專利名稱：：(s)-1-甲基-3-苯基哌嗪的立體選擇性合成的制作方法(S)-1-甲基-3-苯基哌溱的立體選擇性合成本發(fā)明涉及新穎原料和其在通過酶水解外消旋l-曱基-3-苯基哌嗪的酯制備(S)-l-甲基-3-苯基哌噪或(R)-l-甲基-3-苯基哌溱的方法中的用途。為得到用于S-米氮平的立體選擇合成路線的光學活性原料l-甲基-3-苯基哌溱(參見Wieringa等人，W02005/005410)，需要制備高對映體純度的(S)-1-曱基-3-苯基哌嗪的有效方法。生物催化是制備光學活性化合物的很好手段。在很溫和的條件下，酶通常顯示化學選擇性、對映選擇性和區(qū)域選擇性。此外，生物催化使得可以使用在有機化學中幾乎沒有等價手段的方法。這方面的實例是，在犧牲一些產(chǎn)率的情況下，消耗不希望的對映體以達到高至99。/。ee(對映體過量)的中等立體選擇性。生物催化并不總是絕對選擇性的。但通過適當?shù)倪x擇酶并隨后根據(jù)對潛在機理的理解進行優(yōu)化可以得到良好的結果。最終結果可以比標準化學方法更簡單。按照流程1的ratl-甲基-3-苯基哌溱的立體選擇性酶酰化嘗試失敗了，因為使用高活性的丁酸三氟乙基酯和大量的各種酶在高至55。C的溫度下沒有可觀察到的反應，盡管發(fā)表的實例(0rsat，等人，/.j邁.1996(118)712.;Morgan等人；/.Org.C力e瓜2000(65)5451;Breen，7b^ra力edro/7..h/邁/i7"/y2004(15)1427)中使用酶和?；w的良平衡組合成功進行了對映選擇性的酰化。Hu等人W7^.2005(7)4329)發(fā)現(xiàn)，用草氨酸酯基團的酶水解來拆分仲胺是可行的(流程2)。將酯與酸產(chǎn)物分離以及草氨酸基團裂解后，可以得到所述胺的兩種對映體。獨有特征是用于此拆分的遠端草氨酸酯基團的用途，同時低反應性的酰胺鍵不^:轉化。其中Ri是曱基、乙基、正丙基、異丙基、芐基或2-鹵代乙基(比如2-氯-乙基和2,2,2-三氟乙基)，該化合物在新穎方法中的用途是獨特的，所述方法通過這種化合物的酶水解制備分離的(S)-和(R)-1-曱基-3-苯基哌喚。盡管Hu等人觀察到灰色鏈霉菌(Streptomycesgriseus)的蛋白酶對苯基哌啶作用較小，本發(fā)明提供通過酶水解上面定義的化合物隨后分離水解產(chǎn)物并裂解草氨酸基團來制備(s)-和(R)-1-甲基-3-苯基哌溱的方法，由此灰色鏈霉菌蛋白酶用作酶水解中的酶。外消旋1-曱基-3-苯基哌溱的(Cl-C3)烷基-、節(jié)基-或2-鹵代乙基-草氨酸酯或者任意程度的光學活性混合物可以用作起始化合物以得到高光學活性純度的(S)-或(R)-1-曱基-3-苯基哌溱。(Cl-C3)烷基是指曱基、乙基、正丙基和異丙基。使用優(yōu)化的方案，目前可以以99.8%的ee和約98%的純度得到總產(chǎn)率36%的(5)-1-曱基-3-苯基哌溱?；疑溍咕鞍酌甘呛艽蟮乃饷讣易逯械拿浮Ｋ饷缚梢耘c水反應，但也可以在幾乎無水的有機溶劑中反應。水解酶的一些實例是脂肪酶(脂肪水解)、蛋白酶(蛋白水解)和酯酶(酯水解)?；疑溍咕鞍酌缸鳛樗饷傅挠猛揪哂性S多優(yōu)點。它是可以作為濃縮水溶液或凍干粉保存的相對穩(wěn)定的酶。所述酶不需要任何輔助因子，如果需要輔助因子不僅經(jīng)濟上沒有吸引力，而且很多輔助因子可以比酶本身更脆弱。