枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝，包括以下步驟：a、將枳實(shí)粉碎等量分裝于1號和2號滲濾罐；1號罐中加入稀酸溶液浸泡、攪拌、滲濾，流出液加入2號罐與1號罐同樣的操作；合并滲濾液，真空濃縮后上樹脂柱吸附辛弗林，用稀氨水解吸收集解吸液，真空干燥得辛弗林干品；b、枳實(shí)渣用清水洗至中性，用稀強(qiáng)堿溶液浸泡、攪拌、滲濾，真空濃縮，加無水甲醇或無水乙醇，靜置，過濾，濾液真空濃縮回收醇后，得到母液；c、將母液上樹脂柱，過層析柱吸附PMFs，用甲醇或乙醇靜壓過柱解吸，收集解吸液，真空濃縮回收洗脫劑得PMFs；通過樹脂的流出液，經(jīng)鹽酸酸化，靜置析晶，得橙皮甙干品。
【專利說明】枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝 【技術(shù)領(lǐng)域】
[〇〇〇1] 本發(fā)明涉及一種聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和多甲氧基黃酮（PMFs)的生產(chǎn)工藝，特 別是涉及一種從中藥枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的低成本高效生產(chǎn)工藝，屬于 生物分離工程領(lǐng)域。 【背景技術(shù)】
[0002] 積實(shí)為蕓香科植物酸橙（Citrus aurantium L.)及其栽培變種或甜橙（Citrus sinensis Osbeck)的干燥幼果。積實(shí)作為傳統(tǒng)中藥，因其性溫，味苦、辛、酸，歸脾、胃經(jīng)，具 有破氣消積、化痰散痞的功效，而被廣泛應(yīng)用于結(jié)胸、胃下垂、脫肛、積滯內(nèi)停、痞滿脹痛、瀉 痢后重、大便不通、痰滯氣阻胸痹、子宮脫垂等癥。現(xiàn)代中藥化學(xué)研究表明，枳實(shí)的主要有效 成分為揮發(fā)油類、生物堿類以及黃酮類成分，特別是辛弗林(生物堿)、橙皮甙(黃酮類）和多 甲氧基黃酮（PMFs，主要成分為川橙皮素和橘紅素)。
[0003] 辛弗林具有強(qiáng)心、利尿、收縮血管、升高血壓和較強(qiáng)的擴(kuò)張氣管和支氣管的作用， 近年來的研究發(fā)現(xiàn)辛弗林能夠提高新陳代謝、增加能量水平，氧化脂肪，是一種天然興奮 齊U，無副作用。辛弗林臨床用于治療支氣管哮喘，手術(shù)和麻醉時(shí)低血壓、虛脫及休克、體位性 低血壓等。近年來，研究發(fā)現(xiàn)辛弗林可氧化脂肪，作用溫和，無副作用，因此成為一些減肥藥 物的有效成分，在治療因肥胖引起的輕度和中度抑郁癥也顯示了良好的療效。目前，辛弗林 廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、飲料等保健行業(yè)。
[0004] 橙皮式（Hesperidin)是積實(shí)(含陳皮）中最豐富的黃酮類化合物，也是指標(biāo)性成 分。橙皮甙的生物學(xué)效應(yīng)包括：（1)預(yù)防心血管疾病。橙皮甙通過消除細(xì)胞內(nèi)過氧亞硝酸 鹽防止纖維細(xì)胞損傷、降低血管脆性、縮短出血時(shí)間、維持血管正常滲透壓、防止心腦神經(jīng) 細(xì)胞退性型病變。具有降血脂和防治動(dòng)脈粥樣硬化的作用?？勺饔糜谂R床心血管疾病輔助 治療。（2)對胃腸功能及平滑肌作用。橙皮甙對胃腸有興奮作用，是健胃消食類藥物的主要 成分之一。（3)維生素 C樣作用。橙皮甙能改善由于維生素 C缺乏導(dǎo)致的疾病，如提高腎 上腺、脾及白細(xì)胞中抗壞血酸的含量，防治眼球結(jié)膜血管內(nèi)紅細(xì)胞凝聚和毛細(xì)血管抵抗力 降低等。（4)抗過氧化和清除羥自由基作用。橙皮式能夠抑制羥自由基引起的紅細(xì)胞膜質(zhì) 過氧化，保護(hù)羥自由基引起的紅細(xì)胞膜氧化損傷。（5)其他：如鎮(zhèn)靜、催眠作用，抗腫瘤，廣 譜抗菌作用，降膽固醇，治療風(fēng)濕，抑制皮膚色素沉積，防止骨質(zhì)訴訟等。
