異噁唑烷衍生物本申請(qǐng)是母案為中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)201080040085.6的分案申請(qǐng)。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及新的糖皮質(zhì)類固醇系列抗炎和抗過(guò)敏化合物，制備所述化合物方法，包含它們的藥物組合物，其組合和治療用途。更特別，本發(fā)明涉及是異噁唑烷衍生物的糖皮質(zhì)類固醇類。發(fā)明背景皮質(zhì)類固醇是有效的抗炎劑，其能夠減少炎性細(xì)胞數(shù)量、活性和運(yùn)動(dòng)的。它們一般用來(lái)治療寬范圍的慢性和急性炎性病癥包括哮喘，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，變應(yīng)性鼻炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，炎性腸病和自身免疫性疾病。皮質(zhì)類固醇通過(guò)糖皮質(zhì)激素受體(GR)介導(dǎo)其效果。皮質(zhì)類固醇結(jié)合至GR誘導(dǎo)其核轉(zhuǎn)位，其又經(jīng)由DNA-結(jié)合依賴性(例如反式激活)和DNA-結(jié)合獨(dú)立性(例如反式表達(dá))機(jī)理來(lái)影響許多下游路線。用于治療肺部的慢性炎性病癥比如哮喘和COPD的皮質(zhì)類固醇目前通過(guò)吸入給予。運(yùn)用吸入式皮質(zhì)類固醇(ICS)的優(yōu)勢(shì)之一是能夠在作用位點(diǎn)直接遞送藥物，限制全身性負(fù)面效果，從而引起更快速的臨床應(yīng)答和較高的治療比率。盡管ICS治療能夠提供重要益處，但是尤其在哮喘方面重要的是最小化ICS全身性暴露，所述ICS全身性暴露導(dǎo)致可以與慢性給藥有關(guān)的不希望副作用出現(xiàn)和惡化。此外，目前在臨床實(shí)踐上可獲得的ICS的受限作用持續(xù)時(shí)間導(dǎo)致亞最優(yōu)的疾病管理。既然吸入器技術(shù)是靶向肺部的關(guān)鍵點(diǎn)，調(diào)節(jié)皮質(zhì)類固醇分子骨架上的取代基對(duì)于優(yōu)化藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)特性是重要的，其降低口部生物利用度，將藥理學(xué)活性僅限制在肺中(前藥和軟藥(softdrugs))并且增加全身性清除。另外，肺中的長(zhǎng)期持續(xù)ICS活性是高度希望的，因?yàn)槊咳战o藥一次ICS會(huì)允許降低給藥頻率，從而基本上改善患者順從性，作為結(jié)果改善疾病管理和控制?？傊?，醫(yī)學(xué)上迫切需要研發(fā)具有改善的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)特征的ICS。糖皮質(zhì)激素類異噁唑烷衍生物描述于WO2006/005611，GB1578446和"Synthesisandtopicalanti-inflammatoryactivityofsomesteroidal[16α,17α-d]isoxazolidines"(J.Med.Chem.，25，1492-1495，1982)。本發(fā)明的異噁唑烷糖皮質(zhì)激素類這樣進(jìn)行體外效能和效力表征：a)結(jié)合至GR，b)誘導(dǎo)GR核轉(zhuǎn)位，和c)在巨噬細(xì)胞中抑制炎性反應(yīng)。此外，優(yōu)化藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)特性的目的是改善抗炎效能、效力和肺中作用的持續(xù)時(shí)間以及降低全身性副作用。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型肺中局部給予的情況下，本發(fā)明的異噁唑烷糖皮質(zhì)激素類的特征是良好的抗炎效能和效力，其與作用的長(zhǎng)期持續(xù)時(shí)間和受限全身性暴露有關(guān)。發(fā)明概要本發(fā)明涉及通式(I)化合物，制備所述化合物的方法，包含它們的組合物及其治療用途(I)其中R1是(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n和n’各自獨(dú)立地是0、1或2；Z是單鍵或選自S，O，CO和NR3，其中R3選自H，直鏈或支化的(C1-C6)烷基，(C1-C6)鹵代烷基，(C3-C8)環(huán)烷基，芳基，芳基(C1-C6)烷基和雜芳基，其任選由CN取代；R4選自：-H，鹵素，OH，SH，CN，NH2；-芳基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基磺?；?，(C1-C6)烷基羰基，(C1-C6)烷基羧基，O(C1-C6)烷基羧基，(C1-C6)烷基酰胺和(C1-C6)烷氧基，其任選由氧代基團(tuán)取代；-(C1-C6)烷基，其可以任選由選自下述的一個(gè)或多個(gè)取代基取代：鹵素原子，CN，OH，NH2，NO2，CF3和SH；-(C2-C6)炔基；-一、二或三環(huán)飽和的或部分飽和的或不飽和的環(huán)，比如(C3-C8)環(huán)烷基，芳基，(C5-C10)雜環(huán)烷基或雜芳基，任選由一個(gè)或多個(gè)鹵素原子或氧代基團(tuán)取代；R2選自-H；-直鏈或支化的(C1-C6)烷基；-(CH2)mR5，其中R5是雜芳基，其任選用選自下述的取代基取代：氧代，OH，鹵素，CN，NH2，NO2，芳基，(C1-C6)烷基磺?；?，(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷硫基，(C1-C6)烷基羧基，(C1-C6)烷基酰胺，芳基(C1-C6)烷氧基和(C1-C6)烷基，其各自任選由一個(gè)或多個(gè)鹵素原子或COOH取代；-(CH2)pNR6R7；-(CH2)pNR6COR7；-(CH2)pNR6SO2R7；-(CH2)mCONR6R7；-(CH2)mSO2NR6R7；-(CH2)mCOR7；-(CH2)pOR7；-(CH2)mSOqR7；其中R6和R7獨(dú)立地是H或選自直鏈或支化的(C1-C6)烷基，(C3-C8)環(huán)烷基，芳基(C1-C6)烷基和飽和的、部分飽和的或不飽和的任選稠合的環(huán)比如芳基，(C5-C10)雜環(huán)烷基或雜芳基，該基團(tuán)可以任選用一個(gè)或多個(gè)選自下述的取代基取代：鹵素，CN，氧代，NH2，NO2和(C1-C6)烷基；-(CH2)pR8，其中R8選自鹵素，氧代，CN，OH，NH2，NO2；(C3-C8)環(huán)烷基，芳基和飽和的、部分飽和的或不飽和的任選稠合的環(huán)比如(C5-C10)雜環(huán)烷基，其任選由一個(gè)或多個(gè)選自下述的取代基取代：鹵素，CO，CN，(C1-C6)烷基，(C1-C6)鹵代烷基，(C1-C6)羧基烷基，(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)鹵代烷氧基和(C1-C6)烷基磺?；?；其中m和p各自獨(dú)立地是0或1至6的整數(shù)而q是0、1或2和X和Y獨(dú)立地選自H和鹵素原子及其藥學(xué)上可接受的鹽，條件是在R2是(C1-C6)烷基的情況下，X和Y不同時(shí)是H。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)明顯的是，通式(I)化合物至少在位置4a，4b，5，6a，6b，9a，10a，10b，12含有不對(duì)稱中心，因此可以作為許多旋光立體異構(gòu)體及其混合物存在。因此本發(fā)明也涉及全部這些形式。優(yōu)選的化合物是通式(I)的那些，其中手性碳原子的構(gòu)型是固定的，并且特別是其中4a是(R)，4b是(R)，5是(S)，6a是(S)，6b是(R)，9a是(S)，10a是(S)，10b是(S)和12是(S)的那些，其由下式(I’)代表其中R1，R2，X和Y的值如前文所定義。通式(I)化合物能夠形成酸加成鹽，特別是藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。從而，式(I)化合物的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽也涵蓋式(I’)的那些，包括無(wú)機(jī)酸，例如氫鹵酸比如氫氟酸，鹽酸，氫溴酸或氫碘酸；硝酸，硫酸，磷酸的那些；和有機(jī)酸，例如脂族單羧酸比如甲酸，乙酸，三氟乙酸，和丙酸；脂族羥基酸比如乳酸，檸檬酸，酒石酸或蘋果酸；二羧酸比如馬來(lái)酸，富馬酸，草酸或丁二酸；芳族羧酸比如苯甲酸；芳族羥基酸和磺酸的那些。這些鹽可以通過(guò)已知成鹽程序制備自式(I)化合物。本發(fā)明目的式(I)化合物可以按照根據(jù)常規(guī)方法和技術(shù)進(jìn)行的各種合成步驟來(lái)制備。本發(fā)明也涉及制備通式(I’)化合物的方法，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝1和R4如前文所定義，其包括：-將式(VI)化合物與甲磺酰氯或?qū)?甲苯磺酰氯反應(yīng)，獲得通式(XI)化合物其中離去基團(tuán)(LG)可以被親核物質(zhì)替代。本發(fā)明也涉及制備通式(I’)化合物的方法，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝0，Z和R4如前文所定義，其包括：-在氧化條件下反應(yīng)式(VI)化合物，獲得通式(XII)中間體-將式(XII)化合物用一當(dāng)量或多當(dāng)量酸活化劑處理，然后用親核物質(zhì)處理。本發(fā)明也涉及制備通式(I’)化合物的方法，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝0，Z＝S和R4如前文所定義，其包括：-在氧化條件下反應(yīng)式(VI)化合物，獲得通式(XII)中間體-將其轉(zhuǎn)化為通式(XIII)化合物-烷基化式(XIII)化合物。本發(fā)明也涉及制備通式(VI)化合物的方法，其包括：-將通式(IV)化合物與N-四氫吡喃基羥胺(HO-NH-THP)反應(yīng)，以制備式(V)化合物-任選進(jìn)一步官能化式(V)化合物和-脫保護(hù)。本發(fā)明也涉及制備通式(VI)化合物的方法，其包括：-將式(VII)化合物與式(X)化合物反應(yīng)本發(fā)明也涉及制備通式(VI)化合物的方法，其包括：-將式(VII)化合物與N-四氫吡喃基羥胺(HO-NH-THP)反應(yīng)，獲得式(VIII)化合物-保護(hù)式(VIII)化合物，獲得式(IX)化合物-任選進(jìn)一步官能化式(IX)化合物和-脫保護(hù)。本發(fā)明也涉及制備通式(I’)化合物的方法，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝1，Z＝O和R4＝Ac，其包括將通式(IV)中間體與式(X)羥胺反應(yīng)。本發(fā)明也涉及制備通式(I’)化合物的方法，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝1，Z＝O，R4＝H和X＝Cl，該方法包括：-將其中n＝1，Z＝O，R4＝Ac和X＝H的式(I’)化合物與甲磺酰氯反應(yīng)，獲得式(XIV)化合物-將化合物(XIV)與氯化劑反應(yīng)和-進(jìn)行水解。從全部上述內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚地是通過(guò)選擇具有合適立體化學(xué)構(gòu)型的原料，而能獲得的式(I)的可能立體異構(gòu)體中的任意種。本發(fā)明也提供藥物組合物，其包含通式(I)或(I’)化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。本發(fā)明化合物可以作為唯一活性劑給予或與其它藥物活性成分組合給予，所述其它藥物活性成分包括目前用于治療呼吸障礙的那些，例如β2-激動(dòng)劑，抗毒蕈堿藥，皮質(zhì)類固醇，絲裂原活化的蛋白質(zhì)激酶類(P38MAP激酶)抑制劑，核因素κ-B激酶亞單位β(IKK2)抑制劑，人類中性白細(xì)胞彈性酶(HNE)抑制劑，磷酸二酯酶4(PDE4)抑制劑，白細(xì)胞三烯調(diào)節(jié)劑，非甾族抗炎劑(NSAIDs)和粘液調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明也提供通式(I)或(I’)化合物與β2-激動(dòng)劑的組合，所述β2-激動(dòng)劑選自卡莫特羅，GSK-642444，茚達(dá)特羅，米維特羅(milveterol)，阿福特羅，福莫特羅，沙丁胺醇，左旋沙丁胺醇，特布他林，AZD-3199，BI-1744-CL，LAS-100977，班布特羅，異丙腎上腺素，丙卡特羅，克侖特羅，瑞普特羅，非諾特羅和ASF-1020及其鹽。本發(fā)明也提供通式(I)或(I’)化合物與抗毒蕈堿藥的組合，所述抗毒蕈堿藥選自阿地銨(aclidinium)，噻托溴銨，異丙托銨，曲司銨，格隆銨和氧托品鹽。本發(fā)明也提供通式(I)或(I’)化合物與PDE4抑制劑的組合，所述抑制劑選自AN-2728，AN-2898，CBS-3595，apremilast，ELB-353，KF-66490，K-34，LAS-37779，IBFB-211913，AWD-12-281，西潘茶堿，cilomilast，羅氟司特，BAY19-8004和SCH-351591，AN-6415，indus-82010，TPI-PD3，ELB-353，CC-11050，GSK-256066，奧米司特，OX-914，替托司特，MEM-1414和RPL-554。