專利名稱：Lfa－1拮抗劑化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及與CD11/CD18粘附受體結(jié)合，尤其是淋巴細胞功能相關(guān)抗原-1(LFA-1)的新化合物，以及含所述化合物的藥物組合物，能用來治療LFA-1介導的疾病。
背景技術(shù)：
炎癥人外周血主要由血紅細胞、血小板以及白細胞(white blood cells orleukocytes)組成。白細胞又細分為嗜中性粒細胞、淋巴細胞(主要為B細胞和T細胞亞型)、單核細胞、嗜曙紅細胞和嗜堿細胞。嗜中性粒細胞、嗜曙紅細胞和嗜堿細胞有時也被稱為“粒細胞”，或“多形核(PMN)粒細胞”，因為它們細胞質(zhì)和多個核的顆粒外觀。粒細胞和單核細胞經(jīng)常被歸類為“吞噬細胞”，因為它們能吞噬或攝取微生物和一般被稱為“抗原”的異物(foreign mater)。單核細胞也被這樣稱呼是因為它們巨大的單核以及它們會轉(zhuǎn)變成巨噬細胞。吞噬細胞在保護機體抵抗各種感染，并與淋巴細胞一起在炎癥疾病中發(fā)揮重要作用。嗜中性粒細胞是人外周血中最常見的白細胞，其次是淋巴細胞。在一微升正常人外周血中，含有約6,000個白細胞，其中有約4,000個嗜中性粒細胞，1500個淋巴細胞，250個單核細胞，150個嗜曙紅細胞以及25個嗜堿細胞。
在炎癥反應(yīng)的過程中，外周血中的白細胞通過一系列的細胞間相互作用集中到炎癥或損傷部位(見

圖1)。免疫功能的引發(fā)和維持是由細胞間的相互粘附作用以及白細胞與其他細胞之間的相互作用導致的信號傳導來調(diào)節(jié)。炎癥反應(yīng)的一個重要步驟就是白細胞粘附到血管內(nèi)皮細胞，從循環(huán)系統(tǒng)中向炎癥部位遷移(圖1)。T淋巴細胞的免疫識別需要T細胞受體與抗原(與主要的組織相容性復合物體結(jié)合)之間的相互作用以及能促進T細胞在抗原呈遞細胞上的附著和T細胞激活信號轉(zhuǎn)導的黏附受體的參與。淋巴細胞功能相關(guān)抗原-1(LFA-1)被確定為主要的整合素，介導淋巴細胞粘附及激活，從而引起正常的免疫應(yīng)答和幾種病理狀態(tài)(Springer，T.A.，Nature 346425-434(1990))。細胞間粘附分子(ICAM)-1，-2，-3，是免疫球蛋白超家族的成員，并是內(nèi)皮細胞、白細胞以及其他細胞類型上LFA-1的配體。LFA-1與ICAMs的結(jié)合，引發(fā)一系列的淋巴細胞功能，包括輔助T細胞接觸抗原呈遞細胞時產(chǎn)生淋巴因子，T-淋巴細胞介導的靶細胞溶解，自然殺死癌細胞，以及通過T細胞與B細胞相互作用產(chǎn)生免疫球蛋白。因此，淋巴細胞功能的很多方面參與了LFA-1整合素與其ICAM配體的相互作用。許多炎癥疾病都直接涉及到這種LFA-1ICAM介導相互作用，包括移植排斥、皮炎、牛皮癬、哮喘和風濕性關(guān)節(jié)炎。
淋巴細胞上的LFA-1(CD11a/CD18)在慢性炎癥和免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用，而白細胞整合素家族的其他成員(CD11b/CD18，CD11c/CD18和CD11d/CD18)對其他白細胞，如粒細胞和單核細胞，也發(fā)揮重要作用，尤其是在對感染劑的早期應(yīng)答以及在急性炎癥反應(yīng)中。
多形核白細胞來源于嗜中性粒細胞、嗜曙紅細胞和嗜堿細胞系，它作為機體的第一道防御屏障其基本功能是感知炎癥刺激并穿過內(nèi)皮細胞執(zhí)行清除功能。整合素Mac-1(CD11b/CD18)被激活后，在這些細胞上的表達迅速上調(diào)，并與其多重配體結(jié)合，從而釋放氧自由基、蛋白酶和磷脂酶。在某些慢性炎癥狀態(tài)下，這種集中受到不適當?shù)恼{(diào)控，導致顯著的細胞和組織損傷。(Harlan，J.M.，Acta Med Scand Suppl.，715123(1987)；Weiss，S.，New England J.ofMed.，320365(1989))。
LFA-1(CD11a/CD18)和Mac-1(CD11b/CD18)粘附受體分子的(CD11/CD18)家族包括四種密切相關(guān)的細胞表面糖蛋白LFA-1(CD11a/CD18)，Mac-1(CD11b/CD18)，p150.95(CD11c/CD18)和(CD11d/CD18)。除了巨噬細胞的一個亞群之外，LFA-1存在于所有成熟的白細胞的表面，并被認為是主要的淋巴整合素。Mac-1、p150.95和CD11d/CD18的表達主要僅限于骨髓譜系細胞(包括嗜中性粒細胞、單核細胞、巨噬細胞和肥大細胞)。功能研究表明LFA-1與數(shù)種配體相互作用，包括ICAM-1(Rothlein等，J.Immunol.1371270-1274(1986))、ICAM-2(Staunton等，Nature 339361-364(1989))、ICAM-3(Fawcett等，Nature 360481-484(1992)；Vezeux等，Nature 360485-488，(1992)；de Fougerolles and Springer，J.Exp.Med.175185-190(1990))以及前腦胞(Telencephalin)(Tian等，J.Immunol.158928-936(1997))。
CD11/CD18家族與調(diào)節(jié)細胞相互粘附作用大整合素受體家族在結(jié)構(gòu)和遺傳特性上相互關(guān)聯(lián)，所述細胞粘附作用包括胚形成，對細胞外底物的粘附，以及細胞分化(Hynes，R.O.，Cell 48549-554(1987)；Kishimoto等，Adv.Immunol.46149-182(1989)；Kishimoto等，Cell 48681-690(1987)；Ruoslahti等，Science 238491-497(1987))。
整合素是一類跨膜異型二聚體，包括非共價結(jié)合的α亞基和β亞基。β亞基通常能與一個以上的α亞基結(jié)合，并且那些有一個共同的β亞基的異型二聚體被歸類為整合素群的一個亞家族(Larson and Springer，″Structure andfunction ofleukocyte integrins，″Immunol.Rev.114181-217(1990))。
研究發(fā)現(xiàn)CD11/CD18家族的整合素分子及其細胞配體介導了多種細胞間相互作用，尤其是在炎癥反應(yīng)中。這些蛋白被證明在免疫系統(tǒng)的粘附功能中發(fā)揮極其重要的作用。(Kishimoto等，Adv.Immunol.46149-182(1989))。研究發(fā)現(xiàn)抗LFA-1的單克隆抗體能阻斷白細胞對內(nèi)皮細胞的粘附(Dustin等，J.cell.Biol.107321-331(1988)；Smith等，J.Clin.Invest.832008-2017(1989))并抑制T細胞的激活(Kuypers等，Res.Immunol.，140461(1989))，以及抗原特異性CTL殺傷所需共軛物的形成(Kishimoto等，Adv.Immunol.46149-182(1989))，T細胞增殖(Davignon等，J.Immunol.127590-595(1981))和NK細胞殺傷作用(Krensky等，J.Immunol.131611-616(1983))。
ICAMsICAM-1(CD54)為細胞表面粘附受體，是免疫球蛋白超家族一個成員(Rothlein等，J.Immunol.1371270-1274(1986)；Staunton等，Cell 52925-933(1988))。這個超家族的成員的特征是有一個或多個Ig同源區(qū)，每個同源區(qū)含有一個二硫橋環(huán)，該環(huán)含有排列在兩個片層的多個反平行β折疊。已經(jīng)確定三個同源區(qū)類型，每一類型都具有其典型長度和處在形成二硫鍵的半胱氨酸之間的氨基酸殘基共有序列(Williams，A.F.等Ann Rev.Immunol.6381-405(1988)；Hunkapillar，T.等Adv.Immunol.441-63(1989))。ICAM-1在多種造血和非造血細胞上表達，并且，在各種炎癥介質(zhì)的作用下，在炎癥部位表達上調(diào)(Dustin等，J.Immunol.，137256-254(1986))。ICAM-1是一種分子量為90,000-110,000道爾頓的糖蛋白，在未受刺激的內(nèi)皮細胞上具有低的信使RNA水平，和中等的表面表達水平。LPS、IL-1和TNF能極大地上調(diào)ICAM-1的mRNA水平和表面表達水平，大約18-24小時表達達到最高水平(Dustin等，J.Cell.Biol.107321-331(1988)；Staunton等，Cell52925-933(1988))。ICAM-1具有五個細胞外Ig類似結(jié)構(gòu)域(分別指定為1，2，3，4和5結(jié)構(gòu)域D1，D2，D3，D4和D5)和一個細胞內(nèi)或細胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。在Staunton等(Cell 52925-933(1988))中闡述了這些結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)和序列。
ICAM-1最初被定義為LFA-1的反受體(counter-receptor)(Springer等，Ann.Rev.Immunol，5223-252(1987)；Marlincell 51813-819(1987)；Simmons等，Nature 331624-627(1988)；Staunton Nature 33961-64(1989)；Staunton等，Cell 52925-933(1988))。已經(jīng)知道LFA-1/ICAM-1相互作用在淋巴細胞(Dustin等，J.Cell.Biol.107321-331(1988)；Mentzer等，J.Cell.Physiol.126285-290(1986))，單核細胞(Amaout等，J.Cell Physiol.137305(1988)；Mentzer等，J.Cell.Physiol.130410-415(1987)；te Velde等，Immunology61261-267(1987))，和嗜中性粒細胞(Lo等，J.Immunol.143(10)3325-3329(1989)；Smith等，J.Clin.Invest.832008-2017(1989))對內(nèi)皮細胞的粘附中至少起部分作用。通過對ICAM-1的功能抑制性單克隆抗體的研究，發(fā)現(xiàn)了另外的LFA-1配體，ICAM-2和ICAM-3(Simmons，Cancer Surveys 24，CellAdhesion and Cancer，1995)，它們介導了淋巴細胞對其他白細胞以及非造血細胞的粘附。LFA-1和ICAM-2的相互作用被認為介導了自然殺傷細胞(natural killer cell)的活性(Helander等，Nature 382265-267(1996))，而ICAM-3結(jié)合被認為在淋巴細胞的激活和免疫應(yīng)答的引發(fā)中起作用(Simmons，ibid)。這些配體在正常和異常的免疫應(yīng)答中的精確作用有待進一步闡述。
T淋巴細胞介導的疾病功能抑制性單克隆抗體表明LFA-1在T淋巴細胞介導的殺傷、T輔助淋巴細胞的應(yīng)答、自然殺傷作用、和抗體依賴性殺傷中起重要作用(Springer等，Ann.Rev.Immunol 5223-252(1987))。LFA-1抗體能阻斷對靶細胞的粘附、激活和信號轉(zhuǎn)導步驟。
許多疾病都是由T淋巴細胞介導的，人們也在從各種途徑尋求這些疾病的治療方法。類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)就是其中一種。當前對RA的治療方法包括臥床休養(yǎng)，熱敷，以及藥物。水楊酸鹽是目前較好的治療藥物，尤其當其他替代藥物例如免疫抑制劑、腎上腺皮質(zhì)類固醇引起比潛伏的疾病自身更嚴重的病癥時。還可以用非類固醇類抗炎藥物來治療，其中一些對RA患者具有很好解熱鎮(zhèn)痛和抗炎效果。這些藥物包括環(huán)孢菌素、消炎痛、保泰松、苯乙酸衍生物，例如布洛芬與非諾洛芬、萘乙酸類(萘普生)，吡咯烷酸(pyrrole-alkanoic acid)(tometin)，吲哚乙酸(蘇林大)，鹵代鄰氨基苯甲酸(甲氯滅酸鈉)，吡羅昔康，和二氟苯水楊酸。其他用來治療RA的藥物包括抗瘧藥，例如氯喹，金鹽與青霉胺。這些替代藥物經(jīng)常產(chǎn)生嚴重的副反應(yīng)，包括視網(wǎng)膜損傷以及腎臟和骨髓毒性。免疫抑制劑，如氨甲喋呤，因毒性太大只被用于治療嚴重和頑固的RA。皮質(zhì)激素也具有不良副反應(yīng)(例如，白內(nèi)障，骨質(zhì)疏松癥，和Cushing氏疾病綜合征)從而使許多RA患者不能忍受。
另一種由T淋巴細胞介導的疾病是宿主對移植物的排斥反應(yīng)。在實驗?zāi)Ｐ秃团R床應(yīng)用中，為了延長同種異體移植和異種移植物的存活，或為了避免宿主對移植物的排斥的嘗試，都主要集中在對宿主/受體免疫器官的抑制。這種療法的目的是預防性免疫抑制和/或?qū)σ浦才懦獾闹委?。預防性免疫抑制中所用藥物包括細胞毒性藥物，抗代謝藥，皮質(zhì)激素類，和抗淋巴細胞血清。非特異性免疫抑制劑在預防性免疫抑制中有特殊效果(硫唑嘌呤，溴隱亭，甲基強的松龍(methylprednisdone)，強的松，和最近用到的環(huán)孢菌素A)，它們極大地提高了臨床移植的成功率。類固醇的聯(lián)合用藥例如氫化潑尼松，或氫化潑尼松與硫唑嘌呤聯(lián)合應(yīng)用降低了腎移植后環(huán)孢菌素A的腎毒性。另外，在抗淋巴細胞球蛋白之后給藥環(huán)孢菌素A已經(jīng)使腎成功移植。在另一個待評價的方案中，受者在移植前接受全身淋巴照射，移植后使用最小的免疫抑制。
對排斥反應(yīng)的治療已經(jīng)使用類固醇，2-氨基-6-芳基-5-取代嘧啶，異種抗淋巴細胞球蛋白，以及抗各種白細胞的單克隆抗體，包括OKT-3。一般性參見J.Pediatrics，1111004-1007(1987)，詳細參見美國專利(專利號4,665,077)。
免疫抑制藥物引起的主要并發(fā)癥是感染。而且，全身免疫抑制通常伴隨不良毒性反應(yīng)(例如，腎移植后使用環(huán)孢菌素A引起的中毒性腎損害)和造血干細胞水平降低。免疫抑制藥物還會引起肥胖、傷口難以愈合、類固醇高血糖癥、類固醇精神病、白血球減少癥、胃腸道出血、淋巴瘤、以及高血壓。
針對這些并發(fā)癥，移植免疫學家一直在探求抗原特異性地抑制免疫應(yīng)答的方法(只喪失對供體同種抗原的應(yīng)答)。此外，自體免疫性疾病方面的醫(yī)生也在致力于尋找抑制自體免疫應(yīng)答的方法，所述方法只失去對自體抗原的應(yīng)答。一般通過調(diào)節(jié)要被移植組織的抗原性或介導排斥反應(yīng)的特異性細胞來實現(xiàn)特異性免疫抑制。某些情況下，免疫或耐受的誘發(fā)主要取決于抗原呈遞給免疫系統(tǒng)的方式。
在兩個鼠科動物模型系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)移植前預處理過的同種異體移植組織能跨越MHC屏障礙而被長期接受，預處理是通過在組織培養(yǎng)中培養(yǎng)。Lafferty等，Transplantation，22138-149(1976)；Bowen等，Lancet，2585-586(1979)。有假設(shè)認為這種處理導致了客體淋巴細胞的耗竭，從而引起組織免疫原性所必需的刺激細胞群的缺失。參見Lafferty等，Annu.Rev.Immunol.，1143(1983)。Lafferty等，Science，188259-261(1975)(thyroid held in organ culture)，以及Gores等，J.Immunol.，1371482-1485(1986)和Faustman等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，785156-5159(1981)(islet cells treated with murine anti-Ia antiseraand complement before transplantation)。另外，從用淋巴細胞毒性藥物和γ射線預處理的供體動物上取得的甲狀腺，進行十天的體外培養(yǎng)后，不會被任何正常的同種異體的受者所排斥(Gose和Bach，J.Exp.Med.，1491254-1259(1979))。所用這些技術(shù)都涉及供者淋巴細胞的消耗和清除。
