本發(fā)明屬于納米膠束制備技術(shù)領(lǐng)域，涉及酶解α-乳白蛋白多肽、酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束及其制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

聚合物膠束是近年來興起的一種新型納米藥物載體，為兩親性嵌段共聚物溶于水后在疏水、氫鍵、靜電等分子間作用力的推動下自發(fā)形成具有疏水性內(nèi)核與親水性外殼的一種自組裝結(jié)構(gòu)。其具有以下優(yōu)點：①疏水性內(nèi)核可對水溶性差的藥物起到增溶作用，具有較高的載藥量，并對藥物實現(xiàn)可控釋放。②粒徑約為10-200nm，粒徑較小且均一，外殼具有親水性和柔韌性，可大大降低膠束被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(reticuloendothelial system，RES)識別和攝取的機(jī)會，體內(nèi)循環(huán)時間長，并可通過高通透性和滯留(enhanced permeability and retention，EPR)效應(yīng)實現(xiàn)被動靶向。③高度的熱力學(xué)穩(wěn)定性和動力學(xué)穩(wěn)定性使聚合物膠束不易被破壞，具有很高的耐稀釋能力。由于聚合物膠束的諸多優(yōu)越性，可作為一種良好的難溶性物質(zhì)輸送載體，因此相關(guān)研究得到國內(nèi)外積極重視，所開發(fā)的藥物主要有抗腫瘤藥物、抗炎藥物、抗真菌藥物、抗肝炎藥物以及其他疾病治療用難溶性藥物等。Jie Wang等人(Jie Wang,Guang Yang,Xing Guo,Zhaomin Tang,et al.Redox-responsive polyanhydride micelles for cancer therapy.Biomaterials 2014；35:3080-3090)，將單體和姜黃素溶解到THF中，并逐滴滴加到去離子水中，滴加過程中溶液需不斷攪拌。但是，該方法所制備的載體有一定的毒性，所制備的膠束粒徑較大，而且制備過程較為復(fù)雜。

因此，目前存在的問題是需要研究開發(fā)一種制備過程簡單，且所制備的膠體粒徑較小，毒性較低的載體。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種酶解α-乳白蛋白多肽、酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束及其制備和應(yīng)用。本發(fā)明方法制備工藝簡單，所制得的酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束粒徑較小，分散性好，生物相容性好，穩(wěn)定性高；可包埋疏水性物質(zhì)，封裝效率高。

為此，本發(fā)明第一方面提供了一種酶解α-乳白蛋白多肽，其為兩親性酶解α-乳白蛋白多肽，且分子量為9.9-11KDa。

根據(jù)本發(fā)明，所述酶解α-乳白蛋白多肽是由α-乳白蛋白溶液在酶存在條件下進(jìn)行酶解獲得的，所述酶為地衣芽孢桿菌蛋白酶，酶切位點為谷氨酸和天冬氨酸的羧基端。

在本發(fā)明的一些實施例中，所述α-乳白蛋白的純度≥60％(質(zhì)量)。優(yōu)選所述α-乳白蛋白的純度為60％-80％(質(zhì)量)。

本發(fā)明第二方面提供了一種酶解α-乳白蛋白多肽的制備方法，其包括酶解的步驟：向α-乳白蛋白液中加入酶液，混合均勻后，進(jìn)行酶解反應(yīng)，酶解反應(yīng)結(jié)束后離心處理，并將上清液冷凍干燥，制得酶解α-乳白蛋白多肽，其中，所述α-乳白蛋白液的濃度為20-40g/L。優(yōu)選所述α-乳白蛋白液的濃度為25-30g/L。所述酶液與α-乳白蛋白的質(zhì)量比為1:(20-30)。優(yōu)選所述酶液與α-乳白蛋白的質(zhì)量比為1:(20-25)。所述酶液的濃度為80-120mg/mL。優(yōu)選所述酶液的濃度為90-100mg/mL

在本發(fā)明的一些實施例中，所述酶解反應(yīng)的溫度為45-55℃。優(yōu)選所述酶解反應(yīng)的溫度為45-50℃。

在本發(fā)明的另一些實施例中，所述酶解反應(yīng)的時間為15-30min。優(yōu)選所述酶解反應(yīng)的時間為17-20min。

本發(fā)明第三方面提供了一種酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束，其由本發(fā)明第一方面所述的酶解α-乳白蛋白多肽或由本發(fā)明第二方面所述的方法制備的酶解α-乳白蛋白多肽溶于水制得，所述酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的臨界膠束濃度為0.75μg/mL。

