專利名稱：一種從枳實中提取橙皮甙和辛弗林的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種從枳實中提取橙皮甙和辛弗林的工藝技術，屬于天然產物分離技術領域。
背景技術：
我國柑橘資源及產量均居世界第三，產量達到1078萬噸，全國各地均有栽培。枳實為蕓香科植物酸橙及其栽培變種或甜橙的干燥幼果，主產于四川、江西、福建、江蘇等地。5 6月間采摘或采集自落的果實，自中部橫切為兩半，曬干或低溫干燥，較小者直接曬干或低溫干燥。用時洗凈、悶透，切薄片，干燥。生用或麩炒用。柑橘屬容易成花，但座果率較低，一般為3%_5%，豐產樹可達10%左右，低產樹通常不到1%。幼果由于生理原因凋落為生理落果。生理落果有兩個明顯的高峰期，第一次在5月上中旬(花謝后1-2周)，落果的數(shù)量多，約占總落果量的73%-99%，時間短而集中；第二次落果高峰期出現(xiàn)在6月上旬，幼果桔黃后從蜜盤(子房基部和果蒂之間)處脫落，落果較大，約占總落果量的0.02%-0，27%。我國柑橘種植面積廣闊，落果資源豐富，落果中含有橙皮甙和辛弗林等多種有效成分，因而成為具有工業(yè)化生產價值的原料。陳皮中主要成分為辛弗林，與辛弗林共存于陳皮中的黃酮類化合物還有陳皮甙、新陳皮甙、柑桔黃甙、橙皮黃素、酸橙黃素，另外還有中性內酯類苦味質檸檬素及揮發(fā)油等成分。枳實苦而微寒，入脾、胃、大腸經(jīng)，苦泄力大，行氣力強，可入藥。這些藥理活性歸功于桔皮中的橙皮甙和辛弗林等成分，因成研究枳實中這兩種成分的提取技術具有重要意義。辛弗林易溶于水，難溶 于乙醇，幾乎不溶于氯仿、乙醚。辛弗林除具有升壓、抗休克作用外，還具有以下作用:提高新陳代謝、增加熱量消耗、提高能量水平、氧化脂肪和減肥。用于治療支氣管哮喘及手術和麻醉時降低血壓，虛脫及休克，體味性低血壓等。辛弗林是酸橙果實中的主要活性成分，其可有效預防能量過剩(熱量堆積)，逐風理氣，溫胃促進食欲并加速新陳代謝。酸橙理論上可加速脂肪代謝且不會像使用麻黃的患者那樣出現(xiàn)不良的副作用影響心血管，也是一種溫和的芬芳除痰劑，一種神經(jīng)鎮(zhèn)定劑和治療便秘的輕瀉劑。橙皮甙，又名橙皮甙、陳皮甙，屬于天然黃酮類化合物，其純品為白色針狀晶體或淡黃色粉末，味苦，性溫，分子式C28H34O15,分子量610.57，熔點258-262°C，幾乎不溶于冷水，但在乙醇或熱水中有較大的溶解度，可溶于吡啶、甘油、乙酸或稀堿溶液，不溶于氯仿、丙酮、乙醚或苯中，與三氯化鐵、金屬鹽類反應顯色或生成沉淀，與鹽酸一鎂粉反應呈紫紅色。存在于柑橘皮和柑橘采前落果中。橘皮中含量約為3%，未成熟果含量更高。橙皮甙具有抑制癌細胞生長、消炎止痛、避孕、抑菌、防紫外線等生理活性。橙皮甙在自然界分布很廣泛，主要存在于豆科、白樺、唇形花科、蝶形花科、蕓香科、柑橘屬植物體中。橙皮甙具有良好的生物活性，具有抗脂質氧化及清除氧自由基，抗炎、抗病毒、抗菌，增強毛細血管韌性，縮短出血時間，抑制癌細胞活性及延緩衰老等作用。橙皮甙具有維持滲透壓，增強毛細血管韌性，縮短出血時間，降低膽固醇等作用，在臨床上用于心血管系統(tǒng)疾病的輔助治療，可培植多種防止動脈硬化和心肌梗塞的藥物，是成藥“脈通”的主要原料之一。在食品工業(yè)中可用作天然抗氧化劑。也可用于化妝品行業(yè)。橙皮甙大部分存在于柑桔加工的廢棄物中，如果皮、果囊中，其中成熟的果皮和組織中橙皮甙的含量最高(內果皮30% — 50%，桔皮、核、果肉中30% — 50%，外果皮10% — 20%)。汁液和桔囊中含量較低 1% — 5%。