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活性藥物成分及其中間物的酶促合成的制作方法與工藝

文檔序號(hào):12294171閱讀:來(lái)源:國(guó)知局
活性藥物成分及其中間物的酶促合成的制作方法與工藝

技術(shù)特征:
1.用于制備式(I)的化合物或其可藥用的鹽或立體異構(gòu)體的方法,其中R1獨(dú)立于R2表示H、X、(CH2)n-CH3、O-(CH2)n-CH3、S-(CH2)n-CH3、OCO(CH2)nCH3;和R2獨(dú)立于R1地表示H或(CH2)m-CH3;或R1和R2都表示X或O((CH2)nCH3);其中上述任一個(gè)CH2或CH3基團(tuán)可任選地被X、(CH2)n-CH3、C6-10芳基或O-(CH2)n-CH3另外取代;X表示F、Cl、Br或I;n代表0至10的整數(shù);m代表0至3的整數(shù);所述方法包括使式(II)的非天然內(nèi)半縮醛化合物,其中R1和R2的定義如上,與醛糖1-脫氫酶接觸,其中所述醛糖1-脫氫酶是Ylil醛糖脫氫酶或mGDH的葡萄糖脫氫酶。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述芳基是苯基。3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其中醛糖1-脫氫酶選自由脫氫酶編碼基因編碼的脫氫酶,所述脫氫酶編碼基因由SEQIDNO.01、03、05、07、09、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59和61的任一條核苷酸序列構(gòu)成;或者由以下任一條氨基酸序列定義的脫氫酶:SEQIDNO.02、04、06、08、10、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60和62。4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其中2-脫氧核糖-5-磷酸醛縮酶(DERA,EC4.1.2.4)用于制備式(II)的化合物。5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其中醛糖1-脫氫酶,任選地以及DERA酶,獨(dú)立地包含在活的全細(xì)胞、失活的全細(xì)胞、均質(zhì)化的全細(xì)胞或無(wú)細(xì)胞提取物中;或者是純化的、固定的和/或處于胞外表達(dá)的蛋白質(zhì)的形式。6.根據(jù)權(quán)利要求4的方法,其中兩種所述的酶,即,DERA和醛糖1-脫氫酶,都由一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞表達(dá),其中細(xì)胞類型選自細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。7.根據(jù)權(quán)利要求4的方法,還存在吡咯并喹啉醌(PQQ)。8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法,其中通過(guò)選自以下的手段實(shí)現(xiàn)吡咯并喹啉醌(PQQ)的存在:(I)從外部添加PQQ;(II)使用不僅存在脫氫酶活性,還具有內(nèi)在的PQQ生物合成能力的宿主生物;和(III)使用不具有內(nèi)在的PQQ生物合成能力,但經(jīng)過(guò)遺傳改造表達(dá)PQQ合成相關(guān)基因簇的微生物。9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法,其中,根據(jù)手段(III)使用的微生物經(jīng)過(guò)遺傳改造,從而表達(dá)PQQ合成編碼基因,所述編碼基因包含在SEQIDNO.11、17、63、64、65、66、67、68、69、70的任一條核苷酸序列內(nèi)或由SEQIDNO.11、17、63、64、65、66、67、68、69、70的任一條核苷酸序列組成;或者表達(dá)編碼SEQIDNO.12、13、14、15、16、18、19、20、21和22的任一條氨基酸序列的PQQ-合成基因。10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法,還包括將所述化合物(I)置于足以制備抑制素或其可藥用的鹽的條件下,任選地使抑制素產(chǎn)物成鹽、酯化或立體異構(gòu)選擇性地拆分。