[0005] 多甲氧基黃酮（Polymethoxylatednavones, PMFs)是一類僅存在于柑桔屬水果中 的黃酮化合物，在柑桔果皮部位含量豐富，它具有抗癌、抗炎癥、抗突變、抗血小板凝集、 降膽固醇水平及抗菌活性等生理功能，同時(shí)它可作為柑桔品種來源、雜種初篩等園藝分類 學(xué)上的標(biāo)識(shí)物，也可用來評價(jià)橙汁是否存在摻假情況。由于PMFs的重要生理功能，美 國SourceOne公司已商品化生產(chǎn)一種基于柑桔PMFs和棕?cái)R果萃取物的保健品，產(chǎn)品名為 "sytrinol"，經(jīng)臨床試驗(yàn)表明，該產(chǎn)品可同時(shí)降低總膽固醇（TC)、低密度脂蛋白膽固醇 (LDL-C)和甘油三脂（TG)，并可增加高密度脂蛋白（HDL)，是一強(qiáng)抗氧化劑并兼有抗炎癥 效果，且無藥物交互作用，對心腦血管疾病具有很好療效。該產(chǎn)品在全球各大藥店均有銷 售，前景相當(dāng)可觀！我國柑桔PMFs的研究報(bào)道較少，特別在分離純化等方面，生產(chǎn)能供 應(yīng)全球需要的合格的PMFs更是寥寥無幾。
[0006] 基于枳實(shí)中上述化合物的重要功效和應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)能陸陸續(xù)續(xù)地分離 出單體，并進(jìn)入工業(yè)化生產(chǎn)，但僅限于一種或兩種化合的分離、生產(chǎn)。如中國發(fā)明專利申請 201110173777. 4號公開的一種從枳實(shí)中提取橙皮甙的制備方法；文獻(xiàn)：曾超珍等，中國食 品學(xué)報(bào)，2012,12 (3):119-124 ;文獻(xiàn)：梁志鴻等，食品科技：植物提取與應(yīng)用，2012, 37 (3): 225-228 ;僅公開了單獨(dú)提取橙皮甙。
[0007] 文獻(xiàn)：廖茂梁等，現(xiàn)代藥物與臨床，2011，26 (2) :129-133 ;中國發(fā)明專利申請 01106994. 5號公開的從中藥枳實(shí)中提取辛弗林的方法，僅公開了單獨(dú)提取辛弗林。
[0008] 中國發(fā)明專利申請201210024789. 5號公開了一種從檸檬中提取多甲氧基黃酮的 工藝、中國發(fā)明專利201210093926.0號公開的一種從工業(yè)生產(chǎn)廢料中提取純化3種多甲氧 基黃酮的方法、中國發(fā)明專利申請201210433692. X號公開的一種從柑橘類果皮中提取高 純度川陳皮素的方法，均是僅提取PMFs。
[0009] 中國發(fā)明專利申請201310035112. 6號公開的一種從枳實(shí)中提取橙皮甙和辛弗林 的方法、中國發(fā)明專利201010609831. 0號公開的一種從枳實(shí)原料中綜合提取辛弗林和橙 皮甙的方法，報(bào)道了聯(lián)合提取辛弗林和橙皮甙。
[0010] 但上述公開文獻(xiàn)中均沒有同時(shí)提取和分離三種藥用有效成分的報(bào)道，可見其分離 和提取是多么不易，并且分離和提取過程需要浪費(fèi)大量輔料和熱能。特別是聯(lián)合提取，既要 考慮到收率與含量是否能夠滿足需要，又要考慮到成本與工業(yè)化生產(chǎn)的需求，甚至還要考 慮到是否能夠節(jié)約材料、是否能夠回收循環(huán)利用等等因素。基于市場對辛弗林、橙皮甙和多 甲氧基黃酮的大量需求、原材料枳實(shí)的數(shù)量、輔料的數(shù)量等等原因，急需提供一種能夠同時(shí) 提取和分離三種藥用有效成分，收率與含量均有大幅提高、所需熱能大幅、能耗降低、節(jié)約 碳酸氫鈉、氯化鈣等輔料，用無水醇沉淀雜質(zhì)，效果好且能回收循環(huán)利用的枳實(shí)中聯(lián)合提取 辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝。
