專(zhuān)利名稱(chēng)：：能結(jié)合胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素的抗原結(jié)合蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的領(lǐng)域涉及包括能結(jié)合人類(lèi)胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素的抗體的抗原結(jié)合蛋白組合物以及相關(guān)方法。
背景技術(shù)：
：近年來(lái)尤其在發(fā)達(dá)國(guó)家，諸如哮喘、過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、和食物過(guò)敏等過(guò)敏性疾病的發(fā)病率似乎在逐漸升高，受其影響的人群比例逐漸增大(凱(Kay)，新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志(NEngl.J.Med.)344:30-37(2001))。胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)是響應(yīng)促炎癥刺激而產(chǎn)生的上皮細(xì)胞衍生的細(xì)胞因子。已發(fā)現(xiàn)，TSLP主要通過(guò)其對(duì)樹(shù)突細(xì)胞和肥大細(xì)胞的活性來(lái)促進(jìn)過(guò)敏性炎癥反應(yīng)(索梅里斯(Soumelis)等人，自然免疫(NatImmun)3(7)673-680(2002)；阿拉沃迪(Allakhverdi)等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(J.Exp.Med.)204(2)253-258(2007))。已報(bào)導(dǎo)，人類(lèi)TSLP表達(dá)在哮喘氣道中增強(qiáng)，此與疾病嚴(yán)重度有關(guān)(英(Ying)等人，免疫學(xué)雜志(J.Immunol.)174=8183-8190(2005))0此外，在哮喘患者和患有過(guò)敏性病癥的其它患者的濃縮支氣管肺泡灌洗(BAL)液中，TSLP蛋白水平是可檢測(cè)的。同樣，在特應(yīng)性皮炎(AD)患者的損傷皮膚中發(fā)現(xiàn)TSLP蛋白和mRNA的水平升高。因此，TSLP拮抗劑應(yīng)可用于治療炎癥性病癥。此外，也已發(fā)現(xiàn)TSLP可促進(jìn)纖維化，如美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)案第11/344，379號(hào)所報(bào)導(dǎo)。在組織修復(fù)過(guò)程期間，如果纖維化階段繼續(xù)不受抑制地進(jìn)展，則纖維化疾病的結(jié)果會(huì)導(dǎo)致廣泛組織重塑和永久性瘢痕組織的形成(韋恩(Wyrm)，自然免疫學(xué)評(píng)論(NatureRev.Immunol.)4，583(2004))。據(jù)估計(jì)，在美國(guó)高達(dá)45%的死亡可歸因于纖維增生性疾病，其可影響許多組織和器官系統(tǒng)(韋恩，如前所述，595(2004))。當(dāng)前，由于在許多持續(xù)性炎癥疾病(例如特發(fā)性肺纖維化、進(jìn)行性腎病、和肝硬化)中普遍存在纖維化，所以使用消炎藥來(lái)治療纖維化病癥。然而，纖維化調(diào)節(jié)中所涉及的機(jī)制似乎與炎癥不同，并且消炎療法在降低或預(yù)防纖維化中并非總是有效(韋恩，如前所述)。因此，仍然需要研發(fā)可降低和預(yù)防纖維化的藥物。因此，預(yù)期TSLP的拮抗劑可用于治療這些炎癥和纖維化病癥。本發(fā)明提供所述藥物和治療方法。
發(fā)明內(nèi)容在一方面中，本發(fā)明提供經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其包含a.選自以下的輕鏈⑶R3序列i.輕鏈⑶R3序列，其與選自由Al至A27的輕鏈⑶R3序列組成的群組的⑶R3序列的差異總計(jì)不超過(guò)兩個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.QQAX8SFPLT(SEQIDNO251)；和b.選自以下的重鏈⑶R3序列i.重鏈⑶R3序列，其與選自由Al至A27的重鏈⑶R3序列組成的群組的CDR3序列的差異總計(jì)不超過(guò)三個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.GGGIX12VADYYX13YGMDV(SEQIDNO255)；iii.DX21GX22SGffPLFX23Y(SEQIDNO259)；其中X8是N殘基或D殘基；知是？殘基或A殘基；&3是￥殘基或F殘基；^是6殘基或R殘基；X22是S殘基或T殘基；X23是A殘基或D殘基，并且其中所述抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合TSLP。在另一方面中，本發(fā)明經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白另外包含以下中的至少一者a.選自以下的輕鏈⑶Rl序列i.輕鏈⑶Rl序列，其與A1-A27的輕鏈⑶Rl序列的差異不超過(guò)三個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.Rssqslx1Ysdgx2TYlmseqidno246)；iii.RASQX4X5SSffLA(SEQIDNO249)；b.選自以下的輕鏈CDR2序列i.輕鏈CDR2序列，其與A1-A27的CDR2序列的差異不超過(guò)兩個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.KVSX3(SEQIDNO247的殘基1-4)；iii.X6X7SSLQS(SEQIDNO250)；或iv.QDX9KRPS(SEQIDNO252)；和c.選自以下的重鏈CDRl序列i.重鏈CDRl序列，其與A1-A27的⑶Rl序列的差異不超過(guò)兩個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.X10YGMH(SEQIDNO253)；和iii.X15X16YMX17(SEQIDNO257)；和d.選自以下的重鏈CDR2序列i.重鏈⑶R2序列，其與A1-A27的⑶R2序列的差異不超過(guò)三個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.VIffX11DGSNKYYADSVKG(SEQIDNO254)；iii.VISYDGSX14KYYADSVKG(SEQIDNO256)；禾口iv.winpnsggtnx18x19x20kfqg(seqidno258)；其中X1是ν殘基或ι殘基；X2是ν殘基或D殘基；X3是Y殘基或N殘基；X4是6殘基或S殘基；X5是L殘基或I殘基；X6是N殘基或T殘基；Χ7是T殘基或A殘基；Χ9是K殘基或N殘基；Xltl是S殘基或N殘基；X11是Y殘基或F殘基；X14是Y殘基或N殘基；X15是D殘基或G殘基；X16是Y殘基或D殘基；X17是Y殘基或H殘基；X18是Y殘基或H殘基；X19是V殘基或A殘基；X2tl是Q殘基或R殘基，并且其中所述抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合TSLP。在本發(fā)明的另一方面中，技術(shù)方案1的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白包含以下中的任一者a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含i.選自A1-A27的輕鏈⑶Rl序列；ii選自A1-A27的輕鏈⑶R2序列；iii.選自A1-A27的輕鏈⑶R3序列；或b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含i.選自A1-A27的重鏈CDRl序列；ii.選自A1-A27的重鏈CDR2序列和iii.選自A1-A27的重鏈CDR3序列；或c.(a)中的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)中的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一方面中，經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白包含以下中的任一者a.選自以下的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列i.具有至少80%與選自L1-L27的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列相同的序列的氨基酸；ii.由至少80%與編碼L1-L27的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列相同的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；iii.由在中等嚴(yán)格條件下可與由L1-L27輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的補(bǔ)體雜交的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；b.選自以下的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列i.至少80%與H1-H27的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列相同的氨基酸序列；ii.由至少80%與編碼H1-H27的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列相同的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；iii.由在中等嚴(yán)格條件下可與由H1-H27重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的補(bǔ)體雜交的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c.(a)中的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)中的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合TSLP。在另一方面中，本發(fā)明經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白包含以下中的任一者a.選自L1-L27的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列；b.選自H1-H27的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列；或c.(a)中的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)中的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合TSLP。在另一方面中，經(jīng)分離結(jié)合蛋白包含選自以下的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13.1H13、L13.2H13、L14.1H14、L14.2H14、L15.1H15、L15.2H15、L16.1H16、L16.2H16、L17H17、L18.1H18、L18.2H18、L19.1H19、L19.2H19、L20.1H20、L20.2H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、和L27H27。在另一方面中，經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白包含結(jié)合TSLP的結(jié)合蛋白，其與選自A2、A3、A4和A5的參照抗體具有實(shí)質(zhì)上相同的Kd。在另一方面中，經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白包含根據(jù)原代細(xì)胞OPG分析可抑制TSLP活性的結(jié)合蛋白，其與選自A2、A3、A4或A5的參照抗體具有相同IC50。在又一方面中，經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白與參照抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合TSLP。在另一方面中，經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白結(jié)合與參照抗體相同的表位，例如A2、A4、A5、A6、A7、A10、A21、A23、或A26。在一方面中，經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白選自人類(lèi)抗體、人類(lèi)化抗體、嵌合抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、抗原結(jié)合抗體片段、單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、Fab片段、F(fa’)X片段、結(jié)構(gòu)域抗體、IgD抗體、IgE抗體、和IgM抗體、和IgGl抗體、和IgG2抗體、和IgG3抗體、和IgG4抗體，并且IgG4抗體在鉸鏈區(qū)中具有至少一個(gè)突變，此可緩和形成H鏈內(nèi)二硫鍵的趨勢(shì)。在一方面中，經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白是人類(lèi)抗體。本發(fā)明也提供經(jīng)分離核酸分子，其包含編碼本發(fā)明抗原結(jié)合劑的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域、重鏈可變結(jié)構(gòu)域或二者的多核苷酸序列。在一實(shí)施例中，多核苷酸包含輕鏈可變序列L1-L27和/或重鏈可變序列H1-H27、或二者。本發(fā)明也提供包含本發(fā)明多核苷酸的載體。在一實(shí)施例中載體是表達(dá)載體。本發(fā)明也提供包含載體的宿主細(xì)胞。本發(fā)明也提供能產(chǎn)生本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白的雜交瘤。本發(fā)明也提供制備抗原結(jié)合蛋白的方法，其包含在使宿主細(xì)胞可表達(dá)抗原結(jié)合蛋白的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞。本發(fā)明也提供包含本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白的醫(yī)藥組合物。在一實(shí)施例中醫(yī)藥組合物包含人類(lèi)抗體。本發(fā)明也提供在需要治療的個(gè)體中治療TSLP相關(guān)炎癥病況的方法，其包含向所述個(gè)體投與治療有效量的所述組合物。在一實(shí)施例中，炎癥病況是過(guò)敏性哮喘、過(guò)敏性鼻竇炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎、或特應(yīng)性皮炎。本發(fā)明也提供在有需要的個(gè)體中治療TSLP相關(guān)纖維化病癥的方法，其包含向所述個(gè)體投與治療有效量的所述組合物。在一實(shí)施例中，纖維化病癥是硬皮癥、間質(zhì)性肺病、特發(fā)性肺纖維化、B型或C型慢性肝炎引發(fā)的纖維化、輻射誘發(fā)的纖維化、和傷口愈合引發(fā)的纖維化。圖IA-圖1F.所述圖提供A1-A27的輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)的氨基酸序列。另外提供編碼各CDR的實(shí)例性核苷酸序列。圖2A-圖2F.所述圖提供A1-A27的重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)的氨基酸序列。另外提供編碼各CDR的實(shí)例性核苷酸序列。具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及抗原結(jié)合劑，其包括特異性結(jié)合細(xì)胞因子人類(lèi)胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包括可抑制TSLP結(jié)合和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗原結(jié)合蛋白，例如拮抗劑性TSLP抗體、抗體片段、和抗體衍生物。所述抗原結(jié)合劑可用于抑制或阻斷TSLP與其受體的結(jié)合，并且可用于治療炎癥疾病、纖維化疾病、和其它相關(guān)病況。本發(fā)明另外提供與結(jié)合TSLP的抗原結(jié)合蛋白相關(guān)的組合物、試劑盒、和方法。也提供核酸分子和其衍生物和片段，其包含編碼所有或部分結(jié)合TSLP的多肽的多核苷酸序列，例如編碼所有或部分抗TSLP抗體、抗體片段或抗體衍生物的核酸。本發(fā)明另外提供包含所述核酸的載體和質(zhì)粒，以及包含所述核酸和/或載體和質(zhì)粒的細(xì)胞和細(xì)胞系。所提供方法包括(例如)制備、鑒定、或分離結(jié)合人類(lèi)TSLP的抗原結(jié)合蛋白(例如抗TSLP抗體)的方法、確定抗原結(jié)合蛋白是否結(jié)合TSLP的方法、制備包含結(jié)合TSLP的抗原結(jié)合蛋白的組合物的方法(例如醫(yī)藥組合物)、以及向個(gè)體投與結(jié)合TSLP的抗原結(jié)合蛋白的方法，例如治療TSLP所介導(dǎo)病況的方法、和在體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)與TSLP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的生物活性的方法。TSLP胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)是指四α-螺旋束I型細(xì)胞因子，其為IL_2家族的成員但與IL-7的關(guān)聯(lián)最為緊密。細(xì)胞因子是響應(yīng)某些刺激而分泌的低分子量調(diào)節(jié)蛋白，其作用于靶細(xì)胞中膜上的受體。細(xì)胞因子調(diào)節(jié)多種細(xì)胞反應(yīng)。細(xì)胞因子概述于參考文獻(xiàn)中，例如細(xì)胞因子(Cytokines)，Α.邁爾-露沙(A.Mire-Sluis)和R.索恩(R.Thorne)編輯，學(xué)術(shù)出版社(AcademicPress)，紐約，(1998)。TSLP最初是自鼠類(lèi)胸腺基質(zhì)細(xì)胞系克隆(西姆斯(Sims)等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，192(5)，671-680(2000))，并且發(fā)現(xiàn)其支持早期B細(xì)胞和T細(xì)胞發(fā)育。隨后克隆人類(lèi)TSLP，并且發(fā)現(xiàn)其氨基酸序列與鼠類(lèi)同系物具有43%—致性(昆特密爾(Quentmeier)等人，白血病(Leukemia)15，1286-1292(2001)，和美國(guó)專(zhuān)利第6，555，520號(hào)，其是以引用方式并入本文中)。人類(lèi)TSLP的多核苷酸和氨基酸序列分別展示于SEQIDNO:1和2中。人們發(fā)現(xiàn)TSLP以低親和性與稱(chēng)作TSLP受體(TSLPR)的血細(xì)胞生成素受體家族中的受體鏈結(jié)合，此闡述于美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)案第09/895，945號(hào)(公開(kāi)案第2002/0068323號(hào))中(SEQIDNO:3和4)。編碼人類(lèi)TSUR的多核苷酸序列相應(yīng)地顯示為本申請(qǐng)案中的SEQIDNO:3，并且氨基酸序列相應(yīng)地顯示為本申請(qǐng)案中的SEQIDNO:4。TSLPR的可溶性結(jié)構(gòu)域大致為SEQIDNO:4中的氨基酸25至231。TSLP以高親和性結(jié)合TSUR與白介素7受體aIL_7Ra的異二聚體復(fù)合物(帕克(Park)等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，1925(2000)；美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)案第09/895，945號(hào)，公開(kāi)案第U.S.2002/0068323號(hào))。IL-7受體α的序列展示于美國(guó)專(zhuān)利第5，264，416號(hào)的圖2中，其是以引用方式并入本文中。IL-7受體α的可溶性結(jié)構(gòu)域的序列為美國(guó)專(zhuān)利第5，264，416號(hào)中圖2中的氨基酸1至219。本文所用術(shù)語(yǔ)“TSLP多肽”是指可用作免疫原的各種形式的TSLP。這些多肽包括以經(jīng)修飾形式表達(dá)的TSLP，其中已通過(guò)修飾氨基酸序列移除了弗林蛋白酶(furin)裂解位點(diǎn)，如PCT專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)案WO03/032898中所述。經(jīng)修飾TSLP仍保持活性，但在諸如CHO細(xì)胞等哺乳動(dòng)物細(xì)胞中全長(zhǎng)序列更容易表達(dá)。TSLP多肽的實(shí)例包括SEQIDN0:2、SEQIDNO373和SEQIDNO:375。此外，已鑒定短尾猴TSLP并且展示于下文實(shí)例1中并且展示于(例如)SEQIDNO380中。TSLP是在人類(lèi)上皮細(xì)胞(包括皮膚、支氣管、氣管、和氣道上皮細(xì)胞)、角質(zhì)形成細(xì)胞、基質(zhì)和肥大細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、以及肺成纖維細(xì)胞和真皮成纖維細(xì)胞中產(chǎn)生，如通過(guò)定量mRNA分析所確定(索梅里斯等人，自然免疫學(xué)3(7)673-680(2002))。鼠類(lèi)和人類(lèi)TSLP二者都參與促進(jìn)過(guò)敏性炎癥。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>TSLP活件TSLP活性包括表達(dá)人類(lèi)TSLPR(BAF/HTR)的BAF細(xì)胞的增殖，如PCT專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)案WO03/032898中所述。BAF/HTR生物分析采用已經(jīng)人類(lèi)TSLP受體轉(zhuǎn)染的鼠類(lèi)原B淋巴細(xì)胞系。BAF/HTR細(xì)胞的生長(zhǎng)依賴(lài)于huTSLP，并且響應(yīng)測(cè)試樣品中所添加的活性huTSLP而增殖。在培育期后，通過(guò)添加阿爾瑪藍(lán)(AlamarBlue)I型染料或氘化胸苷來(lái)測(cè)量細(xì)胞增殖。增殖也可使用市售試劑盒來(lái)測(cè)量，例如CYQUANT細(xì)胞增殖分析試劑盒(英杰公司(Invitrogen))。關(guān)于huTSLP活性的其它分析包括(例如)測(cè)量通過(guò)TSLP自人類(lèi)骨髓誘導(dǎo)T細(xì)胞生長(zhǎng)的分析，如美國(guó)專(zhuān)利第6，555，520號(hào)中所述。另一TSLP活性是活化STAT5的能力，如參考文獻(xiàn)萊文(Levin)等人，免疫學(xué)雜志162:677_683(1999)和PCT專(zhuān)利申請(qǐng)案WO03/032898中所述。其它分析包括TSLP自原代人類(lèi)單核細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞誘導(dǎo)CCL17/TARC產(chǎn)生，如美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)案第2006/0039910號(hào)(專(zhuān)利號(hào)11/205，909)中所述。下文實(shí)例中闡述可用于測(cè)量TSLP活性的細(xì)胞基分析。這些分析包括上述BAF細(xì)胞增殖分析，以及下文所述測(cè)量TSLP自原代人類(lèi)樹(shù)突細(xì)胞誘導(dǎo)骨保護(hù)素(OPG)產(chǎn)生的原代細(xì)胞分析，以及同樣闡述于下文中的短尾猴外周血單核細(xì)胞分析。TSLP活性另外包括體內(nèi)活性。這些活性可在小鼠模型中測(cè)量，例如周(Zhou)等人，自然免疫6(10)，1047-1053(2005)和余(Yoo)等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志202(4)，541-549(2005)中所述者。例如，顯示在卵蛋白-哮喘模型中抗鼠類(lèi)TSLP抗體可降低BALF的細(xì)胞性和BALF中的IL-5和IL-13水平(周等人)。使用標(biāo)準(zhǔn)單字母或三字母縮寫(xiě)來(lái)表示多核苷酸和多肽序列。除非另外說(shuō)明，否則多肽序列的氨基末端位于左側(cè)并且其羧基末端位于右側(cè)，并且單鏈核酸序列和雙鏈核酸序列的頂鏈的5’末端位于左側(cè)并且其3’末端位于右側(cè)。也可通過(guò)闡釋特定多肽或多核苷酸序列與參照序列的差異來(lái)描述所述特定序列。特定輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多核苷酸和多肽序列，Ll(“輕鏈可變結(jié)構(gòu)域1”)、Hl(“重鏈可變結(jié)構(gòu)域1”)等。通過(guò)組合輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的名稱(chēng)與重鏈可變結(jié)構(gòu)域的名稱(chēng)來(lái)表示包含輕鏈和重鏈的抗體。例如，“L4H7”表示包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域L4和重鏈可變結(jié)構(gòu)域H7的抗體。除非本文另外定義，否則結(jié)合本發(fā)明所用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)具有所屬領(lǐng)域技術(shù)人員通常所了解的含義。此外，除非上下文另有需求，否則單數(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)包括復(fù)數(shù)含義并且復(fù)數(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)包括單數(shù)含義。一般來(lái)說(shuō)，用于本文所述細(xì)胞和組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)、以及蛋白質(zhì)和核酸化學(xué)以及雜交的術(shù)語(yǔ)和技術(shù)是業(yè)內(nèi)熟知并且常用的術(shù)語(yǔ)。除非另有說(shuō)明，否則本發(fā)明方法及技術(shù)一般是根據(jù)業(yè)內(nèi)熟知的習(xí)用方法并且如本發(fā)明說(shuō)明書(shū)中各處引用和論述的各種一般和更具體的參考文獻(xiàn)中所述來(lái)實(shí)施。例如，參見(jiàn)薩姆布魯克(Sambrook)等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(MolecularCloning:ALaboratoryManual)，第二版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress)，冷泉港，N.Y.(1989)和奧斯貝(Ausubel)等人，當(dāng)前分子生物學(xué)規(guī)程(CurrentProtocolsinMolecularBiology)，格林聯(lián)合出版社(GreenePublishingAssociates)(1992)，以及哈洛(Harlow)和萊恩(Lane)，抗體實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(Antibodies=ALaboratoryManual)，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社，冷泉港，N.Y.(1990)，所述文獻(xiàn)是以引用方式并入本文中。酶促反應(yīng)和純化技術(shù)是根據(jù)制造商說(shuō)明書(shū)來(lái)實(shí)施，或以業(yè)內(nèi)習(xí)用方法來(lái)實(shí)施，或如本文所述來(lái)實(shí)施。用于本文所述分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)、以及醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)的術(shù)語(yǔ)和實(shí)驗(yàn)室程序以及技術(shù)是業(yè)內(nèi)熟知并且常用者?；瘜W(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、調(diào)配和遞送、以及患者的治療可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。除非另外說(shuō)明，否則以下術(shù)語(yǔ)應(yīng)理解為具有以下含義術(shù)語(yǔ)“經(jīng)分離分子”(其中所述分子為(例如)多肽、多核苷酸或抗體)是在來(lái)源或衍生來(lái)源方面如下所述的分子(1)不結(jié)合在其天然狀態(tài)下與其共存的天然結(jié)合組份，(2)實(shí)質(zhì)上不含來(lái)自相同物種的其它分子，(3)由不同物種的細(xì)胞表達(dá)，或(4)在自然界中不存在。因此，化學(xué)合成的分子或在不同于天然來(lái)源細(xì)胞的細(xì)胞系統(tǒng)中合成的分子與其天然結(jié)合組份相“分離”。也可通過(guò)使用業(yè)內(nèi)熟知的純化技術(shù)實(shí)施分離來(lái)使分子實(shí)質(zhì)上不含天然結(jié)合組份。分子的純度或同質(zhì)性可通過(guò)多種業(yè)內(nèi)熟知的方式來(lái)分析。例如，可通過(guò)使用聚丙烯酰胺凝膠電泳以及使用業(yè)內(nèi)熟知技術(shù)將凝膠染色以使多肽顯影來(lái)分析多肽樣品的純度。對(duì)于某些目的，可通過(guò)使用HPLC或業(yè)內(nèi)熟知的其它純化方式來(lái)提供較高分辨率。術(shù)語(yǔ)“TSLP抑制劑”與“TSLP拮抗劑”可互換使用。其各自指以可檢測(cè)程度抑制TSLP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子。只要使用分析可檢測(cè)，通過(guò)TSLP抑制劑引發(fā)的抑制不需要完成。例如，下文實(shí)例4中所述的細(xì)胞基分析闡述可用于測(cè)定TSLP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制的分析。術(shù)語(yǔ)“肽”、“多肽”和“蛋白質(zhì)”各自意指包含兩個(gè)或更多個(gè)通過(guò)肽鍵彼此連接的氨基酸殘基的分子。這些術(shù)語(yǔ)涵蓋(例如)天然和人工蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段和具有蛋白質(zhì)序列的多肽類(lèi)似物(例如突變蛋白質(zhì)、變體和融合蛋白)，以及以轉(zhuǎn)譯后方式或以其它方式共價(jià)或非共價(jià)修飾的蛋白質(zhì)。肽、多肽或蛋白質(zhì)可為單體或聚合物。.本文所用術(shù)語(yǔ)“多肽片段”是指與相應(yīng)全長(zhǎng)蛋白質(zhì)相比具有氨基末端和/或羧基末端缺失的多肽。片段長(zhǎng)度可為(例如)5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、50、70、80、90、100、150或200個(gè)氨基酸。片段長(zhǎng)度也可為(例如)至多1，000、750、500、250、200、175、150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11、或10個(gè)氨基酸。片段可在其一個(gè)或兩個(gè)末端另外包含一或多個(gè)額外氨基酸，例如來(lái)自不同天然存在蛋白的氨基酸序列(例如Fc或亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域)或人工氨基酸序列(例如人工連接體序列)。本發(fā)明多肽包括出于任何原因以任何方式修飾的多肽，例如為達(dá)成以下目的而修飾(1)降低對(duì)蛋白酶解的敏感性，(2)降低對(duì)氧化的敏感性，(3)改變形成蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)合親和性，(4)改變結(jié)合親和性，以及(4)賦予或修改其它物理化學(xué)特性或功能特性。類(lèi)似物包括多肽的突變蛋白質(zhì)。例如，可在天然存在序列中(例如在形成分子間連接的結(jié)構(gòu)域之外的多肽部分中)實(shí)施單或多氨基酸取代(例如保守的氨基酸取代)?！氨Ｊ氐陌被崛〈笔菍?shí)質(zhì)上不改變親代序列的結(jié)構(gòu)特征的取代(例如，替代氨基酸不應(yīng)傾向于斷裂親代序列中存在的螺旋或破壞作為親代序列的特征或親代序列的功能所必需的其它類(lèi)型的二級(jí)結(jié)構(gòu))。業(yè)內(nèi)公認(rèn)的多肽二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的實(shí)例闡述于蛋白質(zhì)、結(jié)構(gòu)和分子原理(Proteins,StructuresandMolecularPrinciples)(克雷頓(Creighton)編輯，弗里曼公司(W.H.FreemanandCompany)，紐約(1984))；蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)介(IntroductiontoProteinStructure)(C.布蘭登(C.Branden)和J.圖茲(J.Tooze)編輯，加蘭出版公司(GarlandPublishing)，紐約，N.Y.(1991))；和桑頓(Thornton)等人，自然(Nature)354105(1991)，所述文獻(xiàn)各自以引用方式并入本文中。多肽的“變體”包含氨基酸序列，其中使所述氨基酸序列相對(duì)于另一多肽序列發(fā)生一或多個(gè)氨基酸殘基的插入、缺失和/或取代。本發(fā)明變體包括融合蛋白。本文所述抗體的變體也包括處理所產(chǎn)生的變體。所述變體包括由于(例如)無(wú)效信號(hào)序列裂解而在輕鏈或重鏈的N-末端具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)額外氨基酸者。所述變體也應(yīng)包括自輕鏈或重鏈的N-末端或C-末端缺失一或多個(gè)氨基酸者。多肽的“衍生物”是通過(guò)(例如)與另一化學(xué)部分(例如聚乙二醇、白蛋白(例如人血清白蛋白))偶聯(lián)、磷酸化和糖基化而經(jīng)化學(xué)修飾的多肽(例如抗體)。除非另外說(shuō)明，否則術(shù)語(yǔ)“抗體”除包含兩個(gè)全長(zhǎng)重鏈和兩個(gè)全長(zhǎng)輕鏈的抗體外也包括其衍生物、變體、片段和突變蛋白質(zhì)，其實(shí)例闡述于下文中。本發(fā)明“抗原結(jié)合蛋白”是能結(jié)合抗原的蛋白質(zhì)和(任選地)骨架或框架部分，所述骨架或框架部分容許抗原結(jié)合部分采用可促進(jìn)抗原結(jié)合蛋白與抗原結(jié)合的構(gòu)象。在一實(shí)施例中，本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白包含至少一個(gè)CDR?？乖Y(jié)合蛋白的實(shí)例包括抗體、抗體片段(例如抗體的抗原結(jié)合部分)、抗體衍生物、和抗體類(lèi)似物?？乖Y(jié)合蛋白可包含(例如)具有移植CDR或CDR衍生物的替代性蛋白質(zhì)骨架或人工骨架。所述骨架包括(但不限于)包含經(jīng)引入突變以(例如)穩(wěn)定抗原結(jié)合蛋白的三維結(jié)構(gòu)的抗體衍生骨架，以及包含(例如)生物相容性聚合物的全合成骨架。