相關(guān)申請
本申請要求2014年10月14日提交的美國臨時申請62/063912號和2014年11月3日提交的美國臨時申請62/074406號的權(quán)益。前述申請的全部內(nèi)容通過引用并入本文。
本發(fā)明涉及新穎的視黃酸受體相關(guān)孤兒受體γ(“rorγ”或“ror-γ”)抑制劑、其制備方法、含有這些抑制劑的藥物組合物，和其在治療炎癥、代謝、自身免疫和通過rorγ介導(dǎo)的其它疾病中的用途。
背景技術(shù)：
視黃酸受體相關(guān)孤兒受體(ror)為類固醇激素核受體超家族中的轉(zhuǎn)錄因子的子族(jetten和joo(2006)《高級發(fā)育生物學(xué)》(adv.dev.biol.)2006，16，313-355)。ror家族由ror阿法(rorα)、ror貝塔(rorβ)和ror伽馬(rorγ)組成，其各自由獨立基因編碼(在人類中：分別為rora、rorb和rorc；在小鼠中：分別為rora、rorb和rorc)。ror含有大部分核受體共用的四種主要域：n端域、由兩個鋅指基元組成的高度保守的dna結(jié)合域(dbd)、鉸鏈域和配體結(jié)合域(lbd)。每一ror基因產(chǎn)生若干同功異型物，僅在其n端域中不同。rorγ具有兩種同功異型物：rorγl和rorγ2(也稱為rorγt)。rorγ是指rorγl和/或rorγt。rorγl在包括胸腺、肌肉、腎臟和肝臟的多種組織中表達，但rorγt僅在免疫系統(tǒng)的細胞中表達，在胸腺生成和若干次生淋巴組織的發(fā)育中具有重要作用，且為thl7細胞分化的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子(jetten，2009，《核受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)》(nucl.recept.signal.)，7:e003，doi:10.1621/nrs.07003，電子版2009年4月3日)。
thl7細胞為優(yōu)先產(chǎn)生促炎性細胞因子il-17a、il-17f、il-21和il-22的t輔助細胞的亞群。th17細胞和其效應(yīng)分子，如il-17、il-21、il-22、gm-csf和ccl20與若干自身免疫和炎性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑性狼瘡癥、多發(fā)性硬化癥、牛皮癬、炎性腸病、過敏和哮喘的發(fā)病機理相關(guān)(maddur等人，2012，《美國病理學(xué)雜志》(am.j.pathol.)，181:8-18)。近來的發(fā)現(xiàn)支持il17和th17細胞在痤瘡的發(fā)病機理中的作用(thiboutot等人，2014，《研究性皮膚病學(xué)雜志》(j.invest.dermatol.)，134(2):307-10，doi:10.1038/jid.2013.400；agak等人，2014，《研究性皮膚病學(xué)雜志》，134(2):366-73，doi:10.1038/jid.2013.334，電子版2013年8月7日)。th17細胞還為與子宮內(nèi)膜異位(一種慢性炎性疾病)相關(guān)的炎癥的強力誘導(dǎo)物(hirata等人,2010,《內(nèi)分泌學(xué)》(endocrinol.)，151:5468-5476；hirata等人，2011，《生育與不孕》(fertilsteril.)，7月；96(1):113-7，doi:10.1016/j.fertnstert.2011.04.060，電子版2011年5月20日)。另外，th17細胞在實驗性自身免疫性腦脊髓炎(eae)、膠原蛋白誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(cia)和佐劑誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(aia)的小鼠自身免疫模型中具有關(guān)鍵作用(bedoya等人，2013，《臨床與發(fā)育免疫學(xué)》(clin.dev.immunol.)，2013:986789，電子版2013年12月26日)。th17細胞在炎性和自身免疫疾病過程期間經(jīng)活化且招募其它炎性細胞類型，確切地說嗜中性白細胞以介導(dǎo)目標(biāo)組織中的病理學(xué)(miossec和kolls，2012，《自然評論》(naturerev.)，11:763-776；korn等人，2009，《免疫學(xué)年鑒》(annu.rev.immunol.)，27:485-517)。異常th17細胞功能已與多種自身免疫病，包括多發(fā)性硬化癥和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)。自身免疫病被認(rèn)為起因于效應(yīng)與調(diào)節(jié)t細胞之間的平衡的破壞(solt等人，2012，《acs化學(xué)生物學(xué)》(acschem.biol.)，7:1515-1519，電子版2012年7月9日)。rorγt對th17細胞分化的重要性和th17細胞的致病作用通過rorγt缺陷性小鼠具有極少的th17細胞且具有eae的嚴(yán)重程度的減輕的事實被證明(ivanov等人，2006，《細胞》(cell)，126:1121-1133)。
晝夜節(jié)律為通過內(nèi)源性晝夜節(jié)律鐘調(diào)節(jié)的行為和生理變化的日循環(huán)。多種研究已在核受體(包括rorγ)功能和表達、晝夜調(diào)節(jié)電路與各種生理過程的調(diào)節(jié)之間建立聯(lián)系(jetten(2009)同前)。
阻塞性睡眠呼吸暫停綜合癥(osas)為通過t淋巴細胞調(diào)節(jié)的慢性炎性疾病。osas患者具有外周th17細胞頻率、il-17和rorγt含量的顯著增加(ye等人，2012，《炎癥介質(zhì)》(mediatorsinflamm.)，815308，doi:10.1155/2012/815308，電子版2012年12月31日)。
多種研究已提供ror在癌癥中的作用的證據(jù)。缺乏rorγ表達的小鼠展現(xiàn)頻繁轉(zhuǎn)移到肝臟和脾臟的胸腺淋巴瘤的高發(fā)生率。已顯示在腫瘤微環(huán)境中th17相關(guān)基因(包括rorγ)的高表達和th17細胞的高含量與各種癌癥，包括肺癌、胃癌、乳房癌和結(jié)腸癌的較差的預(yù)后相關(guān)(tosolini等人，2011，《癌癥研究》(cancerres.)，71:1263-1271，doi:10.1158/0008-5472.can-10-2907，電子版2011年2月8日；su等人，2014，《免疫學(xué)研究》(immunol.res.)，58:118-124，doi:10.1007/s12026-013-8483-y，電子版2014年1月9日；carmi等人，2011，《免疫學(xué)雜志》(j.immunol.)，186:3462-3471，doi:10.4049/jimmunol.1002901，電子版2011年2月7日；chen等人，2013，《組織病理學(xué)》(histopathology)，63:225-233，doi:10.1111/his.12156，電子版2013年6月6日)。
也已鑒別rorγ在脂質(zhì)/葡萄糖體內(nèi)穩(wěn)態(tài)中具有調(diào)節(jié)作用，且與代謝綜合癥、肥胖(meissburger等人，2011，《歐洲分子生物學(xué)學(xué)會-分子醫(yī)學(xué)(embomol.med.)》，3:637-651)、脂肪肝、胰島素抵抗和糖尿病有關(guān)。
rorγ在發(fā)炎、代謝、晝夜效應(yīng)、癌癥和自身免疫疾病和病癥的發(fā)病機理中的作用的另外的支持可見于以下參考文獻中：chang等人，2012，《實驗藥理學(xué)雜志》(j.exp.pharmacol.)，4:141-148；jetten等人，2013，《內(nèi)分泌學(xué)前沿》(frontiersendocrinol.)，4:1-8；huh和littman,2012，《歐洲免疫學(xué)雜志》(eur.j.immunol.)，42:2232-2237；martinez等人，2008，《紐約科學(xué)院年鑒》(ann.n.y.acad.sci.)，1143:188-211；pantelyushin等人，2012，《臨床研究雜志》(j.clin.invest.)，122:2252-2256；jetten和ueda,2002，《細胞死亡與分化》(celldeathdifferen.)，9:1167-1171；solt等人，2010，《血脂學(xué)當(dāng)前觀點》(curr.opinlipidol.)，21:204-211。
鑒于rorγ在疾病發(fā)病機理中所起的作用，rorγ活性和th17細胞分化和活性，包括il17產(chǎn)生的抑制將具有顯著治療效益。因此期望制備抑制rorγ活性且因此在治療以下疾病中具有效用的化合物：發(fā)炎、自身免疫、代謝、晝夜效應(yīng)、癌癥和通過rorγ介導(dǎo)的其它疾病，如哮喘、異位性皮炎、痤瘡、克羅恩氏病、局限性腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、休格連氏綜合癥、葡萄膜炎、白塞氏病、皮肌炎、多發(fā)性硬化癥、強直性脊柱炎、全身性紅斑性狼瘡癥、硬皮病、牛皮癬、類固醇耐受性哮喘和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)本文所述的化合物和其藥學(xué)上可接受的組合物為rorγ的有效抑制劑(參見例如表2)。這種化合物包括式(i)的那些化合物：
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中r2、r3、r4、cy1和cy2中的每一個為如本文所定義和描述的。
所提供的化合物和其藥學(xué)上可接受的組合物為rorγ的反向激動劑或拮抗劑，并且用于治療多種疾病、病癥或病況。所述疾病、病癥或病況包括本文所述的疾病、病癥或病況。
所提供的化合物可單獨使用(即作為單一療法)或與一種或更多種對于治療本文描述的適應(yīng)癥中的任一種有效的其它治療劑組合使用。
本文所提供的化合物具有的技術(shù)優(yōu)勢為在無細胞競爭分析、基于細胞的轉(zhuǎn)錄分析、全血分析和herg鉀通道分析中具有治療相關(guān)性，例如參見以下表2和表3。
附圖說明
圖1描述了(s)-7-乙基-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-6-((反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺甲磺酸鹽的粉末x-射線衍射圖。
具體實施方式
1.本發(fā)明化合物的一般性描述
在某些實施方式中，本發(fā)明提供了式(i)化合物：
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中：
r2為(c1-c3)烷基、羥基(c1-c3)烷基、鹵代(c1-c3)烷基、芐基、(c1-c3)烷氧基(c1-c3)烷基、四氫吡喃基、或–ch2-四氫吡喃基；
r3和r4各自獨立地為氫或甲基；
cy1為各自被(c1-c3)烷基磺?；〈谋交蜻拎せ缓?/p>
cy2為氫、鹵代(c1-c3)烷基、環(huán)己基、或四氫吡喃基，其中環(huán)己基和四氫吡喃基各自任選地被選自鹵代(c1-c3)烷基和c1-c3(烷氧基)中的一個或更多個基團取代。
2.化合物和定義
如本文所使用的，術(shù)語“鹵代”和“鹵素”指選自氟(氟代，-f)、氯(氯代，-cl)、溴(溴代，-br)和碘(碘代，-i)的原子。
術(shù)語“烷基”單獨使用或作為較大部分例如“鹵代烷基”的部分使用時，除非另外規(guī)定，指具有1-6個碳原子的飽和的一價直鏈或支化的烴基，并包括例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等?！耙粌r”指在一個位置上連接到分子的其余部分。
術(shù)語“鹵代烷基”或“鹵代環(huán)烷基”包括單鹵代烷基基團、多鹵代烷基基團和全鹵代烷基基團，其中鹵素獨立地選自氟、氯、碘和溴。
如本文所使用的術(shù)語“對象”和“患者”可以互換使用，且意指需要治療的哺乳動物，例如伴侶動物(例如狗、貓等)、農(nóng)畜(例如母牛、豬、馬、綿羊、山羊等)和實驗動物(例如大鼠、小鼠、天竺鼠等)。通常，對象為需要治療的人類。
某些公開的化合物可以各種立體異構(gòu)形式存在。立體異構(gòu)體是僅僅在空間排列方面不同的化合物。對映異構(gòu)體為鏡像不可重疊的立體異構(gòu)體對，最常見的是因為其含有充當(dāng)手性中心的不對稱取代碳原子。“對映異構(gòu)體”意指彼此互為鏡像且不可重疊的分子對中的一個。非對映異構(gòu)體為含有兩個或更多個不對稱取代碳原子的立體異構(gòu)體。結(jié)構(gòu)式中的符號“*”表示手性碳中心的存在?！皉”和“s”表示圍繞一個或更多個手性碳原子的取代基的構(gòu)型。因此，“r*”和“s*”表示圍繞一個或更多個手性碳原子的取代基的相對構(gòu)型。
“外消旋體”或“外消旋混合物”意指等摩爾量的兩種對映異構(gòu)體的化合物，其中此類混合物不表現(xiàn)光學(xué)活性，即其不旋轉(zhuǎn)偏振光的平面。
“幾何異構(gòu)體”意指在與碳-碳雙鍵、環(huán)烷基環(huán)或橋連雙環(huán)體系的關(guān)系中在取代基原子的定向中不同的異構(gòu)體。碳-碳雙鍵的每一側(cè)上的原子(除了h)可以為e(取代基在碳碳雙鍵的相反側(cè))或z(取代基朝向相同側(cè))構(gòu)型?！皉”、“s”、“s*”、“r*”、“e”、“z”、“順”和“反”表明相對于核心分子的構(gòu)型。當(dāng)公開的化合物通過結(jié)構(gòu)命名或描繪而不指明具體的幾何異構(gòu)體形式時，應(yīng)理解命名或結(jié)構(gòu)涵蓋了不含其它幾何異構(gòu)體的一種幾何異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體的混合物或所有幾何異構(gòu)體。
本發(fā)明化合物可以通過對映體特異性合成或從對映異構(gòu)性富集混合物中拆分以作為單個對映體來制備。常規(guī)拆分技術(shù)包括使用光學(xué)活性酸形成對映異構(gòu)體對的每一異構(gòu)體的游離堿的鹽(然后為分步結(jié)晶和游離堿再生)、使用光學(xué)活性胺形成對映異構(gòu)體對的每一對映異構(gòu)體的酸形式的鹽(然后為分步結(jié)晶和游離酸再生)、使用光學(xué)純酸、胺或醇形成對映異構(gòu)體對的對映異構(gòu)體中的每一種的酯或酰胺(然后為色譜分離和手性助劑的去除)或使用各種眾所周知的色譜方法拆分起始物質(zhì)或最終產(chǎn)物的對映體混合物。
當(dāng)公開的化合物的立體化學(xué)通過結(jié)構(gòu)命名或描繪時，所命名或描繪的立體異構(gòu)體相對于所有其它立體異構(gòu)體為至少60重量％、70重量％、80重量％、90重量％、99重量％或99.9重量％純。相對于所有其它立體異構(gòu)體的重量百分比純?yōu)橐环N立體異構(gòu)體的重量與其它立體異構(gòu)體的重量之比。當(dāng)單一對映體通過結(jié)構(gòu)命名或描繪時，所描繪或命名的對映體為至少60重量％、70重量％、80重量％、90重量％、99重量％或99.9重量％光學(xué)純。光學(xué)純度的重量百分比為對映體重量與對映體重量加上其光學(xué)異構(gòu)體重量之比。
當(dāng)所公開化合物的立體化學(xué)通過結(jié)構(gòu)命名或描繪時，所命名或描繪的結(jié)構(gòu)涵蓋多于一種立體異構(gòu)體(例如成非對映體對)，應(yīng)理解為包括所涵蓋的立體異構(gòu)體之一或所涵蓋的立體異構(gòu)體的任意混合物。應(yīng)進一步理解，所命名或描繪的立體異構(gòu)體相對于所有其它立體異構(gòu)體的立體異構(gòu)純度為至少60重量％、70重量％、80重量％、90重量％、99重量％或99.9重量％純。在這種情況下，通過使涵蓋了該命名或結(jié)構(gòu)中的立體異構(gòu)體的混合物的總重量除以所有立體異構(gòu)體的混合物的總重量來確定立體異構(gòu)純度。
當(dāng)所公開的化合物用未指明立體化學(xué)的結(jié)構(gòu)命名或描繪、且該化合物具有一個手性中心時，應(yīng)理解該命名或結(jié)構(gòu)涵蓋不含對應(yīng)的光學(xué)異構(gòu)體的化合物中的一種對映體、該化合物的外消旋混合物以及相對于其對應(yīng)的光學(xué)異構(gòu)體而富集了一種對映體的混合物。
當(dāng)公開的化合物用未表明立體化學(xué)的結(jié)構(gòu)命名或描繪、且其具有至少兩個手性中心時，應(yīng)理解該命名或結(jié)構(gòu)涵蓋不含其它非對映體的一種立體異構(gòu)體、立體異構(gòu)體的混合物、以及相對于其他非對映體在其中富集了一種或多種非對映體的立體異構(gòu)體的混合物。
本發(fā)明的化合物可以以藥學(xué)上可接受的鹽的形式存在。對于醫(yī)學(xué)用途，本發(fā)明化合物的鹽指無毒性的“藥學(xué)上可接受的鹽”。藥學(xué)上可接受的鹽的形式包括藥學(xué)上可接受的酸鹽/陰離子鹽或堿鹽/陽離子鹽。
藥學(xué)上可接受的堿鹽/陽離子鹽包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、二乙醇胺鹽、n-甲基-d-葡糖胺鹽、l-賴氨酸鹽、l-精氨酸鹽、銨鹽、乙醇胺鹽、哌嗪鹽和三乙醇胺鹽。
藥學(xué)上可接受的酸鹽/陰離子鹽包括例如乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙內(nèi)酰胺苯胂酸鹽、己基間苯二酚鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、硝酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽和甲苯磺酸鹽。
3.示例性化合物的描述
在第一實施方式中，本發(fā)明提供式(i)的化合物：
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中變量如上所述。
在第二實施方式中，式(i)的化合物是式(ii)：
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中結(jié)構(gòu)式(ii)中的變量為如式(i)所描述的。
在第三實施方式中，式(i)的化合物是式(iii)：
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中結(jié)構(gòu)式(iii)中的變量如式(i)所描述的。
在第四實施方式中，式(i)的化合物是式(iv)：
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中結(jié)構(gòu)式(iv)中的變量如式(i)所描述的。
在第五實施方式中，式(i)至式(iv)中的cy2為環(huán)己基或四氫吡喃基，其各自任選地被選自鹵代(c1-c3)烷基和c1-c3(烷氧基)的一個或更多個基團取代。
在第六實施方式中，式(i)的化合物是式(v)：
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中x為ch或n，y1為o且y2為ch2、y1為ch2且y2為o，或y1和y2各自為ch2；r9為鹵代(c1-c3)烷基；r10為(c1-c3)烷基磺?；?，其中其余變量如式(i)或第五實施方式所描述的。
在第七實施方式中，式(i)的化合物是式(vi)：
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中結(jié)構(gòu)式(vi)中的變量如式(i)或第五實施方式或第六實施方式所描述的。
在第八實施方式中，式(i)的化合物是式(vii)：
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中結(jié)構(gòu)式(vii)中的變量如式(i)或第五實施方式或第六實施方式所描述的。
在第九實施方式中，式(i)至式(vii)中的r2為甲基、乙基、芐基或異丙基，其中其余變量如式(i)或第五實施方式或第六實施方式所描述的。任選地，式(i)至式(vii)中的r2為乙基或異丙基，其中其余變量如式(i)或第五實施方式或第六實施方式所描述的。
在第十實施方式中，式(v)和式(vii)中的r9為cf3，r10為so2et或so2me，其中其余變量如式(i)或第五實施方式、第六實施方式或第九實施方式所描述的。
在實施例章節(jié)中提供本發(fā)明化合物的具體實例。本發(fā)明包括這些化合物的藥學(xué)上可接受的鹽和中性形式。
在某些實施方式中，本發(fā)明提供前述實例中的任一種化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在某些實施方式中，本發(fā)明提供治療患有由rorγ介導(dǎo)的病癥的患者(例如人類)的方法，其包括向患者施用有效量的具有任何本文所描述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其組合物的化合物的步驟。
4.用途、調(diào)配和投藥
藥學(xué)上可接受的組合物
根據(jù)另一實施方式，本發(fā)明提供一種使用包含本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的載體、佐劑或媒劑的組合物治療患有通過rorγ介導(dǎo)的病癥的對象(例如人類)的方法。在某些實施方式中，提供的組合物中本發(fā)明的化合物的量使其有效作為生物樣品或?qū)ο笾械膔orγ的反向激動劑或拮抗劑。在某些實施方式中，提供的組合物經(jīng)調(diào)配向需要該組合物的對象施用。在一些實施方式中，提供的組合物經(jīng)調(diào)配用于向?qū)ο蠼?jīng)口施用。
