本發(fā)明屬于核酸擴(kuò)增
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一組用于檢測飛行員lod易感基因多態(tài)性位點及檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
：飛行人員的選拔是世界各國都十分重要的問題。國內(nèi)外相關(guān)研究表明，科學(xué)的醫(yī)學(xué)選拔不僅能夠提高飛行人員最終成飛的預(yù)測效率和提高飛機飛行安全，還能大大降低飛行人員訓(xùn)練成本。科學(xué)的醫(yī)學(xué)選拔也能提高飛行安全。因此選拔和訓(xùn)練對建設(shè)高素質(zhì)的飛行人員隊伍具有重要意義。單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism，snp)是由單個核苷酸的改變而引起的dna序列的改變，造成染色體基因組的多樣性。snp分布廣、密度高，已成為繼限制性片段長度多態(tài)性(rflp)標(biāo)志和微衛(wèi)星即短串聯(lián)重復(fù)(str)標(biāo)志后的第三代遺傳標(biāo)志，在腫瘤、糖尿病等復(fù)雜疾病的研究中起重要作用。其中，全基因組關(guān)聯(lián)分析(genomewideassociationstudy，gwas)是研究這類復(fù)雜疾病易感基因的重要手段。飛行人員作為一個特殊群體，其職業(yè)有著高風(fēng)險和高難度的特點，使得他們要承受很大的生理和心理壓力，因而對他們的體質(zhì)和心理健康有著特定的要求。研究表明，不同個體基礎(chǔ)正加速度(+gz)耐力、高空缺氧耐力、認(rèn)識反應(yīng)速度、信息加工能力和突發(fā)性心腦血管疾病的發(fā)生率存在差異，這種差異與遺傳因素有關(guān)。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的第一個目的是提供一種用于檢測飛行員lod易感基因多態(tài)性位點的引物對組。其中，所述飛行員lod易感基因為飛行員遲發(fā)性疾病易感基因，所述飛行員lod易感基因多態(tài)性位點為如下12個snp位點：rs7181866位點、rs6311位點、rs7305115位點、rs4680位點、rs1799983位點、rs5065位點、rs1801133位點、rs3759584位點、rs4340位點、rs11549465位點、rs1800544位點和rs699947位點。這12個snp位點是對飛行員這一特殊群體飛行壽命影響較大的一組位點，主要含有加速度耐力相關(guān)基因、缺氧耐力相關(guān)基因、心理和認(rèn)知相關(guān)基因及心腦血管疾病相關(guān)基因等。所述rs7181866位點為人基因組中如下序列中括號處所示：gatccaacatagaataggagagagt[a/g]cccaaaatgatggtgaagggagacc；所述rs6311位點為人基因組中如下序列中括號處所示：atgtcctcggagtgctgtgagtgtc[c/t]ggcacttccatccaaagccaacagt；所述rs7305115位點為人基因組中如下序列中括號處所示：atggctcagatcccctctacacccc[a/g]gaaccgtgagtacctacattaaagc；所述rs4680位點為人基因組中如下序列中括號處所示：ccagcggatggtggatttcgctggc[a/g]tgaaggacaaggtgtgcatgcctga；所述rs1799983位點為人基因組中如下序列中括號處所示：ccctgctgctgcaggccccagatga[g/t]cccccagaactcttccttctgcccc；所述rs5065位點為人基因組中如下序列中括號處所示：cttgtcctccctggctgttatcttc[a/g]gtactgcaaagagaacacagacata；所述rs1801133位點為人基因組中如下序列中括號處所示：ttgaaggagaaggtgtctgcgggag[c/t]cgatttcatcatcacgcagcttttc；所述rs3759584位點為人基因組中如下序列中括號處所示：ggccttttctcctgtctcatcccca[c/t]ggtcactgcagaggagacacatgcc；所述rs4340位點為人基因組中如下序列中括號處所示：ccatttctctagacctgctgcctat[(288bpindel)/(alu)/-]acagtcacttttatgtggtttcgcc；其中，288bp的插入/缺失序列如序列表中序列38所示；所述rs11549465位點為人基因組中如下序列中括號處所示：gttacgttccttcgatcagttgtca[c/t]cattagaaagcagttccgcaagccc；所述rs1800544位點為人基因組中如下序列中括號處所示：ccgttgcgttctgctccgtcggccc[c/g]gagctgcatggccaactcccagcag；所述rs699947位點為人基因組中如下序列中括號處所示：gccagctgtaggccagaccctggca[a/c]gatctgggtggataatcagactgac。本發(fā)明所提供的用于檢測人基因組中12個snp位點的引物對組，具體由如下1)-12)組成：1)用于檢測所述rs7181866位點的引物對1和引物對2；所述引物對1為如下(a1)或(a2)所示的引物對，所述引物對2為如下(a3)或(a4)所示的引物對：(a1)由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a2)由將序列表中序列1和序列2經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a1)中所述引物對功能相同的引物對；(a3)由序列表中序列1和序列3所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a4)由將序列表中序列1和序列3經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a3)中所述引物對功能相同的引物對；2)用于檢測所述rs6311位點的引物對3和引物對4；所述引物對3為如下(a5)或(a6)所示的引物對，所述引物對4為如下(a7)或(a8)所示的引物對：(a5)由序列表中序列4和序列5所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a6)由將序列表中序列4和序列5經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a5)中所述引物對功能相同的引物對；(a7)由序列表中序列4和序列6所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a8)由將序列表中序列4和序列6經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a7)中所述引物對功能相同的引物對；3)用于檢測所述rs7305115位點的引物對5和引物對6；所述引物對5為如下(a9)或(a10)所示的引物對，所述引物對6為如下(a11)或(a12)所示的引物對：(a9)由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a10)由將序列表中序列7和序列8經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a8)中所述引物對功能相同的引物對；(a11)由序列表中序列7和序列9所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a12)由將序列表中序列7和序列9經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a10)中所述引物對功能相同的引物對；4)用于檢測所述rs4680位點的引物對7和引物對8；所述引物對7為如下(a13)或(a14)所示的引物對，所述引物對8為如下(a15)或(a16)所示的引物對：(a13)由序列表中序列10和序列11所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a14)由將序列表中序列10和序列11經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a13)中所述引物對功能相同的引物對；(a15)由序列表中序列12和序列13所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a16)由將序列表中序列12和序列13經