本發(fā)明也提供通式(I)或(I’)化合物與P38MAP激酶抑制劑的組合，所述抑制劑選自塞馬莫德，talmapimod，吡非尼酮，PH-797804，GSK-725，minokine和losmapimod及其鹽。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供通式(I)或(I’)化合物與IKK2抑制劑的組合。本發(fā)明也提供式(I)化合物與HNE抑制劑的組合，所述抑制劑選自AAT，ADC-7828，Aeriva，TAPI，AE-3763，KRP-109，AX-9657，POL-6014，AER-002，AGTC-0106，respriva，AZD-9668，zemaira，AATIV，PGX-100，elafin，SPHD-400，α1-蛋白酶抑制劑C和α1-蛋白酶抑制劑吸入的。本發(fā)明也提供式(I)化合物與白細(xì)胞三烯調(diào)節(jié)劑的組合，所述調(diào)節(jié)劑選自孟魯司特，扎魯司特和普侖司特。本發(fā)明也提供式(I)化合物與NSAID的組合，所述NSAID選自布洛芬和酮洛芬。本發(fā)明也提供式(I)化合物與粘液調(diào)節(jié)劑的組合，所述調(diào)節(jié)劑選自INS-37217，地夸磷索，西貝那德，CS-003，他奈坦，DNK-333，MSI-1956和吉非替尼。本發(fā)明也提供通式(I)或(I’)化合物，用作藥物。本發(fā)明也涉及通式(I)或(I’)化合物在體外和/或在體內(nèi)減少炎性細(xì)胞數(shù)量、活性和運(yùn)動(dòng)的用途。本發(fā)明也涉及通式(I)或(I’)化合物在預(yù)防或治療其中牽涉炎性細(xì)胞數(shù)量、活性和運(yùn)動(dòng)減少的任何疾病中的用途。在本發(fā)明其它方面，提供通式(I)或(I’)化合物用于預(yù)防和/或治療其中牽涉炎性細(xì)胞數(shù)量、活性和運(yùn)動(dòng)減少的任何疾病的用途。尤其是，通式(I)或(I’)化合物可以單獨(dú)或與一種或多種活性成分相組合給予，用于預(yù)防和/或治療特征是氣道阻塞的呼吸道疾病比如哮喘和COPD。在又一方面，本發(fā)明提供通式(I)或(I’)化合物用于制備預(yù)防和/或治療其中牽涉炎性細(xì)胞數(shù)量、活性和運(yùn)動(dòng)減少的任何疾病的藥物的用途。此外，本發(fā)明提供預(yù)防和/或治療其中牽涉炎性細(xì)胞數(shù)量、活性和運(yùn)動(dòng)減少的任何疾病的方法，所述方法包括向需要所述治療的患者給藥治療有效量的通式(I)或(I’)化合物。本發(fā)明也提供適于通過(guò)吸入、注射、經(jīng)口或鼻內(nèi)給藥的通式(I)或(I’)化合物的藥物制劑?？晌胫苿┌晌敕勰?，含推進(jìn)劑的定量式氣霧劑或不含推進(jìn)劑的可吸入配制劑。本發(fā)明也涉及包含通式(I)或(I’)化合物的裝置，其可以是單劑量或多劑量無(wú)水粉末吸入器，計(jì)量的劑量吸入器或霧化器，尤其是軟霧(softmist)型霧化器。本發(fā)明也涉及試劑盒，其包括通式(I)或(I’)化合物單獨(dú)或與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑組合或與其混合的藥物組合物，以及裝置，其可以是單劑量或多劑量無(wú)水粉末吸入器，計(jì)量的劑量吸入器或霧化器。定義術(shù)語(yǔ)"鹵素"或"鹵素原子"如本文所用包括氟，氯，溴和碘。如本文所用，措辭"(C1-C6)烷基"是指直鏈和支鏈烷基，其中組成碳原子數(shù)為1至6。烷基的實(shí)例是甲基，乙基，正丙基，異丙基，叔丁基，戊基和己基。措辭"(C2-C6)炔基"以類似方式解釋。炔基的實(shí)例包括乙炔基，丙炔基，丁炔基，戊炔基和己炔基。術(shù)語(yǔ)"(C1-C6)烷氧基"是指烷基-氧基(例如烷氧基)基團(tuán)。從而，所述基團(tuán)的實(shí)例可以包含甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，戊氧基，己氧基等。術(shù)語(yǔ)"(C1-C6)鹵代烷基"和"(C1-C6)鹵代烷氧基"，是指上述"(C1-C6)烷基"和"(C1-C6)烷氧基"基團(tuán)，其中一個(gè)或多個(gè)氫原子用一個(gè)或多個(gè)鹵素原子替換，其能夠是相同的或相互不同的。類似地，術(shù)語(yǔ)"(C1-C6)烷基羰基"，"O(C1-C6)烷基羰基"，"(C1-C6)烷基羧基"和"(C1-C6)烷基酰胺"分別指烷基-CO，O-烷基-CO，烷基-CO2-和烷基-NH2，烷基-NH-烷基或烷基-N-(烷基)2基團(tuán)。類似地，術(shù)語(yǔ)"(C1-C6)烷基磺?；?是指烷基-SO2-基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)"(C3-C8)環(huán)烷基"是指具有3至8個(gè)碳原子的環(huán)狀非芳烴基團(tuán)。實(shí)例包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基等。術(shù)語(yǔ)"(C5-C10)雜環(huán)烷基"是指環(huán)狀非芳烴基團(tuán)，其中至少一個(gè)環(huán)原子是雜原子(例如N，S或O)。實(shí)例包括二氫吡啶和二氫苯并二氧雜環(huán)己二烯殘基。術(shù)語(yǔ)"芳基"是指一、二或三環(huán)環(huán)系，其具有5至20個(gè)，優(yōu)選5至15環(huán)原子，且其中至少一個(gè)環(huán)是芳族的。術(shù)語(yǔ)"芳基(C1-C6)烷基"和"芳基(C1-C6)烷氧基"是指(C1-C6)烷基，其分別被芳基，烷氧基，雜芳基或環(huán)烷基環(huán)進(jìn)一步取代。適宜的芳基(C1-C6)烷基的實(shí)例包括芐基，聯(lián)苯基甲基和噻吩基甲基。如本文所用，術(shù)語(yǔ)"雜芳基"是指一、二或三環(huán)環(huán)系，其具有5至20個(gè)，優(yōu)選5至15環(huán)原子，其中至少一個(gè)環(huán)是芳族的并且其中至少一個(gè)環(huán)原子是雜原子(例如N，S或O)。適宜的單環(huán)系統(tǒng)的實(shí)例包括噻吩，環(huán)戊二烯，苯，吡咯，吡唑，咪唑，異噁唑，噁唑，異噻唑，噻唑，吡啶，咪唑烷，哌啶和呋喃殘基比如四氫呋喃。適宜的雙環(huán)系統(tǒng)的實(shí)例包括萘，聯(lián)苯，嘌呤，蝶啶，苯并三唑，喹啉，異喹啉，吲哚，異吲哚，苯并呋喃，苯并二噁烷和苯并噻吩殘基。適宜的三環(huán)系統(tǒng)的實(shí)例包括芴殘基。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及作為糖皮質(zhì)類固醇類起作用的化合物，其是有效的抗炎劑。所述化合物減少炎性細(xì)胞的數(shù)量、活性和向支氣管粘膜下層的運(yùn)動(dòng)，導(dǎo)致降低的導(dǎo)氣管應(yīng)答性。尤其是，本發(fā)明涉及如前文所定義的通式(I)化合物優(yōu)選的化合物是通式(I)那些，其中手性碳原子的構(gòu)型是固定的并且特別是其中4a是(R)，4b是(R)，5是(S)，6a是(S)，6b是(R)，9a是(S)，10a是(S)，10b是(S)和12是(S)，其由下式(I’)代表其中R1，R2，X和Y的值如前文所定義，呈游離或鹽形式。通式(I’)化合物的第一優(yōu)選組是那些，其中R1是(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n是0或1；Z是單鍵或選自S，O和NR3，其中R3是H或(C1-C6)烷基；n’是0、1或2；R4選自H，鹵素，CN，OH；(C1-C6)烷基，任選由一個(gè)或多個(gè)選自下述的取代基取代：鹵素原子，CN，OH，NH2，NO2，CF3和SH；芳基(C1-C6)烷基，(C1-C6)炔基，(C1-C6)烷基磺酰基，(C1-C6)烷基羰基，O(C1-C6)烷基羰基，(C1-C6)烷基酰胺，(C1-C6)烷基羧基，(C5-C10)雜環(huán)烷基和雜芳基，其任選由氧代基團(tuán)取代；R2，X和Y具有上述報(bào)告的含義。在該類別中還更優(yōu)選的是通式(I’)化合物，其中R4選自甲基，乙基，苯并噻唑，苯并噁唑，四氫呋喃，四氫吡喃，甲磺?；?，甲基羰基，氯，氟，三氟甲基，甲基羧基，乙基羧基，甲氧基，乙氧基，三氟甲基和丁炔基。在該類別中甚至更優(yōu)選的是通式(I’)化合物，其中R3是H或甲基。在該類別中甚至更優(yōu)選的是通式(I’)化合物，其中R2是直鏈或支化的(C1-C6)烷基。通式(I’)化合物的第二優(yōu)選組是那些，其中R1，X和Y如前文所定義；R2是H或選自(CH2)mR5，其中m是1或2，R5是雜芳基，其任選由選自下述的基團(tuán)取代：鹵素，CN，OH，CF3，(C1-C6)烷基，(C1-C6)鹵代烷基，(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷基磺酰基和芳基；(CH2)mCONR6R7，其中m是0，R6是(C1-C6)烷基和R7是芳基；(CH2)mCOR7，其中m是1，R7是芳基，雜芳基或(C5-C10)雜環(huán)烷基；(CH2)pOR7，其中p是2而R7是芳基或芳基(C1-C6)烷基；(CH2)mSOqR7，其中m是0或2，q是0或2而R7是(C1-C6)烷基或芳基；以及(CH2)pR8，其中p是1，2或3而R8選自芳基和(C5-C10)雜環(huán)烷基，任選由一個(gè)或多個(gè)選自下述的取代基取代：鹵素，氧代，CN，OH，CF3，(C1-C6)烷基，(C1-C6)鹵代烷基，(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)鹵代烷氧基，(C1-C6)烷基羧基和(C1-C6)烷基磺酰基。在該類別中還更優(yōu)選的是通式(I’)化合物，其中R2選自苯基，噻吩基，吡啶基，咪唑基，噻唑基，芐氧基乙基，苯硫基，苯基丙基，苯氧基乙基，異噁唑基，苯甲?；?，呋喃羰基，甲磺?；溥拎ぜ谆图谆交０?，環(huán)戊烯銅，苯并呋喃，呋喃，二氫苯并二氧雜環(huán)己二烯殘基。通式(I’)化合物的第三優(yōu)選組是那些，其中R1和R2如前文所定義而X和Y均是H或氟原子或X是氯而Y是H。人們發(fā)現(xiàn)通式(I)和(I’)化合物中絕大多數(shù)在10-8至10-10M于全部不含細(xì)胞和基于細(xì)胞的所用測(cè)定中顯示體外活性，并且其中某些在嚙齒動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ头沃芯哂畜w內(nèi)抗炎作用的長(zhǎng)期持續(xù)時(shí)間。優(yōu)選的本發(fā)明化合物的實(shí)例是報(bào)告如下：(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))通式(I)和(I’)化合物可以根據(jù)公開于本領(lǐng)域的方法常規(guī)地制備。如下述方案所示，能夠用于制備式(I’)化合物的某些方法還可以適用于式(I)化合物。制備本發(fā)明化合物的方法根據(jù)本發(fā)明具體實(shí)施方式，取決于取代基R1、R2、X和Y，本發(fā)明化合物可以根據(jù)描述于方案中的不同路線制備。路線A1–將通式(IV)化合物與N-四氫吡喃基羥胺(HO-NH-THP)反應(yīng)，式(V)化合物的制備能夠在質(zhì)子溶劑比如EtOH中在80至100℃溫度方便地進(jìn)行。THP保護(hù)基團(tuán)在反應(yīng)條件下直接裂解。用本領(lǐng)域技術(shù)人員容易獲得的方法，這些化合物可以用烷基鹵，酰鹵，異氰酸酯，氨基甲酰氯或磺酰氯進(jìn)一步官能化(J.Med.Chem.，379-388，1995；J.C.S.Chem.Comm.，256-257，1985)，提供通式(VI)化合物。這些反應(yīng)通常在溶劑比如二氯甲烷(DCM)或四氫呋喃(THF)中進(jìn)行并且在室溫(RT)至回流的溫度下進(jìn)行?？赡苄枰獕A比如三乙胺或二異丙基乙胺來(lái)促進(jìn)反應(yīng)。與芳基鹵的反應(yīng)可以按已知的銅催化異噁唑烷N-芳基化進(jìn)行(Bioorg.Med.Chem.Lett.，2834，2005)。乙?；タ梢杂么济撘阴；臉?biāo)準(zhǔn)條件容易地水解，例如在適宜溶劑(例如甲醇或乙醇)中將化合物用堿比如氫氧化鈉或氫氧化鉀或碳酸鉀處理。該反應(yīng)通常在室溫1至5小時(shí)期間內(nèi)進(jìn)行，獲得通式(VI)化合物。通式(IV)化合物可以根據(jù)報(bào)告于文獻(xiàn)中的標(biāo)準(zhǔn)程序方便地制備。例如它們可以通過(guò)將通式(III)化合物用堿比如乙酸鉀處理來(lái)制備。該反應(yīng)通常在適宜極性溶劑比如二甲基甲酰胺(DMF)中進(jìn)行并且一般在80至110℃的溫度進(jìn)行0.5至4小時(shí)。式(III)化合物可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法，起始自通式(II)化合物容易地制備自已知化合物(J.Med.Chem.1982，25，1492-1495)。路線A2-另選地，通式(VI)化合物可以這樣制備：首先在低聚甲醛存在下將式(VII)化合物與式(X)化合物反應(yīng)，使用異噁唑烷形成的已知程序硝酮環(huán)加成(J.Med.Chem.