專利名稱：：作為c-kit和pdgfr激酶抑制劑的嘧啶衍生物和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供一類新型化合物、包含這類化合物的藥物組合物以及用該化合物來治療或預(yù)防與激酶活性異?；蚴д{(diào)有關(guān)的疾病或病癥、特別是涉及c-kit、PDGFRa和PDGFRp激酶異常激活的疾病或病癥的方法。
背景技術(shù)：
：蛋白激酶代表一大族蛋白質(zhì)，它們在調(diào)節(jié)各種細胞過程和保持對細胞功能的控制中扮演重要角色。這些激酶包括但不限于:受體酪氨酸激酶例如血小板衍生生長因子受體激酶(PDGFR)、神經(jīng)生長因子受體(trkB)、成纖維細胞生長因子受體(FGFR3、B-RAF);非受體酪氨酸激酶如Abl、融合激酶BCR-Abl、Lck、Bmx和c-src;和絲氨酸/蘇氨酸激酶如c-RAF、sgk、MAP激酶(例如，MKK4、MKK6等)和SAPK2ot、SAPK2"。在許多疾病狀態(tài)中都觀察到激酶活性異常，所述疾病狀態(tài)包括良性和惡性的增殖性疾病以及由免疫和神經(jīng)系統(tǒng)不合適的激活所導(dǎo)致的疾病。本發(fā)明的新型化合物可抑制一種或多種蛋白激酶活性，因此期望其可用于治療激酶相關(guān)疾病。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明一方面提供了式I的化合物及其N-氧化物衍生物、前藥衍生物、被保護的衍生物、單個異構(gòu)體及異構(gòu)體的混合物，以及所述化合物的可藥用鹽和溶劑合物(例如7jc合物)，其中L是含有3個氮原子的五元雜芳基，其選自于NN'NHHN-N》'NR!、R2a和R2b獨立的選自于氫、C3-8雜環(huán)烷基、C,—4烷基、C,—4烷氧基、鹵代-Q-4烷氧基、鹵代-d-4烷基、-NRk)Ru、-OX,Rs;其中X,選自于鍵和C,—4亞烷基；Rs是qm2環(huán)烷基；或者R！和R2a或R！和R2b與R,、R2a或R2b連接的碳原子一起形成苯基(即馬庫什結(jié)構(gòu)的吡啶環(huán)與R,/R^或R,/R2b形成的苯環(huán)稠合形成喹啉基或異壹啉基環(huán)系統(tǒng))；R^和Ru獨立的選自于氫、4烷基、Cw烷氧基、卣代-C,—4烷氧基、卣代-d-4烷基、C3-8雜環(huán)烷基、Cwo雜芳基；或Rn)和Rn與兩者共同連接的氮原子一起形成C3—8雜環(huán)烷基或Cw。雜芳基；R3選自于C6w芳基、Cwo雜芳基、C3—12環(huán)烷基和C3_8雜環(huán)烷基；其中所述的R3的芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基被l至3個獨立的選自于氫、鹵素、氰基、Cw烷基、C!-6烷氧基、鹵代-d-6烷基、鹵代-C^6烷氧基、C6—,。芳基-qm烷基、雜芳基、雜環(huán)基、-X2NR5aR5b、-X2NR5aOR5b、-X2C(0)R5a、-X2S(O)0—2R5a、-X2OX3R5a、-X2R5a、-X2C(0)ORSa、-X2ORSa和-X20X30Rsa的基團取代；其中X2和X3獨立的選自于鍵和C,—4亞烷基；R5a和Rsb獨立的選自于氫、C"烷基、C6—h)芳基、Cm環(huán)烷基、Cn雜芳基和C^2雜環(huán)烷基；9其中所述的R3的芳基、環(huán)烷基、雜芳基或雜環(huán)烷基取代基可任選進一步被l至3個獨立的選自于鹵素、羥基、氰基、Cw烷基、C"烷M、鹵代-d—6烷基、卣代-d—6烷総、—X4OR6、—X4C(0)OR6、—X4C(0)NR6R6和乂4116的基團取代；其中X4選自于鍵和d-4亞烷基；R6選自于氫、d-6烷基和C3.12雜環(huán)烷基。本發(fā)明的第二方面提供了含有式I化合物或其N-氧化物衍生物、單個異構(gòu)體或異構(gòu)體的混合物、或其可藥用鹽與一種或多種合適的賦形劑的混合物的藥物組合物。本發(fā)明的第三方面提供了在動物中治療疾病的方法，其中抑制激酶活性、特別是c-kit、PDGFRa和/或PDGFR卩活性可預(yù)防、抑制或減輕所述疾病的病理學(xué)和/或癥狀，該方法包括向所述動物施用治療有效量的式I化合物或其N-氧化物衍生物、單個異構(gòu)體或異構(gòu)體的混合物、或其可藥用鹽。本發(fā)明的第四方面提供了式I化合物在制備用于在動物中治療疾病的藥物中的用途，其中所述疾病的病理學(xué)和/或癥狀與激酶活性、特別是c-kit、PDGFRa和/或PDGFRp活性有關(guān)。本發(fā)明的第五方面提供了式I化合物及其N-氧化物衍生物、前藥衍生物、被保護的衍生物、單個異構(gòu)體及異構(gòu)體的混合物、及其可藥用鹽的制備方法。發(fā)明詳述定義"烷基"作為一種基團和其它基團例如面代烷基和烷氧基的結(jié)構(gòu)元素，可以是直鏈或支鏈的。d-4烷氧基包括甲氧基、乙氧基等。卣代烷基包括三氟甲基、五氟乙基等。"芳基"是指包含6至10個環(huán)碳原子的單環(huán)或稠合的二環(huán)芳環(huán)結(jié)構(gòu)。例如，本申請中使用的C^。芳基包括但不限于苯基或萘基，優(yōu)選苯基。"亞芳基"是指由芳基衍生的二價基團。"雜芳基"是指含有1至3個獨立的選自于-0-、-N=、-NR畫、-C(O)-、-S-、-8(0)-或-8(0)2-的雜原子的5至15元不飽和環(huán)系統(tǒng)，其中R是氫、C^烷基或氮保護基團。例如，本申請中使用的Cwo雜芳基("Cwo"是指環(huán)系統(tǒng)中存在1至10個碳原子)包括但不限于吡唑基、吡咬基、吲哚基、噻唑基、3-氧代-3，4-二氫-2H-苯并[b[l，41哺溱-6-基、呋喃基、苯并[b]呋喃基、吡咯基、1H-巧1唑基、咪哇并l，2-ap比咬-3-基、嗜、唑基、苯并[d噻唑-6-基、1H-苯并[d[l，2，3]三唑-5-基、會啉基、2,3-二氫苯并吹喃-5-基、1H-丐1咮基、3，4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b吡梵基和2,3-二氬呋喃并[2，3-b]吡梵基、3-氧代-3，4-二氫-2H-苯并[b[l，4P惡嗪-7-基等。"環(huán)烷基"是指包含所示數(shù)目環(huán)碳原子的飽和或部分不飽和的單環(huán)、稠合二環(huán)或多元橋環(huán)結(jié)構(gòu)。例如，C3-,o環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。"雜環(huán)烷基"是指含有1至3個獨立的選自于-O-、-N=、-NR-、-C(O)-、畫S國、-S(0)-或-S(0)2-的雜原子的3至8元飽和或部分不飽和的環(huán)系統(tǒng)，其中R是氫、C,-4烷基或氮保護基團。例如，本文用于描述本發(fā)明化合物的C3-8雜環(huán)烷基包括但不限于嗎啉基、吡咯烷基、氮雜環(huán)庚烷基、哌咬基、異喹啉基、四氫吹喃基、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌、秦基、哌啶酮基、1，4-二氧雜-8-氮雜-螺環(huán)[4.5癸-8-基等。"囟素"優(yōu)選是氯或氟，但也可以是溴或碘。"激酶列表，，是指激酶的清單列表，其包括Abl(人)、Abl(T3151)、JAK2、JAK3、ALK、JNKlal、ALK4、KDR、Aurora-A、Lck、Blk、MAPK1、Bmx、MAPKAP國K2、BRK、MEK1、CaMKII(大鼠)、Met、CDKl/細胞周期蛋白B、p70S6K、CHK2、PAK2、CK1、PDGFRa、CK2、PDK1、c-kit、Pim-2、c-RAF、PKA(h)、CSK、PKBa、cSrc、PKCa、DYRK2、Plk3、EGFR、ROCK-I、Fes、Ron、FGFR3、Ros、Flt3、SAPK2a、Fms、SGK、Fyn、SIK、GSK3P、Syk、IGF-1R、Tie-2、IKKIKTrKB、IR、WNK3、IRAK4、ZAP-70、ITK、AMPK(大鼠)、LIMK1、Rsk2、Axl、LKB1、SAPK2卩、BrSK2、Lyn(h)、iiSAPK3、BTK、MAPKAP-K3、SAPK4、CaMKIV、MARK1、Snk、CDK2/細胞周期蛋白A、MINK、SRPK1、CDK3/細胞周期蛋白E、MKK4(m)、TAK1、CDK5/p25、MKK6(h)、TBK1、CDK6/細胞周期蛋白D3、MLCK、TrkA、CDK7/細胞周期蛋白H/MAT1、MRCK卩、TSSK1、CHK1、MSK1、Yes、CKld、MST2、ZIPK、c-Kit(D816V)、MuSK、DAPK2、NEK2、DDR2、NEK6、DMPK、PAK4、DRAK1、PAR-lBa、EphAl、PDGFRp、EphA2、Pim-l、EphA5、PKBp、EphB2、PKC卩I、EphB4、PKC8、FGFR1、PKCii、FGFR2、PKC9、FGFR4、PKD2、Fgr、PKGlp、Fltl、PRK2、Hck、PYK2、HIPK2、Ret、IKKa、RiPK2、IRR、ROCK-II(人)、JNK2a2、Rse、JNK3、Rskl(h)、PI3Ky、PI3和PI3-Kp。針對這個激酶列表(野生型和/或突變型)對本發(fā)明化合物進行篩選，本發(fā)明化合物對上述列表中至少一種激酶的活性有抑制作用。"治療"是指減輕或緩解疾病和/或其伴隨癥狀的方法。優(yōu)選實施方案c-kit基因編碼受體酪氨酸激酶，c-kit受體的配體被稱為干細胞因子(SCF),是肥大細胞生存所必需的主要生長因子。c-kit受體蛋白酪氨酸激酶的活性在正常細胞中是受調(diào)節(jié)的，c-kit基因產(chǎn)物的正常功能活性對于維持正常的造血作用、黑素生成、配子形成(genetogenesis)和肥大細胞的生長和分化是必需的。在缺乏SCF結(jié)合的狀態(tài)下引起c-kit激酶活性的組成性激活的突變與從肥大細胞增生癥到人類惡性癌癥的多種疾病有關(guān)。在一個實施方案中，參考式I化合物，L選自于<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>Rj、R2a和R2b獨立的選自于氫、C3-8雜環(huán)烷基、Cw烷基、烷氧基、鹵代-C"烷氧基、鹵代-C"烷基、-NR10R、-OX,Rs;其中X!選自于鍵和CL4亞烷基；Rs是Cm環(huán)坑基；或R！和R^或R,和R化與R,和R2a或Ri和R2b連接的碳原子一起形成苯基；Ri。和R"獨立的選自于氫、C,—4烷基、d-4烷IL^、卣代-Cw烷氧基、卣代-C,-4烷基、C3-8雜環(huán)烷基、Cwo雜芳基；或R，o和Rn與兩者共同連接的氮原子一起形成C3-8雜環(huán)烷基或Cwo雜芳基；R3選自于C6-,。芳基和Cwo雜芳基；其中所述的芳基或雜芳基被1至3個獨立的選自于鹵素、氰基、C"烷基、Cw烷氧基、鹵代-C,-6烷基、鹵代-C"烷氧基、C6-1G芳基-Qm烷基、雜芳基、雜環(huán)基、-X2NR5aR5b、X2NR5aOR5b、-X2C(0)R5a、X2S(O)0-2R5a、X2OX3R5a、-X2R5a、-X2C(0)OR5a、一X20Rsa和-X20X30Rsa的基團取代；其中X2和X3獨立的選自于鍵和C,-4亞烷基；Rsa和Rsb獨立的選自于氫、Cw烷基、Cw2環(huán)烷基、Cwo雜芳基和C3.12雜環(huán)烷基；其中所述的R3的芳基、環(huán)烷基、雜芳基或雜環(huán)烷基取代基可任選進一步被l至3個獨立的選自于鹵素、羥基、氰基、d-6烷基、C"烷氧基、鹵代-d—6烷基、卣代畫d—6烷氧基、-X4OR6、-X4C(0)OR6、—X4C(0)NR6R6和X4Ro的基團取代；其中X4選自于鍵和d—4亞烷基；R6選自于氫、d-6烷基和C3—12雜環(huán)烷基。