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a15)中所述引物對功能相同的引物對；5)用于檢測所述rs1799983位點的引物對9和引物對10；所述引物對9為如下(a17)或(a18)所示的引物對，所述引物對10為如下(a19)或(a20)所示的引物對：(a17)由序列表中序列14和序列15所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a18)由將序列表中序列14和序列15經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a17)中所述引物對功能相同的引物對；(a19)由序列表中序列14和序列16所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a20)由將序列表中序列14和序列16經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a19)中所述引物對功能相同的引物對；6)用于檢測所述rs5065位點的引物對11和引物對12；所述引物對11為如下(a21)或(a22)所示的引物對，所述引物對12為如下(a23)或(a24)所示的引物對：(a21)由序列表中序列17和序列18所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a22)由將序列表中序列17和序列18經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a21)中所述引物對功能相同的引物對；(a23)由序列表中序列17和序列19所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a24)由將序列表中序列17和序列19經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a23)中所述引物對功能相同的引物對；7)用于檢測所述rs1801133位點的引物對13和引物對14；所述引物對13為如下(a25)或(a26)所示的引物對，所述引物對14為如下(a27)或(a28)所示的引物對：(a25)由序列表中序列20和序列21所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a26)由將序列表中序列20和序列21經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a25)中所述引物對功能相同的引物對；(a27)由序列表中序列20和序列22所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a28)由將序列表中序列20和序列22經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a27)中所述引物對功能相同的引物對；8)用于檢測所述rs3759584位點的引物對15和引物對16；所述引物對15為如下(a29)或(a30)所示的引物對，所述引物對16為如下(a31)或(a32)所示的引物對：(a29)由序列表中序列23和序列24所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a30)由將序列表中序列23和序列24經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a29)中所述引物對功能相同的引物對；(a31)由序列表中序列23和序列25所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a32)由將序列表中序列23和序列25經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a31)中所述引物對功能相同的引物對；9)用于檢測所述rs4340位點的引物對17和引物對18；所述引物對17為如下(a33)或(a34)所示的引物對，所述引物對18為如下(a35)或(a36)所示的引物對：(a33)由序列表中序列26和序列27所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a34)由將序列表中序列26和序列27經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a33)中所述引物對功能相同的引物對；(a35)由序列表中序列26和序列28所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a36)由將序列表中序列26和序列28經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a35)中所述引物對功能相同的引物對；10)用于檢測所述rs11549465位點的引物對19和引物對20；所述引物對19為如下(a37)或(a38)所示的引物對，所述引物對20為如下(a39)或(a40)所示的引物對：(a37)由序列表中序列29和序列30所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a38)由將序列表中序列29和序列30經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a37)中所述引物對功能相同的引物對；(a39)由序列表中序列29和序列31所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a40)由將序列表中序列29和序列31經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a39)中所述引物對功能相同的引物對；11)用于檢測所述rs1800544位點的引物對21和引物對22；所述引物對21為如下(a41)或(a42)所示的引物對，所述引物對22為如下(a43)或(a44)所示的引物對：(a41)由序列表中序列32和序列33所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a42)由將序列表中序列32和序列33經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a41)中所述引物對功能相同的引物對；(a43)由序列表中序列32和序列34所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a44)由將序列表中序列32和序列34經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a43)中所述引物對功能相同的引物對；12)用于檢測所述rs699947位點的引物對23和引物對24；所述引物對23為如下(a45)或(a46)所示的引物對，所述引物對24為如下(a47)或(a48)所示的引物對：(a45)由序列表中序列35和序列36所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a46)由將序列表中序列35和序列36經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a45)中所述引物對功能相同的引物對；(a47)由序列表中序列35和序列37所示的兩條單鏈dna分子組成的引物對；(a48)由將序列表中序列35和序列37經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈dna分子組成的，且與(a47)中所述引物對功能相同的引物對。根據(jù)需要，在所述引物對組中，序列1、序列4、序列7、序列10、序列12、序列14、序列17、序列20、序列23、序列26、序列29、序列32和序列35所示的單鏈dna分子的5’末端可以連接熒光基團(tuán)，如tamra。根據(jù)需要，在所述引物對組中，序列2、序列3、序列5、序列6、序列8、序列9、序列11、序列13、序列15、序列16、序列18、序列19、序列21、序列22、序列24、序列25、序列27、序列28、序列30、序列31、序列33、序列34、序列36和序列37所示的單鏈dna分子經(jīng)過人工修飾；所述人工修飾具體為：在這些單鏈dna分子自5’末端起的第25位和第26位之間連接連續(xù)的12個“—ch2—”結(jié)構(gòu)。這樣的話，當(dāng)dna聚合酶擴(kuò)增到該結(jié)構(gòu)時，由于dna聚合酶無法識別和跨越該結(jié)構(gòu)而終止產(chǎn)物鏈的延伸。