，25，1492-1495，1982)。該反應(yīng)在供質(zhì)子溶劑比如乙醇于80至100℃的溫度方便地進(jìn)行。式(X)羥胺是可商購(gòu)的或可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的程序容易地制備，例如將肟用還原劑比如硼烷吡啶配合物還原(J.Med.Chem.，40，1955-1968，1997)或?qū)-四氫吡喃基羥胺與適宜的烷基化劑比如烷基鹵反應(yīng)(Chem.Pharm.Bull.，46，966-972，1998)。式(VII)化合物可以通過(guò)水解式(IV)化合物制備。該反應(yīng)優(yōu)選通過(guò)將化合物(IV)用酶比如來(lái)自南極念珠菌(CandidaAntarctica)的固定化脂酶(SigmaAldrich)處理來(lái)進(jìn)行(Tetrahedron，50，13165-13172，1994)。路線A3-通式(VIII)化合物可以起始自將式(VII)化合物與HO-NH-THP反應(yīng)來(lái)制備。該反應(yīng)可以在二噁烷或在質(zhì)子溶劑比如EtOH中于80至100℃的溫度方便地進(jìn)行的。THP保護(hù)基團(tuán)在反應(yīng)條件下直接裂解。獲得的(VIII)能夠通過(guò)在適宜溶劑比如DCM或THF中于0℃至室溫的溫度用二氫吡喃處理方便且選擇性地保護(hù)，獲得式(IX)化合物。反應(yīng)在0.5至3小時(shí)的時(shí)間內(nèi)完成。式(IX)化合物可以用烷基鹵，酰鹵，異氰酸酯，氨基甲酰氯或磺酰氯進(jìn)一步官能化，如路線A1所述。THP保護(hù)基團(tuán)能夠通過(guò)在適宜溶劑比如THF或二噁烷中將受保護(hù)的中間體用HCl處理容易地除去。該反應(yīng)通常在室溫進(jìn)行1至15小時(shí)，得到通式(VI)化合物。路線A–將通式(VI)化合物的6b位的2-羥基乙?；糠值牧u基轉(zhuǎn)化為通式(XI)化合物的離去基團(tuán)(LG)能夠這樣進(jìn)行：在適宜溶劑比如吡啶中，將式(VI)化合物用甲磺酰氯或?qū)?甲苯磺酰氯處理(March的"AdvancedOrganicChemistry"，Wiley-Interscience)。該反應(yīng)通常在室溫進(jìn)行1至5小時(shí)。通式(XI)化合物的LG可以用親核物質(zhì)比如鹵陰離子，醇，硫醇，硫代酸，胺，酰胺和碳負(fù)離子容易地替代(J.Org.Chem.，1042，1999；J.Steroid.Biochem.13，311-322，1980)，獲得通式(I)和(I’)化合物，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝0，Z和R4如前文所定義。該反應(yīng)通常在適宜的溶劑比如DCM，THF或二甲基甲酰胺(DMF)中于0至80℃在1-5小時(shí)內(nèi)進(jìn)行，并且可以用堿比如碳酸鈉或碳酸鉀或氫化鈉來(lái)促進(jìn)。獲得的產(chǎn)品可以通過(guò)修飾所描述親核取代反應(yīng)引入的部分來(lái)進(jìn)一步官能化。路線B-在熟知氧化條件下反應(yīng)式(VI)化合物，獲得通式(XII)中間體。該反應(yīng)通常在適宜溶劑比如THF中，在無(wú)機(jī)堿比如氫氧化鈉或氫氧化鉀的水溶液存在下，在敞開的空氣中于室溫進(jìn)行12至48小時(shí)。路線B1–將式(XII)中間體轉(zhuǎn)化為通式(I)和(I’)化合物，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝0，Z和R4如前文所定義：將酸(XII)用一當(dāng)量或多當(dāng)量的酸活試劑比如碳酰二咪唑處理。反應(yīng)通常在適宜的極性溶劑比如DMF中于0至80℃的溫度進(jìn)行1-2小時(shí)。經(jīng)活化的酸可以與親核物質(zhì)比如醇、硫醇、硫代酸和胺反應(yīng)。反應(yīng)可以用堿比如碳酸鈉或碳酸鉀、氫化鈉來(lái)促進(jìn)并且在0至20℃的溫度進(jìn)行1至24小時(shí)。另選地，式(XII)中間體可以在熟知條件下，在適宜溶劑比如DCM中用草酰氯轉(zhuǎn)化為相應(yīng)酰氯?；罨闹虚g體可以與親核物質(zhì)比如醇，硫醇，硫代酸，胺和碳負(fù)離子比如烷基、芳基和雜芳基銅或報(bào)告于文獻(xiàn)中的其它金屬有機(jī)化合物反應(yīng)，從而用于將酰氯轉(zhuǎn)化為相應(yīng)酮。路線B2–將式(XII)中間體轉(zhuǎn)化為通式(XIII)化合物：將酸(XII)與碳酰二咪唑反應(yīng)，隨后與硫代乙酸鈉和/或無(wú)水硫化氫反應(yīng)。反應(yīng)通常這樣進(jìn)行：在0至20℃，將預(yù)先形成的鹽在反應(yīng)溶劑中的溶液加入活化酸的溶液。將容易地形成的硫代酸中間體(XIII)原位與烷基化試劑比如溴烷烴反應(yīng)，得到通式(I)和(I’)硫代酸酯，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝0，Z＝S和R4如前文所定義。選擇適宜的溴烷烴比如溴氯甲烷，使得可以制備式(I)和(I’)化合物，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝0，Z＝S和R4如前文所定義，其可以進(jìn)一步被修飾。例如，將其中R4是氯甲基的這些化合物與碘化鉀反應(yīng)，隨后用氟化銀處理，使得可以制備式(I)和(I’)化合物，其中R4＝氟甲基。這些反應(yīng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的(J.Med.Chem.，37，3717-3729，1994)。路線C–用硝酮環(huán)加成形成異噁唑烷的已知程序，在低聚甲醛存在下將通式(IV)中間體與式(X)羥胺反應(yīng)。該反應(yīng)在供質(zhì)子溶劑比如乙醇中方便地進(jìn)行。反應(yīng)在高溫例如60至85℃方便地進(jìn)行，得到通式(I)和(I’)化合物，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝1，Z＝O和R4＝Ac。通式(XIV)中間體可以這樣制備：在適宜溶劑比如DMF中，在堿比如吡啶存在下，將通式(I)和(I’)化合物，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝1，Z＝O，R4＝Ac和X＝H，用甲磺酰氯處理。反應(yīng)在80至100℃的溫度進(jìn)行1至5小時(shí)。在起始自相應(yīng)烯烴制備氯醇的熟知條件下反應(yīng)式(XIV)化合物能夠獲得通式(I)和(I’)化合物，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝1，Z＝O，R4＝H和X＝Cl。該反應(yīng)涉及使用氯化劑，比如N-氯代琥珀酰亞胺或二氯-5,5-二甲基乙內(nèi)酰脲，并且由酸比如高氯酸促進(jìn)。反應(yīng)通常在極性溶劑比如THF中，于0至20℃進(jìn)行1至4小時(shí)。式(XIV)化合物的乙?；タ梢杂么济撘阴；臉?biāo)準(zhǔn)條件容易地水解：例如將化合物用堿比如在溶劑比如甲醇或乙醇中的碳酸鈉或碳酸鉀處理。該反應(yīng)通常在低溫0至20℃進(jìn)行0.5至2小時(shí)。路線D-用本領(lǐng)域技術(shù)人員的熟知程序，將通式(VI)中間體與酰氯反應(yīng)。反應(yīng)在作為溶劑的DCM中于堿比如三乙胺存在下在室溫下方便地進(jìn)行20至50小時(shí)。該程序使得可以制備式(I’)化合物，其中R1＝(CH2)n-Z-(CH2)n’-R4，其中n＝1，Z＝O，R4如前文所定義。路線E-合成通式(XV)化合物的一鍋程序并隨后進(jìn)行環(huán)加成反應(yīng)，提供通式(I’)化合物。該程序的第一步驟：通過(guò)用無(wú)水乙腈中的甲磺酰氯和N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)的熟知條件，使得起始自中間體(VII)在C21形成相應(yīng)甲磺酸酯。然后，氟原子的引入能夠方便地進(jìn)行：原位加入氟化四正丁基銨(TBAF)和KI，加熱8至20小時(shí)。在低聚甲醛存在下，在描述于路線C的已知條件下，將獲得的中間體(XV)與式(X)羥胺進(jìn)行環(huán)加成反應(yīng)，導(dǎo)致形成通式(I’)化合物，其中R1＝CH2-F而R2如上述定義。有利地，本發(fā)明化合物可以例如以包括0.001至1000mg/天，優(yōu)選0.1至500mg/天的劑量給予。在通過(guò)吸入途徑將其給予的情況下，通式(I)和(I’)化合物的劑量有利地包括0.01至20mg/天，優(yōu)選0.1至10mg/天。優(yōu)選，本發(fā)明化合物可以單獨(dú)或與其它活性成分相組合地給予用于預(yù)防和/或治療任何梗阻性呼吸疾病比如哮喘，慢性支氣管炎和慢性阻塞性肺疾病(COPD)。然而，可以給予本發(fā)明化合物用于預(yù)防和/或治療其中牽涉炎性細(xì)胞數(shù)量、活性和運(yùn)動(dòng)減少的任何疾病。所述疾病的實(shí)例包括：牽涉炎癥的疾病比如哮喘和其它過(guò)敏性疾患，COPD，急性鼻炎；逆向急性移植排斥和所選自身免疫障礙的急性惡化，骨髓移植中的移植物抗宿主??；自身免疫障礙比如風(fēng)濕樣關(guān)節(jié)炎和其它關(guān)節(jié)炎；皮膚病癥比如系統(tǒng)性紅斑狼瘡，全身性皮膚肌炎，牛皮癬；炎性腸病，炎性眼病，自身免疫血液學(xué)障礙，和多發(fā)性硬化的急性惡化；腎、肝、心臟和其它器官移植；急性眼部綜合征，內(nèi)源性葡萄膜炎，特應(yīng)性皮炎，炎性腸病，和腎病綜合征；霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤和慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)；與CLL有關(guān)的自體免疫性溶血性貧血和凝血細(xì)胞減少；白血病和惡性淋巴瘤。優(yōu)選，可以給予本發(fā)明化合物用于預(yù)防和/或治療呼吸疾病比如哮喘和COPD從輕度病癥進(jìn)展為急性嚴(yán)重病癥。本發(fā)明用下述非限制性實(shí)施例進(jìn)一步描述。實(shí)施例1制備乙酸2-((10R,13S,17R)-17-乙酰氧基-10,13-二甲基-3,11-二氧代6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-2-氧代-乙基酯(中間體2)在0℃，向乙酸2-((10R,13S,17R)-17-羥基-10,13-二甲基-3,11-二氧代-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-2-氧代-乙基酯(中間體1)(2g，4.99mmol)和對(duì)-甲苯磺酸(PTSA)(200mg，IIC1523781.051mmol)的乙酸(5ml)懸浮液，在10分鐘內(nèi)緩慢加入三氟乙酸酐(5ml，35.4mmol)。在0℃攪拌20分鐘之后，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物3小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾倒入冰/水(130ml)，所得混合物用DCM(2x100ml)和AcOEt(2x100ml)萃取。經(jīng)合并的有機(jī)萃取物在無(wú)水Na2SO4上干燥，濃縮。粗制產(chǎn)品通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，DCM至DCMAcOEt50:50梯度洗脫，提供標(biāo)題化合物(2.64g，定量收率)。LC-MS(ESIPOS)：445.2(MH+)制備乙酸(10R,11S,13S,17R)-17-(2-乙酰氧基-乙?；?-11-羥基-10,13-二甲基-3-氧代-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基酯(中間體3)向冰冷的(中間體2)(2.64g，5.97mmol)的THF(15ml)和MeOH(15.00ml)溶液，在2.5小時(shí)期間內(nèi)分批加入硼氫化鈉(221mg，5.84mmol)。將反應(yīng)混合物傾倒入1NHCl和冰(150ml)中。形成的沉淀用AcOEt(3x100ml)萃取，經(jīng)合并的有機(jī)層在無(wú)水Na2SO4上干燥，濃縮。粗制物質(zhì)通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，DCM至DCM/AcOEt40:60梯度洗脫，提供標(biāo)題化合物(1.21g，45.6％收率)。1HNMR(300MHz，氯仿-d)ppm7.28(d，1H)，6.30(dd，1H)，6.05(t，1H)，4.92(d，1H)，4.69(d，1H)，4.48-4.58(m，1H)，2.75-2.91(m，1H)，2.61(m，1H)，2.37(ddd，1H)，2.18-2.21(m，3H)，2.09-2.28(m，3H)，2.07(s，3H)，1.74-1.98(m，3H)，1.51-1.70(m，1H)，1.48(s，3H)，1.26-1.39(m，2H)，1.11-1.19(m，1H)，1.05(s，3H)LC-MS(ESIPOS)：445.2(MH+)實(shí)施例2制備乙酸2-((6S,9R,10S,11S,13S)-6,9-二氟-11-羥基-10,13-二甲基-3-氧代-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十氫-3H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-2-氧代-乙基酯(中間體5)在氮?dú)夥障?