專利名稱：：槲皮素及其衍生物的鉑類配合物、制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，確切的說它是一類新的具有藥用價(jià)值的槲皮素或其衍生物與鉑的配合物及其鹽類，包括其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：癌癥(惡性腫瘤)是目前威脅人類生命的最主要的疾病之一。世界衛(wèi)生組織公布的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，從1996年以來全球每年新確診的腫瘤患者均在1030萬以上，到1999年底全球腫瘤患者總數(shù)已逾4000萬人，全世界每年約有700萬人死于各種腫瘤，2001年世界腫瘤發(fā)病率和死亡率比1990年上升了22%，是僅次于心血管疾病的第二大死因。我國(guó)衛(wèi)生部公布的調(diào)査結(jié)果顯示，我國(guó)全國(guó)腫瘤患數(shù)量達(dá)到286.5萬人左右，同時(shí)每年約有212.7萬名新增腫瘤患者，全國(guó)腫瘤死亡人數(shù)每年約有160多萬人，其中胃癌、肝癌、肺癌、食管癌這四種癌癥的死亡率為92.06/10萬，占全部癌癥死亡率的73.97%。隨著環(huán)境的惡化及激素的大量使用，癌癥發(fā)病率呈上升的趨勢(shì)。因此，開發(fā)抗癌藥物具有良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。目前臨床上抗腫瘤藥物的主要分為垸化劑、抗代謝藥、金屬鉑類、植物生物堿和其它天然藥、細(xì)胞毒素類抗生素等。鉑類抗腫瘤藥是一類最重要的抗腫瘤藥物，是20世紀(jì)60年代開發(fā)的新型抗腫瘤藥。與傳統(tǒng)的細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物的重要區(qū)別是，其作用機(jī)制獨(dú)特，抗腫瘤的選擇性好。其主要作用靶點(diǎn)為DNA，作用于DNA鏈間及鏈內(nèi)交鏈，形成DDPDNA復(fù)合物，干擾DNA復(fù)制，或與核蛋白及胞漿蛋白結(jié)合，屬周期非特異性藥?，F(xiàn)已相繼成功開發(fā)了順式-二氯二氨合鉑即順鉑(Cisplatin)、順式-1,1-環(huán)丁烷二羧酸二氨鉑即卡鉑(Carboplatin)、(Z)—二氨(羥基乙酸-O,，-02)鉑即奈達(dá)鉑(Nedaplatin)、1R—反式一(1，2—環(huán)已二胺—N，N')[草酸(Z—)—0，0']合鉬即奧沙利鉬(Oxaliplatin)、順式-[(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-2-異丙基1，3-二惡垸](雙齒)鉑即舒鉑(Su叩la)和l，2二氨甲基-環(huán)丁烷-乳酸合鉑即洛鉑(Lobaplatin)等，鉑類抗腫瘤藥具有抗腫瘤譜廣、作用強(qiáng)等特點(diǎn)，而且鉑類抗腫瘤藥還與其它抗腫瘤藥物有很好的協(xié)同作用，不但提高了對(duì)已有腫瘤的抑制率，而且擴(kuò)大了抗腫瘤譜，由此鞏固了鉑類抗腫瘤藥在臨床治療中的地位。1995年冊(cè)0對(duì)上百種抗腫瘤藥物進(jìn)行拌名，順鉑在療效及市場(chǎng)等方面的綜合評(píng)價(jià)位于第二位。有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，我國(guó)所有的化療方案中有70%80%以鉑為主或有鉑類藥物參加配伍。但目前鉬類抗腫瘤藥物存在毒性較大，如骨髓抑制、腎臟毒性、神經(jīng)損傷等，溶解度不好、抗癌譜相對(duì)較窄、還有耐藥性等缺點(diǎn)。因此，設(shè)計(jì)和合成新型的鉑類抗腫瘤藥物仍是現(xiàn)在抗癌藥研究的主要方向之一(劉偉平，張永俐，孫加林。貴金屬。2005,26:47—52)。中藥中含有很多具有抗腫瘤、解毒和抗氧化作用的成分。近兩年為減少鉑類化療藥物的毒副作用、提高療效、減少腫瘤復(fù)發(fā)和避免抗藥性的產(chǎn)生，把中藥中的有效成分與鉑結(jié)合尋找新藥是一個(gè)新的開發(fā)方向，如中藥斑蝥的有效成分斑蝥素與鉑配合物(ZL97102797.8、200510085430.9)，經(jīng)過臨床前的動(dòng)物試驗(yàn)研究，顯示了較好的抗腫瘤效果和較低的副作用。槲皮素(Quercetin)是最常見的黃酮類物質(zhì)，化學(xué)名為3，5，7，3'，4'一五羥基黃酮，廣泛存在于蔬菜、水果及中草藥中。其分子式為d晶。07，分子結(jié)構(gòu)式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>槲皮素的藥理作用廣泛，具有抗炎、抗過敏、抗氧化、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、降血脂、抗血小板聚集、抗糖尿病并發(fā)癥等多方面的作用。近年來發(fā)現(xiàn)槲皮素對(duì)多種致癌、促癌物和致突劑有抑制作用。槲皮素通過抑制蛋白酪氨酸激酶(PTK)的活性，對(duì)抗致癌因子，抑制II型雌激素與受體結(jié)合，清除自由基以保護(hù)DNA免受損傷等途徑對(duì)多種惡性腫瘤細(xì)胞有生長(zhǎng)抑制作用。槲皮素的金屬配合物如Cu(II)、Zn(II)、Cd(II)等配合物與槲皮素配體相比，一般具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，并對(duì)多種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用。