專利名稱：離子液體-加速溶劑萃取高效液相色譜化學(xué)發(fā)光檢測蘆丁和槲皮素的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了一種檢測蘆丁和槲皮素的方法，具體得說，是一種利用離子液體-加速溶劑萃取高效液相色譜化學(xué)發(fā)光檢測蘆丁和槲皮素的新方法。
背景技術(shù)：
蘆丁和槲皮素都是天然黃酮類化合物，具有很強(qiáng)的抗氧化活性，可以延緩人體細(xì)胞衰老，對于人體健康有著重要的生理作用和藥用價值。很多種中藥當(dāng)中都含有蘆丁和槲皮素，目前常見的提取方法主要有索氏提取、超聲輔助提取或者微波輔助提取法等，但是這些方法往往不是提取時間過長就是提取效率不高，或者是操作麻煩，提取后的萃取液需要繁瑣的進(jìn)一步處理。而常用的檢測手段主要是紫外檢測法，這種方法檢測限較高，對于一些藥物中極微量的組分難以很好的測定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種新的蘆丁和槲皮素的提取及測定方法。該法首先用離子液體作為萃取溶劑，將中藥樣品適當(dāng)處理后裝入加速溶劑萃取裝置內(nèi)，然后在高溫高壓條件下對待測樣品進(jìn)行快速自動萃取。得到的提取液經(jīng)簡單離心處理后直接進(jìn)入色譜系統(tǒng)分離后用化學(xué)發(fā)光檢測器進(jìn)行分析。本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下本發(fā)明是一種利用離子液體-加速溶劑萃取法提取中藥中蘆丁和槲皮素及檢測其含量的方法，該方法是用離子液體作為加速溶劑萃取法中的萃取劑來代替甲醇等對環(huán)境污染的有機(jī)提取劑，在高溫高壓的外界條件下，快速高效的提取中藥中的蘆丁和槲皮素，提取后的液體經(jīng)高速離心簡單處理后，取上清液直接進(jìn)入高效液相色譜系統(tǒng)，完全分離后利用化學(xué)發(fā)光檢測器檢測。本發(fā)明所述的離子液體-加速溶劑萃取提取中藥中蘆丁和槲皮素及檢測其含量的方法，離子液體用于加速溶劑萃取過程中，方法綠色環(huán)保，離子液體的萃取效率高，整個過程比傳統(tǒng)的加熱回流提取法大大縮短時間，自動化程度極高，方法回收率好，穩(wěn)定可靠， 化學(xué)發(fā)光作為檢測手段，不需要內(nèi)部光源，其靈敏度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于紫外和熒光檢測器，能成功測定提取液中極微量的蘆丁和槲皮素。本發(fā)明的方法可應(yīng)用于其他能被離子液體-加速溶劑萃取化學(xué)發(fā)光檢測的中藥中的有效成分或其它固體及半固體樣品的分析測定。本發(fā)明的有益效果如下本發(fā)明測定時首先用離子液體-加速溶劑萃取系統(tǒng)對中藥樣品中的蘆丁和槲皮素進(jìn)行萃取，然后用C18柱進(jìn)行分離后用化學(xué)發(fā)光檢測器進(jìn)行檢測。利用離子液體代替有機(jī)溶劑，使得本方法綠色環(huán)保，而且加速溶劑萃取的高溫和高壓條件大大提升了離子液體的萃取能力；同時，化學(xué)發(fā)光檢測器的使用使得檢測的靈敏度大大提高，而且由于化學(xué)發(fā)光CN 102539572 A檢測本身具有一定的選擇性，這就使得其譜圖要比紫外檢測的譜圖干擾少，非常適合用于像中藥這樣復(fù)雜基體中痕量有效組分的測定；本法測定簡單，自動化程度高，準(zhǔn)確靈敏，經(jīng)濟(jì)環(huán)保，可廣泛應(yīng)用于食品，保健品以及醫(yī)藥領(lǐng)域，該方法可以高效提取并靈敏測定傳統(tǒng)中藥中的蘆丁和槲皮素，國內(nèi)外尚無同類檢測方法的報告。


圖1為離子液體-加速溶劑萃取高效液相色譜化學(xué)發(fā)光檢測蘆丁槲皮素標(biāo)準(zhǔn)色譜 (1 μ g/mL)；圖1中標(biāo)記為1-蘆丁，2-槲皮素；圖2為中藥山楂的色譜圖；圖2中標(biāo)記為1-蘆丁，2-槲皮素。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說明離子液體-加速溶劑萃取高效液相色譜化學(xué)發(fā)光檢測山楂中蘆丁槲皮素具體步驟如下1、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精確稱取蘆丁槲皮素標(biāo)樣各10mg，分別置于兩個IOml容量瓶中，震蕩溶解后，定容到刻度；2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作采用逐級稀釋的方法配制不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液；3、離子液體-加速溶劑萃取將藥店買來山楂去核后洗凈曬干并用粉碎機(jī)粉碎， 然后過40目篩子并收集，取一定量的山楂樣品放入加速溶劑萃取儀的34mL萃取池中，同時加入適量的硅藻土作為分散劑，將水溶性離子液體1-丁基-3-甲基咪唑氯鹽配成一定濃度的溶液，作為萃取劑，在設(shè)定好的溫度和壓力條件下進(jìn)行自動萃取。