這使得每條pcr產(chǎn)物鏈一端都帶有一段25個堿基的taga標(biāo)簽序列粘性末端，另一端具有tamra熒光標(biāo)記，在雜交的過程中無需單鏈制備，taga標(biāo)簽序列粘性末端與基因芯片上的tagb序列互補配對，在芯片清洗的過程中另一端tamra熒光標(biāo)記不會丟失，在芯片掃描的過程中激發(fā)熒光。本發(fā)明的第二個目的是提供一種用于檢測人基因組中所述12個snp位點的成套單鏈dna。本發(fā)明所提供的用于檢測人基因組中所述12個snp位點的成套單鏈dna，具體由探針組和所述引物對組組成；所述探針組由如下1)-12)組成：1)用于檢測所述rs7181866位點的單鏈dna探針1(記為tagb1)和單鏈dna探針2(記為tagb2)；所述單鏈dna探針1(tagb1)的核苷酸序列如序列表中序列2的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針2(tagb2)的核苷酸序列如序列表中序列3的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；2)用于檢測所述rs6311位點的單鏈dna探針3(記為tagb3)和單鏈dna探針4(記為tagb4)；所述單鏈dna探針3(tagb3)的核苷酸序列如序列表中序列5的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針4(tagb4)的核苷酸序列如序列表中序列6的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；3)用于檢測所述rs7305115位點的單鏈dna探針5(記為tagb5)和單鏈dna探針6(記為tagb6)；所述單鏈dna探針5(tagb5)的核苷酸序列如序列表中序列8的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針6(tagb6)的核苷酸序列如序列表中序列9的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；4)用于檢測所述rs4680位點的單鏈dna探針7(記為tagb7)和單鏈dna探針8(記為tagb8)；所述單鏈dna探針7(tagb7)的核苷酸序列如序列表中序列11的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針8(tagb8)的核苷酸序列如序列表中序列13的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；5)用于檢測所述rs1799983位點的單鏈dna探針9(記為tagb9)和單鏈dna探針10(記為tagb10)；所述單鏈dna探針9(tagb9)的核苷酸序列如序列表中序列15的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針10(tagb10)的核苷酸序列如序列表中序列16的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；6)用于檢測所述rs5065位點的單鏈dna探針11(記為tagb11)和單鏈dna探針12(記為tagb12)；所述單鏈dna探針11(tagb11)的核苷酸序列如序列表中序列18的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針12(tagb12)的核苷酸序列如序列表中序列19的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；7)用于檢測所述rs1801133位點的單鏈dna探針13(記為tagb13)和單鏈dna探針14(記為tagb14)；所述單鏈dna探針13(tagb13)的核苷酸序列如序列表中序列21的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針14(tagb14)的核苷酸序列如序列表中序列22的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；8)用于檢測所述rs3759584位點的單鏈dna探針15(記為tagb15)和單鏈dna探針16(記為tagb16)；所述單鏈dna探針15(tagb15)的核苷酸序列如序列表中序列24的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針16(tagb16)的核苷酸序列如序列表中序列25的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；9)用于檢測所述rs4340位點的單鏈dna探針17(記為tagb17)和單鏈dna探針18(記為tagb18)；所述單鏈dna探針17(tagb17)的核苷酸序列如序列表中序列27的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針18(tagb18)的核苷酸序列如序列表中序列28的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；10)用于檢測所述rs11549465位點的單鏈dna探針19(記為tagb19)和單鏈dna探針20(記為tagb20)；所述單鏈dna探針19(tagb19)的核苷酸序列如序列表中序列30的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針20(tagb20)的核苷酸序列如序列表中序列31的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；11)用于檢測所述rs1800544位點的單鏈dna探針21(記為tagb21)和單鏈dna探針22(記為tagb22)；所述單鏈dna探針21(tagb21)的核苷酸序列如序列表中序列33的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針22(tagb22)的核苷酸序列如序列表中序列34的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；12)用于檢測所述rs699947位點的單鏈dna探針23(記為tagb23)和單鏈dna探針24(記為tagb24)；所述單鏈dna探針23(tagb23)的核苷酸序列如序列表中序列36的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示；所述單鏈dna探針24(tagb24)的核苷酸序列如序列表中序列37的自5’末端起第1-25位的反向互補序列所示。其中，所述單鏈dna探針1(tagb1)用于檢測所述引物對1的擴(kuò)增結(jié)果；所述單鏈dna探針2(tagb2)用于檢測所述引物對2的擴(kuò)增結(jié)果；所述單鏈dna探針3(tagb3)用于檢測所述引物對3的擴(kuò)增結(jié)果；……；所述單鏈dna探針24(tagb24)用于檢測所述引物對24的擴(kuò)增結(jié)果。本發(fā)明的第三個目的是提供一種用于檢測人基因組中所述12個snp位點的試劑盒。本發(fā)明所提供的用于檢測人基因組中12個snp位點的試劑盒，含有所述引物對組以及雜交芯片；所述雜交芯片是按照包括如下步驟的方法制備獲得的：將通式為“nh2-(t)n-雜交探針序列”的24種單鏈檢測探針分別通過氨基與醛基的反應(yīng)固定到醛基修飾化的固相載體(如玻片)上，獲得所述雜交芯片；所述通式中的(t)n表示n個連續(xù)的t，n為大于等于5，且小于等于30的整數(shù)；所述通式中對應(yīng)于所述24種單鏈檢測探針的24種tagb標(biāo)簽為所述探針組中的24條單鏈dna探針。根據(jù)需要，所述試劑盒中還含有雜交液；所述雜交液中含有經(jīng)熒光標(biāo)記的無關(guān)單鏈dna分子；所述無關(guān)單鏈dna分子為非源自于人基因組的單鏈dna分子。所述雜交芯片的制備方法還包括將表面化學(xué)質(zhì)控探針qc、和/或雜交質(zhì)控探針pc、和/或陰性對照探針bc通過氨基與醛基的反應(yīng)固定到所述醛基修飾化的固相載體(如玻片)上的步驟；所述表面化學(xué)質(zhì)控探針qc、所述雜交質(zhì)控探針pc和所述陰性對照探針均為單鏈探針；所述表面化學(xué)質(zhì)控探針qc的一端經(jīng)氨基修飾，另一端具有熒光標(biāo)記(如hex)；所述雜交質(zhì)控探針pc的一端經(jīng)氨基修飾，且能與所述雜交液中的所述無關(guān)單鏈dna分子雜交；所述陰性對照探針bc的一端經(jīng)氨基修飾，且與源自于所述細(xì)菌耐藥基因的任何單鏈dna分子均不能雜交。