，向丁?9R,10S,11S,13S,17R)-17-(2-乙酰氧基-乙?；?-9-氯-11-羥基-10,13-二甲基-3-氧代-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基酯(中間體4)(2.48g，4.88mmol)的無(wú)水DMF(60ml)溶液，加入乙酸鉀(3.83g，39.0mmol)，在100℃攪拌反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。將冷卻的反應(yīng)混合物傾至冰和鹽水(200ml)中，水層用AcOEt(3x150ml)萃取。經(jīng)合并的有機(jī)萃取物用水和鹽水洗滌，在Na2SO4上干燥，濃縮，提供2.55g的粗制標(biāo)題化合物，將其不加進(jìn)一步純化地用于后續(xù)步驟。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：ppm7.29(dd，1H)，6.99(dd，1H)，6.29(dd，1H)，5.98-6.15(m，1H)，5.68(dddd，1H)，5.56(dd，1H)，5.10(d，1H)，4.92(d，1H)，3.98-4.23(m，1H)，2.56-2.83(m，1H)，2.26-2.44(m，3H)，2.14-2.26(m，1H)，2.09(s，3H)，1.71-1.87(m，1H)，1.55-1.65(m，2H)，1.53(s，3H)，1.15(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)：421.97(MH+)制備(6S,9R,10S,11S,13S)-6,9-二氟-11-羥基-17-(2-羥基-乙酰基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-酮(中間體6)向(中間體5)(2.55g，6.06mmol)的乙醇(100ml)溶液加入南極念珠菌(CandidaAntarctica)脂酶(2U/mg)(510mg，6.06mmol)，在37℃攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜。過(guò)濾反應(yīng)混合物，用甲醇洗滌，殘余物通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，DCM/AcOEt90:10至DCM/AcOEt50:50梯度洗脫，提供1.62g的標(biāo)題化合物(70.6％收率)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：ppm7.29(dd，1H)，6.87(dd，1H)，6.29(dd，1H)，6.09-6.17(m，1H)，5.67(dddd，1H)，5.53(dd，1H)，4.77(t，1H)，4.44(dd，1H)，4.26(dd，1H)，4.04-4.15(m，1H)，2.56-2.79(m,1H)，2.39(dd，1H)，2.25-2.35(m，2H)，2.09-2.25(m，1H)，1.76(td，1H)，1.55-1.66(m，2H)，1.53(s，3H)，1.17(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)：379.99(MH+)列于表1的中間體7和8按照對(duì)中間體5和6的預(yù)先描述起始自中間體3來(lái)制備。表1實(shí)施例3制備(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-8-呋喃-3-基甲基-5-羥基-6b-(2-羥基-乙?；?-4a,6a-二甲基-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(化合物9)在105℃，將(中間體8)(100mg，0.292mmol)，N-(呋喃-3-基甲基)羥胺(33mg，0.292mmol)和低聚甲醛(50mg，0.999mmol)在乙醇(5ml)中的混合物攪拌過(guò)夜。蒸發(fā)溶劑，殘余物通過(guò)制備型HPLC純化，提供58mg的純化合物(42％收率)。1HNMR(300MHz，氯仿-d)：ppm7.38(t，1H)，7.32-7.36(m，1H)，7.25(d，1H)，6.36(dd，1H)，6.30(dd，1H)，6.05(t，1H)，4.45-4.63(m，1H)，4.45(d，1H)，4.10(d，1H)，3.76(d，1H)，3.70(d，1H)，3.38-3.61(m，2H)，2.90(br.s.，1H)，2.48-2.69(m，1H)，2.36(ddd，1H)，2.14-2.29(m，1H)，2.03-2.14(m，2H)，1.99(dd，1H)，1.65-1.85(m，2H)，1.49-1.67(m，4H)，1.47(s，3H)，1.04-1.21(m，1H)，0.96(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)：468.18(MH+)列于表2的化合物按照化合物9的預(yù)先描述，通過(guò)中間體6或8與適宜羥胺的環(huán)加成來(lái)制備。最終的化合物通過(guò)硅膠柱色譜法或制備型HPLC純化。表2(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))實(shí)施例4制備甲磺酸2-[(4aS，4bR，5S，6aS,6bR,9aS,12S)-4b,12-二氟-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-(3-苯基丙基)2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-基]-2-氧代-乙基酯(化合物74)在氮?dú)夥障?，向化合?0(100mg，0.185mmol)的吡啶(5ml)溶液加入甲磺酰氯(0.030ml，0.385mmol)。在室溫?cái)嚢?小時(shí)之后，將反應(yīng)混合物傾至2NHCl和冰(75ml)中，水層用AcOEt(3x50ml)萃取。經(jīng)合并的有機(jī)萃取物在無(wú)水硫酸鈉上干燥，濃縮，提供115mg的粗制化合物48。LC-MS(ESIPOS)：620.4(MH+)列于表3的化合物按照化合物74的預(yù)先描述制備：表3實(shí)施例5制備(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-6b-(2-乙硫基-乙?；?-8-呋喃-3-基甲基-5-羥基-4a,6a-二甲基-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(化合物81)在氮?dú)夥障?，向K2CO3(41mg，0.297mmol)的無(wú)水DMF(1ml)分散液，加入乙烷硫醇(15ml，0.196mmol)。在攪拌10分鐘之后，向其中滴加溶于無(wú)水DMF(2ml)的化合物76(107mg，0.196mmol)。在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物1.5小時(shí)，然后傾至2NHCl(20ml)和冰中。水層用AcOEt(3x30ml)萃取，經(jīng)合并的有機(jī)萃取物在無(wú)水硫酸鈉上干燥，濃縮。粗制物通過(guò)柱色譜法在硅膠上純化，AcOEt/石油醚10:90至AcOEt/石油醚40:60梯度洗脫，提供68mg的標(biāo)題化合物(68％收率)。1HNMR(300MHz，氯仿-d)ppm7.38(t，1H)，7.33-7.36(m，1H)，7.26(d，1H)，6.37(dd，1H)，6.30(dd，1H)，6.05(t，1H)，4.50(quin，1H)，3.73(s，2H)，3.44(d，1H)，3.35-3.61(m，2H)，3.40(d，1H)，2.43-2.73(m，3H)，2.36(ddd，1H)，1.92-2.28(m，4H)，1.60-1.91(m，3H)，1.47(s，3H)，1.41-1.54(m，1H)，1.23(t，3H)，1.08-1.38(m，3H)，0.99(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)：512.09(MH+)列于表4的化合物按照對(duì)化合物81的預(yù)先描述制備。表4(續(xù))(續(xù))實(shí)施例6制備(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-8-呋喃-3-基甲基-5-羥基-6b-(2-巰基-乙?；?-4a,6a-二甲基-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(化合物88)在0℃于氮?dú)夥障?，向化合?2(63mg，0.120mmol)的脫氣乙醇(7ml)和水(3ml)溶液，加入1NNaOH(120μl，0.120mmol)。在0℃攪拌3.5小時(shí)之后，將反應(yīng)混合物傾至2NHCl(1ml)和鹽水(10ml)中。水層用AcOEt(3x20ml)萃取，干燥經(jīng)合并的有機(jī)萃取物(Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)柱色譜法在硅膠上純化，DCM至DCM/AcOEt80:20梯度洗脫，提供20mg的純化合物(34％收率)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.58(t，1H)，7.52-7.57(m，1H)，7.31(d，1H)，6.41(dd，1H)，6.17(dd，1H)，5.93(t，1H)，4.70(d，1H)，4.14-4.44(m，1H)，3.76(d，1H)，3.66(d，1H)，3.62(dd，1H)，3.34(dd，1H)，3.29-3.53(m，2H)，2.52-2.62(m，1H)，2.34-2.44(m，1H)，2.20-2.35(m，1H)，1.87-2.22(m，3H)，1.73(d，2H)，1.50-1.71(m，2H)，1.38(s，3H)，1.30-1.51(m，1H)，0.99-1.13(m，1H)，0.95(dd，1H)，0.81(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)：484.09(MH+)實(shí)施例7制備(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-6b-(2-氯-乙酰基)-4b,12-二氟-5-羥基-4a,6a-二甲基-8-(3-苯基-丙基)-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(化合物89)在氮?dú)夥障?，向氯化?97mg，2.285mmol)的無(wú)水DMF(1ml)溶液加入溶于無(wú)水DMF(2ml)的化合物74(118mg，0.190mmol)。在65℃攪拌反應(yīng)混合物3.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾至2NHCl和冰(20ml)中，水層用AcOEt(3x50ml)萃取。經(jīng)合并的有機(jī)萃取物用水(2x40ml)、鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉上干燥，濃縮。粗制物通過(guò)柱色譜法在硅膠上純化，DCM至DCM/AcOEt85:15梯度洗脫，提供78mg的標(biāo)題化合物(73.1％收率)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.03-7.34(m，6H)，6.29(dd，J＝10.12，1.91Hz，1H)，6.11(s，1H)，5.49-5.78(m，1H)，5.45(d，J＝2.93Hz，1H)，4.69(d，J＝17.31Hz，1H)，4.54(d，J＝17.31Hz，1H)，3.98-4.24(m，1H)，3.45-3.62(m，1H)，3.33-3.45(m，1H)，2.70(t，J＝7.19Hz，2H)，2.59(t，J＝7.63Hz，2H)，2.05-2.35(m，2H)，1.97(br.s.，2H)，1.54-1.85(m，6H)，1.49(s，3H)，1.39-1.46(m，1H)，0.84(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)560.0(MH+)列于表5的化合物按照化合物89的預(yù)先描述制備。表5(續(xù))實(shí)施例8制備(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-8-呋喃-3-基甲基-5-羥基-4a,6a-二甲基-6b-[2-(2-氧代-四氫-呋喃-3-硫基)-乙?；鵠-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(化合物93)在0℃，將3-巰基-二氫-呋喃-2-酮(37mg，0.312mmol)的無(wú)水THF(1ml)溶液滴加至攪拌中的NaH(13mg，0.325mmol，60％懸浮液，礦物油中)的無(wú)水THF(1.5ml)懸浮液。在0℃攪拌所得溶液30分鐘。