已有的研究表明，槲皮素金屬配合物的抗腫瘤作用有兩種機(jī)制。①槲皮素金屬配合物與其他抗癌金屬配合物相似，可插入到DNA的堿基對(duì)之間，與DNA產(chǎn)生強(qiáng)烈的鍵合作用，影響DNA分子的內(nèi)部構(gòu)型，抑制了DNA分子的進(jìn)一步遺傳與復(fù)制；②槲皮素對(duì)金屬離子的螯合作用以及槲皮素金屬配合物的清除自由基的能力，有助于保護(hù)DNA免受自由基的損傷，并且槲皮素金屬配合物的清除自由基的能力明顯比槲皮素配體高，使得它對(duì)DNA免受氧化性損傷的保護(hù)作用和抗腫瘤作用較強(qiáng)(譚君.槲皮素金屬配合物的藥理作用研究進(jìn)展.中國(guó)藥學(xué)雜志，2006;41:1688—1691)。利用這些作用與鉑類藥物聯(lián)合使用或形成配合物使用將得到更好的治療效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一類新的具有藥用價(jià)值的槲皮素或其衍生物與鉑的配合物及其鹽類，其結(jié)構(gòu)式為-(II)一/^\—式(II)中R可以為H,""，R3NR4R5，但不限于這些取代基。其中R,可以為(CH2),n=l-4;R2可以為H,甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，羥甲基、羥乙基、羥丙基，但不限于這些取代基。R3=(CH2)，n=l-4;&和&=H，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，但不限于這些取代基。A和A2可以是H、Na+、K+、NH/，優(yōu)選H、Na+，A,和&可以相同或不同。當(dāng)R為H時(shí)，且&和A2均為H,結(jié)構(gòu)式(II)即為式(I);A,和A2為Na+、1T、N仏+時(shí)，式(II)即為式(I)的鈉鹽、鉀鹽或銨鹽。一/^~\一當(dāng)R為哌嗪衍生物""^^""時(shí)，R,可以為(CH2),n=l-4，優(yōu)選1-2;Ra可以為H，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基異丁基，叔丁基，羥甲基、羥乙基、羥丙基，優(yōu)選甲基、乙基、異丙基、羥乙基，但不限于這些取代基。A,和A2可以為H、Na+、K+、NH4+，優(yōu)選H、Na+，A,和A2可以相同或不同。當(dāng)R為R3NRJl5時(shí)，&可以為(CH2),n=l-4，優(yōu)選1-2;R4和R5可以為H，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，但不限于這些取代基。K和Rs可以相同或不同，優(yōu)選H、甲基、乙基、丙基。A,和A2可以為H、Na+、K+、NH/，優(yōu)選H、Na+，A,和A2可以相同或不同。本發(fā)明另一目的為提供一種前述化合物的制備方法。一、式(I)的制備方法如下(1)先將氯亞鉑酸鉀合成中間體二碘二氨合鉑，具體合成路徑及化學(xué)反應(yīng)式如下K2(PtCl4)——^——^K2(PtI4)NH^K2(PtI4)-^~^Pt(NH3)2I2(2)再將合成的二碘二氨合鉑與槲皮素(dsHuA)合成槲皮素合氨絡(luò)鉑，具體合成路徑及化學(xué)反應(yīng)式如下AgN03Pt(NH3)2I2-^[Pt(NH3)2(H20)2〗(N03)2(N03)2+C15H10O7->C15H1407N2Pt二碘二氨合鉑制備的具體步驟-先將氯亞鉑酸鉀合成中間體二碘二氨合鉑取含有20g氯亞鉑酸鉀(K2(PtCl4)，48mmol)水溶液，與4-IO倍量的KI飽和溶液混合，水浴加熱，反應(yīng)溶液成黑色，加入2-4倍量的氨水(1:1)，形成深黑黃色結(jié)晶，溶液為無色溶液，過濾，用冷水洗滌，再用冰冷的乙醇和乙醚洗滌，空氣干燥，得到二碘二氨合鉑(P載)山)。KI飽和溶液用量?jī)?yōu)選4-6倍量。槲皮素合氨絡(luò)鉑制備的具體步驟將合成的二碘二氨合鉑與槲皮素合成槲皮素合氨絡(luò)鉑取12.5g二碘二氨合鉑(26腿o1)、加入2—4倍量AgN(V溶液，過濾除去AgI。向?yàn)V液中加入1-1.2倍量槲皮素，避光、加熱攪拌20-50小時(shí)，反應(yīng)混合物過濾后，濾液減壓濃縮析出固體，過濾得到棕黑色固體，少量水洗，避光空氣干燥，得到槲皮素合氨絡(luò)鉑。二、式(II)的制備方法如下(一)R二H時(shí)取制備式(I)所得槲皮素合氨絡(luò)鉑適量，加入2-6倍量氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液攪拌溶解，再加入2-6倍量乙醇，靜置，過濾并用乙醇洗滌，得槲皮素合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽。(二)R二為"'—時(shí)①取適量氯亞鉑酸鉀加水?dāng)嚢枞芙?，稱取4-10倍量碘化鉀投入反應(yīng)液中，在20-4(TC水浴下反應(yīng)1-4小時(shí)，得黑色溶液(碘亞鉑酸鉀)。再加入2-3倍量氨水(1:1)，繼續(xù)反應(yīng)2-4小時(shí)，過濾，并用水、乙醇、乙醚洗滌，干燥得黃色粉末，即二碘二氨合鉑(Pt〈NH3)山)。②取步驟①制得的二碘二氨合鉑(Pt(NH3)2I2，)適量、加入2—4倍量AgN03溶液，于20-4(TC下反應(yīng)24-36小時(shí)。濾除碘化銀沉淀，并用水洗滌，得[Pt(NH3)2(H20)J(肌)2無色透明濾液。