例如，參見(jiàn)康道夫(Korndorfer)等人，2003，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，功能，禾口生物信息學(xué)(ProteinsStructure,Function,andBioinformatics),第53卷，第1期121-129；羅克(Roque)等人，2004，生物技術(shù)前瞻(Biotechnol.Prog.)20639-654。此外，可使用肽抗體模擬物(“PAM”)，以及基于采用纖維蛋白連接素組份作為骨架的抗體模擬物的骨架。例如，抗原結(jié)合蛋白可具有天然存在免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)。“免疫球蛋白”是四聚體分子。在天然存在免疫球蛋白中，每個(gè)四聚體是由兩對(duì)相同的多肽鏈組成，每對(duì)具有一個(gè)“輕”鏈(約25kDa)和一個(gè)“重”鏈(約50-70kDa)。各鏈的氨基末端部分包括主要負(fù)責(zé)抗原識(shí)別的具有約100至110或更多氨基酸的可變區(qū)。各鏈的羧基末端部分界定主要負(fù)責(zé)效應(yīng)子功能的恒定區(qū)。人類(lèi)輕鏈分類(lèi)為κ輕鏈和λ輕鏈。重鏈可分類(lèi)為μ、δ、Υ、α、或ε，并且將抗體同種型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgAjPIgE。在輕鏈和重鏈內(nèi)，可變區(qū)和恒定區(qū)是通過(guò)具有約12個(gè)或更多個(gè)氨基酸的“J”區(qū)連接，其中重鏈也包括具有約10個(gè)或更多個(gè)氨基酸的“D”區(qū)。一般參見(jiàn)功能免疫學(xué)(FundamentalImmunology)第7章(保羅，W.(Paul,W.)編輯，第二版，瑞文出版社(RavenPress),N.Y.(1989))(出于所有目的，其全部?jī)?nèi)容以引用方式并入本文中)。各輕鏈/重鏈對(duì)的可變區(qū)形成抗體結(jié)合位點(diǎn)，從而使完整免疫球蛋白具有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。天然存在免疫球蛋白鏈表現(xiàn)出具有通過(guò)三個(gè)超變區(qū)(也稱(chēng)為互補(bǔ)決定區(qū)或OTR)連接的相對(duì)保守的框架區(qū)(FR)的相同通用結(jié)構(gòu)。輕鏈和重鏈二者自N-末端至C-末端包含結(jié)構(gòu)域？附、0)11112、0)12113、0)13和FR4。氨基酸在各結(jié)構(gòu)域中的分配與以下文獻(xiàn)中的定義一致卡貝特(Kabat)等人，免疫蛋白序列(SequencesofProteinsofImmunologicalInterest)，第5版，美國(guó)衛(wèi)生和福利部(USDept.ofHealthandHumanServices)，PHS，NIH，NIH出版號(hào)91-3242，1991。完整抗體包括具有全長(zhǎng)重鏈和輕鏈的多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人類(lèi)化抗體或全人類(lèi)抗體。除非另外說(shuō)明，否則“抗體”是指完整免疫球蛋白或其可與完整抗體競(jìng)爭(zhēng)特異性結(jié)合的抗原結(jié)合部分。抗原結(jié)合部分可通過(guò)重組DNA技術(shù)或通過(guò)酶促或化學(xué)裂解完整抗體而產(chǎn)生?？乖Y(jié)合部分包括Fab、Fab，、F(ab，)2、Fd、Fv、和結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)、和互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、和至少含有免疫球蛋白中至少一部分的多肽，所述部分足以賦予所述多肽以特異性抗原結(jié)合能力。Fab片段是具有\(zhòng)、VH、(^和ChI結(jié)構(gòu)域的單價(jià)片段；F(ab’)2片段是具有兩個(gè)通過(guò)鉸鏈區(qū)的二硫鍵連接的Fab片段的二價(jià)片段；Fd片段具有Vh和ChI結(jié)構(gòu)域；Fv片段具有抗體單臂的\和Vh結(jié)構(gòu)域；并且dAb片段具有Vh結(jié)構(gòu)域、\結(jié)構(gòu)域、或Vh或\結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合片段(美國(guó)專(zhuān)利第6，846，634號(hào)、第6，696，245號(hào)、美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)案第05/0202512號(hào)、第04/0202995號(hào)、第04/0038291號(hào)、第04/0009507號(hào)、第03/0039958號(hào)，沃德(Ward)等人，自然341=544-546,1989)。單鏈抗體(scFv)是\和Vh區(qū)通過(guò)連接體(例如氨基酸殘基的合成序列)連接以形成連續(xù)蛋白質(zhì)鏈的抗體，其中所述連接體長(zhǎng)至足以容許所述蛋白質(zhì)鏈自身折疊并形成單價(jià)抗原結(jié)合位點(diǎn)(例如，參見(jiàn)伯德(Bird)等人，1988，科學(xué)(Science)242:423_26和休斯頓(Huston)等人，1988，美國(guó)科學(xué)院學(xué)報(bào)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)85:5879_83)。雙鏈抗體是包含兩個(gè)多肽鏈的二價(jià)抗體，其中各多肽鏈包含通過(guò)連接體連接的Vh和\結(jié)構(gòu)域，所述連接體過(guò)短從而使得兩個(gè)結(jié)構(gòu)域不能在同一鏈上配對(duì)，因此使得各結(jié)構(gòu)域可與位于另一多肽鏈上的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)(例如，參見(jiàn)霍利格(Holliger)等人，1993，美國(guó)科學(xué)院學(xué)報(bào)906444-48;和博亞克(Poljak)等人，1994，結(jié)構(gòu)(Structure)21121-23)如果雙鏈抗體中的兩個(gè)多肽鏈相同，則自其配對(duì)所得的雙鏈抗體將具有兩個(gè)相同抗原結(jié)合位點(diǎn)?？墒褂镁哂胁煌蛄械亩嚯逆渷?lái)制備具有兩個(gè)不同抗原結(jié)合位點(diǎn)的雙鏈抗體。類(lèi)似地，三鏈抗體和四鏈抗體是分別包含三個(gè)和四個(gè)多肽鏈并且分別形成三個(gè)和四個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體，所述多肽鏈和抗原結(jié)合位點(diǎn)可相同或不同?？墒褂靡韵挛墨I(xiàn)中所述的系統(tǒng)來(lái)鑒定給定抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)和框架區(qū)(FR)卡貝特等人，免疫蛋白序列，第5版，美國(guó)衛(wèi)生和福利部，PHS，NIH,NIH出版號(hào)91-3242,1991?？梢怨矁r(jià)或非共價(jià)方式將一或多個(gè)⑶R納入分子中以使其成為抗原結(jié)合蛋白?？乖Y(jié)合蛋白可納入CDR作為較大多肽鏈的一部分，可共價(jià)連接CDR與另一多肽鏈，或可以非共價(jià)方式納入CDR。所述CDR允許抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合特定目標(biāo)抗原?？乖Y(jié)合蛋白可具有一或多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。如果存在一個(gè)以上的結(jié)合位點(diǎn)，則所述結(jié)合位點(diǎn)可彼此相同或不同。例如，天然存在的人類(lèi)免疫球蛋白通常具有兩個(gè)相同的結(jié)合位點(diǎn)，而“雙特異性”或“雙功能性”抗體具有兩個(gè)不同結(jié)合位點(diǎn)。術(shù)語(yǔ)“人類(lèi)抗體”包括具有一或多個(gè)衍生自人類(lèi)免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的所有抗體。在一實(shí)施例中，所有可變和恒定結(jié)構(gòu)域都衍生自人類(lèi)免疫球蛋白序列(全人類(lèi)抗體)。這些抗體可以多種方式來(lái)制備，其實(shí)例闡述于下文中，包括通過(guò)用目標(biāo)抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫來(lái)制備，所述小鼠經(jīng)遺傳改性以表達(dá)衍生自人類(lèi)重鏈和/或輕鏈編碼基因的抗體。人類(lèi)化抗體序列與得自非人物種的抗體序列的差異在于一或多個(gè)氨基酸取代、缺失、和/或加入，從而使得在投與人類(lèi)個(gè)體時(shí)，人類(lèi)化抗體與非人物種抗體相比誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的可能性較低，和/或所誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的嚴(yán)重度較低。在一實(shí)施例中，非人物種抗體重鏈和/或輕鏈的框架結(jié)構(gòu)域和恒定結(jié)構(gòu)域中的某些氨基酸突變產(chǎn)生人類(lèi)化抗體。在另一實(shí)施例中，使來(lái)自人類(lèi)抗體的恒定結(jié)構(gòu)域與非人物種的可變結(jié)構(gòu)域融合。在另一實(shí)施例中，改變非人類(lèi)抗體一或多個(gè)CDR序列中的一或多個(gè)氨基酸殘基以在投與人類(lèi)個(gè)體時(shí)降低非人類(lèi)抗體可能的免疫原性，其中所改變氨基酸殘基并非所述抗體與其抗原進(jìn)行免疫特異性結(jié)合的關(guān)鍵氨基酸，或?qū)λ霭被嵝蛄袑?shí)施的改變是保守改變，從而使得人類(lèi)化抗體與抗原的結(jié)合不顯著弱于非人類(lèi)抗體與抗原的結(jié)合。如何形成人類(lèi)化抗體的實(shí)例可見(jiàn)于美國(guó)專(zhuān)利第6，054，297號(hào)、第5，886，152號(hào)和第5，877，293號(hào)。術(shù)語(yǔ)“嵌合抗體”是指含有一或多個(gè)來(lái)自一個(gè)抗體的區(qū)以及一或多個(gè)來(lái)自一或多個(gè)其它抗體的區(qū)的抗體。在一實(shí)施例中，一或多個(gè)CDR衍生自人類(lèi)抗TSLP抗體。在另一實(shí)施例中，所有CDR都衍生自人類(lèi)抗TSLP抗體。在另一實(shí)施例中，在嵌合抗體中混合并匹配來(lái)自不止一個(gè)人類(lèi)抗TSLP抗體的⑶R。例如，嵌合抗體可包含來(lái)自第一人類(lèi)抗TSLP抗體輕鏈的⑶R1，來(lái)自第二人類(lèi)抗TSLP抗體輕鏈的⑶R2和⑶R3，以及來(lái)自第三抗TSLP抗體重鏈的CDR。此外，框架區(qū)可衍生自一個(gè)相同抗TSLP抗體、一或多個(gè)不同抗體(例如人類(lèi)抗體)或人類(lèi)化抗體。在嵌合抗體的一實(shí)例中，重鏈和/或輕鏈的一部分與來(lái)自特定物種或?qū)儆谔囟贵w種類(lèi)或亞類(lèi)的抗體相同、同源、或衍生自所述抗體，同時(shí)所述鏈的其余部分與來(lái)自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w種類(lèi)或亞類(lèi)的抗體相同、同源、或衍生自所述抗體。也包括所述抗體中表現(xiàn)期望生物學(xué)活性(即特異性結(jié)合人類(lèi)TSLP受體的能力)的片段。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)本說(shuō)明書(shū)的教示使用業(yè)內(nèi)熟知的技術(shù)容易地制備抗體的片段或類(lèi)似物。片段或類(lèi)似物的優(yōu)選氨基和羧基末端存在于功能性結(jié)構(gòu)域的邊界附近?？赏ㄟ^(guò)比較核苷酸和/或氨基酸序列數(shù)據(jù)與公開(kāi)或?qū)＠行蛄袛?shù)據(jù)庫(kù)來(lái)鑒定結(jié)構(gòu)和功能結(jié)構(gòu)域?？墒褂秒娔X化比較方法來(lái)鑒定存于具有已知結(jié)構(gòu)和/或功能的其它蛋白質(zhì)中的序列基序或預(yù)期蛋白質(zhì)構(gòu)象結(jié)構(gòu)域。鑒定折疊成已知三維結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)序列的方法已為人們所了解。例如，參見(jiàn)鮑維(Bowie)等人，1991，科學(xué)253:164?！阿荝移植抗體”是包含一或多個(gè)衍生自特定物種或同種型抗體的⑶R以及相同或不同物種或同種型的另一抗體的框架的抗體?！岸嗵禺愋钥贵w”可識(shí)別一或多個(gè)抗原上的不止一個(gè)表位的抗體。此類(lèi)抗體的亞類(lèi)是“雙特異性抗體”，其可識(shí)別相同或不同抗原上的兩個(gè)不同表位。若包括抗體在內(nèi)的抗原結(jié)合蛋白以高結(jié)合親和性(定義為Kd(或相應(yīng)Kb，如下文所定義)值為IiT7M或更低)結(jié)合抗原(例如TSLP)，則其“特異性結(jié)合”所述抗原?！翱乖Y(jié)合結(jié)構(gòu)域”、“抗原結(jié)合區(qū)”或“抗原結(jié)合位點(diǎn)”是抗原結(jié)合蛋白中含有可與抗原交互作用并且有助于抗原結(jié)合蛋白針對(duì)抗原的特異性和親和性的氨基酸殘基(或其它部分)的部分。對(duì)于特異性結(jié)合抗原的抗體，此可包括其⑶R結(jié)構(gòu)域中至少一者的至少一部分。兩個(gè)多核苷酸或兩個(gè)多肽序列的“一致性百分比”是通過(guò)以默認(rèn)參數(shù)使用GAP電腦程序(GCG威斯康星軟件包(GCGWisconsinPackage)，10.3版(?？怂谷鸸?Accelrys)，圣地亞哥，CA)的一部分)比較所述序列來(lái)測(cè)定。術(shù)語(yǔ)“多核苷酸”、“寡核苷酸”與“核酸”在全文中可交換使用并且包括DNA分子(例如cDNA或基因組DNA),RNA分子(例如mRNA)、使用核苷酸類(lèi)似物(例如肽核酸和非天然存在的核苷酸類(lèi)似物)生成的DNA或RNA的類(lèi)似物、以及其雜合體。核酸分子可為單鏈或雙鏈。在一實(shí)施例中，本發(fā)明核酸分子包含編碼本發(fā)明抗體或其片段、衍生物、突變蛋白質(zhì)或變體的鄰接開(kāi)放閱讀框。如果兩個(gè)單鏈多核苷酸的序列可以反向平行方向?qū)R，從而使得一個(gè)多核苷酸中的每個(gè)核苷酸都與其在另一多核苷酸中的互補(bǔ)核苷酸相對(duì)，并且不引入間隙，而且在任一序列的5’或3’末端處無(wú)不成對(duì)核苷酸，則所述兩個(gè)單鏈多核苷酸互為“補(bǔ)體”。如果兩個(gè)多核苷酸可在中等嚴(yán)格條件下相互雜交，則多核苷酸與另一多核苷酸“互補(bǔ)”。因此，多核苷酸可與另一多核苷酸互補(bǔ)而并非其補(bǔ)體?！拜d體”是可用于將所連接的另一核酸引入細(xì)胞中的核酸。一類(lèi)載體是“質(zhì)?！保涫侵缚蛇B接有額外核酸區(qū)段的線狀或環(huán)狀雙鏈DNA分子。另一類(lèi)載體是病毒載體(例如復(fù)制缺陷型反轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒)，其中可將其它DNA區(qū)段引入所述病毒基因組中。某些載體能在引入其的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制(例如，包含細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)的細(xì)菌載體和附加型哺乳動(dòng)物載體)。在引入宿主細(xì)胞后，將其它載體(例如，非附加型哺乳動(dòng)物載體)整合至宿主細(xì)胞基因組中，并且由此與宿主基因組一起復(fù)制?！氨磉_(dá)載體”是一類(lèi)可引導(dǎo)所選多核苷酸表達(dá)的載體。如果調(diào)節(jié)序列影響核苷酸序列的表達(dá)(例如表達(dá)的水平、定時(shí)或位置)，則所述核苷酸序列“可操作連接”至調(diào)節(jié)序列?！罢{(diào)節(jié)序列”是影響其可操作連接的核酸表達(dá)(例如表達(dá)的水平、定時(shí)或位置)的核酸。調(diào)節(jié)序列可(例如)將其效應(yīng)直接施加至所調(diào)節(jié)核酸上，或通過(guò)一或多個(gè)其它分子(例如與調(diào)節(jié)序列和/或核酸結(jié)合的多肽)的作用來(lái)施加效應(yīng)。調(diào)節(jié)序列的實(shí)例包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和其它表達(dá)控制元件(例如多聚腺苷酸化信號(hào))。調(diào)節(jié)序列的其它實(shí)例闡述于(例如)以下文獻(xiàn)中戈戴爾(Goeddel)，1990，基因表達(dá)技術(shù)酶學(xué)方法(GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology)185,學(xué)術(shù)出版社，圣地亞哥，CA和拜倫(Baron)等人，1995，核酸研究(NucleicAcidsRes.)23:3605_06。“宿主細(xì)胞”是可用于表達(dá)核酸(例如本發(fā)明核酸)的細(xì)胞。宿主細(xì)胞可為原核生物，例如大腸桿菌(E.coli)；或其可為真核生物，例如單細(xì)胞真核生物(例如酵母或其它真菌)、植物細(xì)胞(例如煙草或番茄植物細(xì)胞)、動(dòng)物細(xì)胞(例如人類(lèi)細(xì)胞、猴細(xì)胞、倉(cāng)鼠細(xì)胞、大鼠細(xì)胞、小鼠細(xì)胞、或昆蟲(chóng)細(xì)胞)或雜交瘤。實(shí)例性宿主細(xì)胞包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系或其衍生物，包括DHFR缺陷的CHO株DXB-Il(參見(jiàn)厄羅伯(Urlaub)等人，1980，美國(guó)科學(xué)院學(xué)報(bào)77:4216-20)、在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的CHO細(xì)胞系(參見(jiàn)雷斯馬森(Rasmussen)等人，1998，細(xì)胞學(xué)技術(shù)(Cytotechnology)28:31)、DXB_11CHO細(xì)胞的衍生物CS-9細(xì)胞、以及AM-1/D細(xì)胞(闡述于美國(guó)專(zhuān)利第6，210，924號(hào)中)。其它CHO細(xì)胞系包括CH0-K1(ATCC號(hào)CCL-61)、EM9(ATCC號(hào)CRL-1861)、和UV20(ATCC號(hào)CRL-1862)。其它宿主細(xì)胞的實(shí)例包括猴腎細(xì)胞的C0S-7系(ATCCCRL1651)(參見(jiàn)格魯茲曼(Gluzman)等人，1981，細(xì)胞(Cell)23175)、1^細(xì)胞、(127細(xì)胞、313細(xì)胞(ATCCCCL163)、海拉細(xì)胞(HeLacell)、BHK(ATCCCRL10)細(xì)胞系、衍生自非洲綠猴腎細(xì)胞系CVl的CV1/EBNA細(xì)胞系(ATCCCCL70)(參見(jiàn)麥克馬汗(McMahan)等人，1991，歐洲分子生物學(xué)協(xié)會(huì)雜志(ΕΜΒ0J.)102821)、人胚腎細(xì)胞(例如293,293EBNA或MSR293)、人表皮A431細(xì)胞、人Colo205細(xì)胞、其它經(jīng)轉(zhuǎn)化靈長(zhǎng)類(lèi)細(xì)胞系、正常二倍體細(xì)胞、得自初生組織、初級(jí)外植體的體外培養(yǎng)物的細(xì)胞株、HL-60、U937、HaK或尤爾卡特(Jurkat)細(xì)胞。通常，宿主細(xì)胞是可經(jīng)多肽編碼核酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細(xì)胞，所述核酸隨后可在宿主細(xì)胞中表達(dá)。詞組“重組宿主細(xì)胞”可用于表示已經(jīng)欲表達(dá)核酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞也可為包含核酸，但除非將調(diào)節(jié)序列引入宿主細(xì)胞從而使其與所述核酸可操作連接，否則不以期望水平表達(dá)所述核酸的細(xì)胞。應(yīng)理解，術(shù)語(yǔ)宿主細(xì)胞不僅是指特定的個(gè)體細(xì)胞，并且也是指此一細(xì)胞的子代或潛在的子代。由于在后續(xù)世代中可能因突變或環(huán)境影響而發(fā)生某些改變，因此所述子代實(shí)際上可能與親代細(xì)胞不同，但卻仍涵蓋于本文所用術(shù)語(yǔ)宿主細(xì)胞的范圍內(nèi)?？乖Y(jié)合蛋白在一方面中，本發(fā)明提供結(jié)合人類(lèi)TSLP的抗原結(jié)合蛋白，例如抗體、抗體片段、抗體衍生物、抗體突變蛋白質(zhì)、和抗體變體。本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白包括結(jié)合人類(lèi)tslp并由此降低tslp活性的抗原結(jié)合蛋白。例如，抗原結(jié)合蛋白可干擾tslp與其受體的結(jié)合，并且由此降低tslp的活性。在一實(shí)施例中，本發(fā)明提供包含一或多個(gè)cdr序列的抗原結(jié)合蛋白，所述cdr序列與圖1a-1f或圖2a-2f中所示⑶r序列的差異不超過(guò)5、4、3、2、1或0個(gè)氨基酸殘基。在另一實(shí)施例中，至少一個(gè)抗原結(jié)合蛋白⑶r3序列是圖1a-1f或圖2a-2f中的序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白的輕鏈cdr3序列是al至a27的輕鏈序列，并且抗原結(jié)合蛋白的重鏈⑶r3序列是al至a27的重鏈⑶r3序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白另外包含1、2、3、4或5個(gè)⑶r序列，其與a1-a27的⑶r序列的差異各自獨(dú)立地為5、4、3、2、1或0個(gè)單氨基酸添加、取代、和/或缺失。實(shí)例性抗原結(jié)合蛋白a1-a27的輕鏈cdr和實(shí)例性結(jié)合蛋白a1-a27的重鏈cdr分別展示于圖1a-1f和圖2a-2f中。也展示編碼所述⑶r氨基酸序列的多核苷酸序列。此外，下文提供各cdr序列的共有序列。cdr共有序列可變輕鏈cdr第ia組lccdrl共有序列x1x2a16.1rssqslvysdgntylna18.1vna13.1vda19.1vda20.1vda14.1vna15.1inRssqslx1Ysdgx2TYln(seqidno246)x1是v(纈氨酸)殘基或i(異亮氨酸)殘基，x2是n(天冬酰胺)殘基或d(天冬氨酸)殘基；lccdr2共有序列x3a16.1kvsyffdsa18.1ya13.1na19.1na20.1na14.1na15.1nkvsx3wds(seqidno247)x3是y(酪氨酸)殘基或n(天冬酰胺)殘基；0104]LC⑶R3共有序列0105]A16.1MQGTHffP]3A0106]A18.10107]A13.10108]A19.10109]A20.10110]A14.10111]A15.10112]MQGTHQPPA(SEQIDNO248)0113]第lb組0114]LCCDR1共有序列0115]x4x50116]A13.2RASQGLSSffL0117]A14.2GL0118]A19.2GL0119]A20.2GL0120]A16.2SL0121]A18.2SL0122]A15.2GI0123]RASQX4X5SSWLA(SEQIDNO249)0124]父4是6(甘氨酸)殘基或S(絲氨酸)殘基；0125]乂5是1(亮氨酸)殘基或1(異亮氨酸)殘基;0126]LC⑶R2共有序列0127]X6X70128]A13.2NTSSLQS0129]A14.2NT0130]A19.2NT0131]A20.2NT0132]A16.2NA0133]A18.2NA0134]A15.2TT0135]X6X7SSLQS(SEQIDNO250)0136](天冬酰胺)殘基或T(蘇氨酸)殘基;0137](蘇氨酸)殘基或A(丙氨酸)殘基；0138]LC⑶R3共有序列0139]\0140]A13.2QQANSFPLT0141]A14.2N0142]A19.2NA20.2NA16.2NA18.2NA15.2DQQAX85SFPLT(SEQIDNO251)X8是N(天冬酰胺)殘基或D(天冬氨酸)殘基；第2組LCCDR1共有序列A6SGDKLGDKYACA8SGDKLGDKYAC(SEQIDNO:15)LCCDR2共有序列XA6QDKKRPSA8NQDX9KRPS(SEQIDNO:252)X9是K(賴(lài)氨酸)殘基或N(天冬酰胺)殘基；LCCDR3共有序列A6QAWDSSTVVA8QAWDSSTVV(SEQIDNO:107)第3細(xì)LCCDR1共有序列A3TGSSSNIGAGFDVHA4TGSSSNIGAGFDVH(SEQIDNO:10)LCCDR2共有序列A3DNNNRPSA4DNNNRPS(SEQIDNO:57)LCCDR3共有序列A3QSYDSNLSGSIVVA4QSYDSNLSGSIVV(SEQIDNO:102)可變重鏈⑶R第1組HCCDR1共有序列X10A13SYGMHA14S0182]A19S0183]A20S0184]A16N0185]A18N0186]A15N0187]X10YGMH(SEQIDNO253)0188]X1Q是S(絲氨酸)或N(天冬酰胺)0189]HCCDR2共有序列0190]Xn0191]A13VIffYDGSN0192]A14Y0193]A19Y0194]A20Y0195]A16Y0196]A18Y0197]A15F01980199020002010202020302040205020602070208020902100211021202130214021502160217021802190220VIWXnDGSNKYYADSVKG(SEQIDNO254)、是￥(酪氨酸)殘基或F(苯丙氨酸)HCCDR3共有序列殘基；X,1、,,A13GGGIPVADYYYYGMDVA14PYA19PYA20PYA16AYA18AYA15AFGGGIX12VADYYX13YG]VIDV(SEQIDNO:255)乂12是？(脯氨酸)殘基或A(丙氨酸)殘基；乂13是￥(酪氨酸)殘基或F(苯丙氨酸)殘基；第2組HCCDR1共有序列A6SYGA8SYGIH(SEQIDNO147)HCCDR2共有序列IHX14A6VISYDGA8SYKYYADSVKGNVISYDGSX14KYYADSVKG(SEQIDNO256)乂14是￥(酪氨酸)或N(天冬酰胺)殘基;HCCDR3共有序列A6GDSWNDRLNYYFYDA8GDSWNDRLNYYFYDMDV(SEQIDNO214)第3組HCCDR1共有序列X15x16X17A3DYYMYA4GDHX15X16YMX17(SEQIDNO257)乂15是0(天冬氨酸)或G(甘氨酸)殘基;乂16是￥(酪氨酸)或D(天冬氨酸)殘基;乂17是￥(酪氨酸)或H(組氨酸)殘基；HCCDR2共有序列Xl8Xl9X20A3WINPNSGGTNYVQA4HARWINPNSGGTNX18X19X20KFQG(SEQIDNO258)父18是￥(酪氨酸)或H(組氨酸)殘基；乂19是￥(纈氨酸)或A(丙氨酸)殘基；X20是Q(谷氨酰胺)或R(精氨酸)殘基；HCCDR3共有序列^21X22X23A3DGGSSGWPLFAYA4RTD(SEQIDNo259)乂21是0(甘氨酸)或R(精氨酸)殘基；父22是3(絲氨酸)或T(蘇氨酸)殘基；&3是々(丙氨酸)或D(天冬氨酸)殘基。下表2分別提供編碼可變重鏈結(jié)構(gòu)域(H編號(hào)).和可變輕鏈結(jié)構(gòu)域(L編號(hào))的核酸(DNA)序列，以及實(shí)例性TSLP抗原結(jié)合蛋白A1-A27的可變重鏈和可變輕鏈結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。自各序列的開(kāi)始至末端依次為各個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的CDR1、2和3?？蚣?Fr)區(qū)加下劃線。自各序列的開(kāi)始至末端依次為各個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的框架1、2、3和4(例如，在各序列中，第一個(gè)加下劃線的序列部分為Frl，第二個(gè)為Fr2，第三個(gè)為Fr3并且最后一個(gè)為Fr4)。表2HIDNACAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGTCTAGTGGGAGCTACCAACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA(SEQIDNO260)HI蛋白QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEffVAVIffYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASLVGATNYYGMDVffGQGTTVTVSS(SEQIDNO261)LIDNATCTTCTGAGCTGACTCAGGACCCTGCTGTGTCTGTGGCCTTGGGACAGACAGTCAGGATCACATGCCAAGGAGACAGCCTCAGAAGCTATTATGCAAGCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCCCCTGTACTTGTCATCTCTGGTAAAAACTACCGGCCCTCAGGGATCCCAGACCGATTCTCTGGCTCCAGCTCAGGAAACACAGCTTCCTTGACCATCACTGGGGCTCAGGCGGAAGATGAGGCTGACTACTACTGTAACTCCCGGGACAGAAGTGGTAACCATCTGGTGTTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(SEQIDNO262)LI蛋白SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQ⑶SLRSYYASWYQQKPGQAPVLVISGKNYRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDRSGNHLVFGGGTKLTVL(SEQIDNO:263)H2DNAGAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGTCGTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTTTACCATGCACTGGGTCCGTCAAGCTCCGGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCTCTTATTAGTTGGGATGGTGGTAGCACATACTATGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACAGCAAAAACTCCCTGTATATGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACAGCGCCTTGTATTACTGTGCAAGAGGTCCTTACTACTACTTCTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA(SEQIDNO:264)H2蛋白EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFDDFTMHWVRQAPGKGLEffVSLISffDGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYMQMNSLRTEDSALYYCARGPYYYFYGMDVffGQGTTVTVSS(SEQIDNO:265)L2DNATCTTCTGAGCTGACTCAGGACCCTGCTGTGTCTGTGGCCTTGGGACAGACAGTCAGGATCACATGCCAAGGAGACAGCCTCAGAACCTATTATGCAAGCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCCCCTATACTTGTCATCTCTGATAAAAACAACCGGCCCTCAGGGATCCCAGACCGATTCTCTGGCTCCAGCTCAGGAAACACAGCTTCCTTGACCATCACTGGGGCTCAGGCGGAAGATGAGGCTGACTATTACTGTAACTCCCGGGACAGCAGTGATAACCATCTAGTGGTATTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(SEQIDNO:266)L2蛋白SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQ⑶SLRTYYASWYQQKPGQAPILVISDKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSDNHLVVFGGGTKLTVL(SEQIDNO:267)H3DNACAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGACTACTATATGTACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCCTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCACAAACTATGTACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGATGAGATCCGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGGGGTAGCAGTGGCTGGCCCCTCTTTGCCTACTGGGGCCTGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA(SEQIDNO:268)H3蛋白QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMYffVRQAPGQGPEWMGfflNPNSGGTNYVQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRMRSDDTAVYYCARDGGSSGffPLFAYffGLGTLVTVSS(SEQIDNO:269)L3DNACAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTTTGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGATAACAACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAACCTGAGTGGTTCGATTGTGGTTTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(SEQIDNO270)L3蛋白QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYDNNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSNLSGSIVVFGGGTKLTVL(SEQIDNO:271)H4DNACAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACATCTTCACCGGCGACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTGGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCACAAACCATGCACGGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGTGAGAGATAGGGGTACCAGTGGCTGGCCACTCTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACACTGGTCACCGTCTCCTCA(SEQIDNO:272)H4蛋白QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFTCDYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNHARKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVRDRGTSGffPLFDYffGQGTLVTVSS(SEQIDNO273)L4DNACAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTTTGATGTGCACTGGTACCAGCTGