一種使用切向流過濾純化依諾肝素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種使用切向流過濾純化依諾肝素的方法，包括以下步驟：a、預(yù)準(zhǔn)備；b、參數(shù)設(shè)置；c、設(shè)置泵的流速；d、濃縮階段；e、脫除低分子雜質(zhì)和鹽；f、完成超濾；g、指標(biāo)檢測(cè)。本發(fā)明提供的使用切向流過濾技術(shù)（TFF）純化依諾肝素的方法，在依諾肝素脫鹽濃縮除雜中的應(yīng)用，使得過濾滯留體積小，產(chǎn)品收率高，一步實(shí)現(xiàn)除雜脫鹽濃縮，快速，高效溫和，縮短操作時(shí)間和可操作性，降低成本；通過實(shí)時(shí)工藝數(shù)據(jù)記錄而實(shí)現(xiàn)直接、簡(jiǎn)便穩(wěn)定可靠地從研發(fā)規(guī)模放大到生產(chǎn)規(guī)模。
【專利說明】一種使用切向流過濾純化依諾肝素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及依諾肝素的領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種使用切向流過濾純化依諾肝素的方法，應(yīng)用于依諾肝素的純化。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉(Heparin)是廣泛存在于人和哺乳動(dòng)物組織中的生物活性物質(zhì)，屬于天然黏多糖類，其化學(xué)結(jié)構(gòu)由右旋葡萄糖醛酸和右旋葡萄糖胺交替連接而成，分子量分布5，000-30，000道爾頓(平均分子量為20，000道爾頓)。肝素鈉是迄今為止人類已知的分子結(jié)構(gòu)最復(fù)雜的有機(jī)化合物之一。肝素鈉具有很強(qiáng)的抗凝血、抗血栓功能，即抗II a和抗Xa功能。長(zhǎng)期使用普通肝素鈉有誘導(dǎo)血小板減少癥的風(fēng)險(xiǎn)(3%)，而血小板減少癥能導(dǎo)致血栓癥和死亡率的增加。
[0003]依諾肝素納(EnoxaparinSodium)為低分子肝素類(low molecularweightheparin,簡(jiǎn)稱LMWH)品種之一,主要應(yīng)用于抗血栓、抗凝血、治療急性心梗和不穩(wěn)定性心絞痛等。其抗血機(jī)理復(fù)雜，適應(yīng)性比較廣泛，對(duì)凝血的各個(gè)環(huán)節(jié)都有作用，擁有廣泛的市場(chǎng)前景。目前依諾肝素的生產(chǎn)主要通過肝素在堿性條件下裂解后，用有機(jī)溶劑沉淀、烘干、透析/超濾，凍干等純化手段得到藥用級(jí)依諾肝素。
[0004]與普通肝素鈉相比，“依諾肝素鈉”具有相似的抗凝效能，但是引起血小板減少的副作用明顯降低，出血并發(fā)癥亦減少、皮下注射吸收好、體內(nèi)半衰期較長(zhǎng)等諸多優(yōu)點(diǎn)，市場(chǎng)占有率約占肝素類產(chǎn)品2/3以上。 [0005]當(dāng)前依諾肝素鈉純化手段中的透析方法存在換水量大，且不能自動(dòng)操作，透析操作時(shí)間長(zhǎng)，放大過程可操作性差，凍干過程含水量高導(dǎo)致能耗高等缺陷，而目前使用的普通的超濾技術(shù)處理量受限制，從實(shí)驗(yàn)室階段到放大過程數(shù)據(jù)參考性不強(qiáng)，不能夠很好地預(yù)測(cè)小試到中試以及規(guī)模生產(chǎn)所需要的過程參數(shù)，從而影響了整個(gè)生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種使用切向流過濾純化依諾肝素的方法，在依諾肝素脫鹽濃縮除雜中的應(yīng)用，使得過濾滯留體積小，產(chǎn)品收率高，一步實(shí)現(xiàn)除雜脫鹽濃縮，快速，高效溫和，縮短操作時(shí)間和可操作性，降低成本；通過實(shí)時(shí)工藝數(shù)據(jù)記錄而實(shí)現(xiàn)直接、簡(jiǎn)便穩(wěn)定可靠地從研發(fā)規(guī)模放大到生產(chǎn)規(guī)模。
