專利名稱：芹菜籽活性單體的分離純化制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及芹菜籽活性單體分離純化領(lǐng)域，具體為一種芹菜籽活性單體的分離純化制備工藝。
背景技術(shù)：
芹菜籽是芹菜的干燥成熟果實(shí)，具有散氣、消腫、止痛、利尿、降血壓的作用。目前對(duì)其含有的揮發(fā)油成分研究的比較多，但對(duì)其含有的黃酮類化合物的相關(guān)研究很少。黃酮類化合物具有眾多的生理功能和藥用價(jià)值，其主要作用有:延緩衰老、增強(qiáng)心血管功能、抗炎、抗過(guò)敏、抑菌、抗病毒、抗?jié)冏饔?、降血糖作用、抗輻射和抗腫瘤等，而且在食品(及食品添加劑)、保健品、化妝品以及藥品的開發(fā)方面也有很好的應(yīng)用前景。研究表明，芹菜籽中有豐富的黃酮類化合物。目前，黃酮的提取分離方法主要有索氏提取法、微波輔助提取法、超聲波提取法等，單體的分離主要采用傳統(tǒng)的硅膠柱層析或者制備液相色譜技術(shù)分離得到，傳統(tǒng)的分離方法耗時(shí)費(fèi)力，一次實(shí)驗(yàn)等到的單體種類少而量小，不能滿足藥理研究及質(zhì)量控制的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)以上不足之處，提供了一種芹菜籽活性單體的分離純化制備工藝，快速、高效的實(shí)現(xiàn)芹菜籽活性單體的高純度的分離純化。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是:一種芹菜籽活性單體的分離純化制備工藝，包括如下步驟:
(1)將芹菜籽放置在溫度為25°C 35° C的條件下進(jìn)行低溫干燥48小時(shí)，然后將其粉碎至100目；
(2)將得到的芹菜籽干燥粉末使用超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃取劑，在壓力為25MPa 30 MPa、溫度為40° C 50° C、萃取劑流速為40L/h的條件下進(jìn)行萃取，在壓力為6MPa、溫度為30° C 40° C的條件下進(jìn)行分離，得到芹菜籽的油狀萃取物；
(3)將上一步中得到的芹菜籽的油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，溶劑體系是石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，比例為5:5:7:3 (v/v)，形成互不相溶的上下兩相，以上相作為固定相，固定相的保留率為50% 60%，將I克芹菜籽的油狀萃取物溶解于3ml 6ml等量的上相與下相中，進(jìn)行進(jìn)樣,在分離過(guò)程,流速為2ml/min,轉(zhuǎn)速為750rpm 850rpm，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，根據(jù)逆流色譜圖譜，收集所需組分；
(4)將上一步收集到的組分利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀低溫蒸干，蒸干溫度30°C 40° C，蒸干后向蒸餾瓶?jī)?nèi)加入I 3ml色譜純甲醇溶出，裝入已稱量好的小樣品瓶?jī)?nèi)，一 40° C冷凍干燥至干，稱重，分別得到高純度活性單體I (3-n-butyl_4, 5-dihydrophthal ide ), II(sedanolide),
IIII, 3-Di [(cis)-9-octadecenoyl]-2-[(cis, cis)-9, 12-octadecadienoyl]glycerol ο優(yōu)選的一種芹菜籽活性單體的分離純化制備工藝，包括如下步驟:
(1)將芹菜籽放置在溫度30°C的條件下進(jìn)行低溫干燥48小時(shí)，然后將其粉碎至100
目；
(2)將得到的芹菜籽干燥粉末使用超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃取劑，在壓力為25MPa，溫度為45° C，萃取劑流速為40L/h的條件下進(jìn)行萃取，在壓力為6MPa，溫度為35° C的條件下進(jìn)行分離，得到芹菜籽的油狀萃取物；
(3)將上一步中得到的芹菜籽的油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，溶劑體系是石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，比例為5:5:7:3(v/v)，形成互不相溶的上下兩相，以上相作為固定相，固定相的保留率為55%，將I克芹菜籽的油狀萃取物溶解于4ml等量的上相與下相中，進(jìn)行進(jìn)樣，在分離過(guò)程，流速為2ml/min,轉(zhuǎn)速為800rpm,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm,根據(jù)逆流色譜圖譜，收集所需組分；
