專(zhuān)利名稱(chēng)：一種羥基紅花黃色素a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從紅花中快速制備高純度羥基紅花黃色素A的方法。
背景技術(shù)：
高速逆流色譜(High-speed Counter-current Chromatography, HSCCC)是新型 的液-液分配色譜技術(shù)，它利用多層螺旋管同步行星式離心運(yùn)動(dòng)，在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)樣品在 互不相溶的兩相溶劑系統(tǒng)中的高效分配，從而實(shí)現(xiàn)樣品分離。HSCCC具有兩大優(yōu)點(diǎn)首先， HSCCC聚四氟乙烯管中的固定相不需要載體，因而消除了液相色譜中由于使用載體而帶來(lái) 的吸附現(xiàn)象，尤其適用于分離極性物質(zhì)和具有生物活性的物質(zhì)。其次，由于HSCCC與一般色 譜的分離方式不同，每次的進(jìn)樣量比較大，可以達(dá)到毫克量級(jí)，甚至克量級(jí)，使其特別適用 于制備性分離，而且儀器價(jià)格低、性能可靠、分析成本低、易于操作；近年來(lái)，HSCCC技術(shù)被 廣泛應(yīng)用于中藥和天然產(chǎn)物的研究。非常適用于化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品的制備。紅花為菊科紅花屬一年生草本植物紅花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花。 俗名草紅花、紅藍(lán)花和紅花草，在我國(guó)已有2100多年的栽培和藥用歷史。全國(guó)各地都有栽 培，主產(chǎn)于新疆、河南、浙江和四川等省，其中新疆地產(chǎn)紅花占全國(guó)總產(chǎn)量的80%，而新疆塔 城紅花又是新疆地區(qū)優(yōu)質(zhì)品種。紅花作為我國(guó)的傳統(tǒng)草藥，具有活血通經(jīng)、散瘀止痛、降血 壓和降血脂的功效，用于治療痛經(jīng)、跌打損傷、冠心病、心絞痛和高血壓等疾。該植物的化學(xué) 成分包括黃酮類(lèi)、木脂素類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)和烷基二醇類(lèi)及多炔類(lèi)化合物等250余種。羥基紅花黃色素A(HYSA)是其主要的水溶性成分，屬于查耳酮類(lèi)化合物，在植物 中含量較高、為紅花中的具有藥理效應(yīng)代表性的主要成分。大量研究表明紅花黃色素A具 有活血通經(jīng)、化瘀止痛之功效，對(duì)冠心病、高血壓、腦梗塞、糖尿病并發(fā)癥等有療效，并具有 抑制免疫、抗炎、抗腫瘤等廣泛作用。鑒于羥基紅花黃色素A制劑及含羥基紅花黃色素A制劑的大量應(yīng)用，目前關(guān)于羥 基紅花黃色素A的研究報(bào)道中，尚未發(fā)現(xiàn)快速制備高純度的羥基紅花黃色素A方法。本發(fā) 明采用近年來(lái)發(fā)展迅速的高速逆流色譜技術(shù)，大量快速制備的羥基紅花黃色素A的方法， 并采用該方法獲得了高純度的羥基紅花黃色素A的單體化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是為

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種羥基紅花黃色素A的制備方法，該方法利用高速逆 流色譜從紅花中快速大量制備高純度羥基紅花黃色素A，為紅花制劑及羥基紅花黃色素A 的藥理藥效學(xué)研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。通過(guò)該方法獲得的產(chǎn)品羥基紅花黃色素A純度可以達(dá) 到標(biāo)準(zhǔn)品的要求，該方法工藝簡(jiǎn)單，快速，量大，成本低，無(wú)環(huán)境污染，既適用批量的制備，也 適用于小劑量的制備。本發(fā)明所述的一種羥基紅花黃色素A的制備方法，按下列步驟進(jìn)行a、提取取紅花的干燥花，加入10-20倍重量的去離子水，溫度80°C水浴浸泡 10-60分鐘，用水回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮至提取液體積的50%，得到提取液；b、分離將提取液加入3-10%吸附澄清劑殼聚糖或101果汁澄清劑或ZTC II天然 澄清劑除雜后，上大孔吸附樹(shù)脂，待流出液Molish反應(yīng)呈陰性時(shí)，用濃度為5-50%乙醇進(jìn) 行洗脫，得到紅花粗提物；或?qū)⑻崛∫褐苯由洗罂孜綐?shù)脂，待流出液Molish反應(yīng)呈陰性時(shí)，用濃度為 5-50%乙醇進(jìn)行洗脫，得到紅花粗提物；C、高速逆流色譜法分離采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由兩相或三 相組分形成的溶劑，分別是正丁醇或正戊醇與鹽酸組成兩相，或正丁醇或正戊醇和甲醇、乙 酸乙酯或乙醇和鹽酸組成三相，其中各組分體積比為1-3 