專利名稱：：萊鮑迪甙a及其提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及萊鮑迪甙A及其提取方法，屬食品化工領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：甜菊糖武(Totalsteviosides)是一種從甜葉菊(Steviaw&a"rfemaBertoW)的葉和莖中提取出來的高甜度、低熱量天然保健甜味劑，它主要含八種不同甜味成分甜菊甙(Stevioside);萊鮑迪武(Rebaudioside)A、B、C、D、E及杜爾可甙(Dulcoside)A、B。其中甜菊甙約占總甙量的66%，萊鮑迪甙A約占總甙量的22免，萊鮑迪甙C約占總甙量的9%，杜爾可甙A約占總甙量的29fc，其它成分含量極微。普通甜菊糖甙存在一些缺陷，其大多甜味成份具有較強(qiáng)的不良余味，這制約了甜菊糖甙的廣泛應(yīng)用。而萊鮑迪甙A是甜菊糖甙中味質(zhì)最好的甜味成份，無不良余味，甜度也最高(蔗糖的300450倍)，是一種理想的天然保健甜味劑。因此高純度的萊鮑迪甙A產(chǎn)品(含量^99%)是近年來國內(nèi)外甜菊糖試生產(chǎn)工業(yè)的研究熱點(diǎn)。但是由于這些甜味成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)非常相似，僅區(qū)別于甙鍵上結(jié)合糖的種類、數(shù)量和構(gòu)成型式，因此目前在工業(yè)生產(chǎn)上很難純化得到高純度的萊鮑迪甙A。迄今為止，高純度的萊鮑迪甙A制備方法有高效液相色譜法(HPLC)、薄層色譜法、滴液逆流色譜法、毛細(xì)管電泳法、超臨界萃取法等，但這些方法處理量小、成本高，不適用于工業(yè)生產(chǎn)。專利CN1132840C公開了一種通過固液分離精制甜菊糖甙的方法，該方法將甜菊糖甙與乙醇按1:1.4-1.7比例進(jìn)行混合，溶解過程中攪拌混合物，將溶解后的混合物進(jìn)行固液分離，將得到的固體和液體分別進(jìn)行活性碳脫色、干燥后，得到精制甜菊糖武。該方法所得到的甜菊糖甙產(chǎn)品中萊鮑迪甙A的含量為88W，含有較多的不良余味雜質(zhì)。專利CN1098860C公開了一種通過真空吸濾、離子交換樹脂分離富集甜菊糖甙的工藝，該工藝選擇萊鮑迪甙A與甜菊甙之比在0.5~1.1的甜菊糖甙粗品為原料，以甲醇與水混合液溶解攪拌甜菊糖甙，并將混合物過濾后，以離子交換樹脂脫鹽和活性碳脫色，蒸去甲醇與水，得到產(chǎn)率為35~65%>的萊鮑迪甙戍與甜菊甙之比大于2.5的甜菊糖甙產(chǎn)品，該產(chǎn)品中甜菊糖甙含量大于95%(萊鮑迪甙的含量278%)。該工藝中萊鮑迪甙的含量和產(chǎn)率都較低。專利CN1078217C公開了一種通過吸附樹脂分離富集萊鮑迪甙A的方法，該發(fā)明合成了一系列的大孔吸附樹脂，并利用大孔吸附樹脂的選擇性吸附作用分離甜菊糖武，再通過重結(jié)晶可得到萊鮑迪甙A含量為90%的甜菊糖甙產(chǎn)品。該方法所得到的甜菊糖甙產(chǎn)品中仍含有較多的不良余味雜質(zhì)，難以單獨(dú)作為甜味劑使用。專利CN1032651C公開了一種通過萃取精制甜菊糖甙的方法，該方法以脂肪醇或脂肪醇加稀釋劑的混合溶劑對甜菊糖甙粗品溶液進(jìn)行液-液萃取，再用水進(jìn)行反萃取，干燥后可得到甜菊糖總甙含量為鄰％的產(chǎn)品。該方法試劑消耗多，分離效果差，工業(yè)生產(chǎn)有困難。專利CN1024348C公開了一種通過普通樹脂提取甜,武的工藝，該工藝通過干葉浸泡、板框過濾、吸附、脫鹽、普通強(qiáng)堿性樹脂脫色、濃縮干燥等步驟得到甜菊糖總甙含量為98%的產(chǎn)品。該工藝采用普通強(qiáng)堿性樹脂脫色，脫色效率低且該樹脂在使用過程中極易中毒。專利JP07,143，860(1995)公開了一種生產(chǎn)高含量RA的方法。該方法以水或含水溶劑從植物干莖或葉中提取甜菊糖甙，并從提取液中分離收集，可得到萊鮑迪甙A含量為甜菊甙、萊鮑迪甙C、杜爾可甙A總量4.8~8.5倍的提取物。再通過以含水1020%甲醇的結(jié)晶、重結(jié)晶方法可得到RA含量為90%的產(chǎn)品。專利JP2002，262，822公開了一種由甜葉菊變異品種的干葉中所提取的甜味劑及其提取方法。該方法以水或水的溶劑對甜葉菊變異品種的干葉進(jìn)行提取，其中萊鮑迪甙A含量是甜菊甙的2,56倍。