(4)將上一步收集到的組分利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀低溫蒸干，蒸干溫度30°C 40° C，蒸干后向蒸餾瓶?jī)?nèi)加入I 3ml色譜純甲醇溶出，裝入已稱量好的小樣品瓶?jī)?nèi)，一 40° C冷凍干燥至干，稱重，分別得到高純度活性單體I (3-n-butyl_4, 5-dihydrophthalide),
11(sedanolide), III I, 3_Di [ (cis)-9-octadecenoyl]_2_[(cis, cis)_9,12-octadecadienoyl] glycerol。在以上步驟中超臨界萃取過(guò)程中所使用的萃取劑超臨界二氧化碳的純度為99.999%，所用的石油醚，乙酸乙酯，甲醇為分析純，水為去離子水。本發(fā)明的有益效果是:
采用了一種新型的提取技術(shù)——超臨界二氧化碳流體萃取技術(shù)和高速逆流色譜技術(shù)，超臨界二氧化碳流體萃取技術(shù)兼具有精餾和液液萃取的特點(diǎn)，萃取過(guò)程可在接近于室溫的條件下進(jìn)行，無(wú)溶劑殘留，特別適合中藥熱敏物質(zhì)的分離，高速逆流色譜(High speedcounter-current chromatography, HSCCC)是一種新型的分離技術(shù),該技術(shù)不采用固態(tài)吸附劑，與其它的色譜技術(shù)相比，HSCCC能夠消除固體吸附劑所導(dǎo)致的樣品不可逆吸附和對(duì)樣品的沾染、失活、變性等影響，實(shí)現(xiàn)復(fù)雜混合物中各組分的高純度分離；與傳統(tǒng)方法相比，一次實(shí)驗(yàn)可得到多種芹菜籽活性單體，優(yōu)化了適用于提取芹菜籽中活性單體的工藝參數(shù)，達(dá)到了快速、高效的為中藥芹菜籽的質(zhì)量控制和藥理研究提供高純度、無(wú)殘留的活性單體的目的，節(jié)省了時(shí)間，提高了效率。附圖


圖1所示為高速逆流色譜分離芹菜籽活性單體時(shí)的HSCCC色譜圖
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述:
實(shí)施例1
分離純化芹菜籽的活性單體包含如下步驟:
(1)將芹菜籽放置在溫度30°C的`條件下進(jìn)行低溫干燥48小時(shí)，然后將其粉碎至100
目；
(2)將得到的芹菜籽干燥粉末使用超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃取劑，所使用的萃取劑超臨界二氧化碳的純度為99.999%，在壓力為25MPa，溫度為45° C，萃取劑流速為40L/h的條件下進(jìn)行萃取，在壓力為6MPa，溫度為35° C的條件下進(jìn)行分離，得到芹菜籽的油狀萃取物；
(3)將上一步中得到的芹菜籽的油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，溶劑體系是石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，比例為5:5:7:3(v/v)，形成互不相溶的上下兩相，以上相作為固定相，固定相的保留率為55%，將I克芹菜籽的油狀萃取物溶解于4ml等量的上相與下相中，進(jìn)行進(jìn)樣，在分離過(guò)程，流速為2ml/min,轉(zhuǎn)速為800rpm,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm,根據(jù)逆流色譜圖譜，收集所需組分；
(4)將上一步收集到的組分利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀低溫蒸干，蒸干溫度35。C，蒸干后向蒸餾瓶?jī)?nèi)加入Iml色譜純甲醇溶出，裝入已稱量好的小樣品瓶?jī)?nèi)，一 40° C冷凍干燥至干，稱重，分別得到高純度活性單體 I (3-n-butyl-4, 5-dihydrophthalide), II (sedanolide), IIII, 3-Di [(cis)-9-octadecenoyl]-2-[(cis, cis)-9, 12-octadecadienoyl] glycerol。實(shí)施例2
分離純化芹菜籽的活性單體包含如下步驟:
(1)將芹菜籽放置在溫度25。C的條件下進(jìn)行低溫干燥48小時(shí)，然后將其粉碎至100
目；