根據(jù)本發(fā)明，所述酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的粒徑為15-25nm。優(yōu)選所述酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的粒徑為15-20nm。所述酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的最大粒徑與最小粒徑之差≤10nm。

本發(fā)明第四方面提供了一種負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束，其包括酶解α-乳白蛋白膠束及其所包埋的疏水性物質(zhì)顆粒，并且疏水性物質(zhì)與酶解α-乳白蛋白多肽的質(zhì)量比為(0.89-2.25):5。

本發(fā)明第五方面提供了一種負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的制備方法，其包括：

步驟A，將疏水性物質(zhì)溶液與上述酶解α-乳白蛋白多肽或上述方法制備的酶解α-乳白蛋白多肽溶液混合，攪拌均勻后，制成負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束基液；

步驟B，負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束基液反應(yīng)后，制得負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束；

其中，負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束基液中，疏水性物質(zhì)與酶解α-乳白蛋白多肽的質(zhì)量比為(1-3):5。

在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟A中，所述疏水性物質(zhì)溶液由疏水性物質(zhì)與有機(jī)溶劑配制而成，并且疏水性物質(zhì)溶液的濃度為1-3mg/mL。

在本發(fā)明的另一些實施例中，在步驟A中，所述酶解α-乳白蛋白多肽溶液由酶解α-乳白蛋白多肽與pH 7-7.5的Tirs-HCl緩沖液配制而成，并且酶解α-乳白蛋白多肽溶液的濃度為1-2mg/mL。

在本發(fā)明的又一些實施例中，在步驟A中，所述疏水性物質(zhì)溶液與酶解α-乳白蛋白多肽溶液的體積比為1:(5-6)。優(yōu)選所述疏水性物質(zhì)溶液與酶解α-乳白蛋白多肽溶液的體積比為1:5。

在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟B中，所述反應(yīng)的時間為30-60min。優(yōu)選所述反應(yīng)的時間為30-40min。

本發(fā)明第六方面提供了一種分離提純α-乳白蛋白的方法，其包括：

步驟S1，將乳清分離蛋白(WPI)溶于水中制得乳清分離蛋白液Ⅰ，將乳清分離蛋白液Ⅰ的pH調(diào)節(jié)至5.2，再離心處理除去β-乳球蛋白[等電點(pI)5.2]，取上清液作為乳清分離蛋白液Ⅱ；

步驟S2，將乳清分離蛋白液Ⅱ的pH調(diào)節(jié)至4.75，離心處理除去乳清蛋白聚集物[(whey protein aggregates)pI～4.8]，取上清液冷凍干燥，制得較純的α-乳白蛋白。

在步驟S1和S2中，優(yōu)選所述離心的溫度為4℃；優(yōu)選所述離心的速度為10000r/min，優(yōu)選所述離心的時間為2h。

本發(fā)明第七方面提供了一種酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的應(yīng)用，包括將酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束作為疏水性物質(zhì)的載體，提高其生物利用度。

附圖說明

下面將結(jié)合附圖來說明本發(fā)明。

圖1為實施例2中的酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的透射電鏡圖片。

圖2為實施例4中包埋了疏水性物質(zhì)的負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束與疏水性物質(zhì)溶液的對比圖；圖中附圖標(biāo)記的含義：1包埋了疏水性物質(zhì)β-胡蘿卜素的負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的水溶液；2疏水性物質(zhì)β-胡蘿卜素水溶液。

具體實施方式

為使本發(fā)明更加容易理解，下面將結(jié)合實施例和附圖來詳細(xì)說明本發(fā)明，這些實施例僅起說明性作用，并不局限于本發(fā)明的應(yīng)用范圍。

如前所述，現(xiàn)有的負(fù)載型膠束制備過程較為復(fù)雜，所制成的膠束粒徑較大，且載體有一定的毒性。

為克服上述問題，本發(fā)明的發(fā)明人對聚合物負(fù)載型膠束進(jìn)行了大量的研究，本發(fā)明的發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，以一定純度的α-乳白蛋白(α-lactalbumin)為原料，在特定的酶存在條件下進(jìn)行酶解可以制得較為理想的酶解α-乳白蛋白多肽；采用該酶解α-乳白蛋白多肽可以制得一種穩(wěn)定的小粒徑納米膠束；以該膠束為載體可以制成能夠包埋疏水性物質(zhì)的負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束，該負(fù)載型納米膠束粒徑小、穩(wěn)定性好且無毒。