所述酶具有大活性位點并且可以很好地處理本反應所需的底物，盡管事實上微小的改變可以引起反應速率的戲劇性差異。最后，所述酶在水/助溶劑混合物或純有機溶劑中具有高穩(wěn)定性。在生物催化中，反應的選擇性通常表示為對映體比例或E。對映應t-0)。如果已知下述三個參數(shù)中的兩個，可以在反應任意一點計算對映體比例轉化率、產(chǎn)物ee和底物ee。在理想條件下，E在整個反應中是常數(shù)。然而在并不總是有效的公式中有許多假設。此外，在很高或很低的轉化率下，E隨轉化率或ee的微小改變劇烈變化。這是指所述值變得對測量的準確度更敏感。因為選擇性從來不是真正絕對的，在100%轉化率又將得到外消旋體。這是指E值在反應即將結束時常常會變低。所以，E應該用作指示值而不是絕對值。通?？梢允褂孟铝薪?jīng)驗規(guī)則E-1沒有選擇性，對兩種對映體速率相等。E=1-5低選擇性。高ee只能在不希望的對映體在反應中被消耗后得到，即只在轉化率>90%。E=5-25很可能是通過消耗不當對映體的方法。只在低轉化率得到高產(chǎn)物ee。E=25-100在中等轉化率得到高底物以及產(chǎn)物ee。E〉100近絕對選擇性。反應通常在50%轉化率"停止"(戲劇性的速率降低)。動態(tài)動力學拆分可能在100%產(chǎn)率得到100%ee。不僅以高ee得到底物，而且產(chǎn)物在理論(50%)產(chǎn)率附近顯示高ee。在本發(fā)明更具體的實施方式中提供上面定義的方法，由此在無緩沖液媒介中進行水解。無需向反應媒介中加入緩沖液不僅簡化了方法，而且通過得到更高的對映體比例甚至改善了方法。不受理論限制，認為哌溱環(huán)中的l位氮對此有貢獻。本發(fā)明更具體實施方式是，在如上定義的方法中組合使用l-曱基-3-苯基哌溱的草酸甲酯(methyloxalate)與包含曱苯或甲基-叔丁基醚的媒介。本發(fā)明的另一個具體實施方式是，在如上定義的方法中組合使用1-曱基-3-苯基哌嗪的草酸乙酯(ethyloxalate)與包含環(huán)己烷的媒介。根據(jù)本說明書中的信息，本領域技術人員現(xiàn)在可以通過選擇適宜的媒介、濃度和草氨酸酯來進一步優(yōu)化本方法的條件或找到本方法的近似替代方法。實施例草氨酸甲酯或草氨酸乙酯衍生物的酶水解。通過用市售的氯代草酸甲酯?；?-甲基-3-苯基哌溱制備外消旋底物，得到結晶的草氨酸酯，其可以通過重結晶純化。測試了一系列市售的蛋白酶(表1)?；谟^察到的對映體之一的富集，只有esperase顯示一些活性。通過與(S)-對映體的確定樣品比較以測定絕對構型。對反應條件進行了簡單的篩選(表2)。基于轉化率以及原料和產(chǎn)物的ee計算E值。通過在原料中使用少量雜質(已在起始哌喚中存在)作為內標估算轉化率。表l:在草氨酸乙酯拆分中的蛋白酶的篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>條件將7個管形瓶充滿酶、1ml草氨酸酯溶液(甲基-叔丁基醚(MTBE)中的0.1M1-曱基-3-苯基哌嗪草氨酸乙酯)和2ml0.1M磷酸緩沖液(pH7.3)。在rT攪拌3天，在40匸再攪拌反應220h。通過手性GC分析。表2:esperase的簡單條件篩選_<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>條件將8個管形瓶充滿酶、1ml草氨酸酯溶液(MTBE或乙腈(ACN)中的0.1M1-曱基-3-苯基哌溱草氨酸乙酯)和2ml磷酸緩沖液。