(2)將得到的芹菜籽干燥粉末使用超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃取劑，所使用的萃取劑超臨界二氧化碳的純度為99.999%，在壓力為25MPa，溫度為40° C，萃取劑流速為40L/h的條件下進(jìn)行萃取，在壓力為6MPa，溫度為30° C的條件下進(jìn)行分離，得到芹菜籽的油狀萃取物；
(3)將上一步中得到的芹菜籽的油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，溶劑體系是石油醚-乙酸乙酯- 甲醇-水，比例為5:5:7:3(v/v)，形成互不相溶的上下兩相，以上相作為固定相，固定相的保留率為50%，將I克芹菜籽的油狀萃取物溶解于3ml等量的上相與下相中，進(jìn)行進(jìn)樣，在分離過(guò)程，流速為2ml/min,轉(zhuǎn)速為750rpm,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm,根據(jù)逆流色譜圖譜，收集所需組分；
(4)將上一步收集到的組分利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀低溫蒸干，蒸干溫度為30°C，蒸干后向蒸餾瓶?jī)?nèi)加入2ml色譜純甲醇溶出，裝入已稱量好的小樣品瓶?jī)?nèi)，一 40° C冷凍干燥至干，稱重，分別得到高純度活性單體 I (3-n-butyl_4, 5-dihydrophthalide), II (sedanolide),
IIII, 3~Di [(cis)-9-octadecenoyl]-2-[ (cis, cis)-9, 12-octadecadienoyl]glycerolo實(shí)施例3
分離純化芹菜籽的活性單體包含如下步驟:
(1)將芹菜籽放置在溫度35°C的條件下進(jìn)行低溫干燥48小時(shí)，然后將其粉碎至100
目；
(2)將得到的芹菜籽干燥粉末使用超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃取劑，所使用的萃取劑超臨界二氧化碳的純度為99.999%，在壓力為30MPa，溫度為50° C，萃取劑流速為40L/h的條件下進(jìn)行萃取，在壓力為6MPa，溫度為40° C的條件下進(jìn)行分離，得到芹菜籽的油狀萃取物；
(3)將上一步中得到的芹菜籽的油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，溶劑體系是石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，比例為5:5:7:3(v/v)，形成互不相溶的上下兩相，以上相作為固定相，固定相的保留率為60%，將I克芹菜籽的油狀萃取物溶解于6ml等量的上相與下相中，進(jìn)行進(jìn)樣，在分離過(guò)程，流速為2ml/min,轉(zhuǎn)速為850rpm,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm,分離得根據(jù)逆流色譜圖譜，收集所需組分；
(4)將上一步收集到的組分利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀低溫蒸干，蒸干溫度40° C，蒸干后向蒸餾瓶?jī)?nèi)加入3ml色譜純甲醇溶出，裝入已稱量好的小樣品瓶?jī)?nèi)，一 40° C冷凍干燥至干，稱重，分別得到高純度活性單體 I (3-n-butyl_4, 5-dihydrophthalide), II (sedanolide), III
1,3-Di [(cis)-9-octadecenoyl]-2-[(cis, cis)-9， 12-octadecadienoyl] glycerol。當(dāng)然，上述說(shuō)明并非是對(duì)本發(fā)明的限制，本發(fā)明也并不僅限于上述舉例，本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)范圍內(nèi)所做出的變化、改型、添加或替換，也應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種芹菜籽活性單體的分離純化制備工藝，其特征在于:包括如下步驟: (1)將芹菜籽放置在溫度為25°C 35° C的條件下進(jìn)行低溫干燥48小時(shí)，然后將其粉碎至100目； (2)將得到的芹菜籽干燥粉末使用超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃取劑，在壓力為25MPa 30MPa、溫度為40° C 50° C、萃取劑流速為40L/h的條件下進(jìn)行萃取，在壓力為6MPa、溫度為30° C 40 ° C的條件下進(jìn)行分離，得到芹菜籽的油狀萃取物； (3)將上一步中得到的芹菜籽的油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，溶劑體系是石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，比例為5:5:7:3 (v/v)，形成互不相溶的上下兩相，以上相作為固定相，固定相的保留率為50% 60%，將I克芹菜籽的油狀萃取物溶解于3ml 6ml等量的上相與下相中，進(jìn)行進(jìn)樣,在分離過(guò)程,流速為2ml/min,轉(zhuǎn)速為750rpm 850rpm，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，根據(jù)逆流色譜圖譜，收集所需組分； (4)將上一步收集到的組分利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀低溫蒸干，蒸干溫度30°C 40° C，蒸干后向蒸餾瓶?jī)?nèi)加入I 3ml色譜純甲醇溶出，裝入已稱量好的小樣品瓶?jī)?nèi)，一 40° C冷凍干燥至干，稱重，分離得高純度活性單體I (3-n-butyl_4, 5-dihydrophthalide), II(sedanolide),III I, 3~Di [ (cis)-9_octadecenoyl]-2-[(cis, cis)-9, 12-octadecadienoyl]glycerolo
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芹菜籽活性單體的分離純化制備工藝，其特征在于:包括如下步驟: (1)將芹菜籽放置在溫度30°C的條件下進(jìn)行低溫干燥48小時(shí)，然后將其粉碎至100目； (2)將得到的芹菜籽干燥粉末使用超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃取劑，在壓力為25MPa，溫度為45° C，萃取劑流速為40L/h的條件下進(jìn)行萃取，在壓力為6MPa，溫度為35° C的條件下進(jìn)行分離，得到芹菜籽的油狀萃取物； (3)將上一步中得到的芹菜籽的油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，溶劑體系是石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，比例為5:5:7:3(v/v)，形成互不相溶的上下兩相，以上相作為固定相，固定相的保留率為55%，將I克芹菜籽的油狀萃取物溶解于4ml等量的上相與下相中，進(jìn)行進(jìn)樣，在分離過(guò)程，流速為2ml/min,轉(zhuǎn)速為800rpm,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm,根據(jù)逆流色譜圖譜，收集所需組分； (4)將上一步收集到的組分利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀低溫蒸干，蒸干溫度30°C 40° C，蒸干后向蒸餾瓶?jī)?nèi)加入I 3ml色譜純甲醇溶出，裝入已稱量好的小樣品瓶?jī)?nèi)，一 40° C冷凍干燥至干，稱重，分離得高純度活性單體I (3-n-butyl_4, 5-dihydrophthal ide ),11(sedanolide), III I, 3_Di [ (cis)-9-octadecenoyl]_2_[(cis, cis)-9,12-octadecadienoyl] glycerol。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的芹菜籽活性單體的分離純化制備工藝，其特征在于:超臨界萃取過(guò)程中所使用的萃取劑超臨界二氧化碳的純度為99.999%，所用的石油醚，乙酸乙酯，甲醇為分析純，水為去離子水。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種芹菜籽活性單體的分離純化制備工藝，涉及芹菜籽活性單體分離純化領(lǐng)域，此工藝?yán)昧顺R界萃取裝置進(jìn)行萃取，利用了高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，快速、高效的實(shí)現(xiàn)芹菜籽活性單體的高純度的分離純化。
文檔編號(hào)C07D307/88GK103183654SQ20131003411
公開日2013年7月3日 申請(qǐng)日期2013年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月30日
發(fā)明者馮蕾, 冀海偉, 高琳琳, 李福榮, 崔英杰, 郭守東 申請(qǐng)人:泰山醫(yī)學(xué)院