專利US20060134292公開了一種從甜葉菊中提取甜味甙的方法，并可分別得到萊鮑迪甙A及甜菊甙，提取在具有膠質(zhì)酶的條件下進(jìn)行，純化中使用了環(huán)狀糊精及斑脫土，高純度萊鮑迪甙A由結(jié)晶及重結(jié)晶得到。高純度甜菊甙則由環(huán)狀糊精，斑脫土及離子交換樹脂處理得到，酶修飾的萊鮑迪甙A，甜菊甙及純化提取物由77imnoa"/MO附j(luò)cesw7gfl"'s和Bac說ws中所提取的酶進(jìn)行。專利US20060083838公開了一種生產(chǎn)高含量萊鮑迪甙A的方法。該方法以配制的乙醇溶劑與甜葉菊起始材料進(jìn)行回餾，回餾后過濾收集固體殘留物并以乙醇攪拌洗滌，再次過濾，收集殘留物并除去乙醇并干燥可得純度^99W萊鮑迪武A。由這些方法和工藝(除專利US2006柳83838)所得到的甜菊糖甙中的萊鮑迪甙A絕對含量較低(純度<96%),更不能得到純度^99%的萊鮑迪甙A產(chǎn)品，難以單獨(dú)作為甜味劑使用。專利US20060083838聲稱能夠得到萊鮑迪甙A純度，％的產(chǎn)品，但其提供的方法步驟十分簡單常見。發(fā)明人經(jīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)表明如此簡單的處理步驟不能將萊鮑迪武A同與其結(jié)構(gòu)極為相似的其它成分分離開，因此實(shí)踐中通過該專利方法并不能得到其所聲稱的純度299%的萊鮑迪甙A。雖然目前我國每年出口大量甜菊糖武，但由于其中萊鮑迪甙A含量低(到目前為止國內(nèi)還沒有萊鮑迪甙A純度296%的甜菊糖甙產(chǎn)品)，往往僅作為一種原料和初級(jí)產(chǎn)品出口，技術(shù)含量低，價(jià)格便宜。
發(fā)明內(nèi)容為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種高純度、高產(chǎn)率的萊鮑迪甙A,本發(fā)明還提供了該萊鮑迪甙A的精制和提取方法。本發(fā)明提供了一種萊鮑迪甙A,其純度36%。進(jìn)一步地，其純度^99%。本發(fā)明還提供了該萊鮑迪甙A的精制方法，它包括如下步驟a、按l:2~1:5m/m的甜菊糖甙與硅膠重量比例對甜菊糖甙進(jìn)行硅膠柱層析；b、以20:1~20:4的乙酸乙酯、^/乙醇混合溶劑進(jìn)行洗脫，分別收集各餾分；其中擬乙醇的重量配比為1/10;c、以薄層層析確定b步驟的萊鮑迪甙A鎦分后將其合并濃縮，得萊鮑迪甙A固體；d、按l:4(m/v)比例向該固體加入4%~10%(v/v)的水/乙醇混合溶劑，60'C加熱攪拌14小時(shí)，一20'C冷凍攪拌結(jié)晶12-24小時(shí)，過濾收集晶體，80'C烘千，得萊鮑迪甙A。其中，步驟a所述的甜菊糖甙與硅膠的重量配比范圍1:3~1:5。進(jìn)一步地，步驟a所述的甜菊糖甙與硅膠的重量配比范圍l:4~1:5。其中，步驟b所述的乙酸乙酯乙醇/水的體積配比范圍為20:2~20:4。進(jìn)一步地，步驟b所述的乙酸乙酯乙醇/水的體積配比范圍為20:2~20:3。其中，歩驟(1所述的水與乙醇配制的體積配比范圍為4%~8%。進(jìn)一步地，步驟d所述的水與乙醇配制的體積配比范圍為6%~8%。其中，步驟d中所述的加熱攪拌時(shí)間為24小時(shí)。進(jìn)一步地，步驟d中所述的加熱攪拌時(shí)間為23小時(shí)。其中，步驟d中所述的一20'C冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間為1624小時(shí)。進(jìn)一步地，步驟d中所述的一20'C冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間為20~24小時(shí)。本發(fā)明還提供了另一種提取萊鮑迪甙A的方法，包括如下步驟a、按l:3~1:9(m/v)的重量體積比例，將甜葉菊(Steviaw6awdia朋Berto/iO葉和莖與0%~15%(v/v)的水與甲醇混合溶劑在50'C80'C進(jìn)行連續(xù)逆流提??；b、水與甲醇混合溶劑對每千克甜葉菊原料的流速為l4L/h;c、將提取溶液濃縮后得萊鮑迪甙A粗品以水分散后進(jìn)行超濾，超濾膜規(guī)格為1K，膜透壓為15~30PSI,透過流速為10~40LMH;d、以極性樹脂對超濾后濾液進(jìn)行吸附洗脫，吸附流速為l~4BV/h，吸附后以30%~60%(v/v)的甲醇與水混合溶劑進(jìn)行洗脫，洗脫流速為0.5~2BV/h;e、將洗脫液濃縮后，于一20X:冷凍攪拌結(jié)晶24小時(shí)，再于一2(TC冷凍攪拌重結(jié)晶24小時(shí)，過濾收集晶體，柳r烘干，得純度^99免的萊鮑迪甙A。