因此，本發(fā)明涉及一種酶解α-乳白蛋白多肽。所述酶解乳白蛋白多肽實際上為兩親性的，其由α-乳白蛋白溶液在酶存在條件下進(jìn)行酶解制得，分子量為9.9-11KDa。基于此，本發(fā)明的酶解α-乳白蛋白多肽也可稱為酶解α-乳白蛋白多肽。

在本發(fā)明的一些實施例中，例如，所述酶可以為地衣芽孢桿菌蛋白酶，且酶切位點為谷氨酸和天冬氨酸的羧基端。

在本發(fā)明的另一些實施例中，所述α-乳白蛋白的純度≥60％(質(zhì)量)。優(yōu)選所述α-乳白蛋白的純度為60％-80％(質(zhì)量)。

本發(fā)明的發(fā)明人對α-乳白蛋白的純度與酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的制備過程進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)當(dāng)α-乳白蛋白的純度小于60％(質(zhì)量)時，酶解過程出現(xiàn)沉淀。

在本發(fā)明的一些實施方式中，例如，優(yōu)選根據(jù)乳清分離蛋白(whey protein isolation，WPI)中各成分的等電點不同，利用等電點沉淀法來分離提純α-乳白蛋白，具體方法包括：

步驟S1，將乳清分離蛋白溶于水中制得乳清分離蛋白液Ⅰ，使用HCl將乳清分離蛋白液Ⅰ的pH調(diào)節(jié)至5.2，再離心處理除去β-乳球蛋白[等電點(pI)5.2]，取上清液作為乳清分離蛋白液Ⅱ；

步驟S2，將乳清分離蛋白液Ⅱ的pH調(diào)節(jié)至4.75，離心處理除去乳清蛋白聚集物(pI～4.8)，取上清液冷凍干燥，制得α-乳白蛋白；

在步驟S1和S2中，優(yōu)選所述離心的溫度為4℃；優(yōu)選所述離心的速度為10000r/min；優(yōu)選所述離心的時間為2h。

在本發(fā)明的一個實施例中，利用等電點沉淀法來分離提純α-乳白蛋白。稱取5g WPI，緩慢加入50mL蒸餾水中(磁力攪拌器500rpm)。然后稀釋濃HCl用 于調(diào)節(jié)pH。先用pH計調(diào)節(jié)pH至5.2，然后離心處理(4℃、10000r/min、2h)除去β-乳球蛋白(β-lactolglobulin)(pI 5.2)，接著取上清液于燒杯中，再調(diào)節(jié)pH至4.75，同樣離心條件下除去乳清蛋白聚集物(pI～4.8)，然后取上清液進(jìn)行真空冷凍干燥，即得到提純后的α-乳白蛋白。

本發(fā)明所述用語乳清蛋白聚集物(whey protein aggregates)是指除α-乳白蛋白和β-乳球蛋白以外的其它小分子蛋白。

本發(fā)明所述用語“pI～4.8”是指等電點(pI)在4.8左右，包括4.8。

在本發(fā)明的一些實施方式中，本發(fā)明采用酶解α-乳白蛋白的方法制備酶解α-乳白蛋白多肽，其包括：

制備α-乳白蛋白液的步驟：將α-乳白蛋白溶于水中，混合均勻后制得濃度為20-40mg/mL，優(yōu)選濃度為25-30mg/mL，進(jìn)一步優(yōu)選濃度為30mg/mL的α-乳白蛋白液；

制備酶液的步驟：將粗酶液在4℃條件下，以5000r/min的轉(zhuǎn)速離心處理30min后，上清液用0.22μm的微濾膜過濾，制得濃度為80-120mg/mL，優(yōu)選濃度為90-100mg/mL，進(jìn)一步優(yōu)選濃度為100mg/mL的酶液；

