存在與肥大細(xì)胞中，具有抗凝血作用，被廣泛用于手術(shù)和腦血栓、心肌梗死等的治療。肝素的分子量大約3000—37500，對商品肝素的研究提示至少有21種分子個體，肝素鈉是肝素的鈉鹽。肝素鈉作為天然抗凝血物質(zhì)受到世界各國的重視.也是我國主要的出口藥物之一，隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)肝素鈉不但有抗凝、抗血栓形成和調(diào)節(jié)血脂的作用，還具有抗炎、抗過敏、抗病毒、抗癌等功能。肝素鈉粗品是我國的傳統(tǒng)出口產(chǎn)品，在國際上占有重要的地位。但是傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝落后，肝素鈉產(chǎn)率低，肝素鈉產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種療效快、治愈率高的利用酶解法制備肝素鈉的方法。
本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：
一種利用酶解法制備肝素鈉的方法，包括以下步驟：
(1)酶解:取小腸粘膜，加入腸衣專用鹽至料液的鹽度為3.0-4.0％，與水一起置于酶解罐中，調(diào)節(jié)ph7.5-8，每4kg小腸粘膜加入胰酶0.8g,加熱至溫度45-55℃，保溫1小時后，過80目濾膜，收集過濾液，在濾液中加入2709堿性蛋白酶，保溫1小時；
(2)升溫:步驟(1)結(jié)束后，將步驟(1)中酶解中的濾液加熱至溫度60-65℃，保溫5分鐘，過80目濾膜，收集過濾液；
(3)樹脂吸附:將步驟(2)中所得過濾液加入到吸附罐中，每40l濾液中加4-6g樹脂，進(jìn)行攪拌，然后降溫至55℃，保溫55℃并攪拌吸附8小時后過濾，放出廢液；
(4)洗脫:步驟(3)結(jié)束后，收集過濾后的樹脂，每克樹脂中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24％的飽和鹽水20ml，保持55℃洗脫，收集洗脫液；
(5)醇沉:將步驟(4)中收集的洗脫液過濾，然后移入沉淀罐中，加入乙醇沉淀肝素鈉；
(6)烘干:步驟(5)結(jié)束后，將收集的沉淀物過濾干凈進(jìn)行烘干脫水，即可得到肝素鈉。
其中，步驟(1)中所述小腸粘膜與腸衣專用鹽的質(zhì)量比例為100:3-4；小腸粘膜與2709堿性蛋白酶的質(zhì)量比為4000:1-2。
其中，步驟(1)中所述小腸粘膜與水的質(zhì)量比1:9。
其中，步驟(1)中所述胰酶與2709堿性蛋白酶的重量比4:5-10。
其中，步驟(2)中所述步驟(1)中酶解中的濾液的溫度為50-55℃。
傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝在肝素鈉生產(chǎn)過程中，往往對料渣不做處理直接倒掉。而料渣中解離不完全的肝素鈉也料渣一起倒掉，致使產(chǎn)品收率低。本發(fā)明通過酶解方法將肝素鈉-蛋白復(fù)合體中的肝素鈉進(jìn)行解離，然后通過升溫、樹脂吸附、洗脫、醇沉、烘干等步驟將肝素鈉完全提取出來，提高肝素鈉收率。采用酶解可以適當(dāng)降低鹽濃度，減輕污染，降低蒸汽用量和降溫水用量。大生產(chǎn)可以采用豬胰臟活化后使用，每6噸反應(yīng)液豬胰臟成本100元左右。豬胰臟成本和蒸汽成本可以抵消。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明能解決單酶解工藝中酶解液活性低的問題，采用酶解方法將肝素鈉-蛋白復(fù)合體中的肝素鈉進(jìn)行解離，然后通過升溫、樹 脂吸附、洗脫、醇沉、烘干等步驟將肝素鈉完全提取出來，提高肝素鈉收率。
