本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域,具體地說涉及一種從男性尿液中提取烏司他丁粗品的方法。
背景技術(shù):
烏司他?。║Linastatin)系從健康成年男性新鮮尿液中分離純化出來的一種酸性糖蛋白,是一種廣譜的蛋白酶抑制劑,主要在肝臟中合成,由腎臟代謝隨尿液排出,且其分解形成的低分子量成分也具有很強的抑制水解酶的作用。烏司他丁由143個氨基酸組成,相對分子質(zhì)量約37000~43000,屬于蛋白酶抑制劑,對胰蛋白酶、α-糜蛋白酶等絲氨酸蛋白酶及粒細胞彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、巰基酶、纖溶酶等多種酶有抑制作用,還具有穩(wěn)定溶酶體膜、抑制溶酶體酶的釋放、抑制心肌抑制因子(MDF)產(chǎn)生、清除氧自由基及抑制炎癥介質(zhì)釋放的作用。烏司他丁還可改善手術(shù)刺激引起的免疫功能下降、蛋白代謝異常和腎功能降低,防止手術(shù)刺激引起的對內(nèi)臟器官與細胞的損傷以及改善休克時的循環(huán)狀態(tài)等。
1909年歐洲首先報道人體尿液存在著胰蛋白酶抑制劑,隨后人們發(fā)現(xiàn),當(dāng)人體受到感染、發(fā)熱、腫瘤、妊娠、休克、手術(shù)、給予糖皮質(zhì)激素等刺激時,人體尿液中UTI活性升高。1985年由日本首先開發(fā)上市,在日本已作為急性胰腺炎、急性循環(huán)衰竭的治療藥物被廣泛應(yīng)用于臨床。
本發(fā)明人自2008年開始對UTI的生產(chǎn)工藝進行試驗研究,采用現(xiàn)代蛋白質(zhì)高端生化分離技術(shù)進行生產(chǎn),使UTI的總收率提高到70%以上,總效價不低于5000iu/mg,生產(chǎn)工藝穩(wěn)定,質(zhì)量可控。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的是提供了一種從男性尿液中提取烏司他丁粗品的方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是:健康成年男性尿液經(jīng)甲殼素并在一定酸度的條件下進行吸附、吸附物經(jīng)過一定濃度的氨水進行洗脫、洗脫液加入硫酸銨進行鹽析、鹽析品經(jīng)過五氧化二磷干燥得烏司他丁粗品的方法。
包括如下步驟:
1.甲殼素吸附
將合格的男性尿液經(jīng)過二層紗布過濾,濾入塑料桶中,不斷攪拌的同時,以緩慢的速度加入16.5kg甲殼素,并用精密pH試紙測定,調(diào)節(jié)尿液pH到5.5~6.0之間;攪拌吸附2小時,過濾,棄去尿液,用水洗滌甲殼素去殘尿及雜質(zhì),至澄清為止。
2.氨水脫附
將5%氨水?dāng)嚢柘礈旒讱に?小時,過濾,收集洗脫液;甲殼素再用等量的5%的氨水溶液洗脫1小時,收集洗脫液,合并二次洗脫液。
3.鹽析
將洗脫液按500g/L的比例,加入固體硫酸銨,攪拌溶解,攪拌后,放置12-16小時沉淀,離心(3500rpm/min-4000rpm/min),收集沉淀的烏司他丁鹽析品。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。
實施例
所述的利用健康成年男性尿液經(jīng)甲殼素并在一定酸度的條件下進行吸附、吸附物經(jīng)過一定濃度的氨水進行洗脫、洗脫液加入硫酸銨進行鹽析、鹽析品經(jīng)過五氧化二磷干燥得烏司他丁粗品的方法。包括如下步驟:
1.尿液檢查
1.1.尿液是否澄清;
1.2 pH試紙檢查尿液的pH值為6.0。
2.甲殼素吸附
2.1取合格尿1.0T用二層紗布過濾,濾入塑料桶中;
2.2在不斷攪拌的同時,以緩慢的速度加入16.5kg甲殼素,并用精密pH試紙測定,調(diào)節(jié)尿液pH到5.5;
2.3攪拌吸附2小時,過濾,棄去尿液,用水洗滌甲殼素去殘尿及雜質(zhì),至澄清為止。
3.氨水脫附
用5%氨水33L攪拌洗滌甲殼素1小時,過濾,收集洗脫液;甲殼素再用等量的5%的氨水溶液洗脫1小時,收集洗脫液,合并二次洗脫液得10.6L。
4.硫酸銨鹽析
洗脫液按500g/L的比例,加入固體硫酸銨5300g,攪拌溶解,攪拌后,放置12小時沉淀,離心(3500r/min-4000r/min),收集沉淀的烏司他丁鹽析品。
5.將烏司他丁鹽析品,用五氧化二磷作吸水劑,真空干燥,干燥后即得粗制品共計199.6g,收率為0.02%。
以上所述,僅是本發(fā)明的較佳實施例而已,并非是對本發(fā)明作其它形式的限制,任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容,依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型,仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護范圍。