【發(fā)明內(nèi)容】

[〇〇11] 本發(fā)明的目的是提供一種能夠同時(shí)提取和分離三種藥用有效成分，收率與含量均 有大幅提高、所需熱能大幅、能耗降低、節(jié)約碳酸氫鈉、氯化鈣等輔料，用無水醇沉淀雜質(zhì)， 效果好且能回收循環(huán)利用的枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝。
[0012] 本發(fā)明的基本構(gòu)思是：基于前期工藝中國發(fā)明專利申請：CN201210224593. 0號公 開的一種從枳實(shí)中提取辛弗林和橙皮甙的方法，改進(jìn)和創(chuàng)新發(fā)明了從枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗 林、橙皮甙和PMFs的簡單化生產(chǎn)工藝。從枳實(shí)中聯(lián)合提取不同類別高附加值中藥有效成分 辛弗林、橙皮甙和PMFs，以綜合利用祖國中藥寶貴資源，得到高品位的有效成分，實(shí)現(xiàn)中藥 現(xiàn)代化生產(chǎn)。技術(shù)方案基本按照三個(gè)步驟進(jìn)行，其中步驟一是辛弗林的提取與分離。將枳 實(shí)篩去石子、鐵釘?shù)入s物，淘去泥沙，風(fēng)干至浸潤狀態(tài)，粉碎。等量分裝于兩個(gè)滲濾罐，編為1 號和2號。先向1中加入稀酸溶液浸泡、攪拌、滲濾，流出液再加入2號罐作同樣的操作。合 并滲濾液，真空濃縮至原體積的70%-90%后上樹脂柱(樹脂已處理）解吸（與吸附相反，解吸 的意思就是將樹脂吸附的有效成分解吸附至解吸溶劑中。吸附和解吸是一組相反的過程)。 然后水洗至中性并用稀氨水解吸、收集解吸液，真空干燥得辛弗林干品?；厥瞻敝貜?fù)使用。
[0013] 步驟二是PMFs與橙皮甙的同時(shí)提取。酸提后留下的枳實(shí)渣，立即用清水洗至中 性，再用稀強(qiáng)堿溶液浸泡、攪拌、滲濾，操作過程同步驟一。合并滲濾液，真空濃縮至原體積 的70%，加無水醇調(diào)節(jié)醇濃度70%-80%，靜置4-8h，過濾，濾液真空濃縮回收醇后，母液備用。
[0014] 步驟三是PMFs與橙皮甙的分離。將步驟二所得母液上已處理好的樹脂柱，然后解 吸，收集解吸液，真空濃縮回收洗脫劑得PMFs浸膏，浸膏經(jīng)真空干燥，粉碎得粉末。通過樹 脂的流出液，經(jīng)鹽酸酸化至pH值為5,靜置析晶，常壓干燥得橙皮甙干品。
[0015] 其中，步驟一中所述稀酸溶液可以是稀鹽酸或者稀硫酸，其中稀鹽酸濃度 為0.08%-0. 20%，稀硫酸濃度為0.08%。步驟一中所述真空濃縮條件是真空度控制在 0. 08Mpa-0. 085Mpa，溫度65°C -70°C，濃縮至原體積的1/3-1/2。步驟一中所述樹脂柱為不 銹鋼材質(zhì)，填料為D001、D061和D152大孔樹脂其中一種。步驟一中所述洗脫是指用濃度 為3%-10%的氨水溶液以6L/h的速率過柱。步驟一中所述真空干燥條件為真空度控制在 0· 08Mpa-0. 085Mpa，溫度 35? -45?。
[0016] 其中，步驟二中所述稀強(qiáng)堿溶液是指濃度為3%-6%的氫氧化鈉水溶液。步驟二中 所述真空濃縮條件同步驟一。步驟二中所述無水醇為無水甲醇或無水乙醇。步驟二中所述 回收醇的真空條件為真空度控制在〇. 〇8Mpa-〇. 085Mpa，溫度65°C -75°C，濃縮至母液用最 低量程酒精計(jì)測不出為止。