公開號為CN01106994的中國專利公開了一種從中藥枳實中提取藥用原料辛弗林的方法，該方法是用水提取枳實，提取液經(jīng)濃縮、醇沉、回收乙醇、砂濾，然后上陽離子樹脂柱，先用適量水沖洗，再用一定濃度的氨水洗脫，氨水洗脫液經(jīng)濃縮直接析晶，重結晶即得辛弗林。本方法具有操作過程簡單、生產成本低等優(yōu)點。公開號為CN102276669A的中國專利公開了從枳實中提取橙皮甙的制備方法，包括以下步驟:(1)準備原料即枳實細粉倒入提取罐中；(2)配置堿溶液對罐內料作浸泡處理后排空液再翻料；(3)配置堿溶液對罐內料作熱處理；(4)配置堿溶液對罐內料作第一次滲濾處理后排空液再翻料；(5)配置堿溶液對罐內料作第二次滲濾處理后排空液再翻料；(6)泵入提取液提取橙皮甙；(7)析離橙皮甙結晶；(8)對橙皮甙結晶作濾干、烘干處理。公開號為CN102050855A的中國專利公開了一種從枳實原料中綜合提取辛弗林和橙皮甙的方法，以克服現(xiàn)有技術無法對兩種產品綜合開發(fā)而導致的資源浪費，并且優(yōu)化提取步驟，降低生產成本，提升可操作性。原料粉碎后，采用堿性有機溶劑提?。缓喜⑻崛∫?，濃縮至比重1.05，過濾，濾液脫色；將濾液調至中性，過濾得橙皮甙產品，收率25%，含量95%;過濾得到的母液調節(jié)至強堿性，采用混合有機溶劑萃取，濃縮至一定體積加入小極性溶劑結晶，產品收率為1.2%，辛弗林含量為98%。本發(fā)明實現(xiàn)了將枳實原料充分利用，設計工藝同時生產辛弗林和橙皮甙兩種產品，大大降低了生產成本；總體提取過程更加優(yōu)化，縮短了工藝流程,節(jié)約生產成本。但是辛弗林的產品收率太低公開號為CN101875703A的中國專利公開了一種利用果皮果渣提取果膠和辛弗林的方法，包括以下步驟:1)先將果皮攪碎至粒徑2 3mm,置于蒸汽或沸水中處理5 8min,以鈍化果膠酶活性；殺酶后的原料再在水中清泡30min，在90°C溫度下加熱5min，壓去汁液，用清水漂洗數(shù)次，盡可能除去苦味、色素及可溶性雜質，干皮溫水浸泡復水后備用；2)經(jīng)預處理的原料與30 50倍的水混合，加入占液重2.0% -2.5%的離子交換劑制成料漿，調節(jié)料衆(zhòng)pH值到1.3 1.6,在攪拌下加熱2h,過濾，放入臥螺離心機洗洛20min,分離出不溶于水的離子交換劑和廢渣，得到含有果膠粗產品，將所述果膠粗產品用臥螺離心機萃取60min，將所述經(jīng)過萃取的濾液用三效降膜蒸發(fā)器濃縮，得到果膠濃縮液；3)在所述果膠濃縮液中加入占液重1.5%的工業(yè)鹽酸，攪勻，再徐徐加入等量的95%濃度的酒精，邊加邊攪拌，使果膠沉淀析出，再用80%濃度的酒精洗滌，除去醇溶性雜質，然后用95%濃度的酸性酒精洗滌兩次，用螺旋壓榨機榨干，最后經(jīng)干燥處理得到果膠成品；4)將用于吸附辛弗林的強酸性陽離子交換樹脂柱進行預處理，先用質量分數(shù)為10%的氯化鈉溶液浸泡2h，裝柱，蒸餾水反洗至流出的水澄清為止，然后用2倍柱體積的50g/L的氫氧化鈉溶液沖洗，用蒸餾水洗至PH值為中性，再用4倍體積的體積分數(shù)為5%的鹽酸溶液沖洗，最后再用蒸餾水洗至PH值為中性；將步驟3)分離出的廢液用`塔式蒸餾器蒸餾進行乙醇回收處理，再與步驟2)分離出來的果膠廢液合并后上樹脂柱，用5%濃度的氨水洗脫，再用三效降膜蒸發(fā)器濃縮，最后經(jīng)噴霧干燥處理得到辛弗林成品。辛弗林在陳皮中含量最高，而且橙皮甙在陳皮中也有一定含量，取材方便，分布廣泛，價格便宜。目前公開的文獻資料未能對提取過程中其有效成分進行綜合開發(fā)利用，因而對陳皮進行綜合深加工意義非凡，探索從陳皮中同時提取辛弗林和橙皮甙，其意義相當遠大。