在另一實施方案中，Ri選自于氫、吡咯烷基、嗎啉基、曱氧基、2-氟-乙氧基和曱基；R^和R2b是氫；或者R,和R2a與兩者連接的碳原子一起形成苯基(即馬庫什結(jié)構(gòu)的吡啶環(huán)與R,和R2a形成的苯環(huán)稠合形成異壹啉基環(huán)系統(tǒng))。在另一實施方案中，Rj選自被選自于二氟甲氧基、羥甲基、三氟甲氧基、甲基磺?；?、曱氧基和乙氧基的基團取代的苯基；和2，3-二氫苯并呋喃-5-基。另一實施方案中的化合物選自于(5-[5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-[1，2，4三唑-3-基]-2-甲基-苯基}-(4-吡淀-3-基-嘧梵-2-基)-胺；N-(2-曱基-5-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-lH-l，2,4-三唑-3-基)苯基)-4-(吡咬-3-基)嘧咬-2-胺；N-(2-曱基-5-(5-(3-(甲基磺?；?苯基)-lH-l，2，4-三唑-3-基)苯基)-4-(吡咬-3-基)嘧啶-2-胺；N-(5-(5-(3-甲氧基苯基)-lH-l，2，4-三唑-3-基)-2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧淀-2-胺；N-(5-(5-(3-乙氧基苯基)-111-1，2，4-三唑-3-基)-2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧吱-2-胺；N-(5-(5-(2，3-二氫苯并呋喃-5-基)-lH-l，2，4-三哇-3-基)-2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺；N-(5-(5-(4-(二氟曱M)苯基)-lH-l，2，4-三唑-3-基)-2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧咬-2-胺；和(3-(3-(4曙曱基-3-(4-(吡咬-3-基)嘧啶-2-基M)苯基)-lH-l，2，4-三唑-5-基)苯基)甲醇。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了用于治療由c-kit和PDGFRa/(3激酶受體調(diào)節(jié)的疾病或病癥的方法，包括施用式I化合物或其可藥用鹽或其藥物組合物。可以用本發(fā)明化合物和組合物調(diào)節(jié)的由c-kit和/或PDGFRa/(3介導(dǎo)的疾病或病癥的實例包括^f旦不限于腫瘤性病癥、過敏性病癥、炎性病癥、自身免疫性病癥、移才直物抗宿主疾病、癡原蟲相關(guān)疾病、與月巴大細胞有關(guān)的疾病、代謝綜合征、CNS相關(guān)病癥、神經(jīng)變性病癥、疼痛情況、物質(zhì)濫用、朊病毒病、癌癥、心臟病、纖維變性疾病、特發(fā)性動脈壓過高(IPAH)、原發(fā)性肺動脈高壓(PPH)?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的與肥大細胞有關(guān)的疾病的實例包括但不限于痤瘡和痤瘡丙酸桿菌、進行性骨化性纖維發(fā)育不良(FOP)、炎癥和由于接觸化學(xué)或生物武器(如炭疽和硫-芥子氣)引起的組織破壞、嚢性纖維化病；腎病、炎性肌肉病癥、HIV、II型糖尿病、腦局部缺血、肥大細胞增多癥、藥物依賴和戒斷癥狀、CNS病癥、預(yù)防和最小化脫發(fā)、細菌感染、間質(zhì)性膀胱炎、炎性腸道綜合征(IBS)、炎性腸病(IBD)、腫瘤血管生成、自身免疫性疾病、炎性疾病、多發(fā)性硬化(MS)、過敏性病癥(包括哞喘)和骨損失?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的腫瘤性病癥的實例包括但不限于肥大細胞增多癥、胃腸道間質(zhì)瘤、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、急性髓細胞性白血病、急性淋巴細胞性白血病、脊M育不良綜合征、慢性髓細胞性白血病、結(jié)腸直腸癌、胃癌、睪丸癌、成/1^7貢細胞瘤或星形細胞瘤?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的過敏性病癥的實例包括但不限于哞喘、過敏性鼻炎、過敏性鼻竇炎、過敏性綜合征、蕁麻滲、血管性水腫、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性接觸性皮炎、結(jié)節(jié)性紅斑、多形性紅斑、皮膚壞死性靜脈炎(cutaneousnecrotizingvenulitis)、昆蟲叮咬皮膚炎癥或吸血性寄生蟲感染?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的炎性病癥的實例包括但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)膜炎、類風(fēng)濕性脊推炎、骨關(guān)節(jié)炎或痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎?！鰁r"Jfl太*日日/kA輪知4a厶輪.:A力w^ik冬^,hi癥iW^:/fe,1白.4/日不限于多發(fā)性硬化、牛皮癬、腸的炎性疾病、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)炎、局部或全身性硬皮病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡、皮力夫紅斑、皮肌炎、多發(fā)性肌炎、斯耶格倫氏綜合征、結(jié)節(jié)性全動脈炎、自身免疫性腸病或增生性腎小球腎炎。可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的移植物抗宿主疾病的實例包括但不限于器官移植，如腎移植、胰腺移植、肝移植、心臟移植、肺移植或骨髓移植的移植物排斥?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的代謝綜合征的實例包括但不限于I型糖尿病、II型糖尿病或肥胖?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的CNS相關(guān)病癥的實例包括但不限于抑郁、心境惡劣障礙、循環(huán)型情感障礙、厭食癥、易餓病、月經(jīng)前期綜合征、絕經(jīng)后綜合征、智力遲緩(mentalslowing)、集中力缺失、悲觀煩惱、精神激動、自嘲和性欲降低、焦慮癥、精神病學(xué)病癥或精神分裂癥?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的抑郁情況的實例包括但不限于雙相性抑郁、嚴(yán)重或憂郁性抑郁、非典型抑郁、難治性抑郁或季節(jié)性抑郁?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的焦慮癥的實例包括但不限于與換氣過度和心律失常有關(guān)的焦慮、恐怖癥、強迫癥、創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙、急性應(yīng)激障礙和泛化性焦慮癥?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的精神病學(xué)病癥15的實例包括但不限于恐慌發(fā)作，包括精神病、妄想性障礙、轉(zhuǎn)換障礙、恐怖癥、躁狂癥、譫妄、分離性發(fā)作(dissociativeepisode),包括分離性遺忘癥、分離性漫游和分離性自殺行為、自我忽視、暴力性或攻擊性行為、創(chuàng)傷、邊緣型人格、和急性精神病如精神分裂癥，包括偏執(zhí)型精神分裂癥、錯亂型精神分裂癥、緊張型精神分裂癥和未分化型精神分裂癥?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的神經(jīng)變性病癥的實例包括但不限于阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、朊病毒病、運動神經(jīng)元病(MND)或肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的疼痛情況的實例包括但不限于急性痛、術(shù)后痛、'f曼性痛、傷害性疼痛、癌癥痛、神經(jīng)性疼痛或心理性疼痛綜合征?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的物質(zhì)使用障礙的實例包括但不限于藥物成癮、藥物濫用、藥物習(xí)慣性、藥物依賴性、戒斷綜合征和超劑量用藥?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的癌癥的實例包括但不限于黑素瘤、胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)、結(jié)腸癌、小細胞肺癌和其它實體腫瘤?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的纖維變性疾病的實例包括但不限于丙型肝炎(HCV)、肝纖維化、非酒精性脂肪肝(NASH)、肝硬化、硬皮病、肺纖維化或骨髓纖維化。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了用于治療由c-kit激酶受體和/或PDGFRa/卩調(diào)節(jié)的疾病或病癥的方法，包括施用式I4匕合物或其可藥用鹽或其藥物組合物。藥理和用途本發(fā)明的化合物可調(diào)節(jié)激酶的活性并因此可用于治療其中激酶與疾病的病理和/或癥狀有關(guān)的疾病或病癥。本文所述化合物和組合物可以抑制的PDGFRa、PDGFR(3、Lyn、MAPK14(p38d)、ARG、BCR-Abl、BRK、EphB、Fms、Fyn、KDR、LCK、b-Raf、c-Raf、SAPK2、Src、Tie2和TrkB激酶。一個特定子集的組織成分，所述調(diào)節(jié)因子的大部分具有纟艮強的促炎活性。由于MC幾乎分布在全身各處，因此活化的成分分泌調(diào)節(jié)因子過多時可導(dǎo)致多種器官衰竭。因此，肥大細胞在許多疾病中起重要作用。本發(fā)明涉及一種治療與肥大細胞有關(guān)的疾病的方法，其包括向需要這種治療的人類施用能夠耗竭肥大細胞的化合物或抑制肥大細胞脫粒的化合物。這種化合物可選自于c-kit抑制劑，更具體而言，選自無毒而具有效力的選擇性c-kit抑制劑。優(yōu)選所述抑制劑在IL-3存在下，在細胞培養(yǎng)物中不能促進IL-3依賴性細胞的死亡。