一種從小花棘豆中分離槲皮素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種小花棘豆中槲皮素的制備方法，包括以下步驟：(1)小花棘豆粉碎；(2)超聲波協(xié)助法提取小花棘豆總提取物；(3)大孔樹脂吸附法分離小花棘豆黃酮；(4)酸水解制備槲皮素粗品；(5)槲皮素的重結(jié)晶；(6)槲皮素純度的檢測。本發(fā)明具有制備工藝簡單，成本較低，產(chǎn)品純度高的特點，適合推廣和應(yīng)用。
【專利說明】一種從小花棘豆中分離槲皮素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥和保健品【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種從小花棘豆中分離槲皮素的方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]小花棘豆(Oxytropisglabra DC)是豆科(Leguminosae)棘豆屬(Oxytropis)植物，在新疆分布廣泛。據(jù)蒙藥典記載，小花棘豆是一種重要的中蒙藥原料，具有麻醉、鎮(zhèn)靜和止痛作用，主治牙痛、關(guān)節(jié)痛、失眠、健忘、神經(jīng)衰弱及皮膚瘙癢。如小花棘豆4.5g、北五加皮6g及地枸葉9g,水煎服,可治關(guān)節(jié)痛。
[0003]黃酮類化合物是小花棘豆的有效成分之一，其中含有槲皮素。槲皮素(quercetin),化學(xué)名為 3,3 1 ,4 1 ,5,7_ 五羥基黃酮(3,3 1 ,4 1 ,5,7-pentahydroxyf Iavone),又名櫟精、槲皮黃素,可作為藥品。具有較好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。此外還有抗氧化和清除自由基、保護(hù)心血管、預(yù)防冠心病、防治心肌缺血再灌注損傷、消炎，抗過敏，抗病毒和鎮(zhèn)定、抗腫瘤、預(yù)防癌癥等作用?？捎糜谥委熉灾夤苎祝瑢谛牟『透哐獕夯颊咭灿休o助治療作用。到目前為止，并未有小花棘豆中分離槲皮素的專利申請。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服上述技術(shù)存在的缺陷，提供一種從小花棘豆中分離槲皮素的方法及應(yīng)用，該方法利于操作、產(chǎn)品純度高。
[0005]其具體技術(shù)方案為:
[0006]一種從小花棘豆中分離槲皮素的方法，包括以下步驟:
[0007](1)小花棘豆粉碎:取小花棘豆地上部分，陰干、粉碎、過20目篩后備用；
[0008](2)超聲波協(xié)助法提取小花棘豆總提取物:稱取小花棘豆樣品，按照物料比1:15g / mL的比例加入體積分?jǐn)?shù)100%的甲醇超聲波提取90min，超聲波功率800W，溫度450C，提取完成后過濾，濾液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，恒溫干燥箱干燥，即得到小花棘豆總提取物；
[0009](3)小花棘豆黃酮的分離:將小花棘豆總提取物用水充分溶解；向?qū)游鲋屑尤隝 / 3體積的去離子水，然后將D-1Ol型大孔吸附樹脂用去離子水轉(zhuǎn)移至層析柱中，加入70%的乙醇溶液，體積為樹脂體積的2倍，流速為I倍樹脂體積/ min，然后用去離子水洗至無醇味后進(jìn)行小花棘豆總提取物水溶液的梯度洗脫；大孔樹脂最佳吸附工藝條件為:PH值4.0，溫度室溫，流速1.0BV / h;用10%~100%的乙醇洗脫，收集50%~85%的乙醇洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，冷凍干燥儀干燥，得到棕黃色粉末；
[0010](4)槲皮素粗品的分離:稱取小花棘豆黃酮約1.0g，加入體積比為V鴨:V*:V鹽酸=35:5:10的水解液60mL，于80°C水浴加熱90min，冷卻后過濾，60°C烘干即得黃色針狀槲
皮素粗產(chǎn)品；
[0011](5)槲皮素的重結(jié)晶:取步驟(4)制備的槲皮素粗品約1.0g，加入IOOmL石油醚和20mL去離子水,于80°C加熱攪拌30min,趁熱過濾,用20mL去離子水洗漆沉淀3次,于6(TC烘干得到槲皮素；稱取槲皮素(1)0.5g，加入IOOmL甲醇溶液，于80°C溶解，過濾，濾液放冷結(jié)晶，過濾得晶體，用20mL去離子水洗滌沉淀3次，于60°C烘干得純度高的槲皮素。