[0007]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是:提供了一種使用切向流過濾純化依諾肝素的方法，包括以下步驟:
a、預(yù)準(zhǔn)備:將依諾肝素樣品溶解在純水中，定容后然后裝至端口處理容器中形成依諾肝素溶液，并連接緩沖液容器，滲透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零；
b、參數(shù)設(shè)置:壓力監(jiān)測(cè)器和泵通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計(jì)算機(jī)，在計(jì)算機(jī)內(nèi)通過軟件進(jìn)行參數(shù)設(shè)置；
C、設(shè)置泵的流速:關(guān)閉透過液端口，斷開端口處理容器與緩沖液容器，開啟泵，通過泵從端口處理器中抽取依諾肝素溶液，通過膜上出液口的管道進(jìn)入中空纖維膜組件，壓力傳感器將數(shù)據(jù)反饋給壓力監(jiān)測(cè)器，依諾肝素溶液進(jìn)入膜上回流液口的管道回流，通過自動(dòng)背壓閥回流進(jìn)入端口處理容器中；
d、濃縮階段:使用計(jì)算機(jī)開始開始采集數(shù)據(jù)，運(yùn)行5分鐘后打開透過液端口，泵從端口處理容器中抽取依諾肝素溶液，通過膜上出液口的管道進(jìn)入中空纖維膜組件，壓力傳感器將數(shù)據(jù)反饋給壓力監(jiān)測(cè)器，依諾肝素溶液的小部分液體通過滲透口的管道滲透至液體收集器中，依諾肝素溶液的大部分液體通過膜上回流液口的管道回流進(jìn)入端口處理容器中，逐步提高TMP，設(shè)置TMP來改變滲透口的管道內(nèi)滲透液的流速，依諾肝素溶液進(jìn)入濃縮階段，同時(shí)對(duì)低分子雜質(zhì)及鹽進(jìn)行脫除；
e、脫除低分子雜質(zhì)和鹽:當(dāng)依諾肝素溶液濃縮至一定體積后，在緩沖液容器中加入純水，由于管道系統(tǒng)為內(nèi)封閉狀態(tài)，當(dāng)緩沖液容器中滲透出液體時(shí)，端口處理容器內(nèi)部形成真空，將緩沖液容器中純水吸入，依諾肝素溶液進(jìn)入恒體積換液階段，實(shí)現(xiàn)低分子雜質(zhì)和鹽的脫除，同時(shí)實(shí)現(xiàn)脫除低分子多糖而調(diào)節(jié)分子量分布，觀察壓力及滲透流量變化，調(diào)控TMP來改變滲透流速；
f、完成超濾:通過測(cè)定滲透液中鹽含量，確定換水倍數(shù)，當(dāng)換水達(dá)到4-8倍時(shí)，依諾肝素溶液完成超濾，斷開緩沖液容器，濃縮依諾肝素至難以有液體滴出，計(jì)算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉泵，終止依諾肝素超濾的實(shí)驗(yàn)，清洗設(shè)備；
g、指標(biāo)檢測(cè):將依諾肝素肝素樣品凍干，稱取質(zhì)量，計(jì)算收率，產(chǎn)品指標(biāo)檢測(cè)。
[0008]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述的滲透天平通過透過液端口與中空纖維膜組件相連接，所述的中空纖維膜組件分別與自動(dòng)背壓閥和壓力監(jiān)測(cè)器相連接，所述的端口處理容器連接在自動(dòng)背壓閥和壓力監(jiān)測(cè)器之間，所述的緩沖液容器與端口處理容器相連接，所述的計(jì)算機(jī)與壓力監(jiān)測(cè)器外接，所述的液體收集器放置在滲透天平上面，所述的壓力監(jiān)測(cè)器設(shè)置在泵上。
[0009]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述的泵的流速70_90ml/min，控制剪切力250(T3500/s。
