1.一種分離的氨基酸序列,所述氨基酸序列含有:
(1)SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列;或
(2)在(1)所述的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸,同時(shí)保留SEQ ID NO:7所具備的磷脂酶C活性的由(1)衍生的多肽。
2.如權(quán)利要求1所述的氨基酸序列,其特征在于,
SEQ ID NO:7中第56位的氨基酸Xaa為丙氨酸、賴氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、組氨酸或色氨酸,優(yōu)選組氨酸或色氨酸;和/或
(2)所述的取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸為第106位的M突變?yōu)閂;優(yōu)選地,(2)所述的氨基酸序列56位的氨基酸殘基為組氨酸,106位的氨基酸殘基為纈氨酸;和/或
所述氨基酸序列含有前導(dǎo)肽、末端延伸、GST、麥芽糖E結(jié)合蛋白、蛋白A、如6His或Flag的標(biāo)簽、和/或Xa因子或凝血酶或腸激酶的蛋白水解酶位點(diǎn)。
3.如權(quán)利要求1所述的氨基酸序列,其特征在于,所述氨基酸序列選自SEQ ID NO:2、4和6。
4.一種分離的多核苷酸序列,選自:
(1)編碼權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的分離的氨基酸序列的多核苷酸序列;
(2)(1)所述多核苷酸序列的互補(bǔ)序列;和
(3)(1)或(2)所述序列的長(zhǎng)15-30個(gè)堿基的片段;
優(yōu)選地,所述多核苷酸序列如SEQ ID NO:1、3或5所示。
5.一種核酸構(gòu)建體,其特征在于,該核酸構(gòu)建體包含權(quán)利要求6所述的多核苷酸序列,優(yōu)選地,所述核酸構(gòu)建體是表達(dá)載體。
6.一種遺傳工程化的宿主細(xì)胞,其特征在于,所述宿主細(xì)胞含有權(quán)利要求4所述的多核苷酸序列或權(quán)利要求5所述的核酸構(gòu)建體。
7.一種組合物,其特征在于,所述組合物含有權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的多肽和任選的輔料,優(yōu)選地,所述輔料為選自活性炭、氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃的吸附材料。
8.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的氨基酸序列、權(quán)利要求4所述的多核苷酸序列、權(quán)利要求5所述的核酸構(gòu)建體、權(quán)利要求6所述的宿主細(xì)胞或權(quán)利要求7所述的組合物在油脂精煉、磷脂改性、飼料改良劑、食品工業(yè)和醫(yī)藥工業(yè)中的應(yīng)用。
9.一種酶法脫膠方法,或一種提高磷脂酶C脫膠性能的方法,其特征在于,所述方法包括:在55~75℃的溫度下孵育磷脂酶C后,將該磷脂酶C加到毛油中,進(jìn)行脫膠。
10.如權(quán)利要求10所述的方法,其特征在于,所述方法具有以下一個(gè)或多個(gè)特征:
(1)所述磷脂酶C具有權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的氨基酸序列;
(2)在60~70℃的溫度下孵育所述磷脂酶C;
(3)孵育時(shí)間為15~45分鐘;
(4)以毛油重量計(jì),酶的添加量為50~1000ppm,優(yōu)選為100~500ppm,更優(yōu)選為100~300ppm;
(5)在將酶加入毛油前,先將毛油加熱至50~70℃,優(yōu)選50~60℃;和
(6)脫膠包括在50~60℃下攪拌1~3小時(shí),然后升溫至80~90℃保持1~10分鐘。