[0012]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:
[0013]本發(fā)明所述方法操作簡單，有機溶劑消耗少，生產(chǎn)成本低，工藝穩(wěn)定，能耗小，污染少，所得產(chǎn)品純度高，可適用于實驗室和工業(yè)化制備。通過槲皮素純度的檢測:通過灼燒殘渣檢查、澄清度的檢測和高效液相色譜檢測對分離得到的槲皮素進(jìn)行純度檢測，結(jié)果表明分離得到的槲皮素純度>98%。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1是槲皮素HPLC圖。
【具體實施方式】
[0015]下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明
[0016]小花棘?提取試驗:
[0017]為了綜合考察小花棘豆黃酮提取的影響因素，利用正交法“均衡分散”的特點，選取超聲時間、甲醇濃度、物料比作為考察因素，并結(jié)合多次提取的經(jīng)驗每因素又選取3個水平安排試驗，以黃酮的得率為衡量提取效率的客觀指標(biāo)，優(yōu)選最佳提取工藝。
[0018]表1正交試驗設(shè)計
[0019]
水平_超聲時間(min)_』甲醇濃度(0Zo)_物料比(g/mL)_
145601:10
260801:15
_3_90_100__IJ20_
[0020]表2小花棘豆黃酮提取試驗結(jié)果
[0021]
因素超聲時間(min) 甲醇濃度(％) 物料比(g/mL) 黃酮含量(％)
IIII1.326
[0022]
【權(quán)利要求】
1.一種從小花棘豆中分離槲皮素的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)小花棘豆粉碎:取小花棘豆地上部分，陰干、粉碎、過20目篩后備用； (2)超聲波協(xié)助法提取小花棘豆總提取物:稱取小花棘豆樣品，按照物料比1:15g /mL的比例加入體積分?jǐn)?shù)100%的甲醇超聲波提取90min，超聲波功率800W，溫度45°C，提取完成后過濾，濾液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，恒溫干燥箱干燥，即得到小花棘豆總提取物； (3)小花棘豆黃酮的分離:將小花棘豆總提取物用水充分溶解；向?qū)游鲋屑尤隝/ 3體積的去離子水，然后將D-101型大孔吸附樹脂用去離子水轉(zhuǎn)移至層析柱中，加入70%的乙醇溶液，體積為樹脂體積的2倍，流速為I倍樹脂體積/ min，然后用去離子水洗至無醇味后進(jìn)行小花棘豆總提取物水溶液的梯度洗脫；大孔樹脂最佳吸附工藝條件為:pH值4.0，溫度室溫，流速1.0BV / h;用10%~100%的乙醇洗脫，收集50%~85%的乙醇洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，冷凍干燥儀干燥，得到棕黃色粉末； (4)槲皮素粗品的分離:稱取小花棘豆黃酮約1.0g，加入體積比為V￥e:V*:V鹽酸=35:5:10的水解液60mL，于80°C水浴加熱90min，冷卻后過濾，60°C烘干即得黃色針狀槲皮素粗產(chǎn)品； (5)槲皮素的重結(jié)晶:取步驟(4)制備的槲皮素粗品約1.0g，加入IOOmL石油醚和20mL去離子水，于80°C加熱攪拌30min，趁熱過濾，用20mL去離子水洗滌沉淀3次，于60°C烘干得到槲皮素；稱取槲皮素(1)0.5g，加入IOOmL甲醇溶液，于80°C溶解，過濾，濾液放冷結(jié)晶，過濾得晶體，用20mL去離子水洗滌沉淀3次，于60°C烘干得純度高的槲皮素。
【文檔編號】C07D311/40GK103467425SQ201310403867
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年8月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月31日
【發(fā)明者】王帥, 馬春暉, 周小玲, 張玲, 賈琦珍, 陳根元 申請人:塔里木大學(xué)