緩慢地滴加化合物76(170mg，0.312mmol)的無(wú)水THF(2ml)溶液，在0℃攪拌混合物2小時(shí)，在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾至水(20ml)和冰中，水層用AcOEt(3x20ml)萃取，經(jīng)合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)柱色譜法在硅膠上純化，DCM至DCM/AcOEt25:75梯度洗脫，提供97mg的純化合物(55％收率)。1HNMR(300MHz，氯仿-d)ppm7.32-7.43(m，2H)，7.18-7.32(m，2H)，6.33-6.43(m，1H)，6.26-6.34(m，1H)，5.82-6.13(m，1H)，4.46-4.58(m，1H)，4.24-4.69(m，2H)，3.31-4.21(m，7H)，2.48-2.87(m，2H)，2.30-2.49(m，1H)，1.86-2.29(m，5H)，1.60-1.86(m，2H)，1.47(s，3H)，1.38-1.63(m，1H)，1.25-1.37(m，1H)，1.06-1.20(m，2H)，0.98(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)：568.11(MH+)列于表6的化合物按照化合物93的預(yù)先描述制備：表6(續(xù))實(shí)施例9制備(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-5-羥基-4a,6a-二甲基-6b-[2-(四氫-吡喃-2-基氧基)-乙?；鵠-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(中間體97)在0℃于氮?dú)夥障?，?4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-5-羥基-6b-(2-羥基-乙?；?-4a,6a-二甲基4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(中間體21)(250mg，0.64mmol)的DCM(10ml)溶液，加入DHP(161μl，1.9mmol)，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，殘余物通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，DCM/AcOEt80:20洗脫，提供260mg的標(biāo)題化合物(86％收率)。LC-MS(ESIPOS)：444.2(MH+)實(shí)施例10制備(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-8-苯甲?；?5-羥基-4a,6a-二甲基-6b-[2-(四氫-吡喃-2-基氧基)-乙?；鵠-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(中間體98)在0℃于氮?dú)夥障?，向中間體97(130mg，0.27mmol)的無(wú)水THF(2.7ml)溶液加入三乙胺(75μl，0.54mmol)，在0℃攪拌混合物15分鐘。加入苯甲酰氯(63μl，0.54mmol)，再攪拌混合物15分鐘?；旌衔镉肁cOEt(20ml)稀釋，有機(jī)層用水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，DCM/AcOEt80:20洗脫，提供120mg的標(biāo)題化合物，是無(wú)色油狀物(77％收率)。LC-MS(ESIPOS)：576.15(MH+)列于表7的中間體按照中間體98的預(yù)先描述將中間體97與適宜的酰氯反應(yīng)來(lái)制備。表7實(shí)施例11制備(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-8-苯甲?；?5-羥基-6b-(2-羥基-乙?；?-4a,6a-二甲基-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(化合物100)向中間體98(120mg，0.20mmol)的THF(6ml)溶液加入1NHCl(3ml)，在室溫?cái)嚢杌旌衔?4小時(shí)。混合物用AcOEt(30ml)稀釋，有機(jī)層用水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)制備型HPLC純化，提供41.3mg的標(biāo)題化合物(42％收率)。1HNMR(300MHz，氯仿-d)ppm7.57-7.71(m，2H)，7.47-7.56(m，1H)，7.37-7.46(m，2H)，7.30(d，1H)，6.39(dd，1H)，6.15(t，1H)，4.44-4.56(m，1H)，4.42(d，1H)，4.21(dd，1H)，4.16(d，1H)，3.73(td，1H)，3.53(dd，1H)，2.53-2.72(m，1H)，2.42(ddd，1H)，2.17-2.30(m，1H)，2.06-2.17(m，1H)，1.96-2.06(m，1H)，1.85(ddd，1H)，1.67-1.79(m，2H)，1.62(dd，1H)，1.47(s，3H)，1.09-1.33(m，1H)，1.04(dd，1H)，1.01(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)：492.10(MH+)化合物101按照化合物100的預(yù)先描述制備：表8實(shí)施例12制備(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-8-(呋喃-2-羰基)-5-羥基-6b-(2-羥基-乙?；?-4a,6a-二甲基-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(化合物102)在氮?dú)夥障略?℃，向中間體97和三乙胺(117ml，0.84mmol)的無(wú)水THF溶液，加入2-呋喃甲酰氯(76μl，0.77mmol)，攪拌反應(yīng)混合物5分鐘。減壓除去溶劑，將殘余物溶于THF(2ml)、乙腈(2ml)和水(10ml)。將1NHCl加入該混合物，在室溫將其攪拌30分鐘。加入DCM(15ml)，分相，水層用DCM(2x15ml)萃取。干燥經(jīng)合并的有機(jī)層(Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)制備型HPLC純化，提供40mg的標(biāo)題化合物(11％收率)。1HNMR1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.90(dd，1H)，7.31(d，1H)，7.20(dd，1H)，6.67(dd，1H)，6.16(dd，1H)，5.91(s，1H)，4.80(br.s.，1H)，4.45(d，1H)，4.27-4.38(m，1H)，4.20(dd，1H)，4.19(d，1H)，3.53-3.67(m，1H)，3.46(dd，1H)，2.53-2.61(m，1H)，2.22-2.39(m，2H)，1.94-2.17(m，2H)，1.82-1.92(m，2H)，1.50-1.82(m，3H)，1.39(s，3H)，0.99-1.15(m，1H)，0.92-1.00(m，1H)，0.92(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)：482.00(MH+)列于表9的化合物按照化合物102的預(yù)先描述制備：表9(續(xù))實(shí)施例13制備乙酸2-((4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-基)-2-氧代-乙基酯(化合物106)如化合物9(實(shí)施例3)的預(yù)先描述，起始自中間體7，以55％收率獲得標(biāo)題化合物。LC-MS(ESIPOS)：430.3(MH+)制備乙酸2-((4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-5-羥基-8-甲磺酰基-4a,6a-二甲基-2-氧代-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-基)-2-氧代-乙基酯(化合物107)在氮?dú)夥障?，將化合?06(120mg，0.28mmol)溶于無(wú)水DCM(5ml)。加入三乙胺(75μl，0.54mmol)和甲磺酰氯(75μl，0.54mmol)，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物3天?；旌衔镉肈CM(20ml)稀釋，有機(jī)相用水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，DCM/AcOEt90:10至DCM/AcOEt50:50梯度洗脫，提供74mg的純化合物(52％收率)。LC-MS(ESIPOS)：508.3(MH+)制備(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-5-羥基-6b-(2-羥基-乙?；?-8-甲磺?；?4a,6a-二甲基4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(化合物108)在0℃在氮?dú)夥障拢蛞宜?-((4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-5-羥基-8-甲磺?；?4a,6a-二甲基-2-氧代-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-基)-2-氧代-乙基酯(化合物107)(74mg，0.16mmol)的脫氣甲醇(5ml)和水(5ml)溶液，加入1NNaOH(180μl)，在0℃攪拌反應(yīng)混合物10分鐘。將反應(yīng)混合物酸化至pH2，濃縮，殘余物通過(guò)制備型LC-MS純化，提供11.5mg的標(biāo)題化合物(17％收率)。1HNMR(300MHz，氯仿-d)：ppm7.26(d，1H)，6.33(dd，1H)，6.08(t，1H)，4.72(d，1H)，4.54(q，1H)，4.23(d，1H)，4.03(dd，1H)，3.78(td，1H)，3.06(s，3H)，3.00(dd，1H)，2.51-2.71(m，1H)，2.39(ddd，1H)，2.17-2.31(m，1H)，2.01-2.17(m，3H)，1.77-1.95(m，1H)，1.58-1.76(m，2H)，1.47(s，3H)，1.09-1.32(m，2H)，1.01(s，3H)LC_MS(ESIPOS)：466.09(MH+)實(shí)施例14制備乙酸2-[(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-5-羥基-4a,6a-二甲基-8-(甲基-苯基-氨基甲?；?-2-氧代-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-基]-2-氧代-乙基酯(化合物109)在氮?dú)夥障?，將化合?06(200mg，0.50mmol)溶于無(wú)水DCM(7ml)。加入三乙胺(71μl，0.51mmol)和N-甲基-N-苯基氨基甲酰氯(87mg，0.51mmol)，在0℃攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)，在室溫?cái)嚢?天?；旌衔镉盟♂?15ml)，加入1NHCl。水層用DCM(3x20ml)萃取。干燥經(jīng)合并的有機(jī)層(Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)制備型HPLC純化，提供66mg的純化合物(23％收率)。LC-MS(ESIPOS)：563.7(MH+)制備(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-5-羥基-6b-(2-羥基-乙?；?-4a,6a-二甲基-2-氧代-2,4a,4b,5,6,6a,6b,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-8-羧酸甲基-苯基-酰胺(化合物110)在0℃在氮?dú)夥障?，向化合?09(66mg，0.12mmol)的脫氣甲醇(1.5ml)和水(1.5ml)溶液，加入1NNaOH(117μl)，在0℃攪拌反應(yīng)混合物10分鐘。將反應(yīng)混合物酸化至pH2，濃縮，殘余物通過(guò)制備型LC-MS純化，提供21mg的標(biāo)題化合物(33％收率)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.25-7.38(m，3H)，7.17-7.25(m，2H)，7.06-7.17(m，1H)，6.20(dd，1H)，5.94(s，1H)，4.64(br.s.，1H)，4.36(d，1H)，4.04-4.25(m，1H)，3.89(d，1H)，3.65(dd，1H)，3.40-3.46(m，1H)，3.14(s，3H)，2.98(dd，1H)，2.53-2.65(m，1H)，2.20-2.35(m，1H)，1.84-2.13(m，2H)，1.47-1.69(m，2H)，1.37-1.47(m，1H)，1.35(s，3H)，1.13-1.37(m，3H)，0.92-1.12(m，1H)，0.84(dd，1H)，0.78(s，3H)。