專利名稱：色譜法從鉤吻醇取物中制備鉤吻堿甲的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鉤吻堿甲(gelsemine)的制備方法，特別是涉及一種從鉤吻提取物中分離制備鉤吻堿甲的方法。
背景技術(shù)：
鉤吻(Gelsemium elegans Benth.)為馬錢科胡蔓藤屬植物，分中國(guó)鉤吻和北美鉤吻兩種。我國(guó)盛產(chǎn)于福建、浙江、廣西、廣東、湖南等地，又名斷腸草。其藥用部位為全草。具有祛風(fēng)攻毒，消腫止痛的功效。鉤吻堿類化合物是存在于鉤吻中的一類化合物，被證明在腫瘤、鎮(zhèn)痛等方面有較好的活性。臨床上用于抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、治療神經(jīng)痛、局部用于擴(kuò)瞳等作用，可以被認(rèn)為是鉤吻藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。鉤吻堿甲(Gelsemine)是自鉤吻中分離得到的一種鉤吻堿類化合物，其含量較高，具有一定的開(kāi)發(fā)新藥的潛力。其藥理作用主要包括其能抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜等作用。目前技術(shù)公開(kāi)鉤吻堿甲的制備方法(專利號(hào)CN 101323618A，
公開(kāi)日2008年12 月17日)是將鉤吻總堿用流動(dòng)相溶解后，采用高速逆流色譜儀進(jìn)行制備，該制備方法操作繁瑣，設(shè)備費(fèi)用昂貴，制備量少，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。因此，鉤吻堿甲分離手段的不足是限制其醫(yī)藥用途的一個(gè)主要原因。
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種從鉤吻提取物中制備鉤吻堿甲的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中制備手段繁瑣，產(chǎn)率極低的技術(shù)問(wèn)題。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明從鉤吻提取物中制備鉤吻堿甲的方法，包括步驟(1)乙酸乙酯萃取步驟將鉤吻提取物的水溶液用體積比為0.5 1 2 1的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑，得萃取純化的浸膏A。(2)硅膠色譜純化步驟將步驟(1)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱層析硅膠柱色譜分離，并以體積比為100 1 25 1氯仿-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點(diǎn)樣后于紫外燈254nm下觀察，合并含有鉤吻堿甲的流份，減壓回收溶劑，得浸膏B。
(3)反相C18色譜純化步驟將步驟⑵所得的浸膏C用30%甲醇溶解后，反相硅膠分離(浸膏樣品與C18反相硅膠重量比為1 30 1 50)，體積比為40% 50%的甲醇-水溶液洗脫，洗脫液作 TLC檢識(shí)，合并含有鉤吻堿甲的流份，減壓回收溶劑，得鉤吻堿甲的純品。其中，所述硅膠色譜純化步驟與反相色譜純化步驟的順序能夠顛倒。所述步驟(1)中鉤吻提取物中所用的提取溶劑為體積濃度為70% 95%的乙醇溶液。采用本發(fā)明的方法依次經(jīng)(1)乙酸乙酯萃??；( 硅膠色譜純化；(3)反相色譜純化；能極大地提高得率，因此，該方法是一種制備鉤吻堿甲的簡(jiǎn)化工藝，可用于鉤吻堿甲的工業(yè)制備。


圖1是鉤吻堿甲的1H-WR圖。 圖2是鉤吻堿甲的13C-NMR圖。 圖3是鉤吻堿甲的DEPT圖。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1鉤吻堿甲的制備鉤吻藥材1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粗粉，體積濃度為70%乙醇5L回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收溶劑得提取液約1L。將提取液用2L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約 40g。將浸膏A用硅膠柱色譜分離(硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為1 30，硅膠柱規(guī)格Φ100*1000πιπι)，并以體積比為50 1的氯仿-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點(diǎn)樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開(kāi)后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有鉤吻堿甲的部分，減壓回收溶劑，得浸膏B約7g。將浸膏B用反相Cw硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與硅膠重量比為1 40，硅膠柱規(guī)格Φ60*600πιπι)，體積比為40%的甲醇-水溶液洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點(diǎn)樣， 以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開(kāi)后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有鉤吻堿甲的部分，即得純化的鉤吻堿甲0. 26go最終所得鉤吻堿甲經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定Heterocycles，1996，43 1015-1020.，并經(jīng)高效液相檢測(cè)[Kromasil-Cw柱(4. 6mm*250mm)，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，流動(dòng)相水-甲醇(50 50)，流速ImL · mirT1，進(jìn)樣量10μ 1，柱溫25°C，理論塔板數(shù)以鉤吻堿甲計(jì)不低于5000含量在96%以上，其得率為0. 026%實(shí)施例2鉤吻堿甲的制備鉤吻藥材1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粗粉，體積濃度為95%乙醇5L回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收溶劑得提取液約2L。將提取液用IL乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約 35g。將浸膏A用反相Cw硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與Cw硅膠重量比為1 30，硅膠柱規(guī)格Φ100*1000πιπι)，體積比為50%的甲醇-水溶液洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點(diǎn)樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開(kāi)后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有鉤吻堿甲的部分，得浸膏B約3g。