一種新型卵黃抗體及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種新型卵黃抗體及其制備方法屬于業(yè)獸用生物制品領(lǐng)域，本發(fā)明旨在提供一種能有效防控禽流感的新型卵黃抗體以及精制生產(chǎn)工藝和用途。本發(fā)明采用提取純化方法，能最大限度將卵黃抗體從雜蛋白中分離出來(lái)，且純化濃縮過(guò)程不會(huì)對(duì)卵黃抗體產(chǎn)生破壞作用，不影響產(chǎn)品生物潔性：其方法包括：蛋雞的免疫、卵黃抗體的提取、卵黃抗體的純化和卵黃抗體的干燥。所提供卵黃抗體主要用于檢測(cè)、預(yù)防和治療多類(lèi)禽流感病毒感染，以及因?yàn)槎局曜儺惗鸬那萘鞲忻庖呤　?br> 【專(zhuān)利說(shuō)明】一種新型卵黃抗體及其制備方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于動(dòng)保行業(yè)獸用生物制品領(lǐng)域，所提供卵黃抗體主要用于檢測(cè)、預(yù)防和治療多類(lèi)禽流感病毒感染，以及因?yàn)槎局曜儺惗鸬那萘鞲忻庖呤　?br> [0002]禽流感是"禽流行性感冒"的簡(jiǎn)稱(chēng)，是由A型流感病毒引起的禽類(lèi)烈性傳染病，又稱(chēng)"真性雞瘟"或"歐洲雞瘟"。臨床主要表現(xiàn)為急性高致死性，產(chǎn)蛋量下降，輕度呼吸系統(tǒng)疾病等。禽流感是全世界范圍內(nèi)的禽類(lèi)傳染病，因?qū)︷B(yǎng)禽業(yè)造成的毀滅性經(jīng)濟(jì)損失，而被視為嚴(yán)重威脅家禽養(yǎng)殖業(yè)的頭號(hào)傳染病，100多年來(lái)人類(lèi)尚未發(fā)現(xiàn)有效的預(yù)防和治療方法。禽流感還是一種禽畜和人共感病，對(duì)人類(lèi)健康存在巨大威脅。
[0003]從2003年12月開(kāi)始，由H5N1禽流感病毒引起的高致病性禽流感突襲亞洲，在不到2個(gè)月的時(shí)間內(nèi)，席卷了韓國(guó)、日本、越南、泰國(guó)、柬埔寨、老撾、中國(guó)和印度尼西亞等8個(gè)東亞和南亞國(guó)家。此次禽流感流行的規(guī)模之大、地理分布范圍之廣、破壞程度之深在人類(lèi)養(yǎng)禽業(yè)歷史上均是史無(wú)前例的。當(dāng)前，禽流感在世界局部地區(qū)仍然活躍，疫情范圍里繼續(xù)擴(kuò)大之勢(shì)。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，從2003年到現(xiàn)在，僅亞洲各國(guó)死亡或淘汰的禽只總數(shù)大約，15億只，全球已有超過(guò)1000人感染禽流感，因患禽流感死亡的人數(shù)已接近700人。
[0004]當(dāng)前，已開(kāi)發(fā)出多種治療禽流感的藥物，并制定出許多可行防控方案，且取得顯著效果。但禽流感病毒在傳染過(guò)程中，不斷發(fā)生變異，使許多之前的有效防控方案失效。本發(fā)明所提供的卵黃抗體含多種抗體， 對(duì)多種禽流感毒株所引起的感染有效，可降低因?yàn)槎局曜儺惗鴮?dǎo)致防控失敗的機(jī)率。
[0005]當(dāng)前卵黃抗體提取純化方法有乙二醇提取法、氯仿提取法、鹽析法等，這些方法收率低、雜蛋白多、產(chǎn)品活性低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明旨在提供一種能有效防控禽流感的新型卵黃抗體以及精制生產(chǎn)工藝和用途。本發(fā)明采用提取純化方法，能最大限度將卵黃抗體從雜蛋白中分離出來(lái)，且純化濃縮過(guò)程不會(huì)對(duì)卵黃抗體產(chǎn)生破壞作用，不影響產(chǎn)品生物活性。
[0007]一種新型卵黃抗體及其制備方法，其生產(chǎn)過(guò)程如下:
1、挑選高品質(zhì)蛋雞雞茵進(jìn)行凈化飼養(yǎng)，為生產(chǎn)免疫蛋做準(zhǔn)備；
2、產(chǎn)蛋期開(kāi)始后，給蛋雞按一定程序人工免疫特定抗原因或H7、H9型禽流感弱化疫
苗；
3、收集免疫雞蛋并保存，為提取卵黃抗體做準(zhǔn)備；
4、收集蛋黃按1:10的比例加入蒸餾水并攪拌30分鐘，配成均勻蛋黃液。調(diào)節(jié)蛋黃液PH值到5.5, IO0C靜置14小時(shí)，回收上清液；
5、將含卵黃抗體的蛋黃土清液進(jìn)行雙效超濾濃縮，收集卵黃抗體濃縮將回收的卵黃土清液通過(guò)0.45 μ m和0.22 μ m的串聯(lián)過(guò)濾系統(tǒng)過(guò)濾，再將過(guò)濾液以4.5L/min的流速經(jīng)過(guò)截留分子量分別150KD和220KD的雙效超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，待濃縮液體積為I/ 20時(shí)回收濃縮液；6、將卵黃濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，制成凍干粉將回收的卵黃土清液通過(guò)0.45 μ m和0.22 μ m的串聯(lián)過(guò)濾系統(tǒng)過(guò)濾，再將過(guò)濾液以4.5L/min的流速經(jīng)過(guò)截留分子量分別為150KD和220KD的雙效超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，待濃縮液體積為I/ 20時(shí)回收濃縮液；