LC_MS(ESIPOS)：521.24(MH+)實(shí)施例15制備(4aR，5S,6aS,6bR,9aS)-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-噻吩-3-基甲基-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-羧酸(化合物111)向11(202mg，0.418mmol)的THF(3ml)和水(1ml)溶液加入1NNaOH(836μl，0.836mmol)，在室溫于敞開容器中攪拌反應(yīng)混合物24小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾至2NHCl和冰(30ml)中，水層用AcOEt(3x30ml)萃取。經(jīng)合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉上干燥，濃縮，提供202mg的粗制物質(zhì)(定量收率)，將其不加純化地原樣使用。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.42(dd，1H)，7.31-7.35(m，1H)，7.31(d，1H)，7.04(dd，1H)，6.16(dd，1H)，5.92(s，1H)，4.20-4.35(m，1H)，3.89(br.s.，2H)，3.31-3.58(m，2H)，2.53-2.60(m，1H)，2.22-2.37(m，1H)，1.93-2.20(m，3H)，1.81(d，1H)，1.49-1.71(m，3H)，1.35-1.48(m，1H)，1.39(s，3H)，0.97-1.15(m，1H)，0.96(s，3H)，0.91(dd，1H)。LC-MS(ESIPOS)：470.13(MH+)列于表10的化合物按照化合物111的預(yù)先描述制備：表10實(shí)施例16制備(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-噻吩-3-基甲基-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-羧酸甲基酯(化合物116)在氮?dú)夥障?，將化合?11(110mg，0.23mmol)懸浮于無(wú)水THF(25ml)，加入CDI(65mg，0.39mmol)，在60℃攪拌混合物3小時(shí)。加入甲醇(5ml)，在室溫下攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜。蒸發(fā)溶劑，粗制物通過(guò)制備型HPLC純化，提供41mg的純化合物(37％收率)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.42(dd，1H)，7.31(d，1H)，7.27-7.30(m，1H)，7.01(dd，1H)，6.16(dd，1H)，5.92(s，1H)，4.18-4.36(m，1H)，3.88(s，2H)，3.66(s，3H)，3.38-3.51(m，2H)，2.53-2.61(m，1H)，2.21-2.37(m，1H)，1.92-2.18(m，3H)，1.69-1.84(m，1H)，1.46-1.68(m，3H)，1.39(s，3H)，1.32-1.46(m，1H)，0.97-1.14(m，1H)，0.90(s，3H)，0.86-0.96(m，1H)。LC-MS(ESIPOS)：484.28(MH+)實(shí)施例17制備(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-4b,12-二氟-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-(3-苯基-丙基)-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-硫代羧酸S-丁基酯(化合物117)在氮?dú)夥障拢蚧衔?14(100mg，0.190mmol)的無(wú)水DMF(2ml)溶液加入碳酰二咪唑(CDI)(61.5mg，0.379mmol)，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物1.5小時(shí)，在60℃攪拌30分鐘。然后，緩慢滴加丁基硫醇(0.041ml，0.379mmol)和氫化鈉(16.68mg，0.417mmol)的無(wú)水DMF(3ml)溶液，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物1.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾至水和冰(50ml)中，水層用AcOEt(3x50ml)萃取。經(jīng)合并的有機(jī)萃取物用水、鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉上干燥，濃縮。粗制物通過(guò)快速SiO2柱體純化，DCM至DCM/AcOEt88:12梯度洗脫，提供66mg的標(biāo)題化合物(58.1％收率)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.08-7.33(m，6H)，6.29(dd，1H)，6.11(s，1H)，5.50-5.78(m，1H)，5.47(d，1H)，4.06-4.30(m，1H)，3.44-3.64(m，1H)，3.32-3.44(m，1H)，2.79(td，2H)，2.54-2.74(m，6H)，2.18-2.32(m，1H)，1.94-2.18(m，3H)，1.70-1.94(m，4H)，1.53-1.68(m，1H)，1.49(s，3H)，1.40-1.48(m，2H)，1.25-1.39(m，2H)，0.87(s，3H)，0.86(t，3H)。LC-MS(ESIPOS)：600.4(MH+)[α]D25＝+150.2°(c＝0.50，CHCl3)實(shí)施例18制備(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-氯-芐基)-4b,12-二氟-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-羧酸甲基酰胺(化合物118)在氮?dú)夥障?，向化合?13(200mg，0.375mmol)的無(wú)水DMF(5ml)溶液加入CDI(66.8mg，0.412mmol)，在50℃攪拌混合物1h。將反應(yīng)冷卻至室溫，加入2M的甲胺(0.749ml，1.498mmol)的THF溶液，隨后加入DMAP(45.8mg，0.375mmol)。在50℃攪拌反應(yīng)4小時(shí)：因還存在一些羧酸，再加入2M的甲胺(1.5ml，3.00mmol)溶液，在50℃加熱反應(yīng)過(guò)夜。冷卻反應(yīng)混合物，傾至100ml水中，用AcOEt(3x70ml)萃取。經(jīng)合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，在硫酸鈉上干燥，濃縮。粗制物(240mg)溶于MeOH，在PS-HCO3-柱體上除去殘余的羧酸，獲得219mg的粗制物。經(jīng)由色譜柱在硅膠上(DCM/AcOEt1/1)純化，提供150mg的標(biāo)題化合物(73％收率)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.27-7.46(m，4H)，7.24(dd，1H)，7.10(q，1H)，6.29(dd，1H)，6.11(s，1H)，5.50-5.79(m，1H)，5.38(dd，1H)，4.05-4.17(m，1H)，3.91(d，1H)，3.83(d，1H)，3.46-3.62(m，1H)，3.34-3.46(m，1H)，2.61(d，3H)，2.54-2.59(m，1H)，2.18-2.33(m，1H)，1.97-2.17(m，1H)，1.71-1.86(m，1H)，1.51-1.65(m，3H)，1.49(s，3H)，1.46-1.52(m，1H)，1.39(dd，1H)，0.88(s，3H)LC-MS(ESIPOS)：547.19MH+[α]D25＝+283.3，(c0.21，CHCl3)列于表11的化合物按照化合物118的預(yù)先描述使用適宜的醇、硫醇或胺(或胺的相應(yīng)鹽酸鹽)來(lái)制備：表11(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))實(shí)施例19制備(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-4b,12-二氟-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-(3-苯基-丙基)-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-羧酸氯甲基酯(化合物135)在氮?dú)夥障?，向化合?14(120mg，0.227mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(4ml)溶液加入碳酸鉀(62.9mg，0.455mmol)和溴氯甲烷(0.075ml，1.137mmol)，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物25小時(shí)。反應(yīng)混合物用AcOEt(40ml)稀釋，有機(jī)層用5％NaHCO3、水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，DCM至DCM/AcOEt85:15梯度洗脫，提供31.5mg的標(biāo)題化合物(24％收率)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.08-7.34(m，6H)，6.29(dd，1H)，6.11(s，1H)，5.95(d，1H)，5.92(d，1H)，5.53-5.80(m，1H)，5.53(dd，1H)，4.10-4.24(m，1H)，3.43-3.72(m，2H)，2.54-2.70(m，4H)，2.18-2.34(m，2H)，2.04-2.19(m，1H)，1.80-1.95(m，1H)，1.60-1.80(m，5H)，1.50-1.60(m，1H)，1.49(s，3H)，1.38-1.47(m，1H)，0.94(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)：576.07(MH+)列于表12的化合物按照化合物135的預(yù)先描述制備：表12(續(xù))實(shí)施例20制備(4aS，4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-4b,12-二氟-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-(3-苯基-丙基)-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-硫代羧酸S-氰基甲基酯(139)在65℃在氮下，將化合物114(220mg，0.417mmol)和CDI(135mg，0.834mmol)在無(wú)水DMF(4ml)中的混合物攪拌1h30分鐘。將混合物在室溫然后在0℃冷卻；將新鮮制備的硫代乙酸(0.096ml，1.334mmol)和氫化鈉(50.0mg，1.251mmol)的無(wú)水DMF(2ml)溶液加入所述混合物，在0℃攪拌所得溶液10分鐘。然后加入2-溴乙腈(0.119ml，1.710mmol)，在室溫?cái)嚢杷没旌衔?小時(shí)。混合物在AcOEt(40ml)與水間分配(30ml)，分離有機(jī)相；水層用AcOEt(2x40ml)萃取，經(jīng)合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，在Na2SO4上干燥，濃縮。粗制物通過(guò)硅膠快速色譜法純化，DCM至DCM/AcOEt90:10梯度洗脫，提供100mg的標(biāo)題化合物(41.2％收率)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.05-7.34(m，6H)，6.29(dd，1H)，6.11(s，1H)，5.55(dd，1H)，5.49-5.82(m，1H)，4.12-4.24(m，1H)，3.96(d，1H)，3.89(d，1H)，3.46-3.67(m，1H)，3.33-3.45(m，1H)，2.54-2.84(m，5H)，1.99-2.33(m，3H)，1.49(s，3H)，1.42-1.93(m，7H)，0.92(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)：583.98(MH+)[α]D25＝+118.2°(c＝0.49，CHCl3)列于表13的化合物按照化合物139的預(yù)先描述用適宜溴乙烷衍生物來(lái)制備：表13(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))(續(xù))實(shí)施例21制備(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,12S)-4b,12-二氟-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-(3-苯基-丙基)-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-硫代羧酸S-碘甲基酯(化合物157)向化合物143的丙酮(4ml)溶液加入碘化鈉(122mg，0.811mmol)，在65℃攪拌反應(yīng)混合物9小時(shí)。