將浸膏B用硅膠柱色譜分離(硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為1 100，硅膠柱規(guī)格Φ60*600πιπι)，并以體積比為100 1的氯仿-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點(diǎn)樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開(kāi)后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有鉤吻堿甲的部分，減壓回收溶劑，即得純化的鉤吻堿甲0. 31g。最終所得鉤吻堿甲經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定Heterocycles，1996，43 1015-1020.，并經(jīng)高效液相檢測(cè)[Kromasil-Cw柱(4. 6mm*250mm)，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，流動(dòng)相水-甲醇(55 45)，流速ImL · mirT1，進(jìn)樣量10μ 1，柱溫25°C，理論塔板數(shù)以鉤吻堿甲計(jì)不低于5000含量在98%以上，其得率為0. 031%。 實(shí)施例3鉤吻堿甲的制備鉤吻藥材1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粗粉，體積濃度為80%乙醇5L回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收溶劑得提取液約1L。將提取液用0. 5L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約 35g。將浸膏A用硅膠柱色譜分離(硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為1 50，硅膠柱規(guī)格Φ100*1000πιπι)，并以體積比為50 1的氯仿-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點(diǎn)樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開(kāi)后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有鉤吻堿甲的部分，減壓回收溶劑，得浸膏B約15g。將浸膏B用30%甲醇溶解后，反相C18硅膠分離(浸膏樣品與C18硅膠重量比為 1 50，硅膠柱規(guī)格Φ60*600mm)，體積比為45 %的甲醇-水溶液洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點(diǎn)樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開(kāi)后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有鉤吻堿甲的部分，即得純化的鉤吻堿甲0. 35g。最終所得鉤吻堿甲經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定Heterocycles，1996，43 1015-1020.，并經(jīng)高效液相檢測(cè)[Kromasil-Cw柱(4. 6mm*250mm)，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，流動(dòng)相水-甲醇(55 45)，流速ImL · mirT1，進(jìn)樣量10μ 1，柱溫25°C，理論塔板數(shù)以鉤吻堿甲計(jì)不低于5000含量在97%以上，其得率為0. 035%以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法用于制備鉤吻堿甲，工藝簡(jiǎn)單，得率在萬(wàn)分之二以上， 因此，本發(fā)明可用于鉤吻堿甲的工業(yè)制備。
權(quán)利要求
1.從鉤吻提取物中制備鉤吻堿甲的方法，其特征在于包括步驟(1)乙酸乙酯萃取步驟將鉤吻提取物的水溶液用體積比為0.5 1 2 1的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑，得萃取純化的浸膏A。(2)硅膠色譜純化步驟將步驟(1)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱層析硅膠柱色譜分離，并以體積比為100 1 25 1的氯仿-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點(diǎn)樣后于紫外燈254nm下觀察，合并含有鉤吻堿甲的流份，減壓回收溶劑，得浸膏B。(3)反相C18色譜純化步驟將步驟⑵所得的浸膏C反相硅膠柱色譜分離，體積比為40% 50%的甲醇-水溶液洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點(diǎn)樣后于紫外燈254nm下觀察，合并含有鉤吻堿甲的流份，減壓回收溶劑，即得純化的鉤吻堿甲。其中，所述硅膠色譜純化步驟與反相色譜純化步驟的順序能夠顛倒。
2.如權(quán)利要求1所述的從鉤吻提取物中制備鉤吻堿甲的方法，其特征在于所述步驟 (1)中鉤吻提取物中所用的提取溶劑為體積濃度為70% 95%的乙醇溶液；鉤吻提取物的水溶液濃度相當(dāng)于生藥0. 5g · πιΓ1 1. Og · Iiir10
3.如權(quán)利要求1所述的從鉤吻提取物中制備鉤吻堿甲的方法，其特征在于所述乙酸乙酯萃取中，鉤吻提取物的水溶液與乙酸乙酯溶液的體積比為0.5 1 2 1。
4.如權(quán)利要求1所述的從鉤吻提取物中制備鉤吻堿甲的方法，其特征在于所述硅膠色譜純化步驟中，硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠或薄層層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為1 30 1 100。
5.如權(quán)利要求1所述的從鉤吻提取物中制備胡鉤吻堿甲的方法，其特征在于所述反相色譜純化步驟中，浸膏樣品與Cw反相硅膠重量比為1 30 1 50。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從鉤吻提取物中制備鉤吻堿甲的方法，包括步驟(1)乙酸乙酯萃??；(2)硅膠色譜純化；(3)反相色譜純化。本發(fā)明是一種制備鉤吻堿甲的簡(jiǎn)化工藝，能極大地提高鉤吻堿甲的得率，可用于鉤吻堿甲的工業(yè)制備。
文檔編號(hào)C07D491/22GK102199156SQ20101013392
公開(kāi)日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2010年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月26日
發(fā)明者馮怡, 梁爽, 王源, 鄭向煒, 阮克鋒 申請(qǐng)人:上海張江中藥現(xiàn)代制劑技術(shù)工程研究中心