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTTTGATAACAACAATCGCCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAACCTGAGTGGTTCGATTGTGGTATTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(SEQIDNO274)L4蛋白QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQLLPGTAPKLLIFDNNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSNLSGSIVVFGGGTKLTVL(SEQIDNO:275)H5DNACAGATGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGAACCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGACTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAACACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCGGATTCACCATCACCAGAGACAATTCCAAGAACACTCTGAATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGCCCCTCAGTGGGAGCTAGTTCATGAAGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA(SEQIDNO:360)H5蛋白QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEffVAVIffYDGSNKHYADSVKGRFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQffELVHEAFDIffGQGTMVTVSS(SEQIDNO:361)L5DNATCCTATGTGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACCTTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCATGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGGCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATGTGGTATTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(SEQIDNQ362)L5蛋白SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSfflPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVffDSSSDHVVFGGGTKLTVL(SEQIDNO:363)H6DNACAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCATTTTCAGTAGCTATGGCATTCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTTATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGGGGACTCCTGGAACGACAGATTAAACTACTACTTCTACGATATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA(SEQIDNO:276)H6蛋白QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFIFSSYGIHWVRQAPGKGLEffVAVISYDGSYKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDSffNDRLNYYFYDMDVffGQGT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EQIDNO:341)H23DNACAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAATGGTGGCACAAACTATGGACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGGAACTGGAACGACGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA(SEQIDNO:342)H23蛋白QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGfflNPNNGGTNYGQKFQGRYTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAYYYCARGNffNDDAFDIffGQGTMVTVSS(SEQIDNO:343)L23DNATCCTATGAGCTGACTCAGTCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGCATCACCTGTTCTGGTGATAAATTGGGGGATAAATTTGCTTTCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGCTGGTCATCTATCAAGATAGCAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCAGCGCCGGGGGGGTATTTCGGCGGAGGGACCAAGTTGACCGTCCTA(SEQIDNO:344)L23蛋白SYELTQSPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKFAFffYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAffDSSAGGVFGGGTKLTVL(SEQIDNO:345)H24DNACAGGTGCAACTGGAGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGTAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAATGGGGTTTACTATGGTTCGGGGAGCCCTCTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA(SEQIDNO:346)H24蛋白QVQLEESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEffVAVIffYDGSNKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGFTMVRGALYYGMDVffGQGTTVTVSS(SEQIDNO:347)L24DNATCTTCTGAGCTGACTCAGGACCCTGCTGTGTCTGTGGCCTTGGGACAGACAGTCAGGATCACATGCCAAGGAGACAGCCTCAGAAGCTATCATGCAAGCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCCCCTGTACTTGTCATCTATGGTGAAAACAACCGGCCCTCAGGGATCCCAGACCGATTCTCTGACTCCAGTTCAGGAAACACAGCTTCCTTGACCATCACTGGGGCTCAGGCGGAAGATGAGGCTGACTATTATTGTAATTATCGGGACAACAGTGGTAACCATCTGGTGTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(SEQIDNO:348)L24蛋白SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQ⑶SLRSYHASWYQQKPGQAPVLVIYGENNRPSGIPDRFSDSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNYRDNSGNHLVFGGGTKLTVL(SEQIDNO:349)H25DNAGAGGTGCAGCTGTTGGAATCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTCGTAGTGGTAGTACCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGTGGAACCGAGATATTTTGACTGGTTATTAGGCGACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA(SEQIDNO:350)H25蛋白EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSffVRQAPGKGLEffVSAISRSGSTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYCVEPRYFDWLL⑶WGQGTLVTVSS(SEQIDNO351)L25DNAGACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAACTCCAACAATAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCTTCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAGGATGTGGCAATTTATTACTGTCAGCAATTTTATGGTCCTCCTCTCACTTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA(SEQIDNO:340)L25蛋白DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYNSNNKNYLAffYQQKPGQPPKLLIYffASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLOAEDVAIYYCQQFYGPPLTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:341)H26DNACAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTAAATGGTATGAAGGAAGTAATAAATACTATGGAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATTTGCAAATGAACAGTCTGAGAGGCGAGGATACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGGCGCCCACGACTACGGTGACTTCTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA(SEQIDNO:352)H26蛋白QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEffVAVKffYEGSNKYYCTISVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGEDTAVYYCARGAHIDYGDFYYGMDWGQGTTVTVSS(SEQIDNO:353)L26DNATCCTATGAACTGACTCAGCCAGCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGATAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATAATTTGGGGGATAAATATATTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGCGGGTCATCTATCAAGATAACAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGTTTCTCTGGCTCCAATTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCAGCACTGTGGTATTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(SEQIDNO:354)L26蛋白SYELTQPASVSVSPGQIASITCSGDNLGDKYICffYQQKPGQSPVRVIYQDNKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAffDSSTYYFGGGTKLTYL(SEQIDNO:355)H27DNAGAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTITAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTTATAGTGGCGGTAGCACATACTACGCAGGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATCGGGAGGGAGCGACTTGGTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA(SEQIDNO:356)H27蛋白EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSffVRQAPGKGLEffVSAISYSGGSTYYAGSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAYYYCAKDREGATffYYGMDYffGQGTTVTYSS(SEQIDNO:357)L27DNATCCTATGAACTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATAAATTGGGGGAAAGCTATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTACTGGTCATCTATCAAGATTACAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGCTTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGAAGTACTGTACTATTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(SEQIDNO:358)L27蛋白SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGESYACffYQQKPGQSPVLVIYQDYKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAffDRSTVLFGGGTKLTVL(SEQIDNO:359)本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白的具體實(shí)施例包含一或多個(gè)與一或多個(gè)CDR氨基酸序列相同的氨基酸序列，并且另外可包含一或多個(gè)上述FR。在一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白包含上述輕鏈CDRl序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白包含上述輕鏈CDR2序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白包含上述輕鏈CDR3序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白包含上述重鏈⑶Rl序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白包含上述重鏈⑶R2序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白包含上述重鏈CDR3序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白另外包含上述輕鏈FRl序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白另外包含上述輕鏈FR2序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白另外包含上述輕鏈FR3序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白另外包含上述輕鏈FR4序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白另外包含上述重鏈FRl序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白另外包含上述重鏈FR2序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白另外包含上述重鏈FR3序列。在另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白另外包含上述重鏈FR4序列。在一實(shí)施例中，本發(fā)明提供包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合蛋白，所述結(jié)構(gòu)域所包含氨基酸序列與選自由Ll至L27組成的群組的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的差異僅為15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0個(gè)殘基，其中每個(gè)所述序列差異獨(dú)立地為缺失、插入、或取代一個(gè)氨基酸殘基中的任一者。在另一實(shí)施例中，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域所包含氨基酸序列中至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、或99%與選自由L1-L27組成的群組的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列相同。在另一實(shí)施例中，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述核苷酸序列中至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、或99%與編碼選自由L1-L27組成的群組的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列相同。在另一實(shí)施例中，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由多核苷酸編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸可在中等嚴(yán)格條件下與編碼選自由L1-L27組成的群組的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多核苷酸的補(bǔ)體雜交。在另一實(shí)施例中，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由多核苷酸編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸可在高度嚴(yán)格條件下與L1-L27的輕鏈多核苷酸的補(bǔ)體雜交。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合蛋白，所述結(jié)構(gòu)域所包含氨基酸序列與選自由H1-H27組成的群組的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的差異僅為15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或O個(gè)殘基，其中每個(gè)所述序列差異獨(dú)立地為缺失、插入、或取代一個(gè)氨基酸殘基中的任一者。在另一實(shí)施例中，重鏈可變結(jié)構(gòu)域所包含氨基酸序列中至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、或99%與選自由H1-H27組成的群組的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列相同。在另一實(shí)施例中，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述核苷酸序列中至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、或99%與編碼選自由H1-H27組成的群組的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列相同。在另一實(shí)施例中，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由多核苷酸編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸可在中等嚴(yán)格條件下與編碼選自由H1-H27組成的群組的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多核苷酸的補(bǔ)體雜交。在另一實(shí)施例中，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由多核苷酸編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸可在高度嚴(yán)格條件下與編碼選自由H1-H27組成的群組的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多核苷酸的補(bǔ)體雜交。在上表2所提供的某些實(shí)施例中，兩個(gè)輕鏈與單一重鏈相連，例如如L-12.1、L-12.2等所顯示。這些替代性輕鏈各自與單一重鏈配對(duì)。在這些實(shí)施例中，可如下所述來(lái)分析輕鏈和重鏈的組合，并且可選擇提供較大TSLP中和活性的輕鏈和重鏈組合。其它實(shí)施例包括包含以下組合的抗原結(jié)合蛋白L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、和L27H27。本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白(例如抗體、抗體片段、和抗體衍生物)可另外包含任何業(yè)內(nèi)已知的恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)可為例如κ-或λ-型輕鏈恒定區(qū)，例如人類(lèi)κ-或λ-型輕鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)可為(例如)α-、δ-、ε-、Υ-、或μ-型重鏈恒定區(qū)，例如人類(lèi)α_、δ-、ε-、Y-、或μ-型重鏈恒定區(qū)。在一實(shí)施例中，輕鏈或重鏈恒定區(qū)是天然存在恒定區(qū)的片段、衍生物、變體、或突變蛋白質(zhì)。在一實(shí)施例中，抗原結(jié)合蛋白包含IgG，例如IgGl、IgG2、IgG3、或IgG4。自目標(biāo)抗體衍生不同亞類(lèi)或同種型的抗體的技術(shù)(即亞類(lèi)轉(zhuǎn)換)是已知的。因此，IgG抗體可衍生自(例如)IgM抗體，并且反之亦然。所述技術(shù)使得可制備新抗體，其具有給定抗體(親代抗體)的抗原結(jié)合特性，但也表現(xiàn)與不同于親代抗體的抗體同種型或亞類(lèi)相關(guān)的生物學(xué)特性。也可采用重組DNA技術(shù)。所述程序中可采用編碼特定抗體多肽的克隆DNA，例如編碼期望同種型抗體的恒定結(jié)構(gòu)域的DNA。也可參見(jiàn)蘭托(Lantto)等人，2002，分子生物學(xué)方法(MethodsMol.Biol.)178:303_16。在一實(shí)施例中，本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白包含IgGl重鏈恒定結(jié)構(gòu)域或IgGl重鏈結(jié)構(gòu)域的片段。在一實(shí)施例中，本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白另外包含恒定輕鏈κ或λ結(jié)構(gòu)域或這些結(jié)構(gòu)域的片段。輕鏈恒定和其編碼多核苷酸展示于下表3中。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白另外包含重鏈恒定結(jié)構(gòu)域或其片段，例如下表3中所示IgG2重鏈恒定區(qū)。編碼恒定重鏈和恒定輕鏈結(jié)構(gòu)域的核酸(DNA)以及重鏈和輕鏈結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列展示于下文中。可使λ可變結(jié)構(gòu)域與λ恒定結(jié)構(gòu)域融合并且可使κ可變結(jié)構(gòu)域與κ恒定結(jié)構(gòu)域融合。表3IgG2重鏈恒定結(jié)構(gòu)域DNA(SEQIDNO364)gctagcaccaaggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgaIgG2重鏈恒定結(jié)構(gòu)域蛋白(SEQIDNO365)ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA[1001]LHNHYTQKSLSLSPGK*K輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域DNA(SEQIDNO366)cgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttagK輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域蛋白(SEQIDNO367)RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC"Λ輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域DNA(SEQIDNO368)ggccaaccgaaagcggcgccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttcatagA輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域蛋白(SEQIDNO369)GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS*本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白包括包含(例如)以下可變結(jié)構(gòu)域組合者L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHlUL12H12、L13.1H13、L13.2H13、L14.1H14、L14.2H14、L15.1H15、L15.2H15、L16.1H16、L16.2H16、L17H17、L18.1H18、L18.2H18、L19.1H19、L19.2H19、L20.1H20、L20.2H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、和L27H27，其具有期望同種型(例如IgA,IgGUIgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgE、和IgD)；以及其Fab或F(ab’)2片段。此外，若需要IgG4，則也可期望在鉸鏈區(qū)中引入點(diǎn)突變(如布魯姆(Bloom)等人，1997，蛋白質(zhì)科學(xué)(ProteinScience)6:407(以引用方式并入本文中)中所述)以緩和形成H鏈內(nèi)二硫鍵的趨勢(shì)，所述趨勢(shì)可在IgG4抗體中產(chǎn)生異質(zhì)性?？贵w和抗體片段本文所用術(shù)語(yǔ)“抗體”是指完整抗體或其抗原結(jié)合片段，如本文定義部分所述?？贵w可包含完整抗體分子(包括具有全長(zhǎng)重鏈和/或輕鏈的多克隆形式、單克隆形式、嵌合形式、人類(lèi)化形式、或人類(lèi)形式)，或包含其抗原結(jié)合片段。抗體片段包括F(ab’)2、Fab、Fab’、Fv、Fe、和Fd片段，并且可將其納入單結(jié)構(gòu)域抗體、單價(jià)抗體、單鏈抗體、大分子抗體(maxibody)、微小抗體、細(xì)胞內(nèi)抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、v_NAR和雙scFv中(例如，參見(jiàn)霍林格(Hollinger)和哈德遜(Hudson)，2005，天然生物技術(shù)(NatureBiotechnology)，23，9，1126-1136)。抗體多肽也揭示于美國(guó)專(zhuān)利第6，703，199號(hào)中，其包括纖連蛋白多肽單抗。其它抗體多肽揭示于美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)案第2005/0238646號(hào)中，其為單鏈多肽。單價(jià)抗體片段揭示于美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)案第20050227324號(hào)中。可通過(guò)(例如)抗體的蛋白水解來(lái)獲得源自抗體的抗原結(jié)合片段，例如用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化全抗體。例如，可通過(guò)用胃蛋白酶酶促裂解抗體來(lái)產(chǎn)生抗體片段以提供稱(chēng)作F(ab’)2的5S片段。此片段可使用硫醇還原劑進(jìn)一步裂解以產(chǎn)生3.5SFab'單價(jià)片段。任選地，在裂解反應(yīng)實(shí)施中可使用阻斷基團(tuán)來(lái)阻斷自二硫鍵裂解產(chǎn)生巰基。作為替代方式，使用木瓜蛋白酶的酶促裂解直接產(chǎn)生兩個(gè)單價(jià)Fab片段和Fc片段。這些方法闡述于(例如)以下文獻(xiàn)中格登伯格(601如111^1^)，美國(guó)專(zhuān)利第4，331，647號(hào)；尼森諾夫(Nisonoff)等人，生物化學(xué)與生物物理學(xué)文獻(xiàn)(Arch.Biochem.Biophys.)89:230，1960；波特(Porter)，生物化學(xué)雜志(Biochem.J.)73=119,1959；愛(ài)德曼(Edelman)等人，酶學(xué)方法(MethodsinEnzymology)1:422(學(xué)術(shù)出版社，1967)；以及安德魯斯，S.M.(Andrews,S.Μ.)和泰特斯，J.A.(Titus，J.Α.)，當(dāng)前免疫學(xué)規(guī)程(CurrentProtocolsinlmmunology)(克利根J.Ε.(ColiganJ.Ε.)等人編輯)，約翰威利出版公司(JohnWiley&SonS)，紐約(2003)，第2.8.1-2.8.10頁(yè)和第2.10A.1-2.10A.5頁(yè)。也可使用裂解抗體的其它方法，例如分離重鏈以形成單價(jià)輕鏈_重鏈片段(Fd)、進(jìn)一步裂解各片段、或其它酶促、化學(xué)、或遺傳技術(shù)，只要所述片段可結(jié)合完整抗體所識(shí)別的抗原即可。抗體片段也可為任何合成蛋白或遺傳改造蛋白。例如，抗體片段包括由輕鏈可變區(qū)組成的分離片段、由重鏈和輕鏈可變區(qū)組成的“Fv”片段、輕鏈和重鏈可變區(qū)通過(guò)肽連接體連接的重組單鏈多肽分子(scFv蛋白)。抗體片段的另一形式是包含一或多個(gè)抗體互補(bǔ)決定區(qū)(OTR)的肽。⑶R(也稱(chēng)作“最小識(shí)別單元”或“超變區(qū)”)可通過(guò)構(gòu)建編碼目標(biāo)CDR的多核苷酸來(lái)獲得。所述多核苷酸是通過(guò)(例如)使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)合成可變區(qū)來(lái)制備，其中使用抗體產(chǎn)生細(xì)胞的mRNA作為模板(例如，參見(jiàn)萊瑞克(Larrick)等人，方法酶學(xué)方法指南(Methods=ACompaniontoMethodsinEnzymology)2:106，1991；康特尼—萊克(Courtenay—Luck)，“單克隆抗體的遺傳操作(GeneticManipulationofMonoclonalAntibodies)”，單克隆抗體產(chǎn)生，改造禾口臨床應(yīng)用(MonoclonalAntibodiesproduction,EngineeringandClinicalApplication)，李特爾(Ritter)等人編輯，第166頁(yè)(劍橋大學(xué)出版社(CambridgeUniversityPress)1995)；以及沃德等人，“抗體的遺傳操作和表達(dá)(GeneticManipulationan(!ExpressionofTVntibodies)，，，單克隆㈱體原iS禾口用(MonoclonalAntibodies=PrinciplesandApplications),博爾克(Birch)等人編輯，第137頁(yè)(威利-李斯(Wiley-Liss)公司，1995))。因此，在一實(shí)施例中，結(jié)合劑包含至少一個(gè)本文所述⑶R。結(jié)合劑可包含至少2、3、4、5或6個(gè)本文所述CDR。結(jié)合劑可另外包含至少一個(gè)本文所述抗體的可變區(qū)結(jié)構(gòu)域?？勺儏^(qū)結(jié)構(gòu)域可具有任何尺寸或氨基酸組成并且一般包含至少一個(gè)負(fù)責(zé)結(jié)合TSLP的⑶R序列，例如本文具體闡述的重鏈⑶R1、⑶R2、⑶R3和/或輕鏈⑶R，并且所述⑶R序列與一或多個(gè)框架序列相鄰或位于所述框架序列的框架中。一般來(lái)說(shuō)，可變(V)區(qū)結(jié)構(gòu)域可具有免疫球蛋白重鏈(Vh)和/或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的任何適宜排列。因此，例如，V區(qū)結(jié)構(gòu)域可為單體并且是Vh或\結(jié)構(gòu)域，其能以至少等于1x10_7M或更低的親和性獨(dú)立結(jié)合人類(lèi)TSLP，如下文所述?；蛘?，V區(qū)結(jié)構(gòu)域可為二聚體并且含有￥11-￥11、￥11-\或八二聚體。V區(qū)二聚體包含可以非共價(jià)方式連接的至少一個(gè)Vh和至少一個(gè)\鏈(下文中稱(chēng)作Fv)。若需要，所述鏈可通過(guò)(例如)兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域之間的二硫鍵直接共價(jià)偶聯(lián)，或通過(guò)連接體(例如肽連接體)共價(jià)偶聯(lián)，從而形成單鏈Fv(scFv)?？勺儏^(qū)結(jié)構(gòu)域可為任何天然存在的可變結(jié)構(gòu)域或其改造形式。改造形式意指已使用重組DNA改造技術(shù)產(chǎn)生的可變區(qū)結(jié)構(gòu)域。所述改造形式包括通過(guò)(例如)對(duì)特異性抗體的氨基酸序列實(shí)施插入、缺失、或改變自所述特異性抗體可變區(qū)產(chǎn)生者。具體實(shí)例包括經(jīng)改造可變區(qū)結(jié)構(gòu)域，其含有至少一個(gè)⑶R并且任選地含有一或多個(gè)來(lái)自第一抗體的框架氨基酸以及來(lái)自第二抗體可變區(qū)結(jié)構(gòu)域的其余部分?？勺儏^(qū)結(jié)構(gòu)域可在C-末端氨基酸處共價(jià)連接至少一個(gè)其它抗體結(jié)構(gòu)域或其片段。因此，例如，存于可變區(qū)結(jié)構(gòu)域中的VH結(jié)構(gòu)域可與免疫球蛋白CHl結(jié)構(gòu)域或其片段連接。類(lèi)似地，八結(jié)構(gòu)域可與Ck結(jié)構(gòu)域或其片段連接。例如，以此方式，抗體可為Fab片段，其中抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域含有經(jīng)結(jié)合Vh和\結(jié)構(gòu)域，其在其C-末端處分別與CHl和Ck結(jié)構(gòu)域共價(jià)連接?？捎闷渌被醽?lái)延長(zhǎng)CHl結(jié)構(gòu)域，以提供(例如)Fab’片段中所發(fā)現(xiàn)的鉸鏈區(qū)或鉸鏈區(qū)結(jié)構(gòu)域的一部分，或提供其它結(jié)構(gòu)域，例如抗體CH2和CH3結(jié)構(gòu)域?？