[0017] 其中，步驟三中所述樹脂柱為不銹鋼材質(zhì)，填料為D254和706大孔吸附樹脂的 一種。步驟三中所述解吸(洗脫）條件是指用70%-80%的甲醇或乙醇溶液，解吸(洗脫） 時(shí)間4-10h。步驟三中所述PMFs浸膏是指在真空濃縮過程中先后經(jīng)析晶、結(jié)膠、抱團(tuán)、 團(tuán)塊生長等步驟形成的粘稠狀團(tuán)塊物。步驟三中所述真空干燥條件是指真空度控制在 0. 08Mpa-0. 085Mpa，溫度50°C -65°C，干燥8h。步驟三中所述鹽酸為濃度為5%的稀鹽酸水 溶液。步驟三中所述靜置析晶是指靜置〇.5h攪拌一次，再靜置4-6h。步驟三中所述橙皮甙 的干燥條件為常壓70°C烘干或風(fēng)干。
[0018] 這樣一來，與現(xiàn)有生產(chǎn)工藝相比，本發(fā)明的有益效果在于：（1)從中藥枳實(shí)中 同時(shí)提取和分離了三種藥用有效成分，特別是增加了高附加值PMFs的提出，其收率0. 558%-0. 627%，含量(干品以川橙皮素和橘紅素總量計(jì)）76. 4%-93. 62%。（ 2)在原工藝的 基礎(chǔ)上，辛弗林和橙皮甙的收率與含量均有所提高，分別為：辛弗林收率19%-25%，含量 25%-54. 76% ;橙皮甙收率28%-29. 8%，含量97. 42%-98. 24%。（3)在原工藝的基礎(chǔ)上，淘汰了 傳統(tǒng)的煎煮工藝。雖然增加了真空濃縮和干燥過程，但所需熱能大幅降低，能耗綜合計(jì)算 (按月平均標(biāo)煤計(jì)）降低3%左右。例如，按原工藝生產(chǎn)平均每月需標(biāo)煤4. lit，按此發(fā)明工 藝則只需3. 98t，節(jié)約用煤3. 16%。（4)在原工藝的基礎(chǔ)上，節(jié)約了碳酸氫鈉、氯化鈣等輔料， 用無水醇沉淀雜質(zhì)，效果較好，且能回收利用，回收率85%，濃度74%-85%，可循環(huán)利用。
[0019] 本發(fā)明中所使用的濃鹽酸、濃硫酸、濃液堿、濃氨水、無水乙醇、甲醇均為市售工業(yè) 級，根據(jù)需要用蒸餾水稀釋配成所需濃度使用，其中稀鹽酸、稀硫酸、稀NaOH和稀氨水味質(zhì) 量分?jǐn)?shù)（W/W)，甲醇和乙醇為體積分?jǐn)?shù)（V/V)。
[0020] 本發(fā)明中所使用的PMFs對照品（主要指標(biāo)成分為川橙皮素 Ν0Β和橘紅素 T)經(jīng)中 國藥品生物制品檢定所鑒定。
[0021] 具體來說，本發(fā)明的枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝，其特征是包 括以下步驟： a、 將枳實(shí)篩去雜物、風(fēng)干至浸潤狀態(tài)，然后粉碎；等量分裝于兩個(gè)滲濾罐，編為1號和 2號；先向1號罐中加入稀酸溶液浸泡、攪拌、滲濾，所述稀酸溶液是濃度為0. 08%-0. 20%的 稀鹽酸或者濃度為〇. 08%的稀硫酸，流出液再加入2號罐作進(jìn)行與1號罐同樣的操作；合并 滲濾液，真空度控制在〇. 〇8Mpa-〇. 085Mpa，溫度65°C -70°C，真空濃縮至原體積的70%-90% 后上樹脂柱，滲濾液過層析柱吸附辛弗林，吸附時(shí)間6h-14h，然后水洗至中性并用稀氨水解 吸，所述解吸是指用濃度為3%-10%的氨水溶液以6L/h的速率解吸，收集解吸液，真空干燥 得辛弗林干品，所述真空干燥條件為真空度控制在〇. 〇8Mpa-〇. 085Mpa，溫度35°C -45°C ; b、 酸提后留下的枳實(shí)渣，立即用清水洗至中性，再用稀強(qiáng)堿溶液浸泡、攪拌、滲濾，所述 稀強(qiáng)堿溶液是指濃度為3%-6%的氫氧化鈉水溶液，操作過程同步驟a中所述的稀強(qiáng)堿溶液 浸泡、攪拌、滲濾，合并滲濾液，真空濃縮至原體積的70%，加無水甲醇調(diào)節(jié)醇濃度70%-80% 或無水乙醇調(diào)節(jié)醇濃度80%，靜置4-8h，過濾，濾液真空濃縮回收醇后，得到母液備用，所述 回收醇的真空條件為真空度控制在〇. 