進(jìn)一步，在本發(fā)明中，所述表面化學(xué)質(zhì)控探針qc自5’端到3’端的結(jié)構(gòu)組成為“nh2-tcacttgcttccgttgagg-hex”；所述雜交質(zhì)控探針pc自5’端到3’端的結(jié)構(gòu)組成為“nh2-ttttttttttttcctcaacggaagcaagtgat”；所述陰性對照探針bc自5’端到3’端的結(jié)構(gòu)組成為“nh2-ttttttttttttgttgcttctggaatgagtttgct”。所的引物對組或所述成套單鏈dna或所述試劑盒在如下(a)或(b)中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍：(a)檢測人基因組中所述12個snp位點，或制備用于檢測人基因組中所述12個snp位點的產(chǎn)品；(b)選拔飛行員，或制備用于選拔飛行員的產(chǎn)品。在所述(b)所示的應(yīng)用中，選擇具有如下(1)-(13)所示基因型的人作為候選飛行員：(1)所述rs7181866位點為gg基因型：人基因組中所述rs7181866位點處的核苷酸為g的純合型；(2)所述rs6311位點為tt基因型：人基因組中所述rs6311位點處的核苷酸為t的純合型；(3)所述rs7305115位點為aa基因型：人基因組中所述rs7305115位點處的核苷酸為a的純合型；(4)所述rs4680位點為aa基因型：人基因組中所述rs4680位點處的核苷酸為a的純合型；(5)所述rs1799983位點為gg基因型：人基因組中所述rs1799983位點處的核苷酸為g的純合型；(6)所述rs5065位點為aa基因型：人基因組中所述rs5065位點處的核苷酸為a的純合型；(7)所述rs1801133位點為cc基因型：人基因組中所述rs1801133位點處的核苷酸為c的純合型；(8)所述rs3759584位點為tt基因型：人基因組中所述rs3759584位點處的核苷酸為t的純合型；(9)所述rs4340位點為插入純合基因型：人基因組中所述rs4340位點處為插入序列表中序列38的純合型；(10)所述rs11549465位點為tt基因型：人基因組中所述rs11549465位點處的核苷酸為t的純合型；(11)所述rs1800544位點為cc基因型：人基因組中所述rs1800544位點處的核苷酸為c的純合型；(12)所述rs699947位點為aa基因型：人基因組中所述rs699947位點處的核苷酸為a的純合型。所述引物對組或所述成套單鏈dna在制備所述試劑盒中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明以加速度耐力相關(guān)基因、缺氧耐力相關(guān)基因、心理和認(rèn)知相關(guān)基因及心腦血管疾病相關(guān)基因等為候選檢測基因(血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因(rs4340)、α2-腎上腺素能受體基因(rs1800544)、腦型肌酸激酶基因(rs3759584)為加速度耐力相關(guān)基因，低氧誘導(dǎo)因子1基因(rs11549465)、核呼吸因子1(rs7181866)為缺氧耐力相關(guān)基因，5羥色胺2a受體基因(rs6311)、色胺酸羥化酶基因(rs7305115)、兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶基因(rs4680)為心理和認(rèn)知相關(guān)基因，內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因(rs1799983)、心鈉素anp基因(rs5065)、亞甲基四氫葉酸還原酶基因(rs1801133)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子基因(rs699947)為心腦血管疾病相關(guān)基因)開發(fā)一套基因芯片檢測試劑盒。本發(fā)明提供的試劑盒支持高通量、快速、準(zhǔn)確地同時檢測12個飛行員lod易感基因snp位點，本發(fā)明為飛行人員選拔提供參考。附圖說明圖1為雜交芯片的點陣排布示意圖。其中，a為各snp位點rs號排布示意圖，b為各snp探針編號排布，c為各snp位點對應(yīng)的基因型。圖2為模板的用量為0.5ng(對應(yīng)模板濃度為0.25ng/μl)采用通用芯片檢測結(jié)果。其中，a為照片；b為結(jié)果讀取。圖3為模板的用量為1ng(對應(yīng)模板濃度為0.5ng/μl)到50ng(對應(yīng)模板濃度為25ng/μl)范圍內(nèi)采用通用芯片檢測結(jié)果。其中，a為照片；b為結(jié)果讀取。圖4為模板的用量為60ng(對應(yīng)模板濃度為30ng/μl)采用通用芯片檢測結(jié)果。其中，a為照片；b為結(jié)果讀取。圖5為第一位待測者的采用通用芯片檢測后的照片及結(jié)果讀取。其中，a為照片，b為結(jié)果讀取。圖6為第二位待測者的采用通用芯片檢測后的照片及結(jié)果讀取。其中，a為照片，b為結(jié)果讀取。圖7為第三位待測者的采用通用芯片檢測后的照片及結(jié)果讀取。其中，a為照片，b為結(jié)果讀取。圖8為第四位待測者的采用通用芯片檢測后的照片及結(jié)果讀取。其中，a為照片，b為結(jié)果讀取。具體實施方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實施例1、用于檢測飛行員lod易感基因多態(tài)性的試劑盒的制備及其使用一、用于檢測飛行員lod易感基因多態(tài)性的試劑盒的組裝與制備(一)針對12個飛行員lod易感基因snp位點設(shè)計引物12個飛行員lod易感基因snp位點的信息分析結(jié)果見表1。表112個飛行員lod易感基因snp位點的信息rs號snp類型已知適合做飛行員的基因型rs7181866a>ggrs6311c>ttrs7305115a>gars4680a>gars1799983g>tgrs5065a>gars1801133c>tcrs3759584c>ttrs4340缺失>插入插入rs11549465c>ttrs1800544c>gcrs699947a>ca本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)一步針對以上各snp位點設(shè)計了兩對引物，每對引物中的一條引物5’末端鏈接一個特異的taga標(biāo)簽序列，另一條引物的5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，含有taga標(biāo)簽的引物進(jìn)行人工修飾，具體做法是：在taga標(biāo)簽序列與其后的基因特異擴(kuò)增序列之間連接連續(xù)的12個“—ch2—”結(jié)構(gòu)，當(dāng)dna聚合酶擴(kuò)增到該結(jié)構(gòu)時，由于dna聚合酶無法識別和跨越該結(jié)構(gòu)而終止產(chǎn)物鏈的延伸。這使得每條pcr產(chǎn)物鏈一端都帶有一段25個堿基的taga標(biāo)簽序列粘性末端，另一端具有tamra熒光標(biāo)記，在雜交的過程中無需單鏈制備，taga標(biāo)簽序列粘性末端與基因芯片上的tagb序列互補配對，在芯片清洗的過程中另一端tamra熒光標(biāo)記不會丟失，在芯片掃描的過程中激發(fā)熒光。1、針對rs號為rs7181866的snp位點設(shè)計兩對引物第一對引物(以人基因組dna為模板，只有該snp位點處的核苷酸為a時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為228bp)：1-f-a-31-3t-taga1(正向引物，下劃線標(biāo)注處為taga1標(biāo)簽，序列表的序列2)：5’-atctcggcgggtctatctacatcttataaagatccaacatagaataggagagatta-3’；1-r-t-tamra(反向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列1)：5’-cgcatcccaaactctccactg-3’。第二對引物(以人基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為g時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為228bp)：1-f-g-28-3t-taga2(正向引物，下劃線標(biāo)注處為taga2標(biāo)簽，序列表的序列3)：5’-ctgttccgcatacctactacagttgaagatccaacatagaataggagagattg-3’；1-r-t-tamra(反向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列1)：5’-cgcatcccaaactctccactg-3’。