術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體、佐劑或媒劑”是指不會破壞一起調(diào)配的化合物的藥理學(xué)活性的無毒載體、佐劑或媒劑。在本公開的組合物中可以使用的藥學(xué)上可接受的載體、佐劑或媒劑包括但不限于離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白例如人類血清白蛋白、緩沖物質(zhì)例如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠態(tài)二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、基于纖維素的物質(zhì)、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
本文所述的組合物可經(jīng)口、非經(jīng)腸、通過吸入氣霧劑、局部、經(jīng)直腸、經(jīng)鼻、經(jīng)頰、經(jīng)陰道或經(jīng)由植入式貯器施用。如本文所使用的，術(shù)語“非經(jīng)腸”包括皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、肝內(nèi)、病灶內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸注技術(shù)。
口服液體劑型包括但不限于藥學(xué)上可接受的乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。除了活性化合物外，液體劑型可以含有所屬領(lǐng)域中常用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油類(尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和脫水山梨糖醇脂肪酸酯和其混合物。除惰性稀釋劑之外，經(jīng)口組合物還可包括佐劑，如濕潤劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑。
可以根據(jù)已知技術(shù)使用適合的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配制可注射制劑，例如無菌可注射水性或油性懸浮液。無菌可注射制劑也可以為無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液、懸浮液或乳液，例如作為1,3-丁二醇中的溶液形式?？梢圆捎玫目山邮苊絼┖腿軇樗?、林格氏溶液(ringer'ssolution)、u.s.p.和等張氯化鈉溶液。另外，無菌不揮發(fā)性油常規(guī)地用作溶劑或懸浮介質(zhì)。出于此目的，可以采用任何溫和的不揮發(fā)性油，包括合成單酸甘油酯或二酸甘油酯。此外，在可注射劑制備中使用脂肪酸，例如油酸。
可注射調(diào)配物可以例如通過經(jīng)由細菌截留過濾器過濾或通過并入滅菌劑來滅菌，所述滅菌劑呈可以在使用前溶解或分散于無菌水或其它無菌可注射介質(zhì)中的無菌固體組合物形式。
為了延長提供的化合物的作用，通常希望減慢從皮下或經(jīng)肌肉內(nèi)注射吸收化合物。這可以通過使用具有不良水溶性的結(jié)晶或非晶形物質(zhì)的液體懸浮液來實現(xiàn)?；衔锏奈账俾蕜t取決于其溶解速率，溶解速率又可以取決于晶體尺寸及結(jié)晶形式。任選地，通過將化合物溶解或懸浮于油媒劑中來實現(xiàn)延遲非經(jīng)腸施用的化合物形式的吸收。通過在生物可降解聚合物例如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微膠囊基質(zhì)來制造可注射積存形式。取決于化合物與聚合物的比率和所用具體聚合物的性質(zhì)，可以控制化合物的釋放速率。其它生物可降解聚合物的實例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。還通過將化合物截留于與身體組織相容的脂質(zhì)體或微乳液中來制備積存可注射調(diào)配物。
用于經(jīng)口施藥的固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、散劑和顆粒。在該固體劑型中，活性化合物與以下各者混合：至少一種惰性藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣和/或a)填充劑或增量劑，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合劑，如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；c)保濕劑，如甘油；d)崩解劑，如瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉；e)溶液遲延劑，如石蠟；f)吸收促進劑，如季銨化合物；g)濕潤劑，如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；h)吸收劑，如高嶺土和膨潤土；和i)潤滑劑，如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉和其混合物。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，劑型還可以包含緩沖劑。
還可以使用類似類型的固體組合物作為使用如乳糖及高分子量聚乙二醇等的賦形劑的軟和硬填充的明膠膠囊中的填充劑。片劑、糖衣藥丸、膠囊、丸劑和顆粒劑的固體劑型可以用包衣和外殼(例如腸溶包衣和藥物調(diào)配領(lǐng)域中熟知的其它包衣)來制備。其可任選地含有乳濁劑，并且還可以為使其任選地以延遲方式僅釋放活性成分或優(yōu)先在腸道的某一部分中釋放的組合物?？梢允褂玫陌窠M合物的實例包括聚合物質(zhì)和蠟。還可以使用相似類型的固體組合物作為使用如乳糖以及高分子量聚乙二醇等賦形劑的軟和硬填充的明膠膠囊中的填充劑。
提供的化合物還可以呈與一種或更多種如上文所提及的賦形劑的微膠囊化形式?？梢杂冒潞屯鈿?如腸溶衣、釋放控制包衣和藥物調(diào)配領(lǐng)域中熟知的其它包衣)來制備片劑、糖衣藥丸、膠囊、丸劑和顆粒劑的固體劑型。在該固體劑型中，活性化合物可與至少一種惰性稀釋劑例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。如在常規(guī)的實踐中，所述劑型還可以包含除惰性稀釋劑以外的額外物質(zhì)，例如制錠潤滑劑和其它制錠助劑，如硬脂酸鎂和微晶纖維素。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，劑型還可以包含緩沖劑。其可以任選地含有乳濁劑，并且還可以為使其任選地以延遲方式僅釋放活性成分或優(yōu)先在腸道的某一部分中釋放的組合物。可以使用的包埋組合物的實例包括聚合物質(zhì)和蠟。
用于局部或透皮施用的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠、散劑、溶液、噴霧劑、吸入劑或貼片。在無菌條件下，將活性組分與藥學(xué)上可接受的載體和如可能需要的任何所需防腐劑或緩沖劑混合。眼用制劑、滴耳劑和滴眼劑也涵蓋在本發(fā)明范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明涵蓋使用經(jīng)皮貼片，其具有提供化合物向身體的控制遞送的附加優(yōu)點。這些劑型可以通過將化合物溶解或分配于適當(dāng)介質(zhì)中來制備。還可以使用吸收增強劑來增加化合物穿過皮膚的通量。可以通過提供速率控制膜或通過將化合物分散于聚合物基質(zhì)或凝膠中來控制速率。
本文提供的藥學(xué)上可接受的組合物可經(jīng)配制用于經(jīng)口施用。所述制劑可以在存在或不存在食品的情況下施用。在一些實施方式中，本公開的藥學(xué)上可接受的組合物在不存在食品的情況下施用。在其它實施方式中，本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的組合物在存在食品的情況下施用。
可以與載體材料組合以產(chǎn)生單一劑型的組合物的提供的化合物的量將視待治療的患者和特定施用模式而變化。
還應(yīng)理解，任何特定患者的特定劑量和治療方案將取決于多種因素，包括年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時間、排泄率、藥物組合、治療醫(yī)師的判斷和治療的特定疾病的嚴(yán)重程度。組合物中提供的化合物的量還將取決于組合物中的特定化合物。
化合物和藥學(xué)上可接受的組合物的用途
本文所述的化合物和組合物一般可用于抑制rorγ。因此，在一些實施方式中，本發(fā)明提供了治療通過rorγ介導(dǎo)的炎癥、代謝和自身免疫疾病或病癥的方法，其包含施用提供的化合物或組合物。更確切地說，本文所述的化合物和組合物充當(dāng)rorγ的反向激動劑或拮抗劑。
如本文所使用的，術(shù)語“治療”指反轉(zhuǎn)、緩解、延遲如本文所述的疾病或病癥或其一種或更多種癥狀的開始或抑制其進程。在一些實施方式中，可以在一種或更多種癥狀發(fā)展之后實施處理，即治療處理。在其他實施方式中，治療可以在無癥狀時實施。例如，治療可以在癥狀開始之前施用于易感個體(例如，根據(jù)癥狀史和/或根據(jù)基因或其他易感因素)，即預(yù)防性處理。在癥狀已緩解之后還可以繼續(xù)治療，例如預(yù)防或延遲其復(fù)發(fā)。
根據(jù)本發(fā)明的方法可治療的疾病和病況包括但不限于由rorγ介導(dǎo)的炎癥、代謝和自身免疫疾病或病癥。這些疾病和病況包括但不限于，哮喘、慢性阻塞性肺病(copd)、支氣管炎、過敏性鼻炎、異位性皮炎、接觸性皮炎、痤瘡、風(fēng)團、蕁麻疹、血管性水腫、囊腫性纖維化、同種異體移植物排斥、多發(fā)性硬化、巴洛同心(圓形)硬化癥、巴洛病(balodisease)、同心性軸周性白質(zhì)腦炎、同心性軸周性腦炎、硬皮病、局限性硬皮病、crest綜合征、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、萊特爾綜合征(reiter’ssyndrome)、骨關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎、全身性紅斑狼瘡(sle)、銀屑病、斑塊狀銀屑病、滴狀銀屑病、反向銀屑病、膿皰性銀屑病、紅皮病型銀屑病、銀屑病上皮增生癥、上皮增生癥、橋本氏疾病(hashimoto'sdisease)、胰腺炎、自身免疫性糖尿病、i型糖尿病、自身免疫性眼部疾病、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病(crohn'sdisease)、局限性腸炎、炎性腸病(ibd)、炎性腸道綜合征(ibs)、肖格倫綜合征(
還包括的是與個體的晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)相關(guān)的疾病和病癥，包括例如重性抑郁癥、季節(jié)性情緒失調(diào)、創(chuàng)傷后緊張癥(ptsd)、躁郁病、孤獨癥、癲癇癥、阿爾茨海默病和與改變的睡眠和/或晝夜節(jié)律相關(guān)的其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)病癥。
在一個實施方式中，用本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體、佐劑或賦形劑來治療人類患者，其中所述化合物以治療或緩解一種或更多種上述疾病和病況的量而存在。在另一實施方式中，本發(fā)明化合物治療或緩解的疾病和病況包括：即哮喘、copd、支氣管炎、過敏性鼻炎、異位性皮炎、接觸性皮炎、痤瘡、蕁麻疹、囊腫性纖維化、同種異體移植物排斥、多發(fā)性硬化、硬皮病、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎、sle、銀屑病、橋本氏病、胰腺炎、自身免疫性糖尿病、i型糖尿病、自身免疫性眼部疾病、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、局限性腸炎、ibd、ibs、肖格倫綜合征、視神經(jīng)炎、肥胖癥、肝脂肪變性、脂肪組織相關(guān)炎癥、胰島素抵抗、ii型糖尿病、視神經(jīng)脊髓炎、重癥肌無力、年齡相關(guān)性黃斑變性、干眼癥、葡萄膜炎、格林-巴利綜合征、牛皮癬、psa、類固醇抵抗性哮喘、格雷夫斯氏病、鞏膜炎、重性抑郁癥、季節(jié)性情緒失調(diào)、ptsd、躁郁癥、孤獨癥、癲癇、阿爾茨海默病、與改變的睡眠和/或生理節(jié)律相關(guān)的cns障礙、子宮內(nèi)膜異位癥、osas、白塞氏病、皮肌炎、多發(fā)性肌炎、移植物抗宿主病、原發(fā)性膽汁性肝硬化、肝纖維化、nafld、類肉狀瘤病、原發(fā)性硬化性膽管炎、自身免疫性甲狀腺疾病、i型自身免疫性多內(nèi)分泌腺綜合征、ii型自身免疫性多內(nèi)分泌腺綜合征、乳糜瀉、神經(jīng)脊髓炎、青少年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、全身性硬化癥、心肌梗塞、肺動脈高血壓、骨關(guān)節(jié)炎、皮膚利什曼病、鼻腔鼻竇息肉病和癌癥。在供選擇的實施方式中，本發(fā)明化合物治療或緩解的疾病或病況包括例如患者的哮喘、異位性皮炎、痤瘡、克羅恩氏病、局限性腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、肖格倫綜合征、葡萄膜炎、白塞氏病、皮肌炎、多發(fā)性硬化、強直性脊柱炎、sle、硬皮病、銀屑病、psa、類固醇耐受性哮喘和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
本發(fā)明還涉及用于治療或緩解本文描述的疾病或病癥的組合療法。在一些實施方式中，組合療法包括將至少一種本發(fā)明的組合物與一種或更多種用于治療或緩解通過rorγ介導(dǎo)的炎癥、代謝和自身免疫疾病或病癥的試劑相結(jié)合來施用。在一些實施方式中，組合療法包括將至少一種本發(fā)明的組合物與一種或更多種用于治療或緩解本文描述的疾病或病癥的試劑相結(jié)合來施用。在一些實施方式中，組合療法包括將至少一種本發(fā)明的組合物與一種或更多種用于治療下述疾病的試劑相結(jié)合來施用，所述疾病包括哮喘、異位性皮炎、痤瘡、克羅恩氏病、局限性腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、肖格倫綜合征、葡萄膜炎、白塞氏病、皮肌炎、多發(fā)性硬化、強直性脊柱炎、sle、硬皮病、銀屑病、psa、類固醇耐受性哮喘和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
根據(jù)本發(fā)明的化合物也可以與免疫療法組合使用以治療本文所公開的疾病或病癥。
組合療法包括例如共同施用本發(fā)明的化合物和一種或更多種其它試劑、連續(xù)施用本發(fā)明的化合物和一種或更多種其它試劑、施用含有本發(fā)明的化合物和一種或更多種其它試劑的組合物、或同時施用含有本發(fā)明的化合物和一種或更多種其它試劑的各自組合物。
本發(fā)明還提供了一種治療罹患上述病癥或疾病中的一種的對象如人類的方法。
本發(fā)明還涉及提供的化合物用于生產(chǎn)用于治療和/或預(yù)防和/或改善本文中提及的疾病和病癥的藥物組合物的用途。
本文所述的化合物或組合物可使用有效治療或減輕本文所述的疾病和病況中的一種或更多種的嚴(yán)重程度的任何量和任何給藥途徑來施用。所需的精確量將在對象之間變化，取決于對象的物種、年齡以及整體狀況、感染的嚴(yán)重程度、特定藥劑、其給藥模式等。提供的化合物優(yōu)選地以單位劑型配制以易于施用且劑量均一。如本文所使用的，表述“單位劑型”是指適于待治療的患者的藥劑的物理離散單位。然而，應(yīng)理解本公開的化合物和組合物的每日總用量將由主治醫(yī)師在合理醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)決定。針對任何特定患者或有機體的特定有效劑量水平將取決于多種因素，包括所治療的病癥和病癥的嚴(yán)重程度；所用特定化合物的活性；所用特定組合物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；所用特定化合物的給藥時間、給藥途徑和排泄率；治療持續(xù)時間；與所用特定化合物組合或同時使用的藥物；以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中熟知的類似因素。
本公開的藥學(xué)上可接受的組合物可以經(jīng)口、經(jīng)直腸、非經(jīng)腸、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部地(如通過散劑、軟膏或滴劑)、經(jīng)頰、作為經(jīng)口或經(jīng)鼻噴霧等向人類和其它動物施用，取決于所治療感染的嚴(yán)重程度。在某些實施方式中，提供的化合物可以每天每千克對象體重約0.01mg到約50mg且優(yōu)選地約1mg到約25mg的劑量水平，每天一次或多次地經(jīng)口或非經(jīng)腸施用以獲得期望的治療效果。
如本文所使用的，術(shù)語“生物樣品”包括但不限于細胞培養(yǎng)物或其提取物、由哺乳動物獲得的活組織檢查物質(zhì)或其提取物，和血液、唾液、尿液、糞便、精液、淚液或其它體液或其提取物。
可與載體物質(zhì)組合產(chǎn)生單一劑型的提供的化合物和其它治療劑兩者的量(在包含如上所述的其它治療劑的那些組合物中)將取決于所治療的宿主和特定給藥模式而變化。
在包含其它治療劑的那些組合物中，所述其它治療劑和提供的化合物可以協(xié)同地起作用。因此，這些組合物中其它治療劑的量將低于僅使用那種治療劑的單一療法中所需的量。
存在于本公開的組合物中的其它治療劑的量將不大于通常將以包含那種治療劑作為唯一活性劑的組合物形式施用的量。
實施例
如以下實例中所描述的，在某些示例性實施方式中，根據(jù)以下一般程序制備化合物。應(yīng)領(lǐng)會，雖然一般方法描述了本發(fā)明的某些化合物的合成，但以下一般方法和所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的其它方法可以適用于如本文中所述的所有化合物和這些化合物中的每一種的子類和種類。
合成的一般描述
本發(fā)明的化合物可以根據(jù)以下反應(yīng)方案和實例或其修正，使用容易獲得的原料、試劑和常規(guī)合成程序容易地制備。許多反應(yīng)也可以在微波(mw)條件下或使用常規(guī)加熱或利用其它技術(shù)，如固相試劑/清除劑或流動化學(xué)系統(tǒng)進行。在這些反應(yīng)中，還可能利用本身為所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知但并未更詳細地提及的變型。此外，根據(jù)以下反應(yīng)方案和實例，制備本發(fā)明的化合物的其它方法對所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將顯而易見。在合成中間體和最終產(chǎn)物含有可能干擾期望反應(yīng)的潛在反應(yīng)性官能團，例如氨基、羥基、硫醇基和羧酸基的情況下，可能有利的是采用中間體的經(jīng)保護形式。保護基的選擇、引入和后續(xù)去除方法為所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員眾所周知。在下文論述中，除非另外指明，否則變量具有上文指示的含義。用于這些實驗細節(jié)中的縮寫列于下文且其它縮寫應(yīng)為合成領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的。另外，關(guān)于適合的合成方法，可參考以下參考文獻，如march,《advancedorganicchemistry》，第3版，johnwiley&sons，1985，greene和wuts，《protectivegroupsinorganicsynthesis》，第2版，johnwiley&sons,，1991以及richardlarock，《comprehensiveorganictransformations》，第4版，vchpublishersinc.，1989中所述。
一般來說，反應(yīng)方案中的試劑以等摩爾量使用；然而，在某些情況下，可能期望使用過量的一種試劑以驅(qū)動反應(yīng)完成。當(dāng)過量試劑可易于通過蒸發(fā)或萃取去除時，情況尤其如此。用于中和反應(yīng)混合物中的hcl的堿一般以略微到大量過量(1.05至5當(dāng)量)使用。
當(dāng)呈現(xiàn)nmr數(shù)據(jù)時，光譜在varian400(400mhz)或300(300mhz)上獲得且報道為來自四甲基硅烷的ppm低磁場，其中質(zhì)子數(shù)、多重度和偶合常數(shù)連同附帶說明的氘化溶劑的參考。
本發(fā)明通過以下實例說明，其中可以采用以下縮寫。
根據(jù)反應(yīng)方案1，根據(jù)式(i)的化合物可以通過使式(500)的中間體化合物與烷基鹵化物或芐基鹵化物反應(yīng)制備，反應(yīng)方案1為在如乙腈的極性非質(zhì)子溶劑中，在如n,n-二異丙基乙胺或碳酸鉀的適合的堿的存在下進行的反應(yīng)。任選地，根據(jù)反應(yīng)方案1，根據(jù)式(i)的最終化合物可以通過使式(500)的中間體化合物與醛遵循所屬領(lǐng)域已知的還原胺化程序，在如二氯乙烷、二氯甲烷或甲醇的典型溶劑中；在如氰基硼氫化鈉或三乙酰氧基硼氫化鈉的適合的還原試劑存在下反應(yīng)而制備。在反應(yīng)方案1中，所有變量如式(i)中所定義且g1為離去基團，如溴化物、氯化物、甲基磺酸鹽(甲磺酸鹽)、甲苯磺酸鹽(對甲苯磺酸鹽)、三氟甲基磺酸鹽(三氟甲磺酸鹽)或碘化物。
方案1.
