本發(fā)明屬于海洋生物制品與藥品領(lǐng)域，具體涉及一種防治絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的海洋寡肽及其制備工藝。
背景技術(shù)：
骨質(zhì)疏松癥是中、老年人常見(jiàn)病、多發(fā)病，嚴(yán)重影響該類人員的健康和生活質(zhì)量。骨質(zhì)疏松癥及其引起的骨折在當(dāng)前常見(jiàn)疾病中位居第7位，嚴(yán)重威脅著中、老年人的健康，使之成為全球的公共衛(wèi)生問(wèn)題。目前，人口老齡化日益嚴(yán)重，提高對(duì)骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防意識(shí)具有非常重要的意義。臨床上骨質(zhì)疏松患者主要表現(xiàn)為腰背疼痛、駝背、易骨折，并伴有腎虛表現(xiàn)，嚴(yán)重影響了生活和生命質(zhì)量。據(jù)聯(lián)合國(guó)統(tǒng)計(jì)老齡化已成為21世紀(jì)不可逆轉(zhuǎn)的世界性趨勢(shì)，中國(guó)社會(huì)老齡化速度快于全國(guó)總?cè)丝谠鲩L(zhǎng)速度，因此增加骨密度、有效治療骨質(zhì)疏松已成為人們廣泛關(guān)注的領(lǐng)域。
我國(guó)骨質(zhì)疏松病例較30年前增加了3倍，60歲以上老人發(fā)病率達(dá)59%，每年骨質(zhì)疏松癥骨折發(fā)病率達(dá)9.6%，并逐年增高。女性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥屬于原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥，主要與雌激素水平降低有關(guān)。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松是中、老年婦女的常見(jiàn)病、多發(fā)病。女性在50歲后可見(jiàn)明顯的骨質(zhì)丟失加速，40歲以上骨質(zhì)疏松癥總患病率女性為15.70%，50-79歲人群骨質(zhì)疏松癥發(fā)病率女性為67.30%。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松臨床癥狀表現(xiàn)主要腰背疼痛，甚至骨折，并伴有多種并發(fā)癥，其致殘率和致死率高。目前普遍認(rèn)為，對(duì)骨質(zhì)疏松癥的防治重點(diǎn)應(yīng)該放在50歲左右的絕經(jīng)期及絕經(jīng)后婦女。
生物活性肽是指那些有特殊生理活性的肽類的總稱。由于海洋存在許多極端環(huán)境，如高壓（深海）、低溫（極地、深海）、高溫（海底火山口）和高鹽等。為了適應(yīng)這些極端的海洋生境，海洋生物蛋白質(zhì)無(wú)論氨基酸的組成或序列都與陸地生物蛋白有很大的不同。隨著人們對(duì)海洋資源認(rèn)識(shí)水平的提高，以及現(xiàn)代生物技術(shù)在海洋藥物研究中的應(yīng)用，如RP-HPLC, 2D-NMR,TOF- MS,手性色譜（包括GC, HPLC)等技術(shù)的發(fā)展，使得對(duì)海洋活性肽的研究逐漸成為熱點(diǎn)。
研究證明氨基酸和小肽具有促進(jìn)鈣吸收的作用，而且氨基酸和肽的金屬?gòu)?fù)合體如Fe、Zn和Mn的生物學(xué)利用率比無(wú)機(jī)離子高，且無(wú)毒副作用。海洋生物蛋白質(zhì)經(jīng)水解生成的肽與微量元素結(jié)合形成的螯合物可通過(guò)小腸直接吸收，具有增強(qiáng)骨密度的作用，可替代市場(chǎng)上的補(bǔ)鈣制劑產(chǎn)品治療骨質(zhì)疏松癥。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種防治絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的海洋寡肽，該產(chǎn)品經(jīng)實(shí)驗(yàn)多次驗(yàn)證，具有顯著的骨密度增加作用，且無(wú)任何毒副作用。該發(fā)明技術(shù)工藝簡(jiǎn)單，適用范圍廣，極具推廣前景。
一種防治絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的海洋寡肽，所述的海洋寡肽通過(guò)如下步驟進(jìn)行制備：
①蛋白酶解：按每克魚(yú)膠原蛋白添加胰蛋白酶0.01-0.05%進(jìn)行酶解，酶解溫度20-60℃，酶解時(shí)間3-10h，pH值7.0-9.0，得到酶解物；
②親和層析：采用親和層析柱處理步驟①中得到的酶解物，采用pH2.0、4.0和6.5的緩沖液梯度洗脫，收集寡肽組分；
③噴霧干燥：對(duì)步驟②中寡肽組分進(jìn)行噴霧干燥，且在干燥前添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的甘露醇保護(hù)劑，得到海洋寡肽；
④包裝：將干燥好的海洋寡肽經(jīng)包裝后即得防治絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的海洋寡肽。
優(yōu)選的，所述的海洋寡肽為pH6.5緩沖液洗脫下的寡肽組分，分子量小于2000Da。