發(fā)明內容
本發(fā)明采用的技術方案包括:干燥過后的枳實經(jīng)石油醚脫脂、用稀堿溶液回流提取、過濾、濃縮至干、用酸水進行溶解，上樹脂吸附、分步洗脫、濃縮結晶制得橙皮甙和辛弗林純品。因此，本發(fā)明提供一種從枳實中提取辛弗林和橙皮甙的方法，步驟包括:(1)粉碎干燥枳實，并將枳實、石油醚按重量(kg) /體積比(L) =1:2-4進行混合，70°C回流提取40min，陶瓷膜過濾一次，得濾液，再經(jīng)減壓濃縮去除石油醚得到枳實精油；(2)將枳實濾渣、乙醇水溶液按重量(kg) /體積比(L)=1: 2-4進行混合，45°C回流提取40min，陶瓷膜過濾一次，得濾液，再重復一次，合并濾液得混合提取液；(3)將提取液在50°C減壓進行濃縮至原有體積的1/4-1/10，得到濃縮液I，上KLFC - 150大孔樹脂吸附濃縮液，并用A溶液進行洗脫，得到洗脫液I，并將洗脫液I進行50°C減壓濃縮至原來體積的1/4-1/10，得濃縮液II ；(4)再用B溶液對KLFC — 150大孔樹脂進行洗脫，得到洗脫液II，并將洗脫液II進行50°C減壓濃縮至原來體積的1/3-1/15，得濃縮液III ；(5)用0.01mol/L的鹽酸溶液將濃縮液II調節(jié)pH至7.5左右，4°C靜置過夜結晶，過濾得結晶物，即為辛弗林；(6)用0.01mol/L的鹽酸溶液將濃縮液III調節(jié)pH至6左右，4°C靜置過夜結晶，過濾得結晶物，即為橙皮甙。在一個實施方案中，步驟(2)中所述乙醇溶液，是指含有20%的乙醇、0.0OOlmol/LNaOH的乙醇水溶液。在一個實施方案中，步驟(3)中所述A溶液，是指含有40%的乙醇、0.00ImoI/LNaOH的乙醇水溶液。在一個實施方案中，步驟(4)中所述B溶液，是指含有60%的乙醇、0.0OOlmol/LNaOH的乙醇水溶液。在一個實施方案中，步驟(5)、(6)中所述過濾，是指采用0.2μπι孔徑大小的陶瓷膜過濾一次。技術效果1、本發(fā)明方法操作簡單，大大提高了辛弗林和橙皮甙的產率，極大地降低了辛弗林和橙皮甙的生產成本，簡化了其生產過程,還能得到大量的油類物質。2、使用枳實作為提取原料，既大大提高了枳實的利用效率，又提高了枳實的附加值。3、柑桔種植容易，產量高、價格低，來源方便，后續(xù)資源有保障。4、本發(fā)明方法中所用的原料、設備均為常見的普通原料、設備，避免了工業(yè)化生產過程中對于昂貴原材料、儀器的依賴，大大地降低了其生產成本。5、本發(fā)明所用的試劑均為無毒、廉價、量產的化學試劑，整個過程中可利用成熟的試劑回收常規(guī)技術，極大地降低了向環(huán)境排放廢棄物。


:圖1:枳實樣品中橙皮甙的HPLC曲線圖，其中縱坐標表示峰面積，橫坐標表示分離時間。圖2:橙皮甙標準品的HPLC曲線圖，其中縱坐標表示峰面積，橫坐標表示分離時間。圖3:枳實樣品中辛弗林的HPLC曲線圖，其中縱坐標表示峰面積，橫坐標表示分離時間。圖4:辛弗林標準品的HPLC曲線圖,其中縱坐標表示峰面積,橫坐標表示分離時間。具休實施方式下面，本發(fā)明將用實施例進行進一步的說明，但是它并不限于這些實施例的任何一個或類似實例。實施例1選用枳實中辛弗林含量在1.34%、橙皮甙含量在4.94%，將枳實干燥后粉碎至10目以下稱取100kg，加入400L的石油醚進行混合，700C回流提取40min，陶瓷膜過濾一次，得濾液，再經(jīng)減壓濃縮去除石油醚得到枳實精油。