專利名稱：含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體及其合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體，本發(fā)明進(jìn)一步涉及上述含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體的合成方法，屬于醫(yī)學(xué)科學(xué)和化學(xué)合成技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在生命科學(xué)領(lǐng)域，靶向多肽及靶向藥物是否對(duì)特殊器官或病變部位具有靶向性，基因治療方法的早期安全性評(píng)估等方面都需要更科學(xué)的檢測(cè)跟蹤方法。由于磁共振成像進(jìn)行檢測(cè)跟蹤可以無(wú)需殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和長(zhǎng)時(shí)間跟蹤而被廣泛采用。一方面具有靶向性、半衰期長(zhǎng)、弛豫率高的造影劑可以使待檢測(cè)器官成像清晰，對(duì)臨床磁共振檢測(cè)和病情的診斷有益而成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。另一方面，大多數(shù)多肽、蛋白質(zhì)、DNA等生化藥物具有非?？斓拇x速度(plasma clearance)，并且能夠被免疫，所以需要經(jīng)常注射這種必不可少的關(guān)鍵藥劑，以確保其在病人血液中維持穩(wěn)定的藥理學(xué)濃度。
目前，磁共振成像造影劑一般為順磁性金屬離子的配合物，其配體多為含多氨基和多羧基的線形和環(huán)狀小分子化合物，所以半衰期較短，常常為了獲取清晰圖象而增加用量或者短時(shí)間內(nèi)重復(fù)給藥等。美國(guó)專利US 4 647 447是將二乙三胺五乙酸配合物，與葡甲胺成鹽，制成釓噴酸葡胺造影劑，在臨床上廣泛應(yīng)用。雖然它與人體有較好的生物相容性，但是釓噴酸葡胺分子量小，排泄太快，消除半衰期約20～100分鐘，這種造影劑沒(méi)有組織和器官選擇性，且?guī)缀跬耆ㄟ^(guò)肝排瀉，對(duì)肝膽系統(tǒng)的造影效果不理想。由于代謝速度過(guò)快，顱腦及脊髓磁共振成像，需在30分鐘內(nèi)再次給藥；判斷病人是屬于成人病變還是腫瘤復(fù)發(fā)，需要增加用量；增加了該藥物用量，就增加了人體排毒量，也就提高了負(fù)作用的幾率。而且，釓噴酸葡胺造影劑不能通過(guò)完整的血腦屏障，也不能進(jìn)入毛細(xì)血管屏障的其它組織，如脊髓、眼及睪丸等。作成口服劑使用時(shí)不能被胃粘膜所吸收，更不能進(jìn)入紅細(xì)胞或附著于血紅蛋白上，因而只限于在血漿中運(yùn)輸。釓噴酸葡胺不適于在心臟和血管疾病的成像中應(yīng)用，而通常要用所謂的血池成像對(duì)比度增強(qiáng)劑才行。總之，至今為止，還沒(méi)有一種配體可以使制成關(guān)鍵藥劑或造影劑能同時(shí)滿足具有靶向性、半衰期長(zhǎng)、弛豫率高等特性要求的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是公開(kāi)一種含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體，用這種配體制備靶向藥物或造影劑具有靶向性、半衰期長(zhǎng)、弛豫率高，用量很少而圖象清晰，并且毒性低，對(duì)肝癌進(jìn)行檢測(cè)的效果好。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述配體的合成工藝。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期對(duì)帶有端官能團(tuán)的聚氧乙烯的性能研究發(fā)現(xiàn)，靶向藥物可以與高分子造影劑通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合，這樣高分子既延長(zhǎng)造影劑的半衰期、又延長(zhǎng)了靶向藥物的半衰期、同時(shí)又可以進(jìn)行跟蹤監(jiān)測(cè)。聚氧乙烯及其衍生物(PEG)具有兩親性、無(wú)毒、免疫原性低、生物相容性好、種類多等優(yōu)點(diǎn)，常用于蛋白質(zhì)、多肽生物藥物制備、西藥添加劑和制備生物醫(yī)用材料。用PEG改性造影劑，有聚氧乙烯的所有優(yōu)點(diǎn)。帶有端官能團(tuán)的聚氧乙烯有許多功能，例如雙端胺基的聚氧乙烯改性的造影劑，其端基為胺基，可以進(jìn)行藥物的化學(xué)修飾。而對(duì)于用于多肽等的修飾，要求的實(shí)驗(yàn)條件溫和。
本發(fā)明提供的一種含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體，具有如下結(jié)構(gòu) 式中，R3代表3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-琥珀酰亞胺酯(MBS)偶聯(lián)劑殘基-肝癌靶向多肽，結(jié)構(gòu)式為 式中R4代表巰基參與反應(yīng)的肝癌靶向多肽，肝癌靶向多肽次序?yàn)镕AM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH，其中FAM代表連接到多肽胺基端的羅丹明熒光素C21H12O7。
R2代表聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物鏈段，結(jié)構(gòu)式為 式中，R1代表聚氧乙烯，結(jié)構(gòu)式為-CH2CH2-(OCH2CH2)n-n代表22～500的整數(shù)。
本發(fā)明的含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體可溶于N，N-二甲基甲酰胺，或二氯甲烷，或氯仿，或二氧六環(huán)，或二甲基亞砜，或蒸餾水，或磷酸PBS緩沖溶劑，為黃色固體粉末。
