專利名稱：：一種從獨一味中同時制備高純度5-羥基-獨一味素a苷和獨一味素a苷提取物的方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明屬醫(yī)藥
技術(shù)領域：
，具體是涉及一種從植物獨一味中同時分離純化作為對照品的單體化合物sesamoside和phlorigidosideC的方法。
背景技術(shù)：
：獨一味[lamiophlomisrotata(benth.)kudo]是藏、蒙、納西等民族民間草藥，具有止血、鎮(zhèn)痛、活血化瘀、抗菌消炎、增強免疫力等作用。在我國一千多年前的藏醫(yī)學名著《四部醫(yī)典》和《晶珠本草》中就已有記載。獨一味生長于海拔27004500m的高山草甸、河灘等處。主產(chǎn)于西藏、青海、云南、四川、甘肅等省區(qū)，藏醫(yī)將其用于骨髓炎、關(guān)節(jié)黃水病、骨折、跌傷、槍傷等。中國藥典2005年版一部收錄了獨一味藥材，但其中作為藥材質(zhì)量控制的關(guān)鍵指標的含量測定項，釆用測定藥材中木樨草素的含量。黃酮類成分具有多方面的生理活性，但獨一味中的黃酮類是否是其止血、鎮(zhèn)痛的主要藥學成分還有待于進一步研究。有研究表明獨一味中的環(huán)烯醚萜類成分是其止血、鎮(zhèn)痛作用主要藥效成分，參見賈正平等人，解放軍藥學學報，Vol21(2005)，272274。獨一味中的環(huán)烯醚萜苷包括至少26種結(jié)構(gòu)類似的化合物，其中sesamoside及phlorigidosideC是獨一味中含量較高的2個環(huán)烯醚萜苷類成分。獨一味地上部分用乙醇回流提取，所得乙醇流浸膏用丙酮提取，丙酮提取物經(jīng)聚酰胺層析，水洗脫部分再經(jīng)反復硅膠柱層析，分離得到了sesamoside，參見張承忠等人，中草藥,Vol23(1992),509-510。該方法使用常規(guī)的硅膠柱層析的方法分離純化大極性環(huán)烯醚萜苷類成分sesamoside，分離效果不佳，產(chǎn)品純度低，而且往往會存在較大的損失；獨一味根依次用95%乙醇和50%乙醇超聲提取，50Q/。乙醇提取物用D-1400大孔樹脂純化，10%乙醇洗脫部分經(jīng)硅膠柱層析純化，再經(jīng)ODS-A反相填料純化，制備得到了sesamoside以及phlorigidosideC，參見Jun-JieTan等人，Helv.Chim.Acta，Vol90(2007)，143-148。該方法存在以下局限性環(huán)烯醚萜苷類成分極性較大，具有良好的水溶性，它們在乙醇-水組成混合溶劑里也具有很大溶解度。研究表明95%的乙醇對獨一味環(huán)烯醚萜苷的提取效果也較好，其干膏收率可達到13%，干膏中環(huán)烯醚萜苷類成分sesamoside及phlorigidosideC的含量分別可達到4.7。/Q和3.P/()。因此先用95%乙醇提取獨一味藥材，會造成sesamoside及phlorigidosideC的較大損失。中國專利CN1660163A公開了一種從獨一味中提取總環(huán)烯醚萜苷的方法，該方法采用獨一味為原料，以0-95。/。乙醇溶液在20-7(TC溫浸提取，提取液濃縮至浸膏狀，加10-15倍30-卯t:水溶解，放冷，濾過，除去脂溶性成分得提取液，提取液加入聚酰胺柱，合并流出液和水洗液上大孔樹脂柱，10-95%的乙醇洗脫大孔樹脂柱，得到總環(huán)烯醚萜苷。該方法得到的總環(huán)烯醚萜苷類為組成復雜的混合物體系，未報道是否含有sesamoside及phlorigidosideC。Sesamoside在其它植物中也有發(fā)現(xiàn)螃蟹甲全草，粉碎后用95%乙醇提取，減壓蒸餾回收提取液，得粗提物。粗提物經(jīng)處理后分別以石油醚、氯仿、乙酸乙酯及正丁醇萃取，正丁醇萃取部分通過硅膠柱層析則分別得到了化合物sesamoside，參見高詠莉等人，中藥材，Vol30(2007)，1239-1242;取自然干燥的糙蘇根，粉碎后用95%的乙醇加熱回流提取3次，每次6h。提取液減壓濃縮，得浸膏，浸膏加水混懸后，分別用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇進行萃取，醋酸乙酯萃取物經(jīng)硅膠柱，凝膠滲透色譜反復分離，制備高壓液相色譜純化，得到化合物sesamoside，參見劉普等人，藥學學報，Vol42(2007),401-404;蘿卜秦艽根粗粉，用95%乙醇回流提取，每次2h，合并提取液，減壓濃縮得浸膏。浸膏用水溶解并稀釋后，經(jīng)D101型大孔吸附樹脂吸附，分別用10%，40°/。，95%乙醇洗脫。40%乙醇洗脫物浸膏經(jīng)減壓硅膠柱色譜，氯仿/甲醇梯度洗脫，所得各部分再經(jīng)過反復硅膠柱色譜和制備高效液相色譜分離，分得到化合物sesamoside，參見余振喜等人，中國中藥雜志，Vol31(2006)，656-658;糙蘇地下部分藥粉，先用95%的乙醇在微沸狀態(tài)下浸提4次，減壓濃縮后將浸提物懸浮于水中依次用乙酸乙酯和正丁醇分別進行萃取，正丁醇萃取物經(jīng)硅膠柱層析，用氯仿/甲醇梯度洗脫，TCL檢測合并為9個流分(Frl-9)。Fr-3經(jīng)硅膠柱層析，氯仿/甲醇梯度洗脫，得到sesamoside，參見楊永利等人，蘭州大學學報，Vol40(2004)，67-71。