〇8Mpa-〇. 085Mpa，溫度65°C -75°C ; c、 將步驟b中所得母液上已處理好的樹脂柱，過層析柱吸附PMFs，吸附時(shí)間10h-30h， 然后用70%濃度的甲醇或70%-80%濃度的乙醇，靜壓過柱解吸4-10h，收集解吸液，真空濃縮 回收解吸(洗脫）劑得PMFs浸膏，濃縮至母液用最低量程酒精計(jì)測不出為止，浸膏經(jīng)真空干 燥，所述真空干燥是指真空度控制在0. 08Mpa-0. 085Mpa，溫度50°C -65°C，干燥8h，粉碎得 粉末；通過樹脂的流出液，經(jīng)鹽酸酸化至pH值為5,所述鹽酸為濃度為5%的稀鹽酸水溶液， 靜置析晶，常壓70°C烘干或風(fēng)干得橙皮甙干品。
[0022] 本發(fā)明的步驟a中所述樹脂柱可以為不銹鋼材質(zhì)，填料為D001、D061和D152大孔 樹脂其中一種。
[0023] 本發(fā)明的步驟b中所述真空濃縮條件可以同步驟a。
[0024] 本發(fā)明的步驟c中所述樹脂柱為不銹鋼材質(zhì)，填料為D254和706大孔吸附樹脂的 一種。
[0025] 本發(fā)明的步驟c中所述PMFs浸膏是指在真空濃縮過程中先后經(jīng)析晶、結(jié)膠、抱團(tuán)、 團(tuán)塊生長等步驟形成的粘稠狀團(tuán)塊物。
[0026] 本發(fā)明的步驟c中所述靜置析晶是指靜置0. 5h，攪拌一次再靜置4h_6h。
[0027] 與前述現(xiàn)有同類產(chǎn)品相比，本發(fā)明的枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工 藝能夠同時(shí)提取和分離三種藥用有效成分，收率與含量均有大幅提高，所需熱能大幅降低， 能耗綜合計(jì)算降低3%。并且在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，節(jié)約了碳酸氫鈉、氯化鈣等輔料，用無水 醇沉淀雜質(zhì)，效果好且能回收循環(huán)利用。
[0028] 本發(fā)明的內(nèi)容結(jié)合以下實(shí)施例作更進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的內(nèi)容不僅限于實(shí)施 例中所涉及的內(nèi)容。下面通過具體的實(shí)施方案敘述本發(fā)明中辛弗林、橙皮甙和PMFs聯(lián)合提 取的生產(chǎn)方法。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的前提下，對這些實(shí) 施方案中的物料成分和用量進(jìn)行的各種改變或改動(dòng)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0029] 圖1為本發(fā)明枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝的工藝流程圖。
[0030] 圖2為本發(fā)明枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝中所使用PMFs的 HPLC 圖。
[0031] 圖3是實(shí)施例1中生產(chǎn)所得PMFs的HPLC圖。
[0032] 圖4是實(shí)施例2中生產(chǎn)所得PMFs的HPLC圖。
[0033] 圖5是實(shí)施例3中生產(chǎn)所得PMFs的HPLC圖。 【具體實(shí)施方式】
[0034] 實(shí)施例1 :本實(shí)施例中所述的枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝，其 特征是包括以下步驟： a.辛弗林的提取與分離 (1)將10kg枳實(shí)篩去石子、鐵釘?shù)入s物，淘去泥沙，風(fēng)干至浸潤狀態(tài)，粉碎。等量分裝于 兩個(gè)滲濾罐，編為1號和2號。