與肥大細胞有關(guān)的疾病包括但不限于痤瘡和痤瘡丙酸桿菌(痤瘡包括所有形式的慢性皮膚炎癥，包括由痤瘡丙酸桿菌誘發(fā)的炎癥)；被稱為進行性骨化性纖維發(fā)育不良(FOP)的一種非常罕見的可導(dǎo)致殘疾的遺傳性結(jié)締組織病癥；炎癥的有害作用和由于接觸化學(xué)或生物武器(如炭疽和硫-芥子氣)引起的組織破壞；嚢性纖維化病(一種肺部、消化系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)的遺傳疾病)；腎病例如急性腎病綜合征、腎小球腎炎、腎淀粉樣變性、腎間質(zhì)纖維化(各種腎病中導(dǎo)致晚期腎病的最終共同路徑)；炎性肌肉病癥，包括肌炎和肌肉萎縮；HIV(例如耗竭HIV感染的肥大細胞可以作為治療HIV感染及相關(guān)疾病的新途徑)；治療II型糖尿病、肥胖癥及相關(guān)疾病(肥大細胞調(diào)節(jié)導(dǎo)致動脈粥樣硬化進展的多種過程，包括高血糖、高膽固醇血癥、高血壓、內(nèi)皮功能障礙、胰島素耐受和血管重構(gòu))；腦局部缺血；肥大細胞增多癥(一組高度異質(zhì)性病癥，其特征為不同組織中肥大細胞的異常累積，主要發(fā)生在皮膚和骨髓中，但也可發(fā)生在脾臟、肝臟、淋巴結(jié)和胃腸道中)；藥物依賴和戒斷癥狀(特別是藥物成癮、藥物濫用、藥物習(xí)慣性、藥物依賴、戒斷綜合征和超劑量用藥)；CNS病癥(特別是抑郁癥、精神分裂癥、焦慮癥、偏頭痛、記憶力喪失、疼痛和神經(jīng)變性疾病)；促進毛發(fā)生長(包括預(yù)防和最小化脫發(fā))；細菌感染(特別是由表達FimH的細菌引起的感染)；腸17易激綜合征(IBS)和腸易激疾病(IBD);間質(zhì)性膀胱炎(由組織損傷、特別是膀胱內(nèi)膜細胞間隙中的組織損傷導(dǎo)致的膀胱壁慢性炎癥)；炎性腸病(通常適用于四種腸病，即克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、未定型結(jié)腸炎和感染性結(jié)腸炎)；腫瘤血管生成；自身免疫性疾病(特別是多發(fā)性硬化癥、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和多關(guān)節(jié)炎、硬皮病、紅斑狼疳、皮肌炎、天庖瘡、多發(fā)性肌炎、血管炎和移植物抗宿主疾病)；炎性疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA);多發(fā)性硬化癥(MS);過敏性病癥(特別是哞喘、過敏性鼻炎、過敏性鼻竇炎、過敏綜合征、蕁麻滲、血管性水腫、特應(yīng)性皮炎、過敏性接觸性皮炎、結(jié)節(jié)性紅斑、多形紅斑、皮膚壞死性靜脈炎和昆蟲叮咬導(dǎo)致的皮膚發(fā)炎、支氣管哮喘)；鼻息肉；和骨損失。PDGF(血小板衍生生長因子)是一種普遍存在的生長因子，其在正常生長中起重要作用，并且如在癌生成和血管平滑肌細胞的疾病例如動脈粥樣硬化和血栓形成中看到的那樣，其在病理學(xué)細胞增殖中也起重要作用。本發(fā)明的化合物可抑制PDGF受體(PDGFR)活性，并且因此適于治療肺瘤疾病，如神經(jīng)月交質(zhì)瘤、肉瘤、前列腺腫瘤、以及結(jié)腸、乳房和印巢的腫瘤；嗜酸粒細胞增多癥；纖維化例如肺纖維化、肝纖維化和硬皮病；肺高血壓；和心血管疾病。Ras-Raf-MEK-ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)對生長信號的細胞響應(yīng)。在約15%的人類癌癥中，Ras突變成致癌形式。Raf族屬于絲氨^/蘇氨酸蛋白激酶并且包括三個成員——A-Raf、B-Raf和c-Raf(或Raf-l)。Raf作為藥物靶點的研究集中在Raf作為Ras的下游效應(yīng)蛋白的關(guān)系上。但是最近的數(shù)據(jù)表明B-Raf在不需要活化的Ras等位基因的某些腫瘤的形成中有重要作用(Nature417:949-954,2002年7月1日)。具體而言，在《艮大部分的惡性黑素瘤中已經(jīng)檢測到B-Raf突變?，F(xiàn)有的黑素瘤的醫(yī)學(xué)治療的效果有限，對于晚期黑素瘤而言尤其如此。本發(fā)明的化合物還可抑制一些涉及b-Raf激酶的細胞過程，從而提供治療人類癌癥，尤其是黑素瘤的治療新4幾遇。18本發(fā)明的化合物還可抑制涉及c-Raf激酶的細胞過程。c-Raf被Ras腫瘤基因活化，在多種人類癌癥中都發(fā)生突變。因此抑制c-Raf激酶活性可提供預(yù)防ras介導(dǎo)的腫瘤生長的方法(Campbell，S.L.,Oncogene,17，1395(1998》。本發(fā)明的化合物還可用于治療非惡性增殖性病癥，如動脈粥樣硬化、血栓形成、牛皮癬、硬皮病和纖維化；用于保護干細胞，例如對抗化療劑如5-氟尿嘧咬的血液毒性作用；并且還可用于治療哮喘。本發(fā)明的化合物可在由移植例如同種異體移植導(dǎo)致的病癥尤其是組織排斥的治療中表現(xiàn)出有用的作用，如閉塞性細支氣管炎(OB)，即同種異體肺移植物的慢性排斥。與未患OB的患者相反，那些患有OB的患者常常表現(xiàn)出支氣管肺泡灌洗液中的PDGF濃度升高。本發(fā)明的化合物還可有效對抗與血管平滑肌細胞遷移和增殖有關(guān)的疾病(在這些疾病中，PDGF和PDGFR也常常起一定作用)，如再狹窄和動脈肌細胞增殖或遷移的這些作用及其后果，并且還可以通過研究其對體內(nèi)機械損傷后血管內(nèi)膜增厚的作用來證明這一點。神經(jīng)營養(yǎng)因子受體的trk族(trkA、trkB、trkC)可促進神經(jīng)元組織和非神經(jīng)元組織的存活、生長和分化。trkB蛋白表達于小腸和結(jié)腸的神經(jīng)內(nèi)分泌型細胞中、胰腺的a細胞中、淋巴結(jié)和脾臟的單核細胞和巨噬細胞中、表皮的顆粒層中(ShibayamaandKoizumi,1996)。TrkB蛋白的表達與Wilms腫瘤和神經(jīng)母細胞瘤的不良*有關(guān)。此外，trkB在前列腺癌細胞中表達，而在正常前列腺細胞中沒有表達。Trk受體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑下游包括通過Shc、活化的Ras、ERK-1和ERK-2基因的MAPK活化級聯(lián)和PLC-轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(Sugimoto等，2001)。激酶c-Src傳遞許多受體的致癌信號。例如，EGFR或HER2/neu在肺瘤中的過表達導(dǎo)致了c-src的組成活化，這是惡性細胞的特征，正常細胞并不具有該特征。另一方面，c-src表達不足的小鼠表現(xiàn)出一種骨硬化表型，表明c-six在破骨細胞功能中起關(guān)鍵作用并且可能與相關(guān)病癥有關(guān)。19Tec族激酶Bmx是一種非受體蛋白酪氨酸激酶，控制哺乳動物上皮癌細月包增殖。Cj體頭風(fēng)？T堆翊月巴王"^lsj丁叉仵J"，—王1^夂仵貝T^節(jié)作用升對秋賞細胞增殖發(fā)揮抑制作用。致死性骨發(fā)育不全是由成纖維細胞生長因子受體3的不同突變造成的。一種TDIIFGFR3突變具有激活轉(zhuǎn)錄因子Statl的組成酪氨酸激酶活性，導(dǎo)致細胞周期抑制劑的表達、生長停滯和骨發(fā)育異常(Su等，Nature1997，386:288-292)。在多發(fā)性骨髓瘤型癌癥中也常常表達FGFR3。FGFR3活性的抑制劑可用于治療T細胞介導(dǎo)的炎性疾病或自身免疫疾病，包括但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、II型膠原性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥(MS)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、牛皮癬、青少年發(fā)病型糖尿病、干燥癥(Sjogren'sdisease)、曱狀腺病、結(jié)節(jié)病、自身免疫性葡萄膜炎、炎性腸病(克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎)、乳糜瀉和重癥肌無力。血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)的激酶(SGK)活性與紊亂的離子通道活性特別是鈉和/或鉀通道的活性有關(guān)，因此本發(fā)明的化合物可用于治療高血壓。Lin等(1997)J.Clin.Invest.100，8:2072-2078和P.Lin(1998)PNAS95,8829-8834已經(jīng)證實，在腺病毒感染期間或者在乳腺腫瘤和黑素瘤異體移才ij莫型中注射Tie-2(Tek)胞外域時，肺瘤生長和血管生成被抑制，同時肺部轉(zhuǎn)移減少。Tie-2抑制劑可用于發(fā)生了不適當(dāng)?shù)男卵馨l(fā)生的情況(例如在糖尿病性視網(wǎng)膜病、慢性炎癥、牛皮褲、卡波濟瘤、黃斑變性引起的慢性新血管發(fā)生、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、嬰兒血管瘤和癌癥)。Lck在T-細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起作用。缺乏Lck基因的小鼠形成胸腺細胞的能力差。Lck作為T-細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的正性活化劑的功能表明Lck抑制劑可以用于治療自身免疫性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。已證明JNK與其它MAPK在介導(dǎo)對癌癥、凝血酶誘導(dǎo)的血小板凝集、免疫缺陷病癥、自身免疫病、細胞死亡、過敏、骨質(zhì)疏松和心臟病的細胞應(yīng)答中發(fā)揮一定作用。與JNK路徑激活有關(guān)的治療目標(biāo)包括慢性粒細胞白血病(CML)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、嗜喘、骨關(guān)節(jié)炎、局部缺血、癌癥和神經(jīng)變性疾病。鑒于JNK活化與肝病或肝臟局部缺血發(fā)作密切相關(guān)，本發(fā)明的化合物還可用于治療各種肝臟病癥。已報道JNK在心血管疾病例如心^*塞或充血性心力衰竭中發(fā)揮一定作用，已經(jīng)證實JNK介導(dǎo)針對各種形式心臟壓力所產(chǎn)生的肥大應(yīng)答。已證實JNK級聯(lián)在T細胞活化包括IL-2啟動子活化中也發(fā)揮一定作用。因此JNK抑制劑可能在改變病理性免疫應(yīng)答中具有治療價值。還證實JNK活化與各種癌癥有關(guān)，表明JNK抑制劑在癌癥治療中有潛在的用途。例如組成激活的JNK與HTLV-1介導(dǎo)的腫瘤發(fā)生有關(guān)(Oncogene13:135-42(1996))。JNK可能與卡波濟瘤(KS)有關(guān)。與KS增殖有關(guān)的其它細胞因子例如血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、IL-6和TNFa的增殖作用也可能是JNK介導(dǎo)的。此外，在p210BCR-ABL轉(zhuǎn)化的細胞中調(diào)節(jié)c-jun基因?qū)?yīng)于JNK活性，表明JNK抑制劑在治療慢性粒細胞白血病(CML)中可發(fā)揮一定作用(Blood92:2450-60(1998))。據(jù)信某些異常增殖性病癥與raf表達有關(guān)，因此據(jù)信這些病癥對于抑制raf表達會產(chǎn)生響應(yīng)。