乖Y(jié)合蛋白衍牛物[1028]圖1A-1F、圖2A-2F、和上表2中所示的核苷酸序列可通過(guò)(例如)隨機(jī)誘變或定點(diǎn)誘變(例如寡核苷酸引導(dǎo)的點(diǎn)特異性誘變)來(lái)改變，從而產(chǎn)生與未突變多核苷酸相比包含一或多個(gè)特定核苷酸取代、缺失、或插入的經(jīng)改變多核苷酸。實(shí)施所述改變的技術(shù)的實(shí)例闡述于以下文獻(xiàn)中沃德?tīng)?Walder)等人，1986，基因(Gene)42133；鮑爾(Bauer)等人，1985，基因3773；克雷克(Craik)，生物技術(shù)(BioTechniques)，1985年1月，12-19；史密斯(Smith)等人，1981，遺傳工程原理和方法(GeneticEngineeringprinciplesandMethods)，普萊納姆出版社(PlenumPress)；以及美國(guó)專(zhuān)利第4，518，584號(hào)和第4，737，462號(hào)?？墒褂眠@些和其它方法來(lái)制備(例如)與未衍生抗原結(jié)合蛋白相比具有期望特性的TSLP抗原結(jié)合蛋白衍生物，例如增強(qiáng)的親和性、親合力、或?qū)SLP的特異性、提高的體內(nèi)或體外活性或穩(wěn)定性、或降低的體內(nèi)副作用。在本發(fā)明范圍內(nèi)的包括抗體在內(nèi)的其它抗TSLP抗原結(jié)合蛋白衍生物包括抗TSLP抗體或其片段與其它蛋白質(zhì)或多肽的共價(jià)或凝聚性偶聯(lián)物，例如通過(guò)表達(dá)包含與抗TSLP抗體多肽N-末端或C-末端融合的異源多肽的重組融合蛋白而獲得者。例如，偶聯(lián)肽可為諸如酵母α-因子前導(dǎo)子等異源信號(hào)(或前導(dǎo)子)多肽，或諸如表位標(biāo)簽等肽。含有抗原結(jié)合蛋白的融合蛋白可包含經(jīng)加入以促進(jìn)抗原結(jié)合蛋白的純化或鑒定的肽(例如聚His)。也可使抗原結(jié)合蛋白連接FLAG肽，如以下文獻(xiàn)中所述霍普(Hopp)等人，生物技術(shù)(Bio/Technology)6=1204,1988；和美國(guó)專(zhuān)利第5，011，912號(hào)。FLAG肽具有高抗原性并且提供由特異性單克隆抗體(mAb)可逆結(jié)合的表位，從而使得可快速分析并且便捷地純化所表達(dá)重組蛋白?？捎糜谥苽涫笷LAG肽與給定多肽融合的融合蛋白的試劑可在市場(chǎng)上購(gòu)得(西格瑪(Sigma)，圣路易斯，M0)。可采用含有一或多個(gè)抗原結(jié)合蛋白的寡聚體作為T(mén)SLP拮抗劑。寡聚體可呈共價(jià)連接或非共價(jià)連接的二聚體、三聚體、或多元寡聚體形式。意欲使用包含兩個(gè)或更多個(gè)抗原結(jié)合蛋白的寡聚體，其一個(gè)實(shí)例為同二聚體。其它寡聚體包括異二聚體、同三聚體、異三聚體、同四聚體、異四聚體等。一實(shí)施例涉及包含多個(gè)抗原結(jié)合蛋白的寡聚體，所述抗原結(jié)合蛋白通過(guò)與抗原結(jié)合蛋白融合的肽部分之間的共價(jià)或非共價(jià)交互作用而連接。所述肽可為肽連接體(間隔子)或具有促進(jìn)低聚反應(yīng)的特性的肽。亮氨酸拉鏈和某些衍生自抗體的多肽位于可促進(jìn)肽所附接抗原結(jié)合蛋白的低聚反應(yīng)的所述肽之間，如下文更詳細(xì)地闡述。在特定實(shí)施例中，寡聚體包含2-4個(gè)能結(jié)合TSLP的抗原結(jié)合蛋白。寡聚體中的抗原結(jié)合蛋白可呈任何形式，例如上述形式中的任一者，例如變體或片段。在一實(shí)施例中，使用衍生自免疫球蛋白的多肽來(lái)制備寡聚體。包含某些與抗體衍生多肽中各部分(包括Fc結(jié)構(gòu)域)融合的異源多肽的融合蛋白的制備已闡述于(例如)以下文獻(xiàn)中阿斯科那茲(Ashkenazi)等人，1991，PNASUSA8810535；布恩(Bym)等人，1990，自然344:677；以及霍倫保(Hollenbaugh)等人，1992，“免疫球蛋白融合蛋白質(zhì)的構(gòu)建(ConstructionofImmunoglobulinFusionProteins)”，當(dāng)前免疫學(xué)規(guī)程，增刊4，第10.19.1-10.19.11頁(yè)。本發(fā)明一實(shí)施例涉及包含兩個(gè)融合蛋白的二聚體，其是通過(guò)融合抗TSLP抗體的片段與抗體的Fc區(qū)來(lái)產(chǎn)生。所述二聚體可通過(guò)(例如)以下方式來(lái)制備將編碼融合蛋白的融合基因插入適宜表達(dá)載體中，在經(jīng)重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中表達(dá)所述融合基因，并且使得可以非常類(lèi)似抗體分子的方式裝配所表達(dá)融合蛋白，隨后在Fc部分之間形成鏈間二硫鍵以產(chǎn)生二聚體。本文所用術(shù)語(yǔ)“Fe多肽”包括衍生自抗體Fc區(qū)的多肽的天然和突變蛋白質(zhì)形式。也包括所述多肽的含有鉸鏈區(qū)的截?cái)嘈问?，其可促進(jìn)二聚作用。包含F(xiàn)c部分(和自其形成的寡聚體)的融合蛋白提供可在蛋白A或蛋白G管柱上通過(guò)親和色譜便捷地純化的優(yōu)勢(shì)。闡述于PCT申請(qǐng)案WO93/10151(以引用方式并入本文中)中的一種適宜Fc多肽是自N-末端鉸鏈區(qū)延伸至人類(lèi)IgGl抗體Fc區(qū)的天然C-末端的單鏈多肽。另一可用Fc多肽是美國(guó)專(zhuān)利第5，457，035號(hào)和鮑姆(Baum)等人，1994，歐洲分子生物學(xué)協(xié)會(huì)雜志133992-4001中所述的Fc突變蛋白質(zhì)。此突變蛋白質(zhì)的氨基酸序列與W093/10151中所示天然Fc序列相同，只是氨基酸19已自Leu變?yōu)锳la，氨基酸20已自Leu變?yōu)镚lu，并且氨基酸22已自Gly變?yōu)锳la。突變蛋白質(zhì)所表現(xiàn)針對(duì)Fc受體的親和性降低。在其它實(shí)施例中，可用抗體重鏈和/或輕鏈中的可變部分取代抗TSLP抗體中的重鏈和/或輕鏈可變區(qū)。或者，寡聚體是包含多個(gè)抗原結(jié)合蛋白并且具有或不具有肽連接體(間隔肽)的融合蛋白。尤其適合的肽連接體是闡述于美國(guó)專(zhuān)利第4，751，180號(hào)和第4，935，233號(hào)中者。制備寡聚體抗原結(jié)合蛋白的另一方法涉及亮氨酸拉鏈的使用。亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域是可促進(jìn)含有所述結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)低聚反應(yīng)的肽。亮氨酸拉鏈最初是在若干種DNA-結(jié)合蛋白中鑒定出來(lái)的(蘭德斯庫(kù)(Landschulz)等人，1988，科學(xué)2401759)，并且此后發(fā)現(xiàn)其存于多種不同蛋白質(zhì)中。已知亮氨酸拉鏈?zhǔn)翘烊淮嬖诘碾暮推涠刍蛉刍难苌?。適合產(chǎn)生可溶性寡聚體蛋白的亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域的實(shí)例闡述于PCT申請(qǐng)案WO94/10308中，并且衍生自肺表面活性蛋白D(SPD)的亮氨酸拉鏈闡述于霍普等人，1994，歐洲生化學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)快報(bào)(FEBSLetters)344:191中，其是以引用方式并入本文中。經(jīng)修飾亮氨酸拉鏈的使用容許與其融合的異源蛋白進(jìn)行穩(wěn)定三聚化，此闡述于范斯路(Fanslow)等人，1994，免疫學(xué)論文集(Semin.Immunol.)6:267_78中。在一方法中，在適宜宿主細(xì)胞中表達(dá)包含與亮氨酸拉鏈肽融合的抗TSLP抗體片段或衍生物的重組融合蛋白，并且自培養(yǎng)物上清液回收由此形成的可溶性寡聚體抗TSLP抗體片段或衍生物。如本文所述，抗體包含至少一個(gè)⑶R。例如，可將一或多個(gè)⑶R納入已知抗體框架區(qū)(IgGl、IgG2等)中或使其偶聯(lián)適宜媒劑以延長(zhǎng)其半衰期。適宜媒劑包括(但不限于)Fe、聚乙二醇(PEG)、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、和諸如此類(lèi)。這些和其它適宜媒劑為業(yè)內(nèi)已知。所述偶聯(lián)CDR肽可呈單體、二聚體、四聚體、或其它形式。在一實(shí)施例中，將一或多種水溶性聚合物結(jié)合在結(jié)合劑的一或多個(gè)特定位置處，例如結(jié)合在氨基末端。在某些優(yōu)選實(shí)施例中，抗體包含一或多種經(jīng)結(jié)合水溶性聚合物，包括(但不限于)聚乙二醇、聚氧乙二醇、或聚丙二醇。例如，參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第4，640，835號(hào)、第4，496，689號(hào)、第4，301，144號(hào)、第4，670，417號(hào)、第4，791，192號(hào)和第4，179，337號(hào)。在某些實(shí)施例中，衍生物結(jié)合劑包含以下中的一或多種單甲氧基-聚乙二醇、葡聚糖、纖維素、或其它碳水化合物基聚合物、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)_聚乙二醇、丙二醇同聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)和聚乙烯醇、以及所述聚合物的混合物。在某些實(shí)施例中，一或多種水溶性聚合物隨機(jī)附接至一或多個(gè)側(cè)鏈上。在某些實(shí)施例中，PEG可用于改良諸如抗體等結(jié)合劑的治療能力。某些所述方法論述于(例如)美國(guó)專(zhuān)利第6，133，426號(hào)中，其出于任一目的以引用方式并入本文中。應(yīng)了解，本發(fā)明抗體可具有至少一個(gè)氨基酸取代、缺失、或加入，前提是所述抗體可保留結(jié)合特異性。因此，本發(fā)明范圍涵蓋對(duì)抗體結(jié)構(gòu)進(jìn)行的修飾。這些修飾可包括保守或不保守的氨基酸取代，其不破壞抗體的人類(lèi)TSLP結(jié)合能力。保守氨基酸取代可涵蓋非天然存在的氨基酸殘基，其通常是通過(guò)化學(xué)肽合成而非在生物系統(tǒng)中合成來(lái)納入。這些殘基包括假肽和氨基酸部分的其它反轉(zhuǎn)或倒置形式。保守氨基酸取代也可涉及用標(biāo)準(zhǔn)殘基取代天然氨基酸殘基，從而使得對(duì)所述位置的氨基酸殘基的極性或電荷幾乎沒(méi)有影響或無(wú)影響。非保守取代可能涉及用一類(lèi)氨基酸或氨基酸模擬物的成員置換另一類(lèi)具有不同物理特性(例如尺寸、極性、疏水性、電荷)的成員?？蓪⑺鼋?jīng)取代殘基引入人類(lèi)抗體的與非人類(lèi)抗體同源的各個(gè)區(qū)中，或?qū)⑵湟胨龇肿拥姆峭磪^(qū)中。此外，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可制備在各期望氨基酸殘基處含有單一氨基酸取代的測(cè)試變體。隨后可使用所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的活性分析篩選所述變體?？墒褂盟鲎凅w來(lái)收集關(guān)于適宜變體的信息。例如，若發(fā)現(xiàn)對(duì)特定氨基酸殘基的改變可導(dǎo)致經(jīng)破壞、不期望的降低的、或不適宜的活性，則可排除具有此一改變的變體。換句話說(shuō)，根據(jù)使用所述常規(guī)實(shí)驗(yàn)收集的信息，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定應(yīng)只避免進(jìn)行進(jìn)一步取代或同時(shí)避免其它突變的氨基酸。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員能根據(jù)本文所述使用熟知技術(shù)來(lái)確定多肽的適宜變體。在某些實(shí)施例中，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可通過(guò)靶定據(jù)信對(duì)活性無(wú)重要作用的區(qū)域來(lái)確定分子中可進(jìn)行改變而不破壞活性的適宜區(qū)域。在某些實(shí)施例中，可確定分子中的相似多肽之間的保守殘基和部分。在某些實(shí)施例中，甚至可對(duì)可能對(duì)生物活性或結(jié)構(gòu)具有重要作用的區(qū)域?qū)嵤┍Ｊ氐陌被崛〈?，并且不破壞生物活性或?qū)Χ嚯慕Y(jié)構(gòu)無(wú)不利影響。此外，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可回顧鑒定相似多肽中對(duì)活性或結(jié)構(gòu)具有重要作用的殘基的結(jié)構(gòu)-功能研究。根據(jù)此一比較，可預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)中與相似蛋白質(zhì)中對(duì)活性或結(jié)構(gòu)具有重要作用的氨基酸殘基對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基的重要性。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可選擇化學(xué)上類(lèi)似的氨基酸取代用于所述預(yù)測(cè)的重要氨基酸殘基。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員也可相對(duì)于類(lèi)似多肽中的三維結(jié)構(gòu)來(lái)分析三維結(jié)構(gòu)和氨基酸序列。根據(jù)所述信息，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可預(yù)測(cè)抗體中氨基酸殘基相對(duì)于其三維結(jié)構(gòu)的對(duì)齊。在某些實(shí)施例中，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可選擇不對(duì)經(jīng)預(yù)測(cè)位于蛋白質(zhì)表面上的氨基酸殘基進(jìn)行基團(tuán)改變，因?yàn)樗鰵埢赡苌婕芭c其它分子的重要交互作用。已有多個(gè)科學(xué)出版物涉及對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)。參見(jiàn)繆特J.(MoultJ.)，生物技術(shù)新見(jiàn)(Curr·Op.inBiotech.)，7(4):422_427(1996)；周(Chou)等人，生物化學(xué)(Biochemistry),13(2):222_245(1974)；周等人，生物化學(xué)，113(2):211_222(1974)；周等人，酶學(xué)和相關(guān)分子生物學(xué)領(lǐng)域進(jìn)展(Adv.Enzymol.Relat.AreasMol.Biol.),4745-148(1978)；周等人，生物化學(xué)年鑒(Ann.Rev.Biochem.)，47:251_276；以及周等人，生物物理學(xué)雜志(Biophys.J.)，26:367_384(1979)。此外，當(dāng)前可使用電腦程序來(lái)幫助預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)。預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)的一種方法是基于同源性建模。例如，序列一致性大于30%或相似度大于40%的兩個(gè)多肽或蛋白質(zhì)通常具有類(lèi)似的結(jié)構(gòu)形態(tài)。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)(PDB)最新內(nèi)容已提供更有效的對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)，包括多肽或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中可能的折疊數(shù)量。參見(jiàn)霍爾姆(Holm)等人，核酸研究，27(1):244_247(1999)。有人提出(布倫納(Brenner)等人，結(jié)構(gòu)生物學(xué)新見(jiàn)(Curr·Op.Struct.Biol.)，7(3)=369-376(1997))，在給定多肽或蛋白質(zhì)中的折疊數(shù)量有限，并且一旦分辨出結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵數(shù)量，就可顯著提高結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性。預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)的其它方法包括“線串法(threading)”(瓊斯，D.(Jones,D.)，結(jié)構(gòu)生物學(xué)新見(jiàn)，7(3)377-87(1997)；斯普(Sippl)等人，結(jié)構(gòu)，4(1):15_19(1996))、“特征分析法”(鮑維等人，科學(xué)，253:164-170(1991)；格波斯科夫(Gribskov)等人，酶學(xué)方法，183146-159(1990)；格波斯科夫等人，國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)，84(13):4355_4358(1987))、以及“進(jìn)化連接法(evolutionarylinkage)”(參見(jiàn)霍爾姆，如前所述(1999)；以及布倫納，如前所述(1997))。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，諸如抗體等某些蛋白質(zhì)可發(fā)生多種轉(zhuǎn)譯后修飾。這些修飾的類(lèi)型和程度通常取決于用于表達(dá)所述蛋白的宿主細(xì)胞系以及培養(yǎng)條件。所述修飾可包括糖基化、甲硫氨酸氧化、哌嗪二酮形成、天冬氨酸異構(gòu)化和天冬酰胺脫酰胺作用中的變化。常見(jiàn)修飾是羧基末端堿性殘基(例如賴(lài)氨酸或精氨酸)由于羧肽酶的作用而丟失(如哈里斯，R.J.(Harris,R.J.)，色譜學(xué)雜志(JournalofChromatography)705129-134,1995中所述)。在某些實(shí)施例中，抗體變體包括糖基化變體，其中糖基化位點(diǎn)的數(shù)量和/或類(lèi)型與親代多肽的氨基酸序列相比發(fā)生改變。在某些實(shí)施例中，變體包含數(shù)量大于或小于天然蛋白的N-連接糖基化位點(diǎn)?；蛘?，可消除此序列的取代會(huì)移除現(xiàn)有N-連接碳水化合物鏈。本發(fā)明也提供N-連接碳水化合物鏈的重排，其中消除一或多個(gè)N-連接糖基化位點(diǎn)(通常為天然存在的位點(diǎn))并且產(chǎn)生一或多個(gè)新的N-連接位點(diǎn)。其它優(yōu)選抗體變體包括半胱氨酸變體，其中與親代氨基酸序列相比一或多個(gè)半胱氨酸殘基缺失或經(jīng)另一氨基酸(例如絲氨酸)取代。當(dāng)抗體必須重折疊為生物活性構(gòu)象時(shí)(例如在分離不溶性包涵體之后)可使用半胱氨酸變體。半胱氨酸變體中的半胱氨酸殘基一般少于天然蛋白，并且通常具有相同數(shù)量以使不成對(duì)半胱氨酸所致交互作用最小化。在需要期望氨基酸取代(保守或不保守)時(shí)，可由所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)確定所述取代。在某些實(shí)施例中，可使用氨基酸取代來(lái)確定人類(lèi)TSLP抗體中的重要?dú)埢?，或提高或降低本文所述人?lèi)TSLP抗體的親和性。根據(jù)某些實(shí)施例，優(yōu)選氨基酸取代如下所述其⑴降低對(duì)蛋白酶解的敏感性，(2)降低對(duì)氧化的敏感性，(3)改變形成蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)合親和性，(4)改變結(jié)合親和性，和/或(4)賦予或修改所述多肽的其它物理化學(xué)或功能特性。根據(jù)某些實(shí)施例，可在天然存在序列中(在某些實(shí)施例中，在形成分子間連接的結(jié)構(gòu)域以外的多肽部分中)進(jìn)行單或多氨基酸取代(在某些實(shí)施例中為保守氨基酸取代)。在某些實(shí)施例中，保守的氨基酸取代通常實(shí)質(zhì)上不改變親代序列的結(jié)構(gòu)特征(例如，替代氨基酸不應(yīng)傾向于斷裂存于親代序列中的螺旋或破壞作為親代序列特征的其它類(lèi)型的二級(jí)結(jié)構(gòu))。業(yè)內(nèi)公認(rèn)的多肽二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的實(shí)例闡述于蛋白質(zhì)、結(jié)構(gòu)和分子原理(克雷頓編輯，弗里曼公司，紐約(1984))；蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)介(C.布蘭登和J.圖茲編輯，加蘭出版公司，紐約，N.Y.(1991))；以及桑頓等人，自然354:105(1991)，其各自以引用方式并入本文中。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明抗體可以化學(xué)方式結(jié)合聚合物、脂質(zhì)或其它部分。[1055]此外，抗原結(jié)合蛋白可包含至少一個(gè)本文所述納入生物相容性框架結(jié)構(gòu)中的⑶R。在一實(shí)例中，生物相容性框架結(jié)構(gòu)包含多肽或其足以形成構(gòu)象穩(wěn)定結(jié)構(gòu)支撐或框架或骨架的部分，其能在局部表面區(qū)域中顯示一或多個(gè)結(jié)合抗原的氨基酸序列(例如CDR、可變區(qū)等)。所述結(jié)構(gòu)可為天然存在的多肽或多肽“折疊”(結(jié)構(gòu)基序)，或可具有一或多個(gè)修飾，例如氨基酸相對(duì)于天然存在多肽或折疊的加入、缺失或取代。這些骨架可衍生自任何物種(或不止一個(gè)物種)的多肽，例如人類(lèi)、其它哺乳動(dòng)物、其它脊椎動(dòng)物、無(wú)脊椎動(dòng)物、植物、細(xì)菌或病毒。生物相容性框架結(jié)構(gòu)通?；诔庖咔虻鞍捉Y(jié)構(gòu)域以外的蛋白質(zhì)骨架或主干。例如，可使用基于以下者纖連蛋白、錨蛋白、脂質(zhì)運(yùn)載蛋白、新制癌菌素、細(xì)胞色素b、CPl鋅指、PST1、卷曲螺旋、LACI-DUZ結(jié)構(gòu)域和淀粉酶抑肽結(jié)構(gòu)域(例如，參見(jiàn)虞格仁(Nygren)和烏爾倫(Uhlen)，1997，結(jié)構(gòu)生物學(xué)新見(jiàn)(CurrentOpinioninStructuralBiology),7,463-469)。此外，在另一實(shí)施例中，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，抗原結(jié)合蛋白可包括具有一個(gè)氨基酸取代的重鏈⑶R1、⑶R2、⑶R3、和/或輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3中的一或多者，前提是所述抗體可保留未取代CDR的結(jié)合特異性。抗體中的非CDR部分可為非蛋白分子，其中結(jié)合劑交叉阻斷本文所揭示抗體與人類(lèi)TSLP的結(jié)合和/或抑制TSLP活性?？贵w中的非CDR部分可為非蛋白分子，其中所述抗體與抗體A1-A27中的至少一者在結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)分析中表現(xiàn)針對(duì)人類(lèi)TSLP蛋白的類(lèi)似結(jié)合模式和/或可中和TSLP的活性?？贵w中的非CDR部分可由氨基酸組成，其中所述抗體是重組結(jié)合蛋白或合成肽，并且所述重組結(jié)合蛋白交叉阻斷本文所揭示抗體與人類(lèi)TSLP的結(jié)合，和/或在體外或在體內(nèi)中和TSLP?？贵w中的非CDR部分可由氨基酸組成，其中所述抗體是重組抗體，并且所述重組抗體與抗體A1-A27中至少一者在結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)分析中表現(xiàn)針對(duì)人類(lèi)TSLP多肽的類(lèi)似結(jié)合模式和/或中和TSLP活性。制備抗原結(jié)合蛋白、具體來(lái)說(shuō)制備抗體的方法.包含上述重鏈⑶R1、⑶R2、⑶R3、和/或輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3中一或多者的諸如抗體等抗原結(jié)合蛋白可通過(guò)自含有編碼這些序列的DNA的宿主細(xì)胞表達(dá)來(lái)獲得。編碼各CDR序列的DNA可根據(jù)CDR氨基酸序列來(lái)確定并且根據(jù)需要使用寡核苷酸合成技術(shù)、定點(diǎn)誘變和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)與任何期望抗體可變區(qū)框架以及恒定區(qū)DNA序列一起合成。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可自多種來(lái)源自諸如基因庫(kù)⑧等遺傳序列數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)獲得編碼可變區(qū)框架和恒定區(qū)的DNA。其它實(shí)施例包括嵌合抗體，例如非人類(lèi)(例如鼠類(lèi))單克隆抗體的人類(lèi)化形式。所述人類(lèi)化抗體可通過(guò)已知技術(shù)來(lái)制備，并且可在將抗體投與人類(lèi)時(shí)提供降低免疫原性的優(yōu)勢(shì)。在一實(shí)施例中，人類(lèi)化單克隆抗體包含鼠類(lèi)抗體的可變結(jié)構(gòu)域(或其抗原結(jié)合位點(diǎn)的全部或一部分)和衍生自人類(lèi)抗體的恒定結(jié)構(gòu)域。或者，人類(lèi)化抗體片段可包含鼠類(lèi)單克隆抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)和衍生自人類(lèi)抗體的可變結(jié)構(gòu)域片段(缺少抗原結(jié)合位點(diǎn))。產(chǎn)生嵌合抗體和其它經(jīng)改造單克隆抗體的程序包括以下文獻(xiàn)中所述者里克曼(Riechmann)等人，1988，自然332:323；劉(Liu)等人，1987，美國(guó)科學(xué)院學(xué)報(bào)84:3439；萊瑞克等人，1989，生物技術(shù)7:934；以及溫特(Winter)等人，1993，TIPS14:139。在一實(shí)施例中，嵌合抗體是CDR移植抗體。人類(lèi)化抗體的技術(shù)論述于諸如以下等文獻(xiàn)中美國(guó)專(zhuān)利第5，869，619號(hào)、第5，225，539號(hào)、第5，821，337號(hào)、第5，859，205號(hào)、第6，881，557號(hào)；帕德蘭(Padlan)等人，1995，F(xiàn)ASEBJ.9133-39；以及田村(Tarnura)等人，2000，免疫學(xué)雜志164:1432-41。產(chǎn)生人類(lèi)化抗體的其它技術(shù)闡述于以下文獻(xiàn)中張，W.(Zhang,W.)等人，分子免疫學(xué)(MolecularImmunology).42(12):1445_1451，2005；黃W.(Hwangff.)等人，方法(Methods.)36(1)35-42，2005；達(dá)爾阿夸WF(Dal1，AcquaWF)等人，方法36(1):43_60，2005；以及克拉克，M.(Clark，M)，今日免疫學(xué)(ImmunologyToday).21(8)397-402,2000已研發(fā)出在非人類(lèi)動(dòng)物中生成人類(lèi)抗體或部分人類(lèi)抗體的程序。例如，已制備出通過(guò)多種方式鈍化一或多種內(nèi)源免疫球蛋白基因的小鼠。已可將人類(lèi)免疫球蛋白基因引入所述小鼠中來(lái)替代所述鈍化小鼠基因。在所述動(dòng)物中產(chǎn)生的抗體納入了由引入所述動(dòng)物中的人類(lèi)遺傳物質(zhì)編碼的人類(lèi)免疫球蛋白多肽鏈。在一實(shí)施例中，用(例如)TSLP蛋白對(duì)諸如轉(zhuǎn)基因小鼠等非人類(lèi)動(dòng)物實(shí)施免疫，從而在所述動(dòng)物中生成針對(duì)各種TSLP多肽的抗體。適宜免疫原的實(shí)例闡述于下文實(shí)例中。產(chǎn)生和使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物以供產(chǎn)生人類(lèi)或部分人類(lèi)抗體的技術(shù)的實(shí)例闡述于以下文獻(xiàn)中美國(guó)專(zhuān)利第5，814，318號(hào)、第5，569，825號(hào)和第5，545，806號(hào)；戴維斯(Davis)等人，2003，自轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生人類(lèi)抗體(Productionofhumanantibodiesfromtransgenicmice),羅(Lo)編輯，抗體改造方法禾口規(guī)禾呈(AntibodyEngineering:MethodsandProtocols)，胡馬納出版社(HumanaPress),NJ191-200；科勒曼(Kellermann)等人，2002，生物技術(shù)新見(jiàn)(CurrOpinBiotechnol.)13:593_97；羅塞爾(Russel)等人，2000，感染免疫學(xué)(InfectImmun.)681820-26；加羅(Gallo)等人，2000，歐洲免疫學(xué)雜志(EurJImmun.)30:534-40；戴維斯等人，1999，癌癥轉(zhuǎn)移評(píng)論(CancerMetastasisRev.)18421-25；格林(Green)，1999，免疫方法雜志(JImmunolMethods.)231:11_23；雅各波維次(Jakobovits)，1998，高級(jí)藥物遞送評(píng)論(AdvancedDrugDeliveryReviews)3133-42；格林等人，1998，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志188483-95；雅各波維次A，1998，研究中藥物專(zhuān)家觀點(diǎn)(Exp.Opin.Invest.Drugs.)7607-14；津田(Tsuda)等人，1997，基因組學(xué)(Genomics.)42413-21;門(mén)德斯(Mendez)等人，1997，自然遺傳學(xué)(NatGenet.)15:146_56；雅各波維次，1994，當(dāng)前生物學(xué)(CurrBiol.)4:761_63；奧博恩(Arbones)等人，1994，免疫力(Immunity).1:247_60；格林等人，1994，自然遺傳學(xué)7:13_21；雅各波維次等人，1993，自然.362255-58；雅各波維次等人，1993，美國(guó)科學(xué)院學(xué)報(bào).90:2551_55；陳，J.(Chen,J.)、M.特洛恩斯汀(M.Trounstine)、F.W.沃特(F.W.Alt)、F.楊(F.Young)、C.維善(C.Kurahara)、J.洛靈(J.Loring)、D.胡薩爾(D.Huszar)，“通過(guò)JH基因座的靶定缺失生成的B細(xì)胞缺陷型小鼠中的免疫球蛋白基因重排(ImmunoglobulingenerearrangementinB-celldeficientmicegeneratedbytargeteddeletionoftheJHlocus)，，，國(guó)際免疫學(xué)(InternationalImmunology)5(1993):647_656;晁埃(Choi)等人，1993，自然遺傳學(xué)(NatureGenetics)4:117_23；菲施威德(Fishwild)等人，1996，天然生物技術(shù)14845-51；哈丁(Harding)等人，1995，紐約科學(xué)院年報(bào)(AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences)；郎伯格(Lonberg)等人，1994，自然368:856_59；郎伯格，1994，獲得人類(lèi)單克隆抗體的轉(zhuǎn)基因方法(TransgenicApproachestoHumanMonoclonalAntibodies),實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)手冊(cè)(HandbookofExperimentalPharmacology)，113:49_101；郎伯格等人，1995，國(guó)際免疫學(xué)評(píng)論(InternalReviewofImmunology)13:65_93；紐博格(Neuberger)，1996，天然生物技術(shù)14826；泰勒(Taylor)等人，1992，核酸研究20:6287_95；泰勒等人，1994，國(guó)際免疫學(xué)6579-91；富冢(Tomizuka)等人，1997，自然遺傳學(xué)16133-43；富冢等人，2000，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA)97,122-21；泰倫(Tuaillon)等人，1993，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊90:3720_24；以及泰倫等人，1994，免疫學(xué)雜志152:2912-20。在另一方面中，本發(fā)明提供結(jié)合人類(lèi)TSLP的單克隆抗體。單克隆抗體可使用業(yè)內(nèi)已知的任何技術(shù)來(lái)制造，例如通過(guò)在免疫方案完成后自轉(zhuǎn)基因動(dòng)物收獲永生化脾細(xì)胞來(lái)制造。可使用業(yè)內(nèi)已知的任何技術(shù)使脾細(xì)胞永生化，例如通過(guò)將其與骨髓瘤細(xì)胞融合來(lái)產(chǎn)生雜交瘤。用于產(chǎn)生雜交瘤的融合程序中的骨髓瘤細(xì)胞優(yōu)選地不產(chǎn)生抗體，其具有高融合效率，并且具有使其不能在某些僅支持期望融合細(xì)胞(雜交瘤)生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的酶缺陷。用于小鼠融合中的適宜細(xì)胞系的實(shí)例包括Sp-20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NSl/l.Ag4l、Sp210-Agl4、F0、NS0/U、MPC-ll、MPCll-X45-GTG1.7和S194/5XX0Bui；用于大鼠融合的細(xì)胞系的實(shí)例包括R210.RCY3、Y3-Ag1.2.3、IR983F和4B210?？捎糜诩?xì)胞融合的其它細(xì)胞系是U-266、GM1500-GRG2、LICR-L0N-HMy2和UC729-6。在一實(shí)施例中，雜交瘤細(xì)胞系是通過(guò)以下方式來(lái)產(chǎn)生用TSLP免疫原對(duì)動(dòng)物(例如具有人類(lèi)免疫球蛋白序列的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物)進(jìn)行免疫；自經(jīng)免疫動(dòng)物收獲脾細(xì)胞；將所收獲脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞系融合，由此生成雜交瘤細(xì)胞；自雜交瘤細(xì)胞建立雜交瘤細(xì)胞系，并且鑒定產(chǎn)生可結(jié)合TSLP多肽的抗體的雜交瘤細(xì)胞系。所述雜交瘤細(xì)胞系和其產(chǎn)生的TSLP單克隆抗體涵蓋于本發(fā)明中。雜交瘤細(xì)胞系分泌的單克隆抗體可使用業(yè)內(nèi)已知的任何技術(shù)來(lái)純化?？蛇M(jìn)一步篩選雜交瘤或mAb以鑒定具有特定特性的mAb，例如可阻斷TSLP活性(例如自原代人類(lèi)樹(shù)突細(xì)胞產(chǎn)生骨保護(hù)素(0PG))。所述分析的實(shí)例闡述于下文實(shí)例中。人們也已使用抗體結(jié)合位點(diǎn)中心處互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)的分子進(jìn)化來(lái)分離具有提高親和性的抗體，例如如希爾(Schier)等人，1996，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)263551中所述。因此，所述技術(shù)可用于制備人類(lèi)TSLP抗體。