在某些模型例如血管和腎臟移植中，II類匹配與延長的同種異體移植存活之間存在著關(guān)聯(lián)性，而皮膚移植中則不存在此類關(guān)聯(lián)(Pescovitz等，J.Exp.Med.，1601495-1508(1984)；Conti等，Transplant.Proc.，19652-654(1987))。所以，供者-受者HLA匹配已經(jīng)被應(yīng)用。此外，還發(fā)現(xiàn)移植前輸血也有效果(Opelz等，Transplant.Proc.，4253(1973)；Persijn等，Transplant.Proc.，23396(1979))。聯(lián)合應(yīng)用移植前輸血、供者-受者HLA匹配、和移植后免疫抑制治療(環(huán)孢菌素A)，極大改善了移植存活率，并且發(fā)現(xiàn)其效果是累加的(Opelz等，Transplant.Proc.，172179(1985))。
移植反應(yīng)還可用作用于MHC抗原的免疫受體的抗體減輕(Bluestone等，Immunol.Rev.905-27(1986))。而且，抗移植抗體的存在能延長移植物的存活，該抗體能誘發(fā)機體反應(yīng)，而該反應(yīng)反過來能產(chǎn)生特異性免疫抑制(Lancaster等，Nature，315336-337(1985))。機體對MHC抗原的免疫反應(yīng)能通過作為器官移植的準備階段的骨髓移植來特異性調(diào)節(jié)。因此，抗T細胞單克隆抗體被用來消耗供者骨髓移植物中的成熟T細胞，使骨髓移植時不會出現(xiàn)移植物抗宿主(graft-versus-host)疾病(Mueller-Ruchholtz等，Transplant Proc.，8537-541(1976))。此外，為骨髓移植保留的部分宿主淋巴細胞解決了在完全的同種異體的移植中出現(xiàn)的免疫功能不全的問題。
如圖1所示，淋巴細胞對內(nèi)皮的粘附是炎癥過程中的關(guān)鍵步驟。依據(jù)T細胞和內(nèi)皮細胞的激活狀態(tài)，現(xiàn)在至少有三種已知的淋巴細胞粘附到內(nèi)皮的途徑。T細胞的免疫識別需要T細胞受體和粘附受體的參與，它們能促進細胞對抗原呈遞細胞的附著和轉(zhuǎn)導T細胞激活的調(diào)節(jié)信號。淋巴細胞功能相關(guān)(LFA)抗原-1(LFA-1，CD11a/CD18，αLβ2其中αL為CD11a，β2為CD18)被確定為參與導致幾種病理癥狀的細胞相互粘附作用中的淋巴細胞上的主要整合素受體。ICAM-1，內(nèi)皮細胞免疫球蛋白類粘附分子，是一個已知的LFA-1配體，并與移植排斥，牛皮癬，和關(guān)節(jié)炎直接相關(guān)。
LFA-1對于許多白細胞的功能來說是必需的，包括輔助T細胞對抗原呈遞細胞的應(yīng)答中淋巴因子的產(chǎn)生，殺傷T細胞介導的靶細胞溶解，以及通過T細胞/B細胞相互作用產(chǎn)生免疫球蛋白。T細胞和B細胞上的抗原受體的激活使得LFA-1以更高的親和力與其配體結(jié)合。
最初對LFA-1功能的認識和研究是由直接抗LFA-1的單克隆抗體(MAbs)引起的(Davignon等，J.Immunol.，127590(1981))。LFA-1只存在于白細胞上(Krenskey等，J.Immunol.，131611(1983))，而ICAM-1分布在激活的白細胞，皮膚成纖維細胞，以及內(nèi)皮細胞上(Dustin等，J.Immunol.137245(1986))。
以前曾對抗CD11a MAbs對許多T細胞依賴的免疫功能的影響進行了體外研究和對少數(shù)幾種免疫應(yīng)答的體內(nèi)效果進行研究。在體外，抗CD11aMAbs抑制T細胞激活(Kuypers等，Res.Immunol.，140461(1989))，T細胞依賴的B細胞增殖和分化(Davignon等，supra；Fischer等，J.Immunol.，1363198(1986))，細胞毒性的T淋巴細胞引起的靶細胞溶解(Krensky等，supra)，免疫共軛物的形成(Sanders等，J.Immunol.，1372395(1986)；Mentzer等，J.Immunol.，1359(1985))，T細胞對血管內(nèi)皮的粘附(Lo等，J.Immunol.，1433325(1989))。而且，發(fā)現(xiàn)直接抗CD11b/CD18的抗體5C6能防止巨噬細胞和T細胞的胰島內(nèi)(intra-islet)浸潤，并能抑制小鼠胰島素依賴型糖尿病的發(fā)展(Hutchings等，Nature，348639(1990))。
體外研究發(fā)現(xiàn)，LFA-1ICAM-1相互作用對于優(yōu)化T細胞功能是必需的，以及抗CD11a MAbs誘發(fā)對蛋白抗原的耐受(Benjamin等，Eur.J.Immunol.，181079(1988))并延長小鼠腫瘤移植存活(Heagy等，Transplantation，37520-523(1984))，這些發(fā)現(xiàn)是檢測MAbs對這些分子的作用從而避免人體移植排斥作用的基礎(chǔ)。
在靈長類動物中也進行了實驗。例如，猴子中實驗表明，直接抗ICAM-1的MAb能避免或甚至逆轉(zhuǎn)腎臟移植排斥(Cosimi等，″Immunosuppression ofCynomolgus Recipients of Renal Allografts by R6.5，a Monoclonal Antibody toIntercellular Adhesion Molecule-1，″in Springer等(eds.)，Leukocyte AdhesionMolecules New YorkSpringer，(1988)，p.274；Cosimi等，J.Immunology，1444604-4612(1990))。而且，對獼猴進行體內(nèi)給藥抗CD11a MAb延長了皮膚同種異體移植的存活(Berlin等，Transplantation，53840-849(1992))。
首次成功地將大鼠的抗鼠科動物CD111a抗體(25-3；IgG1)用于患有遺傳疾病的兒童以避免骨髓不匹配單倍同一性(haploidentical)移植的排斥反應(yīng)的報導，參見Fischer等，Lancet，21058(1986)。只觀察到最小的副反應(yīng)。還可參見Fischer等，Blood，77249(1991)；van Dijken等，Transplantation，49882(1990)；和Perez等，Bone Marrow Transplantation，4379(1989)。此外，抗體25-3能有效控制人中類固醇耐受的急性移植物抗宿主疾病(Stoppa等，Transplant.Int.，43-7(1991))。
然而，在另一個試點研究中，對患有白血病的成人移植中使用這種Mab(Maraninchi等，Bone-marrow-Transplant，4147-150(1989))，或使用直接抗LFA-1不可變鏈的抗CD18 MAb，(Baumae等，Transplantation，47472(1989))卻得不到可重復的上述結(jié)果。而且，大鼠抗鼠科動物CD11a MAb，25-3，并不能控制在人的腎臟移植中急性排斥反應(yīng)的進程(LeMauff等，Transplantation，52291(1991))。
關(guān)于對人類移植中使用單克隆抗體的評論，參見Dantal和Soulillou的文章，Current Opinion in Immunology，3740-747(1991)。一個稍早的報導中曾提到用抗LFA-1或抗ICAM-1 Mabs短暫治療能稍微延長了小鼠中原發(fā)性血管化異位心臟(primarilly vascularized heterotopic heart)同種異體移植的存活(Isobe等，Science，2551125(1992))。在該模型中要想得到長期的移植存活，必須用兩種Mabs聯(lián)合治療。
獨立地，發(fā)現(xiàn)單獨用抗LFA-1 MAb治療有效地延長了異位(ear-pinnae)非原發(fā)性血管化小鼠心臟移植的存活，給藥方案為每天以最大劑量4mg/kg/每天給藥，然后每星期給藥一次(Nakakura等，J.Heart Lung Transplant.，11223(1992))。非原發(fā)性血管化心臟同種異體移植比原發(fā)性血管化心臟同種異體移植更具有免疫原性，并且對用MAbs而引起的移植存活延長更具有抗性，(Warren等，Transplant.Proc.，5717(1973)；Trager等，Transplantation，44447587(1989))。后一參考文獻討論了使用高初始劑量和低后續(xù)劑量的L3T4抗體的治療。
Yednock等(Nature，35663-66(1992))敘述了另一項用與Nakakura等(supra)用到的相似抗體治療嚙齒動物硬化癥類(sclerosis-type)疾病的研究。其他的關(guān)于用抗LFA-1抗體，和ICAM-1，ICAM-2，ICAM-3及其抗體來治療LFA-1-介導的疾病的專利公開還包括WO 91/18011(11/28/91公開)，WO91/16928(11/14/91公開)，WO 91/16927(11/14/91公開)，加拿大專利申請2,008,368(6/13/91公開)，WO 90/03400，WO 90/15076(12/13/90公開)，WO90/10652(9/20/90公開)，EP 387,668(9/19/90公開)，WO 90/08187(7/26/90公開)，WO 90/13281，WO 90/13316，WO 90/13281，WO 93/06864，WO93/21953，WO 93/13210，WO 94/11400，EP 379,904(8/1/90公開)，EP 346,078(12/13/89公開)，美國專利5,002,869，美國專利5,071,964，美國專利5,209,928，美國專利5,223,396，美國專利5,235,049，美國專利5,284,931，美國專利5,288,854，美國專利5,354,659，澳大利亞專利申請15518/88(11/10/88公開)，EP 289,949(11/9/88公開)，和EP 303,692(2/22/89公開)，EP365,837，EP 314,863，EP 319,815，EP 468,257，EP 362,526，EP 362,531，EP 438,310。
關(guān)于使用LFA-1，和ICAM肽片斷以及拮抗劑的專利公開包括美國專利5,149,780，美國專利5,288,854，美國專利5,340,800，美國專利5,424,399，美國專利5,470,953，WO 90/03400，WO 90/133 16，WO 90/10652，WO 91/19511，WO 92/03473，WO 94/11400，WO 95/28170，JP 4193895，EP 314,863，EP 362,526和EP 362,531。
成功地使用抗LFA-1或抗ICAM-1抗體，LFA-1或ICAM-1肽、片斷或肽拮抗劑的上述方案比常規(guī)免疫抑制藥物療法有了改進。這些研究表明LFA-1和ICAM-1非常適合作為拮抗作用的靶標。更好地治療LFA-1介導的疾病，包括自體免疫性疾病、移植物對宿主或宿主對移植物的排斥、T細胞炎性反應(yīng)，并將副反應(yīng)降至最小以及維持對自身的或外來抗原的特異耐受是本領(lǐng)域的一項重要任務(wù)。另外，還需要找到一種拮抗LFA-1ICAM-1相互作用的非肽拮抗劑。
白蛋白是一種大量存在的血漿蛋白，負責脂肪酸的運送。然而，白蛋白也結(jié)合并干擾許多藥物化合物的藥代動力學。因此，任何藥物與血清血漿蛋白例如白蛋白的結(jié)合特性是其藥理特性的一個重要方面。與血漿蛋白有高親和力的藥物化合物，僅以少量存在于血清中與其靶組織、細胞或蛋白作用。例如，一個給藥后99％與血漿蛋白結(jié)合的化合物，其血漿中能與其靶標作用的濃度，只有98％與血漿蛋白結(jié)合的化合物的一半。因此人們非常希望找到一種具有低血清血漿蛋白親和力的LFA拮抗化合物。
發(fā)明簡介本發(fā)明一方面提供式(I)新化合物 其中Cy為非芳香族碳環(huán)或雜環(huán)，可被羥基、巰基、硫烷基、鹵素、氧代、硫代、氨基、氨基烷基、脒基、胍基、硝基、烷基、烷氧基或者?；芜x取代；X為二價烴鏈，可被羥基、巰基、鹵素、氨基、氨基烷基、硝基、氧代或硫代任選取代并可任選被N、O、S、SO或SO2斷開；Y為碳環(huán)或雜環(huán)，可被羥基、巰基、鹵素、氧代、硫代、烴、鹵代烴、氨基、脒基、胍基、氰基、硝基、烷氧基或者?；芜x取代；L為單鍵或二價烴，可被羥基、鹵素、氧代或硫代任選取代并可任選被N、O、S、SO或SO2替代一個或多個碳原子；或烴上3個碳原子被氨基酸殘基替換。
R1為H、羥基、氨基，或可被氨基、碳環(huán)或雜環(huán)任選取代的O-碳環(huán)或烷氧基；R2-5獨立為氫、羥基、巰基、鹵素、氰基、氨基、脒基、胍基、硝基或烷氧基；或R3和R4一起形成一個稠合的碳環(huán)或雜環(huán)，可被羥基、鹵素、氧代、硫代、氨基、脒基、胍基或烷氧基任選取代；R6為H或可被碳環(huán)或雜環(huán)任選取代的烴鏈；前提條件當Y為苯基時，R2，R4和R5為H，R3為Cl，且R1為OH，則X為除環(huán)己基以外的基團。
本發(fā)明還提供包含本發(fā)明化合物以及可藥用的載體的藥物組合物。
本發(fā)明還提供一種治療哺乳動物中由LFA-1介導疾病或病理狀態(tài)的方法，包括向所述哺乳動物施用有效劑量的本發(fā)明化合物。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供具有通式(I)的新化合物 其中Cy，X，Y，L和R1-6如上述定義。由于取代基Cy為非芳香環(huán)，與其他在這部分為芳香環(huán)的化合物相比，本發(fā)明化合物具有較低的血漿蛋白親和力。
術(shù)語“非芳香族”是指不具有芳香性的碳環(huán)或雜環(huán)。要具有芳香性，環(huán)必須在一個平面上，每個環(huán)原子具有垂直于環(huán)平面的p-軌道，并要滿足休克爾定律環(huán)的π電子數(shù)為(4n+2)，其中n為整數(shù)(即π電子數(shù)為2，6，10或14)。而這里所述的非芳香環(huán)則不滿足其中一個或全部的芳香性的標準。
此處的術(shù)語“烷氧基”包括飽和的，如O-烷基，以及不飽和的，如O-烯基和O-炔基等基團。烷氧基的實例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基。
術(shù)語“氨基”是指伯(-NH2)，仲(-NHR)，叔(-N(R)2)或季(-N+(R)4)胺，其中R為烴鏈、羥基、碳環(huán)、雜環(huán)或烴鏈，被碳環(huán)或雜環(huán)取代。
術(shù)語“氨基酸”是指天然的和非天然的α-，β-，D-和L-氨基酸殘基。非天然的氨基酸包括那些具有不是天然存在側(cè)鏈的氨基酸。
“羧基”在這里是指游離酸-COOH及其酯例如烷基，芳基和芳烷基酯。優(yōu)選的酯為甲基，乙基，丙基，丁基，異丁基酯，仲丁基酯和叔丁基酯。
術(shù)語“碳環(huán)”是指一、二或三環(huán)碳環(huán)或4-16元環(huán)(包括橋環(huán))，為飽和的，不飽和的或部分不飽和的包括芳香(芳基)環(huán)(除非特指為非芳香的)。優(yōu)選的非芳香碳環(huán)包括環(huán)丙基，環(huán)丙烯基，環(huán)丁基，環(huán)丁烯基，環(huán)戊基，環(huán)戊烯基，環(huán)己基和環(huán)己烯基。優(yōu)選的芳香碳環(huán)包括苯基和萘基。