萃取后的液體流入收集瓶中收集，將此萃取液10000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后稀釋一定倍數(shù)直接進(jìn)色譜系統(tǒng)分析；4、標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品的測定進(jìn)樣量50 μ L，分別取1 μ g/mL蘆丁和槲皮素的混標(biāo)及稀釋一定倍數(shù)后的山楂實際樣品提取液注入色譜分析系統(tǒng)，得到標(biāo)樣色譜圖(附圖1)及樣品色譜圖(附圖2)。附圖1中我們可以看到蘆丁出峰時間大約為5. 8分鐘，槲皮素出峰時間大約為9. 3分鐘，二者可以很好的分離，而且峰型好。附圖2中可以看出蘆丁和槲皮素在實際樣品中都可以測得，并且沒有受到實際樣品中復(fù)雜基質(zhì)的干擾，可以很好的定量分析。5、發(fā)光試劑的選擇試驗不同體系的發(fā)光試劑，以求達(dá)到最佳的測定效果，最終該實例選擇0. 5mM高錳酸鉀和5 X 10- 鐵氰化鉀作為發(fā)光試劑；6、流動相的選擇試驗不同的流動相配比，最后確定為43%甲醇，0-8分鐘，8_9 分鐘增加甲醇至65%，然后保持這一比例到13分鐘；7、泵流速為lmL/min，蠕動泵流速為23轉(zhuǎn)/分，負(fù)高壓，800V。上述實施例用來解釋說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明進(jìn)行限制，在本發(fā)明的精神和權(quán)力要求保護(hù)范圍內(nèi)，對本發(fā)明做出的任何修改和改變，都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種離子液體-加速溶劑萃取提取中藥中蘆丁和槲皮素及檢測其含量的方法，其特征在于，該方法是用離子液體作為加速溶劑萃取法中的萃取劑來代替甲醇等對環(huán)境污染的有機(jī)提取劑，在高溫高壓的外界條件下，快速高效的提取中藥中的蘆丁和槲皮素，提取后的液體經(jīng)高速離心簡單處理后，取上清液直接進(jìn)入高效液相色譜系統(tǒng)，完全分離后利用化學(xué)發(fā)光檢測器檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的離子液體-加速溶劑萃取提取中藥中蘆丁和槲皮素及檢測其含量的方法，其特征在于，所述的離子液體用于加速溶劑萃取過程中，方法綠色環(huán)保，離子液體的萃取效率高，整個過程比傳統(tǒng)的加熱回流提取法大大縮短時間，自動化程度極高，方法回收率好，穩(wěn)定可靠，化學(xué)發(fā)光作為檢測手段，不需要內(nèi)部光源，其靈敏度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于紫外和熒光檢測器，能成功測定提取液中極微量的蘆丁和槲皮素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的離子液體-加速溶劑萃取提取中藥中蘆丁和槲皮素及檢測其含量的方法，其特征在于，可應(yīng)用于其他能被離子液體-加速溶劑萃取化學(xué)發(fā)光檢測的中藥中的有效成分或其它固體及半固體樣品的分析測定。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種易于自動化，綠色環(huán)保，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，靈敏度高的蘆丁和槲皮素的提取及檢測方法。該方法是用綠色環(huán)保的離子液體來代替有毒的有機(jī)溶劑，利用加速溶劑萃取技術(shù)中的高溫高壓條件，來快速萃取傳統(tǒng)中藥山楂中的有效成分蘆丁和槲皮素，萃取后的提取液只需經(jīng)簡單處理后就可以直接進(jìn)高效液相色譜分離系統(tǒng)，經(jīng)C18柱完全分離后用化學(xué)發(fā)光檢測器進(jìn)行檢測，出峰情況良好，可以得到很好的檢測結(jié)果，檢測限低。本方法可以應(yīng)用于食品、保健品及其他含量極低固體樣品中蘆丁和槲皮素的檢測。
文檔編號G01N30/08GK102539572SQ20121000166
公開日2012年7月4日 申請日期2012年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月5日
發(fā)明者吳宏偉, 朱巖, 陳梅蘭 申請人:浙江大學(xué)