針對(duì)人類(lèi)TSLP的抗原結(jié)合蛋白可用于(例如)在體外或在體內(nèi)檢測(cè)TSLP的存在的分析中。盡管人類(lèi)抗體、部分人類(lèi)抗體或人類(lèi)化抗體可適合于多種應(yīng)用，尤其涉及向人類(lèi)個(gè)體投與抗體的應(yīng)用，但其它類(lèi)型的抗原結(jié)合蛋白也可適合于某些應(yīng)用。本發(fā)明非人類(lèi)抗體可得自(例如)任何產(chǎn)生抗體的動(dòng)物，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、驢、或非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)(例如猴(例如食蟹猴或羅猴)或猿(例如黑猩猩))。本發(fā)明非人類(lèi)抗體可用于(例如)體外應(yīng)用和基于細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用中，或可用于針對(duì)本發(fā)明抗體的免疫應(yīng)答不會(huì)發(fā)生、無(wú)關(guān)緊要、可預(yù)防、無(wú)影響、或被期望的任何其它應(yīng)用中。在一實(shí)施例中，將非人類(lèi)本發(fā)明抗體投與非人類(lèi)個(gè)體。在另一實(shí)施例中，非人類(lèi)抗體在非人類(lèi)個(gè)體中不引發(fā)免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施例中，非人類(lèi)抗體來(lái)自與非人類(lèi)個(gè)體相同的物種，例如將本發(fā)明小鼠抗體投與小鼠。來(lái)自特定物種的抗體可通過(guò)(例如)以下方式來(lái)制備用期望免疫原對(duì)所述物種的動(dòng)物實(shí)施免疫或使用生成所述物種抗體的人工系統(tǒng)(例如生成特定物種抗體的基于細(xì)菌或噬菌體顯示的系統(tǒng))；或?qū)⒁粋€(gè)物種的抗體轉(zhuǎn)化成另一物種的抗體，例如通過(guò)用另一物種的恒定區(qū)替代所述抗體的恒定區(qū)、或通過(guò)替代所述抗體中的一或多個(gè)氨基酸殘基以使其更接近地類(lèi)似于另一物種的抗體序列來(lái)達(dá)成。在一實(shí)施例中，抗體是包含衍生自?xún)蓚€(gè)或更多個(gè)不同物種抗體的氨基酸序列的嵌合抗體?？乖Y(jié)合蛋白可通過(guò)多種習(xí)用技術(shù)中的任一種來(lái)制備。例如，可自天然表達(dá)抗體的細(xì)胞中純化抗體(例如可自產(chǎn)生抗體的雜交瘤中純化抗體)；或使用任何業(yè)內(nèi)已知技術(shù)在重組體表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生。例如，參見(jiàn)單克隆抗體，雜交瘤生物學(xué)分析的新領(lǐng)域(MonoclonalAntibodies,Hybridomas:ANewDimensioninBiologicalAnalyses)，克奈特(Kermet)等人編輯，普萊納姆出版社，紐約(1980)；以及抗體實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)，哈洛和蘭德(Land)編輯，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社，冷泉港，NY，(1988)?？墒褂萌魏螛I(yè)內(nèi)已知的表達(dá)系統(tǒng)來(lái)制備本發(fā)明重組多肽。一般來(lái)說(shuō)，用包含編碼期望多肽的DNA的重組表達(dá)載體來(lái)轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞?？刹捎玫乃拗骷?xì)胞為原核生物、酵母或高等真核細(xì)胞。原核生物包括革蘭氏(gram)陰性或革蘭氏陽(yáng)性有機(jī)體，例如大腸桿菌或桿菌。高等真核細(xì)胞包括昆蟲(chóng)細(xì)胞和已建立的哺乳動(dòng)物源細(xì)胞系。適宜哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的實(shí)例包括猴腎細(xì)胞的C0S-7系(ATCCCRL1651)(格魯茲曼等人，1981，細(xì)胞23175)、L細(xì)胞、293細(xì)胞、C127細(xì)胞、3T3細(xì)胞(ATCCCCL163)、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CH0)細(xì)胞、海拉細(xì)胞、BHK(ATCCCRL10)細(xì)胞系、和得自非洲綠猴腎細(xì)胞系CVI的CVI/EBNA細(xì)胞系(ATCCCCL70)，如麥克馬汗等人，1991，歐洲分子生物學(xué)協(xié)會(huì)雜志102821中所述。用于細(xì)菌、真菌、酵母、和哺乳動(dòng)物細(xì)胞宿主的適宜克隆和表達(dá)載體由鮑維斯(Pouwels)等人來(lái)闡述(克隆載體實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(CloningVectors:ALaboratoryManual)，艾斯維爾(Elsevier)，紐約，1985)。可在促進(jìn)多肽表達(dá)的條件下培養(yǎng)經(jīng)轉(zhuǎn)化細(xì)胞，并且通過(guò)習(xí)用蛋白質(zhì)純化程序來(lái)回收多肽。一種所述純化程序闡述于下文實(shí)例中。欲用于本文中的多肽包括實(shí)質(zhì)上同質(zhì)的重組哺乳動(dòng)物抗TSLP抗體多肽，其實(shí)質(zhì)上不含內(nèi)源污染物。可通過(guò)多種已知技術(shù)中的任一種來(lái)制備并篩選抗原結(jié)合蛋白以達(dá)成期望特性。某些技術(shù)涉及分離編碼目標(biāo)抗原結(jié)合蛋白(例如TSLP抗體)多肽鏈(或其部分)的核酸，以及通過(guò)重組DNA技術(shù)來(lái)處理所述核酸。可使核酸與另一目標(biāo)核酸融合，或?qū)⑵涓淖?例如通過(guò)誘變或其它習(xí)用技術(shù))以(例如)加入、缺失、或取代一或多個(gè)氨基酸殘基。單鏈抗體可通過(guò)用氨基酸橋(短肽連接體)連接重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(Fv區(qū))片段而產(chǎn)生單多肽鏈來(lái)形成。所述單鏈Fv(SCFv)已可通過(guò)將編碼肽連接體的DNA融合在編碼兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域多肽久和VH)的DNA之間來(lái)制備?？墒顾枚嚯淖陨碚郫B以形成抗原結(jié)合單體，或其可形成多聚體(例如二聚體、三聚體、或四聚體)，根據(jù)兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域之間柔性連接體的長(zhǎng)度而定(考特(Kortt)等人，1997，保護(hù)工程(Prot.Eng.)10423’考特等人，2001，分子生物學(xué)工程(Biomol.Eng.)18:95-108)。通過(guò)組合包含不同\和VH的多肽，可形成結(jié)合不同表位的多聚體scFv(克日康(Kriangkum)等人，2001，分子生物學(xué)工程1831-40)。所研發(fā)用于產(chǎn)生單鏈抗體的技術(shù)包括闡述于以下文獻(xiàn)中者美國(guó)專(zhuān)利第4，946，778號(hào)；伯德，1988，科學(xué)242423；休斯頓等人，1988，美國(guó)科學(xué)院學(xué)報(bào)855879；沃德等人，1989，自然334544；迪格夫(deGraaf)等人，2002，分子生物學(xué)方法(MethodsMolBiol.)178:379-87。衍生自本文所提供抗體的單鏈抗體包括(但不限于)包含以下可變結(jié)構(gòu)域組合的scFv:L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、和L27H27，其涵蓋于本發(fā)明中。[1074]在合成后，編碼本發(fā)明抗體或其片段的DNA可根據(jù)用于核酸切除、連接、轉(zhuǎn)化、和轉(zhuǎn)染的多種熟知程序中的任一種使用任何數(shù)量的已知表達(dá)載體來(lái)增殖或表達(dá)。因此，在某些實(shí)施例中，優(yōu)選地在諸如大腸桿菌(Escherichiacoli)等原核宿主中表達(dá)抗體片段(例如，參見(jiàn)普拉克松(Pluckthun)等人，1989，酶學(xué)方法，178:497_515)。在某些其它實(shí)施例中，優(yōu)選地可在真核宿主細(xì)胞中表達(dá)抗體或其片段，包括酵母(例如釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)禾口畢赤酵母(Pichiapastoris))、動(dòng)物細(xì)胞(包括哺乳動(dòng)物細(xì)胞)或植物細(xì)胞。適宜動(dòng)物細(xì)胞的實(shí)例包括(但不限于)骨髓瘤(例如小鼠NS0系)、COS、CH0、或雜交瘤細(xì)胞。植物細(xì)胞的實(shí)例包括煙草、玉米、大豆、和稻細(xì)胞。可制備一或多種含有編碼抗體可變和/或恒定區(qū)的DNA的可復(fù)制表達(dá)載體并將其用于轉(zhuǎn)化適宜細(xì)胞系，例如非產(chǎn)生型骨髓瘤細(xì)胞系(例如小鼠NS0系)或可發(fā)生抗體產(chǎn)生的細(xì)菌(例如大腸桿菌)。為獲得有效轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯，各載體中的DNA序列應(yīng)包括適宜調(diào)節(jié)序列，尤其是與可變結(jié)構(gòu)域序列可操作連接的啟動(dòng)子和前導(dǎo)子序列。以此方式產(chǎn)生抗體的特定方法一般為人所熟知并且經(jīng)常使用。例如，以下文獻(xiàn)中闡述的基礎(chǔ)分子生物學(xué)程序瑪尼蒂斯(Maniatis)等人(分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)，第2版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室，紐約，1989;也參見(jiàn)瑪尼蒂斯等人，第3版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室，紐約，(2001))。可如桑格爾(Sanger)等人(PNAS74:5463，(1977))和阿莫仙國(guó)際pic測(cè)序手冊(cè)(AmershamInternationalpicsequencinghandbook)中所述來(lái)實(shí)施DNA測(cè)序，并且可*艮據(jù)業(yè)內(nèi)己知方法來(lái)實(shí)施定點(diǎn)誘變(克萊默(Kramer)等人，核酸研究12:9441，(1984)；昆克爾(Kunkel)美國(guó)科學(xué)院學(xué)報(bào)82=488-92(1985)；昆克爾等人，酶學(xué)方法154:367_82(1987)；盎格魯生物技術(shù)公司手冊(cè)(AnglianBiotechnologyLtd.Handbook))。此外，多個(gè)出版物闡述適合通過(guò)處理DNA、產(chǎn)生表達(dá)載體、和轉(zhuǎn)化并培養(yǎng)適宜細(xì)胞來(lái)制備抗體的技術(shù)(孟坦A(M0imtainA)和愛(ài)戴爾，JR(Adair,JR)，生物技術(shù)和遺傳工程評(píng)論(BiotechnologyandGeneticEngineeringReviews)(湯姆斯，MP(Tombs,MP)編輯，10，第1章，1992，應(yīng)特色普特(Interc印t)，安多夫，UK)；“當(dāng)前分子生物學(xué)規(guī)程”，1999，F(xiàn).M.奧斯貝編輯，威利國(guó)際科技公司(WileyInterscience),紐約)。倘若期望改良含有一或多個(gè)上述⑶R的本發(fā)明抗體的親和性，可通過(guò)多種親和性成熟方案來(lái)達(dá)成，包括維持CDR(楊(Yang)等人，分子生物學(xué)雜志，254，392-403，1995)、鏈改組(馬克思(Marks)等人，生物技術(shù)，10,779-783，1992)、使用大腸桿菌突變株(魯爾(Low)等人，分子生物學(xué)雜志，250，350-368，1996)、DNA改組(帕頓(Patten)等人，生物技術(shù)新見(jiàn)，8，724-733，1997)、噬菌體展示(湯普森(Thompson)等人，分子生物學(xué)雜志，256，7-88，1996)和PCR(克萊默(Crameri)等人，自然，391，288-291，1998)。所有這些親和性成熟方法都由沃恩(Vaughan)等人加以論述(天然生物技術(shù)，16，535-539，1998)。其它本發(fā)明抗體可通過(guò)闡述于本文中并且業(yè)內(nèi)已知的習(xí)用免疫和細(xì)胞融合程序來(lái)獲得。本發(fā)明單克隆抗體可使用多種已知技術(shù)來(lái)生成。一般來(lái)說(shuō)，結(jié)合特定抗原的單克隆抗體可通過(guò)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來(lái)獲得(例如，參見(jiàn)科勒(Kohler)等人，自然256:495，1975；克利根等人編輯，當(dāng)前免疫學(xué)規(guī)程，12.5.12.6.7(約翰威利出版公司1991)；美國(guó)專(zhuān)利第RE32，011號(hào)、第4，902，614號(hào)、第4，543，439號(hào)和第4，411，993號(hào)；單克隆抗體，雜交瘤生物學(xué)分析的新領(lǐng)域，普萊納姆出版社，克奈特、麥克恩(McKearn)和貝克托爾(Bechtol)編輯(1980)；以及抗體實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)，哈洛和萊恩編輯，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社(1988)；皮克斯利(Picksley)等人，“針對(duì)大腸桿菌所表達(dá)蛋白質(zhì)的單克隆抗體的產(chǎn)生(ProductionofmonoclonalantibodiesagainstproteinsexpressedinE.coli)DNA克隆2表達(dá)系統(tǒng)(DNACloning2ExpressionSystems)，第2版，格羅夫(Glover)等人編輯，第93頁(yè)(牛津大學(xué)出版社(OxfordUniversityPress)1995))?？墒褂萌魏芜m宜標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)自其衍生抗體片段，例如蛋白水解消化或任選地在蛋白水解消化(例如使用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶)后進(jìn)行二硫鍵的溫和還原和烷基化?；蛘?，所述片段也可通過(guò)本文所述重組遺傳改造技術(shù)來(lái)生成。單克隆抗體可通過(guò)以下方式來(lái)獲得根據(jù)業(yè)內(nèi)已知并且闡述于本文中的方法向動(dòng)物(例如大鼠、倉(cāng)鼠、兔或優(yōu)選為小鼠，包括(例如)業(yè)內(nèi)已知的轉(zhuǎn)基因小鼠或基因剔除小鼠)注射免疫原包含SEQIDNO2的人類(lèi)TSLP、本文所述其它TSLP多肽序列、或其片段。可在初始注射后和/或加強(qiáng)注射后通過(guò)獲取血清樣品并使用業(yè)內(nèi)已知并且闡述于本文中的若干種免疫檢測(cè)方法中的任一種檢測(cè)結(jié)合人類(lèi)TSLP或其片段的抗體的存在來(lái)監(jiān)測(cè)特定抗體產(chǎn)生的存在。自產(chǎn)生期望抗體的動(dòng)物移出淋巴樣細(xì)胞(最常用為脾細(xì)胞或淋巴結(jié)細(xì)胞)以獲得B-淋巴細(xì)胞。隨后使B淋巴細(xì)胞與藥物致敏骨髓瘤細(xì)胞融合配偶體、優(yōu)選地與經(jīng)免疫動(dòng)物同基因并且任選地具有其它期望特性(例如不能表達(dá)內(nèi)源Ig基因產(chǎn)物，例如P3X63-Ag8.653(ATCC編號(hào)CRL1580)；NS0、SP20)的融合配偶體融合，從而產(chǎn)生不死真核細(xì)胞系雜交瘤。可將淋巴樣細(xì)胞(例如脾細(xì)胞)和骨髓瘤細(xì)胞與諸如聚乙二醇等膜融合促進(jìn)劑或非離子型去污劑合并數(shù)分鐘，且隨后以較低密度平鋪在支持雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)但不支持未融合骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基上。優(yōu)選選擇培養(yǎng)基是HAT(次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸苷)。在培養(yǎng)足夠時(shí)間(通常為約1至2周)后，觀察細(xì)胞群落。分離單一群落，并且可使用業(yè)內(nèi)已知并且闡述于本文中的多種免疫分析中的任一種來(lái)測(cè)試細(xì)胞所產(chǎn)生抗體對(duì)人類(lèi)TSLP的結(jié)合活性?？寺‰s交瘤(例如通過(guò)有限稀釋克隆或通過(guò)軟瓊脂噬菌斑分離)，并且選擇并培養(yǎng)產(chǎn)生人類(lèi)TSLP特異性抗體的陽(yáng)性純系?？勺噪s交瘤培養(yǎng)物的上清液分離來(lái)自雜交瘤培養(yǎng)物的單克隆抗體。產(chǎn)生鼠類(lèi)單克隆抗體的替代性方法是將雜交瘤細(xì)胞注射至同基因小鼠的腹腔中，例如已經(jīng)處理(例如姥鮫烷(pristane)初免)以促進(jìn)形成含有單克隆抗體的腹水的小鼠。可通過(guò)多種業(yè)內(nèi)已接受的技術(shù)來(lái)分離并純化單克隆抗體。所述分離技術(shù)包括使用蛋白質(zhì)A瓊脂糖的親和色譜、尺寸排阻色譜、和離子交換色譜(例如，參見(jiàn)克利根，第2.7.1-2.7.12頁(yè)和第2.9.1-2.9.3頁(yè)；貝恩(Baines)等人，“免疫球蛋白G(IgG)的純化(PurificationofImmunoglobulinG(IgG))”，分子生物學(xué)方法(MethodsinMolecularBiology)，第10卷，第79-104頁(yè)(胡馬納出版公司，1992))。可通過(guò)使用根據(jù)抗體的特定特性(例如重鏈或輕鏈同種型、結(jié)合特異性等)選擇的適宜配體的親和色譜來(lái)純化單克隆抗體。固定在固體載體上的適宜配體的實(shí)例包括蛋白質(zhì)A、蛋白質(zhì)G、抗恒定區(qū)(輕鏈或重鏈)抗體、抗獨(dú)特型抗體、和TSLP或其片段或變體。本發(fā)明抗體也可為全人類(lèi)單克隆抗體。全人類(lèi)單克隆抗體可通過(guò)任何數(shù)量的上述技術(shù)來(lái)生成。所述方法另外包括(但不限于)人類(lèi)外周血細(xì)胞(例如含有B淋巴細(xì)胞)的愛(ài)潑斯坦巴爾病毒(EpsteinBarrVirus)(EBV)轉(zhuǎn)化、人類(lèi)B細(xì)胞的體外免疫、融合來(lái)自攜帶經(jīng)插入人類(lèi)免疫球蛋白基因的經(jīng)免疫轉(zhuǎn)基因小鼠的脾細(xì)胞、自人類(lèi)免疫球蛋白V區(qū)噬菌并且基于本文揭示內(nèi)容的其它程序。例如，可自已經(jīng)改造可響應(yīng)抗原攻擊產(chǎn)生特定人類(lèi)抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠獲得全人類(lèi)單克隆抗體。自轉(zhuǎn)基因小鼠獲得全人類(lèi)抗體的方法闡述于(例如)以下文獻(xiàn)中格林等人，自然遺傳學(xué)7:13，1994；郎伯格等人，自然368=856,1994；泰勒等人，國(guó)際免疫學(xué)6=579,1994；美國(guó)專(zhuān)利第5，877，397號(hào)；布呂格曼(Bruggemann)等人，1997生物技術(shù)新見(jiàn)8:455_58；雅各波維次等人，1995國(guó)家科學(xué)院年報(bào)764:525-35。在此技術(shù)中，將人類(lèi)重鏈和輕鏈基因座元件引入得自胚胎干細(xì)胞系并且內(nèi)源重鏈和輕鏈基因座含有靶定破壞的小鼠株系中(也可參見(jiàn)布呂格曼等人，生物技術(shù)新見(jiàn)8455-58(1997))。例如，人類(lèi)免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因可為小基因構(gòu)成物、或酵母人工染色體上的轉(zhuǎn)基因座，其在小鼠淋巴樣組織中發(fā)生B細(xì)胞特異性DNA重排和超突變。全人類(lèi)單克隆抗體可通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠實(shí)施免疫來(lái)獲得，其隨后可產(chǎn)生人類(lèi)TSLP特異性人類(lèi)抗體?？筛鶕?jù)本文所述方法使用經(jīng)免疫轉(zhuǎn)基因小鼠的淋巴樣細(xì)胞來(lái)產(chǎn)生分泌人類(lèi)抗體的雜交瘤。也可自經(jīng)免疫動(dòng)物血液中獲得含有全人類(lèi)抗體的多克隆血清。生成本發(fā)明人類(lèi)抗體的一種實(shí)例性方法包括通過(guò)EBV轉(zhuǎn)化使人類(lèi)外周血細(xì)胞永生化，如例如美國(guó)專(zhuān)利第4，464，456號(hào)中所述。此一產(chǎn)生特異性結(jié)合人類(lèi)TSLP的單克隆抗體的永生化B細(xì)胞系(或類(lèi)淋巴母細(xì)胞系)可通過(guò)諸如ELISA等本文所提供免疫檢測(cè)方法來(lái)鑒定，并且隨后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)克隆技術(shù)來(lái)分離。產(chǎn)生抗TSLP抗體的類(lèi)淋巴母細(xì)胞系的穩(wěn)定性可根據(jù)業(yè)內(nèi)已知方法通過(guò)融合經(jīng)轉(zhuǎn)化細(xì)胞系與鼠類(lèi)骨髓瘤而產(chǎn)生小鼠_人類(lèi)雜合體細(xì)胞系來(lái)改良(例如，參見(jiàn)哥拉斯科(Glasky)等人，雜交瘤(Hybridoma),8:377_89(1989))。生成人類(lèi)單克隆抗體的另一方法是體外免疫，其包括用人類(lèi)TSLP對(duì)人類(lèi)脾B細(xì)胞實(shí)施初免，隨后融合初免B細(xì)胞與異種雜合融合配偶體。例如，參見(jiàn)鮑納(Boerner)等人，1991免疫學(xué)雜志147:86-95。在某些實(shí)施例中，選擇產(chǎn)生抗人類(lèi)TSLP抗體的B細(xì)胞并根據(jù)業(yè)內(nèi)已知并且闡述于本文中的分子生物學(xué)技術(shù)自所述B細(xì)胞克隆輕鏈和重鏈可變區(qū)(W092/02551；美國(guó)專(zhuān)利第5，627，052號(hào)；拜布庫(kù)克(Babcook)等人，美國(guó)科學(xué)院學(xué)報(bào)93:7843_48(1996))?？赏ㄟ^(guò)選擇產(chǎn)生特異性結(jié)合TSLP的抗體的細(xì)胞自脾、淋巴結(jié)、或外周血樣品分離來(lái)自經(jīng)免疫動(dòng)物的B細(xì)胞。也可自人類(lèi)、例如自外周血樣品分離B細(xì)胞。檢測(cè)正在產(chǎn)生具有期望特異性的抗體的單一B細(xì)胞的方法為業(yè)內(nèi)所熟知，例如噬菌斑形成、熒光活化細(xì)胞分選、體外刺激后檢測(cè)特異性抗體、和諸如此類(lèi)。選擇產(chǎn)生特異性抗體的B細(xì)胞的方法包括(例如)在含有人類(lèi)TSLP的軟瓊脂中制備B細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液。B細(xì)胞所產(chǎn)生特異性抗體與抗原的結(jié)合導(dǎo)致形成復(fù)合物，其可為可見(jiàn)免疫沉淀物。在選擇產(chǎn)生期望抗體的B細(xì)胞后，可根據(jù)業(yè)內(nèi)已知并且闡述于本文中的方法通過(guò)分離并擴(kuò)增DNA或mRNA來(lái)克隆特異性抗體基因。獲得本發(fā)明抗體的另一種方法是噬菌體顯示。例如，參見(jiàn)溫特等人，1994免疫學(xué)年鑒(Annu.Rev.Immunol.)12:433_55；波頓(Burton)等人，1994免疫學(xué)進(jìn)展(Adv.Immunol.)57:191_280?？稍谑删w載體中產(chǎn)生人類(lèi)或鼠類(lèi)免疫球蛋白可變區(qū)基因組合文庫(kù)，所述噬菌體載體可經(jīng)篩選以選擇特異性結(jié)合TSLP或其變體或片段的Ig片段(Fab、Fv、sFv、或其多聚體)。例如，參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第5，223，409；休斯(Huse)等人，1989科學(xué)246:1275-81；賽斯綴(Sastry)等人，美國(guó)科學(xué)院學(xué)報(bào)86:5728_32(1989)；奧汀密斯(Alting-Mees)等人，分子生物學(xué)策略(StrategiesinMolecularBiology)3:1_9(1990)；康(Kang)等人，1991美國(guó)科學(xué)院學(xué)報(bào)88:4363_66；霍根布姆(Hoogenboom)等人，1992，分58子生物學(xué)雜志，227381-388；斯古布克(Schlebusch)等人，1997，雜交瘤16:47_52和其中所引用的參考文獻(xiàn)。例如，可將含有多個(gè)編碼Ig可變區(qū)片段的多核苷酸序列的文庫(kù)插入絲狀噬菌體(例如M13或其變體)的基因組中，并且其位于編碼噬菌體外殼蛋白的序列的框架中。融合蛋白可為外殼蛋白與輕鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域和/或與重鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域的融合體。根據(jù)某些實(shí)施例，也可在噬菌體顆粒上顯示免疫球蛋白Fab片段(例如，參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第5，698，426號(hào))。也可在入噬菌體中使用(例如)入ImmunoZap(H)和入ImmunoZap(L)載體(絲綴特公司(Stratagene)，拉荷亞市，加利福尼亞)制備重鏈和輕鏈免疫球蛋白cDNA表達(dá)文庫(kù)。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，自B細(xì)胞群分離mRNA，并使用其在\ImmunoZap(H)和\ImmunoZap(L)載體中產(chǎn)生重鏈和輕鏈免疫球蛋白cDNA表達(dá)文庫(kù)。這些載體可單獨(dú)篩選或共表達(dá)以形成Fab片段或抗體(參見(jiàn)休斯等人，如前所述；也可參見(jiàn)賽斯綴等人，如前所述)。隨后可將陽(yáng)性噬菌斑轉(zhuǎn)化為非溶解性質(zhì)粒，其使得可自大腸桿菌表達(dá)高水平單克隆抗體片段。在一實(shí)施例中，在雜交瘤中，使用核苷酸引物來(lái)擴(kuò)增表達(dá)目標(biāo)單克隆抗體的基因的可變區(qū)。這些引物可由所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)合成，或可自市場(chǎng)來(lái)源購(gòu)得。(例如，參見(jiàn)絲綴特公司(拉荷亞市，加利福尼亞)，其銷(xiāo)售用于小鼠和人類(lèi)可變區(qū)的引物，尤其包括用于VHa、VHb、VH。、VHd、CHI、八和Q區(qū)的引物)。這些引物可用于擴(kuò)增重鏈或輕鏈可變區(qū)，隨后可將其分別插入諸如ImmUn0ZAPTMH或ImmimoZAPL(絲綴特公司)等載體中。隨后可將這些載體引入基于大腸桿菌、酵母、或哺乳動(dòng)物的表達(dá)系統(tǒng)中?？墒褂眠@些方法產(chǎn)生大量含有\(zhòng)和\結(jié)構(gòu)域融合體的單鏈蛋白(參見(jiàn)伯德等人，科學(xué)242=423-426,1988)。在使用上述免疫技術(shù)和其它技術(shù)中的任一者獲得產(chǎn)生本發(fā)明抗體的細(xì)胞后，可通過(guò)根據(jù)本文所述標(biāo)準(zhǔn)程序自其分離并擴(kuò)增DNA或mRNA來(lái)克隆特異性抗體基因?？蓪?duì)自其產(chǎn)生的抗體進(jìn)行測(cè)序，并且如前所述對(duì)所鑒定⑶R和編碼所述⑶R的DNA進(jìn)行處理，從而生成本發(fā)明其它抗體。本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白在一種本文所述細(xì)胞基分析中和/或本文所述體內(nèi)分析中優(yōu)選地調(diào)節(jié)TSLP活性，和/或交叉阻斷一種本申請(qǐng)案所述抗體的結(jié)合，和/或可被一種本申請(qǐng)案中所述抗體交叉阻斷與TSLP的結(jié)合。尤其可用者是與本文所述實(shí)例性抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)的抗原結(jié)合蛋白，即其交叉阻斷一種本申請(qǐng)案所述實(shí)例性抗體的結(jié)合，并且可被一種所述實(shí)例性抗體交叉阻斷與TSLP的結(jié)合。因此，所述結(jié)合劑可使用本文所述分析來(lái)鑒定。在某些實(shí)施例中，通過(guò)首先鑒定如下抗體來(lái)生成抗體其結(jié)合TSLP和/或在本文所述細(xì)胞基分析中中和TSLP，和/或交叉阻斷本申請(qǐng)案所述抗體，和/或可被一種本申請(qǐng)案所述抗體交叉阻斷與TSLP的結(jié)合。然后使用該等抗體的CDR區(qū)，將其插入適宜生物相容性框架中以生成抗原結(jié)合蛋白。所述結(jié)合劑的非CDR部分可由氨基酸組成，或可為非蛋白質(zhì)分子。本文所述分析使得可表征結(jié)合劑。優(yōu)選地，本發(fā)明結(jié)合劑是本文所定義抗體。本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白包括與本文所述抗體結(jié)合相同表位者。如實(shí)例9中所述，表位可為結(jié)構(gòu)性或功能性表位。結(jié)構(gòu)性表位可視為靶中由抗體覆蓋的區(qū)塊。功能性表位是結(jié)構(gòu)性表位的亞組并且包含那些直接促進(jìn)交互作用(例如氫鍵、離子交互作用)親和性的殘基。一種確定抗體表位的方法是在靶分子中使用掃描突變并測(cè)量突變對(duì)結(jié)合的影響。在給定抗體結(jié)合區(qū)三維結(jié)構(gòu)的情況下，表位中的突變可降低或增強(qiáng)抗體與突變靶的結(jié)合親和性。[1090]抗原結(jié)合蛋白可通過(guò)其表位來(lái)定義。如表6中所示，盡管抗體都可結(jié)合TSLP，但TSLP中某些殘基的突變對(duì)其影響各不相同，此表明其各自的表位不完全重疊。優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白包括那些共享本文所述參照抗體的至少一部分結(jié)構(gòu)性表位者。例如，優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白是與A2共享至少一部分相同結(jié)構(gòu)性表位者。此情況可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變K67E、K97E、K98E、R100E、K101E或K103E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性增強(qiáng)來(lái)證實(shí)。此情況也可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變K21E、T25R、S28R、S64R或K73E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性降低來(lái)證實(shí)。盡管某些突變對(duì)抗原結(jié)合蛋白和A2的影響類(lèi)似并且其它突變的影響不同，但TSLP中某些殘基的突變對(duì)抗原結(jié)合蛋白與A2的影響之間的一致性越高，抗原結(jié)合蛋白與參照抗體共享結(jié)構(gòu)性表位的程度也就越高。另一優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白是與A4共享至少一部分相同結(jié)構(gòu)性表位者。此情況可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變K97E、K98E、R100E、K101E或K103E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性增強(qiáng)來(lái)證實(shí)。此情況也可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變K10E、A14R、K21E、D22R、K73E、K75E或A76R時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性降低來(lái)證實(shí)。另一優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白是與A5共享至少一部分相同結(jié)構(gòu)性表位者。此情況可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變K12E、D22R、S40R、R122E、m24E、R125E或K129E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性降低來(lái)證實(shí)。另一優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白是與A6共享至少一部分相同結(jié)構(gòu)性表位者。此情況可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變S40R、S42R、H46R、R122E或K129E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性降低來(lái)證實(shí)。另一優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白是與A7共享至少一部分相同結(jié)構(gòu)性表位者。此情況可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變K101E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性增強(qiáng)來(lái)證實(shí)。此情況也可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變D2R、T4R、D7R、S42R、H46R、T49R、E50R、Q112R、R122E、R125E或K129E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性降低來(lái)證實(shí)。另一優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白是與A10共享至少一部分相同結(jié)構(gòu)性表位者。此情況可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變K97E、K98E、R100E、K101E或K103E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性增強(qiáng)來(lái)證實(shí)。此情況也可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變N5R、S17R、T18R、K21E、D22R、T25R、T33R、H46R、A63R、S64R、A66R、E68R、K73E、K75E、A76R、A92R、T93R、Q94R或A95R時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性降低來(lái)證實(shí)。另一優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白是與A21共享至少一部分相同結(jié)構(gòu)性表位者。此情況可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變K97E、K98E、R100E、K101E或K103E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性增強(qiáng)來(lái)證實(shí)。