③取槲皮素溶解于無水乙醇中，攪拌下加入-1.2倍摩爾量的醛水溶液和哌嗪衍生物，20-40'C下反應(yīng)5-10小時(shí)，冷卻至有固體生成，濾集固體，重結(jié)晶，得到槲皮素與哌嗪衍生物的縮合物。④取步驟②制備的[Pt(朋3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液，加入1-1.2倍量步驟③制備的縮合物(用4-8倍量的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液溶解)，60-80'C反應(yīng)24-48小時(shí)，再加入2-6倍量乙醇，靜置、過濾并用乙醇洗滌、千燥，得取代哌嗪基槲皮素合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽。將步④制備的取代哌嗪基槲皮素合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽溶于水，加入2-4倍量的鹽酸溶液，攪拌、靜置，有沉淀生成，過濾并用水、乙醇、乙醚洗滌，得產(chǎn)物取代哌嗪基槲皮素合氨絡(luò)鉑。(三)當(dāng)R為跳R5時(shí):①取適量氯亞鉑酸鉀加水?dāng)嚢枞芙?，稱取5-12倍量碘化鉀投入反應(yīng)液中，在20-4CTC下反應(yīng)l-4小時(shí)，得黑色溶液(碘亞鉑酸鉀)。再加入2—4倍量氨水(1:1)，繼續(xù)反應(yīng)2-4小時(shí)，過濾，并用水、乙醇、乙醚洗滌，抽干得黃色粉末，即二碘二氨合鉑(Pt(NH3)2I2〕。②取步驟①制得的二碘二氨合鉑(Pt(NH3)2I2，)適量、加入2—4倍量AgM)3溶液，于20-4(TC下反應(yīng)24-36小時(shí)。濾除碘化銀沉淀，并用水洗滌，得[Pt(NH丄(H20)J(冊(cè)3)2無色透明濾液。③取槲皮素溶解于無水乙醇中，攪拌下加入等摩爾的R3CH0水溶液和R4R5NH，20-40'C下反應(yīng)5-10小時(shí)，冷卻至有固體生成，濾集固體，重結(jié)晶，得到8—取代胺基烷基槲皮素縮合物。取步驟②制備的[Pt(NH3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液，加入1-1.2倍量步驟③制備的縮合物(用4-8倍量的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液溶解)，60-8(TC反應(yīng)24-48小時(shí)，再加入2-6倍量乙醇，靜置、過濾并用乙醇洗滌、干燥，得8—取代胺基垸基槲皮素合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀i卜.prtr.o⑤將步驟④制備的8—取代胺基烷基槲皮素衍生物合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽溶于水，加入2-4倍量的鹽酸溶液攪拌，靜置，有沉淀生成，過濾并用水、乙醇、乙醚洗滌，得8—取代胺基烷基槲皮素衍生物合氨絡(luò)鉑。上述制備方法中提及的用量均為摩爾比。本發(fā)明目的之三為提供所述鉑類配合物在制備治療癌癥的藥物方面的用途。本發(fā)明還提供含有本發(fā)明鉑配合物的藥物組合物，本發(fā)明所述鉬配合物還可包括其藥學(xué)上可接受的鹽，溶劑化物和相應(yīng)的結(jié)晶形態(tài)的物質(zhì)。本發(fā)明的藥物組合物必要時(shí)可含有藥物可接受的載體。本發(fā)明的組合物，在制成藥劑時(shí)可以制成任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴劑、貼劑、緩釋制劑、控釋制劑。本發(fā)明的制劑，優(yōu)選注射劑型，如凍干粉針劑、無菌粉針、小水針、大輸液、注射用乳劑等。本發(fā)明的藥物組合物，在制成藥物制劑時(shí)，可按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備。本發(fā)明的藥物組合物，在制成藥物制劑時(shí)，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，如黏合劑、填充劑、稀釋劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑、濕潤(rùn)劑和包衣劑等。適用的填充劑包括纖維素、甘露醇、乳糖和其他類似的填充劑。適宜的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯垸酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤(rùn)劑包括十二烷基硫酸鈉。，可通過混合、填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進(jìn)行反復(fù)混合可使活性物質(zhì)分布在整個(gè)使用大量填充劑的組合物中。口服液體制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、口服液、乳劑、糖漿劑，或者可以是一種在使用前可用水或其他適宜的載體復(fù)配的干燥產(chǎn)品。這種液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、硬質(zhì)酸鋁凝膠或氫化食用脂肪；乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(它們可以包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油；防腐劑，例如對(duì)羥基苯甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常規(guī)的調(diào)味劑和著色劑。