將枳實濾渣與250L的20%乙醇水溶液，其中乙醇水溶液還含有0.000ImoI/LNaOH進行混合，45°C回流提取40min，陶瓷膜過濾一次，得濾液，再重復一次， 合并濾液得混合提取液400L。將提取液進行濃縮，得到50L濃縮液I，上KLFC - 150大孔樹脂吸附濃縮液，并含有40%的乙醇、0.00ImoI/LNaOH的乙醇水溶液進行洗脫，得到120L洗脫液I，并將洗脫液I進行50°C減壓濃縮至15L，得濃縮液II。再用含有60%的乙醇、0.000ImoI/LNaOH的乙醇水溶液對KLFC — 150大孔樹脂進行洗脫，得到200L洗脫液II，并將洗脫液II進行50°c減壓濃縮至20L，得濃縮液III。用0.01mol/L的鹽酸溶液將濃縮液II調節(jié)pH至7.5左右，4°C靜置過夜結晶，陶瓷膜過濾一次得結晶物，即為辛弗林樣品0.885kg。用0.01mol/L的鹽酸溶液將濃縮液III調節(jié)pH至6左右，4°C靜置過夜結晶，陶瓷膜過濾一次得結晶物，即為橙皮甙樣品3.65kg。檢測設備為AgilentllOO高效液相色譜儀，色譜柱為Hypersil ODS (250mmX4.6mm，5 μ )，橙皮甙的檢測條件:流動相為水:乙腈:乙酸溶液(80:16:4，V/V)、檢測波長為280nm、流速為I ml / min、進樣量為20μ ;辛弗林的液相色譜檢測條件:流動相為乙腈:水:0.1%氫氧化鈉溶液(32:68:0.2，V/V)、檢測波長為225nm、流速為I ml / min、進樣量為20μ 。橙皮甙樣品的純度為95.54%，產品收率達到70%以上、辛弗林樣品的純度為97.25%，產品收率達到60%以上。實施例2選用枳實中辛弗林含量在1.34%、橙皮甙含量在4.94%，將枳實干燥后粉碎至10目以下稱取200kg，加入800L的含有0.001mol/LNa0H,45%的乙醇的水溶液進行混合，40°C回流提?。粚㈣讓崬V渣與400L的20%乙醇水溶液，其中乙醇水溶液還含有0.000ImoI/LNaOH進行混合，450C回流提取40min，陶瓷膜過濾一次，得濾液，再重復一次，合并濾液得混合提取液700L。將提取液進行濃縮，得到80L濃縮液I，上KLFC — 150大孔樹脂吸附濃縮液，并含有40%的乙醇、0.0Olmol/LNaOH的乙醇水溶液進行洗脫，得到250L洗脫液I，并將洗脫液I進行50°C減壓濃縮至25L，得濃縮液II。再用含有60%的乙醇、0.000ImoI/LNaOH的乙醇水溶液對KLFC - 150大孔樹脂進行洗脫，得到420L洗脫液II，并將洗脫液II進行50°C減壓濃縮至35L，得濃縮液III。用0.01mol/L的鹽酸溶液將濃縮液II調節(jié)pH至7.5左右，4°C靜置過夜結晶，陶瓷膜過濾一次得結晶物，即為辛弗林樣品1.81kg。用0.01mol/L的鹽酸溶液將濃縮液III調節(jié)pH至6左右，4°C靜置過夜結晶，陶瓷膜過濾一次得結晶物，即為橙皮甙樣品7.67kg。按實施例1的檢測方法進行檢測橙皮甙和辛弗林樣品，橙皮甙樣品的純度為96.25%，產品收率達到70%以上、辛弗林樣品的純度為97.62%，產品收率達到60%以上。實施例3選用枳實中辛弗林含量在1.34%、橙皮甙含量在4.94%，將枳實干燥后粉碎至10目以下稱取400kg，加入1400L的含有0.001mol/LNa0H,45%的乙醇的水溶液進行混合，40°C回流提??；將枳實濾渣與500L的20%乙醇水溶液，其中乙醇水溶液還含有0.000ImoI/LNaOH進行混合，450C回流提取40min，陶瓷膜過濾一次，得濾液，再重復一次，合并濾液得混合提取液900L。