專利名稱：厚樸酚系列化合物及其合成方法和以該化合物為活性成分的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及厚樸酚系列化合物的結(jié)構(gòu)式及其合成方法，和以該化合物為活性成份的藥物組合物，以及它們在降血壓、抗氧化活性、抗自由基活性的藥物組合物的應(yīng)用。
厚樸屬木蘭科植物，產(chǎn)于四川、貴州、湘北、陜西、福建等地，神農(nóng)本草經(jīng)載[厚樸主治中風(fēng)、傷寒頭痛、熱寒、驚悸、氣血痹、死肌、去三蟲]。梁陶宏景名醫(yī)別錄稱[厚樸溫中益氣、消痰下氣、療霍亂及腹痛脹滿，胃中冷逆，胸中嘔不止、泄痢淋露]。
厚樸酚(magnolol)是在1930年，由日本學(xué)者杉井善雄氏用中國四川厚樸的藥用部位樹皮抽提出的，中藥材厚樸所含的厚樸酚含量很高，約占干重的十分之一。在傳統(tǒng)的民間用藥中，厚樸用于治療焦慮、神經(jīng)及心血管疾病。1990年Teng，C.M等人于Life Sci第47期第1153～1161頁指出其主要成分厚樸酚的作用機制為抑制胞內(nèi)鈣離子流動、血管平滑肌放松、抗血小板凝集及抑制血清素分泌等。
1994年Fujita，S.等人于Biol.Med.第17期第273～277頁揭示厚樸另含有少量如附圖3所示的異厚樸酚(honokiol)，其結(jié)構(gòu)也屬雙酚結(jié)構(gòu)，與厚樸酚之關(guān)系為同分異構(gòu)體，異厚樸酚經(jīng)1994年LO，Y.C.證明也具有強力抗脂質(zhì)過氧化能力，但其活性略遜于厚樸酚。在1976年Feringa B.等人于J.Org.Chem第98期第3372～3373頁報導(dǎo)一系列以對丙烯茴香醚(p-allylanisole)為起始原料如附圖4所示的厚樸酚合成方法；另外1978年Kupchan S.M.等人于J.Org.Chem第43期第4076～4080頁也揭示一系列以對丙烯茴香醚(p-allylanisole)為起始原料如附圖5所示的厚樸酚合成方法；在1985年由何東英等人于臺灣科學(xué)第40期第31～35頁揭示如附圖6所示的兩方向合成方法；在1995年Agharahimi，M.R.等人于J.Org.Chem第60期第1856～1863頁揭示如附圖7所示的合成方法，此方法比何東英等人的合成方法生產(chǎn)率更高可達(dá)到40％，且較無副產(chǎn)物產(chǎn)生，故純化較易，從上述可以清楚明確的證明厚樸酚可以制造，其基本結(jié)構(gòu)是兩個酚環(huán)聯(lián)結(jié)而成，屬于雙酚(biphenol)化合物。1994年文獻(xiàn)報導(dǎo)厚樸酚的抗脂質(zhì)過氧化能力為維生素E的1000倍，厚樸酚的結(jié)構(gòu)比起許多已知的抗氧化劑實為簡單，因此，本研究將此高效及簡易結(jié)構(gòu)的厚樸酚作為結(jié)構(gòu)修飾的先導(dǎo)化合物。厚樸酚的抗氧化能力從過去的研究，經(jīng)由測量“消除者”的方法，顯示厚樸酚的抗氧化能力遠(yuǎn)遜于維生素E。但是若用測量“連鎖反應(yīng)中斷者(chain breaker)”的方法， 顯示厚樸酚具備強力的抗氧化作用，比維生素E強1000倍。由于細(xì)胞的氧化傷害，涉及自由基在細(xì)胞體外膜的一連串反應(yīng)，所以厚樸酚應(yīng)是一種[連鎖反應(yīng)中斷者]型的抗氧化劑，由附圖8、附圖9、附

圖10可知，厚樸酚的抗脂質(zhì)過氧化能力明顯的比維生素E強，為強力的連鎖反應(yīng)中斷者，厚樸酚在附圖10、附圖11、附圖12中所扮演的角色為清除者，由附圖可清楚看出其階段的抗氧化能力遠(yuǎn)遜于維生素E。
氧化壓力(oxidative stress)是一個復(fù)雜的名詞，簡單而言是指在氧化與抗氧化的平衡系統(tǒng)下，氧化的程度勝于抗氧化。這是因為多數(shù)細(xì)胞均需要氧才得以生存，而活性氧正是導(dǎo)致氧化的原因。雖然人體內(nèi)有許多生理自衛(wèi)性的抗氧化劑，包括許多酵素及非酵素的抗氧化成分，由于工業(yè)的發(fā)達(dá)，對人類生活環(huán)境的污染日益嚴(yán)重，因而促使氧化作用的幾率也日益增加，當(dāng)生理自衛(wèi)性的抗氧化系統(tǒng)無法對抗時，氧化所造成的傷害即會在體內(nèi)累積。根據(jù)HalliwellB.于1991年AM.J.Med第91期第14S～23S頁報導(dǎo)，目前已有超過50種以上的疾病，其病因是因為氧化所造成的傷害，因此，進(jìn)一步尋找與研究此類抗氧化物質(zhì)，包括合成或天然的抗氧化劑，是目前亟待解決的問題。