Raf蛋白表達水平過高還與細胞轉(zhuǎn)化和細胞異常增殖有關(guān)。據(jù)信這些異常增殖性病癥也會對抑制raf表達產(chǎn)生響應(yīng)。例如，據(jù)信c-raf蛋白的表達與細胞異常增殖有關(guān)，因為已報道60%的肺癌細胞系表達的c-rafmRNA水平和蛋白水平異常增高。異常增殖性病癥的其它實例有高增殖性病癥例如癌癥、腫瘤、增生病、肺纖維化、血管生成、牛皮痺、動脈粥樣硬化、血管平滑肌細胞增殖例如血管成形術(shù)后的狹窄和再狹窄。其中包含raf的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑與以T細胞增殖(T細胞活化和生長)為特征的炎性病癥有關(guān)，這些病癥有例如組織移植物排斥、內(nèi)毒素休克、腎小^求腎炎。應(yīng)激活化蛋白激酶(SAPK)是蛋白激酶的一個家族，它代表了導(dǎo)致c-Jun轉(zhuǎn)錄因子活化和c-Jun所調(diào)控基因的表達的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑的倒數(shù)第二步。具體而言，c-Jun涉及編碼參與由于基因毒性損傷而受損的DNA修復(fù)的蛋白的基因轉(zhuǎn)錄。所以，在細胞中抑制SAPK活性的藥物能夠阻止DNA修復(fù)并使細胞對導(dǎo)致DNA損傷或抑制DNA合成以及誘導(dǎo)細胞凋亡或抑制細胞增殖的藥物敏感。細胞分裂素-活化蛋白激酶(MAPK)是活化轉(zhuǎn)錄因子、翻譯因子和對許多細胞外信號發(fā)生響應(yīng)的其它目標(biāo)分子的保守信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑的成員。MAPK通過細胞分裂素-活化蛋白激酶激酶(MKK)在具有Thr-X-Tyr序列的雙重磷酸化基序上磷酸化而被活化。在高級真核生物中，已經(jīng)證實MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的生理學(xué)作用與一些細胞事件如增殖、腫瘤生成、t艮和分化有關(guān)。因此，調(diào)節(jié)通過這些途徑(特別是通過MKK4和MKK6)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力使得可以開發(fā)出用于與MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的人類疾病如炎性疾病、自身免疫性疾病和癌癥的治療和預(yù)防性療法。人核蛋白體S6蛋白激酶族由至少8個成員(RSK1、RSK2、RSK3、RSK4、MSK1、MSK2、p70S6K和p70S6Kb)組成。核蛋白體蛋白S6蛋白激酶發(fā)揮重要的多效性功能，其中一種關(guān)鍵作用是在蛋白生物合成期間調(diào)節(jié)mRNA翻譯(Eur.J.Biochem2000November;267(21):6321-30,ExpCellRes.Nov.25，1999;253(l):100-9，MolCellEndocrinol.May25,1999;151(1-2):65-77)。已經(jīng)表明在細胞活力的調(diào)節(jié)(Immunol.CellBiol.2000August;78(4):447-51)和細胞生長(Prog.NucleicAcidRes.Mol.Biol"2000;65:101-27)中涉及p70S6對S6核蛋白體蛋白的磷酸化，因此，其在腫瘤轉(zhuǎn)移、免疫應(yīng)答和組織修復(fù)以及其它一些疾病情況中可能很重要。SAPK's(也被稱為"junN-末端激酶"或"JNK's")是蛋白激酶的一個家族，它代表了導(dǎo)致c-Jun轉(zhuǎn)錄因子活化和c-Jun所調(diào)控基因的表達的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑的倒數(shù)第二步。具體而言，c-Jun涉及編碼參與由于基因毒性損傷而受損的DNA修復(fù)的蛋白的基因轉(zhuǎn)錄。在細胞中抑制SAPK活性的藥物能夠阻止DNA修復(fù)并使細胞對通過誘導(dǎo)DNA損傷而起作用的癌癥治療藥物變得敏感。BTK在自身免疫和/或炎性疾病例如系統(tǒng)性紅斑3良瘉(SLE)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多血管炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、重癥肌無力和哮喘中發(fā)揮一定作用。由于BTK在B細胞活化中的作用，BTK抑制劑可用作B細胞介導(dǎo)的病理活動例如自身抗體生成的抑制劑，可用于治療B細胞淋巴瘤和白血病。CHK2是絲氨^/蘇氨酸蛋白激酶檢驗點激酶家族的成員，與DNA損傷監(jiān)測機制有關(guān)，例如由環(huán)境中致突變原和內(nèi)源性活性氧導(dǎo)致的DNA損傷。所以CHK2可作為腫瘤抑制子，可作為癌癥治療的靶點。CSK影響癌細胞特別是結(jié)腸癌細胞的轉(zhuǎn)移潛力Fes是一種非受體蛋白酪氨酸激酶，與各種細胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑有關(guān)，也與骨髓細胞分化有關(guān)。Fes也是骨髓粒細胞的分化機制的關(guān)鍵組成成分。Flt3受體酪氨酸激酶活性與白血病和骨髓增生異常綜合征有關(guān)。在約25%的AML中，在白血病細胞表面上表達一種組成活性形式的自身礴酸化的(p)FLT3酪氨酸激酶。p-Flt3活性使白血病細胞獲得生長和存活優(yōu)勢。白血病細胞表達p-Flt3激酶活性的急性白血病患者總體臨床后果較差。抑制p-Flt3激酶活性可裔導(dǎo)白血病細胞凋亡(程序性細胞死亡)。IKKa和IKK(5(l&2)抑制劑可治療疾病，所述疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植物排斥、炎性腸病、骨關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、動脈粥樣硬化、牛皮褲、多發(fā)性硬化癥、中風(fēng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘉、阿爾茨海默病、腦局部缺血、創(chuàng)傷性腦損傷、帕金森病、肌萎縮側(cè)索硬化癥、蛛網(wǎng)膜下出血或與腦內(nèi)或中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)炎性介質(zhì)生成過多有關(guān)的疾病或病癥。Met與多數(shù)主要類型的人類癌癥有關(guān)，其表達通常與預(yù)后不良和轉(zhuǎn)移有關(guān)。Met抑制劑可治療疾病，所述疾病包括肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚黑素瘤或眼內(nèi)黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區(qū)域癌癥、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、婦科腫瘤(例如子宮肉瘤、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、陰道癌、陰戶癌)、霍奇金病、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)的癌癥(例如甲狀腺癌、副曱狀腺癌或腎上腺癌)、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、兒童實體瘤、淋巴細胞、淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌(例如腎細胞癌、腎盂癌)、兒童惡性腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)肺瘤(例如原發(fā)性CNS淋巴瘤、樞推肺瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤或垂體腺瘤)、血癌例如急性髓細胞性白血病、慢性髓細胞性白血病等、巴雷特食管(惡變前綜合征)、腫瘤性皮膚病、牛皮瓣、蕈樣真菌病、良性前列腺增生、糖尿病相關(guān)疾病例如糖尿病性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜缺血、視網(wǎng)膜新血管發(fā)生、肝硬化、心血管疾病例如動脈粥樣硬化、免疫疾病例如自身免疫病和腎病。優(yōu)選所述疾病是癌癥例如急性髓細胞性白血病和結(jié)腸直腸癌。Nima相關(guān)激酶2(Nek2)是一種細胞周期調(diào)節(jié)的蛋白激酶，在減數(shù)分裂開始時活性最高，位于中心體上。功能研究表明Nek2參與調(diào)節(jié)中心體分離和紡錘體形成。多種人類腫瘤衍生的細胞系中Nek2蛋白水平升高2至5倍，包括宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌，特別是乳腺癌。p70S6K介導(dǎo)的疾病或病癥包括但不限于增殖性病癥例如癌癥和結(jié)節(jié)性硬化癥。根據(jù)前述，本發(fā)明進一步提供一種在有需要的個體中預(yù)防或治療上述任何疾病或病癥的方法，該方法包括給所述個體施用治療有效量(參見下文"給藥和藥物組合物")的式I化合物或其可藥用鹽。對于任何上面的用途而言，所需劑量將才艮據(jù)給藥方式、所治療的特定病癥和所期望的效果而變化。給藥和藥物組合物一般而言，本發(fā)明的化合物通常通過本領(lǐng)域已知的任何常規(guī)和可接受的方式、單獨地或與一種或多種治療藥物組合來以治療有效量進行給藥。治療有效量可隨疾病的嚴(yán)重程度、個體的年齡和相對健康狀況、所用化合物的效力和其它因素而在寬范圍內(nèi)進行變化。一般以每日每公斤體重約0,03至2.5mg的日劑量系統(tǒng)給藥通?？色@得滿意結(jié)果。對于大型哺乳動物例如人而言，每日推薦劑量為約0.5mg至約100mg，例如方便地以每日最多4次的分次劑量或以緩釋劑型進行給藥?？诜o藥的適宜單位劑型包舍大約1至50mg活性成分。本發(fā)明化合物可通過任何常規(guī)途徑以藥物組合物的形式給藥，特別是可以被經(jīng)腸給藥，例如，口服給藥，例如以片劑或膠嚢劑的形式進行給藥；或胃腸外給藥，例如，以可注射的溶液或混懸液的形式進行給藥；局部給藥，例如，以洗劑、凝膠劑、軟骨劑或霜劑的形式進行給藥；或以鼻腔制劑吸入給藥或以栓劑的形式進行給藥。包含游離形式或可藥用鹽形式的本發(fā)明化合物和至少一種可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物可按照常規(guī)方式，通過混合、制?；虬路椒▉磉M行制備。例如，口服組合物可以是片劑或明嚢，它含有活性組分和a)稀釋劑，例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤滑劑，例如，二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂鹽或釣鹽和/或聚乙二醇；對于片劑來說還可以含有c)粘合劑，例如，硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西黃蓍膠、曱基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要還可以含有d)崩解劑，例如，淀粉、瓊脂、藻酸或其鈉鹽，或泡騰混合物；和/或e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑?？