攪拌18h。通過手性GC分析。使用粗草氨酸曱酯和相對純的草氨酸乙酯進行廣泛的蛋白酶篩選(表3)。esperase的CLEA原型未給出更佳結果。甲苯/碳酸氫鹽緩沖液中的一系列其它酶完全未顯示選擇性(表4)。表3:對草氨酸曱酯或草氨酸乙酯的更廣泛的蛋白酶篩選醉m原料GC(ee草氨酸酯)1胰蛋白酶Novo50mgMe*0%2Europa蛋白酶250mgMe*-3%3Europa蛋白酶750mgMe*04Europa蛋白酵1250ragMe*05Europa酉旨酶250ragMe*-3%6EsperaseCXEA50mgMe*11%7EsperaseCLEA250mgMe*12%8AlcalaseCLEA50mgMe*15%9AlcaUseCLEA250mgMe*43°/。(R)10Microb.蛋白酶Fluka10mgMe*37%(R)11枯草桿菌蛋白酶A10mgMe*11%12EsperaseCLEA250mgEt4%13AlcalaseCLEA250mgEt9%14Microb.蛋白酶Fluka10mgEt6%15枯草桿菌蛋白酶A10mgEt<2%條件將15個管形瓶充滿酶、1ml草氨酸酯溶液(MTBE中的0.1Ml-甲基-3-苯基哌溱草氨酸乙酯或1-甲基-3-苯基哌喚草氨酸曱酉旨)和2ml0.1M磷酸緩沖液(pH9.0)。攪拌18h。通過手性GC分析。9表4:在甲苯碳酸氫鹽緩沖液中的酶的篩選E9/酵終pHee剩余底物1AlcalaseCLEA8.002EsperaseCLEA8.103SavinaseCLEA8.1<34Novo枯草桿菌蛋白酶8.1<25CaL-ACLEA8.106CaL-BCLEA8.137CRCLEA8.308Amano?；D移酶8.429酰基轉移酶I8.4210AlcalaseCLEA7.61(PH8K-磷酸緩沖液)表4條件將干酶(50mg)與1ml儲備溶液(溶于600ml甲苯的1-甲基-3-苯基哌嗪草氨酸甲酯(16g)作為不純的粗糖漿)和1ml的0.2M碳酸氫鹽緩沖液混合。在rT反應22h。用灰色鏈霉菌蛋白酶得到良好的結果。表5顯示結果；在正確的條件下對希望的對映體可以得到很好的ee。在無緩沖液媒介中得到最佳結果，其將底物中的另一個氮用作堿。甚至在pH<<7時，對此蛋白酶得到很好的結果。表5:對灰色鏈霉菌蛋白酶和草氨酸乙酯的條件的篩選溶劑終pH66E估算*190%ACN/水7.30—210%ACN/水6.4100%(s)E=60350°/。ACN/水6,731%(S)—450°/。二氧六環(huán)/水6.629%(S)-50%t-BuOH/水5.990%(S)E=27650%MTBE/水5.9ca98%(S)E=500750%MTBE/pH80.1M緩沖液7.150%(S)E=7條件向7個管形瓶加入8mg灰色鏈霹菌蛋白酶、28mg(0.1mmol)油狀草氨酸乙酯和2ml的指示溶劑。在rT攪拌20h。通過手性GC分析。*用3.8m雜質估算轉化率。使用(此處為純的)草氨酸甲酯和草氨酸乙酯在一系列條件下進一步測試所述酶(表6)。使用無助溶劑條件時，所述草氨酸甲酯固化，得到濃懸浮液，其具有在相對高轉化率下妨礙完全光學純度的明顯擴散限制。僅需要少量酶。兩種酯在拆分最佳條件中顯示了差異。表6:灰色鏈霉菌蛋白酶和草氨酸乙酯或草氨酸甲酯的進一步條件篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>條件向13個管形瓶中加入灰色鏈霉菌蛋白酶、26/28mg(0.1mmol)油狀草氨酸乙酯或草氨酸甲酯和2ml的指示溶劑。