[0010]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述的中空纖維膜組件包括中空纖維膜過濾器以及超濾膜，所述的超濾膜設(shè)置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部。
[0011]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述的超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量lkD。
[0012]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述的中空纖維膜過濾器上設(shè)置有三個(gè)接口，包括滲透口、膜上出液口以及膜上回流液口，所述的滲透口設(shè)置在中空纖維膜過濾器的一側(cè)中部與透過液端口相連接，所述的膜上回流液口和膜上出液口分別安裝在中空纖維膜過濾器的頂部和底部。
[0013]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述的壓力傳感器包括Pp壓力傳感器、Pr壓力傳感器和Pf壓力傳感器，所述的Pp壓力傳感器和Pf壓力傳感器分別安裝在膜上出液口和膜上回流液口的位置，所述的Pr壓力傳感器安裝在滲透口的位置。
[0014]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明的使用切向流過濾純化依諾肝素的方法，在依諾肝素脫鹽濃縮除雜中的應(yīng)用 ，使得過濾滯留體積小，產(chǎn)品收率高，一步實(shí)現(xiàn)除雜脫鹽濃縮，快速，高效溫和，縮短操作時(shí)間和可操作性，降低成本；通過實(shí)時(shí)工藝數(shù)據(jù)記錄而實(shí)現(xiàn)直接、簡(jiǎn)便穩(wěn)定可靠地從研發(fā)規(guī)模放大到生產(chǎn)規(guī)模?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0015]為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖，其中:
圖1是本發(fā)明的使用超濾純化依諾肝素的方法一較佳實(shí)施例的流程圖；
圖2是依諾肝素的超濾方法使用設(shè)備的結(jié)構(gòu)框圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0017]請(qǐng)參閱圖1，本發(fā)明實(shí)施例包括:
一種使用超 濾純化依諾肝素的方法，包括以下步驟:
a、預(yù)準(zhǔn)備:將依諾肝素樣品溶解在純水中，定容后然后裝至端口處理容器中形成依諾肝素溶液，并連接緩沖液容器，滲透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零；
b、參數(shù)設(shè)置:壓力監(jiān)測(cè)器和泵通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計(jì)算機(jī)，在計(jì)算機(jī)內(nèi)通過軟件進(jìn)行參數(shù)設(shè)置；
C、設(shè)置泵的流速:關(guān)閉透過液端口，斷開端口處理容器與緩沖液容器，開啟泵，通過泵從端口處理器中抽取依諾肝素溶液，通過膜上出液口的管道進(jìn)入中空纖維膜組件，壓力傳感器將數(shù)據(jù)反饋給壓力監(jiān)測(cè)器，依諾肝素溶液進(jìn)入膜上回流液口的管道回流，通過自動(dòng)背壓閥回流進(jìn)入端口處理容器中；
d、濃縮階段:使用計(jì)算機(jī)開始開始采集數(shù)據(jù)，運(yùn)行5分鐘后打開透過液端口，泵從端口處理容器中抽取依諾肝素溶液，通過膜上出液口的管道進(jìn)入中空纖維膜組件，壓力傳感器將數(shù)據(jù)反饋給壓力監(jiān)測(cè)器，依諾肝素溶液的小部分液體通過滲透口的管道滲透至液體收集器中，依諾肝素溶液的大部分液體通過膜上回流液口的管道回流進(jìn)入端口處理容器中，逐步提高TMP，設(shè)置TMP來改變滲透口的管道內(nèi)滲透液的流速，依諾肝素溶液進(jìn)入濃縮階段，同時(shí)對(duì)低分子雜質(zhì)及鹽進(jìn)行脫除；
