本發(fā)明涉及一種草本植物的提取方法，特別是一種石斛多糖與石斛堿醇質(zhì)體的制備方法；同時，本發(fā)明中還涉及一種能夠抗紫外線抗氧化，具備美白淡斑效果，純天然、無刺激的化妝品。

背景技術(shù)：

皮膚長期暴露在紫外線下和吸收內(nèi)源性光敏分子都將導(dǎo)致氧自由基的形成，對皮膚造成不同程度的損害和病變，如光老化、粗糙，脂褐素增加等。皮膚在紫外線的照射下基底層的酪氨酸酶活性增加，產(chǎn)生黑色素，導(dǎo)致面部雀斑、黃褐斑等色斑顏色加深，這不僅影響患者的容貌美觀，也給患者帶來心理壓力，嚴重時甚至影響患者的社交自信心。

紫外線損傷的皮膚，如果及時的進行保濕、補水和抗氧化護理可以促進皮膚新陳代謝，減緩色斑的生成甚至淡化已生成的色斑。防紫外線與保濕是預(yù)防皮膚色素沉著以及老化的一個有效方法。

目前市場上常見的防曬產(chǎn)品主要分為兩類，一類是物理防曬，一類是化學(xué)防曬。物理防曬主要是指添加一些反射光的微小粒子，一般是二氧化鈦、氧化鋅等，將紫外線反射出去，避免皮膚接受紫外線而受到傷害。但是物理防曬不易涂抹均勻，同時容易造成皮膚毛孔堵塞，涂抹舒適性差?；瘜W(xué)防曬主要是添加了可以吸收特定波長的紫外線吸收劑，如對氨基苯甲酸及其衍生物、肉桂酸等，但是由于不同人群膚質(zhì)不同，容易造成皮膚過敏或者刺激。因此開發(fā)一款天然的可以抵御紫外線，具有舒適涂抹性，無刺激的，同時進行皮膚損傷修復(fù)的天然化妝品十分必要。

鐵皮石斛作為我國傳統(tǒng)中藥材，對其功能研究主要集中在免疫、抗氧化、抗腫瘤、抗疲勞、抗炎、降血糖和養(yǎng)陰生津等方面，關(guān)于鐵皮石斛抗光損傷試驗的研究報道很少。但是，大量研究表明鐵皮石斛中菲類、多糖、木脂素、聯(lián)芐類、酚酸類、黃酮類都有很強的抗氧化作用，鐵皮石斛水提液對皮膚膠原蛋白的成纖維細胞gm0639抗輻射作用，同時馮冰等人研究石斛提取液可以提高細胞保濕性能以及抑制黑色素生成，盧秋靜，周夢娣及王浙樂等人的中成藥發(fā)表文獻（浙江省“生物工程”重中之重學(xué)科，項目編號：1740002730）中記載到了鐵皮石斛提取物（主要包括石斛多糖以及石斛堿醇質(zhì)體）對小鼠皮膚光損傷的保護作用，均為鐵皮石斛應(yīng)用于皮膚光損傷提供了良好的物質(zhì)基礎(chǔ)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種能夠抗紫外線抗氧化，同時具備美白淡斑效果，純天然、無刺激的化妝品。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所設(shè)計的一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖20～35%、甘油10～15%、神經(jīng)酰胺0～2%、超純水42～65%、石斛堿醇質(zhì)體0.3～1%、天然維生素e0～2%、全反式白藜蘆醇0～1%、維生素c棕櫚酸酯0～1%、α-熊果苷0～1%、植物精油0.1～1%。

上述化妝品成分中的石斛多糖以及石斛堿醇質(zhì)體涂抹在皮膚上能夠提升皮膚的抗氧化能力，抑制皮膚組織活性氧代謝，從而增強皮膚組織抗光老化作用；同時，上述化妝品成分中鐵皮石斛提取物配合神經(jīng)酰胺能快速滲透進皮膚，與角質(zhì)層中的水結(jié)合形成一種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，鎖住水分，迅速恢復(fù)保濕和屏障功能，加快皮膚細胞代謝更新，調(diào)節(jié)細胞生長變異作用，參與細胞作用，抗衰老，防止過敏性皮膚病的目的和抑制黑色素褐斑的效果，有保濕的特性，結(jié)合維生素e，在皮膚表面水解成生育酚，使末梢血管擴張，改善血液循環(huán)，結(jié)合降低血液粘稠度，抑制血小板凝結(jié)和血管舒張，保持血液暢通，促進其他活性成分的吸收，而且白藜蘆醇還是一種天然的抗氧化劑，白藜蘆醇還可抑制細胞發(fā)炎，α-熊果苷抑制體內(nèi)酪氨酸酶的活性，阻止黑色素的生成，從而減少皮膚色素沉積，祛除色斑和雀斑，同時還有殺菌、消炎的作用。