11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法,其中,抑制素選自洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、匹伐他汀、柏伐他汀和達(dá)伐他汀,及其可藥用的鹽。12.包含2-脫氧核糖-5-磷酸醛縮酶(DERA)酶和醛糖1-脫氫酶的反應(yīng)體系,所述反應(yīng)體系能夠或被安排用于將式(IX)的化合物與乙醛轉(zhuǎn)化為式(I)的化合物,其中,R表示式(I)的R1-CH-R2部分,R1和R2如權(quán)利要求1-2的任一項(xiàng)中所定義,其中,R1和R2如前定義;其中所述醛糖1-脫氫酶是Ylil醛糖脫氫酶或mGDH的葡萄糖脫氫酶。13.根據(jù)權(quán)利要求12的反應(yīng)體系,其中兩種所述的酶,即,DERA和醛糖1-脫氫酶,都由一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞表達(dá),其中細(xì)胞類型選自細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。14.根據(jù)權(quán)利要求12的反應(yīng)體系,還存在吡咯并喹啉醌(PQQ)。15.根據(jù)權(quán)利要求14的反應(yīng)體系,其中通過(guò)選自以下的手段實(shí)現(xiàn)吡咯并喹啉醌(PQQ)的存在:(I)從外部添加PQQ;(II)使用不僅存在脫氫酶活性,還具有內(nèi)在的PQQ生物合成能力的宿主生物;和(III)使用不具有內(nèi)在的PQQ生物合成能力,但經(jīng)過(guò)遺傳改造表達(dá)PQQ合成相關(guān)基因簇的微生物。16.根據(jù)權(quán)利要求15的反應(yīng)體系,其中,根據(jù)手段(III)使用的微生物經(jīng)過(guò)遺傳改造,從而表達(dá)PQQ合成編碼基因,所述編碼基因包含在SEQIDNO.11、17、63、64、65、66、67、68、69、70的任一條核苷酸序列內(nèi)或由SEQIDNO.11、17、63、64、65、66、67、68、69、70的任一條核苷酸序列組成;或者表達(dá)編碼SEQIDNO.12、13、14、15、16、18、19、20、21和22的任一條氨基酸序列的PQQ-合成基因。17.根據(jù)權(quán)利要求12-16的任一項(xiàng)的反應(yīng)體系的用于制備式(I)的化合物的用途,其中式(I)如權(quán)利要求1-2的任一項(xiàng)定義,以及任選的還用于制備抑制素或其可藥用的鹽的用途。18.微生物用于由權(quán)利要求1中所定義的式(II)化合物制備式(I)的化合物或其可藥用的鹽或立體異構(gòu)體的用途,其中R1獨(dú)立于R2地表示H、X、(CH2)n-CH3、O-(CH2)n-CH3、S-(CH2)n-CH3、OCO(CH2)nCH3;和R2獨(dú)立于R1地表示H或(CH2)m-CH3;或者R1和R2都表示X或O((CH2)nCH3);其中任一種上述CH2或CH3基可任選地被X、(CH2)n-CH3、C6-10芳基、O-(CH2)n-CH3另外取代;X表示F、Cl、Br或I;n代表0至10的整數(shù);m代表0至3的整數(shù);任選地進(jìn)一步加工式(I)的化合物以制備抑制素;其中微生物包含權(quán)利要求1中所定義的醛糖1-脫氫酶,并且其(i)選自變形細(xì)菌(proteobacteria)、放線菌(actinomycetales)、miobacteriaceae、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、腸桿菌屬(Enteorobacter)、不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)、根瘤菌屬(Rhizobioum)、甲基桿菌屬(Methylobacterium)、克呂沃爾氏菌屬(Kluyvera)、葡糖桿菌屬(Gluconobacter)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、歐文氏菌屬(Erwinia)、拉恩氏菌屬(Rahnella)和異常球菌屬(Deinococcus)的細(xì)菌來(lái)源;或(ii)是大腸桿菌,所述的大腸桿菌經(jīng)過(guò)遺傳改造以能夠表達(dá)用于提供吡咯并喹啉醌(PQQ)的基因簇的基因,或添加了外源性PQQ以被補(bǔ)充。19.權(quán)利要求18的用途,其中所述芳基是苯基。
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