此外，本發(fā)明還提出一種防治絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的海洋寡肽的制備工藝，所述工藝步驟包括：
①蛋白酶解：按每克魚(yú)膠原蛋白添加胰蛋白酶0.01-0.05%進(jìn)行酶解，酶解溫度20-60℃，酶解時(shí)間3-10h，pH值7.0-9.0，得到酶解物；
②親和層析：采用親和層析柱處理步驟①中得到的酶解物，采用pH2.0、4.0和6.5的緩沖液梯度洗脫，收集寡肽組分；
③噴霧干燥：對(duì)步驟②中寡肽組分進(jìn)行噴霧干燥，且在干燥前添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的甘露醇保護(hù)劑，得到海洋寡肽；
④包裝：將干燥好的海洋寡肽經(jīng)包裝后即得防治絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的海洋寡肽。
本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)所具有的優(yōu)點(diǎn)是提供了一種防治骨質(zhì)疏松癥的海洋寡肽，為婦女絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防和治療提供了新的制劑和藥物；該產(chǎn)品無(wú)毒副作用，性質(zhì)溫和，對(duì)胃腸道無(wú)刺激作用。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例1：一種防治絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的海洋寡肽的制備工藝，具體制備步驟如下：
①蛋白酶解：每克魚(yú)膠原蛋白添加0.02%的胰蛋白酶酶解，酶解溫度45℃，酶解時(shí)間6h，pH值7.5，得到酶解物；
②親和層析：采用親和層析柱處理步驟①中得到的酶解物，采用pH2.0、4.0和6.5的緩沖液梯度洗脫，收集pH6.5洗脫的寡肽組分；
③噴霧干燥：對(duì)步驟②中寡肽組分進(jìn)行噴霧干燥，且在干燥前添加質(zhì)量比為5%的甘露醇保護(hù)劑，得到海洋寡肽；本發(fā)明使用的甘露醇可穩(wěn)定海洋寡肽在噴霧干燥的變性，使得制得含海洋寡肽穩(wěn)定性更強(qiáng)。
④包裝：干燥好的海洋寡肽經(jīng)包裝后即為本發(fā)明產(chǎn)品。
本發(fā)明所述的魚(yú)膠原蛋白為深海鱈魚(yú)膠原蛋白。
實(shí)施例2：一種防治絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的海洋寡肽的制備工藝，具體制備步驟如下：
①蛋白酶解：每克魚(yú)膠原蛋白添加0.04%的胰蛋白酶酶解，酶解溫度55℃，酶解時(shí)間3h，pH值8，得到酶解物；
②親和層析：采用親和層析柱處理步驟①中得到的酶解物，采用pH2.0、4.0和6.5的緩沖液梯度洗脫，收集pH6.5洗脫的寡肽組分；
③噴霧干燥：對(duì)步驟②中寡肽組分進(jìn)行噴霧干燥，且在干燥前添加質(zhì)量比為5%的甘露醇保護(hù)劑，得到海洋寡肽；
④包裝：干燥好的海洋寡肽經(jīng)包裝后即為本發(fā)明產(chǎn)品。
通過(guò)本實(shí)施例步驟①對(duì)魚(yú)膠原蛋白進(jìn)行了充分的酶解。
實(shí)施例2：一種防治絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的海洋寡肽的制備工藝，具體制備步驟如下：
①蛋白酶解：每克魚(yú)膠原蛋白添加0.05%的胰蛋白酶酶解，酶解溫度30℃，酶解時(shí)間9h，pH值7.5，得到酶解物；
②親和層析：采用親和層析柱處理步驟①中得到的酶解物，采用pH2.0、4.0和6.5的緩沖液梯度洗脫，收集pH6.5洗脫的寡肽組分；
③噴霧干燥：對(duì)步驟②中寡肽組分進(jìn)行噴霧干燥，且在干燥前添加質(zhì)量比為5%的甘露醇保護(hù)劑，得到海洋寡肽；
④包裝：干燥好的海洋寡肽經(jīng)包裝后即為本發(fā)明產(chǎn)品。
本實(shí)施例的魚(yú)膠原蛋白為羅非魚(yú)膠原蛋白。
當(dāng)然，本發(fā)明所述的魚(yú)膠原蛋白，不局限于實(shí)施例中列舉的，還可以為其他魚(yú)膠原蛋白，如三文魚(yú)等。
該發(fā)明的海洋寡肽制備工藝簡(jiǎn)單，易于產(chǎn)業(yè)化，反應(yīng)條件溫和，是一種綠色加工技術(shù)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所得的海洋寡肽具有顯著的促鈣吸收效果，并可提高血清鈣和骨鈣含量，增強(qiáng)骨密度，調(diào)整降鈣素和甲狀旁腺激素水平，具有顯著的抗骨質(zhì)疏松作用，可用于絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防與治療。
以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其進(jìn)行限制；盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，依然可以對(duì)前述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明所要求保護(hù)的技術(shù)方案的精神和范圍。