專利名稱：一種高效精制粗品肝素鈉的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種粗品肝素鈉精制方法，特別是一種肝素鈉生產(chǎn)工藝方法。
背景技術(shù)：
肝素鈉是一種臨床常用的抗凝血藥物，主要從豬小腸粘膜中提取的粘多糖物質(zhì)， 具有顯著地抗凝血和防止血栓形成的作用。近年來低分子肝素鈉產(chǎn)品的涌現(xiàn)，使肝素鈉的應(yīng)用越來越廣泛。傳統(tǒng)的生產(chǎn)工藝方法是將粗品肝素鈉進(jìn)行一次或兩次氧化脫色及乙醇沉淀精制，其過氧化氫用量大(3-5% )，對肝素鈉效價損傷大，收率低。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的提供一種精制粗品肝素鈉的高效工藝方法，克服了上述常規(guī)方法存在的問題，提高了收率，增加了經(jīng)濟收益。
本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來達(dá)到，依次通過以下幾個步驟來實現(xiàn)。
1、粗品溶解將粗品肝素鈉按5_6Kg/億單位比例用純化水充分溶解；
2、第一次氧化調(diào)節(jié)pH = 9. 0-10. 0，調(diào)節(jié)料液溫度至15_20°C，按照O. 4-0. 6 % (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照O. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色8-10小時；
3、第一次沉淀調(diào)節(jié)pH = 4. 0-5. O,按照20_30g/L比例向料液中加入氯化鈉,攪拌條件下加入溫度為5-10°C的乙醇(80-95% )，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置 10-14小時；
4、第二次氧化將3中的沉淀物用純化水按照5_6Kg/億單位比例充分溶解，調(diào)節(jié) pH = 9. 0-10. 0，調(diào)節(jié)料液溫度至15-20°C，按照O. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照O. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫， 攪拌條件下氧化脫色8-10小時；
5、第二次沉淀 調(diào)節(jié)pH = 10. 0-11. 0，按照20_30g/L比例向料液中加入氯化鈉， 攪拌條件下加入溫度為5-10°C的乙醇(80-95% )，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時；
6、第三次氧化將5中的沉淀物用純化水按照5_6Kg/億單位比例充分溶解，調(diào)節(jié) pH = 9. 0-10. 0，調(diào)節(jié)料液溫度至15-20°C，按照O. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照O. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫， 攪拌條件下氧化脫色8-10小時；
7、第三次沉淀調(diào)節(jié)pH = 4. 0-5. 0，按照20_30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為5-10°C乙醇(80-95%)沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時；
8、第四次氧化將7中的沉淀物用純化水按照5_6Kg/億單位比例充分溶解，調(diào)節(jié) pH = 9. 0-10. 0，調(diào)節(jié)料液溫度至15-20°C，按照O. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照O. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫， 攪拌條件下氧化脫色8-10小時；
9、第四次沉淀調(diào)節(jié)pH = 10. 0-11. 0，按照20_30g/L比例向料液中加入氯化鈉， 用溫度為5-10°C乙醇(80-95%)沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌， 靜置10-14小時；
將9)中所得沉淀物用純化水按照2_3Kg比例充分溶解后過濾，用乙醇沉淀后脫水干燥即得高收率高效價肝素鈉精品。
本技術(shù)方案的有益效果是經(jīng)過多次梯度氧化脫色和酸堿交替沉淀，提高了收率，增加了收益。經(jīng)本方法精制粗品肝素鈉，精品活性效價收率可達(dá)85-90%，單位效價彡180U/mg。傳統(tǒng)工藝方法精制粗品肝素鈉，精品活性效價收率只有65-80%，若要求其單位效價彡180U/mg，收率將更低。
第一，本技術(shù)方案中，使用過氧化氫進(jìn)行梯度氧化脫色，O. 4-0.6% (v/v)與 O. 2-0.4% (v/v)梯度加入，前者氧化4-6小時，后者氧化8-10小時。減少了肝素鈉在水溶液中接觸過氧化氫的濃度，降低了過氧化氫對肝素鈉效價的破壞。
第二，本技術(shù)方案中，3，5，7，9步驟中，沉淀pH值采用酸堿交替法，3與7步驟中采用pH = 4. 0-5. 0，5與9步驟中采用pH = 10. 0-11. O。此方法可有效去除堿性雜質(zhì)和酸性雜質(zhì)。
第三，本技術(shù)方案中，3,5,7,9步驟中，乙醇沉淀讀數(shù)控制在35-40 %，所用乙醇為 5-10°C乙醇(80-95% )，可使酸性雜質(zhì)和堿性雜質(zhì)懸浮在乙醇溶液中而有效去除。
具體實施方式
以下實例詳細(xì)說明了本發(fā)明
1、粗品溶解將粗品肝素鈉100億單位加入到沉淀釜中，用600Kg純化水充分溶解，得料液700L。
2、第一次氧化調(diào)節(jié)pH = 9. 5，調(diào)節(jié)溫度15-20°C，加入30%過氧化氫3. 5L，攪拌條件下氧化脫色4小時。之后，加入30%過氧化氫2. 1L，攪拌條件下氧化脫色8小時。
3、第一次沉淀調(diào)節(jié)pH = 4. 5,按照30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為 6°C乙醇(90% )沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為35%，停止攪拌，靜置12小時。
4、第二次氧化將 3中的沉淀物加純化水至700L充分溶解，調(diào)節(jié)pH = 9. 5，調(diào)節(jié)溫度至15-20°C，加入30%過氧化氫3. 5L，攪拌條件下氧化脫色4小時。之后，加入30%過氧化氫2. 1L，攪拌條件下氧化脫色8小時。
5、第二次沉淀調(diào)節(jié)pH = 10. 5，按照30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為 7°C乙醇(90% )沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為36%，停止攪拌，靜置12小時。