本發(fā)明的目的在于提供一類新的具有藥用價值的厚樸酚系列化合物及其該化合物的合成方法；本發(fā)明的另一目的是提一種具有降低血壓、抗氧化活性、抗自由基活性的藥物組合物。
本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思依據(jù)本發(fā)明的目的，提供厚樸酚兩大系列化合物及其合成方法，從而進(jìn)一步的提供以該化合物為活性成分的多種具有降低血壓、抗氧化活性、抗自由基活性的藥物組合物。
厚樸酚的合成方法在1976年Feringa B.等人于J.Org.Chem.第98期第3372～3373頁報導(dǎo)一系列以對丙烯茴香醚(p-allylanisole)為起始原料如附圖4所示的厚樸酚合成方法，其是將對丙烯茴香醚(p-allylanisole)與三溴化硼甲基硫化物(boron tribromide-methylsulfide complex)進(jìn)行去除甲基反應(yīng)，生成對丙烯酚(p-allylphenol；chavicol)；在堿性環(huán)境下，再與鐵氰化鉀(potassium ferricyanide；K3Fe(CN)6)進(jìn)行氧化還原反應(yīng)，生成2-[2-羥基-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚(2-[2-hydroxy-5-(2-propenyl)phenyl]-4-(2-propenyl)phenol；magnolol)；在1978年Kupchan S.M等人于J.Org.Chem.第43期第4076～4080頁揭示一系列以對丙烯茴香醚(p-allylanisole)為起始原料如附圖5所示的厚樸酚合成方法，其是將二氯甲烷為溶劑，加入三氟醋酸(trifluororacetic acid；TFA)及三氟醋酐(trifluororacetic acid anhydride；TFAA)，在氧氟化釩(vanadium oxytrifluoride；VOF3)的氧化還原反應(yīng)下，生成1-甲氧基-2-[2-甲氧基-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)苯(1-methoxy-2-[2-methoxy-5-(2-propenyl)phenyl]-4-(2-propenyl)benzene)；再與三溴化硼甲基硫化物(boron tribromide-methyl sulfide complex)進(jìn)行去除甲基反應(yīng)，生成2-[2-羥基-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚(2-[2-hydroxy-5-(2-propenyl)phenyl]-4-(2-propenyl)phenol；magnolol)；在1985年何東英等人在臺灣科學(xué)第40期第31～35頁揭示如附圖6所示的兩方向合成方法，本方法的優(yōu)點為合成途徑短，試藥較便宜；缺點是生產(chǎn)率太低(0.25％)，終產(chǎn)物與副產(chǎn)物的物化性質(zhì)過于類似，造成分離純化困難，無法大量生產(chǎn)；在1995年Agharahimi，M.R等人于J.Org.Chem第60期第1856～1863頁揭示如附圖7所示的合成方法，本方法優(yōu)點為較何東英等人的合成方法的生產(chǎn)率更高，可達(dá)到40％，且較無副產(chǎn)物產(chǎn)生，純化較易，但制造流程長，所用試藥昂貴，且反應(yīng)條件均需在無水、避氧及低溫條件下進(jìn)行，因此無工業(yè)利用價值；本發(fā)明綜合上述優(yōu)缺點，詳細(xì)分析厚樸酚的逆合成得知，可從兩方向著手合成厚樸酚，一是先合成對丙烯酚，再將其聯(lián)合起來；二是在雙酚的對位上導(dǎo)入丙烯基。