具體實施方式
實施例1：
一種利用酶解法制備肝素鈉的方法，通過下述步驟實現(xiàn)：
(1)酶解:取豬肝素車間得小腸粘膜500kg，加入腸衣專用鹽至料液的鹽度為3.5％，與水一起置于酶解罐中，調(diào)節(jié)ph7.8，加胰酶100g,加熱至溫度升至51℃，保溫1小時后，過80目膜過濾，收集過濾液，加入2709堿性蛋白酶125g，保溫1小時。
(2)升溫:步驟(1)結(jié)束后，加熱至溫度升至63℃，保溫5分鐘，過80目膜過濾，收集過濾液。
(3)樹脂吸附:步驟(2)結(jié)束后，將上述所得過濾液加入到吸附罐中，攪拌，降溫至55℃，加500g樹脂，保溫55℃，攪拌吸附8小時，過濾，放出廢液。
(4)洗脫:步驟(3)結(jié)束后，收集過濾樹脂，各加飽和鹽水694.4ml，保持55℃洗脫。
(5)醇沉:步驟(4)結(jié)束后，反復(fù)沖洗過濾后的樹脂，將沖洗干凈的樹脂，倒入到洗脫器，收集洗脫液，將洗脫液過濾移入沉淀罐中，加入酒精沉淀肝素鈉。
(6)烘干:步驟(5)結(jié)束后，將收集的沉淀物過濾干凈進(jìn)行烘干脫水，即可得到肝素鈉。
實施例2：
一種利用酶解法制備肝素鈉的方法，通過下述步驟實現(xiàn)：
(1)酶解:取豬肝素車間得小腸粘膜600kg，加入腸衣專用鹽至料液的鹽 度為3.0％，與水一起置于酶解罐中，調(diào)節(jié)ph7.5，加胰酶120g,加熱至溫度升至45℃，保溫1小時后，過80目膜過濾，收集過濾液，加入2709堿性蛋白酶300g，保溫1小時。
(2)升溫:步驟(1)結(jié)束后，加熱至溫度升至60℃，保溫5分鐘，過80目膜過濾，收集過濾液。
(3)樹脂吸附:步驟(2)結(jié)束后，將上述所得過濾液加入到吸附罐中，攪拌，降溫至55℃，加650g樹脂，保溫55℃，攪拌吸附8小時，過濾，放出廢液。
(4)洗脫:步驟(3)結(jié)束后，收集過濾樹脂，各加飽和鹽水903ml，保持55℃洗脫。
(5)醇沉:步驟(4)結(jié)束后，反復(fù)沖洗過濾后的樹脂，將沖洗干凈的樹脂，倒入到洗脫器，收集洗脫液，將洗脫液過濾移入沉淀罐中，加入酒精沉淀肝素鈉。
(6)烘干:步驟(5)結(jié)束后，將收集的沉淀物過濾干凈進(jìn)行烘干脫水，即可得到肝素鈉。
實施例3：
一種利用酶解法制備肝素鈉的方法，通過下述步驟實現(xiàn)：
(1)酶解:取豬肝素車間得小腸粘膜800kg，加入腸衣專用鹽至料液的鹽度為4.0％，與水一起置于酶解罐中，調(diào)節(jié)ph8，加胰酶160g,加熱至溫度升至55℃，保溫1小時后，過80目膜過濾，收集過濾液，加入2709堿性蛋白酶300g，保溫1小時。
(2)升溫:步驟(1)結(jié)束后，加熱至溫度升至65℃，保溫5分鐘，過80目膜過濾，收集過濾液。
(3)樹脂吸附:步驟(2)結(jié)束后，將上述所得過濾液加入到吸附罐中，攪拌，降溫至55℃，加1200g樹脂，保溫55℃，攪拌吸附8小時，過濾，放出廢液。
(4)洗脫:步驟(3)結(jié)束后，收集過濾樹脂，各加飽和鹽水1667ml，保持55℃洗脫。
(5)醇沉:步驟(4)結(jié)束后，反復(fù)沖洗過濾后的樹脂，將沖洗干凈的樹脂，倒入到洗脫器，收集洗脫液，將洗脫液過濾移入沉淀罐中，加入酒精沉淀肝素鈉。
(6)烘干:步驟(5)結(jié)束后，將收集的沉淀物過濾干凈進(jìn)行烘干脫水，即可得到肝素鈉。