專利名稱：一種超低分肝素鈉工藝研究的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及從低效價(jià)肝素鈉中將蛋白去除，得到超低分子肝素鈉。
背景技術(shù)：
肝素鈉是從豬小腸粘膜中提取的一種生化藥品，是手術(shù)中不可替代的、挽救生命的、市場不能斷檔的首選藥物。自二十世紀(jì)四十年代用于臨床以來，其應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，尤其是二十世紀(jì)九十年代以來，該產(chǎn)品臨床主要用于防止血栓形成，治療心血管病、血液病、尿毒癥等。西方國家已開始研究肝素鈉對癌癥的防治作用，其新用途不斷增加，而超低分子肝素鈉是治療血栓的主要藥物，目前世界上還未上市，我公司進(jìn)行了工藝攻關(guān)，已成功解決了治療的目的，并在臨床成功治療了上百例。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種超低分子肝素鈉工藝研究的方法，是為了攻克國內(nèi)外治療血栓的疑難雜癥，通過產(chǎn)品的逐級沉淀分離雜質(zhì)而得到的。在發(fā)明的技術(shù)方案中，包括如下步驟:一、提取1、粗品溶解:開啟水閥，加入一定量飲用水，再將肝素鈉粗品(效價(jià)在10-20usp/mg)加入到反應(yīng)罐中，邊攪邊加，按原 料與飲用水1: ￠-7)比例溶解，攪拌5-10小時(shí)至全部溶解；2、酶解:將上一步溶解液，先用鹽酸溶液調(diào)PH7.0-8.0，升溫至50_55°C之間時(shí)加入胃蛋白酶5-10g/億單位，再加入50g/億單位胰酶，50-55°C保溫4小時(shí)；3、急升溫:將上一步酶解液在I小時(shí)內(nèi)升溫至85-90°C，靜止10-30分鐘，開攪拌，通入循環(huán)水降溫，待溫度降至50-55°C時(shí)，用2-6mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)PH10.0-12.0，靜止分層20-30小時(shí)；4、底部沉淀的雜質(zhì)離心:虹吸上清，用40-100目濾袋過濾，過濾后的溶液分為上清液和下層沉淀，留上清液待沉淀，下層沉淀放離心機(jī)離心，離心后留上層離心液；二、精制1、第一次沉淀:待上述上清液和離心液溫度降至20-30°C，加入20_30g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸將濾液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí);2、第一次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積10%雙氧水，氧化15小時(shí)；3、第二次沉淀:溶液加入20_30g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí)；4、第二次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積10%雙氧水，氧化15小時(shí)；5、第三次沉淀:溶液加入20_30g/L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到45 50%，沉淀15小時(shí)；6、第三次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積10%雙氧水，氧化15小時(shí)；7、第四次沉淀:溶液加入20_30g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí)；8、第四次氧化:棄去上層乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積10雙氧水，氧化15小時(shí)；9、溶液加入20_30g/L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí)；10、將沉淀物用純化水按2-5L/億單位溶解后，用孔徑0.22-0.3微米濾膜板框機(jī)微濾，用乙醇沉淀，使乙醇濃度達(dá)75-80%，再加入23-26%的氯化鈉溶液，每I升溶液加6-10ml氯化鈉溶液，靜止沉淀10-12小時(shí)；11、將上層乙醇棄去，加入無水乙醇脫水，邊攪邊加，使乙醇濃度為97-99%，靜止24-30小時(shí)，棄去上層乙醇，將不銹鋼砂芯棒放在產(chǎn)品中，用真空泵通過管道和過濾瓶把剩余乙醇抽干，待干燥；10、將抽干的產(chǎn)品均勻放置在不銹鋼盤中，放在真空干燥箱中抽真空，用循環(huán)水加溫，溫度35-60。。，烘干70-80小時(shí)；11、包裝:將產(chǎn)品取出，稱重，使每包裝袋5kg，用封口機(jī)封口，放在鋁桶中待驗(yàn)。根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種超低分肝素鈉工藝研究，其特征在于:第四次沉淀后的溶液進(jìn)行QA取樣化驗(yàn)，測吸光度:260nm < 0.2 ；400nm < 0.03 ;分子量2000-3000道爾
頓，若不合格，繼續(xù)重復(fù)上面過程，若合格移交下一工序。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例1 一、提取1、粗品溶解:開啟水閥，加入一定量飲用水，再將肝素鈉粗品IOOKg(效價(jià)在10usp/mg)加入到反應(yīng)罐中，邊攪邊加入600L飲用水溶解，攪拌10小時(shí)；2、酶解:
將上一步溶解液，用鹽酸溶液調(diào)PH8.0，升溫至53°C時(shí)加入胃蛋白酶100g，再加入500g胰酶，50°C保溫4小時(shí)；3、急升溫:將上一步酶解液升溫至90°C，靜止30分鐘，開攪拌，通入循環(huán)水降溫，待溫度降至55°C時(shí)，用6mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)PH10.0，靜止分層30小時(shí)；4、底部沉淀的雜質(zhì)離心:虹吸上清，用40-100目濾袋過濾，過濾后的溶液分為上清液和下層沉淀，留上清液待沉淀，下層沉淀放離心機(jī)離心，離心后留上層離心液；二、精制1、第一次沉淀:待上述上清液和離心液溫度降至30°C，加入ISOOOg氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸將濾液調(diào)PH12.0，邊攪邊加濃度為95%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在達(dá)到50%，沉淀15小時(shí)；2、第一次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)PHl2.0,然后加入30L雙氧水,氧化15小時(shí)；3、第二次沉淀:溶液加入9000g氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0-7.0，邊 攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí)；4、第二次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH12.0，然后加入30L雙氧水，氧化15小時(shí)；5、第三次沉淀:溶液加入9000g氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH10.