勺⑸涞慕M合物可以是等滲水溶液或混懸液、并且栓劑可以由脂肪乳劑或混懸液來進行制備。組合物可以被滅菌和/或含有輔助劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑或乳化劑、溶解促進劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。另外，它們還可以含有其它有治療價值的物質(zhì)。適宜的經(jīng)皮用制劑包含有效量本發(fā)明的化合物和載體。載體包括有助于通過宿主皮膚的可吸收的藥理學(xué)上可接受的溶劑。例如，經(jīng)皮吸收裝置是一種含有背襯膜、含有所述化合物并任選地含有載體和使所述化合物在較長的一段時間內(nèi)以受控和預(yù)定速度釋方文到宿主皮膚的控速屏障的貯藥庫、以及確保所述裝置附著在皮膚上的部件的繃帶形式。也可以使用基質(zhì)經(jīng)皮制劑。適用于局部用于例如皮膚和眼睛的制劑優(yōu)選為本領(lǐng)域眾所周知的水溶液、軟膏劑、霜劑或凝膠。所述制劑可包含增溶劑、穩(wěn)定劑、張力增強劑、緩沖劑和防腐劑。本發(fā)明化合物可以與一種或多種治療劑一起以治療有效量進行給藥(藥物組合形式)。例如可以與其它津喘治療劑例如類固醇和白三烯拮抗劑一起獲得協(xié)同作用。例如，可以與其它免疫調(diào)節(jié)或抗炎物質(zhì)一起產(chǎn)生協(xié)同作用，例如，當(dāng)與環(huán)孢菌素、雷帕霉素或子嚢霉素或其免疫抑制劑類似物，例如環(huán)孢菌素A(CsA)、環(huán)孢菌素G、FK-506、雷帕霉素或相當(dāng)?shù)幕衔?、支氣管擴張劑、皮質(zhì)類固醇、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、曱氨蝶呤、布喹那、來氟米特、25咪唑立賓、麥考酚酸、麥考酚酸莫酯、15-脫氧精胍菌素、免疫抑制劑抗體，尤其是白細胞受體的單克隆抗體例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、B7、CD45、CD58或它們的配體，或其它免疫調(diào)節(jié)化合物，如CTLA41g聯(lián)用時。當(dāng)本發(fā)明化合物與其它治療劑一同給藥時，共同給藥的化合物的劑量當(dāng)然將根據(jù)一起使用的藥物類型、所使用的特定藥物、被治療的情況等來進行調(diào)節(jié)。本發(fā)明也提供了一種藥物組合形式，例如藥盒，其包含a)游離形式或可藥用鹽形式的笫一種藥物，它是本文所公開的本發(fā)明化合物，和b)至少一種聯(lián)用的藥物。該藥盒可包含用于指導(dǎo)給藥的使用說明。本文使用的術(shù)語"共同給藥"或"聯(lián)合給藥，，等意在包括將所選擇的治療劑給藥于單個患者，意在包括其中活性劑不一定經(jīng)相同給藥途徑或不同時給藥的治療方案。本文使用的術(shù)語"藥物組合形式"是指將多于一種活性成分混合或組合所得的產(chǎn)物，包括活性成分的固定組合和非固定組合。術(shù)語"固定組合"是指活性成分例如式I化合物和聯(lián)用藥物同時以一個實體或劑量的形式給藥于患者。術(shù)語"非固定組合，，是指活性成分例如式I化合物和聯(lián)用藥物作為分開的實體同時、并行或沒有固定時間限制的先后給藥于患者，其中這種給藥方式在患者體內(nèi)提供了兩種化合物的治療有效水平。后者還適用于雞尾酒療法，例如給藥三種或多種活性成分。制備本發(fā)明化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的制備方法。在所述反應(yīng)中，可能有必要保護在終產(chǎn)物中所需的反應(yīng)性官能團，例如羥基、氨基、亞氨基、巰基或羧基，以避免它們不必要地參與反應(yīng)?？砂凑諛?biāo)準(zhǔn)操作使用常規(guī)的保護基團，例如，參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts，"有機化學(xué)中的保護基團(ProtectiveGroupsinOrganicChemistry)",JohnWiley和Sons,1991?？赏ㄟ^以下反應(yīng)方案I制備式I化合物反應(yīng)方案I其中R,、R2a、R2b和R3如
發(fā)明內(nèi)容所述且L是1H-l，2，4-三唑-5-基(如反應(yīng)方案中所示)。(反應(yīng)方案I顯示了其中L是1H-1，2，4-三唑的式I化合物的形成過程，但其并不限制本發(fā)明的范圍)。可以在適當(dāng)溶劑(例如NMP、DMF、nBuOH等)和適當(dāng)?shù)膲A(例如碳酸鉀等)的存在下，使式2化合物與式3化合物反應(yīng)制備式I化合物。反應(yīng)溫度范圍為約0°C至約180°C，可在最多24小時內(nèi)完成。式I化合物合成的詳細實例見以下實施例。制備本發(fā)明化合物的其它步驟可通過將游離堿形式的化合物與可藥用的無機或有機酸反應(yīng)來將本發(fā)明化合物制備為可藥用酸加成鹽的形式?；蛘撸赏ㄟ^將游離酸形式的化合物與可藥用的無機或有機堿反應(yīng)來制備本發(fā)明化合物的可藥用的堿加成鹽?；蛘撸}形式的本發(fā)明化合物可利用起始材料或中間體的鹽來進行制備。游離酸或游離堿形式的本發(fā)明化合物可分別從相應(yīng)的堿加成鹽或酸加成鹽制備。例如可通過用合適的堿(例如，氬氧化銨溶液、氫氧化鈉等)進行處理來將酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離堿?？赏ㄟ^用合適的酸(例如，鹽酸等)進行處理來將堿加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離酸。27非氧化形式的本發(fā)明化合物可通過在適宜的惰性有機溶劑(例如乙腈、乙醇、二喁烷水溶液等)中，于0至80。C下，用還原劑(例如，硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氬化鋰、硼氬化鈉、三氯化磷、三溴化磷等)處理本發(fā)明化合物的N-氧化物而制備。本發(fā)明化合物的前藥衍生物可用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法(例J(口，詳十青見Saulnier等人(1994)，BioorganicandMedicinalChemistryLetters,笫4巻，第1985頁)來進行制備。例如，合適的前藥可通過將未衍生化的本發(fā)明化合物與適宜的氨基甲?；噭?例如，1，l-酰氧基烷基氨基碳酰氯、對硝基苯基碳酸酯等)反應(yīng)來制備。行制備。用于產(chǎn)生保護基團和除去保護基團的技術(shù)的詳細描述可見于T.W.Greene,"有才幾化學(xué)中的保護基團(ProtectingGroupsinOrganicChemistry)",第3版，JohnWiley和Sons,Inc.,1999。在本發(fā)明化合物的制備過程中，本發(fā)明化合物可方便地被制備為或形成溶劑化物(例如水合物)。本發(fā)明化合物的水合物可通過采用有機溶劑如二"惡英、四氫呋喃或甲醇，在水/有機溶劑混合物中重結(jié)晶來方便地制備。應(yīng)以形成一對非對映異構(gòu)體化合物、分離非對映異構(gòu)體并回收光學(xué)純的對映異構(gòu)體來制備其單個的立體異構(gòu)體。盡管對映異構(gòu)體的拆分可利用本發(fā)明化合物的共價非對映異構(gòu)體衍生物來進行，但優(yōu)選可解離的復(fù)合物(例如，結(jié)晶的非對映異構(gòu)體鹽)。非對映異構(gòu)體具有不同的物理性質(zhì)(例如，熔點、沸點、溶解度、反應(yīng)性等)并且可以很容易地利用這些差異進行分離。非對映異構(gòu)體可以通過色譜法分離，或者優(yōu)選地，可以通過基于溶解度差異的分離/拆分技術(shù)進行分離。然后通過任何不會導(dǎo)致消旋化的操作方法回收光學(xué)純的對映異構(gòu)體與拆分劑。用于從外消旋混合物中拆分化合物的立體異構(gòu)體的技術(shù)的更詳細描述可見于JeanJacques,AndreCollet,SamuelH.Wilen,"對映異構(gòu)體，夕卜消^:體和拆分(Eiiantiomers,RacematesandResolutions)",JohnWiley和Sons,lnc,，1981?？傊?，式1的化合物可通過下述方法制備，其包括(a)反應(yīng)方案I中的步驟；和(b)任選地將本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用鹽；(c)任選地將鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為非鹽形式；(d)任選地將非氧化形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用的N-氧化物；(e)任選地將N-氧化物形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為其非氧化物形式；(f)任選地從異構(gòu)體混合物拆分本發(fā)明化合物的單個的異構(gòu)體；(g)任選地將未衍生化的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用的前藥衍生物；和(h)任選地將本發(fā)明化合物的前藥衍生物轉(zhuǎn)化為其未衍生化的形式。在文中，當(dāng)沒有具體描述原料的制備時，這些化合物是已知的或可通過與本領(lǐng)域已知方法類似的方法制備或按下文實施例中所公開的方法制備。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解的是，以上轉(zhuǎn)化僅是用于制備本發(fā)明化合物的方法中的代表，并且可類似地使用其它公知的方法。實施例以下實施例進一步舉例說明本發(fā)明式I化合物的制備但不限制本發(fā)明。3_(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲基苯甲酸5的合成NaOH/n-BuOHC07Me.-N1)NaOH2)HCI29向3-tJ^4-甲基-苯曱酸曱酯(0.6mol)在nBuOH(50mL)中的溶液中加入70%硝酸(2.7mL)形成硝酸鹽，然后與氨腈水溶液(5(T/。wt.，7mL，0.09mol)縮合。將所得混合物回流加熱16小時然后冷卻至室溫，加入二乙醚(100mL)。在0。C下冷卻30分鐘后，過濾并用1:1=甲醇:二乙醚(120mL)洗滌得到3-胍基-4-甲基-苯甲酸甲酯硝酸鹽2。向3-胍基-4-甲基-苯曱酸甲酯硝酸鹽2(0,02mol)在nBuOH(40mL)中的溶液中加入3(0.02mol)和氫氧化鈉片(0.02mol)。將所得混合物回流加熱12小時得到酯4。將1Naq.NaOH(20mL)加至酯4的nBuOH溶液中回流加熱30分鐘。冷卻至室溫后，在劇烈攪拌下緩慢向混合物中加入1N(aq)HC1(20mL)。過濾收集產(chǎn)物，用水洗滌得到酸5。