術(shù)語“雜環(huán)”是指具有5-16環(huán)原子的單環(huán)，雙環(huán)或三環(huán)，其中至少一個環(huán)原子為雜原子(即N，O和S和SO，或SO2)。該環(huán)可為飽和的，不飽和的或部分不飽和的，也可以是芳香環(huán)(除非特指為非芳香環(huán))。雜環(huán)的實例包括哌啶，哌嗪，吡啶，吡嗪，嘧啶，噠嗪，嗎啉，吡喃，吡咯，呋喃，噻吩(噻吩基)，咪唑，吡唑，噻唑，異噻唑，二噻唑，噁唑，異噁唑，二噁唑，噻二唑，噁二唑，四唑，三唑，噻三唑，噁三唑，噻二唑，噁二唑，嘌呤和其與苯稠合的衍生物。
術(shù)語“烴鏈”是指飽和的，不飽和的，直鏈的或支鏈的碳鏈如烷基，鏈烯基以及炔基。優(yōu)選的烴鏈由1-12碳原子組成，更優(yōu)選由1-6個碳原子組成，最優(yōu)選1-4個碳原子組成，如甲基，乙基，丙基，丁基，烯丙基。
“可被任選取代的”的表述是指，除非另行說明，一個或多個特定的取代基通過共價鍵連接到被取代基團上。當為多個取代基時，這些取代基可以為相同或不同的基團。
Cy為非芳香碳環(huán)或雜環(huán)，可任選被羥基(-OH)，巰基(-SH)，硫烷基，鹵素(例如，F(xiàn)，Cl，Br，I)，氧代(＝O)，硫代(＝S)，氨基，氨基烷基，脒基(-C(NH)-NH2)，胍基(-NH2-C(NH)-NH2)，硝基，烷基或烷氧基取代。在一個特選的實施方案中，Cy為3-5元環(huán)。在優(yōu)選的實施方案中，Cy為可被羥基，巰基，鹵素(優(yōu)選為F或Cl)，氧代(＝O)，硫代(＝S)，氨基，脒基，胍基，硝基，烷基或烷氧基任選取代的5-或6-元非芳香雜環(huán)。在更優(yōu)選的實施方案中，Cy為可被羥基，氧代，硫代，Cl，C1-4烷基(優(yōu)選為甲基)，或C1-4烷?；?優(yōu)選為乙酰基，丙?；蚨□；?任選取代的5元非芳香雜環(huán)。在更優(yōu)選的實施方案中，該非芳香雜環(huán)包含一個或多個雜原子(N，O或S)，并可被羥基，氧代，巰基，硫代，甲基，乙?；?，丙酰基或丁基任選取代。在特選的實施方案中，該非芳香雜環(huán)包含至少一個可被甲基或乙?；芜x取代的氮原子。在特別優(yōu)選的實施方案中，該非芳香雜環(huán)選自哌啶，哌嗪，嗎啉，四氫呋喃，四氫噻吩，噁唑烷，噻唑烷，可被羥基，氧代，巰基，硫代，烷基或烷氧基任選取代。在最優(yōu)選的實施方案中，Cy為非芳香雜環(huán)，選自四氫呋喃-2-基，噻唑烷基-5-基，噻唑烷基-2-酮-5-基，和噻唑烷基-2-硫酮-5-基，環(huán)丙吡咯烷(cyclopropapyrrolidine)。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，Cy為可被羥基，巰基，鹵素，氧代，硫代，氨基，脒基，胍基，烷基，烷氧基或者酰基任選取代的3-6元碳環(huán)。在特選的實施方案中，該碳環(huán)為飽和的或部分不飽和的。在特選的實施方案中，Cy碳環(huán)選自環(huán)丙基，環(huán)丙烯基，環(huán)丁基，環(huán)丁烯基，環(huán)戊基，環(huán)戊烯基，環(huán)己基，環(huán)己烯基。
X為C1-5二價烴連接基團(linker)，該基團任選地一個或多個碳原子被N，O，S，SO或SO2替代，并可被羥基，巰基，鹵素，氨基，氨基烷基，硝基，氧代或硫代任選取代。在優(yōu)選的實施方案中，X至少含有一個碳原子。替換取代之后會在烴鏈中或任意一端或兩端形成酰胺成分(-NRC(O)-或-C(O)NR-)。另外的成分包括磺酰胺(-NRSO2-或-SO2NR)，?；?，硫醚，胺。在特別優(yōu)選的實施方案中，X為-CH2-NR6-C(O)-，其中其羰基-C(O)-部分與Cy相鄰(如共價結(jié)合)，并且R6為烷基如甲基，更優(yōu)選為氫。
Y為碳環(huán)或雜環(huán)，可任選被羥基，巰基，鹵素，氧代，硫代，烴，鹵代烴，氨基，脒基，胍基，氰基，硝基，烷氧基或?；〈?。在特選的實施方案中，Y為芳基或雜芳基可被鹵素或羥基任選取代。在更優(yōu)選的實施方案中，Y為苯基，呋喃-2-基，噻吩-2-基，鹵素(優(yōu)選為Cl)或羥基取代的苯，優(yōu)選為間位取代。
L為二價烴，該烴任選地一個或多個碳原子被N，O，S，SO或SO2替代，并可被羥基，鹵素，氧代，或硫代任選取代；或烴上的三個碳原子被氨基酸殘基替代。優(yōu)選地，L的長度為少于10個原子，更優(yōu)選5個或更少，最優(yōu)選5或3個原子。在特選的實施方案中，L選自-CH＝CH-C(O)-NR6-CH2-，-CH2-NR6-C(O)-，-C(O)-NR6-CH2-，-CH(OH)-(CH2)2-，-(CH2)2-CH(OH)-，-(CH2)3-，-C(O)-NR6-CH(R7)-C(O)-NR6-，-NR6-C(O)-CH(R7)-NR6-C(O)-，-CH(OH)-CH2-O-和-CH(OH)-CF2-CH2-，其中每個R6獨立為H或烷基，R7為氨基酸側(cè)鏈。優(yōu)選的氨基酸側(cè)鏈包括非天然存在的側(cè)鏈，例如苯基，或天然的側(cè)鏈。優(yōu)選的側(cè)鏈為Phe，Tyr，Ala，Gln和Asn上的側(cè)鏈。在優(yōu)選的實施方案中，L為-CH＝CH-C(O)-NR6-CH2-，其中-CH＝CH-基團與Y相鄰(如共價連接)。在另一個優(yōu)選的方案中，L為-CH2-NR6-C(O)-，其中亞甲基(-CH2-)與Y連接。
R1為H，OH，氨基，可被氨基、碳環(huán)或雜環(huán)任選取代的O-碳環(huán)或烷氧基。在優(yōu)選的實施方案中，R1為H，苯基，或C1-4烷氧基，可被碳環(huán)，例如苯基，任選取代。在更優(yōu)選的實施方案中，R1為H。在另一個特選的方案中，R1為甲氧基，乙氧基，丙氧基，丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，苯氧基或芐氧基。再另一個特選的方案中，R1為NH2。在更優(yōu)選的實施方案中，R1為乙氧基。在另一個優(yōu)選的實施方案中R1為異丁氧基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R1為氨基取代的烷氧基，例如2-氨基乙氧基，N-嗎啉基乙氧基，N，N-二烷氨基乙氧基，季銨羥基烷氧基(例如，三甲基銨羥基乙氧基)。
R2-5獨立為H，羥基，巰基，鹵素，氰基，氨基，脒基，胍基，硝基或烷氧基；或R3和R4合在一起形成一個稠合的碳環(huán)或雜環(huán)，可被羥基、鹵素、氧代、硫代、氨基、脒基、胍基或烷氧基任選取代。在特選的實施方案中，R2和R3獨立為H，F(xiàn)，Cl，Br或I。在另一個特選的實施方案中，R4和R5都為H。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R2，R3中的一個為鹵素而另外一個為氫或鹵素。在更優(yōu)選的實施方案中，R3為Cl而R2，R4和R5分別為H。在另一個更優(yōu)選的實施方案中，R2和R3都為Cl而R4和R5都為H。
R6為H或可被碳環(huán)或雜環(huán)任選取代的烴鏈。在優(yōu)選的實施方案中，R6為H或烷基，如甲基，乙基，丙基，丁基，異丁基，仲丁基或叔丁基。在特選的實施方案中，R6為H。
在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物具有通式(Ia)-(If)，
其中Cy，Y，L和R1-6如前定義。在特別優(yōu)選的實施方案中，式(Ia)-(If)化合物中用星號(*)標注的碳原子為手性碳原子。在特選的實施方案中，該碳原子具有R-構(gòu)型。在另一個優(yōu)選的實施方案中，該碳原子具有S-構(gòu)型。
本發(fā)明的特選化合物包括



及其鹽，溶劑化物，水合物，酯。
應(yīng)該意識到本發(fā)明化合物會并入手性中心，因此存在幾何異構(gòu)體和立體異構(gòu)體。所有這些預期的異構(gòu)體，無論是以純的異構(gòu)體形式或其混合物以及外消旋體，都包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。立體異構(gòu)化合物可用本領(lǐng)域已知的技術(shù)例如色譜法，如手性HPLC，或結(jié)晶法進行分離。
“可藥用”鹽包括酸和堿加成鹽?？伤幱盟峒映甥}是指那些保留了游離堿的生物活性和特性的鹽，沒有不受歡迎的生物學或其他活性，與無機酸形成的，該無機酸可以是鹽酸，氫溴酸，硫酸，硝酸，碳酸，磷酸等；和有機酸，選自脂肪族的，脂環(huán)族的，芳香族的，芳香脂肪族，雜環(huán)類，羧基類，和磺酸基類的有機酸，例如甲酸，乙酸，丙酸，羥基乙酸，葡糖酸，乳酸，丙酮酸，草酸，蘋果酸，馬來酸，丙二酸，琥珀酸，富馬酸，酒石酸，檸檬酸，天冬氨酸，抗壞血酸，谷氨酸，鄰氨基苯甲酸，苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸，embonic acid，苯乙酸，甲磺酸，乙磺酸，對甲苯磺酸，水楊酸等。
可藥用堿加成鹽包括無機堿的加成鹽，例如鈉，鉀，鋰，銨，鈣，鎂，鐵，鋅，銅，錳，鋁鹽等。優(yōu)選的為銨，鉀，鈉，鈣和鎂鹽?？伤幱糜袡C無毒性堿加成鹽包括伯，仲，叔胺，取代胺包括天然的取代胺，環(huán)胺以及堿性離子交換樹脂，例如異丙基胺，三甲基胺，二乙胺，三乙胺，三丙基胺，乙醇胺，2-二乙基氨基乙醇，三甲基胺(trimethamine)，二環(huán)己胺，賴氨酸，精氨酸，組氨酸，咖啡因，普魯卡因，hydrabamine，膽堿，甜菜堿，乙二胺，葡糖胺，甲基葡糖胺，可可堿，嘌呤，哌嗪，哌啶，N-乙基哌啶，聚胺樹脂等的加成鹽。特別優(yōu)選的有機無毒性堿為異丙基胺，二乙胺，乙醇胺，三甲基胺，二環(huán)乙基胺，膽堿，和咖啡堿。
本發(fā)明化合物可以通過現(xiàn)有有機合成技術(shù)用市售原料和試劑或用從市場可得原料制備得到的原料試劑來制備。許多標準的化學技術(shù)以及工藝，參見March，J.，“Advanced Organic Chemistry”McGraw-Hill，New York，1977；和Collman，J.，“Principles and Applications of Organotransition MetalChemistry”University Science，Mill Valley，1987；和Larock，R.，“Comprehensive Organic Tansformations”Verlag，New York，1989。應(yīng)該意識到除了上述這些步驟，根據(jù)化合物上的特殊取代基，還必須用一些適當?shù)谋Ｗo和脫保護步驟。文獻Greene和Wuts(Protective Groups in OrganicChemistry，2d edition，John Wiley and Sons，1991)敘述了大量的保護基團，以及詳細的加保護和脫保護方法。例如，適當?shù)陌被Ｗo基包括叔丁基羰基(Boc)，芴基甲基羰基(Fmoc)，2-三甲基甲硅基乙氧基羰基(Teoc)，1-甲基-1-(4-聯(lián)苯基)乙氧基羰基(Bpoc)，烯丙氧基羰基(Alloc)，和芐氧基羰基(Cbz)。羧基可用芴基甲基，或烷基酯如甲基或乙基，或鏈烯基酯例如烯丙酯保護。羥基可用三苯甲基，單甲氧基三苯甲基，二甲氧基三苯甲基，以及三甲氧基三苯甲基進行保護。
化合物也可以用美國專利申請09/6446,330(2000年9月14日提交)中闡述的有機合成方法進行制備，其全文在此引用作為參考文獻。一般來說，化合物可按照反應(yīng)流程1來制備。
流程1
如流程1所示，保護市售甘氨酸氨基酸殘基的氨基(如，fmoc)和羧基(Pr)或固定在固體支持物。用適當?shù)脑噭被Ｗo基脫去，并與二苯基酮亞胺反應(yīng)，然后用(iii)鹵素-X-Cy烷化α碳得到中間產(chǎn)物(vi)。亞胺(vi)轉(zhuǎn)變成游離胺(v)，然后與中間產(chǎn)物(vi)結(jié)合得到本發(fā)明化合物，該化合物可以任選地對羧基位置脫保護產(chǎn)生游離酸(vii)。根據(jù)取代基R1的定義，該游離酸可以被酯化或酰胺化。
在特定的技術(shù)方案中，本發(fā)明的式(Ib)化合物可按照流程2制備。
流程2
如流程2所示，市售或用市售原料合成的原始化合物(i)，與N-羥基甲基鄰苯二甲酰胺反應(yīng)而得到中間產(chǎn)物(ii)，將該產(chǎn)物與肼反應(yīng)而產(chǎn)生游離胺(iii)。該胺通過與Boc2O和碳酸氫鈉反應(yīng)從而實現(xiàn)Boc保護(iv)，然后與三氟甲磺酸酐(triflic anhydride)反應(yīng)得到中間化合物(v)。通過與醋酸鈀(II)和1，3-雙(二苯基膦丙烷(dppp)反應(yīng)，隨后又與二異丙基乙基胺(DIPEA)反應(yīng)，該三氟甲磺酸酯(triflate)中間化合物(v)被轉(zhuǎn)變成甲酯中間化合物(vi)。用TFA脫去(vi)的Boc基團，然后與羧酸(vii)反應(yīng)從而得到中間化合物(viii)。在流程2的優(yōu)選方案中，中間化合物(vii)Y-L-C(O)OH為呋喃丙烯酸或噻吩丙烯酸。用LiOH脫去(viii)的甲酯產(chǎn)生游離酸，該游離酸與N-Boc保護的二氨基丙酸/酯(x)反應(yīng)以得到中間化合物(xi)。用TFA脫去(xi)的Boc基團，然后與羧基取代的非芳香環(huán)(xii)反應(yīng)而得到本發(fā)明最終化合物(Ib)。
在另一特定方案中，本發(fā)明式(Ic)化合物可按照流程3制備。
流程3
如所示流程3，羧酸鹽原料(i)與胺試劑(ii)Y-L-NHR6偶合從而得到中間化合物(iii)，該化合物與(iv)反應(yīng)從而得到本發(fā)明化合物(v)。在流程3的優(yōu)選方案中，Y-L-為可被羥基、鹵素、烷基和烷氧基任選取代的芐基。更優(yōu)選Y-L-為3-羥基-芐基。
在另一特定方案中，本發(fā)明式(Id)化合物可按照流程4制備。
流程4
如所示流程4，從流程2中制備的起始化合物(i)，被轉(zhuǎn)化成碘代中間化合物(ii)，然后與炔(iii)反應(yīng)得到中間化合物(iv)。炔(iii)是通過將Y-COOH與Br-C≡CH在THF中反應(yīng)而制得。中間化合物(iv)通過與Rh/Al2O3在氫氣氛中反應(yīng)被轉(zhuǎn)變成烷烴(v)，酯基團是通過與LiI在吡啶中反應(yīng)被轉(zhuǎn)變成游離酸從而得到(vi)。中間化合物(vi)與氨基酸(vii)反應(yīng)而得到本發(fā)明化合物(viii)。在流程4的特選方案中，Y為可被烷基、羥基或鹵素任選取代的苯基。在更優(yōu)選的實施方案中，Y為3-氯-苯基或3-羥基-苯基。
在另一特定方案中，本發(fā)明式(Ie)化合物可按照流程5制備。
流程5 如所示流程5，起始化合物(i)與三氟甲磺酸酐和2，6-二甲基吡啶反應(yīng)得到中間化合物(ii)，該化合物通過與乙酸鈀(II)、1，3-雙(二苯基膦)丙烷(dppp)反應(yīng)，隨后又與二異丙基乙基胺(DIPEA)在DMF和甲醇中反應(yīng)而被轉(zhuǎn)化成甲酯(iii)。該酯(iii)與CrO3在乙酸和乙酸酐中反應(yīng)而得到醛(iv)，該乙醛與格利雅試劑溴化乙炔基鎂在THF中反應(yīng)而得到炔中間化合物(v)。碘試劑(vi)Y-I與(v)反應(yīng)得到中間化合物(vii)，該化合物通過與Rh/Al2O3在氫氣氛下反應(yīng)被轉(zhuǎn)化成烷烴(viii)。在吡啶中，用LiI將甲酯轉(zhuǎn)化成游離酸(ix)，該游離酸與氨基酸殘基(x)偶合從而得到本發(fā)明化合物(xi)。在流程5的優(yōu)選方案中，Y為可被羥基、鹵素、烷基和烷氧基任選取代的苯基。在更優(yōu)選的方案中，Y為3-羥基-苯基或3-氯-苯基。
本發(fā)明化合物對LFA-1的結(jié)合優(yōu)于對Mac-1的結(jié)合。因此，本發(fā)明一方面提供一種抑制LFA-1與ICAMs(細胞粘附分子)結(jié)合的方法，包括使LFA-1與式(I)化合物相接觸。該方法可以基于溶液和基于細胞的分析方法，在體內(nèi)和體外實施。其中，在已知的配體(putative ligand)的存在下(例如ICAM-1)，將本發(fā)明化合物作用于LFA-1。本發(fā)明化合物可以被標記，例如用放射性同位素標記，或用熒光基團標記例如熒光素黃異硫氰酸酯(FITC)，以利于檢測配體的結(jié)合或減少。因此，本發(fā)明化合物在診斷和檢驗方面具有應(yīng)用價值。
