本發(fā)明屬于抗生素提取技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種利用那西肽發(fā)酵液制備那西肽粗品的方法。
背景技術(shù)：
那西肽又稱諾西肽，是一種含有多個噻唑環(huán)并富含硫多肽類抗生素，與硫鏈絲菌肽、鹽屋霉素、微球菌素、硫肽霉素屬于同一類化合物。目前那西肽已被列入歐洲藥典以及日本飼料安全法，許多國家和地區(qū)都在使用那西肽。國內(nèi)農(nóng)業(yè)部將那西肽列為可在飼料中長期添加的飼料添加劑。
那西肽采用發(fā)酵模式生產(chǎn)，90-92%的那西肽存在于菌種細胞內(nèi)，剩余8%左右的那西肽存在于發(fā)酵液中。國內(nèi)相關(guān)文獻、專利報道了采用浸提、樹脂吸附和膜過濾的方法提取胞內(nèi)產(chǎn)物那西肽，未能采取有效方法同時提取發(fā)酵液中剩余的部分產(chǎn)物那西肽，導(dǎo)致提取工藝總收率較低，生產(chǎn)成本較高。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供一種有效提高那西肽提取收率，降低生產(chǎn)成本，且提取工藝簡單的利用那西肽發(fā)酵液制備那西肽粗品的方法。
為實現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為：
一種利用那西肽發(fā)酵液制備那西肽粗品的方法，其特征在于其工藝步驟為：首先將那西肽發(fā)酵液進行預(yù)處理，水洗，然后采用有機溶媒萃取，之后將萃取液加入鈉鹽，充分攪拌后靜置分層，所得那西肽有機溶液減壓蒸餾即可得到那西肽粗品；
所述預(yù)處理工藝為：在那西肽發(fā)酵液中加入尿素和聚乙二醇單辛基苯基醚（triton X-100），充分攪拌，然后靜置，過濾即可；
所述有機溶媒是二氧六環(huán)或吡啶。
所述預(yù)處理過程中，控制那西肽發(fā)酵液溫度30-35℃，攪拌轉(zhuǎn)速90-110r/min，攪拌時間150-190min，靜置時間40-60min。
在預(yù)處理過程中，所述尿素的用量為那西肽發(fā)酵液質(zhì)量的1-3%。
在預(yù)處理過程中，所述聚乙二醇單辛基苯基醚（triton X-100）的用量為那西肽發(fā)酵液質(zhì)量的4-6%。
所述水洗是指加入純化水充分攪拌后再進行過濾處理，水洗兩次，每次加水量按照每1千克預(yù)處理后的濕物質(zhì)加水8-10L計量，每次攪拌時間20-40min。
所述有機溶媒萃取是指在水洗后的濕物質(zhì)中加入有機溶媒，充分攪拌，過濾即可，攪拌轉(zhuǎn)速20-40r/min，攪拌180-200min。
所述有機溶媒的用量為：每1千克的水洗后的濕物質(zhì)加入4-6L有機溶媒。
所述鈉鹽為碳酸鈉或氯化鈉或羧甲基纖維素鈉，其用量為水洗后的濕物質(zhì)重量的0.6-0.8%。
所述減壓蒸餾條件為：溫度80-85℃，壓力-0.1--0.05MPa。
本發(fā)明建立了一種利用那西肽發(fā)酵液制備納西太粗品的方法，該方法在有效提取菌種細胞內(nèi)的產(chǎn)物那西肽的同時，亦可提取出發(fā)酵液中部分產(chǎn)物那西肽，從而提高了提取收率，使其提取收率達到了90%以上，同時降低了生產(chǎn)成本，工藝簡單，提高了產(chǎn)品市場競爭力。
具體實施方式
下面用實例予以說明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，實例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。本發(fā)明的范圍與核心內(nèi)容依據(jù)權(quán)利要求書加以確定。
下述實施例中的那西肽發(fā)酵液來源：
采用二級發(fā)酵模式生產(chǎn)那西肽，其生產(chǎn)菌種為活躍鏈霉菌，培養(yǎng)基中的碳源主要是淀粉和葡萄糖，氮源是豆餅粉、玉米漿、酵母膏，經(jīng)240h的發(fā)酵培養(yǎng)，其效價一般在1500ug/ml左右。
實施例1
那西肽發(fā)酵液100m3，經(jīng)檢測，其效價為1630ug/ml。
1） 發(fā)酵液預(yù)處理
那西肽發(fā)酵液溫度控制在30℃，攪拌轉(zhuǎn)速控制在90r/min，發(fā)酵液中加入尿素10kg、triton X-100 40kg。繼續(xù)攪拌150min，然后靜置40min。發(fā)酵液過濾得到濕固體A 37噸。
2） 水洗
濕固體A中加入純化水300噸，攪拌轉(zhuǎn)速控制在40r/min，攪拌20min，過濾后得到濕固體B，再次加純化水300噸，攪拌20min，過濾得到濕固體C 36.7噸。
3） 萃取
濕固體C中加入有機溶媒二氧六環(huán)147m3，攪拌轉(zhuǎn)速控制在20r/min，攪拌180min，過濾后得到混合溶液D152.3m3?；旌先芤篋中加入碳酸鈉221kg，攪拌30min，靜置分層，得到有機溶液E146.8m3。