對(duì)于注射劑，制備的液體劑型含有本發(fā)明的活性物質(zhì)和無菌載體。根據(jù)載體和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是通過將活性物質(zhì)溶解在一種載體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然后密封。輔料例如一種局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑也可以溶解在這種載體中。為了提高其穩(wěn)定性，可在裝入小瓶以后將這種組合物冰凍，并在真空下將水分除去。本發(fā)明的藥物制劑，在制備成藥劑時(shí)可選擇性地加入適合的藥物可接受的載體，所述藥物可接受的藥物載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA二鈉、EDTA鈣鈉、一價(jià)堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖酐、淀粉、蔗糖、甘露醇、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯垸酮、甘油、吐溫80、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。本發(fā)明的藥物制劑在使用時(shí)根據(jù)病人的情況確定用法用量，可每日服1一3次，每次可l一3劑。本發(fā)明的藥物組合物，可以是單位劑量形式，在制成藥劑時(shí)，單位劑量的藥劑可含有本發(fā)明的鉑配合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、和相應(yīng)的結(jié)晶形態(tài)的物質(zhì)O.l—1000mg，占單位制劑總重量的0.1-99.9%，其余為藥學(xué)上可接受的載體。藥學(xué)上可接受的載體以重量計(jì)可以是制劑總重量的0.1-99.9%。本發(fā)明的鉑配合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、和相應(yīng)的結(jié)晶形態(tài)的物質(zhì)可以是它們的堿金屬、堿土金屬或銨類物質(zhì)的鹽，如果必要，也可以是酸式鹽，如鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、甲磺酸、苯磺酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、丁二烯酸、乳酸、乳糖酸、富馬酸等藥學(xué)上常用的酸形成的鹽。溶劑化物可以是水合物，包括一水合物、二水合物、三水合物等。本發(fā)明所用原料的純度只要達(dá)到化學(xué)純以上即可，來源均可從市場(chǎng)購(gòu)得。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)所合成的目標(biāo)配合物體內(nèi)外具有明顯的抑癌作用，活性優(yōu)于現(xiàn)有藥物順鉑，且毒性降低，可以應(yīng)用其治療癌癥。具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例、試驗(yàn)例可更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。〔實(shí)施例l)制備二碘二氨合鉑取氯亞鉑酸鉀20g(48腿o1)加水1000ml在三口燒瓶中攪拌溶解，稱取碘化鉀47g(283ramo1)投入反應(yīng)液中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)、避光室溫反應(yīng)2小時(shí)，得黑色溶液(碘亞鉑酸鉀)。取16ml濃度為7.5mraol/ml氨水(120mmo1)，繼續(xù)避光室溫反應(yīng)2小時(shí)，過濾，并用水(30mlX2次)、乙醇(30mlX2次)、乙醚(30mlX2次)洗滌，抽干得黃色粉末，即二碘二氨合鉑Pt(NH3)山共21.lg，收率93.4%?！矊?shí)施例2)[Pt(NH3)2(H20)2](N03)2取硝酸銀8.16g(48咖ol)和純凈水240ml投入到500ml茄瓶中攪拌，加入實(shí)施例1制備二碘二氨合鉑共lL592g(24mrao1)，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)、避光、室溫反應(yīng)24小時(shí)。濾除碘化銀沉淀，并用水(20mlX3次)洗滌，得[Pt(NH丄(H20)2](N03)2無色透明濾液。(實(shí)施例3)制備槲皮素合氨絡(luò)鉑(II)取實(shí)施例1制備的二碘二氨合鉑12.5g(26咖o1)，加入9.3gAgN03(55咖o1)AgN03溶液，過濾除去AgI。向?yàn)V液中加入7.9g(26誦o1)槲皮素，避光60士5。C攪拌35小時(shí)，反應(yīng)混合物經(jīng)硅膠藻土層過濾后，得溶液，減壓濃縮至15(kl，過濾得到棕黑色固體，少量水洗，避光空氣干燥，得到槲皮素合氨絡(luò)鉑10.9g，收率78%。紅外光譜Max:3422(NH)，1656(C-O)，569(Pt-0)元素分析理論值C(%)34.03;H(%)2.65:N(%)5.29實(shí)測(cè)值C(%)34.27;H(%)2.52;N(%)5.01(實(shí)施例4)槲皮素合氨絡(luò)鉑鈉鹽取實(shí)施例3所得槲皮素鉑配合物0.53g(l隱ol)，加入3ml2Mol/L氫氧化鈉溶液攪拌溶解，繼續(xù)反應(yīng)l小時(shí)，加入10ml無水乙醇，析出沉淀，靜置2小時(shí)，過濾并用無水乙醇洗滌3次、乙醚洗滌2次，得槲皮素合氨絡(luò)鉑鈉鹽0.49g，收率為88.3%。