將提取液進行濃縮，得到100L濃縮液I，上KLFC — 150大孔樹脂吸附濃縮液，并含有40%的乙醇、0.0Olmol/LNaOH的乙醇水溶液進行洗脫，得到450L洗脫液I，并將洗脫液I進行50°C減壓濃縮至50L，得濃縮液II。再用含有60%的乙醇、0.000ImoI/LNaOH的乙醇水溶液對KLFC - 150大孔樹脂進行洗脫，得到700L洗脫液II，并將洗脫液II進行50°C減壓濃縮至60L，得濃縮液III。用0.01mol/L的鹽酸溶液將濃縮液II調節(jié)pH至7.5左右，4°C靜置過夜結晶，陶瓷膜過濾一次得結晶物，即為辛弗林樣品3.72kg。用0.01mol/L的鹽酸溶液將濃縮液III調節(jié)pH至6左右，4°C靜置過夜結晶，陶瓷膜過濾一次得結晶物，即為橙皮甙樣品15.28kg。按實施例1的檢測方法進行檢測橙皮甙和辛弗林樣品，橙皮甙樣品的純度為98.36%，產品收率達 到70%以上、辛弗林樣品的純度為97.29%，產品收率達到70%以上。
權利要求
1.本發(fā)明提供一種從枳實中提取辛弗林和橙皮甙的方法，步驟包括: (1)粉碎干燥枳實，并將枳實、石油醚按重量(kg)/體積比(L)=1:2-4進行混合，70°C回流提取40min，陶瓷膜過濾一次，得濾液，再經(jīng)減壓濃縮去除石油醚得到枳實精油； (2)將枳實濾渣、乙醇水溶液按重量(kg)/體積比(L)=1:2-4進行混合，450C回流提取40min,陶瓷膜過濾一次，得濾液，再重復一次，合并濾液得混合提取液； (3)將提取液在50°C減壓進行濃縮至原有體積的1/4-1/10，得到濃縮液I，上KLFC—150大孔樹脂吸附濃縮液，并用A溶液進行洗脫，得到洗脫液I，并將洗脫液I進行50°C減壓濃縮至原來體積的1/4-1/10，得濃縮液II ； (4)再用B溶液對KLFC- 150大孔樹脂進行洗脫，得到洗脫液II，并將洗脫液II進行50°C減壓濃縮至原來體積的1/3-1/15，得濃縮液III ； (5)用0.01mol/L的鹽酸溶液將濃縮液II調節(jié)pH至7.5左右，4°C靜置過夜結晶，過濾得結晶物，即為辛弗林； (6)用0.01mol/L的鹽酸溶液將濃縮液III調節(jié)pH至6左右，4°C靜置過夜結晶，過濾得結晶物，即為橙皮甙。
2.根據(jù)權利要求1的方法，步驟(2)中所述乙醇溶液，是指含有20%的乙醇、0.0OOlmol/LNaOH的乙醇水溶液。
3.根據(jù)權利要求1的方法，步驟(3)中所述A溶液，是指含有40%的乙醇、0.0Olmol/LNaOH的乙醇水溶液。
4.根據(jù)權利要求1的方法，步驟(4)中所述B溶液，是指含有60%的乙醇、0.0OOlmol/LNaOH的乙醇水溶液。`
5.根據(jù)權利要求1的方法，步驟(5)、(6)中所述過濾，是指采用0.2 μ m孔徑大小的陶瓷膜過濾一次。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從枳實中提取橙皮甙和辛弗林的工藝技術，干燥過后的枳實經(jīng)石油醚脫脂、用稀堿溶液回流提取、過濾、濃縮至干、用酸水進行溶解，上樹脂吸附、分步洗脫、濃縮結晶制得橙皮甙和辛弗林純品。方法操作簡單，大大提高了辛弗林和橙皮甙的產率，極大地降低了辛弗林和橙皮甙的生產成本，簡化了其生產過程，還能得到大量的油類物質。使用枳實作為提取原料，既大大提高了枳實的利用效率，又提高了枳實的附加值。
文檔編號C07H1/08GK103172685SQ20131003511
公開日2013年6月26日 申請日期2013年1月30日 優(yōu)先權日2013年1月30日
發(fā)明者向華 申請人:向華