2、針對rs號為rs6311的snp位點設(shè)計兩對引物第一對引物(以人基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為c時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為169bp)：2-f-c-21-2t-taga3(正向引物，下劃線標(biāo)注處為taga3標(biāo)簽，序列表的序列5)：5’-gaaagtcccgcggttcatgtttactctcggagtgctgtgagtgttc-3’。2-r-t-tamra(反向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列4)：5’-gtgctaatagtttatcagagttatcacc-3’；第二對引物(以人基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為t時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為169bp)：2-f-t-21-2t-taga4(正向引物，下劃線標(biāo)注處為taga4標(biāo)簽，序列表的序列6)：5’-agataggggtcccccgaattaaaacctcggagtgctgtgagtgttt-3’；2-r-t-tamra(反向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列4)：5’-gtgctaatagtttatcagagttatcacc-3’。3、針對rs號為rs7305115的snp位點設(shè)計的兩對引物。第一對引物(以人基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為g時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為178bp)：3-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列7)：5’-aggtctggcttcacggtgag-3’；3-r-g-25-2t-taga5(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga5標(biāo)簽，序列表的序列8)：5’-tagcgacgcgtagataataccagctctttaatgtaggtactcacggtttc-3’。第二對引物(以人基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為a時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為178bp)：3-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列7)：5’-aggtctggcttcacggtgag-3’；3-r-a-25-2t-taga6(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga6標(biāo)簽，序列表的序列9)：5’-cgcagtacttagtgtccgaaacggactttaatgtaggtactcacggtttt-3’。4、針對rs號為rs4680的snp位點設(shè)計的兩對引物。第一對引物(以人基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為g時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為323bp)：4-f-g-23-2t-taga7(正向引物，下劃線標(biāo)注處為taga7標(biāo)簽，序列表的序列11)：5’-taagcggaggtttcgaatactgcacgcggatggtggatttcgctggtg-3’；4-r-t-tamra(反向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列10)：5’-tagggttctgggatgacaagg-3’。第二對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為a時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為239bp)：4-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列12)：5’-tgcacaggcaagatcgtggac-3’；4-r-a-25-3g-taga8(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga8標(biāo)簽，序列表的序列13)：5’-ggtctatacgagatacgcccgcttacaggcatgcacaccttgtccttgat-3’。5、針對rs號為rs1799983的snp位點設(shè)計的兩對引物。第一對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為g時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為245bp)：5-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列14)：5’-gtggtcacggagacccag-3’。5-r-g-20-2a-taga9(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga9標(biāo)簽，序列表的序列15)：5’-cttattcgtacgagccaacacttgggaaggaagagttctggggac-3’。第二對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為t時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為245bp)：5-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列14)：5’-gtggtcacggagacccag-3’。5-r-t-23-2a-taga10(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga10標(biāo)簽，序列表的序列16)：5’-aacactttcagtatcgcgagggagtgcagaaggaagagttctggggaa-3’。6、針對rs號為rs5065的snp位點設(shè)計的兩對引物。第一對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為a時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為160bp)：6-f-a-21-3g-taga11(正向引物，下劃線標(biāo)注處為taga11標(biāo)簽，序列表的序列18)：5’-ttgtgggccctctataccagtatggcctccctggctgttatctgca-3’；6-r-t-tamra(反向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列17)：5’-gaagcaggtggtcagtaatcaag-3’。第二對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為g時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為160bp)：6-f-g-21-3g-taga12(正向引物，下劃線標(biāo)注處為taga12標(biāo)簽，序列表的序列19)：5’-cacaaccgctattagaccgtgtgctcctccctggctgttatctgcg-3’；6-r-t-tamra(反向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列17)：5’-gaagcaggtggtcagtaatcaag-3’。7、針對rs號為rs1801133的snp位點設(shè)計的兩對引物。