本發(fā)明要解決的第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體的合成方法第一步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗制品先量取肝癌靶向多肽∶3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-琥珀酰亞胺酯MBS偶聯(lián)劑∶含胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物∶溶劑＝1∶0.1～0.2∶1.1～3.3∶200～4000重量比，然后將它們加入反應(yīng)器中，在-4C°～室溫條件下，反應(yīng)2～72小時(shí)，制得含有多肽的聚氧乙烯配體的粗制品；第二步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品將第一步制得的含有多肽的聚氧乙烯配體的粗制品透析，凍干，得到黃色固體粉末為本發(fā)明的含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體；上述的溶劑為N，N-二甲基甲酰胺，或二氯甲烷，或氯仿，或二氧六環(huán)，或二甲基亞砜，或蒸餾水，或磷酸PBS緩沖溶劑；上述含胺基聚合物是端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物，分子式為NH2-R2-NH2，結(jié)構(gòu)式為 式中，R1代表聚氧乙烯，結(jié)構(gòu)式為-CH2CH2-(OCH2CH2)n-n代表22～500的整數(shù)。
上述第一步制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗制品的方法也可以按如下三步進(jìn)行A、先制備含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品；在反應(yīng)器中加入端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物、溶劑、偶聯(lián)劑，在-4C°～室溫反應(yīng)0.5～72小時(shí)，端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物∶溶劑∶偶聯(lián)劑的重量比為1∶10～1670∶0.06～6；B、將A制得的含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品的提純透析，凍干，制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品；C、制備含有多肽的聚氧乙烯改性的配體在第二步得到的產(chǎn)物中加入肝癌靶向多肽和溶劑，先量取含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品∶肝癌靶向多肽∶溶劑的重量比為1∶0.06～1.3∶43～1010，在-4C°～室溫反應(yīng)1～72小時(shí)，制得含有多肽的聚氧乙烯配體的粗制品。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為1.由于本發(fā)明的含肝癌靶向多肽的聚氧乙烯配體是大分子，因此具有兩親性、無(wú)毒、免疫原性低、生物相容性好、種類多、穩(wěn)定、不易粘附于血管壁、半衰期長(zhǎng)。
2.由于本發(fā)明的含多肽的聚氧乙烯配體是通過(guò)易降解的肽鍵連接，所以該大分子可以在生物體內(nèi)降解，毒性小。
3.由于本發(fā)明的含多肽的聚氧乙烯配體含有二乙三胺五乙酸，所以可以用作合成造影劑的配體，用它為配體作成的造影劑半衰期長(zhǎng)、弛豫率高，可以在計(jì)量很小情況下，在體內(nèi)停留時(shí)間延長(zhǎng)，使待檢測(cè)器官成像清晰，而且由于含有酯基可以在體內(nèi)降解，毒性小。
4.由于本發(fā)明的含多肽的聚氧乙烯配體的半衰期長(zhǎng)，因此可以在一段時(shí)間內(nèi)確保其在病人血液中維持穩(wěn)定的藥理學(xué)濃度，可以用于血池造影劑。
5.由于含多肽的聚氧乙烯配體中有靶向多肽，通過(guò)多肽，可以粘附于肝癌細(xì)胞，對(duì)肝癌進(jìn)行檢測(cè)及治療。
6.含多肽的聚氧乙烯配體再接釓，可作為造影劑，靶向肽的半衰期也延長(zhǎng)了，同時(shí)可以進(jìn)行磁共振跟蹤監(jiān)測(cè)。
7.合成本發(fā)明的含多肽的聚氧乙烯配體的工藝路線簡(jiǎn)單，操作條件溫和，產(chǎn)物提純步驟簡(jiǎn)單，產(chǎn)物產(chǎn)率高。


圖1是本發(fā)明實(shí)施例4的含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品的核磁共振氫譜(1H NMR)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的原料端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物需自行合成。合成方法見(jiàn)中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)《端胺基嵌段聚氧乙烯改性的釓配合物及其合成方法》，申請(qǐng)?zhí)枮?00510024217.7。上述方法中的原料肝癌靶向多肽的制備見(jiàn)中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)《體內(nèi)篩選法得到的肝癌組織特異性粘附肽及其用途》，申請(qǐng)?zhí)枮?00410017048.X。
實(shí)施例1第一步制備含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品在反應(yīng)器中加入端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物28mg、溶劑N，N-二甲基甲酰胺2.5ml、偶聯(lián)劑3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-琥珀酰亞胺酯(MBS)3.8mg，在室溫反應(yīng)0.5小時(shí)，端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物、溶劑N，N-二甲基甲酰胺、偶聯(lián)劑3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-琥珀酰亞胺酯(MBS)的重量比為1∶89∶0.136，端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物的結(jié)構(gòu)式為 