在rT攪拌64h。堿化后通過手性GC分析。*用3.8m雜質估算轉化率。測試了另外一系列市售的蛋白酶(表7)。對兩種酯使用自表6的最佳條件；二相性MTBE混合物中的甲酯(現(xiàn)在是固體)，在純水中作為懸浮油的乙酯。在此實驗期間，油狀草氨酸乙酯也開始固化，這可能意味著表6(實驗8)的滿意結果也許是不能重現(xiàn)的。在該酶篩選中只有乙酯給出了兩種可能的候選酶，在更真實的酶負載(表8)下進一步測試它們，盡管幾乎沒有成功。加入少量乙酸改善固體底物的溶解度沒有成功，不過酶在很低的pH顯得有效。表7:對草氨酸乙酯或草氨酸甲酯的進一步蛋白酶篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>條件在18個管形瓶中加入28mg油狀草氨酸乙酯或1ml的MTBE/5y。異丙醇(否則沒有溶解度)中的0.1M草氨酸甲酯溶液。加水至2ml反應體積(考慮到酶的體積)。指示量的酶。*實驗1和10包含1ml0.1MpH8tris緩沖液。表8:草氨酸乙酯中的兩種其它候選蛋白酶的篩選酶酸終態(tài)6612.5mgAmano蛋白酵M0懸浮液02(A.melleus)0.1當量HOAc懸浮液030.2當量HOAc懸浮液040.35當量HOAc懸浮液_3%0.5當量HOAc澄清+3%610^1A.Oryzae蛋白酶0懸浮液-2%0,1當量HOAc懸浮液3%80.2當量HOAc懸浮液3%90.35當量HOAc懸浮液0100.5當量HOAC懸浮液0條件在10個管形瓶中加入28mg油狀草氨酸乙酯。加入1ml水。為改善底物溶解度的指示量的乙酸。經(jīng)灰色鏈霉菌蛋白酶催化的反應的放大。主要目的是降低酶負栽并提高底物的濃度，而不損害產(chǎn)物的最終對映體純度。在未緩沖的水中的反應期間，pH顯著地降低到遠遠超出酶的最佳pH。所以第一個測試是pH篩選，使用pH固定計(pHstar)同時將它和未緩沖反應比較(表9)。在反應早期，無pH控制的反應顯示更高的ee。分離的草氨酸產(chǎn)物的ee(R-對映體)也更高，意味著更高選擇性的反應(更高的E)。對草氨酸乙酯也觀察到相同作用，但底物固化使結果比較變得有點復雜(表IO)。13表9:pH-控制對草氨酸曱酯的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>條件10咖ol固體l-甲基-3-苯基哌溱草氨酸曱酯、25ml水、25mlMTBE、50mg灰色鏈霉菌蛋白酶(2wt%)。實驗A在反應最初24h期間pH控制。表10:pH-控制對草氨酸乙酯的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>條件10fflmol油狀1-甲基-3-苯基哌溱草氨酸乙酯、50ffll水、50mg灰色鏈霉菌蛋白酶(2wt%)。實驗C在反應最初24h期間pH控制。在比之前高很多的濃度下使用已知最佳條件重復最終溶劑篩選。由于兩種草氨酸酯都已固化，它們都需要助溶劑。令人驚訝地，最佳條件再次不同(表ll)。表ll:對草氨酸乙酯或草氨酸甲酯的最終溶劑篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>條件2.6或2.8g(10mmol)固體草氨酸乙酯或草氨酸甲酯、10ml水、5ml溶劑、50mg(約2wt%)灰色鏈霉菌蛋白酶。