酶解的步驟：按照酶液與α-乳白蛋白液的質(zhì)量比為1:(20-30)，優(yōu)選1:25的量向α-乳白蛋白液中加入酶液，漩渦混合均勻后，在45-55℃，優(yōu)選45-50℃，進(jìn)一步優(yōu)選50℃條件下進(jìn)行酶解反應(yīng)15-30min，優(yōu)選17-20min，進(jìn)一步優(yōu)選17min，酶解反應(yīng)結(jié)束后以10000r/min的轉(zhuǎn)速離心處理5min，并將上清液冷凍干燥，制得酶解α-乳白蛋白多肽。

本發(fā)明中，所述酶解過程中的緩沖液為0.075mol/L、pH 7.5Tris-HCl緩沖液。

本發(fā)明的發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，采用上述方法和反應(yīng)條件可以較好的控制酶切位點，例如，將酶切位點完全控制在谷氨酸和天冬氨酸的羧基端，從而制得分子量合適的量親性的酶解α-乳白蛋白多肽。該分子量合適的兩親性的酶解α-乳白蛋白多肽可以制得一種穩(wěn)定的小粒徑納米膠束；以該膠束為載體可以制成能夠包埋疏水性物質(zhì)的負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束，該負(fù)載型納米膠束粒徑小、穩(wěn)定性好且無毒。

在一個優(yōu)選的實施例中，例如，可以按照以下步驟制備酶解α-乳白蛋白多肽：

步驟(1)，稱取純化后的α-乳白蛋白6mg溶于200μL超純水中，制得濃度為30mg/mL的α-乳白蛋白液；

步驟(2)，將粗酶液離心處理(4℃，5000r/min，30min)，然后用移液槍吸取上清酶液于離心管中，再用注射器吸取酶液過0.22μm濾膜，即得到濃度為 100mg/mL的酶液；

步驟(3)，吸取2.4μL步驟(2)制得的酶液加入步驟于(1)制得的α-乳白蛋白液中，然后渦旋混合30s，接著50℃水浴中反應(yīng)17min，10000r/min離心處理5min，然后取上清液真空冷凍干燥，即制得酶解α-乳白蛋白多肽。

本發(fā)明還涉及一種酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束，其由上酶解α-乳白蛋白多肽或上述方法制備的酶解α-乳白蛋白多肽溶于水制得，所述酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的臨界膠束濃度為0.75μg/mL。

在本發(fā)明的一些實施例中，所述酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的粒徑為15-25nm；優(yōu)選所述酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的粒徑為15-20nm；進(jìn)一步優(yōu)選所述酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的粒徑為20nm；且所述酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的最大粒徑與最小粒徑之差≤10nm。

本發(fā)明中所用“水”一詞，在沒有特別指定的情況下，是指去離子水。

本發(fā)明還進(jìn)一步涉及一種酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的應(yīng)用，包括將酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束作為疏水性物質(zhì)的載體，提高其生物利用度。

本發(fā)明另外還涉及一種負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束，其包括酶解α-乳白蛋白膠束及其所包埋的疏水性物質(zhì)顆粒，所述酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束通過疏水作用將疏水性物質(zhì)包埋在其疏水內(nèi)核，并且疏水性物質(zhì)與酶解α-乳白蛋白多肽的質(zhì)量比為(0.89-2.25):5。

在本發(fā)明的一些實施例中，所述疏水性物質(zhì)為疏水性色素或疏水性藥物。所述疏水性色素包括β-胡蘿卜素、蝦青素和番茄紅素中的至少一種。所述疏水性藥物包括姜黃素、阿霉素和紫杉醇中的至少一種。

本發(fā)明另外還進(jìn)一步涉及一種負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的制備方法，其包括：

步驟A，將疏水性物質(zhì)溶液與上述酶解α-乳白蛋白多肽或上述方法制備的酶解α-乳白蛋白多肽溶液混合，攪拌均勻后，制成負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束基液；

步驟B，負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束基液在常溫下，反應(yīng)30-60min，優(yōu)選反應(yīng)30-40min，進(jìn)一步優(yōu)選反應(yīng)30min后，制得負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束；

其中，負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束基液中，疏水性物質(zhì)與酶解α-乳 白蛋白多肽的質(zhì)量比為(1-3):5。

在本發(fā)明的一個實施例中，所述疏水性物質(zhì)溶液由疏水性物質(zhì)與有機(jī)溶劑配制而成，并且疏水性物質(zhì)溶液的濃度為1-3mg/mL。