NMR(400MHz,d6-DMSO)59.28(d，/=1.8Hz，1H)，9,08(s，1H)，8.7(dd，/=4.7，1.5Hz，1H)，8,55(d，5.1Hz，1H)，8.46(dt，/=8，1.8Hz,1H)，8.31(s，1H)，7.65(dd，/=7.8,1.5Hz,1H)，7.54(dd,J=7.7，4.7Hz，1H)，7.49(dd，/=5.2Hz，1H)，7.37(d，/=7.9Hz，1H)，3.08(s，3H)。MS(m/z)(M+l)+:307.2。可以通過以下步驟獲得反應(yīng)物3。將3-乙酰基吡啶(2.47mol)和N，N-二甲基曱酰胺二甲基縮醛(240mL)的混合物加熱回流16小時。真空除去溶劑，向殘余物中加入己烷(100mL),結(jié)晶析出固體。將該固體從二氯甲烷-己烷中重結(jié)晶得到3-二甲氨基-1-(3-吡啶基)-2-丙烯-l-酮3。，HNMR(400MHz，d-氯仿)39.08(d，J=2.4Hz，1H)，8.66(m，1H)，8.20(m，1H)，7.87(m，1H),7.37(m，1H)，5.68(d，J=16.4Hz，1H)，3,18(s,3H)，2.97(s,3H)。3-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基M)-4-曱基苯甲酰肼6的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>將4-曱基-3-(4-吡咬-3-基-嗜咬-2-基^J^)-苯甲酸甲酯4(3.2g，10mmol)和肼(6mmol)溶解于干燥EtOH(20mL)中，回流加熱過夜。將混合物冷卻至室溫，濾出固體，用水洗滌，真空干燥過夜得到產(chǎn)物6，為淡黃色固體。NMR(400MHz，M-DMSO)d9.68(s，1H)，9.26(m，1H)，9.06(s，1H)，8.69(dd，/=4.7，1.5Hz，1H)，8.52(d，/=5.1，1.2Hz，1H)，8.43(m，1H)，8.1(dd，5.8,1.6Hz，1H),7.56(m,2H)，7.46(dd,/=5.1，1.6Hz，1H)，7.3(d，7.9Hz，1H)，4.45(s，1H),3.33(s，3H)，3.31(s，1H)。MS(m/z)(M+l)+:321.1。{5—[5-(3-二氟曱氧基-苯基)-211-[1，2，4三唑-3-基卜2-甲基-苯基}-(4-吡咬-3-基-嘧啶-2-基>胺Al的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>將肼6(160mg,0.5mmol)和3-二氟甲氧基-苯甲腈(338mg，2mmol)混懸于干燥nBuOH(2mL)/NMP(0.5mL)中，在孩t波爐中于180。C下加熱1小時。將混合物冷卻至室溫，經(jīng)制備型LC/MS純化得到產(chǎn)物Al，為淡黃色固體。'HNMR(400MHz，W-MeOH)39.32(s,1H)，8.6(m，2H)，8.51(d，■/=4.9Hz，1H)，7.95(d，/=7.5Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.78(d，/=7.6Hz，1H)，7.52(m，2H)，7.42(m,2H)，7.25(d，/=8.0Hz，1H)，6.9(t,/=73.8Hz，1H)，2.41(s,3H)。MS(m/z)(M+l)十472,2。采用相似方法制備終化合物A2-A8?！?-甲基-5-15-(3-三氟甲氧基-苯基)-2H-『l,2,41三唑-3-基l-苯基W4-吡啶-3-基-嘧咬-2-基)-胺A2:&匿R(400MHz，d6-DMSO)610(s，1H)，9.42(d，/=8.6Hz，1H)，9.3(m，2H)，9.09(d，/=5.2Hz,1H)，8.99(s,1H)，8.67(d,/=7.8Hz，1H)，8.56(s，1H)，8.31(dd，/=7.8，1.6Hz，1H)，8.18(dd,/=7.8,5.5Hz，1H)，8.1(t，/=8.0Hz，1H)，8.0(d，/=5.2Hz，1H)，7.87(m，2H)，2.94(s，3H)。MS(m/z)(M+l)+:490.2重復(fù)上述實施例中的方法(中間體和終產(chǎn)物)，使用適當(dāng)?shù)脑系玫较卤韑中所示的式I化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>測定本發(fā)明化合物選擇性抑制野生型Ba/F3細胞和用Telc-kit激酶和TelPDGFR融合的酪氨酸激酶轉(zhuǎn)化的Ba/F3細胞增殖的能力和選擇性抑制Mo7e細胞的SCF依賴性增殖的能力。此外還測定本發(fā)明化合物抑制Abl、ARG、BCR-Abl、BRK、EphB、Fms、Fyn、KDR、c-kit、LCK、PDGFR、b-Raf、c-Raf、SAPK2、Src、Tie2和TrkB激酶的能力。增殖試驗BaF3文庫-Brightglo讀數(shù)方案對化合物抑制野生型Ba/F3細胞和用Td融合的酪氨酸激酶轉(zhuǎn)化的Ba/F3細胞增殖的能力進行分析。將未被轉(zhuǎn)化的Ba/F3細胞維持在包含重組IL3的培養(yǎng)基中。將細胞以每孔50jiL培養(yǎng)基中5,000個細胞的密度涂到384-孔TC板中，并以0.06nM至10的濃度向其中加入試驗化合物。然后，將這些細胞在37。C、5%<:02下培養(yǎng)48小時。在對細胞進行培養(yǎng)后，按照制造商的說明向各孔中加入25fiLBRIGHTGLO(Promega)，并用AnalystGT-LuminescenceMode-50000積分時間在RLU中對這些板進行讀數(shù)。由劑量響應(yīng)曲線確定IC5o值(50%抑制所需的化合物濃度)。Mo7e試驗用內(nèi)源性表達c-kit的Mo7e細胞在96-孔板中對本文所述化合物抑制SCF依賴性增殖的作用進行試驗。簡單地說，對兩倍系列稀釋的試驗化合物(Cmax二10^M)對用人重組SCF刺激的Mo7e細胞的抗增殖活性進行評估。將其在37。C下培養(yǎng)48小時后，用得自Promega的MTT比色測定測量細胞活力。c-khHTRF試驗方案將等份(5]nL)的2倍濃度的c-kit酶混合物25ngc-kit(5ng/^L)和2jiM生物素-EEEPQYEEIPIYLELLP-NH2肽在激酶緩沖液(20mMTrispH7.5.10mMMgCl2，0.01%BSA，0.1%Brij35，1mMDTT，5%甘油，0.05mMNa3V04)t的溶液加至384孑LProxiplate板(Packard)的各孔中。Proxiplate板最后一行的每個孔中含有5nL不含c-kit的c-kit酶混合物以確定背景水平。向每孔中加入本發(fā)明化合物，將板在室溫下培養(yǎng)30分鐘。向每孔中加入2xATP(40nM)在激酶緩沖液(5nL)中的溶液，將板在室溫下培養(yǎng)3小時。向每孔中加入檢測混合物(50%KF,40。/。激酶緩沖液，10%EDTA，l:l()O稀釋的MabPT66-K(cat#61T66KLB)和1:100稀釋的鏈霉抗生物素-XL(cat#611SAXLB)0(10jiL),將板繼續(xù)在室溫下培養(yǎng)1至2小時，然后在檢測器中讀取HTRF信號強度。人TG-HA-VSMC增殖試驗使人TG-HA-VSMC細胞(ATCC)在補加了10%FBS的DMEM中生長至80-90%融合，然后將其以6e4個細胞/mL的數(shù)量重新混懸于補加了1%FBS和30ng/mL重組人PDGF-BB的DMEM中。然后，將這些細胞以50nL/孔的數(shù)量等分至384-孔板中，將其在37。C下培養(yǎng)20小時，然后用0.5fiL100x化合物將其在37。C下處理48小時。在處理后，向各孔中加入25nLCellTiter-Glo處理15分鐘，然后在CLIPR(MolecularDevices)上對這些板進行讀數(shù)。PDGFRa/PLance試驗方案將等份的(2.5fiL)2x濃度的PDGFRp肽和ATP混合物(4nM生物素-(5A-pA-(3A-AEEEEYVFIEAKKK肽，20ATP在分析緩沖液(20mMHepes，54mMMgCl2，0.01%BSA,0.05%吐溫-20,1mMDTT，10%甘油，50Na3V04)中的溶液)加至384孑LProxiplate板(Packard)中。將板離心，用針式加樣器(pintooldispenser)向每孔中加入本發(fā)明的化合物(50nL)。向各孔中加入(2.5nL)2x濃度的酶混合物(PDGFRa，濃度為4.5ng/^L(cat#PV4117)或PDGFR卩，濃度為1.5ng/pL(cat弁PV3591)，均為在分析緩沖液中的溶液)或不含PDGFRa/p酶的分析緩沖液。將板在室溫下培養(yǎng)1.5小時。向每孔中加入檢測混合物(5pL;50%1MKF，40。/。激酶緩沖液，10%EDTA,1:100稀釋的MabPT66-K(cat#61T66KLB)和1:100稀釋的鏈霉抗生物素-XL(cat#611SAXLB)，將Proxiplate板在室溫下培育1小時，然后在檢測器上讀取HTRF信號。35Ba/F3FLFLT3增殖試驗所用鼠科動物細胞系是過表達全長FLT3構(gòu)建體的Ba/F3鼠科動物pro-B細胞系。將這些細胞維持在補加了青霉素50ng/mL、鏈霉素50fig/mL和L-谷酰胺200mM的RPMI1640/10%胎牛血清(RPMI/FBS)中，同時加入鼠科動物重組IL3。Ba/F3全長FLT3細胞經(jīng)歷16小時的IL3饑餓，然后以每孔25nL培養(yǎng)基中5,000個細胞的密度將其涂到384-孔TC板中；并以0,06nM至10nM的濃度向其中加入試驗化合物。在加入化合物后，以適宜的濃度向各孔25nL的培養(yǎng)基中加入FLT3配體或IL3作為細胞毒性對照。然后，將這些細胞在37。C、5%032下培養(yǎng)48小時。在對細胞進行培養(yǎng)后，按照制造商的說明向各孔中加入25jiLBRIGHTGLO(Promega)并用AnalystGT-LuminescenceMode-50000積分時間在RLU中對這些板進行讀數(shù)。對細胞BCR-Abl依賴性增殖的抑制(高通量方法)所用的鼠細胞系是用Bcr-AblcDNA轉(zhuǎn)化的32D造血祖細胞系(32D-p210)。將這些細胞保持在補充有青霉素(50fig/mL)、鏈霉素(50fig/mL)和L-谷酰胺(200mM)的RPMI/10。/o胎牛血清(RPMI/FCS)中。將未轉(zhuǎn)化的32D細胞保持在類似條件下并添加15%WEHI條件培養(yǎng)基作為IL3源。將50jal32D或32D-p210細胞混懸液以每孔5000個細胞的密度接種于Greiner384孔微孔板(黑色)中。向各孔中加入50nl測試化合物(lmM的DMSO儲備液)(包含STI571作為陽性對照)。在37。C、5%<:02下將細胞培養(yǎng)72小時。向各孔中加入10^160%的AlamarBlueTM溶液(Tek診斷試劑)并將細胞再培養(yǎng)24小時。使用Acquest系統(tǒng)(MolecularDevices)測定熒光強度(530nm激發(fā)，580nm發(fā)射)。對細胞BCR-Abl依賴性增殖的抑制向各孔中加入50pL測試化合物的兩倍系列稀釋液(Cmax為40|iM)(包含36STI571作為陽性對照)。將細胞在37。C、5。AC02下培養(yǎng)48小時后，向各孔中加入15jiLMTT(Promega)并將細胞再培養(yǎng)5小時。