本發(fā)明所合成二系列厚樸酚為骨架的化合物，選用兩種方法一是取厚樸酚(magnolol)與甲醛，加入第二胺衍生物在酸性條件下加熱攪拌充分反應(yīng)后，減壓濃縮，再進(jìn)行純化及再結(jié)晶；可獲得有瑪梨齊(Mannich)鹽基，如式I的2-[3-取代甲基-2-羥基-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚(2-[3-substitutedmethyl-2-hydroxy-5-(2-propenyl)phenyl]-4-(2-propenyl)Phenols)；另一系列的合成方法是將厚樸酚溶于四氫呋喃，在堿性條件下，將氯甲基甲基醚加入反應(yīng)；均勻攪拌地加入預(yù)蒸餾的1-氯-2，3-環(huán)氧丙烷，加熱回流；分別加入六氫吡肼衍生物加熱回流，減壓濃縮，進(jìn)行純化及再結(jié)晶，得各中間產(chǎn)物；以硅膠柱層析法純化，可獲得式II的2-[2-(3-取代2-羥基丙氧基)-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚(2-[2-(3-substituted-2-hydroxypropoxy)-5-(2-propenyl)phenyl-4-(2-propenyl)-phenols])；多數(shù)的活性氧為氧自由基，但也有例外的，如單態(tài)氧分子(Singlet oxygen；1O2)及過氧化氫(H2O2)，不同的氧均有不同的半生期，其中羥基自由基(·OH)是活性最高且半生期最短的自由基，故它對人體的傷害也最嚴(yán)重，過氧自由基(RO2·)的半生期最長，這是造成過氧自由基可擴散至其他地方的原因，其生成是由于別的自由基攻擊不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids；PUFAs)而形成，當(dāng)過氧自由基誕生時，就是脂質(zhì)過氧化作用的開始；脂質(zhì)過氧化作用是氧自由基對人體造成傷害的主要機制，故在病理學(xué)上占有很重要的角色，如在中樞神經(jīng)系統(tǒng)方面，脂質(zhì)過氧化可使大腦及脊髓遭受損害，而導(dǎo)致退化性疾病的產(chǎn)生，如中風(fēng)(stroke)、帕金森氏癥(Parkinson’s disease)等。在心血管方面，可破壞內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cell)，使血管的功能受損，而產(chǎn)生許多心血管疾病，如高血壓。血管梗塞引起心肌缺血(ischemia)及再灌流(reperfusion)所造成的傷害，也與脂質(zhì)過氧化有關(guān)；在血液方面，可使血球的胞膜破裂，產(chǎn)生溶血的現(xiàn)象，諸多嚴(yán)重疾病的病因皆為脂質(zhì)過氧化作用；當(dāng)組織細(xì)胞受到損傷，例如外傷、發(fā)炎等，會造成細(xì)胞死亡。當(dāng)胞膜破裂，過渡金屬離子(transition metal ions)即從細(xì)胞中釋放出來，這些過渡金屬離子具氧化還原能力，可導(dǎo)致自由基的產(chǎn)生，進(jìn)而引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用。此外這些損傷也會活化環(huán)氧化酶(cyclooxygenase)及脂氧化酶(lipoxygenase)，而這兩個酵素會作用在不飽和脂肪酸上，產(chǎn)生自由基，也可引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用；當(dāng)血管硬化、梗塞或血管不正常極度收縮，使得血液無法正常灌流(Perfusion)，造成心肌缺血(myocardial ischemia)，心肌缺血會引起致命的心律不齊而導(dǎo)致死亡，許多研究結(jié)果認(rèn)為是由于氧自由基(oxygen free radical)造成的細(xì)胞過氧化傷害(peroxidation damage)，當(dāng)心肌缺血時，三磷酸腺甘(ATP)會降解成亞黃嘌呤(hypoxanthine)及嘌呤(purine)，經(jīng)由黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase)的作用，則產(chǎn)生超氧陰離子(superoxide anion)，再經(jīng)過過渡金屬的氧化還原能力而產(chǎn)生羥基自由基(hydroxyl