e、脫除低分子雜質(zhì)和鹽:當(dāng)依諾肝素溶液濃縮至一定體積后，在緩沖液容器中加入純水，由于管道系統(tǒng)為內(nèi)封閉狀態(tài)，當(dāng)緩沖液容器中滲透出液體時(shí)，端口處理容器內(nèi)部形成真空，將緩沖液容器中純水吸入，依諾肝素溶液進(jìn)入換水階段，實(shí)現(xiàn)低分子雜質(zhì)和鹽的脫除，同時(shí)對(duì)低分子多糖脫除而調(diào)節(jié)分子量分布，觀察壓力及滲透流量變化，調(diào)控TMP來改變滲透流速；
f、完成超濾:通過測(cè)定滲透液中鹽含量，確定換水倍數(shù)，當(dāng)換水達(dá)到4-8倍時(shí)，依諾肝素溶液完成超濾，斷開緩沖液容器，濃縮依諾肝素至難以有液體滴出，計(jì)算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉泵，終止依諾肝素超濾的實(shí)驗(yàn)，清洗設(shè)備；
g、指標(biāo)檢測(cè):將依諾肝素肝素樣品凍干，稱取質(zhì)量，計(jì)算收率，產(chǎn)品指標(biāo)檢測(cè)。[0018]上述中，步驟b中的參數(shù)設(shè)置包括:
1.日期；
2.過濾組件零件號(hào)，輸入過濾零件號(hào)后，包括表面積、近似纖維支數(shù)、纖維長(zhǎng)度、剪切率指南及膜類型在內(nèi)的過濾信息會(huì)自動(dòng)輸入；
3.序號(hào)；
4.通過泵頭和管道校正的管道尺寸,如:tubingsize: 14,
5.組件表格日期。
[0019]完成超濾后，需要外接少量純凈水沖洗超濾管道并收集，然后用純凈水沖洗超濾系統(tǒng)，最后使用0.4%氫氧化鈉溶液清洗超濾膜,并濕潤(rùn)保存。
[0020]進(jìn)一步的，所述的泵的流速為70-90ml/min，控制剪切力250(T3500/s。
[0021]如圖2所示，所述的滲透天平通過透過液端口與中空纖維膜組件相連接，所述的中空纖維膜組件分別與自動(dòng)背壓閥和壓力監(jiān)測(cè)器相連接，所述的端口處理容器連接在自動(dòng)背壓閥和壓力監(jiān)測(cè)器之間，所述的緩沖液容器與端口處理容器相連接，所述的計(jì)算機(jī)與壓力監(jiān)測(cè)器外接，所述的液體收集器放置在滲透天平上面，所述的壓力監(jiān)測(cè)器設(shè)置在泵上。
[0022]本發(fā)明中，所述的中空纖維膜組件包括中空纖維膜過濾器以及超濾膜，所述的超濾膜設(shè)置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部。其中，所述的超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量lkD。 [0023]上述中，所述的中空纖維膜過濾器上設(shè)置有三個(gè)接口，包括滲透口、膜上出液口以及膜上回流液口，所述的滲透口設(shè)置在中空纖維膜過濾器的一側(cè)中部與滲透鉗相連接，所述的膜上回流液口和膜上出液口分別安裝在中空纖維膜過濾器的頂部和底部。
[0024]再進(jìn)一步的，所述的壓力傳感器包括Pp壓力傳感器、Pr壓力傳感器和Pf壓力傳感器，所述的Pp壓力傳感器和Pf壓力傳感器分別安裝在膜上出液口和膜上回流液口的位置，所述的Pr壓力傳感器安裝在滲透口的位置。
[0025]實(shí)例一:
a、稱取依諾肝素92mg溶解于IOml超純水中，定容，振蕩均勻，置于端口處理容器中，并連接緩沖液容器，滲透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零；