0-2 0.5-2;d、將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上層相溶液作為固定 相，下層相溶液作為流動(dòng)相，將粗提物溶于上層相和下層相的混合溶液中，使高速逆流色 譜儀柱子中充滿(mǎn)固定相，然后使其主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，再將流動(dòng)相泵入柱，再由進(jìn)樣閥進(jìn)入粗提物溶 于上層和下層的混合溶液，保留時(shí)間為100-200分鐘，使用的高速逆流色譜儀流速范圍為 l-3ml/min，轉(zhuǎn)速范圍為700-1000轉(zhuǎn)數(shù)，根據(jù)檢測(cè)器譜圖或高效液相色譜的檢測(cè)結(jié)果接收 目標(biāo)成分羥基紅花黃色素A ；e、純化除酸將高速逆流得到的樣品羥基紅花黃色素A進(jìn)行柱層析，柱子的徑高 比為1 50-100，超純水以(KMl/min的流速洗脫，收集橙黃色色帶流份，于溫度30-80°C 條件下濃縮干燥，即可得到羥基紅花黃色素A干粉。步驟b大孔吸附樹(shù)脂為D-4020或AB-8或D-141或D-201或HPD500型號(hào)。步驟c 中鹽酸為 0. 05-0. 2mol/L。
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步驟e柱層析中的填料，選用葡聚糖凝膠LH-20、LH-60或G_25。本發(fā)明中所用藥材紅花均購(gòu)自新疆塔城，品種為塔原一號(hào)。


圖1為本發(fā)明通過(guò)高速逆流色譜分離羥基紅花黃色素A的逆流色譜圖。圖2為本發(fā)明通過(guò)高速逆流色譜批量分離羥基紅花黃色素A的逆流色譜圖。圖3為羥基紅花黃色素A的質(zhì)譜圖。圖4為羥基紅花黃色素A的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1a、提取取紅花的干燥花20g，加入200g的去離子水，溫度80°C水浴浸泡60分鐘， 用水回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮至提取液體積的50%，得到提取液；b、分離將提取液直接上大孔吸附樹(shù)脂D-4020，待流出液Molish反應(yīng)呈陰性時(shí)， 用濃度5%乙醇洗脫，至羥基紅花黃色素A成分結(jié)束為止，得到紅花粗提物；C、高速逆流色譜法分離采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正丁醇、甲 醇和0. 15mol/L的鹽酸組成，各組分體積比為2 :1:1;d、將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上層相溶液作為固定 相，下層相溶液作為流動(dòng)相，將粗提物溶于上層和下層的混合溶液中，使高速逆流色譜儀柱 子中充滿(mǎn)固定相，然后使其主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，再將流動(dòng)相泵入柱，再由進(jìn)樣閥進(jìn)入粗提物溶于上層 和下層的混合溶液，保留時(shí)間為200分鐘，使用的高速逆流色譜儀流速范圍為lml/min，轉(zhuǎn) 速范圍為750轉(zhuǎn)數(shù)，根據(jù)檢測(cè)器譜圖或高效液相色譜的檢測(cè)結(jié)果接收目標(biāo)成分羥基紅花黃 色素A;e、純化除酸將高速逆流得到的樣品羥基紅花黃色素A上葡聚糖凝膠LH-60，柱子 的徑高比為1 70，超純水以2.5ml/min的流速洗脫，收集橙黃色色帶流份，于溫度80°C條 件下濃縮干燥，即可得到羥基紅花黃色素A干粉201mg，經(jīng)檢測(cè)純度為97%。實(shí)施例2a、提取取紅花的干燥花20g，加入400g的去離子水，溫度80°C水浴浸泡10分鐘， 用水回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮至提取液體積的50%，得到提取液；b、分離將提取液加入3%殼聚糖，上大孔吸附樹(shù)脂AB-8，待流出液Molish反應(yīng)呈 陰性時(shí)，用濃度20%乙醇洗脫，至羥基紅花黃色素A成分結(jié)束為止，得到紅花粗提物；C、高速逆流色譜法分離采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正戊醇、乙 醇和0.05mol/L的鹽酸組成，各組分體積比為3 :2:1;d、將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上層相溶液作為固定 相，下層相溶液作為流動(dòng)相，將粗提物溶于上層相和下層相的混合溶液中，使高速逆流色 譜儀柱子中充滿(mǎn)固定相，然后使其主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，再將流動(dòng)相泵入柱，再由進(jìn)樣閥進(jìn)入粗提物溶 于上層相和下層相的混合溶液，保留時(shí)間為150分鐘，使用的高速逆流色譜儀流速范圍為 1. 5ml/min，轉(zhuǎn)速范圍為800轉(zhuǎn)數(shù)，根據(jù)檢測(cè)器譜圖或高效液相色譜的檢測(cè)結(jié)果接收目標(biāo)成 分羥基紅花黃色素A ；