KBr,一i紅外光譜Max-3429(NH)，1658(C=0),578(Pt-0)元素分析理論值C(%)31.";H(%)2.09;N(%)4.89實(shí)測(cè)值C(%)3L33;H(%)2.25;N(%)4.80(實(shí)施例5)制備8-乙基哌嗪亞甲基槲皮素二氨合鉑(II)取槲皮素12.7g(42腿o1)，室溫下溶解于750ml無水乙醇中，攪拌下加入甲醛(45rnrno1)水溶液，5.12g(45mmo1)乙基哌嗪，室溫下反應(yīng)5小時(shí)，冰浴冷卻至5'C有大量固體生成，用丙酮重結(jié)晶，得8-乙基哌嗪亞甲基槲皮素11g。取8-乙基哌嗪亞甲基槲皮素10.9g(25咖01)，加入200ml0.5Mol/L氫氧化鈉溶液(100咖ol)攪拌溶解，加入實(shí)施例2制備的[Pt(NH丄(H20)2](N03)2無色透明濾液25mm。1，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)、避光、6(TC反應(yīng)24小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻至5'C，加入105ml0.5mol/L鹽酸溶液(52.5咖ol)攪拌30分鐘，靜置2小時(shí)，有大量沉淀生成，過濾并依次用水(50mlX2次)、乙醇(50m]X2次)、乙醚(50mlX2次)洗滌，得產(chǎn)物共7.9g,收率為51.5%。if/rm—1紅外光譜M'1X:3429(NH)，1653(00)，552(Pt-0)元素分析理論值C(%)40.49;H(%)3.83;N(%)8.59實(shí)測(cè)值C(%)4Q.27;H(%)3.92;N(%)8.65(實(shí)施例6)制備8-異丙基哌嗪乙基槲皮素二氨合鉑(II)取槲皮素6.4g(21mmo1)，室溫下溶解于300ml無水乙醇中，攪拌下加入乙醛(25mmo1)水溶液，3.2g(25ramol)異丙基哌嗪，室溫下反應(yīng)6小時(shí)，冰浴冷卻至5。C有大量固體生成，用丙酮重結(jié)晶，得8-異丙基哌嗪乙基槲皮素6.lg。取8-異丙基哌嗪乙基槲皮素5.8g(12.5廳1)，加入IO(M0.5mol/L氫氧化鈉溶液(50m鵬l)攪拌溶解，加入實(shí)施例2制備的[Pt(NH丄(H20)2](N03)2無色透明濾液12mmo1，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)、避光、6(TC反應(yīng)20小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻至5'C，加入55ml0.5mol/L鹽酸溶液攪拌30分鐘，靜置2小時(shí)，有沉淀生成，過濾并用水(20mlX2次)、乙醇(20mlX2次)、乙醚(20mlX2次)洗滌，得產(chǎn)物共5.lg，收率為61%。TRKBr/W1紅外光譜Max3422(NH)，1656(C=0),574(Pt-0)元素分析理論值:C(%)42.35;H(%)4.26;N(%)8.24實(shí)測(cè)值C(%)42.18;H(%)4.39;N(%)8.20(實(shí)施例7)制備8-羥乙基哌嗪亞甲基一槲皮素二氨合鉑(II)取槲皮素4.4g(14rano1)，室溫下溶解于260ml無水乙醇中，攪拌下加入甲醛(15mio1)水溶液和羥乙基哌嗪(15腿o1)，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，冰浴冷卻至5'C有固體生成，用丙酮重結(jié)晶，得8-羥乙基哌嗪亞甲基槲皮素4.1￡。取8-羥乙基哌嗪亞甲基槲皮素3.5g(7.9咖o1)，加入60ml0.5mol/L氫氧化鈉溶液(30mmo1)攪拌溶解，加入實(shí)施例2制備的[Pt(NH3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液7.9ramo1，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)、避光、6(TC反應(yīng)15小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻至5'C,加入40ml0.5mol/L鹽酸溶液攪拌20分鐘，靜置2小時(shí)，有沉淀生成，過濾并用水(10mlX2次)、乙醇(10mlX2次)、乙醚(10mlX2次)洗滌，得產(chǎn)物共2.9g，收率為55%。KBr,一l紅外光譜Max:3426(NH),1658(00),572(Pt-0)元素分析理論值C(%)39.34;H(%)4.17;N(%)8.35實(shí)測(cè)值C(%)39.44;H(%)4.02;N(%)8.29(實(shí)施例8〕制備8-(N-甲基-N-乙基胺基)亞甲基一槲皮素二氨合鉑(II)取槲皮素4.5g(15隱o1)，于室溫下溶解于280ml無水乙醇中，攪拌下加入甲醛(18誦o1)水溶液和CH3NHCH2CH3(18rnmo1)，室溫下反應(yīng)5小時(shí)，冰浴冷卻至5"C有固體生成，用丙酮重結(jié)晶，得8-(N-甲基-N-乙基胺基)亞甲基一槲皮素4.lg。取8-(N-甲基-N-乙基胺基)亞甲基—槲皮素3.7克(lO咖ol)，加入70ml0.5raol/L氫氧化鈉溶液攪拌溶解，加入實(shí)施例2制備的[Pt(朋3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液lOmmol，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)、避光、55。