[0035] (2)先向1號罐中加入100L 0. 08%稀仏504溶液浸泡、攪拌、滲濾，流出液再加入2 號罐作同樣的操作。再向1號罐中加入100L0. 08%#H2S04溶液，重復(fù)一次，合并滲濾液。
[0036] (3)將（2)中滲濾液在真空度0.08Mpa，溫度70°C，濃縮至180L，備用。
[0037] (4)D001大孔樹脂的預(yù)處理：將200g樹脂用蒸餾水浸泡過夜，浙干，依次用3%HC1、 蒸餾水、95%乙醇、蒸餾水洗至無醇味，濕法裝柱。
[0038] (5)將（2)中滲濾液過層析柱吸附辛弗林，吸附時(shí)間6h，然后水洗至流出液中性， 3%的氨水溶液以6L/h的速率解吸，解吸至流出液近無色為止。解吸液在真空度0. 08Mpa， 溫度45°C濃縮揮去氨至蒸干，得辛弗林干品。氨導(dǎo)出溶于水中重復(fù)使用。
[0039] b、橙皮甙與PMFs的同時(shí)提取 (1)酸提后留下的枳實(shí)渣，立即用清水洗至中性，再用l〇〇L 3%Na0H溶液浸泡、攪拌、滲 濾，操作過程同步驟a。
[0040] (2)將（1)中滲濾液在真空度0.08Mpa，溫度60°C，濃縮至70L，加無水乙醇調(diào)節(jié) 醇濃度80%，靜置4h，過濾，濾液真空濃縮回收74%乙醇471L。真空條件為真空度控制在 0. 08Mpa，溫度75°C，濃縮至母液用最低量程酒精計(jì)測不出為止，備用。
[0041] c、PMFs與橙皮甙的分離 (1 )D254大孔吸附樹脂的預(yù)處理：將200g樹脂用蒸餾水浸泡過夜，浙干，依次用3%HC1、 蒸餾水、3%Na0H、蒸餾水、3%HC1、蒸餾水、95%乙醇、蒸餾水洗至無醇味，濕法裝柱。
[0042] (2)將b (2)中母液過層析柱吸附PMFs，吸附時(shí)間10h，然后水洗至流出液中性， 2L 70%乙醇溶液解吸，解吸時(shí)間4h。解吸液在真空度0. 085Mpa，溫度70°C濃縮，回收1. 82L 74%乙醇，并得PMFs浸膏。將浸膏在真空度0. 085Mpa，溫度65°C，干燥8h，得塊狀物，研細(xì) 即得黃綠色粉末。
[0043] (3)橙皮甙的分離：（2)中過柱流出液經(jīng)5%的稀HC1調(diào)pH值至5,靜置0. 5h，攪拌 一次，再靜置6h，過濾，收集濾餅，常壓70°C烘干得橙皮甙。
[0044] 所得的辛弗林、橙皮甙和PMFs經(jīng)HPLC測定含量，數(shù)據(jù)見下表一。
[0045] 實(shí)施例2 : a.辛弗林的提取與分離 (1)將100kg枳實(shí)作實(shí)例1中a (1)步操作。
[0046] (2)先向1號罐中加入1000L 0· 08%稀HC1溶液浸泡、攪拌、滲濾，流出液再加入2 號罐作同樣的操作。再向1號罐中加入1000L 0. 08%稀HC1溶液，重復(fù)一次，合并滲濾液。
[0047] (3)將（2)中滲濾液在真空度0.08Mpa，溫度65°C，濃縮至1600L，備用。
[0048] (4)D061大孔樹脂的預(yù)處理：將2kg樹脂用蒸餾水浸泡過夜，浙干，依次用3%HC1、 蒸餾水、3%Na0H、蒸餾水、3%HC1、蒸餾水洗至中性，濕法裝柱。
[0049] (5)將（2)中滲濾液過層析柱吸附辛弗林，吸附時(shí)間8h，然后水洗至流出液中性， 8%的氨水溶液以6L/h的速率解吸，解吸至流出液近無色為止。解吸液在真空度0. 085Mpa， 溫度40°C濃縮揮去氨至蒸干，得辛弗林干品。氨導(dǎo)出溶于水中重復(fù)使用。
[0050] b、橙皮甙與PMFs的同時(shí)提取 (1)酸提后留下的枳實(shí)渣，立即用清水洗至中性，再用1000L 5%Na0H溶液浸泡、攪拌、 滲濾，操作過程同步驟a。
[0051] (2)將（1)中滲濾液在真空度0. 08Mpa，溫度70°C，濃縮至700L，加甲醇調(diào)節(jié)醇濃度 70%，靜置6h，過濾，濾液真空濃縮回收82%甲醇2894L。真空條件為真空度控制在0. 08Mpa， 溫度65°C，濃縮至母液用最低量程酒精計(jì)測不出為止，備用。