本發(fā)明化合物在治療或預防LFA-1活性介導的疾病或癥狀方面具有應(yīng)用價值。因此本發(fā)明一方面提供一種治療哺乳動物中(如人)，由LFA-1介導的疾病和癥狀的方法，包括向所述哺乳動物施用有效劑量的化合物?！逵行┝俊迨侵冈诮o藥后能降低LFA-1活性的一定數(shù)量的化合物；或指在給藥后預防、抑制、或降低LFA-1介導的疾病或癥狀的嚴重程度所必須的一定數(shù)量的化合物。
本發(fā)明化合物或其組合物能治療的疾病包括牛皮癬；與炎性腸病有關(guān)的反應(yīng)(例如Crohn氏疾病和潰瘍性結(jié)腸炎)，皮炎，腦膜炎，腦炎，眼色素層炎(uveitis)，過敏性癥狀例如濕疹和哮喘，有關(guān)T細胞滲入的疾病和慢性炎癥反應(yīng)，皮膚過敏性反應(yīng)(包括毒葉藤(poison ivy)和毒葛(poison cak)；動脈粥樣硬化，自身免疫性疾病例如類風濕性關(guān)節(jié)炎，全身性紅斑狼瘡，糖尿病，多發(fā)性硬化癥，Reynaud氏綜合癥，自身免疫性甲狀腺炎，實驗的自身免疫性腦脊髓炎，Siorgen氏綜合癥，青少年糖尿病，由細胞因子和T淋巴細胞介導的與遲發(fā)過敏性有關(guān)的免疫反應(yīng)，典型地存在于肺結(jié)核，肉樣瘤病，多發(fā)性肌炎，肉芽腫病和脈管炎；惡性貧血；與白血球滲出有關(guān)的疾?。恢袠猩窠?jīng)系統(tǒng)炎性疾??；敗血病或外傷繼發(fā)的多器官損傷綜合癥；自身免疫溶血性貧血；重癥肌無力；抗原-抗體復合物介導的疾病；各種移植，包括移植物抗宿主或宿主抗移植物的疾病，HIV和鼻病毒感染，肺纖維化，脫發(fā)癥，硬化病(scletedoma)，子宮內(nèi)膜異位，白癜風，由嗜中性粒細胞介導的缺血性再灌注(reperfusion)損傷例如急性心肌梗塞，PTCA后的再狹窄，入侵性(Invasive)過程例如心肺搭橋(bgpass)手術(shù)，腦水腫，中風，腦外傷，出血性休克，燒傷，缺血性腎病，多器官衰竭，傷口愈合和瘢痕形成，動脈粥樣硬化。
化合物的實際給藥量和給藥途徑取決于特定的疾病或癥狀以及其他因素，例如患者的身材大小，年齡，性別以及種族，并且用常規(guī)分析來確定。一般說來，靜脈給藥的劑量按病人體重約0.01-1000mg/kg/每天，優(yōu)選為0.1到20mg/kg，更優(yōu)選0.3到15mg/kg。可以以每天給藥一次和多次的方式持續(xù)給藥幾天或幾星期或幾年，也可以每星期給藥數(shù)次的方式持續(xù)給藥幾星期和幾年。考慮特定藥物的血漿生物利用度的同時，其他途徑的給藥劑量以能達到與上述的靜脈給藥相似的血漿濃度為準。
在本發(fā)明的方法中，化合物可以口服(包括從口腔，舌下，吸入)，從鼻腔給藥，直腸給藥，陰道給藥，靜脈給藥(包括動脈內(nèi)給藥)，真皮內(nèi)給藥，皮下給藥，肌內(nèi)注射以及局部給藥?；衔锟梢耘c本領(lǐng)域的常規(guī)試劑例如載體、稀釋劑、增稠劑，輔劑等一起被制備成適合給藥的組合物。因此，本發(fā)明另一方面提供包含式(I)化合物的藥物組合物，含有可藥用載體、賦形劑或輔劑，還可能包括附加的活性成分例如抗炎藥，如NSAIDs。
劑型包括溶液，粉末，片劑，膠囊，明膠膠囊，栓劑，局部軟膏劑，乳膏，吸入式氣霧劑。非腸道外給藥的劑型包括含有緩沖劑、稀釋劑和其他適當添加劑的無菌水溶液。還可使用適合非腸道外給藥，且不會與本發(fā)明化合物發(fā)生有害反應(yīng)的可藥用有機或無機載體物質(zhì)。合適的可藥用載體包括，但不限于，水，鹽溶液，酒精，聚乙二醇，凝膠，乳糖，直鏈淀粉，硬脂酸鎂，滑石，硅酸，粘性石蠟，羥甲基纖維素，聚乙烯吡咯烷酮等。這些劑型都進行滅菌，需要的時候，與輔劑混合，例如，不與本發(fā)明化合物發(fā)生有害反應(yīng)的潤滑劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑、乳化劑、影響滲透壓的鹽、緩沖液、著色香料和/或芳香物質(zhì)等?；鞈宜芤嚎珊心茉鰪娬承缘奈镔|(zhì)包括，例如，羧甲基纖維素鈉，山梨糖醇和/或右旋糖酐。任選地，混懸劑還含有穩(wěn)定劑。
本發(fā)明化合物具有很高的口服生物利用度。因此，在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物通過口服給藥?？诜o藥的組合物包括粉末或顆粒，水或非水介質(zhì)的混懸液或溶液，膠囊，單元小袋劑，錠劑(troches)，片劑或SECs(柔軟有彈性的膠囊或囊片(caplets))。在這些劑型中，可根據(jù)需要添加增稠劑，芳香劑，稀釋劑，乳化劑，分散助劑，載體，載體物質(zhì)或粘合劑?？捎眠@些劑型有效地將化合物輸送到消化道，更好地暴露于粘膜。因此，這些劑型由能有效地保護化合物防止被胃里過高的pH破壞，或隨時間持續(xù)釋放化合物的材料組成，以促進組合物更有效地分布到特定的粘膜上。本領(lǐng)域已知的腸包衣抗酸片劑、膠囊和囊片；腸溶膜典型包括乙酸酯鄰苯二甲酸酯(acetate phthalate)，丙二醇和脫水山梨糖醇單油酸酯(sorbitanmonoleate)。
本領(lǐng)域有許多制備食物給藥(alimentary delivery)劑型的方法。一般參見，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Gennaro編輯，MackPublishing CO.，Easton，PA，1990。本發(fā)明劑型可以通過已知的方法利用惰性的、無毒的、可藥用的賦形劑或溶劑轉(zhuǎn)變成慣用的劑型，例如片劑，包衣片，丸劑，顆粒，氣霧劑，糖漿劑，乳劑，混懸液以及溶液。在所有的情況下，該藥用活性化合物的濃度應(yīng)該占混合物總重量的約0.1％至約99％，也就是說足夠地能達到所希望的劑量范圍的濃度。該劑型可以通過下列方法制備，例如，用溶劑和/或賦形劑稀釋化合物，適當情況下用乳化劑和/或分散劑，以及，例如，當水作為稀釋劑時，適當情況下用有機溶劑作為輔助溶劑。
制備組合物時還可添加粘合劑(例如，預凝膠玉米淀粉，聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；填充劑(例如，乳糖，微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(例如，硬脂酸鎂，滑石或硅石)；分散劑(例如，淀粉或淀粉羥基乙酸鈉)；或潤濕劑(例如，十二烷基硫酸鈉)。片劑可通過本領(lǐng)域已知的方法進行包衣。適當情況下，還可添加芳香劑，著色劑和/或甜味劑。
本發(fā)明適合口服給藥的劑型可以以分散單元的形式，例如膠囊，扁囊劑(cachets)或片劑，其中每個單元含有預定數(shù)量的活性組分；以粉末或顆粒的形式；以水的或非水的溶液或混懸液的形式；或以水包油乳劑或油包水液體乳劑的形式出現(xiàn)。片劑可通過壓片或模壓的方法制得，其中可任選地添加一種或多種附加成分。壓片是通過壓片機來完成，其中以自由流動形式，例如粉末或顆粒中的活性組分任選地與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或或分散劑混合。模制的片劑是在合適的儀器里模壓用惰性液體稀釋劑濕潤的化合物粉末狀混合物而制得。片劑可以任選地被包衣或做刻痕標記(scored)，也能配制成活性組分的緩釋或控釋配方。
實施例在實施例中用到了下列縮略語Boc＝叔丁氧基羰基；Boc2O＝叔丁氧基羰基酐；DMA＝二甲基乙酰胺；DMF＝二甲基甲酰胺；Hobt＝1-羥基苯三唑；TFA＝三氟乙酸；DCM＝二氯甲烷；MeOH＝甲醇；HOAc＝乙酸；HCl＝鹽酸；H2SO4＝硫酸；乙腈；Na2·EDTA＝乙二胺四乙酸鈉；TBAF＝氟化四丁基銨；EDC＝1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；TEA＝三乙胺；Mg2SO4＝硫酸鎂；TES＝三乙基硅烷；Et2O＝乙醚；BBr3＝三溴化硼實施例1 化合物16，17，38-40，46-50的合成
在一個圓底燒瓶中懸吊一個攪拌器，然后往燒瓶里注入濃硫酸(水體積的2.7倍)和水，用乙醇/冰浴冷卻到約-5℃。一旦冷卻，在劇烈攪拌下加入1當量2，6-二氯苯酚和1當量N-(羥甲基)鄰苯二甲酰亞胺。在低溫下反應(yīng)4小時，然后溫熱至室溫持續(xù)攪拌過夜。一般情況下，反應(yīng)會進行到圓底燒瓶里只有固體階段。此時將乙酸乙酯和水加入并攪拌。大塊固體打碎后，將沉淀過濾并用乙酸乙酯和水洗滌。產(chǎn)物真空干燥過夜后，不需要進一步純化即可使用。
將1當量干燥后的產(chǎn)物與甲醇(每克起始物加22.5毫升)加入到裝有水冷凝器與攪拌棒的圓底燒瓶中。加入1.2當量肼一水合物，然后將混合物回流4小時。冷卻至室溫后，小心加入濃鹽酸(每克起始物加4.5毫升)。加完濃鹽酸后，將混合物回流過夜(大于8小時)。反應(yīng)冷卻至0℃，過濾除去沉淀的副反應(yīng)產(chǎn)物。然后將濾液真空濃縮。
將粗胺殘余物溶解在3∶2 THF/水溶液中。加入1.1當量的固體碳酸氫鈉和1.1當量的Boc2O，混合物攪拌過夜。將反應(yīng)物濃縮，將殘余物在水和乙醚中分配。用乙醚萃取水層，合并有機層，用硫酸鎂干燥，真空濃縮成固體。從熱的甲醇和水中重結(jié)晶得到純的產(chǎn)物。
在圓底燒瓶里，將1當量的Boc保護的胺和1.5當量的2，6-二甲基吡啶溶解于DCM中，必要時可稍微加熱。一旦這些起始原料完全溶解，在氮氣下，用干冰-乙醇浴將其冷卻到-78℃。一旦冷卻，加入2.5當量的三氟甲磺酸酐，攪拌下，反應(yīng)溫度緩慢回升到室溫。通常在4小時內(nèi)，用薄層色譜法實時監(jiān)控反應(yīng)。一旦完成，將反應(yīng)物真空濃縮，將殘余物在乙酸乙酯和水中分配。有機層用0.1N硫酸、飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次，然后用硫酸鎂干燥，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用DCM洗脫，得到純的三氟甲磺酸酯。
在高壓Parr容器的玻璃套(glass insert)中，將1當量三氟甲磺酸酯溶解于DMF和甲醇。然后將起始原料在一氧化碳下攪拌脫氣10分鐘。加入0.15當量醋酸鈀(II)和0.15當量的1，3-雙(二苯基膦)丙烷，再在一氧化碳下攪拌脫氣10分鐘，攪拌過程中，加入2.5當量二異丙基乙基胺。合適地組裝好容器后，用300psi一氧化碳氣體充氣，加熱至70℃，攪拌過夜。將容器冷卻后排氣。轉(zhuǎn)移混合物到圓底燒瓶中，然后真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用1％丙酮和1％TEA的DCM溶液洗脫，得到純的甲酯。
將Boc保護的胺溶解在TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯，再次真空濃縮。將胺的TFA鹽溶解于乙醚，用10％的碳酸鉀水溶液洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。
1當量的游離堿性胺，3當量的呋喃丙烯酸，3當量的EDC和1當量的Hobt溶解于DMA中。將反應(yīng)物進行室溫攪拌，并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油在乙醚中懸浮，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇DCM液洗脫，得到純的甲酯。
將2.3當量碘化鋰加入到1當量的甲酯的吡啶溶液，并將此混合物回流加熱8小時。將反應(yīng)物真空濃縮，將殘余物在乙酸乙酯和1N鹽酸中分配。水層用乙酸乙酯萃取三次，合并有機層，并用1M碳酸氫鈉洗滌，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。將殘余物溶解于NMM中，然后將溶液真空濃縮。將殘留物用DCM溶解，然后用1N鹽酸洗滌三次。有機層用硫酸鎂干燥，并真空濃縮，得到足夠高純度的苯甲酸，不需要繼續(xù)純化，就可以使用。
1當量的酸和2當量的市售β-Boc-二氨基丙酸甲酯，2當量的EDC，1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇DCM液洗脫，得到純的甲酯。
Boc保護的胺溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯并重新真空濃縮。1當量的這種胺，2當量的適合的市售羧酸(化合物16，N-乙?；?D-脯氨酸；化合物17，N-乙?；?L-脯氨酸；化合物38，(-)-2-氧代-4-噻唑烷羧酸；化合物39，1-環(huán)己烯-1-羧酸；化合物40，(4R)-(-)-2-硫代(thioxo)-4-噻唑烷羧酸；化合物45，環(huán)丁烷羧酸；化合物46，環(huán)戊烷羧酸；化合物47，環(huán)己烷羧酸；化合物48，3，4-二氫-2，2-二甲基-4-氧代-2H-吡喃-6-羧酸；化合物49，1，3-二硫戊環(huán)-2-羧酸乙酯(用3當量LiOH·H2O的THF/水(3/1)溶液皂化2當量的這種乙基酯。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用1M鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。用1M的鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。得到的產(chǎn)物不用進一步純化即可直接使用)；化合物50，環(huán)丙烷羧酸；化合物51，四氫-2-糠酸)、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚，用0.1 N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇DCM液洗脫，得到純的甲酯。
1當量的得到的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用1M鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。將得到的固體懸浮于乙醚，用0.1M鹽酸洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。得到的酸用反相HPLC進行純化，并用電噴霧質(zhì)譜確證，然后凍干成粉末。
實施例2 化合物1-15，41，43的合成
在一個圓底燒瓶中懸吊一個高效攪拌器，然后往燒瓶里注入濃硫酸(水體積的2.7倍)和水，用乙醇/冰浴冷卻到約-5℃。一旦冷卻，在劇烈攪拌下加入1當量的2，6-二氯苯酚和1當量的N-(羥甲基)鄰苯二甲酰亞胺。在低溫下反應(yīng)4小時，然后溫熱至室溫持續(xù)攪拌過夜。通常反應(yīng)會進行到圓底燒瓶里只有固體的階段。此時將乙酸乙酯和水加入并攪拌。大塊的固體破碎后，將沉淀過濾，并用乙酸乙酯和水洗滌。產(chǎn)物真空干燥過夜后，不需要進一步純化即可使用。
將1當量的干燥后的產(chǎn)物與甲醇(每克起始物加22.5毫升)加入到裝有水冷凝器與攪拌棒的圓底燒瓶中。加入1.2當量肼的一水合物，然后將混合物回流4小時。冷卻至室溫后，小心加入濃鹽酸(每克起始物加4.5毫升)。加完濃鹽酸后，將混合物回流過夜(大于8小時)。反應(yīng)冷卻至0℃，過濾除去沉淀的副反應(yīng)產(chǎn)物。然后將濾液真空濃縮。
將粗胺殘余物溶解在3∶2 THF/水溶液中。加入1.1當量的固體碳酸氫鈉和1.1當量的Boc2O，混合物攪拌過夜。將反應(yīng)物濃縮，將殘余物在水和乙醚中分配。用乙醚萃取水層，合并有機層，用硫酸鎂干燥，真空濃縮成固體。從熱的甲醇和水中重結(jié)晶得到純的產(chǎn)物。