C反應(yīng)18小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻至5'C，加入45ml0.5mol/L鹽酸溶液攪拌30分鐘，靜置2小時(shí)，有沉淀生成，過濾并用水(10mlX2次)、乙醇(10mlX2次)、乙醚(10ralX2次)洗滌，得產(chǎn)物共3.lg，收率為52%。mKBr/cm—1紅外光譜Max3425(NH)，1655(C=0),577(Pt-0)元素分析理論值C(%)37.94;H(%)3.99;N(°/。)6.99實(shí)測(cè)值C(°/。)37.87;H(%)4.04;N(%)7.05(實(shí)施例9〕制備8-(N，N-二甲基胺基)乙基一槲皮素二氨合鉑(II)取槲皮素2.7g(9咖o1)，室溫下溶解于150ml無水乙醇中，攪拌下加入乙醛(lOmmol)水溶液和CftNHCH3(lOmmol)，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，冰浴冷卻至5'C有固體生成，用丙酮重結(jié)晶，得8-(N，N-二甲基胺基)乙基一槲皮素2.5g。取8-(N，N-二甲基胺基)乙基一槲皮素2.4克(6.4咖o1)，加入50ml0.5mol/L氫氧化鈉溶液攪拌溶解，加入實(shí)施例2制備的[Pt(NH》2(H20)2](NO丄無色透明濾液6.5臓o1，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)、避光、65。C反應(yīng)16小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻至5'C加入40ml0.5raol/L鹽酸溶液攪拌30分鐘，靜置2小時(shí)，有沉淀生成，過濾并用水(10mlX2次)、乙醇(10mlX2次)、乙醚(10ralX2次)洗滌，得產(chǎn)物共2.2g，收率為56%。IRKBr/cm-i紅外光譜Max:3426(NH)，1654(C=0),569(Pt-0)元素分析理論值C(%)37.94;H(%)3.99;N(%)6.99實(shí)測(cè)值C(%〉38.04;H(%)4.01;N(%)6.96(試驗(yàn)例1〕抗肝癌活性研究取46周齡、體重n20g雄性裸小鼠110只，在右腋窩皮下接種濃度為1X107ml的人肝癌細(xì)胞株單細(xì)胞懸液0.2ml，接種24小時(shí)后將小鼠隨機(jī)分為11組，每組分別靜脈給順鉑3、5mg/kg(陽性對(duì)照組)、等體積的生理鹽水(陰性對(duì)照組)、實(shí)施例4化合物組3、5、10、15mg/kg、實(shí)施例7化合物組3、5、10、15mg/kg，連續(xù)給藥隔天給藥一次，給藥4次，均為腹腔注射給藥，10天后取出皮下瘤體稱重，計(jì)算抑瘤率。抑瘤率的計(jì)算公式.對(duì)照組平均瘤重一給藥組平均瘤重抑瘤率％=X100對(duì)照組平均瘤重表1.目標(biāo)化合物抗肝癌活性研究結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>*與順鉑5mg組比較，p<0.05注由于溶解度限制，靜脈注射給藥順鉑對(duì)裸鼠的最大給藥劑量為5mg/kg。(試驗(yàn)例2〕抗結(jié)腸癌活性取體重1720g、46周齡雄性裸小鼠110只，在左前肢皮下接種濃度為lX10Vnd的人結(jié)腸癌細(xì)胞株單細(xì)胞懸液50W，5天后將小鼠隨機(jī)分為ll組，每組分別靜脈給順鉑3、5mg/kg(陽性對(duì)照組)、等體積的生理鹽水(陰性對(duì)照組)、實(shí)施例4化合物組3、5、10、15呢/kg、實(shí)施例7化合物組3、5、10、15mg/kg，連續(xù)給藥3天，均為腹腔注射給藥，停藥24小時(shí)后取出皮下瘤體稱重，計(jì)算抑瘤率。表2.目標(biāo)化合物抗結(jié)直腸癌活性研究結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>*與順鉑5mg組比較，p<0.05〔試驗(yàn)例3)毒性研究取體重120160g、6周齡大鼠100只，隨機(jī)分為10組，每組分別靜注順鉑5mg/kg(陽銷鈾伊伊伊伊伊伊伊伊^M實(shí)實(shí)實(shí)實(shí)實(shí)實(shí)實(shí)實(shí)性對(duì)照組)、等體積的生理鹽水(陰性對(duì)照組)、實(shí)施例4化合物組5、10、15、20mg/kg、實(shí)施例7化合物組5、10、15、20mg/kg，連續(xù)給藥5天。大鼠死亡后立即解剖。試驗(yàn)前后觀察大鼠一般情況，結(jié)束后處死大鼠，稱取胸腺、脾臟濕重，取肝臟、腎臟、脊髓制作切片，HE染色后鏡檢，觀察對(duì)這些臟器的毒性。用藥后，可觀察到大鼠的攝食和活動(dòng)明顯減少，其中胸腺、脾臟重量見下表-.表3.目標(biāo)化合物對(duì)免疫器官的影響研究結(jié)果化合物~劑量(mg/kg)~脾(g/100g7x土sd)~",泉(g/lOOOg;x士sd)—承與順鉑5mg組比較，p<0.05，林與順鉑5mg組比較p〈0.01(制劑實(shí)施例1)實(shí)施例3化合物注射液的制備處方實(shí)施例3化合物10.0g亞硫酸鈉1.0g加氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至7.08.0注射用水加至2000ml制成1000支工藝①取1600nil注射用水置配液缸中，加入處方全量的亞硫酸鈉，攪拌至溶解；②加入處方量的實(shí)施例3化合物，攪拌，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至7.08.0，加注射用水至全量；先用0.45!im的微孔濾膜過濾，再用0.22的微孔濾膜精濾至澄明；③將濾液灌封于西林瓶中，壓蓋，貼標(biāo)簽，包裝，檢驗(yàn)合格后即得成品。