此情況也可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變K21E、K21R、D22R、T25R、T33R、S64R、K73E、K75E、E111R或S114R時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性降低來(lái)證實(shí)。另一優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白是與A23共享至少一部分相同結(jié)構(gòu)性表位者。此可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變K67E、K97E、K98E、R100E、K101E或K103E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性增強(qiáng)來(lái)證實(shí)。此情況也可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變E9R、K10E、K12E、A13R、S17R、S20R、K21E、K21R、K73E、K75E、N124E或R125E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性降低來(lái)證實(shí)。另一優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白是與A26共享至少一部分相同結(jié)構(gòu)性表位者。此情況可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變K97E、K98E、R100E、K101E或K103E時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性增強(qiáng)來(lái)證實(shí)。此情況也可通過(guò)當(dāng)TSLP具有突變A14R、K21E、D22R、A63R、S64R、K67E、K73E、A76R、A92R或A95R時(shí)與野生型TSLP相比結(jié)合親和性降低來(lái)證實(shí)。對(duì)影響與抗體結(jié)合的突變的比較說(shuō)明，TSLP中的某些殘基易于影響抗體結(jié)合TSLP和阻斷TSLP活性的能力。所述殘基包括K21、D22、K73和K129。因此，優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白包括那些與野生型TSLP的親和性高于與包含突變K21E的TSLP的親和性者、那些與野生型TSLP的親和性高于與包含突變D21R的TSLP的親和性者、那些與野生型TSLP的親和性高于與包含突變K73E的TSLP的親和性者、以及那些與野生型TSLP的親和性高于與包含突變K129E的TSLP的親和性者。此外，許多本文所述實(shí)例性抗原結(jié)合蛋白都具有以下特性當(dāng)位置97-103處的氨基酸堿性區(qū)塊變?yōu)樗嵝园被釙r(shí)，與TSLP的親和性增強(qiáng)。在一方面中，本發(fā)明提供經(jīng)分離核酸分子。核酸包含(例如)編碼全部或部分抗原結(jié)合蛋白(例如本發(fā)明抗體的一個(gè)或兩個(gè)鏈、或其片段、衍生物、突變蛋白質(zhì)或變體)的多核苷酸；足以用作用于鑒定、分析、突變或擴(kuò)增編碼多肽的多核苷酸的雜交探針、PCR引物或測(cè)序引物的多核苷酸；抑制多核苷酸表達(dá)的反義核酸；以及上述核酸的互補(bǔ)序列。核酸可具有任何長(zhǎng)度。其長(zhǎng)度可為(例如)5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1，000,1,500,3,000,5,000或更多個(gè)核苷酸，和/或可包含一或多個(gè)諸如調(diào)節(jié)序列等額外序列，和/或?yàn)檩^大核酸(例如載體)的一部分。核酸可為單鏈或雙鏈核酸并且可包含RNA和/或DNA核苷酸以及其人工變體(例如肽核酸)?？勺砸呀?jīng)TSLP抗原免疫的小鼠B細(xì)胞分離編碼抗體多肽(例如重鏈或輕鏈、僅可變結(jié)構(gòu)域、或全長(zhǎng))的核酸?？赏ㄟ^(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)等習(xí)用程序來(lái)分離核酸。編碼重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的核酸序列展示于上文中。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，由于遺傳密碼具有簡(jiǎn)并性，本文所揭示各多肽序列是由大量其它核酸序列來(lái)編碼的。本發(fā)明提供編碼本發(fā)明各抗原結(jié)合蛋白的各簡(jiǎn)并核苷酸序列。本發(fā)明另外提供在特定雜交條件下與其它核酸(例如包含A1-A27中任一者的核苷酸序列的核酸)雜交的核酸。雜交核酸的方法為業(yè)內(nèi)所熟知。例如，參見(jiàn)當(dāng)前分子生物學(xué)規(guī)程，約翰威利出版公司，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6。如本文所定義，中等嚴(yán)格雜交條件使用含有5X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC).O.5%SDSU.OmMEDTA(pH8.0)的預(yù)洗溶液、含有約50%甲酰胺、6XSSC的雜交緩沖液、以及55°C的雜交溫度(或其它類(lèi)似雜交溶液，例如含有約50%甲酰胺者，并且使用42°C的雜交溫度)，并且洗滌條件為60°C、0.5XSSC、0.1%SDS。嚴(yán)格雜交條件在6XSSC和45°C下雜交，隨后在0.1XSSC.0.2%SDS和68°C的條件下洗滌一或多次。此外，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可操縱雜交和/或洗滌條件以提高或降低雜交嚴(yán)格性，從而使得所包含核苷酸序列至少65、70、75、80、85、90、95、98或99%彼此相同的核酸通常仍可相互雜交。影響雜交條件選擇的基本參數(shù)和設(shè)計(jì)適宜條件的指導(dǎo)闡述于(例如)以下文獻(xiàn)中薩姆布魯克、福里茨赫(Fritsch)和瑪尼蒂斯(1989，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社，冷泉港，N.Y.，第9章和第11章；和當(dāng)前分子生物學(xué)規(guī)程，1995，奧斯貝等人編輯，約翰威利出版公司，第2.10節(jié)和第6.3-6.4節(jié))，并且可由所屬領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)(例如)DNA的長(zhǎng)度和/或堿基組成容易地確定?？赏ㄟ^(guò)突變向核酸中引入改變，由此在其所編碼多肽(例如抗原結(jié)合蛋白)的氨61基酸序列中產(chǎn)生改變。可使用任何業(yè)內(nèi)已知技術(shù)來(lái)引入突變。在一實(shí)施例中，使用(例如)定點(diǎn)誘變方案來(lái)一或多個(gè)特定氨基酸殘基。在另一實(shí)施例中，使用(例如)隨機(jī)誘變方案來(lái)改變一或多個(gè)隨機(jī)選擇的殘基。無(wú)論采用何種制備方式，都可表達(dá)突變體多肽并針對(duì)期望特性來(lái)篩選?？蓪⑼蛔円牒怂嶂卸伙@著改變其所編碼多肽的生物活性。例如，可實(shí)施核苷酸取代，此在非必需氨基酸殘基處導(dǎo)致氨基酸取代。在一實(shí)施例中，使本文所提供A1-A27的核苷酸序列或其期望片段、變體、或衍生物發(fā)生突變，從而使得其所編碼氨基酸序列包含一或多個(gè)氨基酸殘基缺失或取代，所述殘基在本文所示A1-A27中使兩個(gè)或更多個(gè)序列不同。在另一實(shí)施例中，通過(guò)誘變插入與本文所示A1-A27中一或多個(gè)氨基酸殘基相鄰的氨基酸，所述殘基使兩個(gè)或更多個(gè)序列不同?；蛘?，可向核酸中引入一或多個(gè)突變以選擇性改變其所編碼多肽的生物活性(例如與TSLP的結(jié)合)。例如，突變可定量或定性地改變生物活性。定量改變的實(shí)例包括提高、降低或消除活性。定性改變的實(shí)例包括改變抗原結(jié)合蛋白的抗原特異性。在另一方面中，本發(fā)明提供適合用作用于檢測(cè)本發(fā)明核酸序列的弓I物或雜交探針的核酸分子。本發(fā)明核酸分子可僅包含一部分編碼本發(fā)明全長(zhǎng)多肽的核酸序列，例如可用作探針或引物的片段或編碼本發(fā)明多肽活性部分(例如TSLP結(jié)合部分)的片段。可使用基于本發(fā)明核酸序列的探針來(lái)檢測(cè)核酸或類(lèi)似核酸，例如編碼本發(fā)明多肽的轉(zhuǎn)錄物。探針可包含標(biāo)記基團(tuán)，例如放射性同位素、熒光化合物、酶、或酶輔因子。所述探針可用于鑒定表達(dá)多肽的細(xì)胞。在另一方面中，本發(fā)明提供包含編碼本發(fā)明多肽或其片段的核酸。載體的實(shí)例包括(但不限于)質(zhì)粒、病毒載體、非附加型哺乳動(dòng)物載體和表達(dá)載體，例如重組表達(dá)載體。本發(fā)明重組表達(dá)載體可包含呈適合在宿主細(xì)胞中表達(dá)核酸的形式的本發(fā)明核酸。重組表達(dá)載體包括一或多個(gè)根據(jù)欲用于表達(dá)的宿主細(xì)胞而選擇的調(diào)節(jié)序列，其與欲表達(dá)的核酸序列可操作連接。調(diào)節(jié)序列包括那些在多種類(lèi)型的宿主細(xì)胞中引導(dǎo)組成型表達(dá)核苷酸序列者(例如SV40早期基因增強(qiáng)子、勞斯肉瘤病毒(Roussarcomavirus)啟動(dòng)子和巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子)、那些僅在某些宿主細(xì)胞中引導(dǎo)表達(dá)核苷酸序列者(例如組織特異性調(diào)節(jié)序列，參見(jiàn)沃斯(Voss)等人，1986，生物化學(xué)科學(xué)趨勢(shì)(TrendsBiochem.Sci.)11287；瑪尼蒂斯等人，1987，科學(xué)236:1237，所述文獻(xiàn)是全文以引用方式并入本文中)、以及那些響應(yīng)特定處理或條件引導(dǎo)誘導(dǎo)型表達(dá)核苷酸序列者(例如哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的金屬硫蛋白啟動(dòng)子以及原核和真核系統(tǒng)中的tet響應(yīng)型和/或鏈霉素響應(yīng)型啟動(dòng)子(參見(jiàn)相同文獻(xiàn)))。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，表達(dá)載體的設(shè)計(jì)可取決于諸如以下等因素欲轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞的選擇、期望蛋白質(zhì)表達(dá)水平等?？蓪⒈景l(fā)明表達(dá)載體引入宿主細(xì)胞中以由此產(chǎn)生由本文所述核酸編碼的蛋白質(zhì)或肽(包括融合蛋白或融合肽)。在另一方面中，本發(fā)明提供已引入本發(fā)明重組表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞可為任何原核細(xì)胞(例如大腸桿菌)或真核細(xì)胞(例如酵母、昆蟲(chóng)或哺乳動(dòng)物細(xì)胞(例如CHO細(xì)胞))?？赏ㄟ^(guò)習(xí)用轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染技術(shù)將載體DNA引入原核或真核細(xì)胞中。對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，已知根據(jù)所用表達(dá)載體和轉(zhuǎn)染技術(shù)，僅小部分細(xì)胞可將外源DNA整合至其基因組中。為鑒定并選擇這些整合體，一般將編碼可選擇標(biāo)記(例如耐抗生素性)的基因與目標(biāo)基因一起引入宿主細(xì)胞中。優(yōu)選可選擇標(biāo)記包括可賦予耐藥性者，例如G418、潮霉素和甲氨蝶呤。在各種方法中，尤其可通過(guò)藥物選擇來(lái)鑒定經(jīng)引入核酸穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(例如已納入可選擇標(biāo)記基因的細(xì)胞可存活，而其它細(xì)胞死亡)。適應(yīng)癥在各種炎癥性病癥、尤其過(guò)敏性炎癥性病癥的促進(jìn)中涉及TSLP。本文所用術(shù)語(yǔ)“過(guò)敏性炎癥”是指免疫球蛋白E(IgE)相關(guān)免疫應(yīng)答的現(xiàn)象。(“過(guò)敏癥和免疫學(xué)手冊(cè)(ManualofAllergyandImmunology)”，第2章，埃爾文Μ.桑尼克(AlvinΜ.Sanico)、布魯斯S.伯納(BruceS.Bochner)、和撒貝特S.薩尼(SarbjitS.Saini)、愛(ài)德曼(Adelman)等人編輯，利平科特(Lippincott)，威廉姆斯(Williams)、威金斯(Wilkins)，費(fèi)城，PA,(2002))。本文所用過(guò)敏性炎癥的特征一般在于2型輔助T細(xì)胞(Th2細(xì)胞)浸潤(rùn)至所影響組織中(凱，如前所述)。過(guò)敏性炎癥除炎癥性皮膚病況(例如特應(yīng)性皮炎)外也包括肺部炎癥疾病，例如過(guò)敏性鼻竇炎、哮喘、過(guò)敏性結(jié)膜炎(過(guò)敏癥和免疫學(xué)手冊(cè)，如前所述)。本文所用術(shù)語(yǔ)“TSLP相關(guān)過(guò)敏性炎癥”是指TSLP出現(xiàn)上調(diào)或顯示以其它方式涉及TSLP的過(guò)敏性炎癥病況。過(guò)敏性哮喘是慢性炎癥性氣道病癥，其特征在于氣道嗜酸性粒細(xì)胞增多、高水平血清IgE和肥大細(xì)胞活化，其可促進(jìn)氣道高應(yīng)答性、上皮損傷和粘液分泌過(guò)多(威爾斯卡普，M(Wills-Karp，Μ)，免疫學(xué)年鑒，17:255_281(1999)，過(guò)敏癥和免疫學(xué)手冊(cè)，如前所述)。研究已證實(shí)，在所有哮喘患者的氣道中都存在不同程度的慢性炎癥，甚至在無(wú)癥狀期間也是如此。在易感個(gè)體中，此炎癥導(dǎo)致哮鳴、氣急、胸部緊迫、和咳嗽事件復(fù)發(fā)。(過(guò)敏癥和免疫學(xué)手冊(cè)，如前所述)。特應(yīng)性皮炎是慢性搔癢炎癥皮膚病，其特征在于皮膚損傷、以及血清總IgE升高、嗜酸性粒細(xì)胞增多和組胺自嗜堿粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞釋放增多。患有特應(yīng)性皮炎者表現(xiàn)增大的Τη2應(yīng)答，并且人們認(rèn)為特應(yīng)性皮炎損傷的起始是藉助釋放高水平IL-4、IL-5和IL-13的ΤΗ2淋巴細(xì)胞的早期皮膚浸潤(rùn)來(lái)介導(dǎo)的(梁，J.(Leimg，J.)，過(guò)敏癥臨床免疫學(xué)(AllergyClinImmunol)，105:860-76(2000))。TSLP與其它炎癥性細(xì)胞因子之間的關(guān)系闡述于美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)案第11/205，904號(hào)、專(zhuān)利公開(kāi)案第2006/0039910號(hào)中，其是以引用方式并入本文中。如通過(guò)原位雜交來(lái)檢測(cè)，據(jù)報(bào)導(dǎo)人類(lèi)TSLP表達(dá)在哮喘氣道中增加，此與疾病嚴(yán)重度有關(guān)(英等人，免疫學(xué)雜志，174=8183-8190(2005))0哮喘患者肺部樣品中TSLPmRNA水平的分析顯示TSLP的表達(dá)相對(duì)于對(duì)照有所增加。此外，在哮喘患者、肺移植患者、和囊性纖維化患者的濃縮支氣管肺泡灌洗(BAL)液中TSLP蛋白水平是可檢測(cè)的。近期已發(fā)現(xiàn)TSLP可響應(yīng)微生物和創(chuàng)傷以及炎癥而釋放，并且可活化肥大細(xì)胞(阿拉沃迪等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，20492:253-258(2007))。據(jù)顯示人類(lèi)TSLP蛋白與患有中度/嚴(yán)重哮喘和COPD的個(gè)體的支氣管粘膜層和BAL液中的疾病相關(guān)。(英等人，免疫學(xué)雜志，181(4)=2790-8(2008))0TSLP在轉(zhuǎn)基因小鼠肺中的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致哮喘樣氣道炎癥(周等人，自然免疫學(xué)，101047-1053(2005))。此外，已報(bào)導(dǎo)在卵蛋白-哮喘模型中TSUR缺陷型小鼠不會(huì)發(fā)作哮喘，此表明在氣道炎癥模型中哮喘發(fā)作需要TSLP(周等人，如前所述；卡皮諾(Carpino)等人，分子細(xì)胞生物學(xué)(Mol.CellBiol.),24=2584-2592(2004))除哮喘外，在特應(yīng)性皮炎(AD)患者的損傷皮膚中和發(fā)炎的扁桃腺上皮細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)升高水平的TSLP蛋白和mRNA(索梅里斯等人，自然免疫學(xué)3(7):673_680(2002))。TSLP在轉(zhuǎn)基因小鼠皮膚中的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致AD樣表型。(余等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，202:541-549(2005))。因此，本申請(qǐng)案的TSLP拮抗劑、尤其TSLP抗原結(jié)合蛋白和抗體可用作過(guò)敏性炎癥、尤其哮喘和特應(yīng)性皮炎的治療性藥物。此外，本發(fā)明TSLP拮抗劑、尤其TSLP抗原結(jié)合蛋白和抗體也可用于治療纖維化病癥。已證實(shí)在纖維化病癥的促進(jìn)中涉及TSLP，如申請(qǐng)案第11/344，379號(hào)中所述。已發(fā)現(xiàn)TSLP可在動(dòng)物中誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞積累和膠原沉積。以(例如)真皮內(nèi)方式將鼠類(lèi)TSLP注射至小鼠中可在小鼠皮下組織內(nèi)導(dǎo)致纖維化，其特征在于成纖維細(xì)胞增殖和膠原沉積。拮抗TSLP活性可導(dǎo)致在組織中阻止或降低成纖維細(xì)胞增殖和膠原沉積。本文所用術(shù)語(yǔ)“纖維增生性疾病”或“纖維化疾病或病癥”是指涉及一或多個(gè)組織中的纖維化的病況。本文所用術(shù)語(yǔ)“纖維化”是指因修復(fù)性或反應(yīng)性過(guò)程而非因器官或組織的正常構(gòu)成而形成纖維組織。纖維化的特征在于超出任何特定組織中的正常沉積的成纖維細(xì)胞積累和膠原沉積。本文所用術(shù)語(yǔ)“纖維化”與“成纖維細(xì)胞積累和膠原沉積”同義。成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織細(xì)胞，其分散于整個(gè)體內(nèi)的結(jié)締組織中。成纖維細(xì)胞分泌含有I型和/或III型膠原的非剛性細(xì)胞外基質(zhì)。成纖維細(xì)胞響應(yīng)組織損傷而遷移至傷口附近，增殖并產(chǎn)生大量膠原性細(xì)胞外基質(zhì)。膠原是富含甘氨酸和脯氨酸的纖維蛋白，其是細(xì)胞外基質(zhì)和結(jié)締組織、軟骨和骨中的主要組份。膠原分子是稱(chēng)作α-鏈的三鏈螺旋結(jié)構(gòu)，其以線狀螺旋形式彼此纏繞。膠原以若干種形式或類(lèi)型存在；其中I型最常見(jiàn)，存于皮膚、腱、和骨中；并且III型存于皮膚、血管和內(nèi)臟器官中。纖維化病癥包括(但不限于)全身和局部硬皮癥、瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕、動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄、肺部炎癥和纖維化、特發(fā)性肺纖維化、肝硬化、由于B型或C型慢性肝炎感染所致的纖維化、腎病、瘢痕組織所致的心臟病、和眼病(例如黃斑變性、以及視網(wǎng)膜病變和玻璃體病變)。其它纖維化疾病包括化學(xué)治療藥物所致纖維化、輻射誘發(fā)的纖維化、以及損傷和燒傷。硬皮癥是纖維化病癥，其特征在于因皮膚和其它器官中的成纖維細(xì)胞過(guò)量產(chǎn)生新膠原所致的皮膚增厚和硬結(jié)。硬皮癥可以局部或全身性疾病形式發(fā)作。全身性硬皮癥可影響多個(gè)器官。全身性硬化癥的特征在于形成透明化并且增厚的膠原性纖維組織，其中皮膚增厚并與皮下組織粘結(jié)，尤其發(fā)生在手部和面部。所述疾病的特征也可為因食管蠕動(dòng)缺失和粘膜下纖維化所致的吞咽困難、因肺纖維化所致的呼吸困難、心肌纖維化、和腎血管變化。(斯泰德曼醫(yī)學(xué)辭典(Stedman’sMedicalDictionary)，第26版，威廉姆斯與威金斯，1995)。肺纖維化影響30-70%的硬皮癥患者，經(jīng)常導(dǎo)致限制性肺病(艾特莫斯(Atamas)等人，細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子綜述(CytokineandGrowthFactorRev)，14:537_550(2003))。特發(fā)性肺纖維化是慢性、進(jìn)行性、并且通常致命的肺病，人們認(rèn)為其為慢性炎癥過(guò)程的結(jié)果(凱利(Kelly)等人，當(dāng)前藥物設(shè)計(jì)(CurrPharmaDesign)9:39_49(2003))。因此，本申請(qǐng)案的TSLP拮抗劑、尤其TSLP抗原結(jié)合蛋白和抗體可用作纖維化疾病的治療性藥物，包括(但不限于)硬皮癥、間質(zhì)性肺病、特發(fā)性肺纖維化、B型或C型慢性肝炎引發(fā)的纖維化、輻射誘發(fā)的纖維化、和傷口愈合引發(fā)的纖維化。盡管上述適應(yīng)癥是優(yōu)選的，但其它疾病、病癥或病況也適合于通過(guò)向個(gè)體投與抗原結(jié)合蛋白來(lái)治療或預(yù)防。所述疾病、病癥和病況包括(但不限于)炎癥、自身免疫性疾病、軟骨炎癥、纖維化疾病和/或骨降解、關(guān)節(jié)炎、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型關(guān)節(jié)炎、幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、少關(guān)節(jié)幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型強(qiáng)直性脊柱炎、幼年型腸病性關(guān)節(jié)炎、幼年型反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、幼年型雷德氏綜合癥(juvenileReiter'sSyndrome),SEA綜合癥(血清陰性、肌腱端病、關(guān)節(jié)病綜合癥)、幼年型皮肌炎、幼年型牛皮癬關(guān)節(jié)炎、幼年型硬皮癥、幼年型全身性紅斑狼瘡、幼年型血管炎、少關(guān)節(jié)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、腸病性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、雷德氏綜合癥、SEA綜合癥(血清陰性、肌腱端病、關(guān)節(jié)病綜合癥)、皮肌炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、硬皮癥、全身性紅斑狼瘡、血管炎、肌炎、多發(fā)性肌炎、皮肌炎、骨關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)性多發(fā)性動(dòng)脈炎、魏格納肉芽腫病(Wegener’sgranulomatosis)、動(dòng)脈炎、多發(fā)性肌痛癥、結(jié)節(jié)病、硬皮癥、硬化癥、原發(fā)性膽道硬化癥、硬化性膽管炎、舍格倫綜合癥(Sjogren’ssyndrome)、銀屑病、斑塊狀銀屑病、滴狀銀屑病、皮褶銀屑病、膿皰性銀屑病、紅皮性銀屑病、皮炎、特應(yīng)性皮炎、動(dòng)脈粥樣硬化、狼瘡、斯提耳病(Still’sdisease)、全身性紅斑狼瘡(SLE)、重癥肌無(wú)力、炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(Crohn'sdisease)、潰瘍性結(jié)腸炎、乳糜瀉、多發(fā)性硬化癥(MS)、哮喘、C0PD、格林-巴利綜合癥(Guillain-Barredisease)、I型糖尿病、格雷夫氏病(Graves’disease)、艾迪生病(Addison，sdisease)、雷諾現(xiàn)象(Raynaud，sphenomenon)、自身免疫性肝炎、GVHD、和諸如此類(lèi)。在具體實(shí)施例中，提供包含治療有效量的TSLP抗原結(jié)合蛋白的醫(yī)藥組合物。術(shù)語(yǔ)“治療”涵蓋減輕或預(yù)防病癥的至少一個(gè)癥狀或其它方面、或降低疾病嚴(yán)重度、和諸如此類(lèi)?？乖Y(jié)合蛋白不需要實(shí)現(xiàn)完全治愈或消除疾病的每個(gè)癥狀或現(xiàn)象才能構(gòu)成有效治療劑。如相關(guān)領(lǐng)域所公認(rèn)，用作治療劑的藥物可降低給定疾病狀態(tài)的嚴(yán)重度，但不需要消除疾病的每個(gè)現(xiàn)象才可被視作有用治療劑。類(lèi)似地，預(yù)防性投與的藥物不需要完全有效地防止病況出現(xiàn)才能構(gòu)成有效預(yù)防劑。只要可在個(gè)體中降低疾病的影響(例如降低疾病癥狀的數(shù)量或嚴(yán)重度、或提高另一藥物的有效性、或產(chǎn)生另一有益效應(yīng))，或降低疾病發(fā)作或惡化的可能性就足夠了。本發(fā)明一實(shí)施例涉及一種方法，其包含以足以誘導(dǎo)超過(guò)反映特定病癥嚴(yán)重度的指示劑基線的持續(xù)性改良的數(shù)量和時(shí)間向患者投與抗原結(jié)合蛋白。醫(yī)藥組合物在某些實(shí)施例中，本發(fā)明提供醫(yī)藥組合物，其包含治療有效量的一種或復(fù)數(shù)種本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白以及醫(yī)藥上可接受的稀釋劑、載劑、增溶劑、乳化劑、防腐劑和/或佐劑。此外，本發(fā)明提供通過(guò)投與所述醫(yī)藥組合物治療患者的方法。術(shù)語(yǔ)“患者”包括人類(lèi)和動(dòng)物個(gè)體?？墒褂冒换蚨喾N抗原結(jié)合蛋白的醫(yī)藥組合物來(lái)降低TSLP活性。包含一或多種抗原結(jié)合蛋白的醫(yī)藥組合物可用于治療與TSLP活性相關(guān)的結(jié)果、癥狀和/或病狀。包含一或多種抗原結(jié)合蛋白的醫(yī)藥組合物可用于抑制TSLP與TSLPR結(jié)合和/或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法中，其包含提供針對(duì)TSLP的本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白。在某些實(shí)施例中，可接受調(diào)配材料在所用劑量和濃度下優(yōu)選地對(duì)接受者無(wú)毒性。在某些實(shí)施例中，醫(yī)藥組合物可含有用于修改、維持或保留(例如)組合物的PH、重量摩爾滲透壓濃度、粘度、澄清度、顏色、等滲性、氣味、無(wú)菌性、穩(wěn)定性、溶解或釋放、吸收或滲透的速率的調(diào)配材料。在所述實(shí)施例中，適宜調(diào)配材料包括(但不限于)氨基酸(例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或賴(lài)氨酸)；抗微生物劑；抗氧化劑(例如抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉)；緩沖液(例如硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其它有機(jī)酸)；增量劑(例如甘露醇或甘氨酸)；螯合劑(例如乙二胺四乙酸(EDTA))；絡(luò)合劑(例如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精)；填充劑；單糖；二糖；和其它碳水化合物(例如葡萄糖、蔗糖、甘露糖或糊精)；蛋白質(zhì)(例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白)；著色劑、矯味劑和稀釋劑；乳化劑；親水聚合物(例如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；鹽形成抗衡離子(例如鈉)；防腐劑(例如苯扎氯銨(benzalkoniumchloride)、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞(thimerosal)、苯乙醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、氯己定(chlorhexidine)、山梨酸或過(guò)氧化氫)；溶劑(例如丙三醇、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(例如甘露醇或山梨醇)；懸浮劑；表面活性劑或潤(rùn)濕劑(例如普流尼克(pluronic)、PEG、山梨醇酐酯、聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯)、曲拉通(triton)、氨丁三醇(tromethamine)、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙泊(tyloxapol))；穩(wěn)定性增強(qiáng)劑(例如蔗糖或山梨醇)；張力增強(qiáng)劑(例如堿金屬鹵化物、優(yōu)選為氯化鈉或氯化鉀、甘露醇、山梨醇)；遞送媒劑；稀釋劑；賦形劑和/或醫(yī)藥佐劑。參見(jiàn)雷明頓藥物科學(xué)(REMINGTON'SPHARMACEUTICALSCIENCES)，第18版(A.R.基諾(A.R.Genrmo)編輯)，1990，麥克出版公司(MackPublishingCompany)。在某些實(shí)施例中，最適醫(yī)藥組合物可由所屬領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)(例如)既定投與路徑、遞送模式和期望劑量來(lái)確定。例如，參見(jiàn)雷明頓藥物科學(xué)，如前所述。在某些實(shí)施例中，所述組合物可影響本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白的物理狀態(tài)、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放速率和體內(nèi)清除速率。在某些實(shí)施例中，醫(yī)藥組合物中的主要媒劑或載劑可具有水性或非水性。例如，適宜媒劑或載劑可為注射用水、生理鹽水或人工腦脊髓液，其可能補(bǔ)加有非經(jīng)腸投與用組合物中的其它常見(jiàn)材料。中性緩沖鹽水或與血清白蛋白混合的鹽水是其它實(shí)例性媒劑。在具體實(shí)施例中，醫(yī)藥組合物包含PH為約7.0-8.5的Tris緩沖液、或pH為約4.0-5.5的乙酸鹽緩沖液，并且可另外包括山梨醇或其適宜取代物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，可通過(guò)混合具有期望純度的所選組合物與可選調(diào)配劑(雷明頓藥物科學(xué)，如前所述)來(lái)制備用于儲(chǔ)存的呈凍干餅或水性溶液形式的TSLP抗原結(jié)合蛋白組合物。此外，在某些實(shí)施例中，可使用諸如蔗糖等適宜賦形劑將TSLP抗原結(jié)合蛋白產(chǎn)物調(diào)配為凍干產(chǎn)物?？蛇x擇本發(fā)明醫(yī)藥組合物用于非經(jīng)腸遞送?；蛘?，可選擇組合物用于吸入或用于通過(guò)消化道遞送，例如經(jīng)口遞送。調(diào)配物組份優(yōu)選地以投與位點(diǎn)可接受的濃度存在。在某些實(shí)施例中，使用緩沖液將組合物維持在生理PH或稍低的pH下，通常在約5至約8的pH范圍內(nèi)，包括約5.1、約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6.0、約6.1、約6.2、約6.3、約6.4、約6.5、約6.6、約6.7、約6.8、約6.9、約7.0、約7.1、約7.2、約7.3、約7.4、約7.5、約7.6、約7.7、約7.8、約7.9、和約8.0。在欲非經(jīng)腸投與時(shí)，可以無(wú)致熱原的非經(jīng)腸可接受水溶液形式提供用于本發(fā)明中的治療組合物，其包含存于醫(yī)藥上可接受的媒劑中的期望TSLP抗原結(jié)合蛋白。尤其適合非經(jīng)腸注射的媒劑是無(wú)菌蒸餾水，在其中將TSLP抗原結(jié)合蛋白調(diào)配為無(wú)菌等滲溶液并以適宜方式保存。在某些實(shí)施例中，制備可涉及調(diào)配期望分子與可使產(chǎn)物受控釋放或緩釋的試齊IJ，例如可注射微球體、生物蝕解顆粒、聚合化合物(例如聚乳酸或聚乙醇酸)、珠?；蛑|(zhì)體，所述產(chǎn)物可通過(guò)積存注射來(lái)遞送。在某些實(shí)施例中，也可使用透明質(zhì)酸，其具有延長(zhǎng)在循環(huán)中的持續(xù)時(shí)間的效應(yīng)。在某些實(shí)施例中，可使用可植入藥物遞送裝置來(lái)引入期望抗原結(jié)合蛋白O可調(diào)配本發(fā)明醫(yī)藥組合物以供吸入。在這些實(shí)施例中，有利地將TSLP抗原結(jié)合蛋白調(diào)配為干燥可吸入粉劑。在具體實(shí)施例中，也可將TSLP抗原結(jié)合蛋白吸入溶液與用于氣溶膠遞送的推進(jìn)劑調(diào)配在一起。在某些實(shí)施例中，可對(duì)溶液實(shí)施噴霧。因此經(jīng)肺投與和調(diào)配方法另外闡述于國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)案第PCTUS94/001875號(hào)中，其是以引用方式并入并且闡述化學(xué)修飾蛋白質(zhì)的經(jīng)肺遞送。也涵蓋經(jīng)口投與調(diào)配物?？稍诖嬖诨虿淮嬖谕ǔＳ糜诨旌现T如錠劑和膠囊等固體劑型的載劑的情況下調(diào)配以此方式投與的TSLP抗原結(jié)合蛋白。在某些實(shí)施例中，可將膠囊設(shè)計(jì)為在胃腸道中的位置釋放調(diào)配物的活性部分，從而使生物利用度最大化并使全身性預(yù)降解最小化?？砂ㄆ渌噭┮源龠M(jìn)TSLP抗原結(jié)合蛋白的吸收。也可使用稀釋劑、矯味劑、低熔點(diǎn)蠟、植物油、潤(rùn)滑劑、懸浮劑、錠劑崩解劑和粘合劑。優(yōu)選地提供在與適合制造錠劑的非毒性賦形劑的混合物中包含有效量的一種或復(fù)數(shù)種TSLP抗原結(jié)合蛋白的本發(fā)明醫(yī)藥組合物。可通過(guò)將錠劑溶于無(wú)菌水中或另一適宜媒劑中來(lái)制備呈單位劑型的溶液。適宜賦形劑包括(但不限于)惰性稀釋劑，例如碳酸鈣、碳酸鈉或碳酸氫鈉、乳糖、或磷酸鈣；或粘合劑，例如淀粉、明膠、或阿拉伯膠；或潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸、或滑石粉。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可了解其它醫(yī)藥組合物，包括涉及TSLP抗原結(jié)合蛋白的呈持續(xù)遞送或受控遞送調(diào)配物形式的調(diào)配物。調(diào)配各種其它持續(xù)遞送或受控遞送形式(例如脂質(zhì)體載劑、生物蝕解微?；蚨嗫字榱：头e存注射劑)的技術(shù)也為所屬領(lǐng)域技術(shù)人員所知。例如，參見(jiàn)國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)案第PCT/US93/00829號(hào)，其是以引用方式并入并且闡述用于遞送醫(yī)藥組合物的多孔聚合物微粒的受控釋放。緩釋制劑可包括半滲透性聚合物基質(zhì)，其呈成型物件形式，例如膜或微膠囊。