在圓底燒瓶里，將1當量的Boc保護的胺和1.5當量的2，6-二甲基吡啶溶解于DCM中，必要時可稍微加熱。一旦這些起始原料完全溶解，在氮氣下，用干冰-乙醇浴將其冷卻到-78℃。一旦冷卻，加入2.5當量的三氟甲磺酸酐，攪拌下，反應(yīng)溫度緩慢回升到室溫。通常在4小時內(nèi)，用薄層色譜法實時監(jiān)控反應(yīng)。一旦完成，將反應(yīng)物真空濃縮，將殘余物在乙酸乙酯和水中分配。有機層用0.1N硫酸、飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次，然后用硫酸鎂干燥，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用DCM洗脫，得到純的三氟甲磺酸酯。
在高壓Parr容器的玻璃套中，將1當量三氟甲磺酸酯溶解于DMF和甲醇。然后將起始原料在一氧化碳下攪拌脫氣10分鐘。加入0.15當量醋酸鈀(II)和0.15當量的1，3-雙(二苯基膦)丙烷，再在一氧化碳下攪拌脫氣10分鐘，攪拌過程中，加入2.5當量二異丙基乙基胺。合適地組裝好容器后，用300psi一氧化碳氣體充氣，加熱至70℃，攪拌過夜。將容器冷卻后排氣。轉(zhuǎn)移混合物到圓底燒瓶中，然后真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用1％丙酮和1％TEA的DCM溶液洗脫，得到純的甲酯。
將Boc保護的胺溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯并重新真空濃縮。將胺的TFA鹽溶解于乙醚，用10％的碳酸鉀水溶液洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。
1當量的游離堿性胺，3當量的呋喃丙烯酸，3當量的EDC和1當量的Hobt溶解于DMA中。將反應(yīng)物進行室溫攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純的甲酯。
2.3當量碘化鋰加入到1當量的甲酯的吡啶溶液中，并將此混合物回流加熱8小時。將反應(yīng)物真空濃縮，將殘余物在乙酸乙酯和1N鹽酸中分配。水層用乙酸乙酯萃取三次，合并有機層，并用1M碳酸氫鈉洗滌，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。將殘余物溶解于NMM中，然后將溶液真空濃縮。將殘留物用DCM溶解，然后用1N鹽酸洗滌三次。有機層用硫酸鎂干燥，并真空濃縮得到足夠高純度的苯甲酸，不需要繼續(xù)純化，就可以使用。
1當量的酸，2當量的市售β-Boc-二氨基丙酸甲酯，2當量的EDC，1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM洗脫，得到純的甲酯。
Boc保護的胺溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯并重新真空濃縮。1當量的這種胺，2當量的適合的市售羧酸((N-Boc酸從市場上購得。另外的酸是將購得的游離胺通過下列步驟加上Boc保護基而得到將胺溶解于3∶2 THF/水溶液。加入1.1當量的固體碳酸氫鈉和1.1當量的Boc2O，然后將混合物攪拌過夜。濃縮反應(yīng)液以除去THF，剩余水層用己烷進行分配。然后，用1N鹽酸將水層酸化至pH2，再用乙酸乙酯分配兩次。合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。得到的產(chǎn)物不用進一步純化就可使用)化合物1 D，L-2-哌啶酸；化合物2，3-哌啶甲酸；化合物3，異哌啶甲酸；化合物4，N-Boc-L-脯氨酸；化合物5，N-Boc-D-脯氨酸；化合物6，Boc-L-噻唑烷-4-羧酸；化合物7，N-Boc-L-焦谷氨酸；化合物8，N-Boc-D-焦谷氨酸；化合物9，L-2-哌啶酸；化合物10，D-順-4-羥基脯氨酸；化合物11，L-順-4-羥基脯氨酸；化合物12，D-羥基脯氨酸；化合物13，(2S，3S)-3-甲基吡咯烷-2-羧酸；化合物14，N-Boc-L-羥基脯氨酸；化合物15，Boc-D-噻唑烷-4-羧酸；化合物41，L-3-羥基脯氨酸；化合物43，反-3-氮雜雙環(huán)[3.1.0]-己烷-2-羧酸)、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9∶1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純的甲酯。
1當量的得到的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9∶1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用1M鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。將得到的固體懸浮于乙醚，用0.1M鹽酸洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。
恰當?shù)兀瑢oc保護的殘余物溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯并重新真空濃縮。得到的酸用反相HPLC進行純化，并用電噴霧質(zhì)譜確證，然后凍干成粉末。
實施例3 化合物18-21的合成
將1當量的4-氨基-2，6-二氯苯酚溶解于3∶2 THF/水溶液中。加入1.1當量固體碳酸氫鈉和1.1當量Boc2O，然后將反應(yīng)液攪拌過夜。濃縮反應(yīng)液，殘余物分配于水和乙醚中。水層用乙醚萃取，合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮得到固體。從乙醚/已烷中重結(jié)晶得到純的產(chǎn)物。
1當量的苯酚溶解于含有2.6當量2，6-二甲基吡啶的DCM中，將混合物冷卻至-78℃。加入1.25當量的三氟甲磺酸酐，將反應(yīng)液溫熱至室溫，攪拌過夜。濃縮反應(yīng)液，將殘余物在乙醚和水中分配。水層用乙醚萃取，合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜(9∶1已烷/乙醚)進行純化，從而得到純的三氟甲磺酸酯。
一邊攪拌一邊將0.15當量1，3-雙(二苯基膦)-丙烷和2.5當量TEA加入到含有1當量三氟甲磺酸酯的混合溶液中，該混合溶液為DMF/甲醇2/1混合液。向此溶液通入一氧化碳氣體，持續(xù)15分鐘，然后加入0.15當量Pd(OAc)2，在70℃下攪拌5-7小時，攪拌是在一氧化碳氣體中進行(利用充滿一氧化碳的氣球)。真空濃縮反應(yīng)液，將殘余物在乙醚和水中分配。水層用乙醚萃取兩次，合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，通過硅膠塞(plug)過濾，然后真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜(已烷/DCM/乙醚，9∶1∶0.02)進行純化，從而得到純的甲酯。
將1當量的Boc-苯胺溶解于甲醇中，并將該溶液用氯化氫飽和。將該溶液在50℃下加熱3小時，然后真空濃縮。得到的淡黃色固體在35％硫酸中加熱，直到完全溶解。加入冰水冷卻混合物，析出硫酸氫胺鹽沉淀。用冰浴冷卻反應(yīng)瓶，并劇烈攪拌混合物，滴加含有1.1當量亞硝酸鈉水溶液。將溶液在0℃下攪拌1.5小時。加入10當量KI的水溶液，然后迅速加入17當量CuI。將反應(yīng)物室溫下攪拌14小時，用乙醚萃取3次。合并有機層，用1M碳酸氫鈉、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，然后真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜(95∶5己烷/乙醚)進行純化，從而得到純的芳基碘(aryl iodide)甲酯。
將1當量3-氯苯甲醛的THF溶液冷卻至-78℃，加入1.1當量0.5M溴化乙炔基鎂/THF。在室溫下攪拌反應(yīng)液3小時，用乙醚稀釋，用10％檸檬酸洗滌兩次。合并水層，用乙醚再次萃取。合并有機層，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜(4∶1至3∶2己烷/乙醚)進行純化，從而得到純的炔。
1當量的芳基碘甲酯溶解于乙酸乙酯中，向該溶液用吸液管持續(xù)通入氮氣10分鐘進行脫氣。加入1.25當量的炔，然后加入0.02當量的二氯雙(三苯基膦)鈀(II)、0.04當量的CuI和5當量的TEA。將反應(yīng)液攪拌14小時，用乙酸乙酯稀釋，用5％ Na2·EDTA、鹽水洗滌兩次，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(從乙醚到乙酸乙酯進行梯度洗脫)，從而得到純的芳基炔。
1當量的芳基炔溶解于甲醇中，向該溶液用吸液管持續(xù)通人氮氣10分鐘進行脫氣。加入5％Rh/Al2O3，利用氣球?qū)錃馔ㄈ肴芤海瑢⑷芤涸跉錃夥障?利用氣球)進行攪拌7小時，接著將反應(yīng)物通過硅藻土墊過濾，然后真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(從乙醚到乙酸乙酯梯度洗脫)，從而得到純的產(chǎn)物。
2.3當量的碘化鋰加入到1當量的甲酯的吡啶溶液中，并將此混合物回流加熱8小時。將反應(yīng)物真空濃縮，將殘余物在乙酸乙酯和1N鹽酸中分配。水層用乙酸乙酯萃取三次，合并有機層，并用1M碳酸氫鈉洗滌，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。將殘余物溶解于NMM中，然后將溶液真空濃縮。將殘留物用DCM溶解，然后用1N鹽酸洗滌三次。有機層用硫酸鎂干燥，并真空濃縮，得到足夠高純度的苯甲酸，不需要繼續(xù)純化。
1當量的酸，2當量的市售β-Boc-二氨基丙酸甲酯，2當量的EDC，1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純的甲酯。
Boc保護的胺溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯并重新真空濃縮。1當量的這種胺，2當量的適合的市售羧酸((N-Boc酸從市場上購得。其他酸是將購得的游離胺通過下列步驟加上Boc保護基而得到將胺溶解于3∶2 THF/水溶液中。加入1.1當量的固體碳酸氫鈉和1.1當量的Boc2O，然后將混合物攪拌過夜。濃縮反應(yīng)液以除去THF，剩余水層用己烷進行分配。然后，用1N鹽酸將水層酸化至pH2，再用乙酸乙酯分配兩次。合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。得到的產(chǎn)物不用進一步純化就可使用)實施例18，N-Boc-D-脯氨酸；實施例19，N-Boc-L-脯氨酸；實施例20，Boc-L-噻唑烷-4-羧酸；實施例21，異哌啶甲酸；2當量的EDC，1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純的甲酯。
1當量的得到的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用1M鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。將得到的固體懸浮于乙醚中，用0.1M鹽酸洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。
Boc保護的殘余物溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯并重新真空濃縮。得到的酸用反相HPLC進行純化，并用電噴霧質(zhì)譜確證，然后凍干成粉末。
實施例4化合物22-25的合成
1當量的4-氨基-2，6-二氯苯酚溶解于3∶2 THF/水溶液中。加入1.1當量的固體碳酸氫鈉和1.1當量的Boc2O，然后將反應(yīng)液攪拌過夜。濃縮反應(yīng)液，殘余物分配于水和乙醚中。水層用乙醚萃取，合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮得到固體。從乙醚/己烷中重結(jié)晶得到純凈的產(chǎn)物。
1當量的苯酚溶解于含有2.6當量2，6-二甲基吡啶的DCM中，將混合物冷卻至-78℃。加入1.25當量的三氟甲磺酸酐，將反應(yīng)液溫熱至室溫，攪拌過夜。濃縮反應(yīng)液，將殘余物在乙醚和水中分配。水層用乙醚萃取，合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜(9∶1己烷/乙醚)進行純化，從而得到純凈的三氟甲磺酸酯。
一邊攪拌一邊將0.15當量1，3-雙(二苯基膦)-丙烷和2.5當量的TEA加入到含有1當量三氟甲磺酸酯的混合溶液中，該混合溶液為DMF/甲醇的2/1混合液。向此溶液通入一氧化碳氣體，持續(xù)15分鐘，然后加入0.15當量的Pd(OAc)2，在70℃下攪拌5-7小時，攪拌是在一氧化碳氣體中進行(利用充滿一氧化碳的氣球)。真空濃縮反應(yīng)液，將殘余物在乙醚和水中分配。水層用乙醚萃取兩次，合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，通過硅膠塞過濾，然后真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(己烷/DCM/乙醚，9∶1∶0.02)，從而得到純凈的甲酯。
將1當量的Boc-苯胺溶解于甲醇中，并將該溶液用氯化氫飽和。將該溶液在50℃下加熱3小時，然后真空濃縮。得到的淡黃色固體在35％硫酸中加熱，直到完全溶解。加入冰水冷卻混合物，析出硫酸氫胺沉淀。用冰浴冷卻反應(yīng)瓶，并劇烈攪拌混合物，滴加含有1.1當量亞硝酸鈉的水溶液。將溶液在0℃下攪拌1.5小時。加入10當量KI水溶液，然后迅速加入17當量CuI。將反應(yīng)物室溫下攪拌14小時，用乙醚萃取3次。合并有機層，用1M碳酸氫鈉、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，然后真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜(95∶5己烷/乙醚)進行純化，從而得到純凈的芳基碘甲酯。
邊攪拌邊將1.3當量DIPEA加入到由1當量3-羥基苯甲酸、1.3當量N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽、1.3當量HOBt和1.3當量EDC在DMF中形成的多相混合物中。在室溫下攪拌28小時直到所有的固體徹底溶解。濃縮該混合物，將殘余物在乙醚和水中分配。水層用乙醚萃取三次，合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(乙醚)，從而得到純凈的hydroxamate。
1當量hydroxamate，2.2當量的叔丁基二甲基氯硅烷和3當量的咪唑(imidizole)溶解于DMF，在室溫下攪拌。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。反應(yīng)完成后，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。得到的產(chǎn)物不用進一步純化就可使用。
邊攪拌邊向1當量的保護的hydroxamate的THF的-78℃溶液中，滴加1.2當量的1.5MDIBAL的甲苯溶液。將反應(yīng)混合物在-78℃下再攪拌3小時，或直到薄層色譜法檢測到產(chǎn)品完全生成，只有微量的反應(yīng)物。通過將反應(yīng)液加入到裝有乙醚和0.35M硫酸氫鈉的分液漏斗中使反應(yīng)中止?；旌衔锓謱印Ｋ畬佑靡颐演腿∪?。合并有機層，用1N鹽酸和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，然后用硫酸鎂干燥，通過硅膠塞過濾，真空濃縮。得到的醛不需要進一步的純化。
將1當量的保護的醛的THF溶液冷卻至-78℃，加入1.1當量的0.5M溴化乙炔基鎂/THF。在室溫下攪拌反應(yīng)液3小時，用乙醚稀釋，用10％檸檬酸洗滌兩次。合并水層，用乙醚再次萃取。合并有機層，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜(4∶1至3∶2己烷/乙醚)進行純化，從而得到純凈的炔。