其中，步驟a所述約甜葉菊與水與甲醇棍合溶劑的重量體積比范圍為l:Sl:9。進(jìn)一步地，步驟a所述的甜葉菊與水與甲醇混合溶劑的重量體積比范圍為l:5~1:7。其中，步驟a所述的水與甲醇的體積配比范圍為5%~15%。進(jìn)一步地，步驟a所述的水與甲醇的體積配比范圍為5%~10%。其中，步驟a所述的連續(xù)逆流提取溫度為60'C柳'C。進(jìn)一步地，步驟a所述的連續(xù)逆流提取溫度為7(TC80'C。其中，步驟b所述的水與甲醇混合溶劑對每千克甜葉菊原料的流速為l~3L/h。進(jìn)一步地，步驟b所述的水與甲醇混合溶劑對每千克甜葉菊原料的流速為1~2L/h。其中，步驟d中所述的極性樹脂對超濾后濾液的吸附流速為l~3BV/h。進(jìn)一步地，歩驟d中所述的極性樹脂對超濾后濾液的吸附流速為l~2BV/h。其中，步驟d中所述的洗脫極性樹脂的甲醇與水的體積配比范圍為40%~60%。進(jìn)一步地，步驟d中所述的洗脫極性樹脂的甲醇與水的體積配比范圍為50%~60%。其中，步驟d中所述的甲醇與水混合溶劑對極性樹脂的洗脫流速為0.5~1.5BV/h。進(jìn)一步地，步驟d中所述的甲醇與水混合溶劑對極性樹脂的洗脫流速為0.5~lBV/h。本發(fā)明提供的高純度的萊鮑迪甙A,通過其工藝可精制得到純度^99%的萊鮑迪甙A，萊鮑迪甙A產(chǎn)率〉85免，其在口感上無任何不良余味，可單獨(dú)作為甜味劑使用，且處理量大、成本低，適用于工業(yè)生產(chǎn)。具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不表示實(shí)施例中所述方式是實(shí)施本發(fā)明的唯一途徑，也不意味著對本發(fā)明的任何限制。實(shí)施例1硅膠比例對精制20%萊鮑迪甙A的影響按1:2、1:3、1:4、1:5(ffl/m)的甜菊糖甙與硅膠重量比例對4份各50.0g甜菊糖甙(含20X萊鮑迪甙A)分別進(jìn)行硅膠柱層析。以乙酸乙酯乙醇水=10:1:0.1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，分別收集各餾分。以薄層層析確定萊鮑迪武A餾分后將其合并濃縮，得萊鮑迪甙A固體。將該固體置于2鄰ml的三角瓶中，按l:4(m/v)比例加入5%(v/v)的水與乙醇混合溶劑，于60'C加熱攪拌4小時(shí)，一20'C冷凍攪拌結(jié)晶24小時(shí)，過濾收集晶體。晶體于80'C烘干至恒重后稱重，并分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表l。表1硅膠比例對精制20%萊鮑迪甙A的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖武中純化得到純度^99%的萊鳙迪甙A。并且甜菊糖甙與硅膠重量比例為1:4~1:5時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及甜菊糖甙與硅膠的特定比例。實(shí)施例2樣品硅膠比例對精制70%萊鮑迪甙A的影響按實(shí)施例1的工藝方法對含70%萊鮑迪甙A的甜菊糖武進(jìn)行精制，其結(jié)果見表2。表2甜菊糖甙硅膠比例對精制70%萊鮑迪甙A的影響_甜菊糖甙硅膠比例(m/m)晶體重量(g)萊鮑迪甙A純度產(chǎn)率1:228.6598.26%80.4%1:328.9098.85%81.6%1:430.5899.38%86.8%1:530.4999.48%86.6%以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖甙中純化得到純度299%的萊鮑迪甙A。并且甜菊糖甙與硅膠重量比例為1:4~1:5時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及甜菊糖甙與硅膠的特定比例。實(shí)施例3層析洗脫液比例對精制20X萊鮑迪甙A的影響按l:4(m/m)的樣品硅膠比例對4份各5(M)g甜菊糖甙(含20X萊鮑迪甙A)進(jìn)行硅膠柱層析，并以乙酸乙酯乙醇/水(10/1,v/v)=20:1~20:4(v/v)的混合溶劑進(jìn)行洗脫，分別收集各餾分。以薄層層析確定萊鮑迪甙A餾分后將其合并濃縮，得萊鮑迪甙A固體。將該固體置于250ml的三角瓶中，按l:4(m/v)比例加入5%(v/v)的水與乙醇混合溶劑，于60'C加熱攪拌4小時(shí)，一20'C冷凍攪拌結(jié)晶24小時(shí)，過濾收集晶體。