radical)，這兩個自由基均會攻擊胞膜，進(jìn)而產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化作用，擴大組織細(xì)胞的傷害范圍，當(dāng)血液無法正常灌流時，通常給予的藥物不外乎是血管擴張劑，血栓溶解劑或是給予外科手術(shù)，使之再灌流，雖然再灌流可使缺氧的細(xì)胞獲得氧氣，但如附圖1所示大量氧氣進(jìn)入?yún)s使得脂質(zhì)過氧化作用更嚴(yán)重，由于自由基可直接或間接的攻擊胞膜的磷脂，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化作用，尤其容易攻擊C20∶4及C22∶6的不飽和脂肪酸，改變胞膜的結(jié)構(gòu)，進(jìn)而瓦解細(xì)胞的功能，由附圖2中可看出，脂質(zhì)過氧化作用為連鎖反應(yīng)，若無法適時阻止反應(yīng)的發(fā)生，則造成的傷害也是連鎖的，當(dāng)自由基攻擊不飽和脂肪酸，脂質(zhì)分子即會發(fā)生重排，而形成共軛雙烯(conjugated diene)的結(jié)構(gòu)，再經(jīng)過兩個不同的代謝途徑形成兩種脂質(zhì)過氧化物，一是環(huán)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)過氧化物(endoperoxide)及氫過氧化物(hydroperoxide)，最后脂質(zhì)過氧化作用的終產(chǎn)物為丙二醯二醛(malondialdehyde，MDA)，故計算丙二醯二醛(MDA)的含量是一般用來評估脂質(zhì)過氧化程度的指標(biāo)；在1995年Uko，E.A.等人于Brain Res第671期第159～163頁指出，在心血管疾病患者，包括所患疾病的并發(fā)癥為心血管病變者，其血漿及血管組織中均可測出大量的丙二醯二醛(MDA)，如糖尿病、高血壓及動脈硬化患者，在老化細(xì)胞中丙二醯二醛(MDA)的含量也比一般細(xì)胞高，研究發(fā)現(xiàn)丙二醯二醛可與體內(nèi)一些重要的分子產(chǎn)生反應(yīng)，如胺基酸、蛋白質(zhì)及核酸等，對人體造成傷害，本發(fā)明化合物良好的抗氧化活性、抗自由基活性使其具有降低血壓的效果，可發(fā)展為心血管藥物，對上述疾病具有治療作用。
結(jié)合附圖及圖表說明本發(fā)明的內(nèi)容及實施例圖1為大量氧氣的進(jìn)入?yún)s使脂質(zhì)過氧化作用更嚴(yán)重。
圖2為脂質(zhì)過氧化作用。
圖3為厚樸酚(magnolol)及異厚樸酚(honokiol)的結(jié)構(gòu)。
圖4為Feringa B.等人合成厚樸酚的方法。
圖5為Kupchan S.M.等人合成厚樸酚的方法。
圖6為何東英等人合成厚樸酚的方法。
圖7為Agharahimi，M.R.等人合成厚樸酚的方法。
圖8為厚樸酚(magnolol，●)與維生素E(α-Tocopherol，▲)抑制心肌粒線體耗氧量的能力(n＝6)。
圖9為厚樸酚(magnolol，●)與維生素E(α-Tocopherol，▲)抑制心肌粒線體產(chǎn)生丙二醯二醛(MDA)的能力(n＝6)。
圖10為厚樸酚(magnolol，●)與維生素E(α-Tocopherol，▲)抑制心肌粒線體產(chǎn)生共軛雙烯的能力(n＝3)。
圖11為厚樸酚(magnolol，●)與維生素E(α-Tocopherol，▲)與二苯硝基肼(DPPH)反應(yīng)90分鐘后，清除二苯硝基肼自由基的能力(n＝3)。
圖12為厚樸酚(magnolol，●)與維生素E(α-Tocopherol，▲)清除二苯硝基肼自由基的能力，測試化合物的濃度為200μM，(n＝3)。
圖13為本發(fā)明化合物清除二苯硝基肼自由基的能力(n＝3)。
圖14為本發(fā)明化合物清除二苯硝基肼自由基的能力(n＝3)。
圖15為本發(fā)明化合物產(chǎn)生丙二醯二醛(MDA)的能力(n＝3)。
表1為2-[3-取代甲基-2-羥基-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚系列化合物的物性、化性數(shù)據(jù)。
表2為2-[2-(3-取代2-羥基丙氧基)-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚系列化合物的物性、化性數(shù)據(jù)。
表3為二苯硝基肼(DPPH)試驗清除自由基的抗氧化能力。