b、壓力監(jiān)測(cè)器和蠕動(dòng)泵通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計(jì)算機(jī)，在計(jì)算機(jī)內(nèi)通過軟件進(jìn)行參數(shù)設(shè)置，選用超濾膜為lkD, 115cm2 ；
C、設(shè)定蠕動(dòng)泵的流速70ml/min，剪切力2648/s，關(guān)閉透過液端口，斷開端口處理容器與緩沖液容器，開啟蠕動(dòng)泵，依諾肝素溶液進(jìn)入膜上回流液管道回流至端口處理容器中；
d、使用計(jì)算機(jī)開始開始采集數(shù)據(jù)，記錄，運(yùn)行5分鐘后打開透過液端口，蠕動(dòng)泵從端口處理容器中抽取依諾肝素溶液中的小部分液體，可通過滲透口的管道滲透至液體收集器中，大部分液體通過膜上回流液口的管道回流進(jìn)入端口處理容器中，依諾肝素溶液進(jìn)入濃縮階段，同時(shí)對(duì)低分子雜質(zhì)及鹽進(jìn)行脫除；
e、將自動(dòng)背壓閥調(diào)節(jié)至手動(dòng)檔，進(jìn)行TMP壓力設(shè)置，逐步升至10；
f、當(dāng)依諾肝素溶液濃縮至一定體積時(shí)，在緩沖液容器中加入純水，對(duì)依諾肝素溶液進(jìn)行脫鹽，除低分子多糖，調(diào)節(jié)分子量分布，調(diào)節(jié)TMP至10時(shí)，測(cè)定超濾滲透流速為0.95ml/min ；TMP 為 12 時(shí)，滲透流速 1.05ml/min ；
g、當(dāng)換水達(dá)到3.5倍時(shí)，依諾肝素溶液滲透液測(cè)定無鹽，斷開緩沖液容器，濃縮依諾肝素至難以有液體滴出，計(jì)算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，終止依諾肝素超濾的實(shí)驗(yàn)。凍干依諾肝素產(chǎn)品得到79mg，產(chǎn)品合格。
[0026]實(shí)例二:
a、稱取依諾肝素98mg溶解于IOml超純水中，定容，振蕩均勻，置于端口處理容器中，并連接緩沖液容器，滲透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零；
b、壓力監(jiān)測(cè)器和蠕動(dòng)泵通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計(jì)算機(jī)，在計(jì)算機(jī)內(nèi)通過軟件進(jìn)行參數(shù)設(shè)置，選用超濾膜為lkD, 115cm2 ；
C、設(shè)定蠕動(dòng)泵的流速80ml/min，剪切力3018/s，關(guān)閉透過液端口，斷開端口處理容器與緩沖液容器，開啟蠕動(dòng)泵；
d、計(jì)算機(jī)開始采集數(shù)據(jù)，此時(shí)為全回流階段，運(yùn)行5分鐘后打開透過液端口；
e、設(shè)置TMP為8.0，蠕動(dòng)泵從端口處理容器中抽取依諾肝素溶液，小部分滲透至液體收集器中，大部分回流進(jìn)入端口處理容器中，依諾肝素溶液進(jìn)入濃縮階段，測(cè)定此時(shí)Pf為
8.1psi，Pp 為-0. 4psi, Pr 為 7.3psi, TMP 為 8.0psi，
f、當(dāng)依諾肝素溶液濃縮至一定體積時(shí)，在緩沖液容器中加入純水，對(duì)依諾肝素溶液進(jìn)入換水脫鹽除雜，逐步調(diào)節(jié)TMP至13時(shí)，Pf為13.lpsi，Pp為-0.4psi，P r為12.3psi，TMP為 13.0psi，滲透流速為 0.90ml/min，膜通量 4.8L/m2.h ；
g、當(dāng)換水達(dá)到4.7倍時(shí)，依諾肝素溶液滲透液測(cè)定無鹽，斷開緩沖液容器，濃縮依諾肝素至難以有液體滴出，計(jì)算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，終止依諾肝素超濾的實(shí)驗(yàn)。凍干依諾肝素產(chǎn)品得到78mg，產(chǎn)品滿足USP中GPC要求。
[0027]實(shí)例三