通過分光光度法定量測定570nm處的光密度并通過量效曲線確定50%抑制所需的化合物濃度。對細胞周期分布的影響將32D和32D-p210細胞以每孔5mL培養(yǎng)基中2.5x106個細胞的數(shù)量接種于6孔TC板中并加入1或10pM的測試化合物(包含STI571作為對照)。然后，將細胞在37。C、5%C02下培養(yǎng)24或48小時。用PBS洗滌2ml細胞混懸液，在70%EtOH中固定1小時并用PBS/EDTA/RNaseA處理30分鐘。加入碘化丙錠(Cf-10ng/ml)并用流式細胞儀在FACScaliburTM系統(tǒng)(BDBiosciences)上測定熒光強度。本發(fā)明的測試化合物顯示對32D-p210細胞具有細胞凋亡作用但不在32D母本細胞中譯導(dǎo)細胞凋亡。對細胞BCR-Abl自身磷酸化的影響使用c-abl特異性捕獲抗體和抗磷酸酪氨酸抗體通過捕獲Elisa測定BCR-Abl的自身褲酸化作用。將32D-p210細胞以每孔50jaL培養(yǎng)基中2xl05個細胞的數(shù)量加入96孑LTC板中。每孔加入50pL測試化合物的兩倍系列稀釋液(C則x為10nM)(包含STI571作為陽性對照)。在37。C、5%C02下培養(yǎng)細胞90分鐘。然后，將細胞在水上用150jnL含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液(50mMTris-HC1、pH7.4、150mMNaCl、5mMEDTA、lmMEGTA和1%NP-40)處理1小時。將50pL細胞溶胞產(chǎn)物加到96孔光學(xué)板中，該板預(yù)先用抗-abl特異性抗體涂覆和封閉。在fC下培養(yǎng)該板4小時。用TBS-吐溫20緩沖液洗滌后，加入50nL結(jié)合有堿性磷酸酶的抗-磷酸酪氨酸抗體并將該板在4。C下培養(yǎng)過夜。用TBS-吐溫20緩沖液洗滌后，加入90nL發(fā)光底物并用Acquest體系(MolecularDevices)定量測定發(fā)光情況。本發(fā)明受試化合物中抑制表達BCR-Abl的細胞增殖的化合物以劑量依賴的方式抑制細胞的BCR-Abl自身磷酸化作用。對表達突變型BCR-Abl的細胞增殖的影響測試本發(fā)明化合物對表達野生型或突變型BCR-Abl(G250E、E255V、T315I、F317L、M351T)的Ba/F3細胞的抗增殖作用，所述BCR-Abl可以引起對STI571耐受或?qū)ζ涿舾行越档汀Ｒ?0、3.3、1.1和0.37^M的濃度如上所述(在不舍IL3的培養(yǎng)基中)測試這些化合物對表達突變型-BCR-Abl的細胞和未轉(zhuǎn)化的細胞的抗增殖作用。如上所述由獲得的量效曲線確定對未轉(zhuǎn)化的細胞沒有毒性的化合物的IQo值。FGFR3(酶試驗)利用純化的FGFR-3(Upstate)進行激酶活性測定，最終體積為10pL，其中含有0.25ng/mL酶的激酶緩沖溶液(30mMTris-HC1pH7.5，15mMMgCl2,4.5mMMnCl2，15fiMNa3V04和50ng/mLBSA)和底物(5ng/mL生物素-聚—EY(Glu,Tyr)(CIS-US公司)和3pMATP)。制備兩種溶液將5pL第一種溶液(含有在激酶緩沖液中的FGFR-3酶)首先分配在384-孔ProxiPlate(賴金埃爾默公司(PerkinElmer))中，然后加入50nL化合物的DMSO溶液，然后向每孔加入5pL第二種溶液，其中含有在激酶緩沖液中的底物(聚-EY)和ATP。將反應(yīng)物于室溫溫育1小時，加入10^LHTRF檢測混合物終止反應(yīng)，所述混合物含有30mMTris-HClpH7.5、0.5MKF、50mMETDA、0.2mg/mLBSA、15ng/mL鏈霉抗生物素-XL665(CIS-US公司)和150ng/mL偶聯(lián)了抗-磷酸酪氨酸抗體的穴狀化合物(C1S-US公司)。于室溫溫育1小時以^f吏鏈霉抗生物素-生物素相互作用后，在AnalystGT(分子裝置公司(MolecularDevicesCorp.))上讀取時間解析熒光信號。通過對每種化合物在12種濃度(從50nM按1:3稀釋至0.28nM)下的抑制百分比進行線性回歸分析，計算得到ICso值。在該試驗中，本發(fā)明化合物的ICso范圍為10nM至2jiM。FGFR3(細胞試驗)測試本發(fā)明4匕合物抑制轉(zhuǎn)化的Ba/F3-TEL-FGFR-3細胞增殖的能力，這種增殖依賴于FGFR-3細胞激酶活性。將Ba/F3-TEL-FGFR-3在用作培養(yǎng)基的補充有10%胎牛血清的RPMI1640中培養(yǎng)至800,000細胞/mL混懸液。將50fiL細胞培養(yǎng)基混懸液分配在384-孔板中，密度為5000個細胞/孔。將本發(fā)明化合物溶解和稀釋在二甲基亞砜(DMSO)中。在DMSO中制備12個1:3系列稀釋液以產(chǎn)生范圍通常從10mM到0.05pM的濃度梯度。向細胞加入50nL稀釋的化合物并在細胞培養(yǎng)箱中溫育48小時。向細胞中加入最終濃度為10%的AlamarBhie(特克診斷系統(tǒng)公司(TREKDiagnosticSystems)),其可用于監(jiān)測由增殖細胞所產(chǎn)生的還原性環(huán)境。在37。C的細胞培養(yǎng)箱中再溫育4小時后，在AnalystGT(分子裝置^^司(MolecularDevicesCorp.))上測定來自還原的AlamarBlue(在530nm激發(fā)，在580nm發(fā)射)的熒光信號。通過對每種化合物在12種濃度下的抑制百分比進行線性回歸分析，計算得到ICso值。b-Raf(酶試驗)測試本發(fā)明化合物抑制b-Raf活性的能力d在黑色壁和透明底的384孔MaxiSorp板(NUNC)中進行測定。在DPBS中稀釋底物lKBa(l:750)并在各孔中加入15pL。在4。C下將板培養(yǎng)過夜并用EMBLA板洗滌器、用TBST(25mMTris，pH8.0，150mMNaCl和0.05。/。吐溫-20)洗滌3次。在室溫下，將板用S叩erbloek(15ixL/孔)封閉3小時，用TBST洗滌3次并拍干。將含有20pMATP的測定緩沖液(10pL)加到各孔中，然后加入100nL或500nL化合物。將b-Raf在測定緩沖液中稀釋(lpL稀釋至25nl)并將10nl稀釋的b-Raf加到各孔中(0.4iag/孔)。在室溫下將該板培養(yǎng)2.5小時。通過用TBST洗滌該板6次來終止激酶反應(yīng)。在Superblock中稀釋Phosph-lKBa(Ser32/36)抗體(1:10，000)并將15iaL加到各孔中。將板在4。C下培養(yǎng)過夜并用TBST洗滌6次。在Superblock中稀釋AP-結(jié)合的山羊-抗-鼠IgG(l:l，500)并將15nL加到各孔中。在室溫下培養(yǎng)該板1小時并用TBST洗滌6次。在各孔中加入15pLAttophosAP熒光底物(普洛麥格(Promega)公司)并在室溫下培養(yǎng)15分鐘。在Acquest或AnalystGT上采用焚光強度程序讀板(激發(fā)波長455nm，發(fā)射波長580nm)。b-Raf(細胞試驗)在A375細胞中測試本發(fā)明化合物抑制MEK磷酸化的能力。A375細胞系(ATCC)得自人黑素瘤患者，它在B-Raf基因上具有V599E突變。由于B-Raf突變，磷酸化MEK的水平上升。在沒有血清的介質(zhì)中，于37°C將亞匯合到匯合的A375細胞與化合物一起培養(yǎng)2小時。然后用冷PBS洗滌細胞一次，用含有l(wèi)°/。TritonX100的細胞裂解緩沖液裂解細胞。離心后，上層液進行SDS-PAGE,然后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。將膜用抗-磷酸-MEK抗體(ser217/221)(細胞信號傳導(dǎo)公司(CellSignaling))進行蛋白質(zhì)印跡。通過硝酸纖維素膜上磷酸-MEK帶的密度監(jiān)測磷酸化MEK的量。UpstateKinaseProfiler-放射-酴fe濾紙結(jié)合試驗評價本發(fā)明的化合物抑制激酶小組中單個成員的能力。按該通用方案以終濃度為10nM對化合物進行測試，一式兩份。需要注意的是激酶緩沖液成分和底物隨"UpstateKinaseProfiler"中所包含的激酶的不同而變化。在置于冰上的微量離心管中混合激酶緩沖液(2.5nL、10x,需要時可含有MnCl2)、活化的激酶(O.OO]-O.Ol個單位；2.5|aL)、在激酶緩沖液中的特異性或多聚(Glu4-Tyr)肽(5-500nM或0.01mg/ml)和激酶緩沖液(50jaM;5pL)。加入Mg/ATP混合物(10^L;67.5(或33.75)mMMgCl2、450或225HMATP和l^Ci/pl[y-32P]-ATP(3000Ci/mmol))并在約30。C下將反應(yīng)培養(yǎng)約IO分鐘。將反應(yīng)混合物(20^il)點在2cmx2cmP81(磷酸纖維素、用于帶正電的肽底物)或WhatmanNo.l(用于多聚(Glu4-Tyr)肽底物)方形紙上。用0.75%砩酸洗滌該方形紙4次，每次5分4中，并用丙酮洗滌一次，洗滌5分鐘。將該方形紙轉(zhuǎn)移到閃爍小瓶中，加入閃爍混合液(5ml)并用Beckman閃爍計數(shù)器定量摻入肽底物中的32P(cpm)。計算每個反應(yīng)的抑制百分比。40游離形式或可藥用鹽形式的式I化合物表現(xiàn)出有價值的藥理學(xué)性質(zhì)，例如，如本申請的體外試驗所述。例如，在Mo7e試驗中本發(fā)明的化合物的ICs。值低于1nM,而且對BCR-Abl的選擇性在10倍以上。應(yīng)當(dāng)理解，本文所迷的實施例和實施方案僅僅是出于舉例說明的目的，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以據(jù)此進行各種修飾或改變，并且這些修飾和改變均包括在本申請的精神和范圍內(nèi)以及所附權(quán)利要求的保護范圍之內(nèi)。本文所引用的所有公開出版物、專利和專利申請均引入本文作為參考并用于所有目的。4權(quán)利要求1.式I的化合物及其可藥用鹽，其中L是含有3個氮原子的五元雜芳基，其選自于R1、R2a和R2b獨立的選自于氫、C3-8雜環(huán)烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵代-C1-4烷氧基、鹵代-C1-4烷基、-NR10R11、-OX1R8；其中X1選自于鍵和C1-4亞烷基；R8是C3-12環(huán)烷基；或者R1和R2a或R1和R2b與R1、R2a或R2b連接的碳原子一起形成苯基；R10和R11獨立的選自于氫、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵代-C1-4烷氧基、鹵代-C1-4烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-10雜芳基；或R10和R11與兩者共同連接的氮原子一起形成C3-8雜環(huán)烷基或C1-10雜芳基；R3選自于C6-10芳基、C1-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；其中所述的R3的芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基被1至3個獨立的選自于氫、鹵素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代-C1-6烷基、鹵代-C1-6烷氧基、C6-10芳基-C0-4烷基、雜芳基、雜環(huán)基、-X2NR5aR5b、-X2NR5aOR5b、-X2C(O)R5a、-X2S(O)0-2R5a、-X2OX3R5a、-X2R5a、-X2C(O)OR5a、-X2OR5a和-X2OX3OR5a的基團取代；其中X2和X3獨立的選自于鍵和C1-4亞烷基；R5a和R5b獨立的選自于氫、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-12環(huán)烷基、C1-10雜芳基和C3-12雜環(huán)烷基；其中所述的R3的芳基、環(huán)烷基、雜芳基或雜環(huán)烷基取代基可任選進一步被1至3個獨立的選自于鹵素、羥基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代-C1-6烷基、鹵代-C1-6烷氧基、-X4OR6、-X4C(O)OR6、-X4C(O)NR6R6和X4R6的基團取代；其中X4選自于鍵和C1-4亞烷基；R6選自于氫、C1-6烷基和C3-12雜環(huán)烷基。