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新的噬菌體、其組合物以及它們的制備方法和應用與流程

文檔序號:12346307閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.新的噬菌體,其特征在于,所述噬菌體為肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12),其中肌尾噬菌體BP-66的保藏編號為CCTCC NO:M 2015146,肌尾噬菌體BP-63的保藏編號為CCTCC NO:M 2015145,長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)保藏編號為CCTCC NO:M 2015141。

2.根據(jù)權利要求1所述的噬菌體,其特征在于所述肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)具有SEQ ID NO:1的核苷酸序列;肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)具有SEQ ID NO:2的核苷酸序列;或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)具有SEQ ID NO:3的核苷酸序列。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的噬菌體,其特征在于,所述肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)不含毒力基因或不良基因。

4.根據(jù)權利要求1或2所述的噬菌體,其特征在于,所述肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)不識別非致病性細菌。

5.根據(jù)權利要求4所述的噬菌體,其特征在于:所述非致病性細菌包括肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)不可識別57株非致病性細菌、肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)不可識別56株非致病性細菌、或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)不可識別57株非致病性細菌。

6.根據(jù)權利要求1或2所述的噬菌體,其特征在于,所述肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)不識別非宿主性致病性細菌。

7.根據(jù)權利要求6所述的噬菌體,其特征在于,所述非宿主性致病細菌為184株致病性細菌。

8.權利要求1-7任一所述肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、 肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)在裂解沙門氏菌中的應用。

9.根據(jù)權利要求8所述的應用,其特征在于:所述的沙門氏菌包括肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)可裂解35株血清型沙門氏菌、肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)可裂解的38株血清型沙門氏菌、或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)可裂解的22株血清型沙門氏菌。

10.根據(jù)權利要求8所述的應用,其特征在于:所述沙門氏菌包括肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)可裂解的22株不同血清型腸道沙門氏菌、肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)可裂解的25株不同血清型腸道沙門氏菌、或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)可裂解的24株不同血清型腸道沙門氏菌。

11.權利要求1所述肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的制備方法,其特征在于,所述制備方法包括:

1-1)采集加拿大蒙特利爾污水處理廠水樣離心取上清液,然后與LB液體培養(yǎng)基與處于對數(shù)期的沙門氏菌均勻混合,于37℃過夜培養(yǎng),富集噬菌體;

1-2)將樣本富集液離心,取上清液除菌得到含有噬菌體的濾液,取濾液與其宿主沙門氏菌菌液均勻混合,靜置使其與細菌表面的受體充分結合;

1-3)將上述混合液加入半固體瓊脂培養(yǎng)基中,混勻后立即鋪于已凝固的固體瓊脂平板上進行培養(yǎng),形成噬菌斑后取噬菌斑,接種于液體培養(yǎng)基中,加入沙門氏菌菌液并混勻過夜培養(yǎng),3500rpm離心10min取上清后以細菌濾膜過濾,采用雙層平板法觀察噬菌斑形態(tài);

1-4)重復步驟3)的操作3-5次后,即可得形狀和大小一致的噬菌斑,即得肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)。

12.權利要求1所述的肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、肌 尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的發(fā)酵方法:

2-1)取肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)或長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的菌落,接種到LB培養(yǎng)液中振蕩得到宿主菌懸液;

2-2)將菌懸液稀釋轉接到LB培養(yǎng)液,振蕩培養(yǎng)至對數(shù)前期并測定其菌懸液濃度;

2-3)調節(jié)肌尾噬菌體BP-66或長尾噬菌體BP-12的發(fā)酵初始pH值為6、肌尾噬菌體BP-63發(fā)酵初始pH值為2;

2-4)采用火焰接種法接種,向發(fā)LB液體培養(yǎng)基中分別接入噬菌體和對數(shù)期宿主菌液并發(fā)酵,發(fā)酵過程中通入無菌空氣,并加入消泡劑;

2-5)發(fā)酵結束后,將噬菌體與宿主菌的全部混合液取出并離心,上清液經(jīng)真空抽氣泵抽濾至無菌過濾器裝置內,得到噬菌體發(fā)酵液并于4℃下保存,即得。

13.根據(jù)權利要求11或12所述的方法,其特征在于,所述LB培養(yǎng)液或LB固體培養(yǎng)基的配方為:胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化鈉10g,蒸餾水1000ml,pH 7.0。

14.一種噬菌體組合物,其特征在于,所述組合物含有肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)和長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)中的任意兩種或三種的組合物。

15.根據(jù)權利要求14所述的組合物,其特征在于,所述噬菌體組合物包括含有肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)和長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)。

16.根據(jù)權利要求15所述的組合物,其特征在于,所述組合物中肌尾噬菌體BP-66(Myoviridae sp.BP-66)、肌尾噬菌體BP-63(Myoviridae sp.BP-63)和長尾噬菌體BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的生物量比為1∶1∶1。

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