a、稱取依諾肝素100g溶解于IOL超純水中，置于端口處理容器中，并連接緩沖液容器，滲透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零；
b、壓力監(jiān)測(cè)器和泵通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計(jì)算機(jī)，在計(jì)算機(jī)內(nèi)通過軟件進(jìn)行參數(shù)設(shè)置，選用超濾膜為lkD, 1.25m2 ；
C、設(shè)定泵的流速8L/min，剪切力為2716/s，關(guān)閉透過液端口，斷開端口處理容器與緩沖液容器，開啟泵，計(jì)算機(jī)開始采集數(shù)據(jù)，此時(shí)為全回流階段，運(yùn)行5分鐘后打開透過液端Π ；
e、設(shè)置TMP為8.0，泵從端口處理容器中抽取依諾肝素溶液，小部分滲透至液體收集器中，大部分回流進(jìn)入端口處理容器中，依諾肝素溶液進(jìn)入濃縮階段，
f、當(dāng)依諾肝素溶液濃縮至4L時(shí)，在緩沖液容器中加入純水，對(duì)依諾肝素溶液進(jìn)入換水脫鹽除雜，控制分子量分布，逐步調(diào)節(jié)TMP至13時(shí)，Pf為14.0psi, Pp為-0.4psi，Pr為12.0psi，TMP 為 13.0psi，膜通量 4L/m2.h ；
g、當(dāng)換水達(dá)到6倍時(shí)，依諾肝素溶液滲透液測(cè)定無鹽，斷開緩沖液容器，濃縮依諾肝素至難以有液體滴出，計(jì)算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉泵，終止依諾肝素超濾的實(shí)驗(yàn)。凍干依諾肝素產(chǎn)品，滿足USP中GPC要求。
[0028]本發(fā)明揭示的使用超濾純化依諾肝素的方法，在依諾肝素脫鹽濃縮除雜中的應(yīng)用，使得過濾滯留體積小，產(chǎn)品收率高，一步實(shí)現(xiàn)除雜脫鹽濃縮，快速，高效溫和，縮短操作時(shí)間和可操作性，降低成本；通過數(shù)據(jù)記錄而實(shí)現(xiàn)直接、簡(jiǎn)便地從研發(fā)規(guī)模放大到生產(chǎn)容量。
[0029]以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其它相關(guān)的【技術(shù)領(lǐng)域】，均同理包括在本 發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種使用切向流過濾技術(shù)純化依諾肝素的方法，其特征在于，包括以下步驟: a、預(yù)準(zhǔn)備:將依諾肝素樣品溶解在純水中，定容后然后裝至端口處理容器中形成依諾肝素溶液，并連接緩沖液容器，滲透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零； b、參數(shù)設(shè)置:壓力監(jiān)測(cè)器和泵通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計(jì)算機(jī)，在計(jì)算機(jī)內(nèi)通過軟件進(jìn)行參數(shù)設(shè)置； C、設(shè)置泵的流速:關(guān)閉透過液端口，斷開端口處理容器與緩沖液容器，開啟泵，通過泵從端口處理器中抽取依諾肝素溶液，通過膜上出液口的管道進(jìn)入中空纖維膜組件，壓力傳感器將數(shù)據(jù)反饋給壓力監(jiān)測(cè)器，依諾肝素溶液進(jìn)入膜上回流液口的管道回流，通過自動(dòng)背壓閥回流進(jìn)入端口處理容器中； d、濃縮階段:使用計(jì)算機(jī)開始開始采集數(shù)據(jù)，運(yùn)行5分鐘后打開透過液端口，泵從端口處理容器中抽取依諾肝素溶液，通過膜上出液口的管道進(jìn)入中空纖維膜組件，壓力傳感器將數(shù)據(jù)反饋給壓力監(jiān)測(cè)器，依諾肝素溶液的小部分液體通過滲透口的管