式中，R1代表聚氧乙烯的結(jié)構(gòu)式為-CH2CH2-(OCH2CH2)n-n代表45；制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品，具有以下結(jié)構(gòu)， 式中，R5代表3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-琥珀酰亞胺酯MBS偶聯(lián)劑殘基 R2代表不含胺基的聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物鏈段 第二步 含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品凍干，制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品25mg，產(chǎn)物收率79.4％；
第三步 制得含有多肽聚氧乙烯改性的配體在第二步得到的產(chǎn)物含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品8.2mg中加入肝癌靶向多肽10mg和溶劑磷酸PBS緩沖溶劑1ml；含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品、多肽與溶劑磷酸PBS緩沖溶劑的重量比為1∶1.2∶122；在室溫反應(yīng)1小時(shí)，制得含有多肽的聚氧乙烯改性的配體，其分子式為 R3代表MBS偶聯(lián)劑殘基-肝癌靶向多肽，是由第二步含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體上面的琥珀酰亞胺官能團(tuán)與多肽次序中的半胱氨酸上的巰基(-SH)官能團(tuán)反應(yīng)得到的，分子式為， 式中R4代表肝癌靶向多肽FAM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH；第四步 制得含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品透析，凍干，制得含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品7.2mg，黃色粉末，產(chǎn)物產(chǎn)率54.5％。
實(shí)施例1的第一步中的溶劑N，N-二甲基酰亞胺可換成二甲基亞砜，或二氯甲烷，或氯仿，或二氧六環(huán)，或蒸餾水，或磷酸PBS緩沖溶劑。
實(shí)施例2第一步 制備含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品在反應(yīng)器中加入端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物99mg、溶劑N，N-二甲基甲酰胺3ml、偶聯(lián)劑3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯(MBS)6.0mg，在室溫反應(yīng)2小時(shí)，制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品；端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物、溶劑N，N-二甲基甲酰胺、偶聯(lián)劑3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯(MBS)的重量比為1∶30.3∶0.061；端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物的結(jié)構(gòu)式中的R1代表-CH2CH2-(OCH2CH2)n-，n代表113；第二步 制備含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品加水，透析，凍干，制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品81mg，產(chǎn)物收率77.1％；第三步 制備含有多肽聚氧乙烯改性的配體粗品在第二步得到的產(chǎn)物含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品9.9mg中加入肝癌靶向多肽FAM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH 3mg和溶劑磷酸PBS緩沖溶劑10ml，含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品、多肽與溶劑磷酸PBS緩沖溶劑的重量比為1∶0.303∶1010，在室溫反應(yīng)24小時(shí)，制得含有多肽的聚氧乙烯改性的配體；第四步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品透析，凍干，制得含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品8.2mg，黃色粉末，產(chǎn)物產(chǎn)率63.9％；實(shí)施例2的第一步中的溶劑選擇與實(shí)施例1的相同；實(shí)施例2的第三步中的溶劑PBS緩沖溶劑可換成N，N-二甲基酰亞胺、二甲基亞砜、二氯甲烷、氯仿、二氧六環(huán)、蒸餾水。
實(shí)施例3第一步 制備含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品在反應(yīng)器中加入端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物99mg、溶劑磷酸PBS緩沖溶劑1ml、偶聯(lián)劑3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯(MBS)6.0mg，在室溫反應(yīng)24小時(shí)，制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品；端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物、溶劑磷酸PBS緩沖溶劑、偶聯(lián)劑3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯(MBS)的重量比為1∶10.1∶0.061；端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物與實(shí)施例2相同；第二步 