1當量的芳基碘甲酯溶解于乙酸乙酯中，向該溶液用吸液管持續(xù)導入氮氣10分鐘進行脫氣。加入1.25當量的炔，然后加入0.02當量的二氯雙(三苯基膦)鈀(II)，0.04當量的CuI和5當量的TEA，將反應(yīng)液攪拌14小時，用乙酸乙酯稀釋，用5％Na2·EDTA、鹽水洗滌兩次，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(從乙醚到乙酸乙酯梯度洗脫)，從而得到純凈的芳基炔。
1當量的芳基炔溶解于甲醇中，向該溶液用吸液管持續(xù)通人氮氣10分鐘進行脫氣。加入5％Rh/Al2O3，利用氣球?qū)錃馔ㄈ肴芤海瑢⑷芤涸跉錃庀?利用氣球)攪拌7小時，接著將反應(yīng)物通過硅藻土墊過濾，然后真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(從乙醚到乙酸乙酯梯度洗脫)，從而得到純凈的產(chǎn)物。
2.3當量的碘化鋰加入到1當量的甲酯的吡啶溶液中，并將此混合物加熱回流8小時。將反應(yīng)物真空濃縮，將殘余物在乙酸乙酯和1N鹽酸中分配。水層用乙酸乙酯萃取三次，合并有機層，并用1M碳酸氫鈉洗滌，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。將殘余物溶解于NMM中，然后將溶液真空濃縮。將殘留物用DCM溶解，然后用1N鹽酸洗滌三次。有機層用硫酸鎂干燥，并真空濃縮，得到足夠高純度的苯甲酸，不需要繼續(xù)純化。
1當量的酸、2當量的市售β-Boc-二氨基丙酸甲酯、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
Boc保護的胺溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中并重新真空濃縮。1當量的這種胺，2當量的適合的市場可得的羧酸((N-Boc酸從市場上購得。其他酸是將購得的游離胺通過下列步驟加上Boc保護基而得到將胺溶解于3∶2 THF/水溶液中。加入1.1當量的固體碳酸氫鈉和1.1當量Boc2O，然后將混合物攪拌過夜。濃縮反應(yīng)液以除去THF，剩余水層用己烷進行分配。然后，用1N鹽酸將水層酸化至pH2，再用乙酸乙酯分配兩次。合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。得到的產(chǎn)物不用進一步純化就可使用。實施例22，N-Boc-L-脯氨酸；實施例23，N-Boc-D-脯氨酸；實施例24，Boc-L-噻唑烷-4-羧酸；實施例25，D-羥基脯氨酸)、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
1當量的得到的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用1M鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。將得到的固體懸浮于乙醚中，用0.1M鹽酸洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。
Boc保護的硅基甲殘余物與3當量的TBAF溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中并重新真空濃縮。得到的酸用反相HPLC進行純化，并用電噴霧質(zhì)譜確證，然后凍干成粉末。
實施例5 化合物26-28，31的合成
1當量的2-氯對苯二酸二甲酯溶解于DCM中，氮氣保護下用冰/丙酮浴冷卻到-5℃。用30分鐘滴加1當量的BBr3的DCM溶液。將反應(yīng)物溫熱至室溫，并攪拌，直到用薄層色譜法(DCM/2％乙酸/2％甲醇)檢測顯示反應(yīng)完全。將溶液傾倒在冰上，冰可能融化?；旌衔镌谝宜嵋阴ブ蟹峙?，真空濃縮。將產(chǎn)物溶于水，再加入飽和碳酸氫鈉，直到pH保持在8以上。該溶液用同等體積的DCM分配一次以除去未反應(yīng)的二酯。將該堿性溶液在0℃用濃鹽酸化至pH＝1-1.5，然后用同等體積的乙酸乙酯萃取沉淀兩次。有機層用鹽水分配一次，再用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。HPLC檢測到期望的位置異構(gòu)體(regioisomer)產(chǎn)物與非期望的異構(gòu)體產(chǎn)物之間的比例為7∶1。
該單酯溶解于DCM，轉(zhuǎn)移到一個預先稱重的裝有攪拌棒的帕爾(Parr)燒瓶中。將燒瓶在氮氣保護下用干冰/乙醇浴冷卻至-5℃。一旦冷卻，攪拌時注入約30當量的異丁烯到溶液中。加入2.1當量的濃硫酸，用一個線拴住的橡皮塞封住燒瓶，攪拌時將反應(yīng)物溫熱至室溫。攪拌溶液直至澄清(1-2天)。當溶液變得澄清時，用冰浴將其冷卻至0℃。拔出塞子，用氮氣將過量的異丁烯吹出。加入飽和碳酸氫鈉中和酸，然后將混合物真空濃縮，直到完全除去DCM。該溶液在乙酸乙酯中分配。有機層用稀鹽酸、飽和碳酸氫鈉分配兩次，用鹽水分配一次，用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。得到的產(chǎn)物不用進一步純化就可使用。
1當量的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，將混合物小心用濃鹽酸化至pH2，然后真空濃縮以除去THF。水層用乙醚洗滌兩次，合并有機層，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。苯甲酸叔丁酯不用進一步純化就可使用。
將1當量的3-甲氧基苯基氰與乙醇、0.02當量的鹽酸和10％(w/w)的10％碳鈀一起放入帕爾瓶中。該容器被放入帕爾振蕩器，充滿50psi氫氣，振蕩12小時。通過硅藻土墊過濾，并用乙醚按1∶10稀釋。放置過夜后，析出細白針狀晶體。將產(chǎn)物過濾，用乙醚洗滌，真空干燥。得到的胺鹽酸鹽不用進一步純化就可使用。
用3當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA的DMA溶液將3當量的苯甲酸叔丁基酯連接到1當量的胺鹽酸鹽。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。產(chǎn)物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液純化得到純的叔丁酯。
將叔丁酯溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯，然后真空濃縮兩次。
將得到的化合物溶解于DCM中，氮氣保護下用冰/丙酮浴冷卻到-5℃。用30分鐘滴加2當量的BBr3的DCM溶液。將反應(yīng)物溫熱至室溫，攪拌直到用薄層色譜法(DCM/2％乙酸/2％甲醇)檢測顯示反應(yīng)完全。將溶液傾倒在冰上，冰可能融化。混合物用乙酸乙酯分配兩次，合并有機層，用硫酸鎂干燥，濾液通過硅膠塞，然后真空濃縮，得到純凈的苯甲酸。
1當量的苯甲酸、2當量的市售β-Boc-二氨基丙酸甲酯、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
Boc保護的胺溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中并重新真空濃縮。1當量的這種胺、2當量的適合的市售羧酸((N-Boc酸從市場上購得。其他酸是將購得的游離胺通過下列步驟加上Boc保護基而得到將胺溶解于3∶2 THF/水溶液中。加入1.1當量的固體碳酸氫鈉和1.1當量的Boc2O，然后將混合物攪拌過夜。濃縮反應(yīng)液除去THF，剩余水層用己烷進行分配。然后，用1N鹽酸將水層酸化至pH2，再用乙酸乙酯分配兩次。合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。得到的產(chǎn)物不用進一步純化就可使用。實施例26，環(huán)己烷羧酸；實施例27，異哌啶甲酸；實施例28，D，L-2-哌啶酸；實施例31，3-哌啶甲酸；)、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
1當量的得到的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用1M鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。將得到的固體懸浮于乙醚中，用0.1M鹽酸洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。
恰當?shù)?，Boc保護的殘余物溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，然后真空再濃縮，得到的酸用反相HPLC進行純化，并用電噴霧質(zhì)譜確證，然后凍干成粉末。
實施例6 化合物29，30的合成
1當量的2-氯對苯二酸二甲酯溶解于DCM中，氮氣保護下用冰/丙酮浴冷卻到-5℃。用30分鐘滴加1當量的BBr3下的DCM溶液。將反應(yīng)物溫熱至室溫，攪拌直到用薄層色譜法(DCM/2％乙酸/2％甲醇)檢測顯示反應(yīng)完全。將溶液傾倒在冰上，冰可能融化?；旌衔镌谝宜嵋阴ブ蟹峙?，然后真空濃縮。將產(chǎn)物溶于水中，再加入飽和碳酸氫鈉，直到pH保持在8以上。該溶液用同等體積的DCM分配一次以除去未反應(yīng)的二酯。將該堿性溶液在0℃用濃鹽酸化至pH＝1-1.5，然后用同等體積的乙酸乙酯萃取沉淀兩次。有機層用鹽水分配一次，再用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。HPLC檢測到期望的位置異構(gòu)體(regioisomer)產(chǎn)物與非期望的異構(gòu)體產(chǎn)物之間的比例為7∶1。
該單酯溶解于DCM中，轉(zhuǎn)移到一個預先稱重的裝有攪拌棒的帕爾燒瓶中。將燒瓶在氮氣保護下用干冰/乙醇浴冷卻至-5℃。一旦冷卻，在攪拌中注入約30當量的異丁烯到溶液中。加入2.1當量的濃硫酸，用一個線拴住的橡皮塞封住燒瓶，攪拌時將反應(yīng)物溫熱至室溫。攪拌溶液直至澄清(1-2天)。當溶液變得澄清時，用冰浴將其冷卻至0℃。拔出塞子，用氮氣將過量的異丁烯吹出。加入飽和的碳酸氫鈉中和酸，然后將混合物真空濃縮，直到完全除去DCM。該溶液在乙酸乙酯中分配。有機層用稀鹽酸、飽和碳酸氫鈉分配兩次，用鹽水分配一次，用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。得到的產(chǎn)物不用進一步純化就可使用。
1當量的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用濃鹽酸小心將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮除去THF。水層用乙醚洗滌兩次，合并有機層，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。得到的苯甲酸叔丁基酯不用進一步純化就可使用。
將1當量的3-甲氧基苯基氰與乙醇、0.02當量的鹽酸和10％(w/w)的10％碳鈀一起放入帕爾瓶中。該容器被放入帕爾振蕩器中，充滿50psi氫氣，振蕩12小時。通過硅藻土墊過濾，并用乙醚按1∶10稀釋。放置過夜后，析出細白針狀晶體。將產(chǎn)物過濾，用乙醚洗滌，真空干燥。得到的胺鹽酸鹽不用進一步純化就可使用。
用3當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA的DMA溶液將3當量的苯甲酸叔丁基酯連接到1當量的胺鹽酸鹽上。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。產(chǎn)物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫純化得到純凈的叔丁酯。
將叔丁酯溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，然后真空濃縮兩次。
將得到的化合物溶解于DCM中，氮氣保護下用冰/丙酮浴冷卻到-5℃。用30分鐘滴加2當量的BBr3的DCM溶液。將反應(yīng)物溫熱至室溫，攪拌直到用薄層色譜法(DCM/2％乙酸/2％甲醇)檢測顯示反應(yīng)完全。將溶液傾倒在冰上，冰可能融化?；旌衔镉靡宜嵋阴シ峙鋬纱危喜⒂袡C層，用硫酸鎂干燥。濾液通過硅膠塞，然后真空濃縮，得到純凈的苯甲酸。
1當量的苯甲酸、2當量的市售β-Boc-二氨基丙酸甲酯、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物在室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的Boc甲酯。
1當量的市售哌啶甲酸溶解于3∶2THF/水溶液中。加入1.1當量的固體碳酸氫鈉和1.1當量的Boc2O，然后將混合物攪拌過夜。濃縮反應(yīng)液除去THF，水層用己烷分配。將水層用1N鹽酸酸化至pH2，然后用乙酸乙酯分配兩次。合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。得到的Boc保護的哌啶甲酸不用進一步純化就可使用。
將Boc甲酯溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，然后重新真空濃縮。1當量的這種胺、2當量的得到的Boc保護的哌啶甲酸、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的產(chǎn)物。
將Boc保護的產(chǎn)物溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，然后真空濃縮兩次得到純凈的胺。1當量的這種胺、2當量的適當?shù)氖惺鬯?實施例29；丙酸；實施例30，乙酸)、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的產(chǎn)物。
1當量的得到的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用1M鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。將得到的固體懸浮于乙醚中，用0.1M鹽酸洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。得到的酸用反相HPLC進行純化，并用電噴霧質(zhì)譜確證，然后凍干成粉末。
實施例7 化合物32-34的合成
1當量的2-氯對苯二酸二甲酯溶解于DCM中，氮氣保護下用冰/丙酮浴冷卻到-5℃。用30分鐘滴加1當量的BBr3的DCM溶液。將反應(yīng)物溫熱至室溫，攪拌直到用薄層色譜法(DCM/2％乙酸/2％甲醇)檢測顯示反應(yīng)完全。將溶液傾倒在冰上，冰可能融化?；旌衔镌谝宜嵋阴ブ蟹峙洌婵諠饪s。將產(chǎn)物溶于水，再加入飽和的碳酸氫鈉，直到pH保持在8以上。該溶液用同等體積的DCM分配一次以除去未反應(yīng)的二酯。將該堿性溶液在0℃用濃鹽酸化至pH＝1-1.5，然后用等體積的乙酸乙酯萃取沉淀兩次。有機層用鹽水分配一次，再用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。HPLC檢測到期望的位置異構(gòu)體(regioisomer)產(chǎn)物與非期望的異構(gòu)體產(chǎn)物之間的比例為7∶1。
該單酯溶解于DCM中，轉(zhuǎn)移到一個預先稱重的裝有攪拌棒的帕爾燒瓶中。將燒瓶在氮氣保護下用干冰/乙醇浴冷卻至-5℃。一旦冷卻，攪拌時注入約30當量的異丁烯到溶液中。加入2.1當量的濃硫酸，用一個線拴住的橡皮塞封住燒瓶，攪拌時將反應(yīng)物溫熱至室溫。攪拌溶液直至澄清(1-2天)。當溶液變得澄清時，將其在冰浴中冷卻至0℃。拔出塞子，用氮氣將過量的異丁烯吹出。加入飽和的碳酸氫鈉中和酸，然后將混合物真空濃縮，直到完全除去DCM。該溶液在乙酸乙酯中分配。有機層用稀鹽酸、飽和的碳酸氫鈉分配兩次，用鹽水分配一次，用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。得到的產(chǎn)物不用進一步純化就可使用。