道滲透至液體收集器中，依諾肝素溶液的大部分液體通過膜上回流液口的管道回流進(jìn)入端口處理容器中，逐步提高TMP，設(shè)置TMP來改變滲透口的管道內(nèi)滲透液的流速，依諾肝素溶液進(jìn)入濃縮階段，同時(shí)對(duì)低分子雜質(zhì)及鹽進(jìn)行脫除； e、脫除低分子雜質(zhì)和鹽:當(dāng)依諾肝素溶液濃縮至一定體積后，在緩沖液容器中加入純水，由于管道系統(tǒng)為內(nèi)封閉狀態(tài)，當(dāng)緩沖液容器中滲透出液體時(shí)，端口處理容器內(nèi)部形成真空，將緩沖液容器 中純水吸入，依諾肝素溶液進(jìn)入恒體積換液階段，實(shí)現(xiàn)低分子雜質(zhì)和鹽的脫除，同時(shí)通過脫除低分子多糖而調(diào)節(jié)分子量分布，觀察壓力及滲透流量變化，調(diào)控TMP來改變滲透流速； f、完成超濾:通過測(cè)定滲透液中鹽含量，確定換水倍數(shù)，當(dāng)換水達(dá)到4-8倍時(shí)，依諾肝素溶液完成超濾，斷開緩沖液容器，濃縮依諾肝素至難以有液體滴出，計(jì)算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉泵，終止依諾肝素超濾的實(shí)驗(yàn)，清洗設(shè)備； g、指標(biāo)檢測(cè):將依諾肝素肝素樣品凍干，稱取質(zhì)量，計(jì)算收率，產(chǎn)品指標(biāo)檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于，所述的滲透天平通過滲透鉗與中空纖維膜組件相連接，所述的中空纖維膜組件分別與自動(dòng)背壓閥和壓力監(jiān)測(cè)器相連接，所述的端口處理容器連接在自動(dòng)背壓閥和壓力監(jiān)測(cè)器之間，所述的緩沖液容器與端口處理容器相連接，所述的計(jì)算機(jī)與壓力監(jiān)測(cè)器外接，所述的液體收集器放置在滲透天平上面，所述的壓力監(jiān)測(cè)器設(shè)置在泵上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于，所述的泵的流速70-90ml/min，控制剪切力 250(T3500/s。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于，所述的中空纖維膜組件包括中空纖維膜過濾器以及超濾膜，所述的超濾膜設(shè)置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的超濾方法，其特征在于，所述的超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量lkD。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的超濾方法，其特征在于，所述的中空纖維膜過濾器上設(shè)置有三個(gè)接口，包括滲透口、膜上出液口以及膜上回流液口，所述的滲透口設(shè)置在中空纖維膜過濾器的一側(cè)中部與透過液端口相連接，所述的膜上回流液口和膜上出液口分別安裝在中空纖維膜過濾器的頂部和底部。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于，所述的壓力傳感器包括透過液(Pp)壓力傳感器、回流液(Pr)壓力 傳感器和料液(Pf)壓力傳感器，所述的Pp壓力傳感器和Pf壓力傳感器分別安裝在膜上出液口和膜上回流液口的位置，所述的Pr壓力傳感器安裝在滲透口的位置。
【文檔編號(hào)】C08B37/10GK103936889SQ201410100250
【公開日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2014年3月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月19日
【發(fā)明者】張銳, 劉向暉 申請(qǐng)人:蘇州英諾凱生物醫(yī)藥科技有限公司