〔制劑實(shí)施例2〕實(shí)施例3化合物凍干粉針劑的制備實(shí)施例3化合物30.0g甘露醇150.0g用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至7.08.0注射用水加至3000ral0.312±0.055林0.267±0.0950.302±0.092林0.297±0.063**0.290±0.082**0.281±0.106*0.296±0,087*0.287±0.075*0.279±0.0650.270±0.0860.921±0.295*0.658±0.3150.913±0.308*0.904±0.258*0.812±0.3250.746±0.2430.915±0.295*0.865±0.243*0.736±0.3120.665±0.32444447777白屈例例例例例例例例六工爐實(shí)S實(shí)實(shí)實(shí)錢鄉(xiāng)制成1000支工藝①取2500ml注射用水置配液缸中，加入處方全量甘露醇，攪拌至溶解；②加入處方量的實(shí)施例3化合物，攪拌并用氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至7.08.0，加注射用水至全量；先用0.45ym的微孔濾膜過濾，再用0.22微孔濾膜精濾至澄明；③將濾液灌封于西林瓶中；冷凍干燥(預(yù)凍，使溫度下降至一4(TC，4小時(shí)后以每分鐘0.15'C的升溫速率將溫度升至一5°C，在此溫度下升華干燥16小時(shí)，再以每分鐘0.4'C的升溫速率將溫度升至4(TC，在此溫度下干燥710小時(shí))；(D壓蓋，貼標(biāo)簽，包裝，檢驗(yàn)合格后即得成品。(制劑實(shí)施例3)實(shí)施例5化合物凍干粉針劑的制備實(shí)施例5化合物25g普朗尼克(F-68)2g甘露醇125g注射用水加至2500ml制成1000支工藝①取2000nil注射用水置配液缸中，加入處方全量的普朗尼克(F-68)和甘露醇，攪拌至溶解；②加入處方量的實(shí)施例5化合物，攪拌至溶解，加注射用水至全量；先用0.45pm的微孔濾膜過濾，再用0.22iira的微孔濾膜精濾至澄明；③將濾液灌封于西林瓶中；④冷凍干燥(預(yù)凍，使溫度下降至一4(TC，4小時(shí)后以每分鐘0.15。C的升溫速率將溫度升至一5。C，在此溫度下升華干燥i6小時(shí)，再以每分鐘o.4t:的升溫速率將溫度升至4(rc，在此溫度下干燥710小時(shí))；(D壓蓋，貼標(biāo)簽，包裝，檢驗(yàn)合格后即得成品。(制劑實(shí)施例4)實(shí)施例8化合物片劑的制備實(shí)施例8化合物20.0g乳糖45.0g微晶纖維素30.0g羧甲基纖維素鈉4.0g硬脂酸鎂l.Og3%聚維酮溶液適量制成1000片工藝將實(shí)施例8化合物粉碎，過80目篩，取處方量化合物與乳糖、微晶纖維素，混合均勻，加3%聚維酮溶液制軟材，過18目篩制顆粒，5(TC以下通風(fēng)干燥30—40分鐘后整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片即得。權(quán)利要求1、一個(gè)槲皮素鉑類配合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式(I)2、一類槲皮素衍生物鉑類配合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式(II):(II)一/~\—其中R代表H,—,R3NR4R5。R代表(CH2),n=l-4;R2代表H，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，羥甲基、羥乙基、羥丙基。Rs代表(CH2),n=l-4;R4和Rs代表甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基。仏和R5可以相同或不同。虬和A2可以是H、Na+、K+、NH:，A,禾口&可以相同或不同，R、A!、^不同時(shí)為H。一/"~\一3、權(quán)利要求2的鉑配合物，當(dāng)R為哌嗪衍生物"一、^/^一、寸，Ri優(yōu)選CH2、CH2CH2;&優(yōu)選甲基、乙基、異丙基、羥乙基。A,和A2優(yōu)選H、Na+，A,和A2可以相同或不同。當(dāng)R為R肌R5時(shí),R3優(yōu)選CH2、CH線;1^和Rs可以相同或不同，優(yōu)選甲基、乙基、丙基。^和A2優(yōu)選H、Na+，A^aA2可以相同或不同。4、權(quán)利要求1的鉑配合物的制備方法，依次包括以下步驟(1)先將氯亞鉑酸鉀合成中間體二碘二氨合鉑取含有20g氯亞鑰酸鉀(K2(PtCl4)，48ramo1)水溶液，與4_10倍量的KI飽和溶液混合，水浴加熱，反應(yīng)溶液成黑色，加入2-3倍量的氫氧化氨溶液，形成深黑黃色結(jié)晶，溶液為無色溶液，過濾，用冷水洗滌，再用冰冷的乙醇和乙醚洗滌，空氣干燥，得到二碘二氨合鉑(Pt(NH3)2I2)。KI飽和溶液優(yōu)選4-6倍量。(2)將合成的二碘二氨合鉑與槲皮素合成槲皮素合氨絡(luò)鉑依次加入12.5g二碘二氨合鉑(Pt(NH》山，26mmol)、1-1.5倍量AgN0"過濾除去AgI。