反應(yīng)混合物用AcOEt(50ml)稀釋，水層用水、10％硫代硫酸鈉、5％碳酸氫鈉和鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉上干燥，濃縮。粗制物通過(guò)硅膠快速色譜法純化，AcOEt/石油醚5:95至AcOEt/石油醚30:70梯度洗脫，提供16mg的標(biāo)題化合物(34.6％收率)。LC-MS(ESIPOS)：684.2(MH+)制備(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-4b,12-二氟-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-(3-苯基-丙基)-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-硫代羧酸S-氟甲基酯(化合物158)向化合物157(16mg，0.023mmol)的乙腈(7ml)溶液加入氟化銀(41.6mg，0.328mmol)，在室溫下避光將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜。反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)棉墊，濃縮，提供28mg的粗制物質(zhì)，將其通過(guò)RP18柱體在乙腈中純化，提供13mg的含有所希望產(chǎn)品的混合物?；旌衔锿ㄟ^(guò)SiO2柱體進(jìn)一步純化，AcOEt/DCM15:85至AcOEt/DCM30:70梯度洗脫，提供2.1mg的標(biāo)題化合物(16％收率)。1HNMR(300MHz，氯仿-d)ppm7.16-7.33(m，5H)，7.12(dd，1H)，6.46(s，1H)，6.40(dd，1H)，6.01(dd，1H)，5.64(dd，1H)，5.41(dddd，1H)，4.25-4.50(m，1H)，3.52-3.74(m，2H)，2.76-2.94(m，2H)，2.64-2.76(m，2H)，2.41-2.64(m，1H)，2.23-2.40(m，2H)，1.65-2.19(m，6H)，1.48(br.s.，1H)，1.28(s，3H)，1.22-1.36(m，2H)，1.03(s，3H)。LC-MS(ESIPOS)：575.90(MH+)列于表14的化合物按照化合物158的預(yù)先描述起始自適宜的酸衍生物制備：表14實(shí)施例22如化合物9(實(shí)施例3)的預(yù)先描述，將中間體7與3-苯基-丙基-羥胺反應(yīng)，以79％收率得到乙酸2-[(4aR,5S,6aS,6bR,9aS)-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-(3-苯基-丙基)-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-基]-2-氧代-乙基酯(化合物160)。制備乙酸2-[(4aS,6aS,6bR,9aS)-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-(3-苯基-丙基)-2,4a,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十二氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-基]-2-氧代-乙基酯(化合物161)在氮?dú)夥障?，向化合?60(403mg，0.736mmol)的DMF(8ml)溶液加入吡啶(0.268ml，3.31mmol)和甲磺酰氯(0.172ml，2.207mmol)。在90℃攪拌反應(yīng)混合物3.5小時(shí)，在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將反應(yīng)混合物傾至冰和鹽水(40ml)中，水層用AcOEt(3x40ml)萃取。經(jīng)合并的有機(jī)萃取物用水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，DCM至DCM/AcOEt85:15梯度洗脫，提供211mg的純化合物(54.1％收率)。LC-MS(ESIPOS)：530.4(MH+)制備乙酸2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS)-4b-氯-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-(3-苯基-丙基)-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-基]-2-氧代-乙基酯(化合物162)在0℃在氮?dú)夥障?，向化合?61(211mg，0.398mmol)的THF(12ml)溶液加入高氯酸(0.073ml，1.214mmol)的水(164μl)溶液，隨后加入1,3-二氯-5,5-二甲基乙內(nèi)酰脲(57mg，0.289mmol)。在5分鐘之后，除去冷卻浴，在室溫?cái)嚢杌旌衔?小時(shí)。再加入1,3-二氯-5,5-二甲基乙內(nèi)酰脲(57.0mg，0.289mmol)和高氯酸(0.073ml，1.215mmol)，在室溫再攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾至0.64％NaHSO3(100ml)溶液中，隨后加入固體NaCl。水層用AcOEt(3x75ml)萃取，經(jīng)合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(無(wú)水Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，DCM至DCM/AcOEt70:30梯度洗脫，提供112mg的標(biāo)題化合物(48.3％收率)。LC-MS(ESIPOS)：582.3(MH+)制備(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS)-4b-氯-5-羥基-6b-(2-羥基-乙?；?-4a,6a-二甲基-8-(3-苯基-丙基)-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(化合物163)在氮?dú)夥障?，?℃，向化合物162(112mg，0.192mmol)的MeOH(8ml)和THF(5.00ml)(脫氣溶劑)溶液加入K2CO3(39.9mg，0.289mmol)，在0℃攪拌反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾至2NHCl和冰(50ml)中，水層用AcOEt(3x60ml)萃取。經(jīng)合并的有機(jī)萃取物用水和鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉上干燥，濃縮。然后，粗制物質(zhì)通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，AcOEt/DCM5:95至AcOEt/DCM40:60梯度洗脫，提供73mg的標(biāo)題化合物(70.3％收率)。1HNMR(300MHz，氯仿-d)ppm7.29-7.34(m，1H)，7.11-7.25(m，5H)，6.37(dd，1H)，6.11(t，1H)，4.87(d，1H)，4.60(br.s.，1H)，4.22(d，1H)，3.75-3.88(m，1H)，3.59-3.75(m，1H)，2.88-3.16(m，2H)，2.68-2.79(m，2H)，2.54-2.70(m，3H)，2.36-2.53(m，2H)，2.19-2.33(m，1H)，1.99-2.17(m，2H)，1.71-1.93(m，3H)，1.67(s，3H)，1.60(dd，1H)，1.40-1.54(m，1H)，1.00(s，3H)LC-MS(ESIPOS)：540.01(MH+)化合物164按照化合物163的預(yù)先描述制備將中間體7與N-對(duì)-氯芐基羥胺反應(yīng)而制備。表15實(shí)施例23制備丙酸2-((4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-4b,12-二氟-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-8-噻吩-2-基甲基-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-基)-2-氧代-乙基酯(化合物165)在氮?dú)夥障略?℃，向37的無(wú)水的二氯甲烷(15ml)溶液加入三乙胺(0.161ml，1.155mmol)和丙酰氯(0.100ml，1.155mmol)。在0℃攪拌反應(yīng)混合物15分鐘，在室溫下攪拌24小時(shí)，然后加入額外的三乙胺(0.080ml，0.577mmol)和丙酰氯(0.050ml，0.577mmol)。在室溫下再攪拌混合物2小時(shí)?；旌衔镉肈CM(60ml)稀釋，有機(jī)相用1NHCl、水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮。殘余物通過(guò)硅膠快速柱體純化，DCM至DCM/AcOEt85：15梯度洗脫，提供248mg的104(75％收率)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.44(dd，1H)，7.27(dd，1H)，7.00(dd，1H)，6.96(dd，1H)，6.31(dd，1H)，6.12(s，1H)，5.58(d，1H)，5.37-5.81(m，1H)，4.76(d，1H)，4.64(d，1H)，4.20-4.26(m，1H)，4.21(d，1H)，4.01(d，1H)，3.45-3.63(m，1H)，3.32-3.38(m，1H)，2.59-2.71(m，1H)，2.38(q，2H)，2.08-2.31(m，3H)，1.94-2.05(m，1H)，1.73(d，1H)，1.52-1.68(m，2H)，1.49(s，3H)，1.43(dd，1H)，1.05(t，3H)，0.85(s，3H)LC-MS(ESIPOS)：576.21MH+[α]D25＝+162.0(c＝0.151，MeOH)列于表16的化合物按照化合物165的預(yù)先描述起始自適宜的異噁唑烷衍生物制備：表16實(shí)施例24制備乙酸2-((4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-4b,12-二氟-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-基)-2-氧代-乙基酯(化合物168)如化合物9(實(shí)施例3)的預(yù)先描述，起始自中間體7，以33％收率獲得標(biāo)題化合物。LC-MS(ESIPOS)：466.0(MH+)制備乙酸2-((4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-4b,12-二氟-5-羥基-4a,6a-二甲基-2-氧代-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-N-(1-甲基-2-氧代-1,2-二氫-吡啶-3-基甲基)-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-6b-基)-2-氧代-乙基酯(化合物169)向化合物168(200mg，0.430mmol)，碘化鉀(164mg，0.988mmol)和乙基二異丙胺(0.169ml，0.988mmol)的無(wú)水DMF(3ml)溶液加入溶于無(wú)水DMF(5ml)的(1-甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲磺酸甲酯(215mg，0.988mmol)。在微波下在100℃加熱，攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)。反應(yīng)混合物用AcOEt(50ml)稀釋，有機(jī)相用水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮。殘余物通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，DCM/MeOH/AcOEt49:1：50至DCM/MeOH/AcOEt47：3：50梯度洗脫，提供115mg的標(biāo)題化合物(46％收率)。LC-MS(ESIPOS)：587.1(MH+)制備(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-4b,12-二氟-5-羥基-6b-(2-羥基-乙?；?-4a,6a-二甲基-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-N-(1-甲基-2-氧代-1,2-二氫-吡啶-3-基甲基)-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(化合物170)向化合物169(115mg，0.196mmol)的二噁烷(12ml)和水(6.00ml)溶液加入12NHCl(1.5ml)，在60℃攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，將pH調(diào)節(jié)至9。加入鹽水，水相用AcOEt(2x50ml)萃取。