[0052] c、PMFs與橙皮甙的分離 (1) 706大孔吸附樹脂的預(yù)處理：將2kg樹脂用蒸餾水浸泡過夜，浙干，依次用5%HC1、 蒸餾水、5%Na0H、蒸餾水、5%HC1、蒸餾水、98%乙醇、蒸餾水洗至無醇味，濕法裝柱。
[0053] (2)將b (2)中母液過層析柱吸附PMFs，吸附時(shí)間20h，然后水洗至流出液中性， 20L 80%乙醇溶液解吸，解吸時(shí)間5h。解吸液在真空度0. 085Mpa，溫度75°C濃縮，回收18L 85%乙醇，并得PMFs浸膏。將浸膏在真空度0. 085Mpa，溫度60°C，干燥8h，得塊狀物，研細(xì) 即得黃綠色粉末。
[0054] (3)橙皮甙的分離：（2)中過柱流出液經(jīng)5%(W/W)的稀HC1調(diào)pH值至5,靜置0. 5h， 攪拌一次，再靜置4h，過濾，收集濾餅，常壓70°C風(fēng)干得橙皮甙。
[0055] 所得的辛弗林、橙皮甙和PMFs經(jīng)HPLC測定含量，數(shù)據(jù)見下表一。
[0056] 實(shí)施例3 : a.辛弗林的提取與分離 (1)將1000kg枳實(shí)作實(shí)例1中a (1)步操作。
[0057] (2)先向1號罐中加入10000L 0· 2%稀HC1溶液浸泡、攪拌、滲濾，流出液再加入2 號罐作同樣的操作。再向1號罐中加入10000L 0. 2%稀HC1溶液，重復(fù)一次，合并滲濾液。
[0058] (3)將（2)中滲濾液在真空度0.08Mpa，溫度70°C，濃縮至14000L，備用。
[0059] (4)D152大孔樹脂的預(yù)處理：將20kg樹脂作同實(shí)例2中第a步第（4)小步同樣的 處理。
[0060] (5)將（2)中滲濾液過層析柱吸附辛弗林，吸附時(shí)間14h，然后水洗至流出液中性， 10%的氨水溶液以6L/h的速率解吸，解吸至流出液近無色為止。解吸液在真空度0. 085Mpa， 溫度35°C濃縮揮去氨至蒸干，得辛弗林干品。氨導(dǎo)出溶于水中重復(fù)使用。
[0061] b、橙皮甙與PMFs的同時(shí)提取 (1)酸提后留下的枳實(shí)渣，立即用清水洗至中性，再用10000L 6%Na0H溶液浸泡、攪拌、 滲濾，操作過程同步驟a。
[0062] (2)將（1)中滲濾液在真空度0.08Mpa，溫度70°C，濃縮至7000L，加甲醇調(diào)節(jié)醇 濃度80%，靜置8h，過濾，濾液真空濃縮回收85%甲醇48265L。真空條件為真空度控制在 0. 08Mpa，溫度75°C，濃縮至母液用最低量程酒精計(jì)測不出為止，備用。
[0063] c、PMFs與橙皮甙的分離 (1 )706大孔吸附樹脂的預(yù)處理：將20kg樹脂用蒸餾水浸泡過夜，浙干，依次用10%HC1、 蒸餾水、10%Na0H、蒸餾水、10%HC1、蒸餾水、無水乙醇、蒸餾水洗至無醇味，濕法裝柱。
[0064] (2)將b (2)中母液過層析柱吸附PMFs，吸附時(shí)間30h，然后水洗至流出液中性， 200L 70%甲醇溶液解吸，解吸時(shí)間10h。解吸液在真空度0.085Mpa，溫度60°C濃縮，回收 160L 75%甲醇，并得PMFs浸膏。將浸膏在真空度0. 085Mpa，溫度50°C，干燥8h，得塊狀物， 研細(xì)即得黃綠色粉末。
[〇〇65] (3)橙皮甙的分離：同實(shí)例2中分離方法。
[0066] 所得的辛弗林、橙皮甙和PMFs經(jīng)HPLC測定含量，數(shù)據(jù)見下表一。
[0067] 表一
【權(quán)利要求】