6、第三次氧化將5中的沉淀物加純化水至700L充分溶解，調(diào)節(jié)pH = 9. 5，調(diào)節(jié)溫度至15-20°C，加入30%過氧化氫3. 5L，攪拌條件下氧化脫色4小時。之后，加入30%過氧化氫2. 1L，攪拌條件下氧化脫色8小時。
7、第三次沉淀調(diào)節(jié)pH = 4. 5，按照30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為 7°C乙醇(90% )沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為36%，停止攪拌，靜置12小時。
8、第四次氧化將7中的沉淀物加純化水至700L充分溶解，調(diào)節(jié)pH = 9. 5，調(diào)節(jié)溫度至15-20°C，加入30%過氧化氫3. 5L，攪拌條件下氧化脫色4小時。之后，加入30%過氧化氫2. 1L，攪拌條件下氧化脫色8小時。
9、第四次沉淀調(diào)節(jié)pH = 10. 5,按照30g/L比例向料液中加入氯化鈉,用溫度為 7°C乙醇(90% )沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為36%，停止攪拌，靜置12小時。
10、將9中所得沉淀物用純化水250Kg充分溶解，用溫度為5°C乙醇(95% )沉淀， 邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為80%，停止攪拌，靜置12小時。`用無水乙醇脫水后真空干燥即得聞收率聞效價肝素納精品。
權(quán)利要求
1.一種高效精制粗品肝素鈉的方法，其特征是 (1)、粗品溶解將粗品肝素鈉按5-6Kg/億單位比例用純化水充分溶解； (2)、第一次氧化調(diào)節(jié)pH= 9. 0-10. 0，調(diào)節(jié)料液溫度至15-200C，按照0. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照0. 2-0.4%(v/v)比例加入30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色8-10小時； (3)、第一次沉淀調(diào)節(jié)pH= 4. 0-5. 0,按照20-30g/L比例向料液中加入氯化鈉,攪拌條件下加入溫度為5-10°C的乙醇(80-95% )，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時； (4)、第二次氧化將(3)中的沉淀物用純化水按照5-6Kg/億單位比例充分溶解，調(diào)節(jié)pH = 9. 0-10. 0，調(diào)節(jié)料液溫度至15-20°C，按照0. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照0. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色8-10小時； (5)、第二次沉淀:調(diào)節(jié)pH= 10. 0-11. 0，按照20-30g/L比例向料液中加入氯化鈉，攪拌條件下加入溫度為5-10°C的乙醇(80-95% )，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時； (6)、第三次氧化將(5)中的沉淀物用純化水按照5-6Kg/億單位比例充分溶解，調(diào)節(jié)pH = 9. 0-10. 0，調(diào)節(jié)料液溫度至15-20°C，按照0. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照0. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色8-10小時； (7)、第三次沉淀調(diào)節(jié)pH= 4. 0-5. 0，按照20-30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為5-10°C乙醇(80-95%)沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時； (8)、第四次氧化將(7)中的沉淀物用純化水按照5-6Kg/億單位比例充分溶解，調(diào)節(jié)pH = 9. 0-10. 0，調(diào)節(jié)料液溫度至15-20°C，按照0. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照0. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色8-10小時； (9)、第四次沉淀調(diào)節(jié)pH= 10. 0-11. 0，按照20-30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為5-10°C乙醇(80-95%)沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時； (10)、將(9)中所得沉淀物用純化水按照2-3Kg比例充分溶解后過濾，用乙醇沉淀后脫水干燥即得高收率高效價肝素鈉精品。
2.按照權(quán)利要求書I所述的方法，其特征為(2)，(4)，(6)，(8)步驟中過氧化氫加入方法采用0. 4-0.6% (v/v)與0. 2-0. 4% (v/v)梯度加入法，前者氧化4_6小時，后者氧化8-10小時。
3.按照權(quán)利要求書I所述的方法，其特征為(3)，(5)，(7)，(9)步驟中，沉淀pH值采用酸堿交替法，3)與7)步驟中采用pH = 4. 0-5. 0,5)與9)步驟中采用pH = 10. 0-11. O。
4.按照權(quán)利要求書I所述的方法，其特征為(3)，(5)，(7)，(9)步驟中，所用乙醇溫度為 5-10°C，濃度為 80-95% o
5.按照權(quán)利要求書I所述的方法，其特征為(2)，(4)，(6)，(8)步驟中，料液氧化pH=9. 0-10. 0， 氧化溫度為 15-20°C ο
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提高肝素鈉精品收率的方法。豬腸粘膜經(jīng)鹽解、酶解、樹脂吸附等方法提取的肝素鈉粗品中含有大量的蛋白質(zhì)和核酸雜質(zhì)，需經(jīng)進(jìn)一步的氧化沉淀操作進(jìn)行精制。傳統(tǒng)工藝采用一次或兩次氧化沉淀法進(jìn)行精制，很難避免效價不高收率低等缺點。本發(fā)明采用多次梯度氧化和pH交替沉淀方法，克服了傳統(tǒng)方法的缺點，提高了肝素鈉精品收率和單位效價，顯著增加經(jīng)濟效益，具有很高的實用價值。
文檔編號C08B37/10GK103044578SQ20121055143
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月7日
發(fā)明者劉乃山, 夏襯來, 遲培升, 陸玉梅 申請人:青島九龍生物醫(yī)藥有限公司