式(500)的中間體化合物可以通過對式(501)的中間體化合物去保護來制備，其中pg為適合的氮保護基(greene和wuts，《有機合成中的保護基》(protectivegroupsinorganicsynthesis)，第2版，johnwiley&sons，1991)，例如pg＝叔丁基氨基甲酸酯，根據(jù)方案2用三氟乙酸去除。在反應(yīng)方案2中，所有變量如式(i)中所定義的。
方案2.
根據(jù)方案3，式(501)的中間體化合物可以由羧酸(502)和胺(503)制備。在活化試劑例如n-(3-二甲基氨基丙基)-n’-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(edci)或o-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(hatu)的存在下，在有機溶劑例如n,n-二甲基甲酰胺或二氯甲烷中，任選地在例如n,n-二異丙基乙胺或三乙胺的堿存在下，在例如0℃至60℃的溫度下，該反應(yīng)便利地進行。
方案3.
中間體的制備
制備a1:(s)-3-氯-7-異丙基-5,7-二氫-6h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-羧酸叔丁基酯
步驟1:(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲基-3-氧代己酸乙酯
在室溫下向boc-val-oh(3.11g，14.3毫摩爾)在thf(40ml)中的攪拌溶液添加1,1’-羰基二咪唑(3.48g，21.5毫摩爾)。在室溫下攪拌混合物1h，然后相繼添加氯化鎂(1.36g，14.3毫摩爾)和丙二酸乙酯鉀鹽(2.44g，14.3毫摩爾)。然后將混合物加熱到50℃并攪拌15h?；旌衔锢鋮s到室溫且用1n的hcl(100ml)淬滅。含水相用etoac(3×100ml)萃取，然后將合并的有機層用鹽水(50ml)洗滌。有機層經(jīng)無水mgso4干燥，過濾并在減壓下濃縮。將殘余物通過硅膠層析純化(用含5％etoac的己烷洗脫)，獲得為黃色油狀物的(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲基-3-氧代己酸乙酯(3.53g，86％產(chǎn)率)。lc-ms在1分鐘的色譜分析中，tr＝0.91分鐘，ms(esi)m/z288.3[m+h]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ5.08(d,j＝8.4hz,1h),4.33(dd,j＝4.4hz,8.8hz,1h),4.20(q,j＝7.2hz,2h),3.54(s,2h),2.27-2.17(m,1h),1.44(s,9h),1.27(t,j＝7.2hz,3h),1.01(d,j＝6.8hz,3h),0.82(d,j＝6.8hz,3h)。
步驟2：(s)-2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基丙基)-5-氯代煙酸乙酯
在0℃下向來自上文的(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲基-3-氧代己酸乙酯(9.68g，33.7毫摩爾)在thf(100ml)中的混合物添加叔丁醇鉀(3.78g，35.4毫摩爾)。使混合物升溫到室溫并攪拌45分鐘，此時相繼添加1,4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷(3.78g，33.7毫摩爾)和2-氯-1,3-雙(二甲基氨基)三次甲基六氟磷酸鹽(15.5g，50.5毫摩爾)。將混合物加熱到45℃并攪拌3h，此時添加乙酸銨(5.19g，67.4毫摩爾)。然后將混合物加熱至回流并攪拌15h。然后將其冷卻到室溫并在減壓下濃縮。將殘余物干式負(fù)載到硅膠柱上并純化(用含5％etoac的己烷洗脫，梯度到15％)，以獲得6.09g(s)-2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基丙基)-5-氯代煙酸乙酯(51％)。lc-ms在1分鐘的色譜分析中，tr＝1.14分鐘，ms(esi)m/z357.3[m+h]+。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ8.61(d,j＝2.4hz,1h),8.18(d,j＝2.8hz,1h),5.71(d,j＝9.6hz,1h),5.62(dd,j＝5.2hz,9.6hz,1h),4.42(q,j＝7.2hz,2h),2.08-2.00(m,1h),1.42(s,9h),1.42(t,j＝7.2hz,3h),0.93(d,j＝6.4hz,3h),0.83(d,j＝6.4hz,3h)。
步驟3：(s)-(1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2-甲基丙基)氨基甲酸叔丁基酯
在0℃下向(s)-2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基丙基)-5-氯代煙酸乙酯(6.09g，17.1毫摩爾)在etoh(70ml)中的攪拌溶液添加硼氫化鈉(1.30g，34.1毫摩爾)。分批添加氯化鈣(1.89g，17.1毫摩爾)，同時將溫度維持在0℃至5℃。所得混合物在0℃下攪拌90分鐘，然后在0℃下用氯化銨飽和水溶液(100ml)緩慢淬滅。含水相用etoac(3×100ml)萃取，然后將合并的有機層用鹽水(50ml)洗滌，經(jīng)無水mgso4干燥，過濾并在減壓下濃縮。粗(s)-(1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2-甲基丙基)氨基甲酸叔丁基酯不經(jīng)任何純化而進行后續(xù)步驟。lc-ms在1分鐘的色譜分析中，tr＝0.94分鐘，ms(esi)m/z315.3[m+h]+。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ8.46(d,j＝2.4hz,1h),7.67(d,j＝2.8hz,1h),5.34(d,j＝9.2hz,1h),4.99(dd,j＝2.0hz,8.4hz,1h),4.54(t,j＝9.2hz,1h),4.41(dd,j＝10.0hz,12.4hz,1h),4.33(d,j＝10.0hz,1h),2.18-2.12(m,1h),1.36(s,9h),1.10(d,j＝6.4hz,3h),0.69(d,j＝6.8hz,3h)。
步驟4：(s)-2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基丙基)-5-氯吡啶-3-基)甲磺酸甲酯
在0℃下向(s)-(1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2-甲基丙基)氨基甲酸叔丁酯(5.33g，16.9毫摩爾)在ch2cl2(70ml)中的溶液添加三乙胺(3.54ml，25.4毫摩爾)和甲磺酰氯(1.44ml，18.6毫摩爾)。使混合物升溫到室溫并攪拌3h，此時用飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)將其淬滅。將水相用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(50ml)洗滌，經(jīng)無水mgso4干燥，過濾并在減壓下濃縮。粗殘余物((s)-(2-(1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙基)-5-氯吡啶-3-基)甲磺酸甲酯和(s)-(1-(5-氯-3-(氯甲基)吡啶-2-基)-2-甲基丙基)氨基甲酸叔丁酯的3:1混合物)不經(jīng)任何純化而進行后續(xù)步驟。lc-ms在1分鐘色譜分析中，tr＝1.01分鐘，ms(esi)m/z393.3[m+h]+。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ8.53(d,j＝2.4hz,1h),7.74(d,j＝2.8hz,1h),5.44(d,j＝12.4hz,1h),5.37(d,j＝12.8hz,1h),5.31(d,j＝8.4hz,1h),4.59(t,j＝9.2hz,1h),3.13(s,3h),2.13-2.04(m,1h),1.36(s,9h),1.03(d,j＝6.8hz,3h),0.77(d,j＝6.8hz,3h)。表征數(shù)據(jù)來自(s)-(2-(1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙基)-5-氯吡啶-3-基)甲磺酸甲酯的純化樣品。
步驟5：(s)-3-氯-7-異丙基-5,7-二氫-6h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁基酯
在0℃下向(s)-(2-(1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙基)-5-氯吡啶-3-基)甲磺酸甲酯和(s)-(1-(5-氯-3-(氯甲基)吡啶-2-基)-2-甲基丙基)氨基甲酸叔丁酯(3:1混合物，6.39g，16.9毫摩爾)在thf(75ml)中的溶液添加氫化鈉(礦物油中60％的分散液，811mg，20.3毫摩爾)。使混合物升溫到室溫并攪拌15h，此時用飽和氯化銨水溶液(100ml)將其淬滅。水相用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。合并的有機層用鹽水(50ml)洗滌，經(jīng)無水mgso4干燥，過濾并在減壓下濃縮。將殘余物通過硅膠層析純化(用含5％etoac的己烷洗脫，梯度至10％)，獲得為黃色油狀物的(s)-3-氯-7-異丙基-5,7-二氫-6h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁基酯(4.31g，經(jīng)3個步驟的產(chǎn)率為85％)。lc-ms在1分鐘色譜分析中，tr＝1.12分鐘，ms(esi)m/z297.3[m+h]+。1hnmr(cdcl3,400mhz,旋光異構(gòu)體的混合物)：δ8.43(s,1h),7.56(s,0.6h),7.50(s,0.4h),4.96(s,0.4h),4.87(s,0.6h),4.86(d,j＝16.0hz,0.6h),4.74(d,j＝15.6hz,0.4h),4.52(d,j＝12.0hz,0.4h),4.49(d,j＝15.2hz,0.6h),2.60-2.51(m,0.4h),2.40-2.36(m,0.6h),1.49(s,9h),1.08(d,j＝7.2hz,1.2h),0.99(d,j＝7.2hz,1.8h),0.78(d,j＝6.8hz,1.8h),0.72(d,j＝6.8hz,1.2h)。
步驟6：(s)-3-氯-7-異丙基-5,7-二氫-6h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁基酯
碳酸鉀(758mg，5.49毫摩爾)和
制備a2：(s)-6-(叔丁氧基羰基)-7-乙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟1：(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-氧代己酸甲酯
在室溫下向(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(200g,0.985摩爾)在thf中的混合物(1l)添加1,1’-羰基二咪唑(176g,1.084摩爾)。在室溫下攪拌混合物1h，然后添加氯化鎂(101g，1.084摩爾)和3-甲氧基-3-氧代丙酸鉀(169g,1.084摩爾)。添加之后，將混合物在50℃下攪拌3h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示原料被消耗。將混合物冷卻并過濾；用thf(300ml)洗滌濾餅并過濾。將合并的濾液在減壓下濃縮，殘余物用etoac(1l)稀釋，用水(800ml)、鹽水(800ml)洗滌,經(jīng)無水硫酸鈉干燥，在減壓下過濾并濃縮，以獲得為黃色油狀物的(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-氧代己酸甲酯(117g,45％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。
步驟2：(s)-2-(1-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-5-氯代煙酸甲酯
在0℃下，向(s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-3-氧代己酸甲酯(117g，0.452摩爾)在無水thf中的溶液(1.0l)分批添加叔丁醇鉀(51.3g，0.474摩爾)。在0℃下攪拌1h之后，在0℃下向混合物中分批加入1,4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷(53.1g,0.474摩爾)和2-氯-1,3-雙(二甲基氨基)三次甲六氟磷酸鹽(145g,0.474摩爾)。將混合物在室溫下攪拌3小時，溶液變?yōu)榧t色。向溶液中添加乙酸銨(104g,1.355摩爾)，將獲得的混合物在室溫下攪拌過夜。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示無原料殘留。將混合物冷卻并過濾；在減壓下濃縮濾液，將殘余物用etoac(1.5l)稀釋，并用水(1l)、鹽水(1l)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，在減壓下過濾并濃縮。將殘余物通過硅膠層析純化，用石油醚：乙酸乙酯＝25:1至17:1洗脫，以獲得為黃色油狀物的(s)-2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)丙基)-5-氯代煙酸甲酯(53g,36％)。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析(merckrp-18e25-2mm)中，tr＝0.961分鐘，ms(esi)m/z272.9[m-55]+。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ8.61(d,j＝2.4hz,1h),8.18(d,j＝2.4hz,1h),5.71-5.54(m,1h),3.94(s,3h),1.86-1.83(m,1h),1.60-1.58(m,1h),1.26(s,9h),0.95(t,j＝7.2hz,3h)。
步驟3：(s)-(1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)丙基)氨基甲酸叔丁基酯
在0℃下，向(s)-2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)丙基)-5-氯代煙酸甲酯(60g，0.183摩爾)在無水乙醇中的溶液(800ml)緩慢地分批添加硼氫化鈉(14.0g，0.366摩爾)并攪拌約20分鐘。在0℃下向獲得的混合物分四批緩慢地添加氯化鈣(20.1g，0.183摩爾)。將混合物在0℃下攪拌1.5h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示無原料殘留。在0℃下，將混合物用飽和nh4cl(50ml)水溶液緩慢淬滅，然后攪拌30分鐘。將混合物濃縮以去除部分乙醇，然后用乙酸乙酯(3×1.0l)萃取。將合并的有機層用水(2×1.0l)和飽和nahco3水溶液(500ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮，以獲得為黃色油狀物的(s)-(1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)丙基)氨基甲酸叔丁基酯(50g,91％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。lc-ms在5-95ab_1.5min色譜分析(merckrp-18e25-2mm)中，tr＝0.703分鐘，ms(esi)m/z244.9[m-55]+。
步驟4：(s)-(1-(5-氯-3-(氯甲基)吡啶-2-基)丙基)氨基甲酸叔丁基酯和4-甲基苯磺酸(s)-(2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)丙基)-5-氯吡啶-3-基)甲酯
在0℃下，向(s)-(1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)丙基)氨基甲酸叔丁基酯(50g，0.167摩爾)在ch2cl2中的溶液(500ml)添加三乙胺(50.5g,0.499摩爾)和對甲苯磺酰氯(63g,0.333摩爾)。在室溫下攪拌混合物1.5h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示無原料殘留。將混合物用ch2cl2(500ml)稀釋，用水(2×1.0l)和鹽水(1l)洗滌，經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物通過硅膠層析純化(用石油醚：乙酸乙酯＝0至10:1洗脫)，獲得為紅色固體的(s)-(1-(5-氯-3-(氯甲基)吡啶-2-基)丙基)氨基甲酸叔丁基酯(11g,21％)和為黃色固體的4-甲基苯磺酸(s)-(2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)丙基)-5-氯吡啶-3-基)甲酯(23g,30％)。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析(merckrp-18e25-2mm)中，tr＝0.840分鐘，ms(esi)m/z262.9[m-55]+。
步驟5：(s)-3-氯-7-乙基-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯
步驟與對于(s)-3-氯-7-異丙基-5,7-二氫-6h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁基酯，用(s)-(1-(5-氯-3-(氯甲基)吡啶-2-基)丙基)氨基甲酸叔丁基酯(11g,34.6毫摩爾)和4-甲基苯磺酸(s)-(2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)丙基)-5-氯吡啶-3-基)甲酯作為原料的步驟相同。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ8.45(s,1h),7.56(s,0.6h),7.50(s,0.4h),5.30(s,0.4h),4.94(s,0.6h),4.77(d,j＝15.6hz,0.6h),4.70(d,j＝15.6hz,0.4h),4.55(s,0.6h),4.51(s,0.4h),2.26-2.14(m,1h),2.04-1.96(m,1h),1.51(s,9h),0.67(t,j＝7.6hz,3h)。
步驟6：(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-乙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
碳酸鉀(33.8g，24.5毫摩爾)和
制備a3：(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-(四氫-2h-吡喃-4-基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟1：(r,e)-2-甲基-n-((四氫-2h-吡喃-4-基)亞甲基)丙烷-2-亞磺酰胺
步驟與(r,e)-n-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺與四氫-2h-吡喃-4-醛以及(r)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺作為原料的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析(merckrp-18e25-2mm)中，tr＝1.072分鐘，ms(esi)m/z217.9[m+h]+。
步驟2：2,5-二溴-3-(溴甲基)吡啶
將在ccl4(300ml)中的2,5-二溴-3-甲基吡啶(20.0g,80.0毫摩爾)、n-溴代琥珀酰亞胺(12.8g,72毫摩爾)和過氧化苯甲酰(1.03g,4毫摩爾)的混合物加熱至回流3h。將混合物冷卻至室溫，用水(2×100ml)和鹽水(100ml)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在真空下濃縮。將殘余物用制備型hplc(hcl)純化，獲得為白色固體的2,5-二溴-3-(溴甲基)吡啶(11.0g,42％)。1hnmr：(cdcl3,400mhz)：δ8.38-8.39(d,j＝2.4hz,1h),7.91-7.92(d,j＝2.4hz,1h),4.51(s,2h)。
步驟3：2,5-二溴-3-(甲氧基甲基)吡啶
將2,5-二溴-3-(溴甲基)吡啶(11.0g,33.3毫摩爾)和甲醇鈉(5.4g,100毫摩爾)在甲醇(150ml)中的混合物在室溫下攪拌18h。將混合物過濾并將濾液在真空下濃縮。將殘余物用硅膠層析純化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1洗脫)，獲得為液體的2,5-二溴-3-(甲氧基甲基)吡啶(8.7g，93％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ8.35(s,1h),7.93(s,1h),4.45(s,2h),3.53(s,3h)。
步驟4：(r)-n-((s)-(5-溴-3-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺和(r)-n-((r)-(5-溴-3-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺
步驟與(r)-n-((r)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-1-(4-(乙基硫代)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺和2,5-二溴-3-(甲氧基甲基)吡啶以及(r)-叔丁基磺酰胺作為原料時的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(merckrp-18e25-2mm)，tr＝0.824分鐘，ms(esi)m/z420.9[m+1]+。異構(gòu)體sfc在25分鐘色譜分析中(柱：as-rh_10-80_b_08ml_25min)，tr＝11.19和11.71，ee＝97.16％。
步驟5：(s)-(2-(氨基(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)-5-溴吡啶-3-基)甲醇
在-30℃下，向(r)-n-((s)-(5-溴-3-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(1.5g,3.6毫摩爾)在ch2cl2(30ml)中的溶液添加三溴化硼(4.5g,18.0毫摩爾)。將混合物在-30℃下攪拌2h。然后在-30℃下將meoh(5ml)小心地添加至混合物中并使反應(yīng)升溫至室溫。達到室溫后，將混合物在減壓下濃縮以提供為油狀物的粗產(chǎn)物(s)-(2-(氨基(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)-5-溴吡啶-3-基)甲醇(1.0g，粗產(chǎn)物)，其不經(jīng)進一步純化用于下一步。lc-ms在0-30cd_pos.m(merckrp-18e25-2mm)中，tr＝0.176分鐘，ms(esi)m/z303.0[m+1]+。
步驟6：(s)-((5-溴-3-(羥甲基)吡啶-2-基)(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯
將(s)-(2-(氨基(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)-5-溴吡啶-3-基)甲醇(1.0g,3.3毫摩爾)、二叔丁基碳酸氫鈉(1.1g,5.0毫摩爾)和三乙胺(1.0g,10毫摩爾)在ch2cl2(10ml)中的混合物在室溫下攪拌16h。將混合物用水(10ml)淬滅并用ch2cl2(3×10ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(2×10ml)洗滌，經(jīng)無水na2so4干燥，過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析純化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1至3:1洗脫)，以提供為油狀物的(s)-((5-溴-3-(羥甲基)吡啶-2-基)(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯(500mg，38％)。lc-ms在0-30cd_pos.m色譜分析(merckrp-18e25-2mm)中，tr＝2.870分鐘，ms(esi)m/z401.1[m+1]+。
步驟7：(s)-((5-溴-3-(氯甲基)吡啶-2-基)(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯
步驟與用(s)-(2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基丙基)-5-氯吡啶-3-基)甲磺酸甲酯與(s)-((5-溴-3-(羥甲基)吡啶-2-基)(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯為原料的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析(merckrp-18e25-2mm)中，tr＝0.943分鐘，ms(esi)m/z365.0[m+1]+。
步驟8：(s)-3-溴-7-(四氫-2h-吡喃-4-基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯
步驟與用(s)-3-氯-7-異丙基-5,7-二氫-6h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁基酯和(s)-((5-溴-3-(氯甲基)吡啶-2-基)(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯(350mg,0.83毫摩爾)為原料時的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析(merckrp-18e25-2mm)中，tr＝1.723分鐘，ms(esi)m/z385.1[m+1]+。異構(gòu)體sfc在12分鐘色譜(柱:ad-rh_10-80_b_08ml_25分鐘)中，tr＝2.930分鐘和4.433分鐘，ee＝97.80％。
步驟9：(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-(四氫-2h-吡喃-4-基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟與用(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-異丙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸和(s)-3-溴-7-(四氫-2h-吡喃-4-基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯作為原料時的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析(merckrp-18e25-2mm)中，tr＝0.685分鐘，ms(esi)m/z349.1[m+1]+。異構(gòu)體sfc在15分鐘色譜分析(柱：ad-h_5_5_40_2,35ml)中，tr＝5.146分鐘和5.602分鐘，ee＝95.89％.