干燥經(jīng)合并的有機(jī)萃取物(Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)硅膠快速柱體純化，AcOEt至AcOEt/MeOH97：3梯度洗脫，提供73mg的標(biāo)題化合物(68％收率)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.62(dd，1H)，7.37(dd，1H)，7.26(d，1H)，6.30(dd，1H)，6.17(t，1H)，6.12(s，1H)，5.49-5.83(m，1H)，5.43(dd，1H)，4.77(t，1H)，4.32(dd，1H)，4.10-4.22(m，1H)，4.01(dd，1H)，3.71(br.s.，2H)，3.44-3.56(m，2H)，3.42(s，3H)，2.58-2.71(m，1H)，2.07-2.35(m，3H)，1.83-1.99(m，1H)，1.52-1.68(m，3H)，1.49(s，3H)，1.38-1.47(m，1H)，0.81(s，3H)LC-MS(ESIPOS)：545.25MH+[α]D25＝+190.6(c＝0.136，MeOH)列于表16的化合物按照化合物170的預(yù)先描述用適宜的烷基化劑來(lái)制備表17實(shí)施例25制備(6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S)-6,9-二氟-17-(2-氟-乙?；?-11-羥基-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-酮(化合物173)在氮?dú)夥障拢蚧衔?(0.5g，1.321mmol)的無(wú)水乙腈(20ml)溶液加入DIPEA(0.396ml，2.246mmol)和Ms-Cl(0.155ml，1.982mmol),在室溫下攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)。然后，加入TBAF(2.64ml，2.64mmol)的1MTHF溶液和氟化鉀(0.077g，1.321mmol)，在回流下加熱混合物過(guò)夜。混合物用AcOEt稀釋，有機(jī)相用水、鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮。粗制物通過(guò)快速色譜法在硅膠上純化，石油醚/AcOEt8：2至AcOEt梯度洗脫，提供標(biāo)題化合物(98％收率)。LC-MS(ESIPOS)：381.3MH+制備(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-氯-芐基)-4b,12-二氟-6b-(2-氟-乙?；?-5-羥基-4a,6a-二甲基-4a,4b,5,6,6a,6b,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-十四氫-7-氧雜-8-氮雜-并環(huán)戊二烯并[2,1-a]菲-2-酮(化合物174)如化合物9(實(shí)施例3)的預(yù)先描述，將中間體111與N-(4-氯-芐基)-羥胺反應(yīng)，以21％收率獲得化合物173。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)ppm7.36-7.44(m，2H)，7.29-7.36(m，2H)，7.27(dd，1H)，6.30(dd，1H)，6.13(s，1H)，5.49-5.79(m，1H)，5.46(dd，1H)，4.92(dd，1H)，4.67-4.94(m，1H)，4.09-4.27(m，1H)，3.95(d，1H)，3.78(d，1H)，3.45-3.60(m，1H)，3.34-3.44(m，1H)，2.59-2.69(m，1H)，1.99-2.39(m，3H)，1.72-1.96(m，1H)，1.51-1.70(m，3H)，1.49(s，3H)，1.38-1.48(m，1H)，0.84(s，3H)LC-MS(ESIPOS)：550.18MH+[α]D25＝+221.2(c＝0.2，MeOH)圖例*NMRs＝單峰d＝二重峰t＝三重峰q＝四重峰dd＝雙二重峰m＝多重峰br＝寬ESI-POS＝電噴霧正離子化LC-MS＝液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用本發(fā)明化合物的藥理學(xué)活性體內(nèi)研究實(shí)施例26脂多糖(LPS)-誘導(dǎo)的肺中性白細(xì)胞增多癥按照描述于Am.J.Respir.Crit.CareMed.Vol162.pp1455-1461，2000的經(jīng)簡(jiǎn)單修飾的方法，用肺炎癥急性模型對(duì)本發(fā)明描述的化合物的效能和作用持續(xù)時(shí)間進(jìn)行體內(nèi)評(píng)價(jià)。測(cè)試在Sprague-Dawley雄性大鼠(200g)上進(jìn)行。LPS的氣管內(nèi)滴注法引起B(yǎng)ALF中的中性白細(xì)胞濃度的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的增加，該濃度是急性進(jìn)行中的肺炎的標(biāo)志。對(duì)于產(chǎn)生75％抑制(ED75劑量)的糖皮質(zhì)激素劑量的評(píng)價(jià)試驗(yàn)，將化合物(0.01-3微摩爾/Kg體重)作為懸浮液(0.2％吐溫80，NaCl0.9％中)在LPS攻擊之前1小時(shí)氣管內(nèi)地給予。繪制試驗(yàn)化合物對(duì)LPS-誘導(dǎo)的肺中性白細(xì)胞增多癥的抑制性效果的劑量-應(yīng)答曲線，將糖皮質(zhì)激素的ED75劑量當(dāng)作該生物測(cè)定中效能的度量。本發(fā)明化合物的ED75劑量值為0.62至1.62微摩爾/Kg體重。在旨在評(píng)價(jià)作用持續(xù)時(shí)間的第二系列的實(shí)驗(yàn)中，在LPS攻擊之前的不同時(shí)間點(diǎn)(16h，24h)將化合物以ED75劑量作為懸浮液氣管內(nèi)地給予。于16小時(shí)，某些化合物顯示高于50％的百分比抑制。最有意義的化合物在LPS攻擊之前24小時(shí)給予的情況下是活性的(百分比抑制高于50％)。體外研究實(shí)施例27糖皮質(zhì)激素受體(GR)轉(zhuǎn)位測(cè)試方案根據(jù)ASSAYDrugDevel.Technol.，4(3)，263-272，2006，通過(guò)DiscoveRx(Fremont，CA)開發(fā)的酶片段互補(bǔ)(EFC)方法中的新的基于細(xì)胞的GR-轉(zhuǎn)位測(cè)試，進(jìn)行本發(fā)明化合物的GR核轉(zhuǎn)位的定量測(cè)量。不存在糖皮質(zhì)激素的情況下，糖皮質(zhì)激素受體(GR)位于胞質(zhì)中，與各種蛋白包括熱休克蛋白復(fù)合。在糖皮質(zhì)激素通過(guò)細(xì)胞膜擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)并結(jié)合至糖皮質(zhì)激素受體(GR)的情況下，其引起熱休克蛋白的釋放并且轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核并在此調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。DiscoveRx測(cè)試將b-半乳糖苷酶(b-gal)的EFC用作在工程改造的CHO-K1生物傳感器細(xì)胞中GR-轉(zhuǎn)位的指示。正如所設(shè)計(jì)的那樣，通過(guò)使用專有組的序列添加和修飾，b-gal的酶受體(EA)片段位于細(xì)胞核中。b-gal的小肽酶供體(ED)片段直接融合至GR的C-末端，并且在不存在受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞質(zhì)中局域化。在結(jié)合至GR配體之后，復(fù)合物轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核，在此處完整的酶活性通過(guò)互補(bǔ)得以恢復(fù)并且檢測(cè)到b-gal活性。于37℃在加濕的含有5％CO2和95％空氣的氣氛下，將穩(wěn)定表達(dá)b-gal的NLS-酶受體片段(EA)和b-gal的GR-酶供體(ED)片段的CHO-K1細(xì)胞保持在F12培養(yǎng)基(Invitrogen，Carlsbad，CA)中。上述培養(yǎng)基含有10％FBS，2mML-谷氨酰胺，50U/ml青霉素50μg/ml鏈霉素，和250μg/ml潮霉素和500μg/mlG418(Invitrogen)。用含有細(xì)胞膜透化劑和β-gal底物(DiscoveRx，F(xiàn)remont，CA)的PathHunter檢測(cè)試劑盒來(lái)測(cè)量GR-轉(zhuǎn)位。全部化合物用10-11至10-6M的變化濃度來(lái)篩選。測(cè)試在48-孔(105個(gè)細(xì)胞/孔)中進(jìn)行。于37℃，與篩選化合物進(jìn)行溫育2小時(shí)。通過(guò)自DiscoveRx提供的試劑盒加入檢測(cè)緩沖劑并在室溫下溫育一小時(shí)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)用CENTROLB960微量培養(yǎng)板讀板器(BertholdTechnologies)來(lái)檢測(cè)發(fā)光。用Prism-版本3.0GraphpadSoftware(SanDiego，CA)進(jìn)行EC50s的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和測(cè)定。用GR轉(zhuǎn)位試驗(yàn)測(cè)試的化合物顯示1nM至10nM的EC50。實(shí)施例28抑制LPS-誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞中的硝酸氧化物產(chǎn)生在基于巨噬細(xì)胞鼠類的體外模型中，將細(xì)胞系RAW264.7用于測(cè)試本發(fā)明皮質(zhì)類固醇的抗炎效果。在炎性過(guò)程期間，通過(guò)可誘導(dǎo)的NO合成酶同種型(iNOS)產(chǎn)生大量硝酸氧化物(NO)。在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中一般使用細(xì)菌脂多糖(LPS)來(lái)在巨噬細(xì)胞中刺激炎性反應(yīng)。在不含酚磺酞的培養(yǎng)基(RPMI補(bǔ)充有熱滅活10％胎牛血清，2mM谷氨酰胺，100U/ml青霉素和0.1mg/ml鏈霉素)中生長(zhǎng)細(xì)胞。通過(guò)用LPS溫育細(xì)胞24小時(shí)至100ng/ml的最終濃度來(lái)引起細(xì)胞刺激。使用本發(fā)明化合物的處理這樣進(jìn)行：在LPS暴露之前15分鐘，加入裝載于DMSO(0.1％最終濃度)的所述化合物至最終希望濃度。作為硝酸氧化物產(chǎn)生的指標(biāo)，在條件培養(yǎng)基中用Griess比色反應(yīng)測(cè)量亞硝酸濃度(J.Neuroimmunol.,150，29-36，2004)。用Prism-版本3.0GraphpadSoftware(SanDiego，CA)進(jìn)行IC50s的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和測(cè)定。所測(cè)本發(fā)明化合物IC50值的為0.06至5.3nM。實(shí)施例29[3H]-地塞米松結(jié)合測(cè)試本專利申請(qǐng)描述的化合物的糖皮質(zhì)激素受體親和力用放射性配體結(jié)合測(cè)試來(lái)評(píng)價(jià)，如IRLPress，OxfordUniversityPress，247-253，1992的描述。人類淋巴母細(xì)胞細(xì)胞系IM-9(ACC117；DSMZ)已被用作可溶性糖皮質(zhì)激素受體來(lái)源而[3H]-地塞米松(GEHealthcare；SA34μCi/nmol)被用作放射性配體來(lái)源(Invest.Ophtalmol.Vis.Sci.37，805-813，1996)。在過(guò)量未標(biāo)記倍氯米松(10μM)存在性評(píng)價(jià)非特異性結(jié)合。在接近[3H]-地塞米松Kd值(1.5-2nM)的放射性配體濃度重復(fù)進(jìn)行結(jié)合實(shí)驗(yàn)。在0℃避光溫育樣品16-18小時(shí)。加入10mMpH7.4Tris、1mMEDTA中2％活性碳和0.5％右旋糖酐的混合物來(lái)終止反應(yīng)。在0℃溫育10分鐘之后，于4500rpm離心樣品10分鐘。將樣品上清液的等分試樣置于含有3ml閃爍混合物Filtercount(PerkinElmer)的小瓶，用PerkinElmer2500TRbeta計(jì)數(shù)器來(lái)計(jì)數(shù)。所測(cè)本發(fā)明化合物的IC50值為0.5至2nM。實(shí)施例30動(dòng)力學(xué)表征：肺部保留肺部保留通過(guò)兩種參數(shù)測(cè)量：MRTL(肺中平均停留時(shí)間)，也即化合物在肺中的停留，其是在氣管內(nèi)給藥1μmol/kg之后在肺勻化之后測(cè)定的化合物在大鼠肺中的最后可測(cè)濃度的時(shí)間；以及C48L/C0.5L(％)，也即在氣管內(nèi)給藥48小時(shí)之后化合物在肺中的量與在給藥0.5小時(shí)之后相同化合物在肺中的量的百分比。MRTL和C48L/C0.5L(％)是單劑量肺部給藥之后藥物效果持續(xù)時(shí)間的兩種有意義的和預(yù)測(cè)性的參數(shù)。本發(fā)明化合物顯示很緩慢的肺部消除，其中MRTL高于20小時(shí)而C48L/C0.5L高于20％。