一種對(duì)可溶性抗體進(jìn)行純化的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種對(duì)可溶性抗體進(jìn)行純化的方法，首先將優(yōu)化條件下誘導(dǎo)表達(dá)的菌液離心后收集菌體；經(jīng)Protein?L柱純化，監(jiān)測(cè)純化的效果；同時(shí)將人大腸癌P-gp21經(jīng)電泳，電轉(zhuǎn)至NC膜；高速離心；懸至渾濁；10％分離純化的抗人大腸癌抗體，電轉(zhuǎn)；純化的抗體作一抗，標(biāo)記的馬抗小鼠抗體為二抗；陰性對(duì)照為裂菌上清，陽(yáng)性對(duì)照為抗體；需要24℃表達(dá)21小時(shí)；重懸超聲裂解時(shí)的條件為：80W，時(shí)間不少于30min。本發(fā)明的有益效果是，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，可以定性、定量分析，同時(shí)為后續(xù)展開(kāi)的人源化提供依據(jù)和支持。
【專利說(shuō)明】一種對(duì)可溶性抗體進(jìn)行純化的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生化的檢測(cè)方法，具體來(lái)說(shuō)，是指一種對(duì)可溶性抗體進(jìn)行純化的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]化療是人民目前治療腫瘤尤其是惡性腫瘤的主要方法，在化療過(guò)程中出現(xiàn)的多藥耐藥是腫瘤化療的最主要障礙，其中可溶性抗體的過(guò)表達(dá)是引發(fā)腫瘤細(xì)胞的最主要原因。目前用于腫瘤多藥耐藥性檢測(cè)和治療的大多為完整抗體，組織穿透能力差，在血液和非瘤組織的清除速度比較慢。本發(fā)明試圖探究一種構(gòu)建大腸癌抗體的原核表達(dá)載體，制備純化處具有一定生物活性的抗體，該抗體的篩選有望為大腸癌等腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性的檢測(cè)和治療提供新的選擇。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為克服上述技術(shù)問(wèn)題，我們提出了以下技術(shù)方案:
[0004]一種對(duì)可溶性抗體進(jìn)行純化的方法，首先將優(yōu)化條件下誘導(dǎo)表達(dá)的菌液離心后收集菌體j^Protein L柱純化，監(jiān)測(cè)純化的效果；同時(shí)將人大腸癌P_gp21經(jīng)電泳，電轉(zhuǎn)至NC膜；高速離心；懸至渾濁；10%分離純化的抗人大腸癌抗體，電轉(zhuǎn)；純化的抗體作一抗，標(biāo)記的馬抗小鼠抗體為二抗；陰性對(duì)照為裂菌上清，陽(yáng)性對(duì)照為抗體。
[0005]本發(fā)明中，需要24°C表達(dá)21小時(shí)。
[0006]本發(fā)明中，重懸超聲裂解時(shí)的條件為:80W，時(shí)間不少于30min。
·[0007]本發(fā)明的有益效果是，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，可以定性、定量分析，同時(shí)為后續(xù)展開(kāi)的人源化提供依據(jù)和支持。
【具體實(shí)施方式】
[0008]一種對(duì)可溶性抗體進(jìn)行純化的方法，首先將優(yōu)化條件下誘導(dǎo)表達(dá)的菌液離心后收集菌體j^Protein L柱純化，監(jiān)測(cè)純化的效果；同時(shí)將人大腸癌P_gp21經(jīng)電泳，電轉(zhuǎn)至NC膜；高速離心；懸至渾濁；10%分離純化的抗人大腸癌抗體，電轉(zhuǎn)；純化的抗體作一抗，標(biāo)記的馬抗小鼠抗體為二抗；陰性對(duì)照為裂菌上清，陽(yáng)性對(duì)照為抗體；需要24°C表達(dá)21小時(shí)；重懸超聲裂解時(shí)的條件為:80W，時(shí)間不少于30min。
[0009]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種對(duì)可溶性抗體進(jìn)行純化的方法，其特征在于，首先將優(yōu)化條件下誘導(dǎo)表達(dá)的菌液離心后收集菌體j^Protein L柱純化，監(jiān)測(cè)純化的效果；同時(shí)將人大腸癌P_gp21經(jīng)電泳，電轉(zhuǎn)至NC膜；高速離心；懸至渾濁；10%分離純化的抗人大腸癌抗體，電轉(zhuǎn)；純化的抗體作一抗，標(biāo)記的馬抗小鼠抗體為二抗；陰性對(duì)照為裂菌上清，陽(yáng)性對(duì)照為抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的一種對(duì)可溶性抗體進(jìn)行純化的方法，其特征在于，需要24°C表達(dá)21小時(shí)。
3.如權(quán)利要求1所述的一種對(duì)可溶性抗體進(jìn)行純化的方法，其特征在于，重懸超聲裂解時(shí)的條件為:80W，時(shí)間不`少于30min。
【文檔編號(hào)】C07K16/18GK103665162SQ201310674278
【公開(kāi)日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2013年12月2日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月2日
【發(fā)明者】仲集華 申請(qǐng)人:仲集華