同樣為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所設(shè)計的另一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖20～30%、甘油10～15%、神經(jīng)酰胺0～2%、磁化超純水40～50%、石斛堿醇質(zhì)體0.3～5%、天然維生素e0～0.2%、hegf0～3%、甘草精0～5%、α-熊果苷0～1%、植物精油0.1～1%、透明質(zhì)酸0.1～1%、維生素p和維生素b3復(fù)合物0.1～1%、絲氨酸0.1～2%、橄欖油0.1～1%、角鯊烯0.1～1%、α亞麻酸0.1～3%、β葡聚糖0.1～2%、sod0.1～5%、內(nèi)皮素拮抗劑0.1～2%、尿囊素0.1～3%、三乙醇胺與檸檬酸0～0.025%。

上述化妝品成分中的石斛多糖以及石斛堿醇質(zhì)體涂抹在皮膚上能夠提升皮膚的抗氧化能力，抑制皮膚組織活性氧代謝，從而增強皮膚組織抗光老化作用；同時，上述化妝品成分中由于石斛多糖以及石斛堿醇質(zhì)體能顯著提高超氧化物歧化酶（sod）和血清钖羥脯氨酶（hyp）的水平，明顯降低脂質(zhì)過氧化物（lop）和單胺氧化物（mao），故結(jié)合sod起到最佳的抗氧化作用，加以角鯊烯提高體內(nèi)超氧化物歧化酶(sod)活性、增強機體免疫能力，從而起到抗衰老作用，促進正常表皮細胞的新陳代謝；當(dāng)hegf與特異的跨細胞膜表面的egfr結(jié)合后，刺激了egfr復(fù)合物中的酪氨酸激酶的活性,，通過egfr復(fù)合物的自磷酸化作用,，在細胞內(nèi)形成快速的信息傳遞網(wǎng)絡(luò)，激活蛋白酶和磷酸酯酶等的一系列生化反應(yīng),，促進體內(nèi)ca2+、k+和糖等低分子物大量進入細胞內(nèi)(主動運輸)，糖酵解量增大，rna與蛋白質(zhì)合成增多，作用一段時間后，egfr復(fù)合物開始促進dna合成，并由此趨向刺激內(nèi)皮細胞、單核細胞等多種細胞分裂、增殖和分化，使之向創(chuàng)傷部位遷移，加速啟動創(chuàng)傷組織再生、修復(fù)和胞外間質(zhì)形成；另一方面，hegf能增加其他內(nèi)源性生長因子，促進羥脯氨酸合成，調(diào)節(jié)膠原酶和膠原的合成、分泌和沉淀，調(diào)節(jié)膠原降解，使膠原纖維以線性方式排列，增強創(chuàng)面抗張程度，減少疤痕形成，提高愈合質(zhì)量；經(jīng)美國柏玫思生物科技研究所研究發(fā)現(xiàn)hegf與肽類化合物和透明質(zhì)酸等保濕因子具有優(yōu)良的正協(xié)同作用，起到保護hegf生物活性、提高hegf透滲性和有利皮膚吸收hegf的作用。甘草精能有效鎮(zhèn)靜神經(jīng)系統(tǒng)增強免疫力，迅速舒緩過敏癥狀，超強滲透力，保濕除皺，補水嫩白，修護受損細胞抗老化，增強肌膚彈性；在美白方面，以β葡聚糖抗氧化、抗輻射的作用，配合sod，石斛堿、石斛多糖等成分去自由基，抗氧化的作用，在加以α-熊果苷和神經(jīng)酰胺抑制絡(luò)氨酸酶合成黑色素，筑起了不僅內(nèi)外兼具，而且美白皆預(yù)防不反彈的堅固堡壘。