表4為降血壓活性。
本發(fā)明的主要內(nèi)容可分為三部分說明，其一為厚樸酚新的合成方法；其二為厚樸酚兩大系列化合物；其三為新的合成方法制備的厚樸酚兩大系列化合物，具有的良好抗氧化活性，抗自由基活性，降低血壓的效果并可以該化合物為活性成分的藥物組合物的應(yīng)用。
厚樸酚新的合成方法一是先合成對丙烯酚，再將其聯(lián)結(jié)起來；二是在雙酚的對位上導(dǎo)入丙烯基，根據(jù)1992年Singh，B等人于J.Med.Chem.第35期第4858～4865頁報導(dǎo)，合成一系列含瑪梨齊(Mannich)鹽基的酚衍生物，其中氫氯化1-(1-吡咯啶甲基-萘酚)((1-pyrrolidine-1-yl)-methyl-2-naphthol·HCl)有強力β型降壓的活性。將所合成的厚樸酚為骨架的化合物，導(dǎo)入一系列可能具有降血壓等活性的瑪梨齊(Mannich)鹽基，期待該化合物除具有良好的抗氧化活性，更兼具降血壓等心血管活性。
本發(fā)明所合成二系列厚樸酚為骨架的化合物，是選用兩方法，一是取厚樸酚(magnolol)與甲醛，加入第二胺衍生物在酸性條件下加熱攪拌充分反應(yīng)后，減壓濃縮，再進(jìn)行純化及再結(jié)晶；可獲得有瑪梨齊(Mannich)鹽基，如式1的2-[3-取代甲基-2-羥基-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚(2-[3-substituted methyl-2-hydroxy-5-(2-propenyl)phenyl]-4-(2-propenyl)phenols)；另一系列的合成方法是將厚樸酚溶于四氫呋喃，于堿性條件下，將氯甲基甲基醚加入反應(yīng)；均勻攪拌地加入預(yù)蒸餾的1-氯-2，3-環(huán)氧丙烷，加熱回流；分別加入六氫吡肼衍生物加熱回流，減壓濃縮，進(jìn)行純化及再結(jié)晶，得各中間產(chǎn)物；以硅膠柱層析法純化，可獲得式II的2-[2-(3-取代2-羥基丙氧基)-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚(2-[2-(3-Substituted-2-hydroxypropoxy)-5-(2-propenyl)phenyl-4-(2-propenyl)phenols])。
本發(fā)明所合成的式I與式II厚樸酚兩大系列化合物的結(jié)構(gòu)如下所示
上述R是指下列基團(tuán)
而其中R1可選用-(-CH2-)n-C-CH2-R2，
而其中R2可選用
而其中R3可選用鹵素、氫基、甲基氧基、乙基氧基、丙基氧基、NO2，n值是自然數(shù)為0、1、2、3。
因此R尚可代表下列基團(tuán)
本發(fā)明所制備的化合物，經(jīng)純化方法或結(jié)晶后分別測定熔點(mp)、元素分析、質(zhì)譜(MS)、紅外線光譜(IR)、核磁共振光譜(1H-NMR，13CH-NMR)、紫外線吸收(UV)等物理化學(xué)資料。
本發(fā)明所合成的式I與式II厚樸酚兩大系列化合物，經(jīng)實施例24、25、26藥理活性測試，其結(jié)果如附圖13、附圖14、附圖15及表3所示化合物EC-2的抗自由基活性良好，遠(yuǎn)勝于厚樸酚，也比臨床藥物塔羅斯(Trolox)及普羅河(Probucol)更強。
本發(fā)明的化合物添加各種賦形劑，如硬脂酸鎂、玉米粉、淀粉、乳糖、羥酸甲基纖維素納、乙醇、甘油等，或稀釋劑(diluents)、潤滑劑(lubricants)、矯味劑、崩散劑(disintegrants)、粘合劑(binders)、或著色劑、甜味劑制成錠劑或其他固形制劑，而用磷酸鹽類緩沖液調(diào)整酸堿度(PH)值可制成注射劑或其他液劑及各種劑型，其中固體劑型是包括片劑、錠劑、粉末、膠囊、舌下片、顆粒等劑型。本發(fā)明的藥學(xué)可容許酸加成鹽，以及該藥學(xué)可容許酸加成鹽的藥學(xué)制品，除供口服給藥、直腸投與之固體劑型外，也可制備為有效量的注射劑型、液體劑型或非經(jīng)腸道使用的注射劑型，或直接涂敷患處的軟膏劑型。一般投藥劑量可隨癥狀需要加以調(diào)配，通常為每人每次50mg到300mg，每天3次。