緩釋基質(zhì)可包括聚酯、水凝膠、聚交酯(如美國(guó)專(zhuān)利第3,773,919號(hào)和歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)案第EP058481號(hào)所揭示，其各自以引用方式并入)、L-谷氨酸與Y-L-谷氨酸乙酯的共聚物(西德曼(Siaman)等人，1983，生物聚合物(Biopolymers)2:547_556)、聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)(蘭格爾(Langer)等人，1981，生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(J.Biomed.Mater.Res.)15167-277；和蘭格爾，1982，化學(xué)技術(shù)(Chem.Tech.)12:98_105)、乙烯乙酸乙烯酯(蘭格爾等人，1981，如前所述)或聚D(-)-3-羥丁酸(歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)案第EP133，988號(hào))。緩釋組合物也可包括可通過(guò)業(yè)內(nèi)已知若干種方法中的任一種制備的脂質(zhì)體。例如，參見(jiàn)埃普施坦因(Eppstein)等人，1985，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)，82.3688-3692；歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)案第EP036，676號(hào)；第EP088，046號(hào)和第EP143，949號(hào)，其是以引用方式并入。用于體內(nèi)投與的醫(yī)藥組合物通常是以無(wú)菌制劑形式來(lái)提供?？赏ㄟ^(guò)無(wú)菌濾膜過(guò)濾來(lái)實(shí)施滅菌。當(dāng)組合物經(jīng)凍干時(shí)，使用此方法的滅菌可在凍干和重構(gòu)之前或之后實(shí)施。非經(jīng)腸投與用組合物可以?xún)龈尚问交蛉芤盒问絻?chǔ)存。一般將非經(jīng)腸組合物置入具有無(wú)菌入口埠的容器中，例如具有可通過(guò)皮下注射針頭刺入的塞子的靜脈注射溶液袋或瓶。本發(fā)明各方面包括自緩沖TSLP抗原結(jié)合蛋白調(diào)配物，其可用作醫(yī)藥組合物，如國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)案第WO06138181A2號(hào)(PCT/US2006/022599)中所述，其是全文以引用方式并入本文中。一實(shí)施例提供包含TSLP抗原結(jié)合蛋白的自緩沖TSLP抗原結(jié)合蛋白調(diào)配物，其中總鹽濃度低于150mM。欲使用的含有TSLP抗原結(jié)合蛋白的醫(yī)藥組合物的治療有效量可取決于(例如)治療背景和目標(biāo)。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，藥物的適宜劑量水平可部分根據(jù)以下因素而改變所遞送分子、使用TSLP抗原結(jié)合蛋白治療的適應(yīng)癥、投與路徑、和患者的尺寸(體重、身體表面尺寸或器官尺寸)和/或條件(年齡和一般健康)。在某些實(shí)施例中，臨床醫(yī)師可確定劑量并改變投與路徑以獲得最佳治療效果。根據(jù)上述因素，典型劑量可介于約0.1μg/kg至最高約30mg/kg或更高之間。在具體實(shí)施例中，劑量可介于0.lyg/kg至最高約30mg/kg之間，任選地為lyg/kg至最高約30mg/kg或10μg/kg至最高約5mg/kg。投藥頻率可取決于特定TSLP抗原結(jié)合蛋白在所用調(diào)配物中的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。通常，臨床醫(yī)師投與組合物直至達(dá)到可達(dá)成期望效果的劑量。因此可以單次劑量投與組合物，或根據(jù)時(shí)間以?xún)纱位蚨啻蝿┝客杜c(每次劑量可含有或不含有相同量的期望分子)，或通過(guò)植入裝置或?qū)Ч芤赃B續(xù)輸注方式投與。適宜劑量的進(jìn)一步細(xì)分是由所屬領(lǐng)域技術(shù)人員以常規(guī)方式來(lái)實(shí)施并且在其所實(shí)施的常規(guī)任務(wù)的范圍內(nèi)?？赏ㄟ^(guò)使用適宜劑量響應(yīng)數(shù)據(jù)來(lái)確定適宜劑量。在某些實(shí)施例中，可經(jīng)整個(gè)延長(zhǎng)時(shí)間段將本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白投與患者。本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白的慢性投與可使一般與并非全人類(lèi)抗體的抗原結(jié)合蛋白(例如在非人類(lèi)動(dòng)物中針對(duì)人類(lèi)抗原產(chǎn)生的抗體，例如在非人類(lèi)物種中產(chǎn)生的非全人類(lèi)抗體或非人類(lèi)抗體)相關(guān)的有害免疫或過(guò)敏性響應(yīng)最小化。醫(yī)藥組合物的投與路徑與已知方法一致，例如經(jīng)口；通過(guò)靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、大腦內(nèi)(腦實(shí)質(zhì)內(nèi))、腦室內(nèi)、肌內(nèi)、眼內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、門(mén)靜脈內(nèi)、或損傷內(nèi)途徑注射；通過(guò)緩釋系統(tǒng)或通過(guò)植入裝置投與。在某些實(shí)施例中，可通過(guò)快速濃注投與組合物，或可通過(guò)輸注或植入裝置連續(xù)投與。也可通過(guò)植入吸附或囊封有期望分子的膜、海綿體或另一適宜材料來(lái)局部投與組合物。在某些實(shí)施例中，倘若使用植入裝置，則可將所述裝置植入任何適宜組織或器官中，并且可通過(guò)擴(kuò)散、定時(shí)釋放快速注射、或連續(xù)投與來(lái)遞送期望分子。組合療法在其它實(shí)施例中，將抗原結(jié)合蛋白與可用于治療患者所患病況的其它藥劑組合投與。所述藥劑的實(shí)例包括蛋白質(zhì)藥物和非蛋白質(zhì)藥物。在共投與多種治療藥物時(shí)，可以有關(guān)領(lǐng)域所公認(rèn)的方式相應(yīng)地調(diào)節(jié)劑量?！肮餐杜c”和組合療法并不限于同時(shí)投與，并且也包括如下治療方案在療程期間至少投與一次抗原結(jié)合蛋白，其中涉及向患者投與至少一種其它治療劑。雖然已闡述本發(fā)明，但以說(shuō)明而非限制方式提供以下實(shí)例。實(shí)例1抗原的制備使用若干種形式的重組TSLP作為免疫原。在大腸桿菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞二者中表達(dá)人類(lèi)TSLP。大腸桿菌產(chǎn)生的人類(lèi)TSLP是未標(biāo)記全長(zhǎng)蛋白。在COSPKB細(xì)胞中產(chǎn)生TSLP蛋白，通過(guò)刪除對(duì)應(yīng)于氨基酸128-132(RKRKV，SEQIDN0:371)的核苷酸382-396(AGAAAAAGGAAAGTC，SEQIDNO370)使其缺失弗林蛋白酶裂解位點(diǎn)。此蛋白含有C末端聚HIS-Flag標(biāo)簽(核苷酸序列=ATGTTCCCTTTTGCCTTACTATATGTTCTGTCAGTTTCTTTCAGGAAAATCTTCATCTTACAACTTGTAGGGCTGGTGTTAACTTACGACTTCACTAACTGTGACTTTGAGAAGATTAAAGCAGCCTATCTCAGTACTATTTCTAAAGACCTGATTACATATATGAGTGGGACCAAAAGTACCGAGTTCAACAACACCGTCTCTTGTAGCAATCGGCCACATTGCCTTACTGAAATCCAGAGCCTAACCTTCAATCCCACCGCCGGCTGCGCGTCGCTCGCCAAAGAAATGTTCGCCATGAAAACTAAGGCTGCCTTAGCTATCTGGTGCCCAGGCTATTCGGAAACTCAGATAAATGCTACTCAGGCAATGAAGAAGAGGACAACCAATAAATGTCTGGAACAAGTGTCACAATTACAAGGATTGTGGCGTCGCTTCAATCGACCTTTACTGAAACAACAGCATCACCATCACCATCACGACTACAAAGACGATGACGACAAA(SEQIDNO372)；蛋白質(zhì)序列=MFPFALLYVLSVSFRKIFILQLVGLVLTYDFTNCDFEKIKAAYLSTISKDLITYMSGTKSTEFNNTVSCSNRPHCLTEIQSLTFNPTAGCASLAKEMFAMKTKAALAIWCPGYSETQINATQAMKKRTTNKCLEQVSQLQGLffRRFNRPLLKQQHHHHHHDYKDDDDK(SEQIDN0:373))。在另一活動(dòng)中，在COSPKB細(xì)胞中產(chǎn)生全長(zhǎng)TSLPC末端聚HIS-Flag標(biāo)記蛋白(核苷酸序列=ATGTTCCCTTTTGCCTTACTATATGTTCTGTCAGTTTCTTTCAGGAAAATCTTCATCTTACAACTTGTAGGGCTGGTGTTAACTTACGACTTCACTAACTGTGACTTTGAGAAGATTAAAGCAGCCTATCTCAGTACTATTTCTAAAGACCTGATTACATATATGAGTGGGACCAAAAGTACCGAGTTCAACAACACCGTCTCTTGTAGCAATCGGCCACATTGCCTTACTGAAATCCAGAGCCTAACCTTCAATCCCACCGCCGGCTGCGCGTCGCTCGCCAAAGAAATGTTCGCCATGAAAACTAAGGCTGCCTTAGCTATCTGGTGCCCAGGCTATTCGGAAACTCAGATAAATGCTACTCAGGCAATGAAGAAGAGGAGAAAAAGGAAAGTCACAACCAATAAATGTCTGGAACAAGTGTCACAATTACAAGGATTGTGGCGTCGCTTCAATCGACCTTTACTGAAACAACAGCATCACCATCACCATCACGACTACAAAGACGATGACGACAAA(SEQIDNO374)；蛋白質(zhì)序列=MFPFALLYVLSVSFRKIFILQLVGLVLTYDFTNCDFEKIKAAYLSTISKDLITYMSGTKSTEFNNTVSCSNRPHCLTEIQSLTFNPTAGCASLAKEMFAMKTKAALAIWCPGYSETQINATQAMKKRRKRKVTTNKCLEQVSQLQGLffRRFNRPLLKQQHHHHHHDYKDDDDK(SEQIDNO375))。應(yīng)注意，氨基酸序列1-28(MFPFALLYVLSVSFRKIFILQLVGLVLT，SEQIDNO376)是自這兩種蛋白質(zhì)的成熟產(chǎn)物裂解的信號(hào)肽。此外，克隆并亞克隆/表達(dá)短尾猴TSLP，其同樣缺失弗林蛋白酶裂解位點(diǎn)(對(duì)應(yīng)于氨基酸120-124(RKRKV，SEQIDNO371)的核苷酸358-372(AGAAAAAGGAAAGTC，SEQIDNO:370))(DNA=ATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCCAGGTTCCACCGGTTACGACTTCACTAACTGTGACTTTCAGAAGATTGAAGCAGACTATCTCCGTACTATTTCTAAAGACCTGATTACATATATGAGTGGGACTAAAAGTACCGACTTCAACAACACCGTCTCCTGTAGCAATCGGCCACACTGCCTTACTGAAATCCAGAGCCTAACCTTCAATCCCACCCCCCGCTGCGCGTCGCTCGCCAAGGAAATGTTCGCCAGGAAAACTAAGGCTACCCTCGCTCTCTGGTGCCCAGGCTATTCGGAAACTCAGATAAATGCTACTCAGGCAATGAAGAAGAGGACAACCAATAAATGTCTGGAACAAGTGTCACAATTACTAGGATTGTGGCGTCGCTTCATTCGAACTTTACTGAAACAACAGCACCACCACCACCACCATGACTATAAAGACGATGACGACAAAT(SEQIDNO377)；蛋白質(zhì)=METDTLLLWVLLLWPGSTGYDFTNCDFQKIEADYLRTISKDLITYMSGTKSTDFNNTVSCSNRPHCLTEIQSLTFNPTPRCASLAKEMFARKTKATLALWCPGYSETQINATQAMKKRTTNKCLEQVSQLLGLWRRFIRTLLKQQHHHHHHDYKDDDDK(SEQIDNO378)或呈全長(zhǎng)/天然產(chǎn)物形式(核苷酸序列=ATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCCAGGTTCCACCGGTTACGACTTCACTAACTGTGACTTTCAGAAGATTGAAGCAGACTATCTCCGTACTATTTCTAAAGACCTGATTACATATATGAGTGGGACTAAAAGTACCGACTTCAACAACACCGTCTCCTGTAGCAATCGGCCACACTGCCTTACTGAAATCCAGAGCCTAACCTTCAATCCCACCCCCCGCTGCGCGTCGCTCGCCAAGGAAATGTTCGCCAGGAAAACTAAGGCTACCCTCGCTCTCTGGTGCCCAGGCTATTCGGAAACTCAGATAAATGCTACTCAGGCAATGAAGAAGAGGAGAAAAAGGAAAGTCACAACCAATAAATGTCTGGAACAAGTGTCACAATTACTAGGATTGTGGCGTCGCTTCATTCGAACTTTACTGAAACAACAGCACCACCACCACCACCATGACTATAAAGACGATGACGACAAA(SEQIDNO:379)；蛋白質(zhì)=METDTLLLWVLLLWVPGSTGYDFTNCDFQKIEADYLRTISKDLITYMSGTKSTDFNNTVSCSNRPHCLTEIQSLTFNPTPRCASLAKEMFARKTKATLALWCPGYSETQINATQAMKKRRKRKVTTNKCLEQVSQLLGLWRRFIRTLLKQQHHHHHHDYKDDDDK(SEQIDN0:380)，在COSPKB細(xì)胞中其與相同C末端聚HIS-Flag融合。))應(yīng)注意，氨基酸序列1-20(METDTLLLWVLLLWVPGSTG，SEQIDNO381)是自這兩種短尾猴蛋白的成熟產(chǎn)物裂解的信號(hào)肽。實(shí)例2小鼠抗人類(lèi)TSLP抗體使用hTSLP-Fc來(lái)免疫Balb/c小鼠(杰克遜實(shí)驗(yàn)室(JacksonLaboratories)，巴爾港，緬因州)。在若干輪免疫后，自脾釋放淋巴細(xì)胞并通過(guò)用50%PEG/DMS0(西格瑪)實(shí)施化學(xué)融合來(lái)使其與小鼠骨髓瘤細(xì)胞NSl(ATCC)融合。以2XIO4細(xì)胞/孔的密度將融合細(xì)胞接種于96孔板中的200μ1DMEMHAT(0.ImM次黃嘌呤，0.16mM胸苷，4mM氨基蝶呤，西格瑪)培養(yǎng)基中，其補(bǔ)加有10%FBS、5%俄利根(Origen)克隆因子(BioVeris)、Ix青霉素-鏈霉素-谷氨酰胺、丙酮酸鈉(英杰公司)。在融合后第7天用補(bǔ)加有10%FBS、5%俄利根克隆因子(BioVerisTM)、lX青霉素-鏈霉素-谷氨酰胺、丙酮酸鈉(英杰公司)的DMEMHT(0.ImM次黃嘌呤，0.16mM胸苷)培養(yǎng)基替代原培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基更換后兩天收集條件培養(yǎng)基并繼續(xù)進(jìn)行初步篩選。實(shí)例3全人類(lèi)抗體生成使用XenoMouse技術(shù)根據(jù)(例如)以下文獻(xiàn)和下文中所述方案來(lái)生成TSLP特異性全人類(lèi)單克隆抗體=U.S.2005/0118643；美國(guó)專(zhuān)利第6114598號(hào)、第6162963號(hào)、第7049426號(hào)、第7064244號(hào)；格林等人，自然遺傳學(xué)7:13_21(1994)；邁德茲(Medez)等人，自然遺傳學(xué)15146-156(1997)；格林和雅各布維茨，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，188:483_495(1998)(所有這些文獻(xiàn)都是以引用方式并入本文中)。實(shí)施兩個(gè)活動(dòng)。在活動(dòng)1中，采用XenoMouse的lgG2和IgG4同齡組。50%的小鼠接受大腸桿菌產(chǎn)生的人類(lèi)TSLP并且50%接受哺乳動(dòng)物產(chǎn)生的人類(lèi)TSLP(如上所述)。通過(guò)ELISA(如下所述)監(jiān)測(cè)血清效價(jià)并且使用以下方案融合具有最佳效價(jià)的小鼠以生成雜交瘤。處死所選小鼠并且自各同齡組收獲并匯集排干的淋巴結(jié)。富集淋巴樣細(xì)胞以獲得B細(xì)胞并將B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合以產(chǎn)生雜交瘤。然后將融合雜交瘤系平鋪于雜交瘤培養(yǎng)基中并在37°C下培養(yǎng)10-14天。如下所述通過(guò)ELISA篩選雜交瘤上清液中結(jié)合TSLP的IgG抗體。開(kāi)始第二個(gè)活動(dòng)，其中用哺乳動(dòng)物產(chǎn)生的人類(lèi)TSLP對(duì)IgG2XenoMouse的兩個(gè)同齡組實(shí)施免疫，并且用短尾猴TSLP對(duì)一個(gè)同齡組實(shí)施加強(qiáng)免疫。在若干輪免疫后，融合來(lái)自淋巴結(jié)的淋巴細(xì)胞并如上所述進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)后，如下所述通過(guò)ELISA篩選雜交瘤上清液與TSLP的結(jié)合。[1172]根據(jù)下述分析選擇來(lái)自?xún)蓚€(gè)活動(dòng)的多克隆上清液進(jìn)行進(jìn)一步亞克隆。鑒定含有作為T(mén)SLP活性潛在抑制劑的抗體的雜交瘤，并且進(jìn)一步確定與犬類(lèi)TSLP的交叉反應(yīng)性。結(jié)果展示于下文實(shí)例5中。根據(jù)雜交瘤在下述原代DC分析中的表現(xiàn)來(lái)選擇有希望的雜交瘤上清液。對(duì)那些雜交瘤進(jìn)行單細(xì)胞克隆和擴(kuò)增以供進(jìn)一步測(cè)試。然后如下所述純化抗體。使用Mab選擇樹(shù)脂(GE醫(yī)療保健公司(GEHealthcare))自雜交瘤的條件培養(yǎng)基純化抗體。將IOOyl在PBS中平衡的Mab選擇樹(shù)脂的12漿液添加至介于7_10ml之間的條件培養(yǎng)基(CM)。將管置于旋轉(zhuǎn)器上在4-8°C下過(guò)夜。以1，OOOXg將管離心5分鐘并傾析未結(jié)合部分。用5mlPBS洗滌樹(shù)脂并如上所述進(jìn)行離心和傾析。然后將樹(shù)脂轉(zhuǎn)移至SPIN-Χ,Ο.45ym,2ml管中。用0.5mlPBS將樹(shù)脂另外洗滌兩次并離心。通過(guò)在室溫下培育10分鐘并不時(shí)地實(shí)施混合用0.2ml0.1M乙酸洗脫Mab。將管離心，并且將30μ1IMTris緩沖液(ρΗ8.0)添加至洗脫液中。將純化Mab儲(chǔ)存在4-8°C下。實(shí)例4抗體分析A.檢測(cè)抗TSLP抗體的存在的ELISA通過(guò)以下方式實(shí)施ELISA用存于IxPBS/0.05%疊氮化物中的以重組方式產(chǎn)生的WtHuTSLP或pHisFlag以2μg/ml50μ1/孔涂布結(jié)合96孔板的科斯塔(Costar)3368培養(yǎng)基，并在4°C下培育過(guò)夜。將板洗滌并用250μ1IXPBS/1%乳汁(分析稀釋劑)封閉，并在室溫下培育至少30分鐘。添加約50μ1/孔的雜交瘤上清液、陽(yáng)性對(duì)照小鼠抗體M385、或陰性對(duì)照，并在室溫下培育2小時(shí)。將板洗滌，并施加存于分析稀釋劑中的400ng/ml第二抗體，即山羊抗人類(lèi)IgGFcHPR(皮爾斯公司(Pierce))或山羊抗小鼠IgGHPR(杰克遜實(shí)驗(yàn)室)。在RT下將板培育lhr，洗滌并在450nm下讀取0D。B.使用以下功能性分析中的一種實(shí)施對(duì)抗TSLP雜交瘤上清液的篩選1.用可溶性huIL-7Ra-huTSLPR-Fc蛋白涂布96孔板，所述蛋白在受體與人類(lèi)Fc之間具有8個(gè)氨基酸的連接體(SGGAPMLS，SEQIDNO382)，并在4°C下培育過(guò)夜。2.在RT下用PBS+1%BSA+5%蔗糖將板洗滌并封閉1小時(shí)。3.將板與生物素化huTSLPHFdel(HF代表聚HisFlag，其中TSLP缺失弗林蛋白酶裂解位點(diǎn))(del)—起培育。然后在RT下將板培育2h，其中存在或不存在(+/-)雜交瘤上清液或作為陽(yáng)性對(duì)照的小鼠抗人類(lèi)TSLP(M385)。4.實(shí)施SA-HRP檢測(cè)(抗生蛋白鏈菌素-辣根過(guò)氧化物酶)。SA牢固結(jié)合生物素化huTSLPHFdel的生物素部分，并且HRP催化過(guò)氧化氫對(duì)色原體TMB(變藍(lán))的氧化。B.細(xì)胞基分析1)根據(jù)以下方案測(cè)定雜交瘤上清液或純化抗體對(duì)表達(dá)人類(lèi)TSLPR-IL7R復(fù)合物的穩(wěn)定BAF細(xì)胞系的TSLP誘導(dǎo)增殖的抑制。1.洗滌存于生長(zhǎng)培養(yǎng)基RPMI1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+0.1%Pen/Strep+0.1%2_ME中的BAF=HuTSUR穩(wěn)定細(xì)胞系以移除維持培養(yǎng)基中所用TSLP，所述維持培養(yǎng)基與生長(zhǎng)培養(yǎng)基相同但添加有l(wèi)Ong/mLhuTSLPHFwt。2.在室溫下于各孔中將HuTSLPwtpHF(+/_)或短尾猴TSLPwtpHF(+/-)與雜交瘤上清液/春化抗體/或小鼠抗人類(lèi)TSLP(M385)—起培育30分鐘。3.添加5XIO4BAF細(xì)胞/孔并培育3天。[1188]4.用氘化胸苷(lyCi/孔)對(duì)細(xì)胞實(shí)施脈沖作用過(guò)夜。通過(guò)細(xì)胞納入的氘化胸苷量(CPM)來(lái)評(píng)價(jià)BAF細(xì)胞的細(xì)胞增殖或其抑制。2)原代細(xì)胞分析.根據(jù)以下方案測(cè)定雜交瘤或純化抗體對(duì)TSLP誘導(dǎo)骨保護(hù)素(OPG)(闡述于美國(guó)專(zhuān)利第6，284，728號(hào)中)自原代人類(lèi)樹(shù)突細(xì)胞(DC)產(chǎn)生的抑制。1.使用CDlc(BDCA-I)DC分離試劑盒(美天旎生物技術(shù)公司(MiltenyiBiotec))自正常國(guó)內(nèi)捐獻(xiàn)者白細(xì)胞采集包富集外周血⑶Ilc+骨髓DC。2.在室溫下將huTSLPwtpHF(+/-)或短尾猴TSLPwtpHF與上清液或純化抗體或小鼠抗人類(lèi)TSLP—起培育30分鐘。3.添加IXIO5細(xì)胞/孔并培育48小時(shí)。收獲上清液并通過(guò)ELISA分析人類(lèi)OPG產(chǎn)生，并且測(cè)定雜交瘤上清液或純化抗體對(duì)OPG產(chǎn)生的抑制。使用R&D系統(tǒng)DuoSet顯影試劑盒實(shí)施OPGELISA?？筎SLP抗體以劑量依賴(lài)性方式抑制自細(xì)胞產(chǎn)生0PG。3)短尾猴外周血單核細(xì)胞分析.根據(jù)以下方案測(cè)定雜交瘤上清液或純化抗體對(duì)犬類(lèi)TSLP誘導(dǎo)CCL22/MDC產(chǎn)生的抑制。1.自短尾猴(SNBL)獲得的外周血中的外周血單核細(xì)胞(PBMC)是通過(guò)將11血液PBS混合物涂覆在isolymph上來(lái)獲得。2.將短尾猴TSLPwtpHF(+/-)上清液/純化抗體或可溶性huIL_7Rα-huTSLPR-Fc在室溫下培育30分鐘。3.添加4XIO5細(xì)胞/孔并培育5天。收獲上清液并通過(guò)ELISA分析短尾猴CCL22/MDC的產(chǎn)生。實(shí)例5的測(cè)定在25°C下使用裝備有CM4傳感器芯片的必亞擴(kuò)(Biacore)3000儀器(國(guó)際必亞擴(kuò)AB(BiaCOreInternationalAB)，烏普薩拉，瑞典)實(shí)施本專(zhuān)利申請(qǐng)案中闡述的表面等離子共振實(shí)驗(yàn)。使用標(biāo)準(zhǔn)胺偶聯(lián)化學(xué)法以HBS-EP作為電泳緩沖液以共價(jià)方式將抗Fcγ特異性捕獲抗體固定在CM4芯片上的兩個(gè)流動(dòng)細(xì)胞上。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，用0.1MNHS與0.4MEDC的11(ν/ν)混合物活化各流動(dòng)細(xì)胞。以3，000RU的靶濃度將以30μg/ml存于IOmM乙酸鈉(pH5.0)中的AffiniPure山羊抗人類(lèi)IgG(Feγ片段特異性抗體)(杰克遜免疫研究(JacksonImmunoResearch)公司，偉群(WestGrove),ΡΑ)固定在兩個(gè)流動(dòng)細(xì)胞上。通過(guò)注射IM乙醇胺使殘留反應(yīng)性表面失活。然后在所有剩余步驟中將電泳緩沖液轉(zhuǎn)換為HBS-EP+0.lmg/mlBSA。測(cè)試以下抗體。A5IgG2是純化克隆抗體，A2IgGl和IgG2是重組或純化抗體，并且A3IgG4和A4IgG4是克隆上清液。在電泳緩沖液中適當(dāng)稀釋抗體，從而使得2分鐘的注射以10μΙ/min流經(jīng)測(cè)試流動(dòng)細(xì)胞，并且導(dǎo)致在測(cè)試流動(dòng)細(xì)胞表面上捕獲約110-175共振單位的抗體。在對(duì)照流動(dòng)細(xì)胞表面上未捕獲到抗體。然后使不同濃度的人類(lèi)、犬類(lèi)或鼠類(lèi)TSLP以及緩沖液空白流經(jīng)兩個(gè)流動(dòng)細(xì)胞。人類(lèi)和犬類(lèi)TSLP的濃度范圍為0.44-100nM,而鼠類(lèi)TSLP的濃度范圍為8.2-6000nM。使用50μ1/min的流速并且依次實(shí)施2分鐘的結(jié)合階段和10-30分鐘的解離階段。在每次循環(huán)后通過(guò)經(jīng)30秒注射IOmM甘氨酸(pH1.5)來(lái)使表面再生。然后在測(cè)試流動(dòng)細(xì)胞上捕獲新鮮抗體以準(zhǔn)備下一循環(huán)。通過(guò)以下方式使數(shù)據(jù)具有雙參考減去對(duì)照表面共振以移除體折射率變化，并隨后減去平均緩沖液空白共振以移除來(lái)自實(shí)驗(yàn)性流動(dòng)細(xì)胞的系統(tǒng)性人為因素。使用BIA評(píng)估軟件4.1版(國(guó)際必亞擴(kuò)AB，烏普薩拉，瑞典)中的局部Rmax處理TSLP數(shù)據(jù)并將其整體擬合至11交互作用模型中。確定結(jié)合GO和解離(kd)速率常數(shù)并使用其來(lái)計(jì)算解離平衡常數(shù)(Kd)。解離速率常數(shù)和解離平衡常數(shù)概述于實(shí)例6中的表中。實(shí)例6抗體的體外活件使用上述必亞擴(kuò)分析對(duì)以下抗體的Kd和Kd進(jìn)行表征。使用原代樹(shù)突細(xì)胞分析來(lái)測(cè)定IC50(pM)。使用純化克隆抗體來(lái)生成關(guān)于A5的數(shù)據(jù)，使用重組純化抗體來(lái)生成關(guān)于A2的數(shù)據(jù)，并且使用克隆上清液來(lái)生成關(guān)于A3和A4的數(shù)據(jù)。所有形式的TSLP都是自哺乳動(dòng)物細(xì)胞生成。<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>實(shí)例7抗體的重細(xì)表汰和純化表達(dá)抗體的穩(wěn)定細(xì)胞系的建立合成對(duì)應(yīng)于輕鏈或重鏈可變結(jié)構(gòu)域初始序列的重疊寡核苷酸用于有義鏈和反義鏈二者。在標(biāo)準(zhǔn)PCR中采用此寡核苷酸集合。使用此第一反應(yīng)的產(chǎn)物作為第二PCR擴(kuò)增的模板。將擴(kuò)增可變重鏈和可變輕鏈片段亞克隆至中間載體中并實(shí)施測(cè)序以鑒定無(wú)錯(cuò)產(chǎn)物。將可變重鏈片段克隆至含有信號(hào)肽和人類(lèi)IgG2恒定區(qū)的瞬時(shí)表達(dá)載體中。將可變輕鏈片段克隆至含有信號(hào)肽和人類(lèi)λ恒定區(qū)的瞬時(shí)表達(dá)載體中。將完整重鏈基因轉(zhuǎn)移至載體pDC324中。將完整輕鏈基因轉(zhuǎn)移至表達(dá)載體PDC323中。用于抗TSLP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的CS-9宿主細(xì)胞是通過(guò)適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基自DXB-Il細(xì)胞獲得的CHO細(xì)胞系(雷斯馬森等人，細(xì)胞學(xué)技術(shù)28=31-42,1998)。抗TSLP細(xì)胞系是通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)電穿孔或脂轉(zhuǎn)染程序以表達(dá)質(zhì)粒PDC323-抗TSLP-λ和pDC324_抗TSLP_IgG2轉(zhuǎn)染CS-9宿主細(xì)胞而產(chǎn)生的。在用表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞系后，使細(xì)胞在選擇培養(yǎng)基中生長(zhǎng)2-3周以使得可選擇質(zhì)粒并回收細(xì)胞。在某些情況下，培養(yǎng)基補(bǔ)加有3%經(jīng)透析胎牛血清(ds或dFBS)。如果使用血清，則在選擇階段后將其自培養(yǎng)基移除。使細(xì)胞在選擇培養(yǎng)基中生長(zhǎng)直至其達(dá)到>85%生存力。然后在培養(yǎng)基中培養(yǎng)此經(jīng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞集合。細(xì)胞系克降根據(jù)以下程序自所選純系制備細(xì)胞庫(kù)。克隆步驟確保所生成純系群體和細(xì)胞庫(kù)在工業(yè)制造中具有可復(fù)現(xiàn)性能。在限定稀釋度下將抗體表達(dá)細(xì)胞的擴(kuò)增集合接種于96孔板中，并在小規(guī)模研究中評(píng)估候選純系的生長(zhǎng)和生產(chǎn)力性能。實(shí)例8抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)界定表位的常用方式是實(shí)施競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)?？烧J(rèn)為彼此競(jìng)爭(zhēng)的抗體結(jié)合靶上的相同位點(diǎn)。此實(shí)例闡述確定結(jié)合TSLP的競(jìng)爭(zhēng)的方法以及在施用于本文所述多種抗體時(shí)所述方法的結(jié)果。可以多種方式實(shí)施分箱(binning)實(shí)驗(yàn)，并且所用方法可對(duì)分析結(jié)果具有一定影響。這些方法的共同之處在于，通常由一個(gè)參照抗體結(jié)合TSLP并用另一個(gè)抗體來(lái)探查。若參照抗體可阻止探針抗體的結(jié)合，則認(rèn)為所述抗體在同一箱(bin)中。使用抗體的順序非常重要。若使用抗體A作為參照抗體并且阻斷抗體B的結(jié)合，則相反情況并非總是成立用抗體B作為參照抗體不一定會(huì)阻斷抗體A。在此處有多個(gè)因素起作用抗體的結(jié)合可導(dǎo)致靶構(gòu)象改變而阻止第二抗體結(jié)合，或彼此重疊但未完全咬合的表位可能會(huì)使第二抗體與靶仍然具有足夠高的親和性交互作用從而容許結(jié)合。具有顯著較高親和性的抗體將阻斷抗體迫離的能力可能較大。一般來(lái)說(shuō)，若以任何順序都可觀察到競(jìng)爭(zhēng)則認(rèn)為抗體分箱在一起，并且若兩種抗體可彼此阻斷則可能表位重疊地更完全。對(duì)于此實(shí)例，使用賈(Jia)等人(免疫方法雜志，288(2004)91-98)所述多重分箱方法的修改形式。由于TSLP內(nèi)弗林蛋白酶裂解位點(diǎn)的存在可導(dǎo)致TSLP蛋白制劑具有異質(zhì)性，因此使用弗林蛋白酶裂解位點(diǎn)內(nèi)精氨酸突變?yōu)楸彼岬腡SLP。參見(jiàn)U.S.7，288，633。在室溫和黑暗中將各珠粒代碼的經(jīng)抗生蛋白鏈菌素包被的魯米尼克斯(Luminex)珠粒(魯米尼克斯，編號(hào)L100-L1XX-01，XX指明珠粒代碼)在100μ16pg/珠粒的生物素化單價(jià)小鼠抗人類(lèi)IgG捕獲抗體(BD菲明根公司(BDPharmingen)，編號(hào)555785)中培育1小時(shí)，然后用PBSA(磷酸緩沖鹽水(PBS)加上牛血清白蛋白(BSA))洗滌3x。將各代碼的珠粒單獨(dú)與ΙΟΟμΙ110稀釋的抗TSLP抗體(包被抗體)一起培育1小時(shí)，然后洗滌。匯集珠粒，然后使其分散至96孔濾板(密理博(Millipore)，編號(hào)MSBVN1250)中。將100μ12μg/ml的親代TSLP添加至一半孔中并將緩沖液添加至另一半孔中并培育1小時(shí)，然后洗滌。將100μ1110稀釋的抗TSLP抗體(檢測(cè)Ab)添加至一個(gè)含有TSLP的孔中和一個(gè)不含TSLP的孔中，培育1小時(shí)后洗滌。運(yùn)行無(wú)關(guān)人類(lèi)IgG(杰克遜，編號(hào)009-000-003)以及無(wú)抗體條件(空白)作為陰性對(duì)照。將20μ1PE-偶聯(lián)單價(jià)小鼠抗人類(lèi)IgG(BD菲明根公司，編號(hào)555787)添加至各孔中并培育1小時(shí)，然后洗滌。使珠粒再懸浮于75μ1PBSA中并在BioPlex儀器(貝爾瑞德(BioRad))上收集至少100個(gè)結(jié)果/珠粒代碼。[1215]自含有TSLP的反應(yīng)的信號(hào)減去無(wú)TSLP的相應(yīng)抗體對(duì)的中位熒光強(qiáng)度(MFI)。對(duì)于被認(rèn)為是同時(shí)結(jié)合并且因此存于不同箱中的抗體對(duì)來(lái)說(shuō)，反應(yīng)值應(yīng)滿(mǎn)足以下兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)1)不論哪種情況最高，所述值應(yīng)為與其自身配對(duì)的包被抗體、無(wú)關(guān)抗體或空白的2倍，以及2)所述值應(yīng)大于與無(wú)關(guān)抗體或空白包被珠粒共存的檢測(cè)抗體的信號(hào)。對(duì)各抗體之間競(jìng)爭(zhēng)的分析的復(fù)雜之處在于以下事實(shí)抗體作為探針時(shí)的性能與其作為阻斷劑時(shí)的性能不一致。然而，若僅考慮那些明確的抗體箱(即各抗體在用作參考抗體時(shí)可阻斷其它抗體)，發(fā)現(xiàn)最少有8個(gè)箱，如下表4中所示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table>[1219]應(yīng)注意，發(fā)現(xiàn)諸如A23和A6等某些抗體存于多個(gè)箱中。可確定其它分箱關(guān)系，并且在自這些箱中弓I入或排除抗體時(shí)偏向于排除。分析結(jié)果確定其它抗體中與參照抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合者?！敖徊娓?jìng)爭(zhēng)結(jié)合”意指參照抗體在用作阻斷抗體時(shí)能阻斷另一抗體的結(jié)合，當(dāng)用作探針時(shí)也可被另一抗體阻斷。換句話說(shuō)，若參照抗體能阻斷另一抗體，但另一抗體不能阻斷參照抗體，則不能說(shuō)所述抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)。交叉競(jìng)爭(zhēng)抗體的列表展示于表5中。表5^參照抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)抗體的實(shí)例A2A2UA23<table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>實(shí)例9表位作圖盡管通常將表位視作線性序列，但更常見(jiàn)的情況是抗體識(shí)別由不連續(xù)氨基酸組成的靶平面。這些氨基酸在線性序列上可能彼此遠(yuǎn)離但通過(guò)靶折疊而彼此接近，并且識(shí)別此一表位的抗體稱(chēng)作構(gòu)象敏感性抗體或直接稱(chēng)作構(gòu)象抗體?？赏ㄟ^(guò)使用變性蛋白質(zhì)印跡(WesternBlot)法來(lái)界定此類(lèi)結(jié)合，其中在凝膠上運(yùn)行之前在去污劑和還原劑存在下加熱靶以使其展開(kāi)。