1.一種用于篩選靶物質(zhì)特異文庫的方法,包括:
(a)提供包含構(gòu)建的細(xì)胞文庫,所述構(gòu)建包括編碼含結(jié)合蛋白和活性包涵體蛋白的融合蛋白的多核苷酸;
(b)在所述細(xì)胞文庫中表達(dá)所述融合蛋白以形成相互作用陷阱(IT)細(xì)胞,其中所述結(jié)合蛋白展示在所述包涵體上;
(c)通過增加細(xì)胞透性依據(jù)步驟(b)將熒光物質(zhì)共軛的靶物質(zhì)導(dǎo)入所述細(xì)胞中;以及
(d)基于共軛到所述靶物質(zhì)的所述熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度測定所述結(jié)合蛋白和所述靶物質(zhì)之間的相互作用并以單個(gè)細(xì)胞單位回收細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中增加細(xì)胞透性包括:
(i)在-80℃到-10℃下冷凍細(xì)胞;
(ii)在室溫至37℃下融化所冷凍的細(xì)胞;以及
(iii)使用酸性溶液處理所融化的細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述增加細(xì)胞透性使得可將所述靶物質(zhì)導(dǎo)入所述細(xì)胞中而不影響展示在所述細(xì)胞內(nèi)包涵體上的所述結(jié)合蛋白活性和遺傳信息。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述靶物質(zhì)是蛋白、核酸或化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述融合蛋白還包括熒光蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其中共軛到所述靶物質(zhì)的所述熒光蛋白和所述熒光具有相互不同的波長。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述活性包涵體蛋白是纖維素結(jié)合結(jié)構(gòu)域(CBD)蛋白。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其中所述熒光蛋白選自:由綠色熒光蛋白(GFP)、增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)、修飾的綠色熒光蛋白(mGFP)、紅色熒光蛋白(RFP)、單體紅色熒光蛋白(mRFP)、增強(qiáng)型紅色熒光蛋白(ERFP)、Discosoma sp.紅色熒光蛋白(DsRed)、藍(lán)色熒光蛋白(BFP)、增強(qiáng)型藍(lán)色熒光蛋白(EBFP)、青色熒光蛋白(CFP)、青綠色熒光蛋白(CGFP)、增強(qiáng)型青色熒光蛋白(ECFP)、黃色熒光蛋白(YFP)、增強(qiáng)型黃色熒光蛋白(EYFP)、薊綠(AzG)、Heteractis crispa紅色熒光蛋白(HcRed)和藍(lán)色熒光蛋白(BFP)所組成的組。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述細(xì)胞中的熒光強(qiáng)度是使用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀測定的。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,還包括(e)提取并擴(kuò)增以單個(gè)細(xì)胞單位回收的細(xì)胞中編碼所述融合蛋白的基因。
11.一種用于測定結(jié)合蛋白和靶物質(zhì)之間相互作用的方法,包括:
(a)提供細(xì)胞,其包括構(gòu)建,所述構(gòu)建包含編碼含有結(jié)合蛋白和活性包涵體蛋白的融合蛋白的多核苷酸;
(b)在所述細(xì)胞中表達(dá)融合蛋白以形成相互作用陷阱(IT)細(xì)胞,其中所述結(jié)合蛋白展示在包涵體上;
(c)通過增加細(xì)胞透性依據(jù)步驟(b)將熒光物質(zhì)共軛的靶物質(zhì)導(dǎo)入所述細(xì)胞中;以及
(d)基于共軛到所述靶物質(zhì)的所述熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度,測定所述結(jié)合蛋白和從細(xì)胞外導(dǎo)入的所述靶物質(zhì)之間的相互作用。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法,其中所述增加細(xì)胞透性包括:
(i)在-80℃到-10℃下冷凍細(xì)胞;
(ii)在室溫至37℃下融化所冷凍的細(xì)胞;以及
(iii)使用酸性溶液處理所融化的細(xì)胞。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法,其中所述增加細(xì)胞透性使得可將所述靶物質(zhì)導(dǎo)入所述細(xì)胞中而不影響展示在所述細(xì)胞內(nèi)包涵體上的所述結(jié)合蛋白活性和遺傳信息。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法,其中所述靶物質(zhì)是蛋白、核酸或化合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法,其中所述融合蛋白還包括熒光蛋白。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法,其中共軛到所述靶物質(zhì)的所述熒光蛋白和所述熒光具有相互不同的波長。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法,其中所述熒光蛋白選自:由綠色熒光蛋白(GFP)、增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)、修飾的綠色熒光蛋白(mGFP)、紅色熒光蛋白(RFP)、單體紅色熒光蛋白(mRFP)、增強(qiáng)型紅色熒光蛋白(ERFP)、Discosoma sp.紅色熒光蛋白(DsRed)、藍(lán)色熒光蛋白(BFP)、增強(qiáng)型藍(lán)色熒光蛋白(EBFP)、青色熒光蛋白(CFP)、青綠色熒光蛋白(CGFP)、增強(qiáng)型青色熒光蛋白(ECFP)、黃色熒光蛋白(YFP)、增強(qiáng)型黃色熒光蛋白(EYFP)、薊綠(AzG)、Heteractis crispa紅色熒光蛋白(HcRed)和藍(lán)色熒光蛋白(BFP)所組成的組。
18.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法,其中所述細(xì)胞中的熒光強(qiáng)度是使用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀測定的。
19.一種細(xì)胞,其包括構(gòu)建,所述構(gòu)建包含編碼含有結(jié)合蛋白和活性包涵體蛋白的融合蛋白的多核苷酸。
20.一種細(xì)胞文庫,其包括構(gòu)建,所述構(gòu)建包含編碼含有結(jié)合蛋白和活性包涵體蛋白的融合蛋白的多核苷酸。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的細(xì)胞文庫,其中所述文庫是DNA文庫或用其轉(zhuǎn)化的細(xì)胞文庫。
22.一種相互作用陷阱(IT)細(xì)胞及細(xì)胞文庫,其中表達(dá)含結(jié)合蛋白和活性包涵體蛋白的融合蛋白并且所述結(jié)合蛋白展示在包涵體上。