第一對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為c時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為272bp)：7-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列20)：5’-tagttcaggctgtgctgtgct-3’；7-r-c-22-2a-taga13(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga13標(biāo)簽，序列表的序列21)：5’-ccagtagggctctcgtacacaatctagctgcgtgatgatgaaatcag-3’。第二對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為t時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為272bp)：7-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列20)：5’-tagttcaggctgtgctgtgct-3’；7-r-t-22-2a-taga14(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga14標(biāo)簽，序列表的序列22)：5’-catacgcgcgtagcaagtagtactcagctgcgtgatgatgaaatcaa-3’。8、針對rs號為rs3759584的snp位點設(shè)計的兩對引物。第一對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為c時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為159bp)：8-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列23)：5’-taggtgcctcagagcagaagg-3’；8-r-c-21-3t-taga15(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga15標(biāo)簽，序列表的序列24)：5’-gagttggcgacgagacagtaggattgtgtctcctctgcagtgactg-3’。第二對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為t時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為159bp)：8-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列23)：5’-taggtgcctcagagcagaagg-3’；8-r-t-21-3t-taga16(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga16標(biāo)簽，序列表的序列25)：5’-ggcatagtatcccgaccgtactaacgtgtctcctctgcagtgatca-3’。9、針對rs號為rs4340的snp位點設(shè)計的兩對引物。第一對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為“缺失”時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為119bp)：9-f-qs-26-2c-taga17(正向引物，下劃線標(biāo)注處為taga17標(biāo)簽，序列表的序列27)：5’-gtgatacgccccggcaacttagtaactgctgcctatacagtcacttttacg-3’；9-r-t-tamra(反向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列26)：5’-cttagctcacctctgcttgtaag-3’。第二對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為“插入”時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為235bp)：9-f-cr-27-taga18(正向引物，下劃線標(biāo)注處為taga18標(biāo)簽，序列表的序列28)：5’-catggagttgtaaggtgcctactctcgcccggctaattttttgtatttttag-3’；9-r-t-tamra(反向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列26)：5’-cttagctcacctctgcttgtaag-3’。10、針對rs號為rs11549465的snp位點設(shè)計的兩對引物。第一對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為c時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為136bp)：10-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列29)：5’-aggacacagatttagacttggagatg-3’；10-r-c-25-3c-5t-taga19(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga19標(biāo)簽，序列表的序列30)：5’-aacgaagtcataggatccctcgagtggcttgcggaactgctttcttacgg-3’。第二對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為t時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為136bp)：10-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列29)：5’-aggacacagatttagacttggagatg-3’；10-r-t-25-3c-5t-taga20(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga20標(biāo)簽，序列表的序列31)：5’-gtctggtcgaccctatcacatcaaaggcttgcggaactgctttcttacga-3’。11、針對rs號為rs1800544的snp位點設(shè)計的兩對引物。第一對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為c時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為270bp)：11-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列32)：5’-cttcctccctctccaggac-3’。11-r-c-22-3g-taga21(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga21標(biāo)簽，序列表的序列33)：5’-gagtgtagcacaccgggattaggtttgggagttggccatgcagcgcc-3’。第二對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為g時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為270bp)：11-f-t-tamra(正向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列32)：5’-cttcctccctctccaggac-3’。11-r-g-22-3g-taga22(反向引物，下劃線標(biāo)注處為taga22標(biāo)簽，序列表的序列34)：5’-acagcaactatgtaacgtgcgaacctgggagttggccatgcagcgcg-3’。12、針對rs號為rs699947的snp位點設(shè)計的兩對引物。第一對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為a時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為153bp)：12-f-a-19-3g-taga23(正向引物，下劃線標(biāo)注處為taga23標(biāo)簽，序列表的序列36)：5’-ataggttaagtatcggtggagcgtcgtaggccagaccctgggaa-3’。