晶體于8(TC烘干至恒重后稱重，并分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。表3層析洗脫液比例對精制20%萊鮑迪甙A的影響乙酸乙酯乙醇/水(10/1)比例(v/v)晶體重量(g)萊鮑迪甙A純度產(chǎn)率20:18.1797.27%79.7%20:28.2699.24%82.0%20:38.1699.25%81.0%20:47.7499.25%76.8%以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖甙中純化得到純度^999fc的萊鮑迪甙A。并且乙酸乙酯乙醇/水(10/1，v/v)的體積配比為20:2~20:3時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及層析洗脫液的特定比例。實(shí)施例4層析洗脫液比例對精制70%萊鮑迪甙A的影響按實(shí)施例1的工藝方法對含70%萊鮑迪武A的甜菊糖武進(jìn)行精制,其結(jié)果見表4。表4層析洗脫液比例對精制70%萊鮑迪甙A的影響乙酸乙酯乙醇/水(10/1)比例(v/v)晶體重量(g)萊鮑迪甙A純度產(chǎn)率20:129.3298.42%82.5%20:230.5399.39%86.7%20:330.2499.41%85.9%20:428.2899.49%80.4%以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊耱甙中純化得到純度^99%的萊鮑迪甙A。并且乙酸乙酯乙醇/水(10/1，V/V)的體積配比為加2~20:3時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及層析洗脫液的特定比例。實(shí)施例5水與乙醇配比對精制20%萊鮑迪甙A的影響按l:4(m/m)的樣品硅膠比例對20(M)g甜菊糖甙(含20X萊鮑迪甙A)進(jìn)行硅膠柱層析，并以乙酸乙酯乙醇水=10:1:0.1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，分別收集各餾分。以薄層層析確定萊鮑迪甙A餾分后將其合并濃縮，得萊鮑迪甙A固體。準(zhǔn)確稱取6份各5.000g該固體置于6個(gè)100ml的三角瓶中，并分別加入20ml以水和乙醇配制成含水0%、2%、4%、6%、8%、10%(v/v)的乙醇溶劑。各瓶于60'C加熱攪拌4小時(shí)，一20'C冷凍攪拌結(jié)晶24小時(shí)，過濾收集晶體，于80'C烘干至恒重后稱重，分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，并按比例進(jìn)行計(jì)算，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。_表5水與乙醇配比對精制20%萊鮑迪甙A的影響_乙醇含水量(v/v)晶體重量(g)萊鮑迪甙A純度產(chǎn)率_~~以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖甙中純化得到純度^99%的萊鮑迪甙A。并且當(dāng)含水量為6%~8%時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及水與乙醇的特定比例。實(shí)施例6水與乙醇配比對精制70%萊鮑迪甙A的影響按實(shí)施例S的工藝方法對含70%萊鮑迪甙A的甜菊糖武進(jìn)行精制,其結(jié)果見表6。表6水與乙醇配比對精制70%萊鮑迪甙A的影響_乙醇含水量(v/v)晶體重量(g)萊鮑迪武A純度產(chǎn)率以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖甙中純化得到純度^999fc的萊鮑迪甙A。并且當(dāng)含水量為6%~8%時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及水與乙醇的特定比例。實(shí)施例7水與乙醇配比對精制80W萊鮑迪甙A的影響按實(shí)施例5的工藝方法對含80%萊鮑迪甙A的甜菊糖武進(jìn)行精制,其結(jié)果見表7。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖甙中純化得到純度^99%的萊鮑迪甙A。并且當(dāng)含水量為6%~8%時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及水與乙醇的特定比例。