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癌癥靶向基因-溶瘤腺病毒的構(gòu)建方法與流程

文檔序號(hào):11936674閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種癌癥靶向基因-溶瘤腺病毒的構(gòu)建方法,其特征在于,所述方法包括在細(xì)菌中進(jìn)行同源重組取代在細(xì)胞中進(jìn)行同源重組,以獲得溶瘤腺病毒攜帶抗癌基因的質(zhì)粒和病毒。

2.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:

(A)穿梭質(zhì)粒pSW-X的構(gòu)建:在pXC2中,將五型腺病毒基因組上的正常E1A或E1B改為能提高五型腺病毒癌癥靶向性的mE1A或mE1B同時(shí)還帶有基因,用XhoI和MfeI酶切,然后與XhoI和MfeI切開的pShuttle質(zhì)粒相結(jié)合,構(gòu)建pSW-X;

(B)腺病毒大質(zhì)粒pBGH581的構(gòu)建:將含腺病毒E3區(qū)的pBHGE3用HindIII酶切,然后與經(jīng)SpeI或SrfI線性化的pAdEasy-1共轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BJ5183中進(jìn)行同源重組,獲得腺病毒大質(zhì)粒pBHG581;

(C)pOV-gene的構(gòu)建:將步驟(A)中所述pSW-X用PmeI線性化后,與步驟(B)中所述pBHG581共轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BJ5183中進(jìn)行同源重組,獲得pOV-gene。

(D)將步驟(C)中所述pOV-gene經(jīng)PacI線性化,轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞中包裝,獲得癌癥靶向基因-溶瘤腺病毒。

3.如權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建方法制備獲得的溶瘤腺病毒攜帶抗癌基因的質(zhì)粒和病毒。

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