制備含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品加水，透析，凍干，制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品90mg，產(chǎn)物收率85.7％；第三步 制備含有多肽聚氧乙烯改性的配體粗制品在第二步得到的產(chǎn)物含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品9.9mg中加入肝癌靶向多肽FAM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH 3mg和溶劑N，N-二甲基酰亞胺1ml，含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品、多肽與溶劑N，N-二甲基酰亞胺的重量比為1∶0.303∶101，在室溫反應(yīng)24小時(shí)，制得含有多肽的聚氧乙烯改性的配體；第四步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品加水，透析，凍干，制得含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品8.5mg，黃色粉末，產(chǎn)物產(chǎn)率65.9％。
實(shí)施例4第一步 含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品在反應(yīng)器中加入端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物44mg、溶劑N，N-二甲基甲酰胺2.5ml、偶聯(lián)劑3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-琥珀酰亞胺酯(MBS)3.9mg，在室溫反應(yīng)2小時(shí)，制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品；端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物、溶劑N，N-二甲基甲酰胺、偶聯(lián)劑3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-琥珀酰亞胺酯(MBS)的重量比為1∶167∶0.06，端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物的結(jié)構(gòu)式中的R1代表-CH2CH2-(OCH2CH2)n-n代表76，第二步 含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品透析，凍干，制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品33mg，產(chǎn)物收率68.9％；第三步 制得含有多肽聚氧乙烯改性的配體在第二步得到的產(chǎn)物含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品11.5mg中加入肝癌靶向多肽FAM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH 5mg和溶劑磷酸PBS緩沖溶劑10ml，含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品、多肽與溶劑磷酸PBS緩沖溶劑的重量比為1∶0.43∶869，在室溫反應(yīng)24小時(shí)，制得含有多肽的聚氧乙烯改性的配體；第四步 制得含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品透析，凍干，制得含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品12.1mg，黃色粉末，產(chǎn)物產(chǎn)率73.3％；本發(fā)明實(shí)施例4的含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品的核磁共振氫譜(1H NMR)見(jiàn)附圖1。
實(shí)施例5第一步 含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品在反應(yīng)器中加入端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物44mg、溶劑N，N-二甲基甲酰胺25ml、偶聯(lián)劑3-馬來(lái)酰胺苯甲酸N-琥珀酰亞胺酯(MBS)390mg，在-4C°反應(yīng)72小時(shí)，制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品；端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物、溶劑N，N-二甲基甲酰胺、偶聯(lián)劑3-馬來(lái)酰胺苯甲酸N-琥珀酰亞胺酯(MBS)的重量比為1∶1670∶6，端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物的結(jié)構(gòu)與實(shí)施例4相同；第二步 含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品透析，凍干，制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品35mg，產(chǎn)物收率73.1％；第三步 制得含有多肽聚氧乙烯改性的配體在第二步得到的產(chǎn)物含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品11.5mg中加入肝癌靶向多肽FAM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH 15mg和溶劑磷酸PBS緩沖溶劑0.5ml，含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品、多肽與溶劑磷酸PBS緩沖溶劑的重量比為1∶1.3∶43.4，在-4C°反應(yīng)72小時(shí)，制得含有多肽的聚氧乙烯改性的配體；第四步 