實(shí)施例8加熱攪拌時(shí)間對精制20%萊鮑迪甙A的影響按l:4(m/m)的樣品硅膠比例對200g甜菊糖甙(含20%萊鮑迪甙A)進(jìn)行硅膠柱層析，并以乙酸乙酯乙醇水=10:1:0.1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，分別收集各餾分。以薄層層析確定萊鮑迪甙A餾分后將其合并濃縮，得萊鮑迪甙A固體。準(zhǔn)確稱取4份各5.000g該固體置于6個(gè)100ml的三角瓶中，并分別加入20ml含水8%(v/v)的乙醇溶劑。將各瓶搖勻后于60'C加熱攪拌1、2、3、4小時(shí)，再分別一20'C冷凍攪拌結(jié)晶24小時(shí)，過濾收集晶體。晶體于80'C烘干至恒重后稱重，分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，并按比例進(jìn)行計(jì)算，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表8。表8加熱攪拌時(shí)間對精制20%萊鮑迪甙A的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖甙中精制得到純度^99%的萊鮑迪甙A。并且當(dāng)加熱攪拌時(shí)間為2~3小時(shí)時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及加熱攪拌的特定時(shí)間。實(shí)施例9加熱攪拌時(shí)間對精制70%萊鮑迪甙A的影響按實(shí)施例8的工藝方法對含70%萊鮑迪甙A的甜菊糖武進(jìn)行精制,其結(jié)果見表9。表9加熱攪拌時(shí)間對精制70%萊鮑迪甙A的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖武中精制得到純度^99%的萊鮑迪甙A。并且當(dāng)加熱攪拌時(shí)間為2~3小時(shí)時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及加熱攪拌的特定時(shí)間。實(shí)施例10加熱攪拌時(shí)間對精制80%萊鮑迪甙A的影響按實(shí)施例8的工藝方法對含80%萊鮑迪武A的甜菊糖武進(jìn)行精制，其結(jié)果見表10。表10加熱攪拌時(shí)間對精制柳％萊鮑迪武A的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖武中精制得到純度^99%的萊鮑迪甙A。并且當(dāng)加熱攪拌時(shí)間為2~3小時(shí)時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及加熱攪拌的特定時(shí)間。實(shí)施例11冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間對精制20%萊鮑迪甙A的影響按l:4(m/m)的樣品硅膠比例對20(M)g甜菊糖甙(含20X萊鮑迪甙A)進(jìn)行硅膠柱層析，并以乙酸乙酯乙醇水=10:1:0.1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，分別收集各餾分。以薄層層析確定萊鮑迪甙A餾分并合并濃縮，得萊鮑迪甙A固體。準(zhǔn)確稱取4份各5.000g該固體置于4個(gè)100ml的三角瓶中，并分別加入20ml含水8%(v/v)的乙醇溶劑。將各瓶搖勻后于60'C加熱攪拌3小時(shí)，再分別于一20'C冷凍攪拌結(jié)晶12、16、20、24小時(shí)，過濾收集晶體，于80'C烘干至恒重后稱重，分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，并按比例進(jìn)行計(jì)算，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表ll。表11冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間對精制20%萊鮑迪甙A的影響冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間(小時(shí))晶體重量(g)萊鮑迪甙A純度產(chǎn)率122.7999.19%79.2%162.8799.21%81.8%203.0099.23%85.3%243.0199.24%85.5%以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖甙中精制得到純度^99%的萊鮑迪甙A。