本發(fā)明的實施例如下實施例1為厚樸酚(magnolol)的合成取18.6g(0.100mol)2，2’-聯(lián)酚置于500ml反應(yīng)瓶中，加入24.2g(0.200mol)丙烯溴及0.20g(1.500mmol)氯化銅(II)，再加30ml水，并充氮氣，加熱回流10小時后，再加入飽和碳酸氫鈉水溶液，中和反應(yīng)所產(chǎn)生的溴酸，以醋酸乙酯及水抽提，減壓濃縮至干，以硅膠柱層析法(乙醚∶己烷＝1∶2)純化得白色結(jié)晶產(chǎn)物，稱重得5.3g(28.5％)。本產(chǎn)品厚樸酚熔點與物化性質(zhì)與天然來源的純品相同。
實施例2至8為EC-2、EC-3、EC-4、EC-5、EC-9、EC-10、EC-112-[3-取代甲基-2-羥基-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚(2-[3-substituted methyl-2-hydroxy-5-(2-propenyl)phenyl]-4-(2-propenyl)phenols)的一般合成法。
取0.200g(0.752mmol)厚樸酚溶于乙醇10ml中，分別加入0.83mmol第二胺衍生物，加熱攪拌5小時，減壓濃縮，進(jìn)行純化及再結(jié)晶得各產(chǎn)物EC-2、EC-4、EC-5、EC-9、EC-10、EC-11，各產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)詳見表1。
實施例9為2-[2-甲氧基甲氧基-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚(2-[2-methoxymethoxy-5-(2-propenyl)phenyl-4-(2-Propenyl)phenol，EC-7)。
取0.200g(0.752mmol)厚樸酚溶于10ml四氫呋喃，置于反應(yīng)瓶中，取0.020g(0.830mmol)氫化鈉溶于1ml四氫呋喃，將此溶液緩緩加入反應(yīng)瓶中，在室溫下攪拌15分鐘，靜置5分鐘，再攪拌1小時，最后緩緩加入60.5mg(0.752mmol)氯甲基甲基醚，室溫下攪拌12小時，減壓濃縮至干，干燥后以硅膠柱層析法(EA∶Hexane＝1∶5)純化，稱重得產(chǎn)物0.162g產(chǎn)率81％。
分析數(shù)據(jù)如下UV(EtOH)λmax290，214nm.
MS(EI，70eV)m/z(％)＝310[M+](100％)IR(KBr)3320，3210，2924，1644，1589，1504，1410，1200，1010，912，820cm-1。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ3.42(3H，s，CH3OCH2)，3.45(4H，d，J＝5.2Hz，2×CH2CH＝CH2)，5.12(4H，m，2×CH2CH＝CH2)，5.16(2H，s，OCH2O)，6.05(2H，m，2×CH2CH＝CH2)，6.20(1H，s，OH)，7.00-7.23(6H，m，6×Ar-H)13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ40.5，57.0，96.6，116.1，116.6，117.2，117.8，126.6，129.0，130.0，131.8，132.9，135.8，137.90，152.5。
Rf(EA∶Hexane＝1∶5)＝0.50元素分析分子式C20H22O3理論值C，77.39；H，7.14實際值C，77.11；H，7.19。
實施例10為1-(環(huán)氧乙烷-2-基甲氧基)-2-[(2-甲氧基甲氧基-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)苯(1-(oxiran-2-ylmethoxy)-2-[2-methoxy methoxy-5-(2-propenyl)phenyl]-4-(2-propenyl)benzene，EC-8)。
取0.200g(0.64mmol)實施例9產(chǎn)物EC-7溶于10ml乙醇，置于反應(yīng)瓶中，加入預(yù)蒸餾的476.5mg(5.1mmol)1-氯-2，3-環(huán)氧丙烷，攪拌均勻，加熱回流2小時，靜置，減壓濃縮至干，以硅膠柱層析法(EA∶Hexane＝1∶5)純化產(chǎn)物，稱重得產(chǎn)物0.21g產(chǎn)率100％。
分析數(shù)據(jù)如下UV(EtOH)λmax285，217nm.