12-r-t-tamra(反向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列35)：5’-ctagctggtttctgacctggc-3’；第二對引物(以基因組dna為模板，只有該snp位點的核苷酸為c時可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物為153bp)：12-f-c-19-3g-taga24(正向引物，下劃線標(biāo)注處為taga24標(biāo)簽，序列表的序列37)：5’-ggcccccgtgagatatcttaatcctgtaggccagaccctgggac-3’；12-r-t-tamra(反向引物，其5’末端具有tamra熒光標(biāo)記，序列表的序列35)：5’-ctagctggtttctgacctggc-3’。(二)制備雜交芯片雜交芯片為分別固定有24種單鏈檢測探針的基片。每種檢測探針都是一段氨基修飾的寡核苷酸探針，24種單鏈檢測探針的通式為“nh2-ttttttttttttttt-tag標(biāo)簽”，24種單鏈檢測探針分別具有tagb1標(biāo)簽至tagb24標(biāo)簽，tagb1標(biāo)簽與taga1標(biāo)簽反向互補，tagb2標(biāo)簽與taga2標(biāo)簽反向互補，……，tagb24標(biāo)簽與taga24標(biāo)簽反向互補。各檢測探針分別用基因點樣液(博奧生物集團(tuán)有限公司產(chǎn)品，其產(chǎn)品目錄號為cp.440010)溶解，終濃度為10μm，重復(fù)三次點制到醛基化修飾的玻片(博奧生物集團(tuán)有限公司產(chǎn)品，其產(chǎn)品目錄號為cp.420022-005)上，從而通過氨基與醛基的反應(yīng)將24種探針固定到雜交芯片上。另外，同樣通過氨基與醛基的反應(yīng)將表面化學(xué)質(zhì)控探針qc、雜交質(zhì)控探針pc和陰性對照探針nc也固定到雜交芯片上。qc是一端帶有hex標(biāo)記，另一端具有氨基修飾的單鏈寡核苷酸探針，用于觀察芯片點樣和固定的效率，其自5’端到3’端的結(jié)構(gòu)組成為nh2-tcacttgcttccgttgagg-hex。pc是一段氨基修飾的單鏈寡核苷酸探針，可以與雜交液中添加的經(jīng)熒光標(biāo)記的無關(guān)單鏈dna分子(c-pc)雜交，用于雜交過程的質(zhì)控，其自5’端到3’端的結(jié)構(gòu)組成為nh2-ttttttttttttcctcaacggaagcaagtgat。nc是一段氨基修飾的寡核苷酸探針，與雜交體系中的所有待檢測序列均不會雜交，用于觀察有無非特異雜交，其自5’端到3’端的結(jié)構(gòu)組成為nh2-ttttttttttttgttgcttctggaatgagtttgct。圖1為雜交芯片的點陣排布示意圖。(三)用于檢測飛行員lod易感基因多態(tài)性的試劑盒的組成本發(fā)明所提供的用于飛行員lod易感基因多態(tài)性(即前文所述12種snp位點)的試劑盒的含有：(1)步驟(一)設(shè)計合成的24個引物對；(2)步驟(二)制備的固定有24種檢測探針以及表面化學(xué)質(zhì)控探針qc、雜交質(zhì)控探針pc和陰性對照探針bc的雜交芯片；(3)雜交液；所述雜交液中含有經(jīng)熒光標(biāo)記的無關(guān)單鏈dna分子(c-pc)，其核苷酸序列為5’-atcacttgcttccgttgagg-3’。二、用于檢測飛行員lod易感基因多態(tài)性的試劑盒的使用方法1、樣品聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)擴(kuò)增取待測者的外周血樣本，提取基因組dna，以其為模板，分別采用步驟一(一)設(shè)計合成的24個引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增。pcr反應(yīng)體系(20μl)的組分如表2所示。pcr反應(yīng)采用s1000tmthermalcycler(bio-rad)進(jìn)行，pcr反應(yīng)程序見表3。表2pcr反應(yīng)體系(20μl)的組分組分加入量在pcr體系中的濃度h2o10.4μl—promega5×buffer4.0μl1×25mmmgcl21.2μl1.5mm2.5mmdntp1.6μl0.2mm10μm正向引物0.8μl0.4μm10μm反向引物0.8μl0.4μm5u/μlpromega熱啟動酶0.1μl0.025u/μl模板2μl0.05～2.5ng/μl表3pcr反應(yīng)程序pcr反應(yīng)結(jié)束后共得到13份pcr擴(kuò)增產(chǎn)物。2、芯片雜交完成pcr擴(kuò)增后，每個擴(kuò)增體系取樣，按照表4制備雜交體系，然后分別與步驟一(二)制備的芯片上的不同點雜交。采用1-f-a-31-3t-taga1和1-r-t-tamra組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb1標(biāo)簽的探針的點雜交。采用1-f-g-28-3t-taga2和1-r-t-tamra組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb2標(biāo)簽的探針的點雜交。采用2-f-c-21-2t-taga3和2-r-t-tamra組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb3標(biāo)簽的探針的點雜交。采用2-f-t-21-2t-taga4和2-r-t-tamra組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb4標(biāo)簽的探針的點雜交。采用3-f-t-tamra和3-r-g-25-2t-taga5組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb5標(biāo)簽的探針的點雜交。采用3-f-t-tamra和3-r-a-25-2t-taga6組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb6標(biāo)簽的探針的點雜交。采用4-f-g-23-2t-taga7和4-r-t-tamra組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb7標(biāo)簽的探針的點雜交。采用4-f-t-tamra和4-r-a-25-3g-taga8組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb8標(biāo)簽的探針的點雜交。采用5-f-t-tamra和5-r-g-20-2a-taga9組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb9標(biāo)簽的探針的點雜交。采用5-f-t-tamra和5-r-t-23-2a-taga10組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb10標(biāo)簽的探針的點雜交。采用6-f-a-21-3g-taga11和6-r-t-tamra組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb11標(biāo)簽的探針的點雜交。采用6-f-g-21-3g-taga12和6-r-t-tamra組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb12標(biāo)簽的探針的點雜交。采用7-f-t-tamra和7-r-c-22-2a-taga13組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb13標(biāo)簽的探針的點雜交。采用7-f-t-tamra和7-r-t-22-2a-taga14組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb14標(biāo)簽的探針的點雜交。采用8-f-t-tamra和8-r-c-21-3t-taga15組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb15標(biāo)簽的探針的點雜交。采用8-f-t-tamra和8-r-t-21-3t-taga16組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb16標(biāo)簽的探針的點雜交。