在rT攪拌。2、3和6是懸浮液。24h后，用EtOAc使其均勻化，調整pH至9并通過手性GC分析。由于對草氨酸乙酯的選擇性相當高、熔點相當?shù)鸵约皩疑溍咕鞍酌傅拿枋鲎罴褱囟认喈敻?，使用環(huán)己烷助溶劑對粗草氨酸乙酯單獨嘗試一次更高溫度的反應。在50t:下，16&的反應對達99.8%ee的完全轉化是足夠的，僅使用1Wt。/fl灰色鏈霉菌蛋白酶。這些條件用于制造下述大規(guī)模樣品。最終樣品C5)-l-甲基-3-苯基哌喚的制備在1L容器中，使用1wt%灰色鏈霉菌蛋白酶拆分粗草氨酸乙酯的17Gg樣品。草氨酸乙酯的R-對映體被選擇性地水解。在反應停止后，以47%的粗產(chǎn)率得到余下的l-曱基-3-苯基哌嗪的草氨酸乙酯的S-對映體。通過在過量15%的HC1中煮沸，所迷草氨酸乙酯的水解在lh內產(chǎn)生向(S)-l-甲基-3-苯基哌嗪的完全轉化。進一步后處理產(chǎn)生相當大量未知組成的不溶沉淀。萃取并且Kugelrohr蒸餾產(chǎn)生的產(chǎn)物得到42g白色固體(36%總產(chǎn)率；99.8%ee)。原料中的0.5%初始雜質增加至1.5%。使用重結晶草氨酸甲酯的規(guī)模小很多的放大提供更純的樣品，因為原料中的0.5%雜質未在最終產(chǎn)物中濃縮。其它實驗細節(jié)材料15氯代草酸曱酯Aldrich氯代草酸乙酯Acros三氟乙酸酐人cros乙酸酐Merck丙酰氯Aldrich丁酰氯Aldrich苯曱酰氯Aldrich灰色鏈霉菌蛋白酶Sigma溶劑p.a-分析在chiralsil-DEXCBGC柱(氦載氣，1:20分流)上分析樣品。溫度程序140°C2分鐘；5。C/min至180。C;180°C10分鐘。哌溱不能在所述GC上拆分，需衍生化為三氟乙酰胺以達到對映體的良好分離。在CH2Cl2溶解少量哌溱(10-50mg)并用三乙胺和三氟乙酸酐處理。反應后用10°/。碳酸鈉堿化。在分析前干燥樣品。用二氧化硅板、CH2Cl2/MeOH混合物(通常90:IO)作洗脫液以及UV熒光和L檢測進行TLC。?；庀w的合成l-甲基-3-苯基哌嗪草氨酸曱酯在IOO二氯甲烷中溶解1-甲基-3-苯基哌嗪(17.6g;0.1mol)。加入三乙胺(5ml;約0.03邁ol)。在冷卻下緩慢加入二氯曱烷中的氯代草酸曱酯(IOml;O.lOmol)溶液。全部加入后形成白色懸浮液。TLC顯示完全轉化。用10。/。碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機層，干燥并蒸發(fā)至油狀物(25.5g;97%)。TLC:相當純，有一些次要極性雜質。GC:15.7/16.0分鐘，可以手性分離(包含約0.4%可以用作內標的3.8分鐘雜質(存在于起始哌嗪中))。該物質經(jīng)放置固化。嘗試從CH2Ch/己烷中重結晶。這產(chǎn)生20g淡褐色固體(76%)。mp103-5iC。GC:除去3.8分鐘雜質。1-曱基-3-苯基哌溱草氨酸乙酯在500二氯曱烷中溶解1-曱基-3-苯基哌溱(123.2g;0.70mol)。加入三乙胺(30ml;約0.2mol)。在冷卻下緩慢加入二氯甲烷中的氯代草酸乙酯(107g;0.78mol)溶液。在全部加入的2/3處形成濃懸浮液。甚至在加入更多溶劑后，攪拌還是困難。用10%碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機層，干燥并蒸發(fā)至橙色油狀物(191.2g;O.69mol;99%)。