2.權(quán)利要求1的化合物，其中L選自于HR!、R2a和R2b獨立的選自于氫、C3—8雜環(huán)烷基、d-4炕基、C,-4烷氧基、鹵代-d-4烷氧基、鹵代-C^烷基、-NR!oR"、-OX,R8;其中Xt選自于鍵和Cw亞烷基；Rs是Cw2環(huán)烷基；或I^和R2a或R,和R2b與R!和R^或R和R2b連接的碳原子一起形成苯基；Rw和Ru獨立的選自于氫、d—4烷基、d—4烷氧基、卣代-d—4烷氧基、囟代-d—4烷基、Q^雜環(huán)烷基Cw。雜芳基；或R^和Rn與兩者共同連接的氮原子一起形成C^雜環(huán)烷基或d—H)雜芳基；R3選自于Cwo芳基和Cw。雜芳基；其中所述的芳基或雜芳基被l至3個獨立的選自于鹵素、氰基、Cw烷基、d—6烷氧基、鹵代-Q.fi烷基、鹵代-Cw烷氧基、C6—1()芳基-Qm烷基、雜芳基、雜環(huán)基、-X2NR5aR5b、-X2NR5aOR5b、-X2C(〇)RSa、-X2S(O)02R5a、-X2OX3R5a、-X2R5a、-X2C(0)OR5a、-X20Rsa和-X20X30R5a的基團取代；其中X2和X3獨立的選自于鍵和Cw亞烷基；Rsa和Rsb獨立的選自于氫、Cw烷基、<:3-12環(huán)烷基、d.,。雜芳基和C3-u雜環(huán)烷基；其中所述的R3的芳基、環(huán)烷基、雜芳基或雜環(huán)烷基取代基可任選進一步被l至3個獨立的選自于鹵素、羥基、氰基、C!-6烷基、C！—6烷氧基、鹵代-d-6烷基、鹵代-C,—6烷氧基、—X4OR6、—X4C(0)OR6、—X4C(0)NR6R6和X4R6的基團取代；其中X4選自于鍵和C"亞烷基；116選自于氫、d_6烷基和C3.12雜環(huán)烷基。3.權(quán)利要求2的化合物，其中R選自于氫、吡咯烷基、嗎啉基、甲氧基、2-氟-乙氧基和甲基；R2a和R2b是氫；或者R，和R2a與R,和R2a所連接的碳原子一起形成苯基。4.權(quán)利要求3的化合物，其中R3選自被選自于二氟甲氧基、羥甲基、三氟甲氧基、甲基磺?；?、甲氧基和乙氧基的基團取代的苯基；和2，3-二氫苯并吹喃-5-基。5.權(quán)利要求1的化合物，其選自于{5-[5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-[l，2，4三唑-3-基]-2-甲基-苯基}-(4-吡啶-3-基-嘧咬-2-基)-胺；N-(2-甲基_5-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-lH-l，2，4-三唑-3-基)苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2畫胺；N-(2-甲基-5-(5-(3-(甲基磺?；?苯基)-lH-l，2，4-三唑-3-基)苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺；N-(5-(5-(3-曱氧基苯基)-111-1，2,4-三唑-3-基)-2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺；N-(5-(5-(3-乙氧基苯基)-lH-l，2,4-三唑-3-基)畫2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺；N-(5-(5-(2，3-二氫苯并呋喃-5-基)-lH-l，2，4-三唑-3-基)-2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧咬-2-胺；N-(5-(5-(4-(二氟甲氧基)苯基)-lH-l，2，4-三唑-3-基)-2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺；和(3-(3-(4-甲基-3-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)苯基)-1H-1，2，4-三唑-5-基)苯基)甲醇。6.—種藥物組合物，其含有治療有效量的權(quán)利要求1的化合物和可藥用賦形劑。7.權(quán)利要求6的藥物組合物，其中所述可藥用賦形劑適合于非胃腸道給藥。8.權(quán)利要求6的藥物組合物，其中所述可藥用賦形劑適合于口服給藥。9.一種調(diào)節(jié)激酶活性的方法，其包括向有需要的系統(tǒng)或個體施用治療有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽或藥物組合物，從而調(diào)節(jié)所述激酶活性。10.沖又利要求9的方法，其中所述激酶選自于c-kit、PDGFRa和PDGFRP或其組合。11.斥又利要求9的方法，其中所述激酶選自于Lyn、MAPK14、PDGFRa、PDGFRp、ARG、BCR-Abl、BRK、EphB、Fms、Fyn、KDR、LCK、PDGF-R、b-Raf、c國Raf、SAPK2、Src、Tie2和TrkB或其組合。12.權(quán)利要求11的方法，其中所述權(quán)利要求1的化合物直接接觸c-kit、PDGFRa和/或PDGFRp激酶受體。13.權(quán)利要求12的方法，其中所述接觸在體外或體內(nèi)發(fā)生。14.一種治療疾病或病癥的方法，其中調(diào)節(jié)激酶活性可預(yù)防、抑制或減輕所述疾病或病癥的病理學(xué)和/或癥狀，該方法包括向個體施用治療有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽或藥物組合物和任選的治療有效量的第二種治療劑。15.4又利要求14的方法，其中所述激酶選自于c-kit、PDGFRa和PDGFRp激酶受體。16.權(quán)利要求14的方法，其中所述笫二種治療劑是支氣管擴張劑、抗炎劑、白三烯拮抗劑或IgE阻斷劑。17.權(quán)利要求14的方法，其中所述的權(quán)利要求1的化合物在第二種治療劑之前、與其同時或在其之后給藥。18.權(quán)利要求14的方法，其中所述疾病或病癥選自于腫瘤性病癥、過敏性病癥、炎性病癥、自身免疫性病癥、癡原蟲相關(guān)疾病、與肥大細胞有關(guān)的疾病、移植物抗宿主病、代謝綜合征、CNS相關(guān)病癥、神經(jīng)變性病癥、疼痛情況、物質(zhì)濫用、朊病毒病、癌癥、心臟病、纖維變性疾病、特發(fā)性動脈壓過高、^_皮病和原發(fā)性肺動脈高壓。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述腫瘤性病癥選自于肥大細胞增多癥、胃腸道間質(zhì)瘤、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、急性髓細胞性白血病、急性淋巴細胞性白血病、脊髓發(fā)育不良綜合征、慢性髓細胞性白血病、結(jié)腸直腸癌、胃癌、睪丸癌、成膠質(zhì)細胞瘤和星形細胞瘤。20.權(quán)利要求18的方法，其中所述過敏性病癥選自于哮喘、過敏性鼻炎、過敏性鼻竇炎、過敏性綜合征、蕁麻滲、血管性水腫、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性接觸性皮炎、結(jié)節(jié)性紅斑、多形性紅斑、皮膚壞死性靜脈炎、昆蟲叮咬皮膚炎癥和吸血性寄生蟲感染。21.權(quán)利要求18的方法，其中所述炎性病癥選自于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)膜炎、類風(fēng)濕性脊推炎、骨關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。22.權(quán)利要求18的方法，其中所述自身免疫性病癥選自于多發(fā)性硬化、牛皮褲、腸的炎性疾病、腸易激綜合征、腸易激疾病、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)炎、局部或全身性硬皮病、系統(tǒng)性紅斑狼瘙、盤狀紅斑狼瘡、皮膚紅斑、皮肌炎、多發(fā)性肌炎、斯耶格倫氏綜合征、結(jié)節(jié)性全動脈炎、自身免疫性腸病和增生性腎小球腎炎。23.權(quán)利要求18的方法，其中所述移植物抗宿主疾病是器官移植物排斥。24.權(quán)利要求18的方法，其中所述器官移植選自于腎移植、胰腺移植、肝移植、心臟移植、肺移植和骨髓移植。25.權(quán)利要求18的方法，其中所述代謝綜合征選自于I型糖尿病、II型糖尿病和肥胖。26.權(quán)利要求18的方法，其中所述CNS相關(guān)病癥選自于抑郁、心境惡劣障礙、循環(huán)型情感障礙、厭食癥、易餓病、月經(jīng)前期綜合征、絕經(jīng)后綜合征、智力遲緩、集中力缺失、悲觀煩惱、精神激動、自嘲和性欲降低、焦慮癥、精神病學(xué)病癥和精神分裂癥。27.權(quán)利要求18的方法，其中所述神經(jīng)變性病癥選自于阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、朊病毒病、運動神經(jīng)元病和肌萎縮性側(cè)索硬化。28.權(quán)利要求18的方法，其中所述疼痛情況選自于急性痛、術(shù)后痛、慢性痛、傷害性疼痛、癌癥痛、神經(jīng)性疼痛和心理性疼痛綜合征。29.權(quán)利要求18的方法，其中所述物質(zhì)使用障礙選自于藥物成癮、藥物濫用、藥物習(xí)慣性、藥物依賴性、戒斷綜合征和超劑量用藥。30.權(quán)利要求18的方法，其中所述癌癥選自于黑素瘤、胃腸道間質(zhì)瘤、結(jié)腸直腸癌、小細胞肺癌和其它實體腫瘤。31.權(quán)利要求18的方法，其中所述纖維變性疾病選自于丙型肝炎、肝纖維化、心臟纖維化、非酒精性脂肪肝、肝硬化、肺纖維化和骨髓纖維化。全文摘要本發(fā)明提供了一類新型嘧啶衍生物、包含這類化合物的藥物組合物以及用該化合物來治療或預(yù)防與激酶活性異?；蚴д{(diào)有關(guān)的疾病或病癥、特別是涉及c-kit、PDGFRα和PDGFRβ激酶異常激活的疾病或病癥的方法。文檔編號C07D401/00GK101687853SQ200880023078公開日2010年3月31日申請日期2008年5月1日優(yōu)先權(quán)日2007年5月4日發(fā)明者V·莫爾泰尼,劉曉東,李小林申請人:Irm責(zé)任有限公司