以上制備工藝采用植物化學的研究方法，對sesamoside和phlorigidosideC的提取及純化工藝均未做深入研究，研究水平也局限于實驗室規(guī)模，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。重復上述方法，分離得到的sesamoside和phlorigidosideC的純度經(jīng)檢査，不能達到國家標準。同時，市場上沒有符合國家標準的sesamoside及phlorigidosideC對照品在銷售。在前人研究的基礎上，發(fā)明人針對目前該技術(shù)存在的不足，經(jīng)反復研究探索，終于發(fā)明了一種工藝簡單，工業(yè)上可行的從獨一味地上部分同時分離純化sesamoside和phlorigidosideC的方法。sesamoside和phlorigidosideC的化學結(jié)構(gòu)式如下4SesamosidePhlorigidosideC
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種從獨一味中同時提取純化可以作為對照品的sesamoside和phlorigidosideC的方法。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的(1)提取獨一味粗粉，加6-12倍，50-80%的乙醇，50-8(TC溫浸，提取3次，每次l-3小時，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇，得濃縮液。(2)聚酰胺純化將步驟(1)得到的濃縮液加入聚酰胺柱上，用3-5BV水洗脫，收集上柱流出液和水洗脫液，得混合液。(3)大孔樹脂純化將步驟(2)得到的混合液加入大孔樹脂柱上，先用5-10BV水洗脫，再用3-5BV30-80。/。的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至干，得粗品。(4)液相色譜制備系統(tǒng)純化將步驟(3)得到的粗品經(jīng)液相色譜制備系統(tǒng)RP-C18柱純化，甲醇-水(20-35%)洗脫，檢測波長237nm，分別收集保留時間為9-17min和11-19min的流份，減壓濃縮，冷凍干燥，即得。本發(fā)明所述的液相色譜制備系統(tǒng)純化包括中壓或高壓液相色譜制備系統(tǒng)。本發(fā)明所述的中壓或高壓液相色譜制備系統(tǒng)采用RP-C18柱。本發(fā)明的優(yōu)點在于(1)該方法制備得到的sesamoside和phlorigidosideC，純度分別達到了98.85%和99.37%。該方法是首次被提出，使用該方法所得產(chǎn)物首次達到國家含量測定用對照品的質(zhì)量要求；(2)該方法采用中壓或高壓液相色譜制備系統(tǒng)，省去了硅膠柱層析的步驟，操作簡單，顯著減少了sesamoside和phlorigedosideC的損失；(3)該方法能夠從獨一味中同時分離純化得到sesamoside和phlorigidosideC兩種物質(zhì)，這一工藝大大節(jié)約了成本，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。附sesamoside禾PplorigidosideC的碳譜、氫譜數(shù)據(jù)如下表:sesamoside和plorigidosideC的碳譜數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>圖1是本發(fā)明Sesamoside的高效液相純度檢查圖，經(jīng)高效液相檢測，Sesamoside純度達至U99.85%。圖2是本發(fā)明PhlorigidosideC的高效液相純度檢査圖，經(jīng)高效液相檢測，Phlorigidoside純度達到99.37%。具體實施方式實施例一(1)提取獨一味粗粉100g，加6倍量，50%的乙醇，5(TC溫浸，提取3次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇，濃縮液，濾過，得相對密度為1.05的濃縮液300ml。(2)聚酰胺純化將濃縮液加入聚酰胺柱上，用3BV水洗脫，收集上柱流出液和水洗脫液，得混合液600ml。(3)大孔樹脂純化混合液加入AB-8大孔樹脂柱上，先用5BV水洗脫，再用3BV30。/。的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至干，得粗提物10.3g。(4)液相色譜制備系統(tǒng)純化粗提物經(jīng)中壓液相色譜制備系統(tǒng)RP-C18柱純化，甲醇-水(25%)洗脫，檢測波長237nm，分別收集保留時間為14min禾D16min的流份，減壓濃縮，冷凍干燥，即得sesamoside，312mg和phlorigidosideC，285mg。實施例二(1)提取獨一味粗粉100g，加8倍量，60%的乙醇，7(TC溫浸，提取3次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇，得相對密度為1.05的濃縮液300ml。(2)聚酰胺純化將濃縮液加入聚酰胺柱上，用5BV水洗脫，收集上柱流出液和水洗脫液，得混合液800ml。(3)大孔樹脂純化混合液加入XAD-1600大孔樹脂柱上，先用8BV水洗脫，再用5BV70。/。