制備a4：(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟1：2-(二氫-2h-吡喃-4(3h)-亞基)乙酸乙酯
在0℃下，向乙腈(500ml)中的二氫-2h-吡喃-4(3h)-酮(22.5g,225毫摩爾)混合物添加(乙氧羰基亞甲基)三苯基膦(86.1g,247毫摩爾)。將混合物在85℃至90℃下(油浴)攪拌48h。lcms顯示強產(chǎn)物峰，多數(shù)的(乙氧羰基亞甲基)三苯基膦被消耗。將混合物冷卻至室溫、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析純化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1洗脫)，獲得為黃色固體的2-(二氫-2h-吡喃-4(3h)-亞基)乙酸乙酯(38g，99％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ5.66(s,1h),4.09-4.14(q,j＝7.2hz,2h),3.71-3.77(m,4h),2.98-3.01(t,j＝5.2hz,2h),2.30-2.32(t,j＝4.8hz,2h),1.24-1.28(t,j＝7.2hz,3h)。
步驟2：2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙酸乙酯
在h2(30psi)下，在16℃至19℃下攪拌2-(二氫-2h-吡喃-4(3h)-亞基)乙酸乙酯(21g，123毫摩爾)和干燥的pd/c(2.5g)在甲醇(300ml)中的混合物18h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)顯示無原料殘留。將混合物過濾并將濾液在減壓下濃縮以獲得為油狀物的粗2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙酸乙酯(20g,94％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ4.11-4.15(q,j＝7.2hz,2h),3.93-3.95(d,j＝10.8hz,2h),3.37-3.43(t,j＝11.6hz,2h),2.23-2.25(d,j＝6.8hz,2h),1.99-2.03(m,1h),1.62-1.65(m,2h),1.32-1.36(m,2h),1.24-1.27(t,j＝7.2hz,3h)。
步驟3：2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙醇
在0℃下，向2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙酸乙酯(20g,116毫摩爾)在無水thf(300ml)中的混合物分批添加氫化鋁鋰(8.8g,232毫摩爾)。將混合物在11℃至13℃下攪拌18h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)顯示無原料殘留。在0℃下，將混合物相繼用水(9ml)，10％naoh水溶液(9ml)和水(18ml)淬滅，過濾并在減壓下濃縮以獲得為油狀物的粗2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙醇(11.7g,77％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ3.86-3.90(m,2h),3.58-3.61(t,j＝6.4hz,2h),3.32-3.35(t,j＝11.6hz,2h),2.69-2.70(m,1h),1.61-1.63(m,3h),1.54-1.60(m,2h),1.43-1.45(m,2h)。
步驟4：2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙醛
在16℃至19℃下，將2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙醇(11.70g,89.9毫摩爾)和氯鉻酸吡啶(38.8g,179.8毫摩爾)在ch2cl2(200ml)中的混合物攪拌17h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)顯示反應(yīng)完成。將混合物用硅藻土過濾，濾液(150ml)不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。
步驟5：(r,e)-2-甲基-n-(2-(四氫-2h-吡喃-4-基)亞乙基)丙烷-2-亞磺酰胺
該步驟與用(r,e)-n-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺與2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙醛以及(r)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(21.8g,179.8毫摩爾)作為原料的步驟相同。lc-ms在10-80ab_2.0分鐘色譜(xtimate3um,c18,2.1*30mm)中，tr＝1.082分鐘，ms(esi)m/z232.0[m+h]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ8.06-8.09(t,j＝5.2hz,1h),3.38-3.44(m,4h),2.47-2.50(m,2h),2.29-2.31(m,1h),1.62-1.68(m,4h)。
步驟6：(r)-n-((s)-1-(5-溴-3-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)-2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺和(r)-n-((r)-1-(5-溴-3-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)-2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺
步驟與用(r)-n-((r)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-1-(4-(乙基硫代)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺與2,5-二溴-3-(甲氧基甲基)吡啶和(r,e)-2-甲基-n-(2-(四氫-2h-吡喃-4-基)亞乙基)丙烷-2-亞磺酰胺作為原料的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(merckrp-18e25-2mm)，tr＝0.849分鐘，ms(esi)m/z433.0[m+h]+。異構(gòu)體sfc在25分鐘色譜分析中(柱：ad-rh_10-80_b_08ml_25分鐘)，tr＝12.39，ee＝97.16％。其它異構(gòu)體:lc-ms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimate,2.1*30mm,3um)，tr＝1.081分鐘，ms(esi)m/z433.0[m+h]+。異構(gòu)體sfc在25分鐘色譜分析中(柱:ad-rh_10-80_b_08ml_25分鐘)，tr＝13.04分鐘和15.09分鐘，ee＝96.46％。
步驟7：(s)-(2-(1-氨基-2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙基)-5-溴吡啶-3-yl)甲醇
步驟與(s)-(2-(氨基(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)-5-溴吡啶-3-基)甲醇和(r)-n-((s)-1-(5-溴-3-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)-2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺作為原料的步驟相同。lc-ms在0-30ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimate,2.1*30mm,3um)，tr＝0.307分鐘，ms(esi)m/z315.0[m+h]+。
步驟8：(s)-1-(5-溴-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙基氨基甲酸叔丁基酯
步驟與(s)-((5-溴-3-(羥甲基)吡啶-2-基)(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯并且(s)-(2-(1-氨基-2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙基)-5-溴吡啶-3-基)甲基作為原料的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(mkrp-18e25-2mm)，tr＝0.716分鐘，ms(esi)m/z414.9[m+h]+。
步驟9：(s)-1-(5-溴-3-(氯甲基)吡啶-2-基)-2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙基氨基甲酸叔丁基酯
步驟與(s)-甲磺酸(2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基丙基)-5-氯吡啶-3-基)甲酯以及(s)-1-(5-溴-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙基氨基甲酸叔丁基酯為原料的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(merckrp-18e25-2mm)，tr＝0.962分鐘，ms(esi)m/z434.9[m+1]+。
步驟10：(s)-3-溴-7-((四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯
步驟與用(s)-3-氯-7-異丙基-5,7-二氫-6h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁基酯以及(s)-1-(5-溴-3-(氯甲基)吡啶-2-基)-2-(四氫-2h-吡喃-4-基)乙基氨基甲酸叔丁基酯為原料的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(mkrp-18e25-2mm)，tr＝0.792分鐘，ms(esi)m/z396.9[m+h]+。
步驟11：(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟與用(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-異丙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸和(s)-3-溴-7-(四氫-2h-吡喃-4-基)甲基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯作為原料的步驟相同。lc-ms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimate3um,c18,2.1*30mm)，tr＝0.990分鐘，ms(esi)m/z363.1[m+1]+。
制備a5：(s)-7-芐基-6-(叔丁氧羰基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟1：(s)-4-(叔丁氧羰基氨基)-3-氧代-5-苯基戊酸甲酯
步驟與用(s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-甲基-3-氧代己酸乙酯和(s)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基丙酸作為原料的步驟相同。
步驟2：(s)-2-(1-(叔丁氧羰基氨基)-2-苯乙基)-5-氯代煙酸甲酯
步驟與用(s)-2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基丙基)-5-氯代煙酸酯和(s)-4-(叔丁氧羰基氨基)-3-氧代-5-苯基戊酸甲酯作為原料的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析(mkrp18e25-2mm)中，tr＝1.007分鐘，ms(esi)m/z335.1[m-55]+。
步驟3：(s)-1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2-苯基乙基氨基甲酸叔丁基酯
步驟與用(s)-(1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2-甲基丙基)氨基甲酸叔丁基酯以及(s)-2-(1-(叔丁氧羰基氨基)-2-苯基乙基)-5-氯代煙酸甲酯作為原料的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(mkrp18e25-2mm)，tr＝0.812分鐘，ms(esi)m/z362.9，306.8[m+h]+,[m-55]+。
步驟4：4-甲基苯磺酸(s)-(2-(1-(叔丁氧羰基氨基)-2-苯基乙基)-5-氯吡啶-3-基)甲酯
步驟與用4-甲基苯磺酸(s)-(2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)丙基)-5-氯吡啶-3-基)甲酯以及(s)-1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2-苯基乙基氨基甲酸叔丁基酯為原料的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(mkrp18e25-2mm)，tr＝1.069分鐘，ms(esi)m/z539.1[m+23]+。
步驟5：(s)-7-芐基-3-氯-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯
步驟與(s)-3-氯-7-異丙基-5,7-二氫-6h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁基酯以及4-甲基苯磺酸(s)-(2-(1-(叔丁氧羰基氨基)-2-苯基乙基)-5-氯吡啶-3-基)甲酯為原料的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(mkrp18e25-2mm)，tr＝0.995分鐘，ms(esi)m/z345.1[m+h]+。
步驟6：(s)-7-芐基-6-(叔丁氧羰基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟與用(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-異丙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸和(s)-7-芐基-3-氯-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯作為原料的步驟相同。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(mkrp18e25-2mm)，tr＝0.869分鐘，ms(esi)m/z355.2[m+h]+。
制備a6：6-(叔丁氧羰基)-7-甲基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟1：4-(叔丁氧羰基氨基)-3-氧代戊酸甲酯
步驟與用(s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-甲基-3-氧代己酸乙酯以及2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸作為原料的步驟相同。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ5.05-5.26(m,1h),4.28-4.39(m,1h),3.72(s,3h),3.50-3.62(m,2h),1.42(s,9h),1.30-1.35(d,j＝7.2hz,3h)。
步驟2：2-(1-(叔丁氧羰基氨基)乙基)-5-氯代煙酸甲酯
步驟與用(s)-2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基丙基)-5-氯代煙酸酯以及4-(叔丁氧羰基氨基)-3-氧代戊酸甲酯作為原料的步驟相同。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ8.57-8.68(d,j＝2.8hz,1h),8.14-8.24(d,j＝2.4hz,1h),5.55-5.91(m,2h),3.95(s,3h),1.34-1.47(m,12h)。lcms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xbridgeshieldrp182.1*50mm)，tr＝1.063分鐘，ms(esi)m/z315.1[m+h]+。
步驟3：1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)乙基氨基甲酸叔丁基酯
步驟與用(s)-(1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2-甲基丙基)氨基甲酸叔丁基酯以及2-(1-(叔丁氧羰基氨基)乙基)-5-氯代煙酸甲酯作為原料的步驟相同。lcms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xbridgeshieldrp182.1*50mm)，tr＝0.887分鐘，ms(esi)m/z287.1[m+h]+。
步驟4：1-(5-氯-3-(氯甲基)吡啶-2-基)乙基氨基甲酸叔丁基酯
步驟與用4-甲苯磺酸(s)-(2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)丙基)-5-氯吡啶-3-基)甲酯以及1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)乙基氨基甲酸叔丁基酯為原料的步驟相同。lcms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xbridgeshieldrp182.1*50mm)，tr＝1.086分鐘，ms(esi)m/z305.1[m+h]+。
步驟5：3-氯-7-甲基-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯
步驟與用(s)-3-氯-7-異丙基-5,7-二氫-6h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁基酯以及1-(5-氯-3-(氯甲基)吡啶-2-基)乙基氨基甲酸叔丁基酯為原料的步驟相同。lcms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xbridgeshieldrp182.1*50mm)，tr＝1.047分鐘，ms(esi)m/z269.1[m+h]+。
步驟6：6-(叔丁氧羰基)-7-甲基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟與用(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-異丙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸以及3-氯-7-甲基-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯作為原料的步驟相同。lcms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xbridgeshieldrp182.1*50mm)，tr＝0.882分鐘，ms(esi)m/z279.1[m+h]+。
制備a7：(r)-6-(叔丁氧羰基)-7-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟1：(s)-2-(叔丁氧羰基)氨基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)丙酸
在0℃下，向(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-羥基丙酸(30g，0.146摩爾)在無水dmf(300ml)中的溶液添加叔丁基氯二甲基甲硅烷(21.90g，0.146摩爾)和咪唑(19.80g，0.292摩爾)，然后將混合物在室溫下攪拌18h。將混合物用乙酸乙酯(300ml)和水(300ml)稀釋，用乙酸乙酯(3×300ml)萃取，用水(2×1000ml)和鹽水(2×1000ml)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，以獲得為黃色油狀物的(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)丙酸(34g,72％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ5.20-5.30(m,1h),4.25-4.35(m,1h),4.01-4.15(m,1h),3.75-3.85(m,1h),1.40(s,9h),0.82(s,9h),0.01(s,6h)。
步驟2：(s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-3-氧代戊酸甲酯
將(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)丙酸(24.0g，75.2毫摩爾)，1,1’-羰基二咪唑(14.6g，90.2毫摩爾)在thf(250ml)中的混合物在室溫下攪拌1h。然后添加3-甲氧基-3-氧代丙酸鉀(11.70g，75.2毫摩爾)和氯化鎂(7.14g，75.2毫摩爾)。添加之后，將混合物在50℃下攪拌16h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示原料被消耗。將混合物用水(200ml)猝滅和用乙酸乙酯(3×150ml)萃取。將合并的有機層用飽和nahco3水溶液(500ml)和鹽水(500ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮，以獲得作為黃色油狀物的(s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-3-氧代戊酸甲酯(28g,100％粗產(chǎn)物)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。lcms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimate,2.1*30mm,3um)，tr＝1.282分鐘，ms(esi)m/z276.1[m-100]+。
步驟3：(r)-5-氯-2-(2,2,3,3,10,10-六甲基-8-氧代-4,9-二氧雜-7-氮雜-3-硅雜十一烷-6-基)煙酸甲酯
在0℃下，向(s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-3-氧代戊酸甲酯(32g,85.3毫摩爾)在thf(320ml)中的溶液添加叔丁醇鉀(10.50g，93.8毫摩爾)。攪拌45分鐘之后，在0℃下向混合物添加dabco(10.5g,93.8毫摩爾)和2-氯-1,3-雙(二甲基氨基)三次甲基六氟磷酸酯(27g，89.5毫摩爾)。將混合物在室溫下攪拌3h。將乙酸銨(7.20g,93.8毫摩爾)添加到上述溶液中，并將獲得的溶液在室溫下攪拌18h。tlc顯示(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示原料被消耗。將混合物過濾并將濾液在減壓下濃縮。將殘余物用乙酸乙酯(200ml)稀釋，用水(3×100ml)和鹽水(100ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝10:1，梯度至8:1洗脫)純化，以獲得為白色固體的(r)-5-氯-2-(2,2,3,3,10,10-六甲基-8-氧代-4,9-二氧雜-7-氮雜-3-硅雜十一烷-6-基)煙酸甲酯(11g，29％)。lcms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimate,2.1*30mm,3um)，tr＝0.990分鐘，ms(esi)m/z445.0[m+h]+。
步驟4：(r)-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯
在0℃下，向(r)-5-氯-2-(2,2,3,3,10,10-六甲基-8-氧代-4,9-二氧雜-7-氮雜-3-硅雜十一烷-6-基)煙酸甲酯(4.0g，9.0毫摩爾)在乙醇(40ml)中的溶液添加硼氫化鈉(0.66g，18.0毫摩爾)和氯化鈣(1.0g，9.0毫摩爾)。在0℃下將混合物攪拌2h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)顯示原料被消耗。將混合物用飽和nh4cl水溶液(20ml)淬滅并在減壓下濃縮。將殘余物用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(20ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮，以獲得為無色油狀物的(r)-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(3.45g,92％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。