用晶種來結晶被證明是困難的。深度蒸發(fā)(deepevaporation)并以油狀物保存。TLC:很純，基線上有少量有色極性物質。沒有的二草酰胺的痕跡(制備自草酰氯和哌嗪)。GC:18.0/18.2分鐘，0.36面積％的3.8分鐘雜質。用水攪拌少量樣品(20g)引起結晶。mp約45C。大部分油狀物在放置幾天后固化。在使用前需熔化。乙酰l-甲基-3-苯基哌嗪在100二氯曱烷中溶解1-曱基-3-苯基哌嗪(17.6g;0.1mol)。加入乙酸酐和三乙胺。水處理產(chǎn)生>100%的惡臭油狀物(過量Ac20)。在160匸/0.05毫巴下Kugelrohr蒸餾產(chǎn)生20.6g油狀物(94%)。手性GC:10.3/10.6分鐘丙酰l-甲基-3-苯基哌溱在100二氯甲烷中溶解1-甲基-3-苯基哌嗪(17.6g;0.rmol)。加入三乙胺(15ml;約0.1mol)。在冷卻下，緩慢加入二氯甲烷中的丙酰氯(10g;0.llmol)溶液。全部加入后形成白色懸浮液。用10%碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機層，干燥并蒸發(fā)至油狀物(23.34g;100%)。在187"C/0.05毫巴下Kugelrohr蒸餾產(chǎn)生21.6g油狀物(93%)。手性GC:10.25/10.39分鐘丁酰l-甲基-3-苯基哌溱在IOO二氯甲烷中溶解1-甲基-3-苯基哌嗪(17.6g;Q.1mol)。加入三乙胺(5ml;約0.05mol)。在冷卻下緩慢加入二氯曱烷中的丁酰氯(11.6g;0.llmol)溶液。全部加入后形成白色懸浮液。用10%碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機層，干燥并蒸發(fā)至油狀物(24g)。22.5g在〉200。C/0.05毫巴下Kugelrohr蒸餾產(chǎn)生22.0g油狀物(95%)。手性GC:12.87/12.98分鐘，嚴重重疊。苯甲酰l-甲基-3-苯基哌溱在100二氯甲烷中溶解1-曱基-3-苯基哌嗪(17.6g;0.1mol)。加入三乙胺(15ml;約0.1mol)。在冷卻下緩慢加入二氯甲烷中的苯甲酰氯(16g;0.114mol)溶液。全部加入后形成白色懸浮液。用10%碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機層，干燥并蒸發(fā)至油狀物(約30g)。用CH2Cl2/MeOH(95:5)通過二氧化硅過濾純化。蒸發(fā)適當?shù)募壏之a(chǎn)生26.2g油狀物(94%)手性GC:用各種方法都未分離。三氟乙酰l-甲基-3-苯基哌嗪在50二氯甲烷中溶解1-甲基-3-苯基哌嗪(1.8g;0.01mol)。加入三乙胺(lml;0.07mol)。加入純的三氟乙酸酐(2ml)。用10%碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機層，干燥并蒸發(fā)至油狀物(2.5g;92%)。TLC很純。手性GC:5.9/6.2分鐘。篩選反應按各表腳注中的描述進行篩選反應。5ml容器用于1-4ml的反應，30ml管形瓶用于規(guī)模更大的優(yōu)化反應。將完成時酸度太高的反應中和至pH>8以允許堿性哌溱(-衍生物)的萃取。