同時，本發(fā)明中還提供了一種上述化妝品中石斛多糖以及石斛堿醇質(zhì)體的制備方法，其包括以下步驟：

a、將石斛進行剪碎，并浸入無水乙醇溶劑中；其中，上述料液體積比為1:20；

b、將步驟a中制得的混合物放入閃式提取器中進行提取，在3500r/min的轉(zhuǎn)速下閃提4次，每次閃提30s，每兩次閃提操作之間間隔1min，4攝氏度低溫高速離心，離心轉(zhuǎn)速為4000r/min，離心用時20min；后加水浸沒沉淀，真空抽濾，反復(fù)用蒸餾水沖洗直至洗凈沉淀，得石斛殘渣；

c、將步驟b中制得的石斛殘渣用重量比為50倍的水進行稀釋，同步按體積百分比為1%的比例加入纖維素酶，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph至5.0，60℃下酶解1.5h；酶解完成后，真空過濾，反復(fù)用蒸餾水沖洗直至洗凈沉淀，得石斛殘渣；

d、將步驟c中制得的石斛殘渣在真空干燥箱中進行干燥，干燥完成后加入氨水及1mol/l的naoh溶液進行堿化，以1∶3的體積比加入丙酮，回流6h進行脫脂后過濾，用氯仿溶液提取石斛殘渣中的石斛堿，提取完成后，上述石斛堿在水浴鍋中將氯仿蒸干，后加入甲醇溶解，離心取沉淀，干燥；

e、合并步驟b與步驟c中通過真空抽濾所得的濾液，加入體積百分比為80%的無水乙醇靜置過夜，離心即得石斛多糖；

f、將步驟d制得的石斛堿、卵磷脂加入無水乙醇中，要求卵磷脂含量的體積百分比為0.8%或者1.5%亦或者3%，相對應(yīng)的石斛堿/卵磷脂的質(zhì)量比值為1/1.5或者1/5亦或者1/10，相對應(yīng)的無水乙醇含量的體積百分比為20%或者30%亦或者40%，在密閉室溫條件下對上述混合物以700r/min轉(zhuǎn)速進行攪拌，并將其緩慢注入到ph7.4的pbs溶液中，加完后攪拌5min；再在4℃低溫條件下采用探頭式超聲儀對上述混合物進行超聲處理5min，整個超聲處理過程中單次累計超聲處理用時達到5s便停5s，以此反復(fù)，探頭式超聲儀的工作功率為200w；最后，將上述混合物過0.45μm微孔濾膜，即得石斛堿醇質(zhì)體。

上述中所提供的一種石斛多糖與石斛堿醇質(zhì)體的制備方法，其基于鐵皮石斛原料中存在豐富的纖維素，及其所含有效活性成分石斛多糖與石斛堿等在長時間高溫下加熱易被破壞的特性，采用了纖維素酶解-閃式提取工藝來提取其有效成分，以達到高效且有效的保留其活性成分的目的。

為了使得藥物能夠被完好無損地輸送至不同的皮膚組織和細胞，以脂質(zhì)體包封率和囊泡粒徑作為評價石斛堿醇質(zhì)體的主要指標(biāo)得最優(yōu)技術(shù)方案，上述步驟f中卵磷脂含量的體積百分比為1.5﹪、石斛堿/卵磷脂質(zhì)量比值為1/10、無水乙醇含量的體積百分比為30%。通過紫外法測定上述優(yōu)選技術(shù)方案制備的石斛堿醇質(zhì)體，其脂質(zhì)體包封率為：（56.25±0.07）%，透射電鏡圖片呈現(xiàn)圓球形，石斛堿醇質(zhì)體的粒徑分布緊密，平均粒徑167.58nm。

本發(fā)明得到的一種化妝品，其在人體皮膚上使用后，具有抗紫外線抗氧化，同時具備美白淡斑效果，并且純天然、無刺激；同時，本發(fā)明中所記載的一種石斛多糖與石斛堿醇質(zhì)體的制備方法，其工藝具備高效性，且能夠有效的保留石斛多糖以及石斛堿醇質(zhì)體中的活性成分；最后，本發(fā)明所得到的化妝品的開發(fā)，滿足了當(dāng)前美容市場的需要，促進鐵皮石斛從育苗-栽種-終端產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)鏈的拓展，加強鐵皮石斛藥材更好的綜合利用，推廣發(fā)然藥物在功效化妝品領(lǐng)域中的應(yīng)用。

具體實施方式

下面通過實施例對本發(fā)明作進一步的描述。

實施例1：

本實施例中所提供的一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖20%、甘油10%、神經(jīng)酰胺1%、超純水64%、石斛堿醇質(zhì)體0.3%、天然維生素e2%、全反式白藜蘆醇1%、維生素c棕櫚酸酯0.5%、α-熊果苷0.5%、植物精油0.7%。