將1當量的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用濃鹽酸小心將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮除去THF。水層用乙醚洗滌兩次，合并有機層，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。得到的苯甲酸叔丁酯不用進一步純化就可使用。
將1當量的3-甲氧基苯基氰與乙醇、0.02當量的鹽酸和10％(w/w)的10％碳鈀一起放入帕爾瓶中。該容器被放入帕爾振蕩器上，充滿50psi氫氣，振蕩12小時。通過硅藻土墊過濾，并用乙醚按1∶10稀釋。放置過夜后，析出細白針狀晶體。將產(chǎn)物過濾，用乙醚洗滌，真空干燥。得到的胺鹽酸鹽不用進一步純化就可使用。
用3當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA的DMA溶液將3當量的苯甲酸叔丁基酯連接到1當量的胺鹽酸鹽上。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。產(chǎn)物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫純化得到純凈的叔丁酯。
將叔丁酯溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，然后真空濃縮兩次。
將得到的化合物溶解于DCM中，氮氣保護下用冰/丙酮浴冷卻到-5℃。用30分鐘滴加2當量的BBr3的DCM溶液。將反應(yīng)物溫熱至室溫，攪拌直到用薄層色譜法(DCM/2％乙酸/2％甲醇)檢測顯示反應(yīng)完全。將溶液傾倒在冰上，冰可能融化。混合物用乙酸乙酯分配兩次，合并有機層，用硫酸鎂干燥，濾液通過硅膠塞，然后真空濃縮，得到純凈的苯甲酸。
1當量的苯甲酸、2當量的市售β-Boc-二氨基丙酸甲酯、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物在室溫下攪拌并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的Boc甲酯。
1當量的市售異哌啶甲酸溶解于3∶2THF/水溶液中。加入1.1當量的固體碳酸氫鈉和1.1當量的Boc2O，然后將混合物攪拌過夜。濃縮反應(yīng)液除去THF，水層用己烷分配。將水層用1N鹽酸酸化至pH2，然后用乙酸乙酯分配兩次。合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。得到的Boc保護的異哌啶甲酸不用進一步純化就可使用。
Boc甲酯溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，然后重新真空濃縮。1當量的這種胺、2當量的得到的Boc保護的異哌啶甲酸、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌，用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的產(chǎn)物。
將Boc保護的產(chǎn)物溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，然后真空濃縮兩次，得到純凈的胺。1當量的這種胺、2當量的適當?shù)氖惺鬯?實施例32；丙酸；實施例33，丁酸；實施例34，乙酸)、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌，并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的產(chǎn)物。
1當量的得到的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用1M鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。將得到的固體懸浮于乙醚中，用0.1M鹽酸洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。得到的酸用反相HPLC進行純化，并用電噴霧質(zhì)譜確證，然后凍干成粉末。
實施例8 化合物36的合成
1當量的2，6-二氯-4-甲基苯酚溶解于含有2.6當量的2，6-二甲基吡啶的DCM中，將混合物冷卻至-78℃。加入1.25當量的三氟甲磺酸酐，攪拌反應(yīng)液，溫熱至室溫過夜。濃縮反應(yīng)液，將殘余物在乙醚和水中分配。水層用乙醚萃取，合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜(9∶1己烷/乙醚)進行純化，從而得到純凈的三氟甲磺酸酯。
攪拌的同時將0.15當量的1，3-雙(二苯基膦)-丙烷和2.5當量的TEA加入到含有1當量的三氟甲磺酸酯的混合溶液中，該混合溶液為2/1的DMF/甲醇混合液。向此溶液通入一氧化碳氣體，持續(xù)15分鐘。然后加入0.15當量的Pd(OAc)2，在70℃下攪拌5-7小時，攪拌是在一氧化碳氣體中進行(利用充滿一氧化碳的氣球)。真空濃縮反應(yīng)液，將殘余物在乙醚和水中分配。水層用乙醚萃取兩次，合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，通過硅膠塞過濾，然后真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(己烷/DCM/乙醚，9∶1∶0.02)，從而得到純凈的甲苯基甲酯。
1當量的甲苯基甲酯(tolyl methyl ester)溶解于乙酸酐和乙酸中，用冰-鹽浴(-5℃)冷卻，然后加入濃硫酸。滴加CrO3(2.6當量的)的乙酸酐和乙酸溶液，將反應(yīng)液在-5℃攪拌3.5小時。將溶液傾入冰水中并攪拌30分鐘。混合物用乙醚萃取三次。合并有機層，用飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮得到油狀物。向油狀物中加入甲苯，再將溶液真空濃縮。重復此步驟直到產(chǎn)生晶狀固體。將該固體溶解于甲醇和濃鹽酸中，然后加熱回流12小時。將反應(yīng)物真空濃縮，殘余物用硅膠快速色譜進行純化(9∶1己烷/乙醚)，從而得到純凈的醛。
將1當量的醛的THF溶液冷卻至-78℃，加入1.1當量的0.5M溴化乙炔基鎂/THF。在室溫下攪拌反應(yīng)液3小時，用乙醚稀釋，用10％檸檬酸洗滌兩次。合并水層，用乙醚再次萃取。合并有機層，用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜(4∶1至3∶2己烷/乙醚)進行純化，從而得到純凈的炔。
1當量的3-碘代苯酚、2.2當量的叔丁基二甲基氯硅烷和3當量的咪唑(imidizole)溶解于DMF中，在室溫下攪拌。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。反應(yīng)完成后，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用飽和的碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。得到的產(chǎn)物不用進一步純化就可使用。
1當量的硅基碘化物溶解于乙酸乙酯中，向該溶液用吸液管持續(xù)通入氮氣10分鐘進行脫氣。加入1.25當量的炔、然后加入0.02當量的二氯雙(三苯基膦)鈀(II)、0.04當量的CuI和5當量的TEA。將反應(yīng)液攪拌14小時，用乙酸乙酯稀釋，用5％Na2·EDTA、鹽水洗滌兩次，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(從乙醚到乙酸乙酯進行梯度洗脫)，從而得到純凈的芳基炔。
1當量的芳基炔溶解于甲醇中，向該溶液用吸液管持續(xù)通入氮氣10分鐘進行脫氣。加入5％Rh/Al2O3，利用氣球?qū)錃馔ㄈ肴芤?，將溶液在氫氣?利用氣球)進行攪拌7小時，接著將反應(yīng)物通過硅藻土墊過濾，真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(從乙醚到乙酸乙酯進行梯度洗脫)，從而得到純凈的產(chǎn)物。
2.3當量的碘化鋰加入到1當量的甲酯的吡啶溶液中，并將此混合物加熱回流8小時。將反應(yīng)物真空濃縮，將殘余物在乙酸乙酯和1N鹽酸中分配。水層用乙酸乙酯萃取三次，合并有機層，并用1M碳酸氫鈉洗滌，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。將殘余物溶解于NMM中，然后將溶液真空濃縮。將殘留物用DCM溶解，然后用1N鹽酸洗滌三次。有機層用硫酸鎂干燥，并真空濃縮，得到足夠高純度的苯甲酸，不需要繼續(xù)純化。
1當量的酸、2當量的市售β-Boc-二氨基丙酸甲酯、2當量的EDC，1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌，并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
Boc保護的胺溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中并重新真空濃縮。將1當量的這種胺、2當量的Boc-L-噻唑烷-4-羧酸、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌，并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
1當量的得到的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用1M鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。將得到的固體懸浮于乙醚中，用0.1M鹽酸洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。
Boc保護的硅基殘余物與3當量的TBAF一起溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，并重新真空濃縮。得到的酸用反相HPLC進行純化，并用電噴霧質(zhì)譜確證，然后凍干成粉末。
實施例9化合物37的合成
1當量的2，6-二氯-4-甲基苯酚溶解于含有2.6當量的2，6-二甲基吡啶的DCM中，將混合物冷卻至-78℃。加入1.25當量的三氟甲磺酸酐，將攪拌的反應(yīng)液溫熱至室溫過夜。濃縮反應(yīng)液，將殘余物在乙醚和水中分配。水層用乙醚萃取，合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜(9∶1己烷/乙醚)進行純化，從而得到純凈的三氟甲磺酸酯。
攪拌同時將0.15當量的1，3-雙(二苯基膦)-丙烷和2.5當量的TEA加入到含有1當量的三氟甲磺酸酯的混合溶液中，該混合溶液為2/1的DMF/甲醇混合液。向此溶液通入一氧化碳氣體，持續(xù)15分鐘。然后加入0.15當量的Pd(OAc)2，在70℃下攪拌5-7小時，攪拌在一氧化碳氣體中(利用充滿一氧化碳的氣球)進行。真空濃縮反應(yīng)液，將殘余物在乙醚和水中分配。水層用乙醚萃取兩次，合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，通過硅膠塞過濾，然后真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(流動相為己烷/DCM/乙醚，9∶1∶0.02)，從而得到純凈的甲苯基甲酯。
1當量的甲苯基甲酯溶解于乙酸酐和乙酸中，在冰-鹽浴(-5℃)中冷卻，然后加入濃硫酸。滴加CrO3(2.6當量的)的乙酸酐和乙酸溶液，將反應(yīng)液在-5℃攪拌3.5小時。將溶液傾入冰水中，并攪拌30分鐘?；旌衔镉靡一演腿∪?。合并有機層，用飽和的碳酸氫鈉和鹽水洗滌，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮得到油狀物。向油狀物中加入甲苯，再將溶液真空濃縮。重復此步驟直到產(chǎn)生晶狀固體。將該固體溶解于甲醇和濃鹽酸中，然后加熱回流12小時。將反應(yīng)物真空濃縮，殘余物用硅膠快速色譜進行純化(9∶1己烷/乙醚)得到純凈的醛。
將1當量的醛的THF溶液冷卻至-78℃，加入1.1當量的0.5M溴化乙炔基鎂/THF。在室溫下攪拌反應(yīng)液3小時，用乙醚稀釋，用10％檸檬酸洗滌兩次。合并水層，用乙醚再次萃取。合并有機層，用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜(4∶1至3∶2己烷/乙醚)進行純化，從而得到純凈的炔。
1當量的1-氯-3-碘代苯溶解于乙酸乙酯中，向該溶液用吸液管持續(xù)通入氮氣10分鐘進行脫氣。加入1.25當量的炔，然后加入0.02當量的二氯雙(三苯基膦)鈀(II)、0.04當量的CuI和5當量的TEA。將反應(yīng)液攪拌14小時，用乙酸乙酯稀釋，用5％Na2·EDTA、鹽水洗滌兩次，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(從乙醚到乙酸乙酯進行梯度洗脫)，從而得到純凈的芳基炔。
1當量的芳基炔溶解于甲醇中，向該溶液用吸液管持續(xù)通人氮氣10分鐘進行脫氣。加入5％Rh/Al2O3，利用氣球?qū)錃馔ㄈ肴芤褐?，將溶液在氫氣?利用氣球)進行攪拌7小時，接著將反應(yīng)物通過硅藻土墊過濾，真空濃縮。殘余物用硅膠快速色譜進行純化(從乙醚到乙酸乙酯梯度洗脫)，得到純凈的產(chǎn)物。
2.3當量的碘化鋰加入到1當量的甲酯的吡啶溶液中，并將此混合物加熱回流8小時。將反應(yīng)物真空濃縮，將殘余物在乙酸乙酯和1N鹽酸中分配。水層用乙酸乙酯萃取三次，合并有機層，并用1M碳酸氫鈉洗滌，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。將殘余物溶解于NMM中，然后將溶液真空濃縮。將殘留物用DCM溶解，然后用1N鹽酸洗滌三次。有機層用硫酸鎂干燥，并真空濃縮，得到足夠高純度的苯甲酸，不需要繼續(xù)純化。
1當量的酸、2當量的市售β-Boc-二氨基丙酸甲酯、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌，并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
1當量的市售D-羥基脯氨酸溶解于3∶2 THF/水溶液中。加入1.1當量的固體碳酸氫鈉和1.1當量的Boc2O，然后將混合物攪拌過夜。濃縮反應(yīng)液除去THF，水層用己烷分配。將水層用1N鹽酸酸化至pH2，然后用乙酸乙酯分配兩次。合并有機層，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。得到的N-Boc-D-羥基脯氨酸不用進一步純化就可使用。
Boc保護的胺溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中。并重新真空濃縮。1當量的這種胺、2當量的Boc-D-羥基脯氨酸、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌，并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
1當量的得到的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用1M鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。將得到的固體懸浮于乙醚中，用0.1M鹽酸洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。Boc保護的硅基殘余物溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，并重新真空濃縮。得到的酸用反相HPLC進行純化，并用電噴霧質(zhì)譜確證，然后凍干成粉末。
實施例10 化合物35的合成