e、純化除酸將高速逆流得到的樣品羥基紅花黃色素A上葡聚糖凝膠LH-20，柱子 的徑高比為1 50，超純水以aiil/min的流速洗脫，收集橙黃色色帶流份，于溫度50°C條件 下濃縮干燥，即可得到羥基紅花黃色素A干粉185mg，經(jīng)檢測(cè)純度在97. 7%。實(shí)施例3a、提取取紅花的干燥花20g，加入300g的去離子水，溫度80°C水浴浸泡20分鐘， 用水回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮至提取液體積的50%，得到提取液；b、分離將提取液加入10% 101果汁澄清劑，上大孔吸附樹(shù)脂D-141，待流出液 Molish反應(yīng)呈陰性時(shí)，用濃度30%乙醇洗脫，至羥基紅花黃色素A成分結(jié)束為止，得到紅花 粗提物；C、高速逆流色譜法分離采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正戊醇和
0.2mol/L的鹽酸組成，各組分體積比為2 1 ；d、將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上層相溶液作為固定 相，下層相溶液作為流動(dòng)相，將粗提物溶于上層相和下層相的混合溶液中，使高速逆流色 譜儀柱子中充滿(mǎn)固定相，然后使其主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，再將流動(dòng)相泵入柱，再由進(jìn)樣閥進(jìn)入粗提物溶 于上層相和下層相的混合溶液，保留時(shí)間為140分鐘，使用的高速逆流色譜儀流速范圍為
1.7ml/min，轉(zhuǎn)速范圍為700轉(zhuǎn)數(shù)，根據(jù)檢測(cè)器譜圖或高效液相色譜的檢測(cè)結(jié)果接收目標(biāo)成 分羥基紅花黃色素A ；e、純化除酸將高速逆流得到的樣品羥基紅花黃色素A上葡聚糖凝膠LH-20，柱子 的徑高比為1 60，超純水以;3ml/min的流速洗脫，收集橙黃色色帶流份，于溫度70°C條件 下濃縮干燥，即可得到羥基紅花黃色素A干粉199mg，經(jīng)檢測(cè)純度在98. 2%。實(shí)施例4a、提取取紅花的干燥花20g，加入^Og的去離子水，溫度80°C水浴浸泡50分鐘， 用水回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮至提取液體積的50%，得到提取液；b、分離將提取液加入8% ZTC II天然澄清劑，上大孔吸附樹(shù)脂D-201，待流出液 Molish反應(yīng)呈陰性時(shí)，用濃度10%乙醇洗脫，至羥基紅花黃色素A成分結(jié)束為止，得到紅花 粗提物；C、高速逆流色譜法分離采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正丁醇和
0.12mol/L的鹽酸組成，各組分體積比為1:1;d、將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上層相溶液作為固定 相，下層相溶液作為流動(dòng)相，將粗提物溶于上層相和下層相的混合溶液中，使高速逆流色 譜儀柱子中充滿(mǎn)固定相，然后使其主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，再將流動(dòng)相泵入柱，再由進(jìn)樣閥進(jìn)入粗提物溶 于上層相和下層相的混合溶液，保留時(shí)間為100分鐘，使用的高速逆流色譜儀流速范圍為
1.2ml/min，轉(zhuǎn)速范圍為900轉(zhuǎn)數(shù)，根據(jù)檢測(cè)器譜圖或高效液相色譜的檢測(cè)結(jié)果接收目標(biāo)成 分羥基紅花黃色素A ；純化除酸將高速逆流得到的樣品羥基紅花黃色素A上葡聚糖凝膠LH-20，柱子的 徑高比為1 75，超純水以lml/min的流速洗脫，收集橙黃色色帶流份，于溫度60°C條件下 濃縮干燥，即可得到羥基紅花黃色素A干粉225mg，經(jīng)檢測(cè)純度在99. 1 %。實(shí)施例5a、提取取紅花的干燥花20g，加入380g的去離子水，溫度80°C水浴浸泡30分鐘，用水回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮至提取液體積的50%，得到提取液；b、分離將提取液加入5% ZTC II天然澄清劑，上大孔吸附樹(shù)脂AB-8，待流出液 Molish反應(yīng)呈陰性時(shí)，用濃度50%乙醇洗脫，至羥基紅花黃色素A成分結(jié)束為止，得到紅花 粗提物；C、高速逆流色譜法分離采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正丁醇、甲 醇和0.08mol/L的鹽酸組成，各組分體積比為1 1 0. 