并且當(dāng)冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間為20~24小時(shí)時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及冷凍攪拌結(jié)晶的特定時(shí)間。實(shí)施例12冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間對精制70%萊鮑迪甙A的影響按實(shí)施例11的工藝方法對含70%萊鮑迪甙A的甜菊糖甙進(jìn)行精制，其結(jié)果見表12。表12冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間對精制70^萊鮑迪甙A的影響冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間(小時(shí))晶體重量(g)萊鮑迪甙A純度產(chǎn)率123.3299.33%81.5%163.4599.35%84.7%203.6199.37%88.7%243.6299.36%88.9%以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖甙中精制得到純度^99免的萊鮑迪甙A。并且當(dāng)冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間為20~24小時(shí)時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及冷凍攪拌結(jié)晶的特定時(shí)間。實(shí)施例13冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間對精制80%萊鮑迪甙A的影響按實(shí)施例11的工藝方法對含80%萊鮑迪甙A的甜菊糖甙進(jìn)行精制，其結(jié)果見表13。表13冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間對精制柳％萊鮑迪甙A的影響冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間(小時(shí))晶體重量(g)萊鮑迪甙A純度產(chǎn)率123.S599.55%78.4%163.8099.58%84.2%204.0499.64%89.6%244.0599.63%狄8%以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜菊糖武中精制得到純度^99%的萊鮑迪甙A。并且當(dāng)冷凍攪拌結(jié)晶時(shí)間為20~24小時(shí)時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及冷凍攪拌結(jié)晶的特定時(shí)間。實(shí)施例14對90X萊鮑迪甙A的精制按l:4(m/m)的樣品硅膠比例對鄰.OOg甜菊糖武(含90W萊鮑迪甙A)進(jìn)行硅膠柱層析，并以乙酸乙酯乙醇水=10:1:0.1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，分別收集各餾分。以薄層層析確定萊鮑迪甙A餾分并合并濃縮，得萊鮑迪甙A晶體，于柳'C烘干至恒重后稱重，并分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，得99.46%萊鮑迪甙A33.32g，產(chǎn)率為92.2%。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的部分精制工藝步驟也可以從甜菊糖甙中精制得到純度^99免的萊鮑迪甙A。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量。實(shí)施例15對95X萊鮑迪甙A的精制準(zhǔn)確稱取50.00g95%萊鮑迪甙A置于1000ml的三角瓶中，加入加0ml含水8%(v/O的乙醇溶劑。60"€加熱攪拌2.5小時(shí)，—20'C冷凍攪拌結(jié)晶22小時(shí)，過濾收集晶體。于80'C烘干至恒重后稱重，并分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，得99.65%萊鮑迪甙A45.63g,產(chǎn)率為95.7%。