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí)；6、第三次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH12.0，然后加入30L雙氧水，氧化15小時(shí)；7、第四次沉淀:溶液加入9000g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí)；8、第四次氧化:棄去上層乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0,然后加入30L雙氧水,氧化15小時(shí)；9、溶液加入9000g/L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH10.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí)；10、將沉淀物用純化水50L溶解后，用孔徑0.22-0.3微米濾膜板框機(jī)微濾，用乙醇沉淀，使乙醇濃度達(dá)80%，再加入26%的氯化鈉溶液500ml，靜止沉淀12小時(shí)；11、將上層乙醇棄去，加入無水乙醇脫水，邊攪邊加，使乙醇濃度為97%，靜止24小時(shí)，棄去上層乙醇，將不銹鋼砂芯棒放在產(chǎn)品中，用真空泵通過管道和過濾瓶把剩余乙醇抽干，待干燥；10、將抽干的產(chǎn)品均勻放置在不銹鋼盤中，放在真空干燥箱中抽真空，用循環(huán)水加溫，溫度35-60°C，烘干70小時(shí)；11、包裝:將產(chǎn)品取出，稱重，使每包裝袋5kg，用封口機(jī)封口，放在鋁桶中待驗(yàn)。
以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的 技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種超低分肝素鈉工藝研究，其特征在于:采用多次氧化和沉淀逐級分離，得到分子量在2000-3000道爾頓，效價(jià)在10-40U/mg的超低分子肝素鈉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種超低分肝素鈉工藝研究，其特征包括如下步驟: 一、提取 (1)、粗品溶解: 開啟水閥，加入一定量飲用水，再將回收的肝素鈉粗品(效價(jià)在10-20usp/mg)加入到反應(yīng)罐中，邊攪邊加，按原料與飲用水1: ￠-7)比例溶解，攪拌5-10小時(shí)至全部溶解； (2)、酶解: 將上一步溶解液，先用鹽酸溶液調(diào)PH7.0-8.0，升溫至50-55°C之間時(shí)加入胃蛋白酶5-10g/億單位，再加入50g/億單位胰酶，50-55°C保溫4小時(shí)； (3)、急升溫: 將上一步酶解液在I小時(shí)內(nèi)升溫至85-90°C，靜止10-30分鐘，開攪拌，通入循環(huán)水降溫，待溫度降至50-55°C時(shí)，用2-6mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)PH10.0-12.0，靜止分層20-30小時(shí)； (4)、底部沉淀的雜質(zhì)離心: 虹吸上清，用40-100目濾袋過濾，過濾后的溶液分為上清液和下層沉淀，留上清液待沉淀，下層沉淀放離 心機(jī)離心，離心后留上層離心液； 二、精制 (1)、第一次沉淀: 待上述上清液和離心液溫度降至20-30°C，加入20-30g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸將濾液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí); (2)、第一次氧化:棄去上層廢乙醇,下層沉淀物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積10%雙氧水，氧化15小時(shí)； (3)、第二次沉淀:溶液加入20-30g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí)； (4)、第二次氧化:棄去上層廢乙醇,下層沉淀物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積10%雙氧水，氧化15小時(shí)； (5)、第三次沉淀:溶液加入20-30g/L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到45 50%，沉淀15小時(shí)； (6)、第三次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積10%雙氧水，氧化15小時(shí)； (7)、第四次沉淀:溶液加入20-30g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí)； (8)、第四次氧化:棄去上層乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0,然后加入體積10雙氧水,氧化15小時(shí)；(9)、溶液加入20-30g/L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95 97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到50%，沉淀15小時(shí)； (10)、將沉淀物用純化水按2-5L/億單位溶解后，用孔徑0.22-0.3微米濾膜板框機(jī)微濾，用乙醇沉淀，使乙醇濃度達(dá)75-80%，再加入23-26%的氯化鈉溶液，每I升溶液加6-10ml氯化鈉溶液，靜止沉淀10-12小時(shí)； (11)、將上層乙醇棄去，加入無水乙醇脫水，邊攪邊加，使乙醇濃度為97-99%，靜止24-30小時(shí)，棄去上層乙醇，將不銹鋼砂芯棒放在產(chǎn)品中，用真空泵通過管道和過濾瓶把剩余乙醇抽干，待干燥； (12)、將抽干的產(chǎn)品均勻放置在不銹鋼盤中，放在真空干燥箱中抽真空，用循環(huán)水加溫，溫度35-60。。，烘干70-80小時(shí)； (13)、包裝:將產(chǎn)品取出，稱重，使每包裝袋5kg，用封口機(jī)封口，放在鋁桶中待驗(yàn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種超低分肝素鈉工藝研究，其特征在于:第四次沉淀后的溶液進(jìn)行QA取樣化驗(yàn)，測 吸光度:260nm < 0.2 ；400nm < 0.03 ;分子量2000-3000道爾頓，若不合格，繼續(xù)重復(fù)上面過程，若合格移交下一工序。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種超低分肝素鈉工藝研究，技術(shù)方案是采用分子量8000道爾頓以上的肝素鈉精品提純后，對分子量2000-3000道爾頓、效價(jià)10-40U/mg的超低分子肝素鈉通過再次回收、精制得到符合藥用安全的原料藥，在歐洲及美國沒有此產(chǎn)品上市，因此，在醫(yī)藥領(lǐng)域?qū)僖活愋滤帯?br> 文檔編號C08B37/10GK103145878SQ201210551440
公開日2013年6月12日 申請日期2012年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月8日
發(fā)明者劉乃山, 遲培升, 夏襯來, 陸玉梅 申請人:青島九龍生物醫(yī)藥有限公司