采用9-f-qs-26-2c-taga17和9-r-t-tamra組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb17標(biāo)簽的探針的點雜交。采用9-f-cr-27-taga18和9-r-t-tamra組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb18標(biāo)簽的探針的點雜交。采用10-f-t-tamra和10-r-c-25-3c-5t-taga19組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb19標(biāo)簽的探針的點雜交。采用10-f-t-tamra和10-r-t-25-3c-5t-taga20組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb20標(biāo)簽的探針的點雜交。采用11-f-t-tamra和11-r-c-22-3g-taga21組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb21標(biāo)簽的探針的點雜交。采用11-f-t-tamra和11-r-g-22-3g-taga22組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb22標(biāo)簽的探針的點雜交。采用12-f-a-19-3g-taga23和12-r-t-tamra組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb23標(biāo)簽的探針的點雜交。采用12-f-c-19-3g-taga24和12-r-t-tamra組成的引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增得到的擴(kuò)增體系與芯片上固定有具有tagb24標(biāo)簽的探針的點雜交。雜交體系(18μl)的組分見表4。表4雜交體系(18μl)的組分50℃雜交60min。從雜交盒中取出芯片浸入42℃的800ml洗液i(配方：水：780ml，20×ssc：12ml，10％sds：8ml)中輕輕洗滌2min；再從洗液i中取出芯片浸入42℃的800ml洗液ii(配方：水：797.5ml，20×ssc：2.5ml)中輕輕洗滌2min；最后1000轉(zhuǎn)離心2min。3、掃描及結(jié)果判定芯片熒光信號采用luxscantm10k-b掃描儀(博奧生物集團(tuán)有限公司)檢測，檢測條件：波長(wavelength)，555nm；laserpower，60；pmt，600。根據(jù)掃描結(jié)果按照如下方法確定待測者基因組中前文所述12個snp位點處的核苷酸：根據(jù)芯片上各snp位點不同基因型的點陣排布，來確定各snp位點的基因型，如rs7181866位點，若tagb1亮、tagb2不亮，檢測結(jié)果為aa純合型；若tagb1不亮、tagb2亮，檢測結(jié)果為gg純合型；若tagb1亮、tagb2亮，檢測結(jié)果為ag雜合型。選擇具有如下(1)-(13)所示基因型的人作為候選飛行員：(1)所述rs7181866位點為gg基因型：人基因組中所述rs7181866位點處的核苷酸為g的純合型；(2)所述rs6311位點為tt基因型：人基因組中所述rs6311位點處的核苷酸為t的純合型；(3)所述rs7305115位點為aa基因型：人基因組中所述rs7305115位點處的核苷酸為a的純合型；(4)所述rs4680位點為aa基因型：人基因組中所述rs4680位點處的核苷酸為a的純合型；(5)所述rs1799983位點為gg基因型：人基因組中所述rs1799983位點處的核苷酸為g的純合型；(6)所述rs5065位點為aa基因型：人基因組中所述rs5065位點處的核苷酸為a的純合型；(7)所述rs1801133位點為cc基因型：人基因組中所述rs1801133位點處的核苷酸為c的純合型；(8)所述rs3759584位點為tt基因型：人基因組中所述rs3759584位點處的核苷酸為t的純合型；(9)所述rs4340位點為插入純合基因型：人基因組中所述rs4340位點處為插入序列表中序列38的純合型；(10)所述rs11549465位點為tt基因型：人基因組中所述rs11549465位點處的核苷酸為t的純合型；(11)所述rs1800544位點為cc基因型：人基因組中所述rs1800544位點處的核苷酸為c的純合型；(12)所述rs699947位點為aa基因型：人基因組中所述rs699947位點處的核苷酸為a的純合型。實施例2、用于檢測飛行員lod易感基因多態(tài)性的試劑盒檢測線的測定用于檢測飛行員lod易感基因多態(tài)性的試劑盒的檢測線的測定，取一位待測者的外周血樣本，提取基因組dna，以其為模板，按照實施例1步驟二進(jìn)行操作，利用nanodrop測量模板的核酸濃度，按0.1、0.25、0.5、1.0、5.0、10.0、25.0、30.0、40.0、50.0、60.0、70.0、80.0、100.0ng/μl的梯度進(jìn)行稀釋，檢測待測基因組中前文所述12個snp位點處的核苷酸及對應(yīng)基因型，具體判定方法參見實施例1步驟二3。每濃度梯度采用三個通用芯片進(jìn)行重復(fù)檢測。與通過sanger法測序確認(rèn)所述12個snp位點的基因型進(jìn)行比較，實驗結(jié)果表明，模板的核酸濃度在1ng到50ng范圍內(nèi)，三個通用芯片檢測讀取的結(jié)果均與對應(yīng)位點測序的結(jié)果一致。模板的核酸濃度低于1ng，或高于50ng，三個通用芯片檢測讀取的結(jié)果與對應(yīng)位點測序的結(jié)果一致性較差，部分雜交結(jié)果如下。模板的用量為0.5ng(對應(yīng)模板濃度為0.25ng/μl)采用通用芯片檢測后的照片見圖2中a，結(jié)果讀取見圖2中b，與測序結(jié)果比較結(jié)果發(fā)現(xiàn)有假陰性，無法確定樣品各snp位點的基因型。模板的用量為1ng(對應(yīng)模板濃度為0.5ng/μl)到50ng(對應(yīng)模板濃度為25ng/μl)范圍內(nèi)采用通用芯片檢測后的照片見圖3中a，結(jié)果讀取見圖3中b，與測序結(jié)果完全一致。模板的用量為60ng(對應(yīng)模板濃度為30ng/μl)采用通用芯片檢測后的照片見圖4中a，結(jié)果讀取見圖4中b，與測序結(jié)果比較結(jié)果發(fā)現(xiàn)有假陽性，無法確定樣品各snp位點的基因型。實施例3、實際臨床樣品的檢測一、待測者待測者為4位知情同意的志愿者，均已通過sanger法測序確認(rèn)所述12個snp位點的基因型。二、檢測待測者的飛行員lod易感基因多態(tài)性取待測者的外周血樣本，提取基因組dna，以其為模板，按照實施例1步驟二進(jìn)行操作，檢測待測基因組中前文所述12個snp位點處的核苷酸及對應(yīng)基因型，具體判定方法參見實施例1步驟二3。每位待測者采用三個通用芯片進(jìn)行重復(fù)檢測。結(jié)果表明，每位待測者采用三個通用芯片檢測讀取的結(jié)果均與全基因組測序的結(jié)果一致。第一位待測者的采用通用芯片檢測后的照片見圖5中a，結(jié)果讀取見圖5中b。第二位待測者的采用通用芯片檢測后的照片見圖6中a，結(jié)果讀取見圖6中b。第三位待測者的采用通用芯片檢測后的照片見圖7中a，結(jié)果讀取見圖7中b。第四位待測者的采用通用芯片檢測后的照片見圖8中a，結(jié)果讀取見圖8中b。四位待測者12個snp位點的基因型結(jié)果見表5。表54個待測者12個snp位點基因型檢測結(jié)果123456789101112第一位待測者aaccgggaggaattcccrctggac第二位待測者agctgaggggaactccqscccgac第三位待測者aactggggggaactccqs/crccggaa第四位待測者agccaaaaggagctcccrcccgcc注：表中，1代表rs號為rs7181866的snp位點。2代表rs號為rs6311的snp位點。3代表rs號為rs7305115的snp位點。4代表rs號為rs4680的snp位點。5代表rs號為rs1799983的snp位點。6代表rs號為rs5065的snp位點。7代表rs號為rs1801133的snp位點。8代表rs號為rs3759584的snp位點。9代表rs號為rs4340的snp位點(cr表示“插入”，qs表示“缺失”)。10代表rs號為rs11549465的snp位點。11代表rs號為rs1800544的snp位點。12代表rs號為rs699947的snp位點。綜合分析，這四位志愿者都不是最佳人選，相對第四位志愿者比其它三位更適合。當(dāng)前第1頁12