一種殼聚糖熒光標記的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種殼聚糖熒光標記的方法，屬于化學材料傳感領域。以Cu2+為媒介將4,4-偶氮-1H-1,2,4-三唑-5-酮(ZTO)與羧甲基殼聚糖配位到一起形成新的殼聚糖氮雜環(huán)金屬配合物，實現(xiàn)對羧甲基殼聚糖的熒光標記，本方法操作簡單，成本低廉，穩(wěn)定時間長，熒光量子產率高。
【專利說明】一種殼聚糖焚光標記的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種殼聚糖熒光標記的方法，屬于化學材料傳感領域。
【背景技術】
[0002] 殼聚糖是由甲殼素脫去乙?；漠a物，其大分子鏈上分布著許多氨基和羥基，含 有親水基和疏水基。殼聚糖結構上的特殊性以及高分子化合物的物理特性，使之與許多離 子，有機物，生物分子等具有離子交換，螯合，吸附等作用。殼聚糖具有許多優(yōu)良特性，比如 生物相容性，生物降解性，多功能性和低細胞毒性等，但其只溶于稀酸和某些特定的溶劑， 大大限制了它的應用。羧甲基殼聚糖是殼聚糖經羧甲基化后的衍生物，殼聚糖經羧甲基化 反應后，其功能性質提高，被賦予了水溶性，比起原結構和合成聚合物，這類改性殼聚糖具 有更高的親水性，更好生物相容性，更容易處理的物理形態(tài)和更強的生物降解性。從分子結 構看，在羧甲基殼聚糖分子中含有-0H、-C00H、-NH-等基團，因而羧甲基殼聚糖對過渡金屬 以及稀土金屬離子甚至堿土金屬離子均有極好的絡合能力，可制備羧甲基殼聚糖基金屬 配合物材料。羧甲基殼聚糖基金屬配合物材料兼?zhèn)淞藲ぞ厶羌敖饘匐x子的種種特性（如羧 甲基殼聚糖的高分子特性、PH響應性、良好的生理活性及金屬離子的配位作用等），并具有 一些新的特性（如人工模擬酶），使得配合物材料的應用途徑大大擴展，可用做酶固定化 齊U、分離膜、人工尿素吸附劑、納米微晶的生長誘導劑、化學催化劑、植物生長調節(jié)劑以及金 屬分離及含量檢測等。
[0003] 熒光標記技術是指利用一些能發(fā)熒光的物質共價結合或物理吸附在所要研究分 子的某個基團上，通過研究其熒光特性來提供被研究對象的信息。4, 4-偶氮-1H-1，2, 4-三 唑-5-酮（ZTO)分子易于與金屬配位且由于具有較強的共軛效應能表現(xiàn)出很強的熒光，在 熒光標記領域的潛力很大。殼聚糖的熒光標記通常使用將殼聚糖的活潑氨基或者羥基通過 化學反應的方法，將熒光基團嫁接到殼聚糖上。此外，殼聚糖的熒光標記還可以通過納米粒 子摻雜的方法實現(xiàn)。然而，這些方法步驟相對比較繁瑣，且分離提純難度較大。
【發(fā)明內容】
[0004] 本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術繁瑣、提純難度較大的問題，提供一種殼聚糖 突光標記的方法，本方法操作簡單，成本低廉，穩(wěn)定時間長，突光量子產率高。
[0005] 本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現(xiàn)的。
[0006] -種殼聚糖熒光標記的方法，具體步驟如下：
[0007] 步驟一、配制N，N-二甲基甲酰胺（DMF)或二甲亞砜（DMSO)與水的混合溶液，其中 水的體積百分比不超過溶液總體積的80% ;
[0008] 步驟二、將ZTO與殼聚糖加入到步驟一所得的混合溶液中，得到溶液A ;摩爾比按 照ZT0:殼聚糖=1 :1?1 :5
[0009] 步驟三、將銅鹽加入到步驟一所得的混合溶液中，制備出濃度為lxl〇_3mol/L的 Cu 2+溶液；
[0010] 步驟四、將步驟二所得的溶液A與步驟三所得的Cu2+溶液混合；溶液A與Cu 2+溶 液的體積比為1 :1?1:50 ;得到殼聚糖熒光標記物溶液。
[0011] 所述殼聚糖包括普通殼聚糖、羧甲基殼聚糖、季銨鹽殼聚糖；
[0012] 原理：羧甲基殼聚糖其分子中含有-OH、_NH2、-COOH等基團，能與金屬離子發(fā)生配 位作用；ZTO含有C = 0、-NH-等基團也是較好的配位受體。通過選取適當?shù)慕饘匐x子，使 得羧甲基殼聚糖與ZTO同時與金屬離子配位，對殼聚糖進行熒光標記。其中，ZTO的結構如 下所示：
[0013]
【權利要求】
1. 一種殼聚糖熒光標記的方法，其特征在于：具體步驟如下： 步驟一、配制N，N-二甲基甲酰胺（DMF)或二甲亞砜（DMSO)與水的混合溶液，其中水的 體積百分比不超過溶液總體積的80% ; 步驟二、將ZTO與殼聚糖加入到步驟一所得的混合溶液中，得到溶液A ;ZTO :殼聚糖的 摩爾比為1 :1?1 :5 步驟三、將銅鹽加入到步驟一所得的混合溶液中，制備出濃度為lxl〇_3mol/L的Cu2+溶 液； 步驟四、將步驟二所得的溶液A與步驟三所得的Cu2+溶液混合；溶液A與Cu2+溶液的 體積比為1 :1?1:50 ;得到殼聚糖熒光標記物溶液。
2. 如轉了一圈1所述的一種殼聚糖熒光標記的方法，其特征在于：所述殼聚糖包括普 通殼聚糖、羧甲基殼聚糖、季銨鹽殼聚糖。
【文檔編號】C08B37/08GK104292362SQ201410353267
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年7月23日 優(yōu)先權日:2014年7月23日
【發(fā)明者】金韶華, 束慶海, 陳樹森, 陳煜 , 李麗潔, 藺鵬超 申請人:北京理工大學