步驟5：(r)-4-甲基苯磺酸(5-氯-2-(2,2,3,3,10,10-六甲基-8-氧代-4,9-二氧雜-7-氮雜-3-硅雜十一烷-6-基)吡啶-3-基)甲酯
在0℃下，向(r)-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-1-(5-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(3.45g，8.20毫摩爾)在ch2cl2(40ml)中的溶液緩慢添加對甲苯磺酰氯(3.15g，16.40毫摩爾)和三乙胺(2.48g，24.60毫摩爾)。在0℃下攪拌混合物1h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示原料被消耗。將混合物用飽和nahco3水溶液(20ml)淬滅，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取并用鹽水(20ml)洗滌。將合并的有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝10:1，梯度至5:1洗脫)純化，以獲得無色油狀物的(r)-4-甲基苯磺酸(5-氯-2-(2,2,3,3,10,10-六甲基-8-氧代-4,9-二氧雜-7-氮雜-3-硅雜十一烷-6-基)吡啶-3-基)甲酯(3.15g,66％)。lcms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimate,2.1*30mm,3um)，tr＝1.497分鐘，ms(esi)m/z571.0[m+h]+。
步驟6：(r)-7-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)甲基)-3-氯-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯
在0℃下，向(r)-4-甲基苯磺酸(5-氯-2-(2,2,3,3,10,10-六甲基-8-氧代-4,9-二氧雜-7-氮雜-3-硅雜十一烷-6-基)吡啶-3-基)甲酯(3.15g，5.5毫摩爾)在dmf(30ml)中的溶液添加氯化鈉(0.66g，16.5毫摩爾，60％分散于礦物油中)。在0℃下將混合物攪拌1h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示原料被消耗。將混合物用飽和nh4cl水溶液(30ml)淬滅并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(20ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析純化(用石油醚：乙酸乙酯＝10:1，梯度至5:1洗脫)，以獲得為無色油狀物的(r)-7-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)甲基)-3-氯-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯(1.20g,54％)。lcms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimateods2.1*30mm,3um)，tr＝1.323分鐘，ms(esi)m/z343.1[m-55]+。
步驟7：(r)-6-(叔丁氧羰基)-7-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟與用(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-乙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸和(r)-7-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)甲基)-3-氯-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯作為原料的步驟相同。lcms在10-80ab_7.0分鐘色譜分析中(xtimateods2.1*30mm,3um)，tr＝3.835分鐘，ms(esi)m/z353.1[m-55]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ9.20(s,1h),8.18(d,j＝22.4hz,1h),4.99(s,1h),4.76(s,1h),4.63-4.64(m,1h),4.42-4.63(m,1h),4.07-4.12(m,1h),1.53(s,9h),0.65(s,9h),0.07(s,3h),0.18(s,3h)。基本制備型hplc方法.流動相a：含有0.05％nh3h2o的水。流動相b：ch3cn。流速：80毫升/分鐘。檢測：uv220nm/254nm。柱：phenomenexgeminic18250*50mm*5um。柱溫：30℃。以分鐘計的時間,％a,％b；0.00,55,35；30.00,40,60；30.20,0,100；35.00,0,100。
制備a8：(r)-6-(叔丁氧羰基)-7-(甲氧基甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟1：(r)-3-氯-7-(羥甲基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯
向(r)-7-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)甲基)-3-氯-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯(1.0g，2.5毫摩爾)在thf(10ml)中的溶液滴加四丁基氟化銨(5ml，在thf中的1.0m)。將混合物在室溫下攪拌4h。lcms顯示原料被消耗。將混合物在減壓下濃縮。將殘余物用乙酸乙酯(3×10ml)萃取，然后將合并的有機層用鹽水(20ml)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析純化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1，梯度至1:1)，以獲得為白色固體的(r)-3-氯-7-(羥甲基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯(0.55g，77％)。lcms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(rp-18e,25-2mm)，tr＝0.712分鐘，ms(esi)m/z229[m-55]+。
步驟2：(r)-3-氯-7-(甲氧基甲基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯
向(r)-3-氯-7-(羥甲基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯(0.55g，1.93毫摩爾)在ch3cn(10ml)中的溶液滴加銀(i)的氧化物(2.24g，9.68毫摩爾)和碘甲烷(0.60ml，9.68毫摩爾)。將混合物在室溫下攪拌18h。lcms顯示原料被消耗。將混合物過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析純化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1，梯度至1:1)，以獲得為黃色固體的(r)-3-氯-7-(甲氧基甲基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯(0.40g，69％)。lcms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(rp-18e,25-2mm)，tr＝0.725分鐘，ms(esi)m/z298.9[m+h]+。
步驟3：(r)-6-(叔丁氧羰基)-7-(甲氧基甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟與用(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-乙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸和(r)-3-氯-7-(甲氧基甲基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯(400mg,1.34毫摩爾)作為原料的步驟相同。lcms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimateods,2.1*30mm,3um)，tr＝0.937分鐘，ms(esi)m/z309.2[m+h]+。hcl制備型hplc方法.流動相a：含有0.05％hcl的水。流動相b：ch3cn.流速：30毫升/分鐘。檢測：uv220nm/254nm。柱：synergimax-rp150*30mm*4u.柱溫：30℃。以分鐘計的時間,％a,％b；0.00,70,30；11.00,5,95；11.20,0,100；13.00,0,100。
制備a9：(r)-6-(叔丁氧羰基)-7-(三氟甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟1：(r,e)-2-甲基-n-(2,2,2-三氟亞乙基)丙烷-2-亞磺酰胺
向2,2,2-三氟乙醛(30.0g，0.25摩爾)在ch2cl2(300ml)中的溶液添加(r)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(31.20g，0.25摩爾)和mgso4(30g),然后將混合物在40℃下攪拌4h。將混合物過濾，然后向濾液中添加
步驟2：(r)-n-((r)-1-(5-溴-3-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺
在-70℃，向30ml甲苯添加n-buli(6.0ml，1.50毫摩爾)，然后添加2,5-二溴-3-(甲氧基甲基)吡啶(2.80g，1.0毫摩爾)在甲苯(10ml)中的溶液。攪拌30分鐘之后，向混合物中添加(r,e)-2-甲基-n-(2,2,2-三氟亞乙基)丙烷-2-亞磺酰胺(3.35g，1.0毫摩爾，60％純度)在甲苯(10ml)中的溶液。將獲得的混合物在-70℃下攪拌2h。向混合物添加飽和nh4cl水溶液(20ml)，然后用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(20ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝5:1，梯度至3:1洗脫)純化，以獲得為油狀物的(r)-n-((r)-1-(5-溴-3-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(1.60g，39％)。lc-ms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimate,2.1*30mm,3um)，tr＝1.105分鐘，ms(esi)m/z402.9[m+h]+。
步驟3：(r)-(2-(1-氨基-2,2,2-三氟乙基)-5-溴吡啶-3-基)甲醇
在-78℃下，向(r)-n-((r)-1-(5-溴-3-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(0.75g，1.86毫摩爾)在ch2cl2(10ml)中的溶液添加三溴化硼(2.33g，9.32毫摩爾)。在室溫下將混合物攪拌18h。將甲醇(10ml)緩慢添加至混合物中。將混合物在減壓下濃縮，以獲得為黃色油狀物的(r)-(2-(1-氨基-2,2,2-三氟乙基)-5-溴吡啶-3-基)甲醇(0.529g,100％粗)，其直接用于下一步。lc-ms在10-80cd_pos分析中(xtimateods2.1*30mm,3um)，tr＝1.306分鐘，ms(esi)m/z284.9[m+h]+。
步驟4：(r)-(1-(5-溴-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁基酯
將(r)-(2-(1-氨基-2,2,2-三氟乙基)-5-溴吡啶-3-基)甲醇(529mg，1.86毫摩爾)，二叔丁基碳酸氫鈉(0.814g,3.73毫摩爾)和三乙胺(0.939g，9.30毫摩爾)在meoh(10ml)中的混合物在室溫下攪拌18h。將混合物在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝10:1，梯度至5:1洗脫)純化，以獲得為白色固體的(r)-(1-(5-溴-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁基酯(510mg，71％)。lc-ms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimateods,2.1*30mm,3um)，tr＝1.036分鐘，ms(esi)m/z385.0[m+h]+。
步驟5：(r)-(5-溴-2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-2,2,2-三氟乙基)吡啶-3-基)甲磺酸甲酯和(r)-(1-(5-溴-3-(氯甲基)吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁基酯
在0℃下，向(r)-(1-(5-溴-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁基酯(510mg，1.32毫摩爾)和三乙胺(0.91ml，6.60毫摩爾)在ch2cl2(10ml)中的溶液添加甲磺酰氯(302mg，2.64毫摩爾)。將混合物在室溫下攪拌18h。lcms顯示原料被消耗。將反應(yīng)混合物用h2o(10ml)淬滅,然后用ch2cl2(3×10ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(20ml)洗滌、經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝10:1，梯度至5:1洗脫)純化，以獲得為白色固體的(r)-(5-溴-2-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-2,2,2-三氟乙基)吡啶-3-基)甲磺酸甲酯(150mg，25％)和為白色固體的(r)-(1-(5-溴-3-(氯甲基)吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁基酯(350mg，66％)。lc-ms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimate,2.1*30mm,3um)，tr＝1.265分鐘，ms(esi)m/z347.0[m+h]+。
步驟6：(r)-3-溴-7-(三氟甲基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯
在0℃下，向(r)-(1-(5-溴-3-(氯甲基)吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁基酯(350mg，0.87毫摩爾)在dmf(10ml)中的溶液添加氫化鈉(104mg，2.61毫摩爾,60％分散在礦物油中)。在0℃下將混合物攪拌1h。將混合物用水(10ml)淬滅并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(20ml)洗滌、經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析純化(用石油醚：乙酸乙酯＝10:1，梯度至8:1洗脫)，以獲得為白色固體的(r)-3-溴-7-(三氟甲基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯(170mg，53％)。lc-ms在10-80ab_2.0分鐘色譜分析中(xtimate,2.1*30mm,3um)，tr＝1.097分鐘，ms(esi)m/z367.0[m+h]+。sfctr＝1.491分鐘(主要)，在12.0分鐘色譜分析中(柱:ad-3_b3_5_40_25ml)tr＝1.778分鐘，ee＝67.2％。
步驟7：(r)-6-(叔丁氧羰基)-7-(三氟甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸
步驟與用(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-乙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸和(r)-3-溴-7-(三氟甲基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯作為原料的步驟相同。lc-ms在10-80ab_7.0分鐘色譜分析中(xtimateods,2.1*30mm,3um)，tr＝2.466分鐘，ms(esi)m/z333.1[m+h]+。hcl制備型hplc方法.流動相a：含有0.05％hcl的水。流動相b：ch3cn。流速：30毫升/分鐘。檢測：uv220nm/254nm。柱：synergimax-rp150*30mm*4um。柱溫：30℃。以分鐘計的時間,％a,％b；0.00,60,40；8.00,30,70；8.20,0,100；10.00,0,100。
制備b1：(r)-2-氨基-2-(4-(乙基磺?；?苯基)乙醇
步驟1：(4-溴苯基)(乙基)硫烷
將4-溴苯硫酚(50g，0.26摩爾)、溴乙烷(58g，0.53摩爾)和三乙胺(78g，0.78摩爾)在乙腈(1l)中的混合物在回流下攪拌17h。將混合物冷卻至室溫并過濾。在真空下濃縮濾液。將殘余物用硅膠層析純化(用石油醚洗脫)以獲得如油狀物的(4-溴苯基)(乙基)硫烷(55g，96％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.40-7.42(dd,j＝6.4,2.0hz,2h),7.18-7.20(dd,j＝6.4,2.0hz,2h),2.91-2.96(q,j＝7.2hz,2h),1.30-1.33(t,j＝7.2hz,3h)。
步驟2：2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)乙醇
在室溫下，向乙烷-1,2-二醇(110g，1.77摩爾)在無水ch2cl2(1.1l)中的溶液添加三乙胺(215.2g，296ml，2.13摩爾)。將混合物冷卻至0℃，然后用1h滴加溶解于ch2cl2(300ml)中的叔丁基氯二甲基硅烷(267.1g，1.77摩爾)。將混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物用飽和nh4cl水溶液(400ml)淬滅并分離。水相用mtbe(2×400ml)萃取。合并的有機層在真空下濃縮并將殘余物再溶解于mtbe(400ml)中。將mtbe層用水(2×500ml)和鹽水(500ml)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在真空下濃縮，以獲得為微油狀物的2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)乙醇(280g，90％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ3.64-3.66(m,2h),3.57-3.60(m,2h),0.85(s,9h),0.02(s,6h)。
步驟3：2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)乙醛
向冷卻至-30℃的ch2cl2(1.8l)溶液滴加乙二酰氯(79.2g，52.8ml，624毫摩爾)。將混合物冷卻至-78℃，然后滴加dmso(62.5g，88.5ml，1.25毫摩爾)。添加之后，將混合物在-78℃下攪拌30分鐘，在-78℃下緩慢添加溶解于ch2cl2(200ml)中的2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)乙醇(100g，567毫摩爾)溶液。將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌1h。在-78℃下滴加三乙胺(287g，395ml，2.84毫摩爾)。在-78℃下將混合物攪拌30分鐘然后在室溫下過夜。將反應(yīng)混合物用水(1l)、1nhcl(2×1l)、飽和nahco3水溶液(1l)和鹽水(1l)洗滌。將有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在真空下濃縮，以獲得為棕色油狀物的2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)乙醛(98.5g，99.8％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ9.70(s,1h),4.22(s,2h),0.93(s,9h),0.11(s,6h)。
步驟4：(r,e)-n-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺
在室溫下，將2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)乙醛(93.5g，0.54摩爾)、(r)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(78.8g，0.65摩爾)和硫酸銅(ii)(215g，1.35摩爾)在無水ch2cl2(1.5l)中的混合物攪拌16h。將混合物用h2o(800ml)淬滅并分離。水相用ch2cl2(2×1l)萃取。將合并的有機層用水(1l)和鹽水(1l)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在真空下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝8:1洗脫)純化，以獲得為黃色油狀物的(r,e)-n-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(38.5g，26％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.96-7.97(t,j＝3.2hz,1h),4.44-4.45(d,j＝2.8hz,2h),1.11(s,9h),0.00(s,6h)。
步驟5：(r)-n-((r)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-1-(4-(乙基硫代)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺
在-78℃下，向(4-溴苯基)(乙基)硫烷(28.9g，133.1毫摩爾)在無水thf(500ml)中的溶液滴加正丁基鋰(73ml，181.5毫摩爾，己烷中的2.5m)。將混合物在-78℃下攪拌30分鐘。在-78℃下向混合物添加(r,e)-n-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(33.5g，121毫摩爾)在無水thf(100ml)中的溶液。將混合物在-78℃下攪拌2h，然后使其升溫至室溫并攪拌2h。將混合物用飽和nh4cl水溶液(200ml)淬滅并用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。將合并的有機層用水(200ml)和鹽水(200ml)洗滌、經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝15:1洗脫)純化三次，以獲得為黃色油狀物的(r)-n-((r)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-1-(4-(乙基硫代)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(22g，44％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.21-7.24(d,j＝7.2hz,2h),7.18-7.21(d,j＝8.4hz,2h),4.42-4.45(dd,j＝8.8,2.4hz,1h),4.21(brs,1h),3.69-3.73(dd,j＝10.4,4.4hz,1h),3.51-3.56(t,j＝9.6hz,1h),2.87-2.92(q,j＝7.6hz,2h),1.25-1.29(t,j＝7.2hz,3h),1.18(s,9h),0.88(s,9h),0.02(s,6h)。lcms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(mkrp18e25-2mm)，tr＝1.010，ms(esi)m/z437.9[m+na]+。異構(gòu)體sfc在12分鐘色譜分析中(ad-h_5_5_40_2.35ml),tr＝3.607分鐘和4.014分鐘，ee＝90.85％。
步驟6：(r)-2-氨基-2-(4-(乙基硫代)苯基)乙醇
在0℃下，向(r)-n-((r)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-1-(4-(乙基硫代)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(22g，52.9毫摩爾)在ch2cl2(250ml)中的溶液添加hcl(26.5ml，二氧六環(huán)中的4n)。將混合物在室溫下攪拌2h。lcms顯示無原料殘留。將混合物在減壓下濃縮，以獲得為棕色固體的粗(r)-2-氨基-2-(4-(乙基硫代)苯基)乙醇的hcl鹽(12.3g，100％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。lcms在0-30ab_2分鐘色譜分析中(xtimate3um,c18,2.1*30mm)，tr＝1.226分鐘，ms(esi)m/z180.9[m-oh]+。
步驟7：(r)-2-氨基-2-(4-(乙基磺?；?苯基)乙醇