MS(EI，70eV)m/z(％)＝366[M+](100％)IR(KBr)3289，3081，2950，1640，1504，1410，1350，1270，1010，912，840，820cm-1。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.76(2H，d，J＝2.8Hz，CH2OCH)，3.36(3H，s，CH3OCH2)，3.39(4H，d，J＝8.7Hz，2×CH2CH＝CH2)，5.05(4H，m，2×CH2CH＝CH2)，5.07(2H，s，OCH2O)，6.01(2H，m，2×CH2CH＝CH2)，6.91-7.15(6H，m，6×Ar-H)13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ40.0，50.8，56.4，69.9，96.2，113.7，116.1，116.3，129.3，129.0，132.4，133.2，138.3，154.0，154.99。
Rf(EA∶Hexane＝1∶5)＝0.40元素分析分子式C23H26O4理論值C，75.38；H，7.15實際值C，75.39；H，7.28。
實施例11至23為2-[2-(3-取代2-羥基丙氧基)-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚[2-[2-(3-substituted 2-hydroxypropoxy)-5-(2-propenyl)phenyl]-4-(2-propenyl)phenols，EC-130～EC-250)。
取1.2g(3.28mmol)實施例10產(chǎn)物EC-8溶于50ml甲醇中，分別加入6.56mmol六氫吡肼衍生物(若為氫氯化衍生物，則需加入等量的碳酸氫鈉，以除去鹽酸)，加熱回流5小時，減壓濃縮，進(jìn)行純化及再結(jié)晶，得各中間產(chǎn)物，本中間產(chǎn)物末經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定，直接進(jìn)行下步驟反應(yīng)分別取3.10mmol上述中間產(chǎn)物，溶于THF∶i-PrOH＝1∶1的溶劑中，加入1.2ml濃鹽酸(37％)，在室溫下攪拌18小時后，加入飽和碳酸氫鈉溶液中和后，分配于水及醋酸乙酯中，有機層減壓濃縮，以硅膠柱層析法純化，即得下列的第二系列產(chǎn)物EC-130、EC-140、EC-150、EC-160、EC-170、EC-180、EC-190、EC-200、EC-210、EC-220、EC-230、EC-240、EC-250，分析數(shù)據(jù)詳見表2。
實施例24為二苯硝基肼(DPPH)試驗抗氧化活性依照1966年Mellors，A.等人于J.Biol.Chem，第241期第4353頁揭示方法，將二苯硝基肼(DPPH)溶于乙醇，配置成100μM。將待測檢體溶乙醇，分別配置成100μM、50μM、20μM及10μM，將待測檢體加入二苯硝基肼(1，1-diphenyl-2-picryhydrazyl.DPPH)中，均勻攪拌，靜置30分鐘，在波長517nm下測其吸光值，由測出的吸光值，即可估計清除自由基的活性，分析數(shù)據(jù)詳見表3。
實施例25為抗脂質(zhì)過氧化活性。
依照1966年Teng.C.M等人于Eur.J.Pharmarco.第303期第129-139頁揭示的方法，取周齡8周SD鼠的全腦組織，去除小腦，用冰冷的Krebs緩沖液沖洗，并用道氏均質(zhì)機(Dounce homogenizer)將之均質(zhì)化，低溫下低速離心10分鐘，加入100μM欲測試活性的化合物，靜置反應(yīng)10分鐘，加入200μM亞鐵離子，并在37℃下反應(yīng)30分鐘，以誘發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，加入10μM的冰冷三氯醋酸溶液及200μM的硫巴比妥酸(thiobarbituric acid)做呈色劑，于沸水下反應(yīng)15分鐘后取出，等其冷卻，再加入1ml的正丁醇，離心5分鐘，取出有機層，在波長532nm下測其吸光值，即可估計其抗脂質(zhì)過氧化活性，其結(jié)果顯示化合物EC-5、EC-6、EC-9、EC-10、EC-170及EC-250的抗脂質(zhì)過氧化活性比厚樸酚強，而EC-150與厚樸酚相當(dāng)，其血壓、心跳的變化如表4所示。
實施例26為周邊給藥降血壓試驗依照1993年Tao，P.L.等人于Eur.J.Pharmarco.第243期第135頁揭示的方法，取周齡10周，體重約250-300g的雄性先天高血壓的大白鼠，經(jīng)腹腔注射50mg/kg本他巴比塔(pentobarbital)麻醉后，分別作股動脈及股靜脈插管，將充有100μg/ml肝素(heparin)的聚乙烯(polyethylene)導(dǎo)管(PE-50)插入股動脈，并連接于壓力轉(zhuǎn)換器(Gould statham P23ID)以偵測血壓，而心跳則利用血壓博動連接于心跳監(jiān)測器(Tachometer，Grass Co)測得，再經(jīng)由高式(GrassModel)7D生理多項描記器記錄其變化，另將充有生理食鹽水的導(dǎo)管插入股靜脈，做給藥及補充體液之用，做氣管插管(PE-240)，防止氣管被痰阻塞及供給氧氣之用。手術(shù)完成后，待動物的血壓、心跳穩(wěn)定達(dá)30分鐘，開始給藥，經(jīng)由靜脈插管打入0.4mg/200g的待測藥物，同時以01ml生理食鹽水沖洗導(dǎo)管管壁所殘留的藥物，記錄其心跳及血壓的變化。