然后可用抗體探查此凝膠上的印跡，并且在此處理后能識(shí)別靶的抗體可能會(huì)識(shí)別線性表位。盡管可通過(guò)與肽(例如P印Spot)結(jié)合來(lái)界定結(jié)合線性序列的抗體的表位，但預(yù)計(jì)構(gòu)象抗體不會(huì)以高親和性結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)肽。將經(jīng)還原、熱變性、純化的親代TSLP蛋白載至存于MESSDS電泳緩沖液中的10%Bis-TrisNupage凝膠上。將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用存于PBS+0.05%Tween(PBST)中的5%脫脂奶粉(NFDM)封閉，并在RT下與TSLP抗體一起培育1小時(shí)。在PBST中將印跡洗滌3x，然后在RT下與山羊抗huIgG第二抗體一起培育1小時(shí)。再次洗滌印跡并將其與抗山羊IgG=Alexa680—起培育。在PBST中洗滌3χ后，在LiCor上掃描印跡以使區(qū)帶顯影。使用此方法來(lái)表征抗體六2、六4、六5、六6、六7、六10、六21、六23和六26。如蛋白質(zhì)印跡中的強(qiáng)區(qū)帶所證實(shí)，抗體Α2、Α4和Α5結(jié)合線性表位。所有其它抗體都是構(gòu)象抗體，因?yàn)槠湓诘鞍踪|(zhì)印跡中都無(wú)區(qū)帶或?yàn)闃O弱區(qū)帶。表位可進(jìn)一步定義為結(jié)構(gòu)性或功能性表位。功能性表位一般是結(jié)構(gòu)性表位的亞組并且由那些直接促進(jìn)交互作用(例如氫鍵、離子交互作用)親和性的殘基組成。結(jié)構(gòu)性表位可視為靶中由抗體覆蓋的區(qū)塊。采用掃描誘變來(lái)進(jìn)一步界定抗體所結(jié)合表位。通常使用丙氨酸掃描誘變來(lái)界定功能性表位；用丙氨酸(甲基側(cè)鏈)取代基本上相當(dāng)于截?cái)嘁吧桶被岬膫?cè)鏈并且相當(dāng)微弱。使用丙氨酸掃描可能不會(huì)揭示蛋白質(zhì)骨架中的交互作用，例如與酰胺鍵之間的氫鍵。作為替代，使用精氨酸和谷氨酸掃描誘變。選擇這兩種側(cè)鏈?zhǔn)且驗(yàn)槠渚哂休^大空間位阻和電荷，此使得在結(jié)構(gòu)性表位中發(fā)生突變時(shí)對(duì)抗體結(jié)合具有較大影響。一般采用精氨酸，除非是在WT殘基為精氨酸或賴(lài)氨酸時(shí)，并且在這些情況下所述殘基突變?yōu)楣劝彼嵋赞D(zhuǎn)換電荷。在少數(shù)情況下，WT殘基突變?yōu)榫彼岷凸劝彼岫摺＿x擇分布在整個(gè)TSLP中的95個(gè)氨基酸來(lái)突變?yōu)榫彼峄蚬劝彼?。由于疏水性殘基一般存在于蛋白質(zhì)折疊核心內(nèi)側(cè)，因此偏向于選擇帶電荷或極性氨基酸以降低突變導(dǎo)致錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)的可能性。由于不存在晶體結(jié)構(gòu)，因此所選擇的這些殘基殘基隨機(jī)分布于整個(gè)TSLP中。如實(shí)例8中所述，使用含有突變弗林蛋白酶裂解位點(diǎn)的TSLP。使用BI0PLEX結(jié)合分析來(lái)測(cè)量抗TSLP抗體與突變體TSLP的結(jié)合。生物素化五-HisAb(快而精公司(Qiagen)，批號(hào)130163339)結(jié)合至抗生蛋白鏈菌素包被珠粒(魯米尼克斯，編號(hào)L100-L1XX-01，XX指明珠粒代碼)的100個(gè)代碼的珠粒上。使用這些來(lái)捕獲his標(biāo)記蛋白。100個(gè)代碼的珠粒容許對(duì)所有85個(gè)突變體、3個(gè)親代對(duì)照、1個(gè)無(wú)關(guān)蛋白和12個(gè)空白進(jìn)行多重分析。比較突變體蛋白的抗體結(jié)合與親代蛋白的抗體結(jié)合。在RT和劇烈震蕩下經(jīng)1小時(shí)使100μ1存于上清液中的15稀釋的TSLP突變體和親代蛋白以及ιμg/mL純化TSLPWT、1μg/mL無(wú)關(guān)蛋白或無(wú)蛋白空白結(jié)合至包被珠粒上。洗滌珠粒并將其等分至96孔濾板(密理博)中。將100μ14倍稀釋的抗TSLP抗體一式三份添加至孔中，在RT下培育0.5小時(shí)并洗滌。將ΙΟΟμΙ1250稀釋的PE-偶聯(lián)抗人類(lèi)IgGFc(杰克遜，編號(hào)109-116-170)添加至各孔中，培育0.5小時(shí)并洗滌。使珠粒再懸浮于75μ1溶液中，震蕩至少3min，且在BI0PLEX上讀取。若使殘基突變?yōu)榫彼峄蚬劝彼釙?huì)破壞抗體結(jié)合，則認(rèn)為殘基是結(jié)構(gòu)性表位的一部分(“命中”)。此破壞可視作與親代TSLP的抗體結(jié)合相比EC50改變或最大信號(hào)降低。使用親代蛋白和突變體的抗體結(jié)合曲線的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析來(lái)鑒定統(tǒng)計(jì)顯著性EC50改變。所述分析考慮到了分析和曲線擬合中的變化。比較突變體結(jié)合曲線和親代結(jié)合曲線的EC50。對(duì)于其它考慮因素可將統(tǒng)計(jì)顯著性差異確定為命中。自此分析中排除具有“無(wú)擬合”或“壞擬合”標(biāo)志的曲線。在EC50估計(jì)值比較中考慮兩個(gè)變化來(lái)源，曲線擬合變化和珠粒間變化。使親代蛋白和突變體連接至不同珠粒上，因此其差異與珠粒間差異相混淆。通過(guò)EC50對(duì)數(shù)估計(jì)值的標(biāo)準(zhǔn)誤差來(lái)估計(jì)曲線擬合變化。珠粒間變化是以實(shí)驗(yàn)方式使用將親代對(duì)照連接至每個(gè)珠粒上的實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。使用親代結(jié)合曲線EC50估計(jì)值中的珠粒變化來(lái)估計(jì)珠粒間變化。使用司徒登氏t-測(cè)試(Student'st-test)來(lái)實(shí)施兩個(gè)EC50(以對(duì)數(shù)標(biāo)度)的比較。將t-統(tǒng)計(jì)值計(jì)算為δ(EC50估計(jì)值之間的絕對(duì)差異)與δ標(biāo)準(zhǔn)偏差之間的比率。通過(guò)三個(gè)分量(即突變體和親代曲線在非線性回歸中的EC50差異估計(jì)值以及自單獨(dú)實(shí)驗(yàn)估計(jì)的兩次珠粒間差異)的和來(lái)估計(jì)S的差異。珠粒間差異加倍是由于以下假設(shè)突變體和親代珠粒二者具有相同差異。使用塞氏逼近法(Satterthwaite，sapproximation)(1946)來(lái)計(jì)算δ的標(biāo)準(zhǔn)偏差的自由度。個(gè)別P-值和置信區(qū)間(95%和99%)是根據(jù)各比較的司徒登氏t分布來(lái)獲得。在多個(gè)親代對(duì)照的情況下，通過(guò)采用與突變體最相似的親代對(duì)照來(lái)實(shí)施保守方法，即采用具有最大P-值者。在同時(shí)實(shí)施大量測(cè)試時(shí)，多重性調(diào)整對(duì)控制假陽(yáng)性非常重要。對(duì)于此分析實(shí)施兩種形式的多重性調(diào)整族誤差(FWE)控制和錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率(FDR)控制。FEW處理法控制一或多個(gè)命中不真實(shí)的可能性；FDR處理法控制所選擇命中中假陽(yáng)性的預(yù)期比例。前一種處理法比后一種更保守并且不如后一種有效。有許多方法可用于這兩種處理法，對(duì)于此分析，選擇霍克方法(Hochberg’smethod)(1988)進(jìn)行FEW分析并且選擇本杰明-霍克(Benjamini-Hochberg)FDR方法(1995)進(jìn)行FDR分析。計(jì)算兩種處理法中各抗體或整個(gè)分析的經(jīng)調(diào)整P-值。認(rèn)為EC50顯著與親代不同(即各抗體的FWE經(jīng)調(diào)整ρ-值小于0.01，或最大信號(hào)低于親代50%)的突變是結(jié)構(gòu)性表位的一部分(表6)。認(rèn)為所有抗體的EC50改變或最大信號(hào)降低都很顯著的突變經(jīng)錯(cuò)誤折疊。這些突變是Y15R、T55R、T74R和A77R。表6.在BI0PLEX中影響抗體結(jié)合并且是結(jié)構(gòu)性表位的一部分的突變的概述。<table>tableseeoriginaldocumentpage78</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage79</column></row><table>存在若干個(gè)可破壞多個(gè)抗體結(jié)合的突變，尤其是K73E、K21E和D22R。誘變用于驗(yàn)證分箱法所生成的數(shù)據(jù)并且進(jìn)一步縮小表位范圍。TSLP中的突變似乎可影響分箱在一起的抗體簇。實(shí)例10毒理學(xué)結(jié)合人類(lèi)TSLP的抗體也可與其它物種的TSLP交叉反應(yīng)，從而使得可在那些物種中進(jìn)行毒理學(xué)測(cè)試。在此實(shí)例中，將可與短尾猴TSLP交叉反應(yīng)的抗體投與短尾猴。然后觀察猴子的毒性效應(yīng)。在短尾猴中進(jìn)行的單劑量安全性藥理學(xué)研究表明，抗體的單一300mg/kg靜脈內(nèi)劑量不具有心血管、呼吸、體溫或神經(jīng)行為效應(yīng)。經(jīng)4周每周一次以皮下方式給予短尾猴(5只/性別/組)30、100或300mg/kg劑量。在任一劑量下都未觀察到有害毒理作用。抗體不影響臨床觀察、體重、眼科、ECG、臨床病理學(xué)或解剖病理學(xué)。在單獨(dú)研究中，向遙測(cè)的四只雄性短尾猴給予媒劑的單一靜脈內(nèi)劑量(第1天)和300mg/kg的抗體(第3天)。在4天的觀察期間未觀察到對(duì)心血管、呼吸或神經(jīng)功能的效應(yīng)。如FDA指導(dǎo)“用于人類(lèi)的單克隆抗體產(chǎn)物制造和測(cè)試中的觀點(diǎn)(PointstoConsiderintheManufactureandTestingofMonoclonalAnitbodyPrductsforHumanUse)”(FDA生物制品評(píng)價(jià)與研究中心，1997年2月28日)中所推薦，進(jìn)一步測(cè)試抗體以確定其與正常人類(lèi)和短尾猴組織的交叉反應(yīng)性。在1或50μg/mL的劑量下未觀察到正常組織染色。上述結(jié)果表明，預(yù)期抗體對(duì)人類(lèi)不產(chǎn)生毒性效應(yīng)。權(quán)利要求一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其包含選自由以下組成的群組的氨基酸序列a.輕鏈CDR3序列，其選自由以下組成的群組i.輕鏈CDR3序列，其與選自由A1至A27的輕鏈CDR3序列組成的群組的CDR3序列的差異總計(jì)不超過(guò)兩個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.QQAX8SFPLT(SEQIDNO251)；和b.重鏈CDR3序列，其選自由以下組成的群組i.重鏈CDR3序列，其與選自由A1至A27的重鏈CDR3序列組成的群組的CDR3序列的差異總計(jì)不超過(guò)三個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.GGGIX12VADYYX13YGMDV(SEQIDNO255)；和iii.DX21GX22SGWPLFX23Y(SEQIDNO259)；其中X8是N殘基或D殘基；X12是P殘基或A殘基；X13是Y殘基或F殘基；X21是G殘基或R殘基；X22是S殘基或T殘基；X23是A殘基或D殘基；并且其中所述抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合TSLP。2.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其另外包含選自由以下組成的群組的氨基酸序列a.輕鏈CDR1序列，其選自由以下組成的群組i.輕鏈CDR1序列，其與A1-A27的輕鏈CDR1序列的差異不超過(guò)三個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.RSSQSLX1YSDGX2TYLN(SEQIDNO246)；iii.RASQX4X5SSWLA(SEQIDNO:249)；禾口b.輕鏈CDR2序列，其選自由以下組成的群組i.輕鏈CDR2序列，其與A1-A27的CDR2序列的差異不超過(guò)兩個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.KVSX3WDS(SEQIDNO247)；iii.X6X7SSLQS(SEQIDNO:250)；禾口iv.QDX9KRPS(SEQIDNO252)；c.重鏈CDR1序列，其選自由以下組成的群組i.重鏈⑶R1序列，其與A1-A27的⑶R1序列的差異不超過(guò)兩個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.X10YGMH(SEQIDNO253)；禾口iii.X15X16YMX17(SEQIDNO257)；d.重鏈CDR2序列，其選自由以下組成的群組i.重鏈⑶R2序列，其與A1-A27的⑶R2序列的差異不超過(guò)三個(gè)氨基酸添加、取代、和/或缺失；ii.VIWXnDGSNKYYADSVKG(SEQIDNO254)；iii.VISYDGSX14KYYADSVKG(SEQIDNO:256)；和iv.WINPNSGGTNX18X19X20KFQG(SEQIDNO:258)；其中&是￥殘基或I殘基；X2是N殘基或D殘基；&是￥殘基或N殘基；&是6殘基或S殘基；殘基或I殘基；X6是N殘基或T殘基；殘基或A殘基；^是1(殘基或N殘基；X1(l是S殘基或N殘基；、是￥殘基或F殘基；&4是￥殘基或N殘基；&5是0殘基或G殘基；&6是￥殘基或D殘基；1是￥殘基或H殘基；&8是￥殘基或H殘基；&9是乂殘基或A殘基；X2(l是Q殘基或R殘基；并且其中所述抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合TSLP。3.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含i.選自A1-A27的輕鏈CDR1序列；ii.選自A1-A27的輕鏈CDR2序列；iii.選自A1-A27的輕鏈CDR3序列；或b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含i.選自A1-A27的重鏈CDR1序列；ii.選自A1-A27的重鏈CDR2序列；禾口iii.選自A1-A27的重鏈CDR3序列；或c.(a)中的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)中的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域。4.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自由以下組成的群組i.具有至少80%與選自L1-L27的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列相同的序列的氨基酸；ii.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列至少80%與編碼L1-L27的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列相同；iii.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在中等嚴(yán)格條件下與由L1-L27的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的補(bǔ)體雜交；b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自由以下組成的群組i.至少80%與H1-H27重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列相同的氨基酸序列；ii.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列至少80%與編碼H1-H27重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列相同；iii.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在中等嚴(yán)格條件下與由H1-H27重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的補(bǔ)體雜交；或c.(a)中的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)中的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合TSLP。5.—種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自由以下組成的群組L1-L27；b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自由以下組成的群組H1-H27；或c.(a)中的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)中的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合TSLP。6.如權(quán)利要求5所述的經(jīng)分離結(jié)合蛋白，其包含選自由以下組成的群組的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13.1H13、L13.2H13、L14.1H14、L14.2H14、L15.1H15、L15.2H15、L16.1H16、L16.2H16、L17H17、L18.1H18、L18.2H18、L19.1H19、L19.2H19、L20.1H20、L20.2H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、和L27H27。7.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求5所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白以實(shí)質(zhì)上與選自由A2、A3、A4和A5組成的抗體組的參照抗體相同的Kd結(jié)合TSLP。8.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求5所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中根據(jù)原代細(xì)胞0PG分析，所述結(jié)合蛋白以與選自由A2、A3、A4和A5組成的抗體組的參照抗體相同的IC50抑制TSLP活性。9.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白選自由以下組成的群組人類(lèi)抗體、人類(lèi)化抗體、嵌合抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、抗原結(jié)合抗體片段、單鏈抗體、單體抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、Fab片段、F(fa’)x片段、結(jié)構(gòu)域抗體、IgD抗體、IgE抗體、和IgM抗體、和IgGl抗體、和IgG2抗體、和IgG3抗體、和IgG4抗體，并且IgG4抗體在鉸鏈區(qū)中具有至少一個(gè)突變，此可緩和形成H鏈內(nèi)二硫鍵的趨勢(shì)。10.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白是人類(lèi)抗體。11.一種醫(yī)藥組合物，其包含如權(quán)利要求9或10所述的抗體。12.—種經(jīng)分離核酸，其包含編碼如權(quán)利要求5所述的抗原結(jié)合劑中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域、所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域、或二者的多核苷酸序列。13.如權(quán)利要求12所述的經(jīng)分離核酸，其中所述序列選自L1-L27、H1-H27或二者。14.一種重組表達(dá)載體，其包含如權(quán)利要求12所述的核酸。15.一種宿主細(xì)胞，其包含如權(quán)利要求14所述的載體。16.一種雜交瘤，其能產(chǎn)生如權(quán)利要求10所述的抗體。17.—種產(chǎn)生如權(quán)利要求11所述的抗體的方法，其包含在容許表達(dá)所述抗體的條件下培育如權(quán)利要求15所述的宿主細(xì)胞。18.一種在需要治療的個(gè)體中治療TSLP相關(guān)炎癥病況的方法，其包含向所述個(gè)體投與治療有效量的如權(quán)利要求11所述的組合物。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述炎癥病況選自由以下組成的群組過(guò)敏性哮喘、過(guò)敏性鼻竇炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎和特應(yīng)性皮炎。20.一種在需要治療的個(gè)體中治療TSLP相關(guān)纖維化病癥的方法，其包含向所述個(gè)體投與治療有效量的如權(quán)利要求11所述的組合物。21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述纖維化病癥選自由以下組成的群組硬皮癥、間質(zhì)性肺病、特發(fā)性肺纖維化、B型或C型慢性肝炎引發(fā)的纖維化、輻射誘發(fā)的纖維化、和傷口愈合引發(fā)的纖維化。22.—種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其與選自由A1-A27組成的群組的抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合TSLP。23.如權(quán)利要求22所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白包含抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。24.一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其以野生型親和性結(jié)合野生型TSLP，其中所述抗原結(jié)合蛋白以高于所述野生型親和性的親和性結(jié)合一組突變TSLP中的任一者，其中所述組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K67E、K97E、K98E、R100E、K101E、和K103E。25.如權(quán)利要求24所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中任何兩個(gè)或更多個(gè)成員的結(jié)合親和性高于所述野生型親和性。26.如權(quán)利要求25所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中所有成員的結(jié)合親和性都高于所述野生型親和性。27.一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其以野生型親和性結(jié)合野生型TSLP，其中所述抗原結(jié)合蛋白以低于所述野生型親和性的親和性結(jié)合一組突變TSLP中的任一者，其中所述組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K21E、T25R、S28R、S64R、和K73E。28.如權(quán)利要求27所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中任何兩個(gè)或更多個(gè)成員的結(jié)合親和性低于所述野生型親和性。29.如權(quán)利要求28所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中所有成員的結(jié)合親和性都低于所述野生型親和性。30.如權(quán)利要求27所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白以高于所述野生型親和性的親和性結(jié)合第二組突變TSLP中的任一者，其中所述第二組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K67E、K97E、K98E、R100E、K101E、和K103E。31.一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其以野生型親和性結(jié)合野生型TSLP，其中所述抗原結(jié)合蛋白以高于所述野生型親和性的親和性結(jié)合一組突變TSLP中的任一者，其中所述組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K97E、K98E、R100E、K101E、和K103E。32.如權(quán)利要求31所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中任何兩個(gè)或更多個(gè)成員的結(jié)合親和性高于所述野生型親和性。33.如權(quán)利要求32所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中所有成員的結(jié)合親和性都高于所述野生型親和性。34.一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其以野生型親和性結(jié)合野生型TSLP，其中所述抗原結(jié)合蛋白以低于所述野生型親和性的親和性結(jié)合一組突變TSLP中的任一者，其中所述組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K10E、A14R、K21E、D22R、K73E、K75E、和A76R。35.如權(quán)利要求34所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中任何兩個(gè)或更多個(gè)成員的結(jié)合親和性低于所述野生型親和性。36.如權(quán)利要求35所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中所有成員的結(jié)合親和性都低于所述野生型親和性。37.如權(quán)利要求34所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白以高于所述野生型親和性的親和性結(jié)合第二組突變TSLP中的任一者，其中所述第二組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K97E、K98E、R100E、K101E、和K103E。38.一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其以野生型親和性結(jié)合野生型TSLP，其中所述抗原結(jié)合蛋白以低于所述野生型親和性的親和性結(jié)合一組突變TSLP中的任一者，其中所述組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K12E、D22R、S40R、R122E、N124E、R125E、和K129E。39.如權(quán)利要求38所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中任何兩個(gè)或更多個(gè)成員的結(jié)合親和性低于所述野生型親和性。40.如權(quán)利要求39所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中所有成員的結(jié)合親和性都低于所述野生型親和性。41.一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其以野生型親和性結(jié)合野生型TSLP，其中所述抗原結(jié)合蛋白以低于所述野生型親和性的親和性結(jié)合一組突變TSLP中的任一者，其中所述組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:S40R、S42R、H46R、R122E、和K129E。42.如權(quán)利要求41所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中任何兩個(gè)或更多個(gè)成員的結(jié)合親和性低于所述野生型親和性。43.如權(quán)利要求42所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中所有成員的結(jié)合親和性都低于所述野生型親和性。44.一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其以野生型親和性結(jié)合野生型TSLP，其中所述抗原結(jié)合蛋白以低于所述野生型親和性的親和性結(jié)合一組突變TSLP中的任一者，其中所述組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:D2R、T4R、D7R、S42R、H46R、T49R、E50R、Q112R、R122E、R125E、和K129E。45.如權(quán)利要求44所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中任何兩個(gè)或更多個(gè)成員的結(jié)合親和性低于所述野生型親和性。46.如權(quán)利要求45所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中所有成員的結(jié)合親和性都低于所述野生型親和性。47.如權(quán)利要求44所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白以高于所述野生型親和性的親和性結(jié)合包含突變KlOlE的突變TSLP。48.一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其以野生型親和性結(jié)合野生型TSLP，其中所述抗原結(jié)合蛋白以低于所述野生型親和性的親和性結(jié)合一組突變TSLP中的任一者，其中所述組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:N5R、S17R、T18R、K21E、D22R、T25R、T33R、H46R、A63R、S64R、A66R、E68R、K73E、K75E、A76R、A92R、T93R、Q94R、禾口A95R。49.如權(quán)利要求48所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中任何兩個(gè)或更多個(gè)成員的結(jié)合親和性低于所述野生型親和性。50.如權(quán)利要求49所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中所有成員的結(jié)合親和性都低于所述野生型親和性。51.如權(quán)利要求48所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白以高于所述野生型親和性的親和性結(jié)合第二組突變TSLP中的任一者，其中所述第二組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K97E、K98E、R100E、K101E、和K103E。52.一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其以野生型親和性結(jié)合野生型TSLP，其中所述抗原結(jié)合蛋白以低于所述野生型親和性的親和性結(jié)合一組突變TSLP中的任一者，其中所述組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K21E、K21R、D22R、T25R、T33R、S64R、K73E、K75E、ElllRjPS114R。53.如權(quán)利要求52所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中任何兩個(gè)或更多個(gè)成員的結(jié)合親和性低于所述野生型親和性。54.如權(quán)利要求53所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中所有成員的結(jié)合親和性都低于所述野生型親和性。55.如權(quán)利要求52所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白以高于所述野生型親和性的親和性結(jié)合第二組突變TSLP中的任一者，其中所述第二組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K97E、K98E、R100E、K101E、和K103E。56.一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其以野生型親和性結(jié)合野生型TSLP，其中所述抗原結(jié)合蛋白以低于所述野生型親和性的親和性結(jié)合一組突變TSLP中的任一者，其中所述組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:E9R、K10E、K12E、A13R、S17R、S20R、K21E、K21R、K73E、K75E、N124E、和R125E。57.如權(quán)利要求56所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中任何兩個(gè)或更多個(gè)成員的結(jié)合親和性低于所述野生型親和性。58.如權(quán)利要求57所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中所有成員的結(jié)合親和性都低于所述野生型親和性。59.如權(quán)利要求56所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白以高于所述野生型親和性的親和性結(jié)合第二組突變TSLP中的任一者，其中所述第二組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K67E、K97E、K98E、R100E、K101E、和K103E。60.一種經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其以野生型親和性結(jié)合野生型TSLP，其中所述抗原結(jié)合蛋白以低于所述野生型親和性的親和性結(jié)合一組突變TSLP中的任一者，其中所述組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:A14R、K21E、D22R、A63R、S64R、K67E、K73E、A76R、A92R、和A95R。61.如權(quán)利要求60所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中任何兩個(gè)或更多個(gè)成員的結(jié)合親和性低于所述野生型親和性。62.如權(quán)利要求61所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與所述組突變TSLP中所有成員的結(jié)合親和性都低于所述野生型親和性。63.如權(quán)利要求60所述的經(jīng)分離抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白以高于所述野生型親和性的親和性結(jié)合第二組突變TSLP中的任一者，其中所述第二組突變TSLP包括包含選自由以下組成的群組的突變的突變TSLP:K97E、K98E、R100E、K101E、和K103E。全文摘要本發(fā)明提供涉及結(jié)合人類(lèi)胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)的抗原結(jié)合蛋白且包括抗體在內(nèi)的組合物和方法。在特定實(shí)施例中，本發(fā)明提供完全人類(lèi)、人類(lèi)化和嵌合抗TSLP抗體以及所述抗體的衍生物。本發(fā)明另外提供編碼所述抗體和抗體片段和衍生物的核酸，以及制備和使用所述抗體的方法，包括治療和預(yù)防TSLP相關(guān)炎癥和纖維化病癥的方法。文檔編號(hào)C07K16/24GK101809035SQ200880106436公開(kāi)日2010年8月18日申請(qǐng)日期2008年9月9日優(yōu)先權(quán)日2007年9月10日發(fā)明者克里斯托弗·梅林,波林·P·尹,詹姆斯·F·斯馬瑟斯,邁克爾·R·科莫申請(qǐng)人:安美基公司