制得含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品透析，凍干，制得含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品12.3mg，黃色粉末，產(chǎn)物產(chǎn)率74.5％；實(shí)施例6第一步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗品在反應(yīng)器中加入3mg肝癌靶向多肽FAM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH、0.60mg MBS偶聯(lián)劑和含胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物9.9mg，蒸餾水1ml，室溫反應(yīng)24小時(shí)，制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗品；多肽、MBS偶聯(lián)劑、含胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物和蒸餾水的重量比為1∶0.2∶3.3∶333，端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物的結(jié)構(gòu)與實(shí)施例2相同；第二步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品加水透析，凍干，得到連有多肽的黃色粉末，9.3mg，收率69.0％；實(shí)施例4的第一步中的溶劑蒸餾水可換成N，N-二甲基酰亞胺、二甲基亞砜、二氯甲烷、氯仿、二氧六環(huán)、蒸餾水或磷酸PBS緩沖溶劑。
實(shí)施例7第一步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗品在反應(yīng)器中加入5mg肝癌靶向多肽FAM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH、1.0mg MBS偶聯(lián)劑和含胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物11.5mg，蒸餾水lml，室溫反應(yīng)24小時(shí)，制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗品；多肽、MBS偶聯(lián)劑、含胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物和蒸餾水的重量比為1∶0.2∶2.3∶200，端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物的結(jié)構(gòu)式與實(shí)施例4相同；第二步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品透析，凍干，得到連有多肽的黃色粉末，7.3mg，收率41.7％。
實(shí)施例8第一步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗品在反應(yīng)器中加入5mg肝癌靶向多肽FAM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH、1.0mg MBS偶聯(lián)劑和含胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物11.5mg，二氯甲烷20ml，在-4C°反應(yīng)72小時(shí)，制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗品；多肽、MBS偶聯(lián)劑、含胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物和二氯甲烷的重量比為1∶0.2∶2.3∶4000，端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物的結(jié)構(gòu)式與實(shí)施例4相同；第二步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品凍干，透析，凍干，得到連有多肽的黃色粉末，7.1mg，收率41.5％。
實(shí)施例9第一步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗品在反應(yīng)器中加入10mg肝癌靶向多肽FAM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH、1.0mg MBS偶聯(lián)劑和含胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物11.5mg，蒸餾水20ml，室溫反應(yīng)2小時(shí)，制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗品；多肽、MBS偶聯(lián)劑、含胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物和蒸餾水的重量比為1∶0.1∶1.1∶2000，端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物的結(jié)構(gòu)式與實(shí)施例4相同；第二步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品透析，凍干，得到連有多肽的黃色粉末，7.5mg，收率41.8％。
實(shí)施例10
第一步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗品在反應(yīng)器中加入3mg肝癌靶向多肽FAM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH、0.58mg MBS偶聯(lián)劑和含胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物6.8mg，蒸餾水10ml，室溫反應(yīng)2小時(shí)，制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗品；多肽、MBS偶聯(lián)劑、含胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物和蒸餾水的重量比為1∶0.19∶2.3∶3333，端胺基聚氧乙烯-二乙三胺五乙酸嵌段聚合物的結(jié)構(gòu)式與實(shí)施例1相同；第二步 制備含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品透析，凍干，得到連有多肽的黃色粉末，5.5mg，收率53.0％。