平均血壓(mean blood pressure；MBP)的計算法[(收縮壓-舒張壓)/3]+舒張壓。
表1
表2
表3Compound Concentration(μM).atΔA＝2Magnolol 65.450±10.542Probucol 4.796±0.309Trolox3.04±1.022EC-2 0.690±0.140表4化合物Δ平均血壓Δ心跳速率作用時間(mmHg)(bpm) (分)Magnolol- --EC-2- --EC-3-66.6±17.5 45±82EC-4- --EC-5- --EC-6-23.3±10 -8 2EC-9- --EC-10 - --EC-130 -49.2±17.5 4±5.3 35±5EC-140 -31.7±5 -24±8 35±15EC-150 - --EC-160 -75.0±17.5 81±0.3EC-170 -48.3 60±46EC-180 - --EC-190 -30 -24±8 12±3EC-200 - --EC-210 - --EC-220 - --EC-230 -20±5-24±6 0.5EC-240 - --EC-250 +68.4±5 +75±5 12.5±2.5Carvedilol -83.4 -24 70±10-表示無作用
權(quán)利要求
1.一種厚樸酚系列化合物，其結(jié)構(gòu)如式I和式I
其中R是指下列基團(tuán)
R1可選用-(-CH2-)n-C-CH2-R2，
而其中R2可選用
而其中R3可選用鹵素、氫基、甲基氧基、乙基氧基、丙基氧其、NO2、n為自然數(shù)0、1、2、3。
2.一種合成式I所示厚樸酚系列化合物的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟a)取厚樸酚(magnolol)與甲醛，加入第二胺衍生物在酸性條件下加熱攪拌充分反應(yīng)后；b)減壓濃縮；c)再進(jìn)行純化及再結(jié)晶；d)可獲得有瑪梨齊(Mannich)鹽基式I的2-[3-取代甲基-2-羥基-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚(2-[3-substitutedmethyl-2-hydroxy-5-(2-propenyl)phenyl]-4-(2-propenyl)phenols)。
3.一種合成式II所示的厚樸酚系列化合物的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟a)將厚樸酚溶于四氫呋喃，在堿性條件下，將氯甲基甲基醚加入反應(yīng)；b)均勻攪拌并加入預(yù)蒸餾的1-氯-2，3-環(huán)氧丙烷，加熱回流；c)分別加入六氫吡肼衍生物再加熱回流；d)減壓濃縮；e)進(jìn)行純化及再結(jié)晶，得各中間產(chǎn)物；f)以硅膠柱層析法純化，可獲得式II的2-[2-(3-取代2-羥基丙氧基)-5-(2-丙烯基)苯基]-4-(2-丙烯基)酚(2-[2-(3-substituted-2-hydroxypropoxy)-5-(2-propenyl)phenyl-4-(2-propenyl)phenols)。
4.一種具有降低血壓的藥物組合物，其特征在于以權(quán)利要求1中式I結(jié)構(gòu)的厚樸酚系列化合物為主要成份，隨各種劑型的需要添加各種賦形劑。
5.一種具有降低血壓的藥物組合物，其特征在于以權(quán)利要求1中式II結(jié)構(gòu)的厚樸酚系列化合物為主要成份，隨各種劑型的需要添加各種賦形劑。
6.一種具有抗氧化活性的藥物組合物，其特征在于以權(quán)利要求1中式I結(jié)構(gòu)的厚樸酚系列化合物為主要成份，隨各種劑型的需要添加各種賦形劑。
7.一種具有抗氧化活性的藥物組合物，其特征在于以權(quán)利要求1中式II結(jié)構(gòu)的厚樸酚系列化合物為主要成份，隨各種劑型的需要添加各種賦形劑。
8.一種具有抗自由基活性的藥物組合物，其特征在于以權(quán)利要求1中式I結(jié)構(gòu)的厚樸酚系列化合物為主要成份，隨各種劑型的需要添加各種賦形劑。
9.一種具有抗自由基活性的藥物組合物，其特征在于以權(quán)利要求1中式II結(jié)構(gòu)的厚樸酚系列化合物為主要成份，隨各種劑型的需要添加各種賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了厚樸酚系列化合物的結(jié)構(gòu)、合成方法及其活性,其中結(jié)構(gòu)式為兩大系列如式Ⅰ與式Ⅱ所示(見右式),R
文檔編號C07D295/00GK1270168SQ9910555
公開日2000年10月18日 申請日期1999年4月12日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月12日
發(fā)明者李安榮 申請人:李安榮