的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至干，得粗提物11.9g。(4)液相色譜制備系統(tǒng)純化粗提物經(jīng)中壓液相色譜制備系統(tǒng)RP-C18柱純化，甲醇-水(20%)洗脫，檢測波長237nm，分別收集保留時間為llmin禾P13min的流份，減壓濃縮，冷凍干燥，即得sesamoside，345mg和phlorigidosideC，296mg。實施例三(1)提取獨一味粗粉100g，加10倍量，80%的乙醇，8(TC溫浸，提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇，得相對密度為1.10的濃縮液140ml。(2)聚酰胺純化將粗提液1加入聚酰胺柱上，用5BV水洗脫，收集上柱流出液和水洗脫液，得混合液640ml。(3)大孔樹脂純化濃縮液加入XAD-16大孔樹脂柱上，先用IOBV水洗脫，再用4BV80。/。的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至干，得粗提物11.9g。(4)液相色譜制備系統(tǒng)純化粗提物經(jīng)中壓液相色譜制備系統(tǒng)RP-C18柱純化，甲醇-水(35%)洗脫，檢測波長237nm，分別收集保留時間為6min和9min的流份，7減壓濃縮，冷凍干燥，即得sesamoside，345mg和phlorigidosideC，296mg。實施例四(1)提取獨一味粗粉100g，力[]8倍量，60%的乙醇，70。C溫浸，提取3次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇，得相對密度為1.05的濃縮液300ml。(2)聚酰胺純化將濃縮液加入聚酰胺柱上，用5BV水洗脫，收集上柱流出液和水洗脫液，得混合液800ml。(3)大孔樹脂純化混合液加入moi大孔樹脂柱上，先用5BV水洗脫，再用4BV70%的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至干，得粗提物10.8g。(4)液相色譜制備系統(tǒng)純化粗提物經(jīng)高壓液相色譜制備系統(tǒng)RP-C18柱純化，甲醇-水(20%)洗脫，檢測波長237nm，分別收集保留時間為6min和9min的流份，減壓濃縮，冷凍干燥，即得sesamoside，365mg和phlorigidosideC，294mg。權(quán)利要求1、一種從獨一味中同時制備高純度sesamoside和phlorigidosideC提取物的方法，包括以下步驟(1)提取獨一味粗粉，加6-12倍50-80％的乙醇，50-80℃溫浸提取3次，每次1-3小時，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇，得濃縮液；(2)聚酰胺純化將步驟(1)得到的濃縮液加入聚酰胺柱上，用3-5BV水洗脫，收集上柱流出液和水洗脫液，得混合液；(3)大孔樹脂純化將步驟(2)得到的混合液加入大孔樹脂柱上，先用5-10BV水洗脫，再用3-5BV30-80％的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至干，得粗品；(4)液相色譜制備系統(tǒng)純化將步驟(3)得到的粗品經(jīng)液相色譜制備系統(tǒng)純化，以20-35％的甲醇-水進行梯度洗脫，檢測波長237nm，分別收集保留時間為9-17min和11-19min的流份，減壓濃縮，冷凍干燥，即得。2、如權(quán)利要求1所述的同時制備高純度sesamoside和phlorigidosideC提取物的方法，其特征在于其中的第(4)步采用的液相色譜制備系統(tǒng)包括中壓或高壓液相色譜制備系統(tǒng)。3、如權(quán)利要求2所述的同時制備高純度sesamoside和phlorigidosideC提取物的方法，其特征在于所述的中壓或高壓液相色譜制備系統(tǒng)采用RP-C18柱。4、如權(quán)利要求1所述的同時制備高純度sesamoside和phlorigidosideC提取物的方法，其特征在于制備所得的sesamoside和phlorigidosideC純度分別達到了98.85%和99.37%，符合國家含量測定用對照品的質(zhì)量要求。全文摘要本發(fā)明提供了一種同時制備高純度sesamoside和phlorigidosideC提取物的方法，該方法采用獨一味為原料，以乙醇溶液進行溫浸提取，濃縮后依次經(jīng)聚酰柱純化和大孔樹脂純化，最后再經(jīng)液相色譜制備系統(tǒng)進行純化，得高純度sesamoside和phlorigidosideC提取物，二者的濃度分別達到了98.85％和99.37％，符合國家含量測定用對照品的質(zhì)量要求。本發(fā)明生產(chǎn)環(huán)節(jié)省去了硅膠柱層析的步驟，操作簡單，顯著減少了sesamoside和phlorigedosideC的損失，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。文檔編號C07H17/00GK101481398SQ200810182239公開日2009年7月15日申請日期2009年2月23日優(yōu)先權(quán)日2009年2月23日發(fā)明者達何,斌周,孫田江,李浩東,玄振玉,波金,陸宏國,陳國俊,黃孝春申請人:揚子江藥業(yè)集團有限公司