本實施例中還提供了一種上述化妝品中石斛多糖以及石斛堿醇質(zhì)體的制備方法，其包括以下步驟：

a、將石斛進行剪碎，其單位體積為10㎝³，并浸入200㎝³的無水乙醇溶劑中；

b、將步驟a中制得的混合物放入閃式提取器中進行提取，在3500r/min的轉(zhuǎn)速下閃提4次，每次閃提30s，每兩次閃提操作之間間隔1min，4攝氏度低溫高速離心，離心轉(zhuǎn)速為4000r/min，離心用時20min；后加水浸沒沉淀，真空抽濾，反復(fù)用蒸餾水沖洗直至洗凈沉淀，得石斛殘渣；

c、將步驟b中制得的石斛殘渣用重量比為50倍的水進行稀釋，同步按體積百分比為1%的比例加入纖維素酶，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph至5.0，60℃下酶解1.5h；酶解完成后，真空過濾，反復(fù)用蒸餾水沖洗直至洗凈沉淀，得石斛殘渣；

d、將步驟c中制得的石斛殘渣在真空干燥箱中進行干燥，干燥完成后加入氨水及1mol/l的naoh溶液進行堿化，以1∶3的體積比加入丙酮，回流6h進行脫脂后過濾，用氯仿溶液提取石斛殘渣中的石斛堿，提取完成后，上述石斛堿在水浴鍋中將氯仿蒸干，后加入甲醇溶解，離心取沉淀，干燥；

e、合并步驟b與步驟c中通過真空抽濾所得的濾液，加入體積百分比為80%的無水乙醇靜置過夜，離心即得石斛多糖；

f、將步驟d制得的石斛堿、卵磷脂加入無水乙醇中，要求卵磷脂含量的體積百分比為0.8%，相對應(yīng)的石斛堿/卵磷脂質(zhì)量比值為1/1.5，相對應(yīng)的無水乙醇含量的體積百分比為20%，在密閉室溫條件下對上述混合物以700r/min轉(zhuǎn)速進行攪拌，并將其緩慢注入到ph7.4的pbs溶液中，加完后攪拌5min；再在4℃低溫條件下采用探頭式超聲儀對上述混合物進行超聲處理5min，整個超聲處理過程中單次累計超聲處理用時達到5s便停5s，以此反復(fù)，探頭式超聲儀的工作功率為200w；最后，將上述混合物過0.45μm微孔濾膜，即得石斛堿醇質(zhì)體。

參考qb/t2660-2004化妝水的標(biāo)準(zhǔn)進行各項指標(biāo)檢測，實驗結(jié)果表明所制鐵皮石斛精華液符合標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)該產(chǎn)品的具體特性，擬定如下質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：

精華液制備完成后，參照化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)gb7916、化妝品衛(wèi)生化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法gb7917、化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法gb7918以及化妝品安全性評價程序和方法gb7919對所制作精華液進行評價。采用硫酸-苯酚法測定精華液中多糖含量，酸性染料比色法測定石斛堿含量，并在電子顯微鏡下觀察石斛堿醇質(zhì)體形狀，利用黏度計測定其黏度，同時利用orac（氧化自由基吸收能力）評價其抗氧化能力，結(jié)合其他感官理化指標(biāo)對所制備的精華液進行質(zhì)量評價。分析數(shù)據(jù)表明，所制備精華液外觀良好，質(zhì)量符合標(biāo)準(zhǔn)。

實施例2：

本實施例中所提供的一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖35%、甘油15%、神經(jīng)酰胺2%、超純水42%、石斛堿醇質(zhì)體1%、天然維生素e2%、全反式白藜蘆醇1%、維生素c棕櫚酸酯0.5%、α-熊果苷0.5%、植物精油1%。

本實施例中還提供了一種上述化妝品中石斛多糖以及石斛堿醇質(zhì)體的制備方法，其大體步驟與實施例1相一致，但是，本實施例中所述步驟f中卵磷脂含量的體積百分比為1.5﹪、石斛堿/卵磷脂質(zhì)量比值為1/10、無水乙醇含量的體積百分比為30%。

參考qb/t2660-2004化妝水的標(biāo)準(zhǔn)進行各項指標(biāo)檢測，實驗結(jié)果表明所制鐵皮石斛精華液符合標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)該產(chǎn)品的具體特性，擬定如下質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：