5 ；d、將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上層相溶液作為固定 相，下層相溶液作為流動(dòng)相，將粗提物溶于上層相和下層相的混合溶液中，使高速逆流色 譜儀柱子中充滿(mǎn)固定相，然后使其主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，再將流動(dòng)相泵入柱，再由進(jìn)樣閥進(jìn)入粗提物溶 于上層相和下層相的混合溶液，保留時(shí)間為100分鐘，使用的高速逆流色譜儀流速范圍為 3. Oml/min，轉(zhuǎn)速范圍為1000轉(zhuǎn)數(shù)，根據(jù)檢測(cè)器譜圖或高效液相色譜的檢測(cè)結(jié)果接收目標(biāo) 成分羥基紅花黃色素A ；e、純化除酸將高速逆流得到的樣品羥基紅花黃色素A上葡聚糖凝膠G-25，柱子 的徑高比為1 100，超純水以;3ml/min的流速洗脫，收集橙黃色色帶流份，于溫度40°C條 件下濃縮干燥，即可得到羥基紅花黃色素A干粉185mg，經(jīng)檢測(cè)純度在97. 8%。
權(quán)利要求
1.一種羥基紅花黃色素A的制備方法，其特征在于按下列步驟進(jìn)行a、提取取紅花的干燥花，加入10-20倍重量的去離子水，溫度80°C水浴浸泡10-60分 鐘，用水回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮至提取液體積的50%，得到提取液；b、分離將提取液加入3-10%吸附澄清劑殼聚糖或101果汁澄清劑或ZTCII天然澄清 劑除雜，上大孔吸附樹(shù)脂，待流出液Molish反應(yīng)呈陰性時(shí)，用濃度為5-50%乙醇進(jìn)行洗脫， 得到紅花粗提物；或?qū)⑻崛∫褐苯由洗罂孜綐?shù)脂，待流出液Molish反應(yīng)呈陰性時(shí)，用濃度為5-50%乙 醇進(jìn)行洗脫，得到紅花粗提物；c、高速逆流色譜法分離采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由兩相或三相組 分形成的溶劑，分別是正丁醇或正戊醇與鹽酸組成兩相，或正丁醇或正戊醇和甲醇或乙醇 和鹽酸組成三相，其中各組分體積比為1-3 0-2 0.5-2;d、將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上層相溶液作為固定相，下 層相溶液作為流動(dòng)相，將粗提物溶于上層相和下層相的混合溶液中，使高速逆流色譜儀柱 子中充滿(mǎn)固定相，然后使其主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，再將流動(dòng)相泵入柱，再由進(jìn)樣閥進(jìn)入粗提物溶于上層 和下層的混合溶液，保留時(shí)間為100-200分鐘，使用的高速逆流色譜儀流速范圍為Hml/ min，轉(zhuǎn)速范圍為700-1000轉(zhuǎn)數(shù)，根據(jù)檢測(cè)器譜圖或高效液相色譜的檢測(cè)結(jié)果接收目標(biāo)成 分羥基紅花黃色素A ；e、純化除酸將高速逆流得到的樣品羥基紅花黃色素A進(jìn)行柱層析，柱子的徑高比為 1 50-100，超純水以(KMl/min的流速洗脫，收集橙黃色色帶流份，于溫度30-80°C條件下 濃縮干燥，即可得到羥基紅花黃色素A干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟b大孔吸附樹(shù)脂為D-4020或AB-8或 D-141 或 D-201 或 HPD500 型號(hào)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟c中鹽酸為0.05-0. 2mol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟e柱層析中的填料選用葡聚糖凝膠 LH-20 或 LH-60 或 G-25 型號(hào)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種羥基紅花黃色素A的制備方法，該方法利用高速逆流色譜從紅花中快速大量制備高純度羥基紅花黃色素A，為紅花制劑及羥基紅花黃色素A的藥理藥效學(xué)研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。通過(guò)該方法獲得的產(chǎn)品羥基紅花黃色素A純度可以達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)品的要求，該方法工藝簡(jiǎn)單，快速，量大，成本低，無(wú)環(huán)境污染，既適用批量的制備，也適用于小劑量的制備。
文檔編號(hào)C07H7/04GK102127124SQ201010606888
公開(kāi)日2011年7月20日 申請(qǐng)日期2010年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月27日
發(fā)明者信學(xué)雷, 吳桂榮, 楊義, 阿吉艾克拜爾·艾薩, 黎凌楠 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所