18(5)-l-甲基-3-苯基哌嗪的樣品制備熔化170g(0.62mol)固體草氨酸乙酯并轉移至1L燒瓶。加入180ml環(huán)己烷和700ml水，然后加入1.7g(1wt。/。)灰色鏈霉菌蛋白酶。于50匸在加熱板上攪拌23h。上層的氣相色譜法(GS)顯示〉99.9%的ee。用1MNaOH將5.22的pH調整至9。用乙酸乙酯萃取反應混合物三次。干燥并蒸發(fā)有機相后得到80g褐色油狀物(47%;E>160)。在400ml15%HC1(約2mol)中回流氷解該(S)-草氨酸乙酯(+之前10g規(guī)模拆分的4.7g產(chǎn)物)lh。通過GC測定水解率為約99.5%。冷卻反應混合物并將其pH調節(jié)至pH〉11。用3x250mlCH2Cl2萃取水相。中和后形成大量不溶沉淀，通過過濾除去。干燥并蒸發(fā)有機萃取物以油狀物提供41g的(S)-l-曱基-3-苯基哌噪。用乙酸乙酯(IOOml)、甲苯和乙醚進一步萃取水相又產(chǎn)生6g的(S)-l-甲基-3-苯基哌嗪(約41°/?？偖a(chǎn)率)。Kugelrohr(140"/0.05毫巴)高真空蒸餾產(chǎn)生41.8g無色油狀物，其在加入晶種后結晶(238mmol;36%總產(chǎn)率)。蒸餾殘余物稱重0.8g。產(chǎn)物的熔點是52^而ee經(jīng)測定為99.8%GC顯示在起始外消旋體中存在的雜質從0.5%增加至1.5%。權利要求1.式1化合物，式1其中R1是甲基、乙基、正丙基、異丙基、芐基或2-鹵代乙基。2.式2的(R)-l-曱基-3-苯基哌嗪的草氨酰衍生物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>式23.式3的(S)-l-曱基-3-苯基哌嗪的草氨酰衍生物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>式3，其中Ri甲基、乙基、正丙基、異丙基、芐基或2_鹵代乙基<4.制備(S)-l-曱基-3-苯基哌嗪的方法，所述方法通過酶水解權利要求l化合物、隨后分離并從反應產(chǎn)物裂解草氨酸酯基團，由此灰色鏈霉菌蛋白酶用作酶水解的酶。5.制備(R)-l-曱基-3-苯基哌嗪的方法，所述方法酶水解權利要求1化合物、隨后分離并從反應產(chǎn)物裂解草氨酸基團，由此灰色鏈霹菌蛋白酶用作酶水解的酶。6.權利要求4或5的方法，其特征在于在無緩沖液媒介中進行所述水解。7.權利要求4-6中任意一項的方法，其特征在于l-曱基-3-苯基哌嗪草酸曱酯進行所述水解和水解媒介包含甲苯或甲基-叔丁基醚。8.權利要求4-6中任意一項的方法，其特征在于l-曱基-3-苯基哌"秦草酸乙酯進行水解和水解媒介包含環(huán)己烷。9.S-米氮平的制備方法，包含權利要求4、6、7或8中任意一項的步驟。全文摘要本發(fā)明提供式1化合物，其中R¹是甲基、乙基、正丙基、異丙基、芐基或2-鹵代乙基，及其在制備(S)-1-甲基-3-苯基哌嗪的方法中的用途，所述方法通過酶水解所述化合物、隨后分離并裂解草氨酸基團，由此灰色鏈霉菌蛋白酶用作酶水解的酶。文檔編號C07D241/04GK101472901SQ200780022409公開日2009年7月1日申請日期2007年6月14日優(yōu)先權日2006年6月16日發(fā)明者G·J·肯佩曼,M·C·A·梵弗利特,M·斯克勒德胡德海韋特申請人:歐加農(nóng)股份有限公司