精華液制備完成后，參照化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)gb7916、化妝品衛(wèi)生化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法gb7917、化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法gb7918以及化妝品安全性評價程序和方法gb7919對所制作精華液進行評價。采用硫酸-苯酚法測定精華液中多糖含量，酸性染料比色法測定石斛堿含量，并在電子顯微鏡下觀察石斛堿醇質(zhì)體形狀，利用黏度計測定其黏度，同時利用orac（氧化自由基吸收能力）評價其抗氧化能力，結(jié)合其他感官理化指標(biāo)對所制備的精華液進行質(zhì)量評價。分析數(shù)據(jù)表明，所制備精華液外觀良好，質(zhì)量符合標(biāo)準(zhǔn)。

實施例3：

本實施例中所提供的一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖20%、甘油10%、神經(jīng)酰胺1%、磁化超純水40%、石斛堿醇質(zhì)體0.3%、天然維生素e1%、hegf3%、甘草精5%、α-熊果苷1%、植物精油1%、透明質(zhì)酸1%、維生素p和維生素b3復(fù)合物1.095%、絲氨酸2%、橄欖油1%、角鯊烯1%、α亞麻酸3%、β葡聚糖2%、sod5%、內(nèi)皮素拮抗劑1%、尿囊素0.6%、三乙醇胺與檸檬酸0.005%。

本實施例中還提供了一種上述化妝品中石斛多糖以及石斛堿醇質(zhì)體的制備方法，其大體步驟與實施例1相一致，但是，本實施例中所述步驟f中卵磷脂含量的體積百分比為3﹪、石斛堿/卵磷脂質(zhì)量比值為1/5、無水乙醇含量的體積百分比為40%。

參考qb/t2660-2004化妝水的標(biāo)準(zhǔn)進行各項指標(biāo)檢測，實驗結(jié)果表明所制鐵皮石斛精華液符合標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)該產(chǎn)品的具體特性，擬定如下質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：

精華液制備完成后，參照化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)gb7916、化妝品衛(wèi)生化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法gb7917、化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法gb7918以及化妝品安全性評價程序和方法gb7919對所制作精華液進行評價。采用硫酸-苯酚法測定精華液中多糖含量，酸性染料比色法測定石斛堿含量，并在電子顯微鏡下觀察石斛堿醇質(zhì)體形狀，利用黏度計測定其黏度，同時利用orac（氧化自由基吸收能力）評價其抗氧化能力，結(jié)合其他感官理化指標(biāo)對所制備的精華液進行質(zhì)量評價。分析數(shù)據(jù)表明，所制備精華液外觀良好，質(zhì)量符合標(biāo)準(zhǔn)。

實施例4：

本實施例中所提供的一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖30%、甘油15%、神經(jīng)酰胺1%、磁化超純水50%、石斛堿醇質(zhì)體0.3%、天然維生素e0.1%、hegf0.5%、甘草精0.54%、α-熊果苷0.1%、植物精油0.1%、透明質(zhì)酸0.1%、維生素p和維生素b3復(fù)合物0.1%、絲氨酸0.2%、橄欖油0.1%、角鯊烯0.1%、α亞麻酸0.3%、β葡聚糖0.2%、sod0.5%、內(nèi)皮素拮抗劑0.2%、尿囊素0.55%、三乙醇胺與檸檬酸0.01%。

本實施例中所提供了一種上述化妝品中石斛多糖以及石斛堿醇質(zhì)體的制備方法，其與實施例3相一致。

參考qb/t2660-2004化妝水的標(biāo)準(zhǔn)進行各項指標(biāo)檢測，實驗結(jié)果表明所制鐵皮石斛精華液符合標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)該產(chǎn)品的具體特性，擬定如下質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：

精華液制備完成后，參照化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)gb7916、化妝品衛(wèi)生化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法gb7917、化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法gb7918以及化妝品安全性評價程序和方法gb7919對所制作精華液進行評價。采用硫酸-苯酚法測定精華液中多糖含量，酸性染料比色法測定石斛堿含量，并在電子顯微鏡下觀察石斛堿醇質(zhì)體形狀，利用黏度計測定其黏度，同時利用orac（氧化自由基吸收能力）評價其抗氧化能力，結(jié)合其他感官理化指標(biāo)對所制備的精華液進行質(zhì)量評價。分析數(shù)據(jù)表明，所制備精華液外觀良好，質(zhì)量符合標(biāo)準(zhǔn)。