4） 減壓蒸餾
有機溶液E升溫至80℃，壓力控制在-0.1MPa。減壓蒸餾結(jié)束，得到那西肽粗品149kg。
提取收率：91.4%。
實施例2
那西肽發(fā)酵液100m3，經(jīng)檢測，其效價為1607ug/ml。
1） 發(fā)酵液預(yù)處理
那西肽發(fā)酵液溫度控制在31℃，攪拌轉(zhuǎn)速控制在95r/min，發(fā)酵液中加入尿素15kg、triton X-100 45kg。繼續(xù)攪拌160min，然后靜置45min。發(fā)酵液過濾得到濕固體A 36.7噸。
2） 水洗
濕固體A中加入純化水312噸，攪拌轉(zhuǎn)速控制在45r/min，攪拌25min，過濾后得到濕固體B，再次加純化水312噸，攪拌25min，過濾得到濕固體C 36.5噸。
3） 萃取
濕固體C中加入有機溶媒吡啶165m3，攪拌轉(zhuǎn)速控制在25r/min，攪拌185min，過濾后得到混合溶液D172m3?；旌先芤篋中加入氯化鈉237kg，攪拌35min，靜置分層，得到有機溶液E164.7m3。
4） 減壓蒸餾
有機溶液E升溫至81℃，壓力控制在-0.09MPa。減壓蒸餾結(jié)束，得到那西肽粗品147kg。
提取收率：91.7%。
實施例3
那西肽發(fā)酵液100m3，經(jīng)檢測，其效價為1547ug/ml。
1） 發(fā)酵液預(yù)處理
那西肽發(fā)酵液溫度控制在33℃，攪拌轉(zhuǎn)速控制在100r/min，發(fā)酵液中加入尿素20kg、triton X-100 50kg。繼續(xù)攪拌170min，然后靜置50min。發(fā)酵液過濾得到濕固體A 35.8噸。
2） 水洗
濕固體A中加入純化水322噸，攪拌轉(zhuǎn)速控制在50r/min，攪拌30min，過濾后得到濕固體B，再次加純化水322噸，攪拌30min，過濾得到濕固體C35.7噸。
3） 萃取
濕固體C中加入有機溶媒二氧六環(huán)179m3，攪拌轉(zhuǎn)速控制在30r/min，攪拌190min，過濾后得到混合溶液D186.4m3?；旌先芤篋中加入羧甲基纖維素鈉250kg，攪拌40min，靜置分層，得到有機溶液E178.6m3。
4） 減壓蒸餾
有機溶液E升溫至83℃，壓力控制在-0.08MPa。減壓蒸餾結(jié)束，得到那西肽粗品143kg。
提取收率：92.3%。
實施例4
那西肽發(fā)酵液100m3，經(jīng)檢測，其效價為1554ug/ml。
1） 發(fā)酵液預(yù)處理
那西肽發(fā)酵液溫度控制在34℃，攪拌轉(zhuǎn)速控制在105r/min，發(fā)酵液中加入尿素25kg、triton X-100 55kg。繼續(xù)攪拌180min，然后靜置55min。發(fā)酵液過濾得到濕固體A 36.1噸。
2） 水洗
濕固體A中加入純化水343噸，攪拌轉(zhuǎn)速控制在55r/min，攪拌35min，過濾后得到濕固體B，再次加純化水343噸，攪拌35min，過濾得到濕固體C 36噸。
3） 萃取
濕固體C中加入有機溶媒吡啶198m3，攪拌轉(zhuǎn)速控制在35r/min，攪拌195min，過濾后得到混合溶液D 204.6m3。混合溶液D中加入碳酸鈉270kg，攪拌45min，靜置分層，得到有機溶液E 197.4m3。
4） 減壓蒸餾
有機溶液E升溫至84℃，壓力控制在-0.06MPa。減壓蒸餾結(jié)束，得到那西肽粗品143kg。
提取收率：92%。
實施例5
那西肽發(fā)酵液100m3，經(jīng)檢測，其效價為1569ug/ml。
1） 發(fā)酵液預(yù)處理
那西肽發(fā)酵液溫度控制在35℃，攪拌轉(zhuǎn)速控制在110r/min，發(fā)酵液中加入尿素30kg、triton X-100 60kg。繼續(xù)攪拌190min，然后靜置60min。發(fā)酵液過濾得到濕固體A 36.4噸。
2） 水洗
濕固體A中加入純化水364噸，攪拌轉(zhuǎn)速控制在60r/min，攪拌40min，過濾后得到濕固體B，再次加純化水364噸，攪拌40min，過濾得到濕固體C 36.2噸。
3） 萃取
濕固體C中加入有機溶媒二氧六環(huán)217m3，攪拌轉(zhuǎn)速控制在40r/min，攪拌200min，過濾后得到混合溶液D 223m3?；旌先芤篋中加入羧甲基纖維素鈉290kg，攪拌50min，靜置分層，得到有機溶液E 222m3。
4） 減壓蒸餾
有機溶液E升溫至85℃，壓力控制在-0.05MPa。減壓蒸餾結(jié)束，得到那西肽粗品144kg。
提取收率：91.8%。
對比實施例
那西肽發(fā)酵液100m3，其效價為1528ug/ml。過濾得到濕菌渣，經(jīng)閃蒸干燥，得到干菌渣23.4噸，加入二甲基亞砜有機溶媒120m3，連續(xù)浸提2次，得到含有那西肽的有機溶液238.2m3，經(jīng)減壓濃縮得到那西肽粗品125.7kg，提取收率為82.3%。。