在0℃下，向(r)-2-氨基-2-(4-(乙基硫代)苯基)乙醇(15.2g，65.0毫摩爾)在甲醇(200ml)中的混合物滴加過硫酸氫鉀試劑(80.0g，130.0毫摩爾)在水(200ml)中的溶液。將混合物在室溫下攪拌1.5h；lcms顯示無原料殘留。將混合物過濾并在減壓下去除甲醇。水相用etoac(2×80ml)萃取，然后在0℃下分批用固體碳酸鈉將水層堿化至ph＝8至9，然后將該溶液凍干(含有na2co3)。將固體溶解于ch2cl2:meoh(3:1,600ml)中并攪拌30分鐘，過濾，然后在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析純化(用ch2cl2:meoh＝1:0至4:1洗脫)，以獲得為白色固體的(r)-2-氨基-2-(4-(乙基磺酰基)苯基)乙醇(11.5g，77％)。lc-ms在0-30cd_pos色譜分析(xtimateods2.1*30mm,3um)中，tr＝0.738分鐘，ms(esi)m/z230.1[m+h]+。異構(gòu)體sfc在30分鐘色譜分析中(cd-ph_10-80_b_08ml)，tr＝6.99分鐘，ee＝97.42％。1hnmr(d2o,400mhz)：δ7.82-7.84(d,j＝8.0hz,2h),7.54-7.56(d,j＝8.4hz,2h),4.33-4.35(t,j＝6.4hz,1h),3.72-3.78(m,2h),3.19-3.25(q,j＝7.6hz,2h),1.03-1.07(t,j＝7.6hz,3h)。
可供選擇的b1制備：
步驟1：4-(乙基磺?；?苯甲醛
向4-氟苯甲醛(24.6g，198毫摩爾)在二甲基亞砜(60ml)中的溶液添加乙烷亞磺酸鈉(46g，396毫摩爾)。將獲得的混合物在125℃下攪拌20h。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物與350ml的h2o一起研磨。將產(chǎn)物過濾，用兩批10ml的etoh洗滌并在真空下干燥，以獲得為淺黃色固體的4-(乙基磺?；?苯甲醛(31.2g，80％收率)。lc-ms，tr＝1.19分鐘，在2分鐘色譜中，ms(esi)m/z199.1[m+h]+。1hnmr(cdcl3)δ10.14(s,1h),8.09(s,4h),3.16(q,j＝7.2hz,2h),1.30(t,j＝7.2hz,3h)。
步驟2：2-(4-(乙基磺?；?苯基)環(huán)氧乙烷
在室溫下，向4-(乙基磺?；?苯甲醛(10g，50.5毫摩爾)在dmf(85ml)中的溶液添加三甲基碘化硫(11.9g，58.1毫摩爾)，然后添加氫氧化鉀粉末(5.66g，101毫摩爾)。在用h2o(50ml)淬滅前將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20分鐘。將混合物用1nhcl溶液(55ml)小心中和并用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。將合并的有機相用鹽水洗滌，經(jīng)無水na2so4干燥，并經(jīng)過硅膠墊(用乙酸乙酯洗脫)。在減壓下將其濃縮，以獲得為黃色油狀物的粗2-(4-(乙基磺?；?苯基)環(huán)氧乙烷，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。lc-ms在2分鐘色譜分析中，tr＝1.13分鐘，ms(esi)m/z213.2[m+h]+。
步驟3：2-氨基-2-(4-(乙基磺酰基)苯基)乙-1-醇
在0℃下，向粗2-(4-(乙基磺?；?苯基)環(huán)氧乙烷(50.5毫摩爾)在ch3cn(200ml)中的溶液緩慢加入濃硫酸(5.4ml，101毫摩爾)。使混合物在室溫下攪拌1.5h。lcms顯示原料被消耗。向反應(yīng)混合物添加h2o(15ml)。在室溫下繼續(xù)攪拌8h，然后在45℃下攪拌10h。冷卻至室溫后，通過添加1nnaoh溶液(90ml)將反應(yīng)混合物的ph調(diào)整到3至4。將混合物用乙酸乙酯(100ml)萃取。然后用h2o(2×30ml)萃取有機相。然后將合并的含水層用1nnaoh溶液(110ml)堿化至ph＝9，并用1-丁醇(5×60ml)萃取。將合并的有機層(由1-丁醇萃取物組成)經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮。將其在高真空下干燥，以獲得為灰白色固體的粗2-氨基-2-(4-(乙基磺?；?苯基)乙-1-醇。4g，經(jīng)過3步的收率為35％。中間體4-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-甲基-4,5-二氫惡唑：lc-ms在2分鐘色譜分析中，tr＝0.77分鐘、0.81分鐘，ms(esi)m/z254.26[m+h]+。2-氨基-2-(4-(乙基磺?；?苯基)乙-1-醇：lc-ms在2分鐘色譜分析中，tr＝0.61分鐘，ms(esi)m/z230.21[m+h]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.88(d,j＝8.4hz,2h),7.64(d,j＝8.4hz,2h),4.16-4.12(m,1h),3.76-3.72(m,1h),3.66-3.61(m,1h),3.17(q,j＝7.2hz,2h),1.19(t,j＝7.2hz,3h)。
步驟4：2-氨基-2-(4-(乙基磺?；?苯基)乙-1-醇單扁桃酸鹽
在50℃下，向2-氨基-2-(4-(乙基磺?；?苯基)乙-1-醇(238mg，1.0毫摩爾)在meoh(3ml)中的溶液添加(r)-扁桃酸(76mg，0.5毫摩爾)在meoh(1ml)中的溶液。使所得溶液緩慢冷卻至環(huán)境溫度。攪拌1天之后，通過真空過濾收集所得晶體并在高真空下干燥，獲得如白色晶體的單扁桃酸鹽，107mg(28％收率)，92.5％ee。1hnmr(cd3od)：δ7.97(d,j＝8.0hz,2h),7.71(d,j＝8.4hz,2h),7.46(d,j＝8.0hz,2h),7.46(d,j＝8.0hz,2h),7.31-7.27(m,2h),7.25-7.22(m,1h),4.42-4.42(m,1h),3.92-3.89(m,1h),3.81-3.77(m,1h),3.21(q,j＝7.2hz,2h),1.21(t,j＝7.2hz,3h)。
制備b2：(1r,2r)-1-氨基-1-(4-(乙基磺?；?苯基)丙-2-醇和(1s,2s)-1-氨基-1-(4-(乙基磺?；?苯基)丙-2-醇
步驟1：1-溴-4-(乙基磺酰基)苯
向(4-溴苯基)(乙基)硫烷(5g，23.15毫摩爾)在乙腈(50ml)中的溶液添加水(50ml)和過硫酸氫鉀(28.94g，46.30毫摩爾)。將混合物在室溫下攪拌1h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)顯示原料被完全消耗。將反應(yīng)混合物用飽和硫酸鈉水溶液(150ml)淬滅并用etoac(3×50ml)萃取。將合并的有機層用水(100ml)洗滌、經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析純化，用石油醚：乙酸乙酯＝10:1至2:1洗脫，以獲得為白色固體的1-溴-4-(乙基磺?；?苯(5.2g，90％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.73(dd,j＝8.4,18.0hz,4h),3.10(q,j＝7.2hz,2h),1.26(t,j＝7.2hz,3h)。
步驟2：(e)-1-(乙基磺酰基)-4-(丙-1-烯-1-基)苯
向1-溴-4-(乙基磺?；?苯(572mg，2.3毫摩爾)在二氧六環(huán)(20ml)中的溶液添加(e)-丙烯基-1-三氟硼酸鉀(375mg，2.53毫摩爾)、碳酸銫(1.5g，4.6毫摩爾)、水(4ml)和乙酸鈀(ii)(57mg，0.25毫摩爾)。將混合物在100℃下攪拌16h。將混合物過濾，然后將濾液在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析純化，用石油醚：乙酸乙酯＝10:1至5:1洗脫，以獲得為白色固體的(e)-1-(乙基磺酰基)-4-(丙-1-烯-1-基)苯(410mg，85％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.80(d,j＝8.4hz,2h),7.47(d,j＝8.4hz,2h),6.50-6.35(m,2h),3.10(q,j＝7.6hz,2h),1.93(d,j＝4.8hz,3h),1.26(t,j＝7.6hz,3h)。
步驟3：((1r,2r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥丙基)氨基甲酸叔丁基酯和((1s,2s)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥丙基)氨基甲酸叔丁基酯
向氨基甲酸叔丁基酯(708mg，6.05毫摩爾)在1-丙醇(15ml)中的溶液添加naoh水溶液(14ml，0.38m)。將混合物在室溫下攪拌5分鐘，然后添加1,3-二氯-5,5-二甲基咪唑啉-2,4-二酮(797mg，2.93毫摩爾)。將混合物在室溫下攪拌10分鐘。在0℃下，向混合物相繼添加(dhq)2-phal(92mg，0.12毫摩爾)在1-丙醇(1ml)中的溶液，(e)-1-(乙基磺?；?-4-(丙-1-烯-1-基)苯(410mg，1.95毫摩爾)在1-丙醇(2ml)中的溶液，和k2oso4·h2o(29mg，0.08毫摩爾)的naoh水溶液(0.2ml，0.38m)。將混合物在室溫下攪拌16h。將混合物用水(100ml)稀釋并用etoac(3×50ml)萃取。將合并的有機層經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物通過用石油醚：乙酸乙酯為10:1至1:1洗脫的硅膠柱層析和制備型tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)純化，以獲得白色固體的((1r,2r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥丙基)氨基甲酸叔丁基酯和((1s,2s)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥丙基)氨基甲酸叔丁基酯的混合物(175mg，26％)。lcms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(welchmkrp-18e,25-2mm)，tr＝0.774分鐘，ms(esi)m/z366.1[m+na]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.86(d,j＝8.4hz,2h),7.50(d,j＝8.4hz,2h),5.60-5.50(m,1h),4.75-4.60(m,1h),4.13-4.02(m,1h),3.10(q,j＝7.6hz,2h),1.43(s,9h),1.35-1.25(m,6h)。
步驟4：(1r,2r)-1-氨基-1-(4-(乙基磺?；?苯基)丙-2-醇和(1s,2s)-1-氨基-1-(4-(乙基磺?；?苯基)丙-2-醇
步驟與用(s)-n-((s)-1-(4-(乙基磺?；?苯基-2-羥乙基)-7-異丙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺和((1r,2r)-1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-羥丙基)氨基甲酸叔丁基酯以及((1s,2s)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥丙基)氨基甲酸叔丁基酯的混合物作為原料的步驟相同。
制備b3：(1r,2s)-1-氨基-1-(4-(乙基磺?；?苯基)丙-2-醇和(1s,2r)-1-氨基-1-(4-(乙基磺?；?苯基)丙-2-醇
步驟1：(2s,3s)-2-(4-(乙基磺?；?苯基)-3-甲基環(huán)氧乙烷和(2r,3r)-2-(4-(乙基磺?；?苯基)-3-甲基環(huán)氧乙烷
向(e)-1-(乙基磺酰基)-4-(丙-1-烯-1-基)苯(200mg，0.95毫摩爾)在ch2cl2(10ml)中的溶液添加間氯過氧苯甲酸(500mg，2.86毫摩爾)。將混合物在18℃下攪拌20h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)顯示原料被完全消耗。將反應(yīng)溶液用飽和硫酸鈉水溶液(40ml)淬滅并用ch2cl2(3×15ml)萃取。將合并的有機層經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物通過硅膠層析純化，用石油醚：乙酸乙酯為15:1至3:1洗脫，以獲得如無色油狀物的(2s,3s)-2-(4-(乙基磺?；?苯基)-3-甲基環(huán)氧乙烷和(2r,3r)-2-(4-(乙基磺酰基)苯基)-3-甲基環(huán)氧乙烷混合物(180mg，80％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.85(d,j＝8.4hz,2h),7.44(d,j＝8.4hz,2h),3.64(d,j＝1.6hz,1h),3.09(q,j＝7.6hz,2h),3.00(dd,j＝2.0,5.2hz,1h),1.47(d,j＝5.2hz,3h),1.25(t,j＝7.6hz,3h)。
步驟2：(1r,2s)-1-氨基-1-(4-(乙基磺?；?苯基)丙-2-醇和(1s,2r)-1-氨基-1-(4-(乙基磺?；?苯基)丙-2-醇
向(2s,3s)-2-(4-(乙基磺酰基)苯基)-3-甲基環(huán)氧乙烷和(2r,3r)-2-(4-乙基磺?；?苯基)-3-甲基環(huán)氧乙烷(120mg，0.53毫摩爾)在i-proh(4ml)中的混合物添加氫氧化銨(4ml)。在110℃下，在密封管中將混合物攪拌17h。lcms顯示反應(yīng)完成。將混合物在減壓下濃縮，然后凍干以去除過量的氫氧化銨，以獲得如黃色油狀物的粗(1r,2s)-1-氨基-1-(4-(乙基磺?；?苯基)丙-2-醇和(1s,2r)-1-氨基-1-(4-(乙基磺?；?苯基)丙-2-醇的混合物(120mg，100％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。
lcms在0-30ab_2分鐘色譜分析(welchxtimate3um,c18,2.1*30mm)中,tr＝0.338分鐘，ms(esi)m/z243.9[m+h]+。
制備b4：2-氨基-2-(4-(乙基硫代)苯基)丙-1-醇
步驟1：2-(4-(乙基硫基)苯基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃下，向氯化鋁(47.6g，357毫摩爾)在二氯甲烷(200ml)中的混合物緩慢添加2-氯-2-氧代乙酸乙酯(31.9ml，286毫摩爾)。攪拌20分鐘之后，在0℃下滴加苯乙硫醚(32.80g，238毫摩爾)在二氯甲烷(200ml)中的溶液。添加之后，在升溫至室溫前將混合物在0℃下攪拌30分鐘，并攪拌2.5小時。lcms顯示反應(yīng)完成。將反應(yīng)混合物用冰淬滅、用乙酸乙酯(800ml)稀釋，然后相繼用水(250ml)和鹽水(100ml)洗滌。將其經(jīng)na2so4干燥，過濾并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，以獲得52.41g(93％收率)如微黃色油狀物的粗2-(4-(乙基硫代)苯基)-2-氧代乙酸乙酯，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。lcms，在2分鐘色譜分析中，tr＝1.77分鐘，ms(esi)m/z239[m+h]+。
步驟2：(r,e)-2-((叔丁基磺酰基)亞氨基)-2-(4-(乙基硫代)苯基)乙酸乙酯
向2-(4-(乙基硫代)苯基)-2-氧代乙酸乙酯(20g，84.3毫摩爾)在干燥thf(100ml)中的混合物添加(r)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(11.18g，92.7毫摩爾)和乙醇鈦(iv)(28.74g，126毫摩爾)。將混合物在回流下加熱過夜。溶液的顏色逐漸變?yōu)闇\棕色。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物用鹽水(25ml)淬滅并攪拌30分鐘。然后將其經(jīng)過硅藻土墊過濾，用乙酸乙酯(100ml)沖洗固體。將濾液用水(50ml)和鹽水(25ml)洗滌，然后有機相經(jīng)na2so4干燥、過濾并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，以獲得23.09g(80.6％收率)的淺棕色油狀物的粗(r,e)-2-((叔丁基磺?；?亞氨基)-2-(4-(乙基硫代)苯基)乙酸乙酯，其不經(jīng)進一步純化而使用。lcms在2分鐘色譜分析中，tr＝1.81分鐘，ms(esi)m/z342[m+h]+。
步驟3：(r)-2-(((r)-叔丁基磺?；?氨基)-2-(4-(乙基硫代)苯基)丙酸乙酯
在0℃下，向(r,e)-2-((叔丁基磺?；?亞氨基)-2-(4-(乙基硫代)苯基)乙酸乙酯(100mg，0.293毫摩爾)在干燥thf(4ml)中的混合物添加二甲基鋅(甲苯中的2.0m，161μl，0.322毫摩爾)。攪拌10分鐘之后，滴加甲基溴化鎂(在甲苯/thf中的1.4m，2.46ml，3.44毫摩爾)。在升溫至室溫前將混合物在0℃下攪拌20分鐘并攪拌16h。將反應(yīng)混合物用飽和氯化銨水溶液(15ml)淬滅，然后用乙酸乙酯(50ml)稀釋。將有機層用0.5％含水hcl(20ml)和鹽水(10ml)洗滌、經(jīng)na2so4干燥、過濾并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將殘余物通過硅膠層析(100％己烷，梯度至1:1的己烷：乙酸乙酯)純化，以提供60mg(57％收率)的(r)-2-(((r)-叔丁基磺?；?氨基)-2-(4-(乙基硫代)苯基)丙酸乙酯。lcms在2分鐘色譜分析中，tr＝1.61分鐘，ms(esi)m/z358[m+h]+。
步驟4：(r)-n-((r)-2-(4-(乙基硫代)苯基)-1-羥丙-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺
在0℃下，向(r)-2-(((r)-叔丁基磺?；?氨基)-2-(4-(乙基硫代)苯基)丙酸乙酯(60mg，0.168毫摩爾)在干燥thf(30ml)中的溶液滴加硼氫化鋰(thf中的2.0m，126μl，0.252毫摩爾)。在0℃下，在升溫至室溫和攪拌3h前將混合物攪拌10分鐘。將反應(yīng)混合物用飽和氯化銨水溶液(15ml)淬滅，用乙酸乙酯(25ml)稀釋。將有機層用0.5％hcl(15ml)和鹽水(10ml)洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥、過濾并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，以獲得56mg(～100％收率)的(r)-n-((r)-2-(4-(乙基硫代)苯基)-1-羥基丙烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺，其不經(jīng)進一步純化而使用。lcms在2分鐘色譜分析中，tr＝1.35分鐘，ms(esi)m/z316[m+h]+。
步驟5：2-氨基-2-(4-(乙基硫代)苯基)丙-1-醇
向(r)-n-((r)-2-(4-(乙基硫代)苯基)-1-羥基丙烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(53mg，0.168毫摩爾)在甲醇(3ml)中的溶液添加hcl溶液(二氧六環(huán)中的4.0m，3ml)。將混合物在室溫下攪拌3h。將混合物濃縮以獲得粗2-氨基-2-(4-(乙基硫代)苯基)丙-1-醇，其不經(jīng)進一步純化使用。lcms在2分鐘色譜分析中，tr＝0.66分鐘，ms(esi)m/z195[m-nh3+h]+。
制備b5：(r)-2-氨基-2-(5-(乙基磺?；?吡啶-2-基)乙醇
步驟1：2-溴-5-(乙基硫基)吡啶
向2-溴-5-氟吡啶(6.28g，35.66毫摩爾)在無水dmf(60ml)中的混合物添加乙硫醇鈉(3g，35.66毫摩爾)。將混合物在100℃下攪拌3h。tlc(石油醚/乙酸乙酯為10/1)顯示原料未被完全消耗。向混合物添加額外的乙硫醇鈉(0.9g，9.56毫摩爾)。將混合物在100℃下攪拌12h。將混合物用h2o(150ml)淬滅并用乙酸乙酯(3×150ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(400ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析純化(用石油醚/乙酸乙酯為80/1洗脫)，以獲得為無色油狀物的2-溴-5-(乙基硫代)吡啶(7.0g，90％)。
lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(welchmerckrp-18e25-2mm)，tr＝0.717分鐘，ms(esi)m/z217.6[m+h]+。
步驟2：(r)-n-((r)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-1-(5-(乙基硫代)吡啶-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺
在-78℃下，向甲苯(60ml)溶液中滴加n-buli(己烷中的10.6ml，26.48毫摩爾，2.5m)；內(nèi)部溫度不超過-50℃。然后在-78℃下，向反應(yīng)混合物添加2-溴-5-(乙基硫代)吡啶(3.85g，17.65毫摩爾)在甲苯(10ml)中的溶液；內(nèi)部溫度不超過-65℃。將混合物在-78℃下攪拌1h。在-78℃下，向反應(yīng)混合物添加(r,e)-n-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(4.90g，17.65毫摩爾)在甲苯(10ml)中的溶液；內(nèi)部溫度不超過-60℃。將混合物在-78℃下再攪拌2h。在-78℃下，將混合物用鹽水(150ml)淬滅并用乙酸乙酯(3×150ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(400ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚/乙酸乙酯為10:1至3/1洗脫)純化，以獲得為淡黃色油狀物的(r)-n-((r)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-1-(5-(乙基硫代)吡啶-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(3.0g，41％)。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析(welchmerckrp-18e25-2mm)中，tr＝1.014分鐘，ms(esi)m/z417.2[m+h]+。
步驟3：(r)-2-氨基-2-(5-(乙基硫代)吡啶-2-基)乙醇
步驟與用(r)-2-氨基-2-(4-(乙基硫代)苯基)乙醇以及(r)-n-((r)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)-1-(5-(乙基硫代)吡啶-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺作為原料的步驟相同。
步驟4：(r)-2-氨基-2-(5-(乙基磺?；?吡啶-2-基)乙醇
步驟與用(r)-2-氨基-2-(4-(乙基磺?；?苯基)乙醇以及(r)-2-氨基-2-(5-(乙基硫代)吡啶-2-基)乙醇作為原料的步驟相同。1hnmr(cd3od,400mhz)：δ9.08(s,1h),8.35(dd,j＝2.0,8.4hz,1h),7.79(d,j＝8.4hz,1h),4.70(t,j＝5.6hz,1h),4.03(dd,j＝4.8,12.0hz,1h),3.91(dd,j＝4.8,11.6hz,1h),3.29(q,j＝7.2hz,2h),1.25(t,j＝7.2hz,3h)。
制備b6：(r)-2-氨基-2-(4-(甲基磺?；?苯基)乙醇
該化合物與(r)-2-氨基-2-(4-(甲磺?；?苯基)乙醇(b1)類似地制備。
制備b7：(r)-2-氨基-2-(5-(甲磺酰基)吡啶-2-基)乙醇
該化合物與(r)-2-氨基-2-(5-(乙磺?；?吡啶-2-基)乙醇(b5)類似地制備。
制備c1：反-4-(三氟甲基)環(huán)己烷甲醛
步驟1：(反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲醇
在0℃下，向氫化鋁鋰(11.6g，0.306摩爾)在無水thf(350ml)中的混合物中滴加反-4-(三氟甲基)環(huán)己烷甲酸(30g，0.153摩爾)在無水thf(50ml)中的溶液。將混合物在0℃下攪拌2h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)顯示無原料殘留。將混合物相繼用水(12ml)、15％naoh水溶液(24ml)和h2o(12ml)淬滅。將混合物過濾并將濾液在真空下濃縮以提供為液體的(反-4-(三氟乙基)環(huán)己基)甲醇(24g，86％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ3.49-3.50(d,j＝6.0hz,2h),1.91-2.07(m,4h),1.50-1.57(m,1h),1.32-1.36(m,2h),0.98-1.05(m,2h)。
步驟2：反-4-(三氟甲基)環(huán)己烷甲醛