向?yàn)V液中加入l-l.2倍量槲皮素，避光、加熱攪拌20-50小時(shí)，反應(yīng)混合物過濾后，得溶液，減壓濃縮析出固體，過濾得到棕黑色固體，少量水洗，避光空氣干燥，得到槲皮素合氨絡(luò)鉑。5、權(quán)利要求4制備所得槲皮素鉑配合物適量，加入2-6倍量氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液攪拌溶解，再加入2-6倍量乙醇，靜置，過濾并用乙醇洗滌，得槲皮素合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀6、權(quán)利要求2或3的鉑配合物的制備方法，依次包括以下步驟(1)當(dāng)R為"—w^^—時(shí)①取適量氯亞鉑酸鉀加水?dāng)嚢枞芙?，稱取4-10倍量碘化鉀投入反應(yīng)液中，在20-4CTC水浴下反應(yīng)1-4小時(shí)，得黑色溶液(碘亞鉑酸鉀)。再加入2-3倍量氨水，繼續(xù)反應(yīng)2-4小時(shí)，過濾，并用水、乙醇、乙醚洗滌，干燥得黃色粉末，即二碘二氨合鉑(Pt(NH3)2I2〕。②取步驟①制得的二碘二氨合鉑(Pt(NH3)2I2,)適量、加入H.5倍量AgN03，20-40'C下反應(yīng)24-36小時(shí)。濾除碘化銀沉淀，并用水洗滌，得[Pt(NH3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液。③取槲皮素溶解于無水乙醇中，攪拌下加入1-1.2倍摩爾量的醛水溶液和哌嗪衍生物，20-4(TC下反應(yīng)5-10小時(shí)，冷卻至有固體生成，濾集固體，重結(jié)晶，得到槲皮素與哌嗪衍生物的縮合物。取步驟②制備的[Pt(NH丄(H20)2](N03)2無色透明濾液，加入1-1.2倍量步驟③制備的縮合物(用4-8倍量的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液溶解)，60-80'C反應(yīng)24-48小時(shí)，再加入2-6倍量乙醇，靜置、過濾并用乙醇洗滌、干燥，得槲皮素哌嗪基衍生物合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽。◎?qū)⒉襟E④制備的槲皮素哌嗪基衍生物合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽溶于水，加入2-4倍量的鹽酸溶液，攪拌、靜置，有沉淀生成，過濾并用水、乙醇、乙醚洗滌，得產(chǎn)物哌嗪基衍生物槲皮素合氨絡(luò)鉑。(2)當(dāng)R為R肌R5時(shí):①取適量氯亞鉑酸鉀加水?dāng)嚢枞芙?，稱取8-14倍量碘化鉀投入反應(yīng)液中，在20-40。C下反應(yīng)1-4小時(shí)，得黑色溶液(碘亞鉑酸鉀)。再加入2—3倍量氨水，繼續(xù)反應(yīng)2-4小時(shí)，過濾，并用水、乙醇、乙醚洗滌，抽干得黃色粉末，即二碘二氨合鉑(Pt(NH3)2I2)。②取步驟①制得的二碘二氨合鉑〔Pt(NH3)2I2,)適量、加入1-1.5倍量Ag亂,20-40'C下反應(yīng)24-36小時(shí)。濾除碘化銀沉淀，并用水洗滌，得[Pt(NH3)2(H20)2](恥3)2無色透明濾液。③取槲皮素溶解于無水乙醇中，攪拌下加入等摩爾的R3CHO水溶液和R4R5NH，20-4(TC下反應(yīng)5-10小時(shí)，冷卻至有固體生成，濾集固體，重結(jié)晶，得到縮合物。取步驟②制備的[Pt(NH3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液，加入1-1.2倍量步驟③制備的縮合物(用4-8倍量的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液溶解)，60-80"C反應(yīng)24-48小時(shí)，再加入2-6倍量乙醇，靜置、過濾并用乙醇洗滌、干燥，得8—取代胺基垸基槲皮素衍生物合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽。⑤將步驟④制備的8—取代胺基烷基槲皮素衍生物合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽溶于水，加入2-4倍量的鹽酸溶液攪拌，靜置，有沉淀生成，過濾并用水、乙醇、乙醚洗滌，得8—取代胺基垸基槲皮素衍生物合氨絡(luò)鉑。上述制備方法中提及的用量均為摩爾比。7、以權(quán)利要求l-3任何一項(xiàng)鉑配合物為活性成分的藥物組合物。8、權(quán)利要求7所述的組合物，是注射劑。9、權(quán)利要求l一3所述任一鉑類配合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了涉及醫(yī)藥
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中一類新的具有藥用價(jià)值的槲皮素或其衍生物與鉑的配合物及其鹽類，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式(I)或(II)，本發(fā)明還公開了涉及了一種前述配合物及其鹽類的制備方法和所述配合物及其鹽類在制備治療癌癥的藥物方面的用途。文檔編號(hào)C07F15/00GK101475596SQ20081018312公開日2009年7月8日申請(qǐng)日期2008年12月12日優(yōu)先權(quán)日2007年12月13日發(fā)明者浩丁,閻亞矢,陳小平申請(qǐng)人:北京嘉事聯(lián)博醫(yī)藥科技有限公司