在一個圓底燒瓶中懸吊一個高效的攪拌器，然后往燒瓶里注入濃硫酸(水體積的2.7倍)和水，用乙醇/冰浴冷卻到約-5℃。一旦冷卻，在劇烈攪拌下加入1當量的2，6-二氯苯酚和1當量的N-(羥甲基)鄰苯二甲酰亞胺。在低溫下反應(yīng)4小時，然后溫熱至室溫，持續(xù)攪拌過夜。通常反應(yīng)會進行到圓底燒瓶里只有固體的階段。此時將乙酸乙酯和水加入并攪拌。大塊的固體破碎后，將沉淀過濾，并用乙酸乙酯和水洗滌。產(chǎn)物真空干燥過夜后，不需要進一步純化即可使用。
將1當量的干燥后的產(chǎn)物與甲醇(每克起始物加22.5毫升)加入到裝有水冷凝器與攪拌棒的圓底燒瓶中。加入1.2當量的肼一水合物，然后將混合物回流4小時。冷卻至室溫后，小心加入濃鹽酸(每克起始物加4.5毫升)。加完濃鹽酸后，將混合物回流過夜(大于8小時)。反應(yīng)冷卻至0℃，過濾除去沉淀的副反應(yīng)產(chǎn)物。然后將濾液真空濃縮。
將粗胺殘余物在3∶2 THF/水溶液中溶解。加入1.1當量的固體碳酸氫鈉和1.1當量的Boc2O，混合物攪拌過夜。將反應(yīng)物濃縮，將殘余物在水和乙醚中分配。用乙醚萃取水溶液，合并有機層，用硫酸鎂干燥，真空濃縮成固體。從熱的甲醇和水中重結(jié)晶得到純凈的產(chǎn)物。
在圓底燒瓶里，將1當量的Boc保護的胺和1.5當量的2，6-二甲基吡啶溶解于DCM中，必要時可稍微加熱。一旦這些起始原料完全溶解，在氮氣下，用干冰乙醇浴將其冷卻到-78℃。一旦冷卻，加入2.5當量的三氟甲磺酸酐，攪拌下，反應(yīng)溫度緩慢回升到室溫。用薄層色譜法實時監(jiān)控反應(yīng)，一般4小時內(nèi)反應(yīng)完畢。一旦完成，將反應(yīng)物真空濃縮，將殘余物在乙酸乙酯和水中分配。有機層用0.1N硫酸、飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次，然后用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用DCM洗脫，得到純凈的三氟甲磺酸酯。
在高壓Parr容器的玻璃套中，將1當量的三氟甲磺酸酯溶解于DMF和甲醇中。然后將起始物在一氧化碳下攪拌脫氣10分鐘。加入0.15當量的醋酸鈀(II)和0.15當量的1，3-雙(二苯基膦)丙烷，再在一氧化碳下攪拌脫氣10分鐘，攪拌過程中，加入2.5當量的二異丙基乙基胺。正確組裝好容器后，充滿300psi一氧化碳氣體，加熱至70℃，攪拌過夜。將容器冷卻排氣。轉(zhuǎn)移混合物到圓底燒瓶中，然后真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用1％丙酮和1％TEA的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
Boc保護的胺溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，并重新真空濃縮。將胺的TFA鹽溶解于乙醚中，用碳酸鉀的10％水溶液洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。
1當量的游離堿性胺、3當量的呋喃丙烯酸、3當量的EDC和1當量的Hobt溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌，并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
2.3當量的碘化鋰加入到1當量的甲酯的吡啶溶液中，并將此混合物加熱回流8小時。將反應(yīng)物真空濃縮，將殘余物在乙酸乙酯和1N鹽酸中分配。水層用乙酸乙酯萃取三次，合并有機層，并用1M碳酸氫鈉洗滌，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。將殘余物溶解于NMM中，然后將溶液真空濃縮。將殘留物用DCM溶解，然后用1N鹽酸洗滌三次。有機層用硫酸鎂干燥，并真空濃縮，得到足夠高純度的苯甲酸，不需要繼續(xù)純化。
1當量的酸、2當量的市售β-Boc-二氨基丙酸甲酯、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌，并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
Boc保護的胺溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，然后重新真空濃縮。
將1.05當量的碘甲烷和2.1當量的碳酸鉀的DMF溶液加入到1當量的這種胺中。將反應(yīng)物室溫下攪拌，用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)測。一旦反應(yīng)完成，用乙酸乙酯和水稀釋。將水層在乙酸乙酯中分配，合并有機層，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。
1當量的這種胺、2當量的Boc-L-噻唑烷-4-羧酸、2當量的EDC、1當量的Hobt和3當量的DIPEA溶解于DMA中。將反應(yīng)物室溫下攪拌，并且用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控。一旦反應(yīng)完成，將混合物真空濃縮。將得到的油懸浮于乙醚中，用0.1N硫酸和飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。將殘余物在硅膠柱上用5％甲醇的DCM液洗脫，得到純凈的甲酯。
1當量的得到的甲酯溶解于THF/水(3/1)中，加入3當量的LiOH·H2O。用薄層色譜法(DCM/甲醇，9/1)監(jiān)控反應(yīng)。一旦反應(yīng)完成，用1M鹽酸將混合物酸化至pH2，然后真空濃縮。將得到的固體懸浮于乙醚中，用0.1M鹽酸洗滌兩次，用鹽水洗滌一次。將有機層用硫酸鎂干燥，然后過濾，真空濃縮。
將殘余物溶解于TFA的DCM溶液(1∶1)中。20分鐘后，將反應(yīng)物真空濃縮。將得到的油溶解于甲苯中，然后重新真空濃縮。得到的酸用反相HPLC進行純化，并用電噴霧質(zhì)譜確證，然后凍干成粉末。
實施例11 PLM2抗體捕獲LFA-1ICAM-1分析抗人體CD18的非功能抑制性單克隆抗體PLM-2(如Hildreth等，Molecular Immunology，Vol.26，No.9，pp.883-895，1989所述)，用PBS稀釋至5μg/ml，并以100μl/孔包被96-孔平底培養(yǎng)板，4℃保持過夜。在室溫下，將培養(yǎng)板用在分析緩沖液(0.02M Hepes，0.15M NaCl，和1mM MnCl2)中的0.5％BSA封閉1小時。用50mM Tis pH7.5，0.1M NaCl，0.05％Tween20和1mM MnCl2沖洗培養(yǎng)板。用分析緩沖液，將純化的全長重組人LFA-1蛋白稀釋至2μg/ml，按100μl/孔加入到培養(yǎng)板中，在37℃培養(yǎng)1小時。洗板三次。每孔加入50μl兩倍終濃度的溶在分析緩沖液中經(jīng)過適當稀釋了的抑制劑，37℃培養(yǎng)30分鐘。每孔加入50μl、用分析緩沖液中稀釋至161ng/ml(終濃度為80ng/ml)的純化的重組人的5結(jié)構(gòu)域ICAM-Ig，在37℃培養(yǎng)2小時。沖洗培養(yǎng)板，室溫下用山羊抗HuIgG(Fc)-HRP檢測結(jié)合的ICAM-Ig1小時。沖洗培養(yǎng)板，室溫下每孔用100μlTMB底物顯色5-10分鐘。每孔用100μl H3PO4(1M)停止顯色，在讀板儀下450nM處讀取。PLM2的分析結(jié)果如下表1-4所示。
實施例12 血清/血漿蛋白結(jié)合受試化合物的結(jié)合是按照Borga等(Journal of Pharmacokinetics &Biopharmaceutics，1997，25(1)63-77)和Godolphin等(Therapeutic drugmonitoring，1983，5319-23)所闡述的步驟進行的。室溫下，雙份10μl受試化合物原液(1μg/μL)攙入到1mL緩沖液或用二氧化碳調(diào)到pH7.4的血清/血漿中。樣品裝在瓶里，在裝有振蕩器的37℃水浴中培養(yǎng)15分鐘進行平衡。保留200μl摻入緩沖液的樣品作為濾前液。800μl摻入緩沖液的樣品和1ml的血清摻入的樣品在超濾離心儀(Amicon Inc.)中37℃下，1500g離心30分鐘。用LC/MS-MS分析濾前液和濾后液，測定受試化合物與血清/血漿蛋白的結(jié)合百分比，從扣除(accounting for)由緩沖液對照得到的非特異性結(jié)合的濾前液和濾后液的數(shù)值得到。
在取代基Cy處含有非芳香環(huán)的本發(fā)明化合物具有很低的血清血漿蛋白結(jié)合特性，有利于維持與治療相關(guān)的血清水平。如表1-4所示，相對于在取代基Cy處含有非芳香環(huán)的本發(fā)明化合物，含有芳香環(huán)的參照化合物一直顯示較高的血漿蛋白結(jié)合百分率。
表1

表2

表3
表4
權(quán)利要求
1.具有通式(I)的化合物，及其鹽、溶劑化物、水合物。 其中Cy為非芳香族碳環(huán)或雜環(huán)，可被羥基、巰基、硫烷基、鹵素、氧代、硫代、氨基、氨基烷基、脒基、胍基、硝基、烷基、烷氧基或者酰基任選取代；X為二價烴鏈，可被羥基、巰基、鹵素、氨基、氨基烷基、硝基、氧代或硫代任選取代并可任選被N，O，S，SO或SO2斷開；Y為碳環(huán)或雜環(huán)，可被羥基、巰基、鹵素、氧代、硫代、硫烷基、氨基、氨基烷基、碳環(huán)或雜環(huán)基、烴基、鹵代烴基、氨基、脒基、胍基、氰基、硝基、烷氧基或者?；芜x取代；L為單鍵或可被羥基、鹵素、氧代或硫代任選取代并可任選被N、O、S、SO或SO2或氨基酸殘基斷開的少于3至5個原子的二價烴鏈；R1為H，羥基，氨基，O-碳環(huán)或烷氧基，所述基團可被氨基、碳環(huán)或雜環(huán)任選取代；R2-5獨立為H，羥基，巰基，鹵素，氰基，氨基，脒基，胍基，硝基或烷氧基；或R3和R4合在一起形成稠合碳環(huán)或雜環(huán)，可被羥基、鹵素、氧代、硫代、氨基、脒基、胍基或烷氧基任選取代；R6為H或可被碳環(huán)或雜環(huán)任選取代的烴鏈；前提條件是當Y為苯基時，R2、R4和R5為H，R3為Cl，且R1為OH，則X為除環(huán)己基以外的基團。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Cy為5或6元非芳香族雜環(huán)，可被羥基、巰基、硫烷基、鹵素、氧代、硫代、氨基、氨基烷基、脒基、胍基、硝基、烷基、烷氧基或酰基任選取代。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中所述雜環(huán)包括一個或兩個雜原子并可被羥基、氧代、巰基、硫代、烷基或烷酰基任選取代。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中所述雜環(huán)選自哌啶、哌嗪、嗎啉、四氫呋喃、四氫噻吩、噁唑烷，環(huán)丙基吡咯烷和噻唑烷，可被羥基、氧代、巰基、硫代、烷基或烷?；芜x取代。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中所述雜環(huán)選自哌啶、哌嗪、嗎啉、四氫呋喃、四氫噻吩、噁唑烷，噻唑烷，可被羥基、氧代、巰基、硫代、烷基或烷?；芜x取代。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Cy為3-6元碳環(huán)，可被羥基、巰基、鹵素、氧代、硫代、氨基、脒基、胍基、烷基、烷氧基或?；芜x取代。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中所述碳環(huán)為部分不飽和。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中Cy為環(huán)丙基，環(huán)丙烯基，環(huán)丁基，環(huán)丁烯基，環(huán)戊基，環(huán)戊烯基，環(huán)己基和環(huán)己烯基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X為C1-5二價烴，任選其中一個或多個碳原子被N，O，S，SO或SO2替代，且該烴可被羥基、氧代或硫代任選取代。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X為-CH2-NR6-C(O)-，其中羰基部分-C(O)-與Cy共價連接，且R6為H或烷基。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Y為可被羥基或鹵素任選取代的碳環(huán)或雜環(huán)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中Y為呋喃-2-基，噻吩-2-基或苯基，其中所述苯基可被鹵素或羥基任選取代。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中L為二價烴，其中一個或多個碳原子被N，O，S，SO或SO2任選替代，且該烴可被羥基、鹵素、氧代或硫代任選取代；或該烴的三個碳原子被氨基酸殘基替代。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其中L為-CH＝CH-C(O)-NR6-CH2-，-CH2-NR6-C(O)-，-C(O)-N6-CH2-，-CH(OH)-(CH2)2-，-(CH2)2-CH(OH)-，-(CH2)3-，-C(O)-NR6-CH(R7)-C(O)-NR6-，-NR6-C(O)-CH(R7)-NR6-C(O)-，-CH(OH)-CH2-O-或-CH(OH)-CF2-CH2-，其中每個R6獨立為H或烷基，且R7為氨基酸側(cè)鏈。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中R1為H、OH、氨基，以及O-碳環(huán)或烷氧基，所述基團可被碳環(huán)任選取代。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的化合物，其中R1為H或C1-4烷氧基。
17.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R2和R3中至少一個為鹵素，且另一個為H或鹵素。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的化合物，其中R2和R3都為Cl。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中R4和R5都為H。
20.一種藥物組合物，含有權(quán)利要求1的化合物、可藥用的輔藥、稀釋劑或載體。
21.一種抑制LFA-1與蛋白配體結(jié)合的方法，包括將LFA-1與權(quán)利要求1的化合物相接觸。
22.一種治療哺乳動物中由LFA-1介導疾病和狀態(tài)的方法，包括向所述哺乳動物施用治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
23.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述疾病或狀態(tài)為關(guān)節(jié)炎，牛皮癬，器官移植排斥，哮喘，和腸道炎性疾病。
23.一種抑制哺乳動物的炎性疾病和狀態(tài)的方法，包括向所述哺乳動物施用治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有下列通式(I)的新化合物，其中Cy，X，Y，L和R
文檔編號A61K31/198GK1592746SQ01821797
公開日2005年3月9日 申請日期2001年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月28日
發(fā)明者丹尼爾·J·伯迪克, 托馬斯·R·加德克, 小詹姆斯·C·馬斯特斯, 戴維·奧雷, 馬克·E·雷諾茲, 馬克·S·斯坦利 申請人:杰南技術(shù)公司