在-65℃下，向乙二酰氯(24.96g，13.84ml，197.7毫摩爾)在ch2cl2(250ml)中的混合物滴加dmso(20.72g，28ml，395.4毫摩爾)。將混合物在-65℃下攪拌30分鐘。在-65℃滴加溶解于ch2cl2(50ml)中的(反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲醇(12g，65.9毫摩爾)，將混合物在-65℃下再攪拌30分鐘。在-65℃以下滴加三乙胺(66.4g，91.2ml，659毫摩爾)。將混合物在-65℃下攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌1.5h。將混合物用水(200ml)淬滅并分離。將含水層用ch2cl2(2×300ml)萃取。將合并的有機層用水(200ml)和鹽水(200ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在真空下濃縮。將殘余物用硅膠層析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1洗脫)純化，以獲得為淺黃色油狀物的反-4-(三氟甲基)環(huán)己基甲醛(8.9g，75％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ9.70(s,1h),2.16-2.65(m,3h),2.04-2.12(m,3h),1.00-1.39(m,4h)。
制備c2：6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲醛
步驟1：2-(((1,1,1-三氟戊-4-烯-2-基)氧)甲基)乙酸乙酯
在0℃下分批向1,1,1-三氟戊-4-烯-2-醇(6.7g，48毫摩爾)在無水(用cah2干燥)dmf(85ml)中的溶液添加氫化鈉(礦物油中的2.3g，57毫摩爾，60％)。將混合物在0℃下攪拌30分鐘，然后在0℃下經(jīng)由注射器向得到的混合物滴加2-(溴甲基)乙酸乙酯(9.2g，48毫摩爾)。添加之后，將混合物在室溫下攪拌2h。tlc分析(用石油醚：乙酸乙酯＝10:1洗脫)顯示原料被消耗。在0℃下用水(50ml)淬滅反應(yīng)，水層使用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。將合并的有機層相繼用水(3×50ml)和鹽水(50ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將粗殘余物用硅膠層析(用石油醚/乙酸乙酯：從梯度100/1至50/1洗脫)純化，以獲得為淡黃色油狀物的2-(((1,1,1-三氟戊-4-烯-2-基)氧)甲基)乙酸乙酯(6.6g，55％)。1hnmr(cdcl3400mhz)：δ6.31(s,1h),5.89(s,1h),5.85-5.74(m,1h),5.23-5.07(m,2h),4.52-4.43(m,1h),4.38-4.15(m,3h),3.82-3.68(m,1h),2.50-2.35(m,2h),1.38-1.20(m,3h)。
步驟2：6-(三氟甲基)-5,6-二氫-2h-吡喃-3-甲酸乙酯
在n2下，向2-(((1,1,1-三氟戊-4-烯-2-基)氧)甲基)乙酸乙酯(6.6g，26.2毫摩爾)在無水ch2cl2(2.6l)中的溶液添加grubbsii催化劑(2.2g，2.62毫摩爾)。將混合物在室溫下攪拌3h。tlc分析(用石油醚：乙酸乙酯＝10:1洗脫)顯示反應(yīng)完成。將水(2l)添加至混合物以淬滅反應(yīng)。分離后，將有機層相繼用水(3×2l)然后用鹽水(2l)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚/乙酸乙酯：從梯度100/1至80/1洗脫)純化，以獲得為淡黃色油狀物的6-(三氟甲基)-5,6-二氫-2h-吡喃-3-甲酸乙酯(4.83g，82％)。1hnmr(cdcl3400mhz)：δ7.01(d,j＝2.8hz,1h),4.63-4.58(m,1h),4.40-4.33(m,1h),4.20(q,j＝7.2hz,2h),3.95-3.84(m,1h),2.57-2.46(m,1h),2.41-2.32(m,1h),1.28(t,j＝7.2hz,3h)。
步驟3：6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲酸乙酯
向6-(三氟甲基)-5,6-二氫-2h-吡喃-3-甲酸乙酯(4.83g，22毫摩爾)在無水thf(130ml)中的溶液添加碳上的干燥pd(oh)2(2.7g，10％w/w)。在h2(30psi)下，將混合物在室溫下攪拌16h。tlc分析(用石油醚/乙酸乙酯＝10/1洗脫)顯示大部分原料未被消耗。將混合物過濾，然后在減壓下濃縮濾液并溶于無水thf(60ml)中。向混合物添加碳上的干燥pd(oh)2(2.7g，10％w/w)。在h2(30psi)下，將混合物在室溫下攪拌28h。tlc分析(用石油醚/乙酸乙酯＝10/1洗脫)顯示原料被消耗。將混合物過濾并將濾液在減壓下濃縮以獲得為無色油狀物的粗6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-羧酸乙酯(3.4g，70％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。1hnmr(cdcl3400mhz)：δ4.50(d,j＝11.6hz,1h),4.18(q,j＝7.2hz,2h),3.80-3.68(m,1h),3.66(d,j＝3.2,11.6hz,1h),2.55-2.49(m,1h),2.43-2.35(m,1h),1.95-1.81(m,1h),1.75-1.65(m,2h),1.25(t,j＝7.2hz,3h)。
步驟4：6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲酸
向粗6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲酸乙酯(2.0g，8.8毫摩爾)在thf(24ml)、etoh(12ml)中的溶液添加1nnaoh的水溶液(12ml)。將混合物在室溫下攪拌3h。tlc分析(用石油醚：乙酸乙酯＝10:1洗脫)顯示反應(yīng)完成。將混合物添加至水(20ml)中，并在減壓下濃縮以去除有機溶劑。將殘余物用mtbe(20ml)洗滌，并用1nhcl溶液調(diào)節(jié)至ph＝4至5。然后，水層用etoac(3×20ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(20ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮，以獲得為淺黃色油狀物的粗6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲酸(1.72g，98％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。
基于1hnmr和19fnmr分析，順：反異構(gòu)體的比例為～2：1。1hnmr(cdcl3400mhz)：δ8.56(brs,1h),4.47(d,j＝12.0hz,0.68h),4.25(d,j＝12.0hz,0.32h),3.76-3.62(m,1.68h),3.47(t,j＝11.2hz,0.32h),2.71-2.61(m,0.32h),2.58-2.51(m,0.68h),2.38-2.22(m,1h),1.88-1.80(m,1h),1.75-1.60(m,2h)。
步驟5：6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲酸
向粗產(chǎn)物6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲酸(1.72g，8.69毫摩爾)溶液添加2nnaoh水溶液(76ml)。在密封管中在100℃下，將混合物攪拌84h。將混合物用水(20ml)稀釋并用mtbe(50ml)洗滌。水層用1nhcl溶液調(diào)節(jié)至ph＝4至5，并用etoac萃取(3×50l)。將合并的有機層用鹽水(50ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮，以獲得為淺黃色油狀物的粗6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲酸(1.60g，93％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。
基于3hnmr和19fnmr分析，順：反的比例為～1：3。1hnmr(cdcl3400mhz)：δ4.54(d,j＝12.0hz,0.25h),4.32(dd,j＝2.8,11.6hz,0.75h),3.83-3.68(m,1.25h),3.52(t,j＝11.2hz,0.75h),2.75-2.58(m,1h),2.45-2.30(m,1h),1.95-1.85(m,1h),1.83-1.63(m,2h)。
步驟6：n-甲氧基-n-甲基-6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲酰胺
向粗6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲酸(1.0g，5.01毫摩爾)(異構(gòu)體順：反比例為～1：3)在無水ch2cl2(60ml)中的溶液添加n,o-二甲基羥胺鹽酸鹽(980mg，10.10毫摩爾)、edci(1.93g，10.10毫摩爾)、hobt(1.36g，10.10毫摩爾)和二異丙基乙胺(1.95g，15.15毫摩爾)。將混合物在室溫下攪拌16h。將混合物用水(60ml)稀釋并用ch2cl2(3×60ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(60ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚/乙酸乙酯：從梯度30/1至15/1洗脫)純化，以獲得為淺黃色油狀物的n-甲氧基-n-甲基-6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲酰胺(1.05g，87％)。
基于1hnmr和19fnmr分析，順：反的比例為～1:3。1hnmr(cdcl3400mhz):δ4.30-4.24(m,0.25h),4.22-4.15(m,0.75h),3.90-3.68(m,4h),3.62-3.52(m,1h),3.24-3.14(m,2h),3.10-2.98(m,1h),2.14-2.04(m,1h),1.95-1.80(m,2h),1.80-1.65(m,2h).
步驟7：6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲醛
在0℃、n2下n-甲氧基-n-甲基-6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲酰胺(90mg，0.373毫摩爾)(異構(gòu)體的順：反比例為～1:3)在無水thf(5ml)中的溶液滴加氫化鋁鋰(在thf中的0.75ml，0.746毫摩爾，1m)。將混合物在0℃下攪拌1h。tlc分析(用石油醚/乙酸乙酯：5/1洗脫)顯示反應(yīng)完成。將混合物用飽和硫酸鈉水溶液(1ml)淬滅并過濾。將濾液用ch2cl2(60ml)稀釋，用水(60ml)、10％hcl水溶液(0.5m，60ml)、飽和nahco3水溶液(60ml)和水(60ml)洗滌。將有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮，以獲得為淺黃色油狀物的粗6-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-甲醛(60mg，88％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步?；?sup>3hnmr和19fnmr分析，順：反的比例為～1:3。
制備c3：反-5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-2-甲醛
步驟1：2-((芐氧基)甲基)-3,4-二氫-2h-吡喃
在0℃下，向氫化鈉(15.8g，394.5毫摩爾，60％在礦物油中)在無水dmf(460ml)中的混合物中緩慢滴加溶于無水dmf(20ml)中的(3,4-二氫-2h-吡喃-2-基)甲醇(30.0g，263毫摩爾)。將混合物在0℃下攪拌30分鐘。滴加溶于無水dmf(20ml)中的(溴甲基)苯(49.4g，34.3ml，289毫摩爾)，將混合物在室溫下攪拌18h。tlc(石油醚)顯示大多數(shù)(溴甲基)苯被消耗，并產(chǎn)生新的斑點。在0℃下將混合物用水(200ml)緩慢淬滅，然后用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。將合并的有機層用水(3×300ml)和鹽水(200ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚洗脫)純化以獲得如無色油狀物的2-((芐氧基)甲基)-3,4-二氫-2h-吡喃(39.4g，73％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.27-7.35(m,5h),6.39(d,j＝6.0hz,1h),4.68-4.69(m,1h),4.53-4.63(m,2h),4.00-4.03(m,1h),3.51-3.61(m,2h),2.06-2.09(m,1h),1.98-2.04(m,1h),1.82-1.83(m,1h),1.67-1.70(m,1h)。
步驟2：6-((芐氧基)甲基)四氫-2h-吡喃-3-醇
在0℃下向2-((芐氧基)甲基)-3,4-二氫-2h-吡喃(31g，152毫摩爾)在無水thf(400ml)中的混合物滴加9-bbn(730ml，365毫摩爾，thf中的0.5m)1小時。將混合物在室溫下攪拌18h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示原料被消耗。在0℃下向混合物添加10％naoh水溶液(200ml)，然后添加30％的h2o2(100ml)。將混合物在21℃至25℃下攪拌1h。在0℃下將反應(yīng)混合物用飽和na2so3水溶液(200ml)淬滅然后在減壓下濃縮以去除thf。將殘余物用乙酸乙酯(2×200ml)萃取。將合并的有機層用h2o(200ml)和鹽水(200ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝2:1至1:1洗脫)純化，以獲得為無色油狀物的6-((芐氧基)甲基)四氫-2h-吡喃-3-醇(30.7g,91％)。lc-ms在10-80ab_2分鐘色譜分析中(xtimateods,2.1*30mm,3um)，tr＝0.869分鐘，ms(esi)m/z240.1[m+18]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.20-7.27(m,5h),4.45-4.55(m,2h),3.97-4.00(m,1h),3.60-3.65(m,1h),3.34-3.43(m,3h),3.05-3.11(m,1h),2.13-2.14(m,1h),1.69-1.71(m,1h),1.41-1.43(m,2h)。
步驟3：6-((芐氧基)甲基)二氫-2h-吡喃-3(4h)-酮
在0℃下向6-((芐氧基)甲基)四氫-2h-吡喃-3-醇(45.5g，205毫摩爾)在無水ch2cl2(500ml)中的混合物分批添加氯鉻酸吡啶(88.4g，410毫摩爾)。將混合物在室溫下攪拌72h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)顯示原料被消耗。將混合物通過硅藻土過濾并將濾液在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝3:1至2:1洗脫)純化，以獲得為油狀物的6-((芐氧基)甲基)二氫-2h-吡喃-3(4h)-酮(31g，69％)。lc-ms在10-80ab_2分鐘色譜分析中(xtimate,2.1*30mm,3um)，tr＝0.735分鐘，ms(esi)m/z256.1[m+36]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.19-7.29(m,5h),4.49-4.57(m,2h),4.11-4.15(m,1h),3.92-2.95(m,1h),3.85-3.91(m,1h),3.47-3.54(m,2h),2.53-2.54(m,1h),2.40-2.44(m,1h),1.97-1.99(m,1h),1.83-1.90(m,1h)。
步驟4：6-((芐氧基)甲基)-3-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-醇
在0℃下向6-((芐氧基)甲基)二氫-2h-吡喃-3(4h)-酮(31.0g，141毫摩爾)和三甲基(三氟甲基)硅烷(50.1g，353毫摩爾)在無水thf(300ml)中的混合物滴加四丁基氟化銨(3.1ml,thf中的1m)。將混合物在室溫下攪拌2h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示原料被消耗。在0℃下向混合物添加hcl溶液(340ml，v:v＝1:1)，然后在室溫下繼續(xù)攪拌18h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示反應(yīng)完成。將混合物在減壓下濃縮以去除thf。將殘余物用乙酸乙酯(3×200ml)萃取。將合并的有機層用h2o(100ml)和鹽水(100ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝5:1洗脫)純化，以獲得為無色油狀物的6-((芐氧基)甲基)-3-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-醇(10.0g，25％)。lc-ms在10-80ab_2分鐘色譜分析中(xtimateods,2.1*30mm,3um)，tr＝1.041分鐘，ms(esi)m/z308.1[m+18]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.22-7.30(m,5h),4.45-4.55(m,2h),4.09-4.13(m,1h),3.60-3.62(m,1h),3.47-3.49(m,1h),3.32-3.41(m,2h),2.19-2.22(m,1h),2.10(brs,1h),1.62-1.69(m,4h)。sfc在15分鐘色譜分析中(柱：ad-h_3_5_40_2.35ml)，tr＝4.512分鐘和4.857分鐘，ee＝10.12％。
步驟5：草酸6-((芐氧基)甲基)-3-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-基乙酯
在0℃下向6-((芐氧基)甲基)-3-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-醇(10.0g，34.4毫摩爾)在無水ch2cl2(150ml)中的混合物滴加草酰氯乙酯(9.41g，68.8毫摩爾)。將混合物在室溫下攪拌20h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)顯示大多數(shù)原料被消耗。將混合物用1nhcl(50ml)和鹽水(50ml)洗滌。將有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝8:1洗脫)純化，以獲得為無色油狀物的草酸6-((芐氧基)甲基)-3-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-基乙酯(11g，82％)。lc-ms在10-80ab_2分鐘色譜分析中(xtimateods,2.1*30mm,3um)，tr＝1.225分鐘，ms(esi)m/z408.2[m+18]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.29-7.36(m,5h),4.51-4.61(m,2h),4.47-4.48(m,1h),4.35(q,j＝7.2hz,2h),4.00-4.01(m,1h),3.60-3.62(m,1h),3.53-3.54(m,1h),3.45-3.48(m,1h),2.63-2.68(m,1h),2.34-2.35(m,1h),1.74-1.78(m,2h),139(t,j＝7.2hz,3h)。
步驟6：反-2-((芐氧基)甲基)-5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃
在130℃下用40分鐘向草酸6-((芐氧基)甲基)-3-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-3-基乙酯(10.0g，25.6毫摩爾)在無水甲苯(600ml)中的混合物滴加溶于無水甲苯(200ml)中的aibn(1.26g，7.68毫摩爾)和三丁基氫化錫(15.05g，51.2毫摩爾)。將混合物在130℃下攪拌7h。lcms顯示反應(yīng)完成。將混合物在減壓下濃縮。將殘余物溶解于乙酸乙酯(200ml)和kf水溶液(100ml)中并過濾。分離濾液。水相用乙酸乙酯(2×200ml)萃取。將合并的有機層用鹽水(100ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物通過硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝10:1至8:1洗脫)純化，以提供為油狀物的反-2-((芐氧基)甲基)-5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃(較少極性峰，3.3g，47％)和順-2-((芐氧基)甲基)-5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃(較多極性峰，1.55g，22％)。反-2-((芐氧基)甲基)-5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃：lc-ms在10-80ab_7分鐘色譜分析中(xtimateods,2.1*30mm,3um)，tr＝3.978分鐘，ms(esi)m/z292.0[m+18]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ7.29-7.35(m,5h),4.57(q,j＝12.0hz,2h),4.17-4.20(m,1h),3.41-3.54(m,4h),2.37-2.38(m,1h),2.06-2.10(m,1h),1.70-1.74(m,1h),1.30-1.42(m,2h)。sfc在12分鐘色譜分析中(柱：oj-h_3_5_40_2.5ml)，tr＝3.237分鐘和3.528分鐘，ee＝5.62％。sfc在12分鐘色譜分析中(柱：oj-h_5_5_40_2.5ml)，tr＝3.158分鐘和3.375分鐘，ee＝0.85％。順-2-((芐氧基)甲基)-5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃：lc-ms在10-80ab_7分鐘色譜分析中(xtimateods,2.1*30mm,3um)，tr＝3.739分鐘，ms(esi)m/z292.0[m+18]+。1hnmr(cdcl3400mhz)：δ7.21-7.30(m,5h),4.50(q,j＝12.0hz,2h),4.14-4.18(m,1h),3.57-3.58(m,2h),3.45-3.49(m,1h),3.33-3.36(m,1h),2.03-2.11(m,2h),1.19-1.77(m,3h)。sfc在12分鐘色譜分析中(柱：oj-h_3_5_40_2.5ml)，tr＝3.304分鐘和4.188分鐘，ee＝9.85％。sfc在12分鐘色譜分析中(柱：od-h_5_5_40_2.5ml)，tr＝3.312分鐘和4.273分鐘，ee＝18.6％。
步驟7：反-(5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-2-基)甲醇
在h2(15psi)、室溫下攪拌反-2-((芐氧基)甲基)-5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃(1.0g，3.6毫摩爾)、干燥pd/c(250mg，10％pd)和hcl(3ml，meoh中的4n)在meoh(20ml)中的混合物18h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)顯示原料被消耗。將混合物過濾并將濾液在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝5:2至1:1洗脫)純化，以獲得為淺黃色油狀物的反-(5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-2-基)甲醇(550mg，82％)。1hnmr(cdcl3，400mhz)：δ4.10-4.12(m,1h),3.35-3.59(m,4h),2.29-2.30(m,1h),2.01-2.05(m,2h),1.58-1.61(m,2h),1.33-1.36(m,1h)。
步驟8：反-5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-2-甲醛
在-78℃下，向草酰氯(1.14g，0.77ml，8.97毫摩爾)在無水ch2cl2(15ml)中的混合物滴加dmso(1.4g，1.27ml，17.94毫摩爾)。將混合物在-78℃下攪拌30分鐘。在-78℃下滴加溶于ch2cl2(5ml)中的反-(5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-2-基)甲醇(550mg，2.99毫摩爾)，將混合物在-78℃下再攪拌2h。在-78℃下滴加三乙胺(3.03g，4.2ml，29.9毫摩爾)，將混合物在-78℃下攪拌30分鐘，然后室溫下攪拌1h。向混合物添加h2o(20ml),并用ch2cl2(3×20ml)萃取。將合并的有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1洗脫)純化，以獲得為黃色油狀物的反-5-(三氟甲基)四氫-2h-吡喃-2-甲醛(450mg，70％純度，83％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ9.55(s,1h),4.06-4.19(m,2h),3.35-3.46(m,1h),2.33-2.35(m,4h),2.10-2.14(m,1h)。