1. 一種枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝，其特征是包括以下步驟： a、 將枳實(shí)篩去雜物、風(fēng)干至浸潤狀態(tài)，然后粉碎；等量分裝于兩個(gè)滲濾罐，編為1號和 2號；先向1號罐中加入稀酸溶液浸泡、攪拌、滲濾，所述稀酸溶液是濃度為0. 08%-0. 20%的 稀鹽酸或者濃度為〇. 08%的稀硫酸，流出液再加入2號罐作進(jìn)行與1號罐同樣的操作；合并 滲濾液，真空度控制在〇. 〇8Mpa-〇. 085Mpa，溫度65°C -70°C，真空濃縮至原體積的70%-90% 后上樹脂柱，滲濾液過層析柱吸附辛弗林，吸附時(shí)間6h-14h，然后水洗至中性并用稀氨水解 吸，所述解吸是指用濃度為3%-10%的氨水溶液以6L/h的速率解吸，收集解吸液，真空干燥 得辛弗林干品，所述真空干燥條件為真空度控制在〇. 〇8Mpa-〇. 085Mpa，溫度35°C -45°C ; b、 酸提后留下的枳實(shí)渣，立即用清水洗至中性，再用稀強(qiáng)堿溶液浸泡、攪拌、滲濾，所述 稀強(qiáng)堿溶液是指濃度為3%-6%的氫氧化鈉水溶液，操作過程同步驟a中所述的稀強(qiáng)堿溶液 浸泡、攪拌、滲濾，合并滲濾液，真空濃縮至原體積的70%，加無水甲醇調(diào)節(jié)醇濃度70%-80% 或無水乙醇調(diào)節(jié)醇濃度80%，靜置4-8h，過濾，濾液真空濃縮回收醇后，得到母液備用，所述 回收醇的真空條件為真空度控制在〇. 〇8Mpa-〇. 085Mpa，溫度65°C -75°C ; c、 將步驟b中所得母液上已處理好的樹脂柱，過層析柱吸附PMFs，吸附時(shí)間10h-30h， 然后用70%濃度的甲醇或70%-80%濃度的乙醇，靜壓過柱解吸4-10h，收集解吸液，真空濃縮 回收解吸劑得PMFs浸膏，濃縮至母液用最低量程酒精計(jì)測不出為止，浸膏經(jīng)真空干燥，所 述真空干燥是指真空度控制在0. 08Mpa-0. 085Mpa，溫度50°C -65°C，干燥8h，粉碎得粉末； 通過樹脂的流出液，經(jīng)鹽酸酸化至pH值為5,所述鹽酸為濃度為5%的稀鹽酸水溶液，靜置析 晶，常壓70°C烘干或風(fēng)干得橙皮甙干品。
2. 如權(quán)利要求1所述的枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝，其特征是步驟 a中所述樹脂柱為不銹鋼材質(zhì)，填料為D00UD061和D152大孔樹脂其中一種。
3. 如權(quán)利要求1所述的枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝，其特征是步驟 b中所述真空濃縮條件同步驟a。
4. 如權(quán)利要求1所述的枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝，其特征是步驟 c中所述樹脂柱為不銹鋼材質(zhì)，填料為D254和706大孔吸附樹脂的一種。
5. 如權(quán)利要求1所述的枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝，其特征是步驟 c中所述PMFs浸膏是指在真空濃縮過程中先后經(jīng)析晶、結(jié)膠、抱團(tuán)、團(tuán)塊生長等步驟形成的 粘稠狀團(tuán)塊物。
6. 如權(quán)利要求1所述的枳實(shí)中聯(lián)合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工藝，其特征是步驟 c中所述靜置析晶是指靜置0. 5h，攪拌一次再靜置4h-6h。
【文檔編號】C07C213/10GK104098634SQ201410301178
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年6月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月30日
【發(fā)明者】夏雯, 徐培東, 蔣國彬, 陳華英 申請人:四川新華康生物科技有限公司