7、利用卵黃抗體凍干粉配制臨床適用的卵黃抗體制品檢測(cè)卵黃濃縮液中抗體含量，分別按5.5%,30%的含量加入普朗尼克、可溶性淀粉，混合均勻后無(wú)菌分裝到滅菌西林瓶，-400C冷凍干燥，制成卵黃抗體凍干粉制劑。
[0008]本方法利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)特性，通過(guò)沉陣法將卵黃抗體與雜蛋白有效分離，且在純化濃縮過(guò)程中不破壞卵黃抗體的空間結(jié)構(gòu)，充分保護(hù)了卵黃抗體的生物活性。所生產(chǎn)的卵黃抗體純度高、活性強(qiáng)。
[0009]本發(fā)明所提供的卵黃抗體含多種抗體，用于檢測(cè)、預(yù)防和治療多類(lèi)禽流感病毒感染，以及由毒株變異而引起的禽流感免疫失敗。
實(shí)施例[0010]1:蛋雞的免疫
選擇健康蛋雞，在170日齡時(shí)進(jìn)行首免H5、H7、H9型禽流感弱化疫苗，接種方式為胸肌多點(diǎn)注射。并分別在首免14天和28天時(shí)進(jìn)行強(qiáng)化免疫。強(qiáng)化免疫后7天開(kāi)始檢測(cè)免疫雞蛋中卵黃抗體水平，合格后開(kāi)始收集免疫雞蛋。
[0011]2:卵黃抗體的提取
使用蛋黃篩將蛋黃從免疫雞蛋中分離，按1:10的比例加入蒸餾水并攪拌30分鐘，配成均勻蛋黃液。調(diào)節(jié)蛋黃液PH值到5.0，8 OC靜置12小時(shí)，回收上清液。
[0012]3:卵黃抗體的純化
將回收的卵黃上清液通過(guò)0.45 μ m和0.22 μ m的串聯(lián)過(guò)濾系統(tǒng)過(guò)濾，再將過(guò)濾液以4.5L/min的流速經(jīng)過(guò)截留分子量分別為150KD和220KD的雙效超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，待濃縮液體積為I/ 20時(shí)回收濃縮液。
[0013]4:卵黃抗體的干燥
檢測(cè)卵黃濃縮液中抗體含量，分別按5.5%,30%的含量加入普朗尼克、可溶性淀粉，混合均勻后無(wú)菌分裝到滅菌西林瓶，-40°C冷凍干燥，制成卵黃抗體凍干粉制劑。
[0014]以上實(shí)施例僅為了對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，而本發(fā)明的范圍不受所舉實(shí)施例的局限。
[0015]部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告:一種新型卵黃抗體精制工藝及其用途的試驗(yàn)報(bào)告選用臨床診斷為溫和性禽流感的病雞5500只，隨機(jī)挑選40只最為空白對(duì)照，其余平均分為A、B兩組。網(wǎng)上平養(yǎng)，保持干凈，及時(shí)通風(fēng)，做好記錄。飼料參考NRC肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，配制基礎(chǔ)日糧，自由采食，自由飲水，統(tǒng)一管理。A組添加本卵黃抗體凍干粉制劑，按1:100的比例兌水飲用組為黃瓦多糖注射液(抗病毒I號(hào)注射液)，按每50ml兌水Ikg自由飲用；C組為空白對(duì)照組。
【權(quán)利要求】
1.一種新型卵黃抗體及其制備方法，其生產(chǎn)過(guò)程如下: (1)、挑選高品質(zhì)蛋雞雞茵進(jìn)行凈化飼養(yǎng)，為生產(chǎn)免疫蛋做準(zhǔn)備； (2)、產(chǎn)蛋期開(kāi)始后，給蛋雞按一定程序人工免疫特定抗原因或H7、H9型禽流感弱化苗； (3)、收集免疫雞蛋并保存，為提取卵黃抗體做準(zhǔn)備 (4)、收集蛋黃按1:10的比例加入蒸餾水并攪拌20分鐘，配成均勻蛋黃液，調(diào)節(jié)蛋黃液PH值到5.5，10°C靜置14小時(shí)，回收上清液； (5)、將含卵黃抗體的蛋黃土清液進(jìn)行雙效超濾濃縮，收集卵黃抗體濃縮將回收的卵黃土清液通過(guò)0.45μπι和0.22 μ m的串聯(lián)過(guò)濾系統(tǒng)過(guò)濾，再將過(guò)濾液以4.5L/min的流速經(jīng)過(guò)截留分子量分別為150KD和220KD的雙效超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，待濃縮液體積為I/20時(shí)回收濃縮液； (6)、將卵黃濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，制成凍干粉將回收的卵黃土清液通過(guò)0.45 μ m和0.22μπι的串聯(lián)過(guò)濾系統(tǒng)過(guò)濾，再將過(guò)濾液4.5L/min的流速經(jīng)過(guò)截留分子量分別為150KD和220KD的雙效超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，待濃縮液體積為I/ 20時(shí)回收濃縮液； (7)、利用卵黃抗體凍干粉配制臨床適用的卵黃抗體制品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種新型卵黃抗體，可將卵黃抗體制成粉劑、溶液劑、噴霧劑、注射液、注射用凍干粉等臨床適用劑型。
【文檔編號(hào)】C07K16/02GK103613665SQ201310584165
【公開(kāi)日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】不公告發(fā)明人 申請(qǐng)人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)