本發(fā)明中，所述有機(jī)溶劑為親水性醇，其選自甲醇、乙醇和丙醇中的至少一種。優(yōu)選有機(jī)溶劑為乙醇。

在本發(fā)明的另一個實施例中，所述酶解α-乳白蛋白多肽溶液由酶解α-乳白蛋白多肽納米材料與pH為7-7.5，優(yōu)選pH為7.5的Tirs-HCl緩沖液配制而成，并且酶解α-乳白蛋白多肽溶液的濃度為1-3mg/mL。優(yōu)選酶解α-乳白蛋白多肽溶液的濃度為1-2mg/mL。進(jìn)一步優(yōu)選酶解α-乳白蛋白多肽溶液的濃度為1mg/mL。

在本發(fā)明的一個具體實施例中，將酶解α-乳白蛋白多肽納米材料與pH 7.5 Tirs-HCl緩沖液混合，在20rmp下旋轉(zhuǎn)混合30min，制得酶解乳白蛋白多肽溶液。

本發(fā)明中，所述負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束基液，既可以按照疏水性物質(zhì)與酶解α-乳白蛋白多肽的質(zhì)量比為(1-3):5的量將疏水性物質(zhì)溶液與酶解α-乳白蛋白多肽溶液混合，攪拌均勻后制得；也可以采用濃度為1-3mg/mL的疏水性物質(zhì)溶液與濃度為1mg/mL的酶解α-乳白蛋白多肽溶液，并按照疏水性物質(zhì)溶液與酶解α-乳白蛋白多肽溶液的體積比為1:(5-6)，優(yōu)選1:5的量將疏水性物質(zhì)溶液與酶解α-乳白蛋白多肽溶液混合，攪拌均勻后制得。

在本發(fā)明的一個具體實施例中，負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束：將疏水性物質(zhì)溶于無水乙醇1mL中，多肽溶于5mL pH 7.5Tris-HCl緩沖液中，將疏水物質(zhì)和多肽溶液混合，攪拌均勻；其中疏水性物質(zhì)的用量為1-3mg，多肽的用量為5mg；室溫下反應(yīng)30-60min，即得分散性較好的包埋疏水性物質(zhì)的酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束。

本發(fā)明中的測定方法包括：

(1)酶解α-乳白蛋白多肽的分子量的測定

本發(fā)明中，采用質(zhì)譜(Q-TOF 2,Micromass)測量酶解α-乳白蛋白多肽的分子量，使用Masslynx software version 3.3處理數(shù)據(jù)。

(2)酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束粒徑的測定

本發(fā)明中，采用激光粒度儀(Zetasizer Nano ZS，英國馬爾文儀器有限公司)測定酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的粒徑。

(3)酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的形態(tài)觀察

本發(fā)明中，采用透射電子顯微鏡(JEM-1400，日本電子)觀察酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的形態(tài)。

(4)酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的臨界膠束濃度的檢測

本發(fā)明中，采用多功能酶標(biāo)儀(Infinite M200，Tecan)測定包埋在酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束中熒光染料的熒光強(qiáng)度，并由此判斷臨界膠束濃度。

本發(fā)明以一定純度的α-乳白蛋白為原料，在特定的酶存在條件下進(jìn)行酶解制得較為理想的酶解α-乳白蛋白多肽；采用該酶解α-乳白蛋白多肽制得一種穩(wěn)定的小粒徑納米膠束，原料成本低，易獲得，可以有效降低成本；制備工藝簡單；膠束粒徑較小，分散性好，生物相容性好，穩(wěn)定性高；該膠束可以包埋疏水性物質(zhì)，以該膠束為載體可以制成能夠包埋疏水性物質(zhì)的負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束，該負(fù)載型納米膠束粒徑小、穩(wěn)定性好、封裝效率高且無毒。

實施例

下列實施例中未提及的具體實驗方法，通常按照常規(guī)實驗方法進(jìn)行。

實施例1：制備酶解α-乳白蛋白多肽。

1)準(zhǔn)確稱取α-乳白蛋白6mg于1.5mL離心管中，加入200μL pH＝7.5，75mM Tris-HCl緩沖液，溶解后，加入1.2μL蛋白水解酶；