權(quán)利要求
1.含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體，其特征在于，該配體具有以下結(jié)構(gòu) 式中，R3代表MBS偶聯(lián)劑加肝癌靶向肽，R2代表聚氧乙烯—二乙三胺五乙酸嵌段聚合物鏈段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體，其特征在于，所述的R3代表MBS偶聯(lián)劑加肝癌靶向肽是3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-琥珀酰亞胺酯MBS偶聯(lián)劑加肝癌靶向肽，結(jié)構(gòu)式為 式中，R4代表肝癌靶向多肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體，其特征在于，所述的肝癌靶向多肽是次序?yàn)镕AM-A-G-K-G-T-P-S-L-E-T-T-P-C-COOH。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體，其特征在于，所述的R2代表聚氧乙烯—二乙三胺五乙酸嵌段聚合物鏈段，結(jié)構(gòu)式為 式中，R1代表聚氧乙烯，結(jié)構(gòu)式為-CH2CH2-(OCH2CH2)n-n代表22～500的整數(shù)。
5.權(quán)利要求1所述的含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體的合成方法，其特征在于，按照如下操作步驟進(jìn)行第一步制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗制品先量取肝癌靶向多肽3-馬來(lái)酰胺苯甲酸-N-琥珀酰亞胺酯MBS偶聯(lián)劑含胺基聚氧乙烯—二乙三胺五乙酸嵌段聚合物∶溶劑＝1∶0.1～0.2∶1.1～3.3∶200～4000重量比，然后將它們加入反應(yīng)器中，在-4℃～室溫條件下，反應(yīng)2～72小時(shí)，制得含有肝癌靶向多肽的聚氧乙烯配體的粗制品；第二步制備含有多肽的聚氧乙烯配體的精制品將第一步制得的含有多肽的聚氧乙烯配體的粗制品透析，凍干，得到黃色固體粉末為本發(fā)明的含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體的合成方法，其特征在于，所述的溶劑為N，N-二甲基甲酰胺，或二氯甲烷，或氯仿，或二氧六環(huán)，或二甲基亞砜，或蒸餾水，或磷酸PBS緩沖溶劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體的合成方法，其特征在于，所述的第一步的含胺基聚合物是端胺基聚氧乙烯—二乙三胺五乙酸嵌段聚合物，分子式為NH2-R2-NH2，結(jié)構(gòu)式為 式中，R1代表聚氧乙烯的結(jié)構(gòu)式為-CH2CH2-(OCH2CH2)n-n代表22～500的整數(shù)。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體的合成方法，其特征在于，第一步制備含有多肽的聚氧乙烯配體的粗制品分以下三步進(jìn)行A.制備含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品在反應(yīng)器中加入端胺基聚氧乙烯—二乙三胺五乙酸嵌段聚合物、溶劑、偶聯(lián)劑，在-4℃～室溫反應(yīng)0.5～72小時(shí)，端胺基聚氧乙烯—二乙三胺五乙酸嵌段聚合物溶劑∶偶聯(lián)劑的重量比為1∶10～1670∶0.06～6；B、含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體粗制品的提純經(jīng)透析，凍干，制得含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品；C、制備含有多肽的聚氧乙烯改性的配體在第二步得到的產(chǎn)物中加入肝癌靶向多肽和溶劑，先量取含有偶聯(lián)劑的聚氧乙烯配體的精制品肝癌靶向多肽∶溶劑的重量比為1∶0.06～1.3∶43～1010，在-4℃～室溫反應(yīng)1～72小時(shí)，制得含有多肽的聚氧乙烯配體的粗制品。
全文摘要
含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體及其合成方法，屬于醫(yī)藥和化學(xué)合成技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明具有右式結(jié)構(gòu)，先量取肝癌靶向多肽3－馬來(lái)酰胺苯甲酸－N－琥珀酰亞胺酯MBS偶聯(lián)劑含胺基聚氧乙烯－二乙三胺五乙酸嵌段聚合物∶溶劑＝1∶0.1～0.2∶1.1～3.3∶200～4000重量比，然后加入反應(yīng)器中，在－4℃～室溫條件下反應(yīng)2～72小時(shí)，制得含有多肽的聚氧乙烯配體的粗制品；將該粗制品透析，凍干，得到黃色固體粉末為本發(fā)明的含有肝癌靶向肽的聚氧乙烯配體。合成路線和產(chǎn)物提純步驟簡(jiǎn)單；產(chǎn)率高；用它制備的造影劑能滿足靜脈注射；在體內(nèi)停留時(shí)間長(zhǎng)；易溶于水，可在體內(nèi)降解毒性低；廣泛應(yīng)用于磁共振成像和血池的造影劑；具有生物活性和靶向性，有利于醫(yī)療診斷，且對(duì)肝癌檢測(cè)效果好。
文檔編號(hào)C08G65/00GK1872348SQ20061002576
公開(kāi)日2006年12月6日 申請(qǐng)日期2006年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月17日
發(fā)明者宋春梅, 薛海麗, 莊小璐, 錢(qián)旻, 杜冰, 余亦華, 彭敏, 柴繼峰, 余磊, 謝美然, 黃明德, 楊東麗 申請(qǐng)人:華東師范大學(xué)