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基于微流控芯片的多器官腫瘤靶向藥物測(cè)試平臺(tái)及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):12584272閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種微流控芯片,其特征在于:該芯片主要由上層芯片、下層芯片和多孔濾膜組成,多孔濾膜上連上層芯片,多孔濾膜下連下層芯片,上層芯片結(jié)構(gòu)為大的細(xì)胞培養(yǎng)室,下層芯片結(jié)構(gòu)為獨(dú)立多通道,通道數(shù)量為1-9條。

2.按照權(quán)利要求1所述的一種微流控芯片,其特征在于:所述芯片材料為可透光透氣的PDMS聚合物,多孔濾膜材料為聚碳酸酯膜,孔徑為0.01um-4um。

3.一種基于權(quán)利要求1所述微流控芯片的多器官腫瘤靶向藥物測(cè)試平臺(tái),其特征在于該平臺(tái)按照如下方法構(gòu)建:

(1)芯片制作與修飾

設(shè)計(jì)制作上層芯片與下層芯片,多孔濾膜夾在中間進(jìn)行封接,用移液器將配制好的膠原工作液加入上層芯片細(xì)胞培養(yǎng)室及下層芯片各通道,對(duì)底面進(jìn)行修飾,促進(jìn)細(xì)胞更好地貼壁;

(2)上層芯片內(nèi)細(xì)胞的接種與培養(yǎng)

肝細(xì)胞消化后,調(diào)整至合適的細(xì)胞密度,加入到上層芯片中,在膠原的修飾作用下,細(xì)胞迅速貼壁并均勻鋪展于細(xì)胞培養(yǎng)室底面,當(dāng)在光學(xué)顯微鏡下觀察到細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)室中均勻分布時(shí),立即將芯片移入二氧化碳培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng);

(3)下層芯片內(nèi)細(xì)胞的接種與培養(yǎng)

待肝細(xì)胞經(jīng)過(guò)增殖鋪滿細(xì)胞培養(yǎng)室60%時(shí),不同的腫瘤細(xì)胞與正常組織細(xì)胞接種培養(yǎng)于下層芯片,12小時(shí)后,向上層芯片加入含藥液的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。

4.按照權(quán)利要求3所述多器官腫瘤靶向藥物測(cè)試平臺(tái)的應(yīng)用,其特征在于該平臺(tái)可用于芯片內(nèi)細(xì)胞活性考察,方法過(guò)程如下:

(1)使用CCK-8試劑盒進(jìn)行細(xì)胞活性的檢測(cè),CCK-8試劑:細(xì)胞培養(yǎng)基=1:9 混合均勻成檢測(cè)工作液,加入下層芯片通道,置培養(yǎng)箱中3小時(shí)后,轉(zhuǎn)入96孔板中,酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處吸光度;

(2)將下層芯片與封有上層芯片的多孔濾膜分離,可對(duì)下層芯片的細(xì)胞進(jìn)行顯微觀察,常規(guī)免疫熒光染色法表征。

5.按照權(quán)利要求3所述多器官腫瘤靶向藥物測(cè)試平臺(tái)的應(yīng)用,其特征在于該平臺(tái)可用于藥物代謝過(guò)程研究的方法該方法過(guò)程如下:收集上層培養(yǎng)液及下層培養(yǎng)液,可以分別進(jìn)行質(zhì)譜分析,可以檢測(cè)藥物原型及代謝物的含量。

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