2)用2mL注射器吸取溶液，于0.2μm聚醚砜針頭式過濾器過濾溶液一次；

3)50℃水浴加熱17min，離心后取上清液；

4)將上清液凍干，得到酶解后的多肽。

經(jīng)檢測，酶解α-乳白蛋白多肽的分子量為9.9-11KDa。

實施例2：制備酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束。

1)準(zhǔn)確稱取多肽5mg溶于5mL pH＝7.5，75mM Tris-HCl緩沖液中；

2)旋轉(zhuǎn)混合30min，轉(zhuǎn)速為20rmp，即可得到空白多肽納米膠束。

用透射電鏡觀察這些空白多肽納米膠束，結(jié)果如圖1所示。從圖1可以看出本發(fā)明的酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束粒徑較小，20nm左右，分散性好。

實施例3：制備負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束。

1)取β-胡蘿卜素溶于無水乙醇中，使β-胡蘿卜素濃度為1.0mg/mL；

2)準(zhǔn)確稱取多肽5mg溶于5mL pH＝7.5，75mM Tris-HCl緩沖液中，迅速加入1mL的β-胡蘿卜素/無水乙醇溶液，旋轉(zhuǎn)混合30min，用0.22μm的聚醚砜過濾器過濾，除去未包埋的β-胡蘿卜素，即可得到封裝β-胡蘿卜素的載藥膠束；多肽納米膠束對β-胡蘿卜素的包埋率為88.6％，載藥量為15.05％(質(zhì)量)。

實施例4：制備負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束。

1)取β-胡蘿卜素溶于無水乙醇中，使β-胡蘿卜素濃度為2.0mg/mL；

2)準(zhǔn)確稱取多肽5mg溶于5mL pH＝7.5，75mM Tris-HCl緩沖液中，迅速加入1mL的β-胡蘿卜素/無水乙醇溶液，旋轉(zhuǎn)混合30min，用0.22μm的聚醚砜過濾器過濾，除去未包埋的β-胡蘿卜素，即可得到封裝β-胡蘿卜素的載藥膠束；多肽納米膠束對β-胡蘿卜素的包埋率為78.7％，載藥量為23.94％(質(zhì)量)。

將包埋了疏水性物質(zhì)的負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束與疏水性物質(zhì)溶液進(jìn)行對比，結(jié)果如圖2所示。

從圖2可以看出，β-胡蘿卜素經(jīng)由酶解乳白蛋白多肽納米膠束包埋后形成包埋了β-胡蘿卜素的負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束，可以較好的溶于水溶劑體系；而經(jīng)酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束包埋的β-胡蘿卜素水溶劑體系中出現(xiàn)不溶性顆粒，不能很好地形成分散體系；由此證明本發(fā)明制得的酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束可以提高β-胡蘿卜素的溶解度。

實施例5：制備負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束。

1)取姜黃素溶于無水乙醇中，使姜黃素濃度為2.0mg/mL；

2)準(zhǔn)確稱取多肽5mg溶于5mL pH＝7.5，75mM Tris-HCl緩沖液中，迅速加入1mL姜黃素/無水乙醇溶液，旋轉(zhuǎn)混合30min，用0.22μm的聚醚砜過濾器過濾，除去未包埋的姜黃素，即可得到封裝姜黃素的載藥膠束；多肽納米膠束對姜黃素的包埋率為92.73％，載藥量為27.06％(質(zhì)量)。

實施例6：制備負(fù)載型酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束。

1)取姜黃素溶于無水乙醇中，使姜黃素濃度為3.0mg/mL；

2)準(zhǔn)確稱取多肽5mg溶于5mL pH＝7.5，75mM Tris-HCl緩沖液中，迅速加入1mL姜黃素/無水乙醇溶液，旋轉(zhuǎn)混合30min，用0.22μm的聚醚砜過濾器過濾，除去未包埋的姜黃素，即可得到封裝姜黃素的載藥膠束；多肽納米膠束對姜黃素的包埋率為75.0％，載藥量為31.03％(質(zhì)量)。

上述實施例2-6中的酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的分析結(jié)果表明，本發(fā)明所制備的酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束的平均粒徑為20nm左右，分散性好。另外，疏水性物質(zhì)經(jīng)由酶解α-乳白蛋白多肽納米膠束包埋后可以大幅度提高溶解度。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。