式i的化合物的制備
根據(jù)以下概述的一般步驟制備式(i)的化合物。
實施例1：(s)-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-7-異丙基-6-((反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺(46)
步驟1：(s)-3-(((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)氨基甲?；?-7-異丙基-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯
在室溫下，攪拌(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-異丙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸(11g，36毫摩爾)、(r)-2-氨基-2-(4-(乙基磺?；?苯基)乙醇(11.5g，43.2毫摩爾)、hatu(16.4g，43.2毫摩爾)和三乙胺(21.9g，30ml，216毫摩爾)在dmf(350ml)中的混合物2h。將反應(yīng)混合物用h2o(140ml)稀釋并用乙酸乙酯(3×140ml)萃取。將合并的有機層用水(3×150ml)和鹽水(150ml)洗滌、經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在真空下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用石油醚：乙酸乙酯＝1:3洗脫)純化，以獲得為淺綠色油狀物的(s)-3-(((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)氨基甲?；?-7-異丙基-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯(6.1g，33％)。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(mkrp-18e25-2mm)，tr＝0.845分鐘，ms(esi)m/z518.3[m+h]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ8.87(s,1h),7.95(s,1h),7.81-7.83(d,j＝8.4hz,2h),7.53-7.55(d,j＝8.4hz,2h),7.16(s,1h),5.26-5.28(m,1h),4.88-4.96(m,1h),4.71-4.80(m,1h),4.45-4.47(m,1h),4.03-4.06(m,1h),3.94-3.98(m,1h),3.01-3.06(q,j＝7.6hz,2h),2.49(brs,1h),2.35(brs,1h),1.46(s,9h),1.19-1.24(t,j＝7.6hz,3h),0.92-1.02(m,3h),0.67-0.72(m,3h)。異構(gòu)體sfc在15分鐘色譜分析中(ad-h_5_5_40_2.35ml),tr＝8.073分鐘和9.821分鐘，ee＝96.91％。
步驟2：(s)-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-7-異丙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺
在0℃下，向(s)-3-(((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)氨基甲?；?-7-異丙基-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯(6.6g，12.8毫摩爾)在ch2cl2(200ml)中的溶液添加hcl(60ml，二氧六環(huán)中的4n)。將混合物在室溫下攪拌4h。lcms顯示無原料殘留。在真空下濃縮混合物。將殘余物用10％naoh溶液調(diào)整至ph＝9至10，然后用乙酸乙酯(4×200ml)萃取。將合并的有機層經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮以獲得如淺黃色固體的(s)-n-((r)-1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-羥乙基)-7-異丙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺(5.3g，99.6％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(mkrp-18e25-2mm)，tr＝0.341分鐘，ms(esi)m/z418.1[m+h]+。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ8.88(s,1h),7.94(s,1h),7.84-7.86(d,j＝8.4hz,2h),7.57-7.59(d,j＝8.4hz,2h),7.28(s,1h),5.29-5.33(m,1h),4.31(s,1h),4.23(s,2h),4.08-4.14(m,2h),4.00-4.07(m,1h),3.06-3.11(q,j＝7.2hz,2h),2.28-2.31(m,1h),1.24-1.29(t,j＝7.6hz,3h),1.06-1.08(d,j＝7.2hz,3h),0.75-0.77(d,j＝6.4hz,3h)。異構(gòu)體sfc在12分鐘色譜分析中(ad-3_b2_5_40_25ml)，tr＝6.964分鐘、7.904分鐘和9.124分鐘，ee＝96.88％。
步驟3：(s)-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-7-異丙基-6-((反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺
向(s)-n-((r)-1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-羥乙基)-7-異丙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺(5.3g，12.7毫摩爾)和反-4-(三氟甲基)環(huán)己烷甲醛(4.58g，25.4毫摩爾)在無水meoh(100ml)中的混合物滴加乙酸直至ph為6至7。在室溫下分批添加氰基硼氫化鈉(3.19g，50.8毫摩爾)。將混合物加熱至70℃并攪拌1h。將混合物冷卻至室溫并用飽和碳酸氫鈉水溶液(150ml)淬滅，然后用乙酸乙酯(3×200ml)萃取。將合并的有機層經(jīng)無水na2so2干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用乙酸乙酯洗脫)純化，以獲得為淺綠色固體的產(chǎn)物(6.63g，90％)，其通過sfc分離和酸(hcl)式制備型hplc純化兩次，以獲得為淺黃色固體的(s)-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-7-異丙基-6-((反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺(46)(3551.7mg，53％)。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(mkrp-18e25-2mm)，tr＝0.634分鐘，ms(esi)m/z582.1[m+h]+。1hnmr(cd3od,400mhz)：δ9.12-9.13(d,j＝2.0hz,1h),9.31-9.32(d,j＝1.6hz,1h),7.91-7.93(dd,j＝6.8,1.6hz,2h),7.71-7.73(d,j＝8.0hz,2h),5.30-5.33(t,j＝6.4hz,1h),5.16-5.19(d,j＝15.2hz,1h),4.87-4.89(m,1h),4.70-4.74(d,j＝15.2hz,1h),3.93-3.95(d,j＝6.4hz,2h),3.30-3.35(m,2h),3.19-3.25(q,j＝7.6hz,2h),2.54-2.56(m,1h),2.25-2.27(m,1h),2.03-2.08(m,5h),1.45-1.48(m,2h),1.33-1.35(m,4h),1.23-1.27(m,4h),1.11-1.13(t,j＝6.8hz,3h)。19fnmr(cd3od,400mhz)：δ-75.39。異構(gòu)體sfc在12分鐘色譜分析中(柱：ad-3_b2_5_40_25ml)，tr＝7.559分鐘，ee＝100％。hcl制備型hplc方法；流動相a：含0.05％hcl的水；流動相b：ch3cn。流速：90毫升/分鐘。檢測：uv220nm/254nm。柱：phenomenexsynergic18250*50mm*10um。柱溫：30℃。以分鐘計的時間：％a:％b；0.00:87:13,30.0:57:43；30.20:0:100；35.00:0:100。
實施例2：(s)-7-乙基-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-6-((反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺(41)
步驟1：(s)-7-乙基-3-(((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)氨基甲?；?-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯
在室溫下，將(s)-6-(叔丁氧羰基)-7-乙基-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酸(8g，27.4毫摩爾)、hatu(12.5g，32.9毫摩爾)和三乙胺(8.32g，11.5ml，82.2毫摩爾)在dmf(120ml)中的混合物攪拌0.5h。在0℃下向混合物滴加溶于dmf(30ml)中的(r)-2-氨基-2-(4-(乙基磺酰基)苯基)乙醇(6.9g，30.1毫摩爾)。將混合物在室溫下攪拌2h。lcms顯示無原料殘留。將反應(yīng)混合物用水(100ml)稀釋并用乙酸乙酯(3×200ml)萃取。將合并的有機層用水(3×100ml)和鹽水(100ml)洗滌、經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠柱層析(用石油醚：乙酸乙酯＝1:6至1:8洗脫)純化，以獲得為黃色固體的(s)-7-乙基-3-(((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)氨基甲酰基)-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯(9.0g,65％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)：δ8.96(s,1h),8.01(s,1h),7.88-7.90(d,j＝8.0hz,2h),7.60-7.62(d,j＝8.4hz,2h),7.29-7.30(m,1h),5.32-5.35(m,1h),5.04-5.13(m,1h),4.76-4.82(m,1h),4.55-4.59(m,1h),4.00-4.13(m,2h),3.08-3.13(q,j＝7.6hz,2h),2.19-2.22(m,2h),1.53(s,9h),1.28-1.30(q,j＝7.6hz,3h),0.65-0.68(q,j＝7.2hz,3h)。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(merckrp-18e25-2mm)，tr＝0.702分鐘，ms(esi)m/z504.0[m+h]+。
步驟2：(s)-7-乙基-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺
在0℃下，向(s)-7-乙基-3-(((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)氨基甲?；?-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7h)-甲酸叔丁基酯(9.0g，17.9毫摩爾)在ch2cl2(100ml)中的溶液滴加hcl(30ml，二氧六環(huán)中的4n)。將混合物在室溫下攪拌2h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1：3)顯示無原料殘留。將混合物在減壓下濃縮。將殘余物用10％naoh水溶液堿化至ph＝9至10，然后用乙酸乙酯(5×200ml)萃取。將合并的有機層經(jīng)無水na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮以獲得如黃紅色固體的(s)-7-乙基-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺(7.2g，100％)，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。
步驟3：(s)-7-乙基-n-((r)-1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-羥乙基)-6-((反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺
向(s)-7-乙基-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺(7.2g，17.8毫摩爾)和反-4-(三氟甲基)環(huán)己烷甲醛(4.81g，26.7毫摩爾)在無水meoh(100ml)中的混合物滴加乙酸直至ph為6至7。在室溫下分批添加氰基硼氫化鈉(4.47g，71.2毫摩爾)。將混合物加熱至70℃并攪拌1h。將混合物冷卻至室溫并用飽和碳酸氫鈉水溶液(150ml)淬滅，然后用乙酸乙酯(2×150ml)萃取。將合并的有機層經(jīng)無水na2so2干燥、過濾并在減壓下濃縮。將殘余物用硅膠層析(用乙酸乙酯洗脫)純化，然后將其通過sfc分離(ad-h)和酸(hcl)式制備型hplc純化，以獲得為淺黃色固體的(s)-7-乙基-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-6-((反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺(41)(總共4.5g，hcl鹽，46％)。lc-ms在5-95ab_1.5分鐘色譜分析中(rp-18e25-2mm)，tr＝0.662分鐘，ms(esi)m/z568.0[m+h]+。1hnmr(cd3od,400mhz)：δ9.07(s,1h),8.27(s,1h),7.88-7.90(d,j＝8.0hz,2h),7.67-7.69(d,j＝8.0hz,2h),5.26-5.29(t,j＝6.0hz,1h),5.06-5.10(m,2h),4.70-4.80(m,1h),3.90-3.91(d,j＝6.4hz,2h),3.30-3.43(m,2h),3.16-3.21(q,j＝7.2hz,2h),1.97-2.22(m,8h),1.18-1.46(m,10h)。19fnmr(cd3od,400mhz)：δ-75.39。hcl制備型hplc方法流動相a：含0.05％hcl的水；流動相b：ch3cn。流速：80毫升/分鐘。檢測：uv220nm/254nm。柱：phenomenexgeminic18250*50mm*5um。柱溫：30℃。以分鐘計的時間：％a:％b；0.00:70:30,8.00:45:55；8.20:0:100；10.00:0:100。
實施例3：作為單甲磺酸鹽晶體的化合物(41)(s)-7-乙基-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-6-((反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺的甲磺酸鹽結(jié)晶
將(s)-7-乙基-n-((r)-1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-羥乙基)-6-((反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺的hcl鹽(993.2mg，1.64毫摩爾)溶于ch2cl2(60ml)中，并用1nnaoh(40ml)洗滌。然后水層用ch2cl2(4×5ml)反萃取。將合并的ch2cl2層經(jīng)na2so4干燥、過濾并在減壓下濃縮。將游離胺(915.1mg,1.61毫摩爾)再溶解于etoh(10ml)中并冷卻至0℃。添加甲磺酸(aldrich，99.5％，171.3mg，1.1當(dāng)量)并攪拌以獲得淺黃色溶液。將幾個晶種添加至溶液，然后將其在室溫下攪拌過夜(5分鐘之內(nèi)出現(xiàn)白色固體)。通過過濾收集晶體，在高真空下抽吸4h后獲得985.3mg(92％)白色固體，以獲得(s)-7-乙基-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-6-((反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺單甲磺酸鹽。lc-ms(2分鐘方法)：tr＝0.93分鐘。1hnmr(cd3od,400mhz)：δ9.06(d,j＝7.2hz,1h),9.01(s,1h),8.19(s,1h),7.83(d,j＝8.4hz,2h),7.62(d,j＝8.4hz,2h),5.22(dd,j＝7.2,6.0hz,1h),5.99(d,j＝14.8hz,1h),4.94(m,1h),4.61(d,j＝14.8hz,1h),3.84(d,j＝6.0hz,1h),3.41(m,2h),3.12(q,j＝7.2hz,2h),2.61(s,3h),2.20-1.80(m,8h),1.44-1.32(m,2h),1.26(t,j＝7.2hz,3h),1.20(m,2h),1.14(t,j＝7.2hz,3h)。19fnmr(cd3od,400mhz)：δ-75.50(d,j＝94hz)。
以以下方式獲得晶種：向(s)-7-乙基-n-((r)-1-(4-(乙基磺?；?苯基)-2-羥乙基)-6-((反-4-(三氟甲基)環(huán)己基)甲基)-6,7-二氫-5h-吡咯并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺(59.7mg，0.11毫摩爾)在乙酸乙酯(0.5ml)中的溶液滴加甲基磺酸(19.8mg，1.95當(dāng)量)。該鹽油化。在將乙酸乙酯上層傾析之后，將殘余物經(jīng)真空干燥以去除所有殘留的乙酸乙酯。通過加熱溶液以獲得澄清溶液，然后將殘余物再溶于etoh(～5ml)中。在室溫下靜置過夜后，晶體析出(17.5mg，25％)。
根據(jù)本文描述的方法制備以下表1中的化合物。特指地，“*”表明盡管分離了單一的非對映異構(gòu)體，這些位置的絕對構(gòu)型沒有被完全表征，而在指定位置中的一個相對于其他指定位置的立體化學(xué)如表中所示。因此，化合物組(對)在單一非對映異構(gòu)體分離和測試，但是關(guān)于“*”的絕對立體化學(xué)被任意定義之處存在(例如，化合物1和4；2和5；3和6；10和11；14和15；18和21；29和30；34和42；以及39和42)。例如在化合物1中，三氟甲基基團相對于其連接的二氫吡咯并吡啶核為反式。
表1：
生物學(xué)分析
放射性配體rorγ結(jié)合分析(分析1)
用可商購的放射性配體(rl)25-羥基[26,27-3h]-膽固醇(perkinelmer，目錄號net674250uc)在無細胞競爭分析中測試本發(fā)明的化合物結(jié)合到rorγ的能力，用于表示為6xhis-谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶(gst)融合物的重組rorγ配體結(jié)合域(lbd)蛋白質(zhì)上的配體結(jié)合位點。分析在96孔spa板(perkinelmer，目錄號1450-401)中，在含有150mm的nacl、5mm的mgcl2、10％(v/v)甘油、2mm的chaps、0.5mm的β-辛基吡喃葡萄糖苷和5mm的dtt的50mmhepes緩沖液(ph7.4)中進行試驗。測試化合物溶解于dmso中，且在相同溶劑中制備化合物的半對數(shù)(3.162x)連續(xù)稀釋。2μl的dmso溶液與28μl8.6nm25-羥基[26,27-3h]-膽固醇和50μl24nm的rorγlbd混合。板在700rpm下振蕩20分鐘并在室溫下培養(yǎng)10分鐘，隨后添加40μl聚-lysysispa珠粒(perkinelmer，目錄號rpnq0010)以實現(xiàn)每孔50μg珠粒。板在定軌振蕩器上培養(yǎng)20分鐘然后在不攪拌的情況下在室溫下培養(yǎng)10min。在perkinelmermicrobeta板讀取器上登記關(guān)于氚β輻射的spa信號?；谠赿mso對照下獲得的高信號和在10μm標(biāo)準(zhǔn)下rorγ反向激動劑t0901317(sigmaaldrich，目錄號t2320)下觀測的低信號計算抑制百分比值。抑制百分比相對于濃度數(shù)據(jù)被擬合到四參數(shù)模型中，且ic50值由所述擬合計算得出，因為濃度對應(yīng)于劑量反應(yīng)曲線上的拐點。使用以下等式計算抑制常量(ki)，其中[rl]為分析中的濃度且kd為25-羥基[26,27-3h]-膽固醇的解離常數(shù)：
jurkat細胞中的rorγt5xrore分析(分析2)
在基于細胞的轉(zhuǎn)錄活性分析中測試本發(fā)明的化合物的rorγ反向激動劑活性。分泌的
人全血分析(分析3)
在人類全血分析中測試本發(fā)明的化合物，以測定其對于il-17a產(chǎn)生的作用，如通過細胞因子分泌到50％血/培養(yǎng)基上清液中所確定的。在存在或不存在化合物的情況下，將肝素化鈉全血(由健康人類供體分離)和t細胞激活劑cytostim的混合物放置到經(jīng)滅菌、組織培養(yǎng)處理的24孔板中。特別地，每個孔中的混合物如下：(1)500μl全血，(2)250μl化合物被稀釋到rpmi-1640培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基含有10％hyclonetmfcs(thermofisherscientific,waltham,ma),
在37℃/5％co2下培養(yǎng)混合物48h，在其之后將來自每個孔中的200μl澄清上清液(即無紅細胞)轉(zhuǎn)移至96孔板。使用來自humanil-17av-plextm試劑盒(cat.#k151rfd-4,mesoscalediscovery,rockville,md)的25μldiluent43稀釋的25μl轉(zhuǎn)移的上清液確定il-17a細胞因子表達。根據(jù)制造商的說明書使用內(nèi)含的試劑進行分析。使用mesoscalediscoveryimager(model1200)讀取il-17av-plextm板。使用四參數(shù)非線性擬合模型由標(biāo)準(zhǔn)曲線推測il-17a水平并以pg/ml表示。使用四參數(shù)非線性擬合模型，相對于測試化合物的濃度倒推這些值以獲得ic50值。
herg分析(分析4)
在體外測試本發(fā)明的化合物相對herg(人類醚-à-go-go-相關(guān)基因)鉀離子通道(ikr的代用品，快速激活延遲的整流器心臟鉀離子通道)。
緩沖劑為hepes-緩沖的生理鹽水(hb-ps)溶液，由以下成分組成：137mmnacl、4.0mmkcl、1.8mmcacl2、1mmmgcl2、10mmhepes、10mm葡萄糖，和0.3％dmso，用naoh將ph調(diào)整至7.4。在溶液制備中使用的化學(xué)品從sigma-aldrich(st.louis,mo)購買，除非另有指明，其為acs試劑等級或更高的純度。
將hek(人類胚胎腎)293細胞平穩(wěn)地用hergcdna轉(zhuǎn)染。
對于膜片箝實驗，使用具有固定振幅的、從-80mv的保持電位以10s間隔重復(fù)的脈沖圖形測定herg鉀電流的啟動和穩(wěn)態(tài)抑制(去極化：+20mv持續(xù)2s；復(fù)極化：-50mv持續(xù)2s)。在2s內(nèi)變?yōu)?50mv期間測定峰尾電流。在應(yīng)用化合物或陽性對照(cisapride)之前維持穩(wěn)態(tài)至少30秒。測量峰尾電流直至達到新穩(wěn)態(tài)。
使用
將濃度-反應(yīng)數(shù)據(jù)擬合到以下形式的等式：
抑制％＝{1-1/[1+([test]/ic50)n]}*100
其中，[測試]為化合物濃度，ic50為在最大抑制一半的化合物濃度，n為希爾系數(shù)，抑制％為在每個化合物濃度的電流抑制百分比。使用excel2003(microsoft，wa)的插件solver實現(xiàn)非線性最小二乘法擬合并計算ic50。
分析1和分析2的結(jié)果示于表2中。
表2：
*+表示>1000nm；++表示100nm–1000nm；+++表示<100nm。
分析3和分析4的結(jié)果示于表3中。
表3：
*+指>200nm；++指100nm–200nm；+++指<100nm。
具有比較化合物的分析1至分析4的結(jié)果示于表4中。
表4：
a+表示>1000nm；++表示100nm–1000nm；+++表示<100nm。
b+表示>200nm；++表示100nm–200nm；+++表示<100nm。
盡管我們已經(jīng)描述了本發(fā)明的許多實施方式，可以改變我們的基本實施例以獲得使用本發(fā)明的化合物和方法的其他實施方式是明顯的。因此，應(yīng)通過所附的權(quán)利要求理解本發(fā)明的范圍而不是以實施例的方式呈現(xiàn)的具體實施方式而定義本發(fā)明的范圍。
貫穿本申請的所有參考文獻的內(nèi)容(包括參考圖書資料、授權(quán)專利、公開的專利申請和審查中的專利申請)據(jù)此通過引用以其整體明確地并入本文。除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常已知的含義相符合。