對于含量較高的萊鮑迪甙A,可直接采用重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的部分精制工藝步驟也可以從甜菊糖甙中精制得到純度^99免的萊鮑迪甙A。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量。針對本發(fā)明的另一提取方法，通過下述實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。實(shí)施例16甜葉菊原料與溶劑比例對連續(xù)逆流提取的影響按l:3、1:5、1:7、1:9(m/v)的重量體積比例，分別將10千克干燥的甜葉菊(分ev/flrekmrfiawafierto/u')葉和莖(含萊鮑迪武A8免)與5%(v/v)的水與甲醇混合溶劑在70'C進(jìn)行連續(xù)逆流提取，水與甲醇混合溶劑對每千克甜葉菊原料的流速為2L/h。測量提取液體積，并定量量取部分提取液蒸干至恒重后稱重，并分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表14。表14甜葉菊原料與溶劑比例對連續(xù)逆流提取的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在對甜葉菊原料進(jìn)行連續(xù)逆流提取中，當(dāng)甜葉菊原料與溶劑比例為l:5~1:7時(shí)有最佳提取效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及甜葉菊原料與溶劑的特定比例。實(shí)施例17水與甲醇混合溶劑比例對連續(xù)逆流提取的影響按1:6(m/v)的重量體積比例，分別將10千克甜葉菊(SteWaw6andia"aBerto/K')葉和莖與0%、5%、10%、15%(v/v)的水與甲醇混合溶劑在70'C進(jìn)行連續(xù)逆流提取，水與甲醇混合溶劑對每千克甜葉菊原料的流速為2L/h。測量提取液體積，并定量量取部分提取液蒸干至恒重后稱重，并分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表15。表15水與甲醇混合溶劑比例對連續(xù)逆流提取的影響水與甲醇混合溶劑比例提取物總重(kg)萊鮑迪甙A含量提取轉(zhuǎn)化率0%3.0623.1%88.3%5%3.4422.6%97.2%腦3.4622.5%97.3%15%3.6821.1%97.2%以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在對甜葉菊原料進(jìn)行連續(xù)逆流提取中，當(dāng)水與甲醇混合溶劑比例為5%~10%時(shí)有最佳提取效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及水與甲醇混合溶劑的特定比例。實(shí)施例18提取溫度對連續(xù)逆流提取的影響按1:6(m/v)的重量體積比例，分別將10千克甜葉菊(&eviaA^ajw/ifl/w葉和莖與7%(v/v)的水與甲醇混合溶劑在5(TC、60'C、7(TC、80^C進(jìn)行連續(xù)逆流提取，水與甲醇混合溶劑對每千克甜葉菊原料的流速為2L/h。測量提取液體積，并定量量取部分提取液蒸干至恒重后稱重，并分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表16。表16提取溫度對對連續(xù)逆流提取的影響提取溫度rc)提取物總重(kg)萊鮑迪甙A含量提取轉(zhuǎn)化率50。C2.8924.3%87.9%60。C3.2223.0%92.8%70。C3.4522.5%97.0%80。C3.4622.5%97.3%以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在對甜葉菊原料進(jìn)行連續(xù)逆流提取中，當(dāng)提取溫度為70'C柳'C時(shí)有最佳提取效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及提取的特定溫度。實(shí)施例19提取流速對連續(xù)逆流提取的影響按1:6(m/v)的重量體積比例，分別將10千克甜葉菊(&ev/areft"oifia"aBerto/K')葉和莖與7%(v/v)的水與甲醇混合溶劑在70'C進(jìn)行連續(xù)逆流提取，水與甲醇混合溶劑對每千克甜葉菊原料的流速為1、2、3、4L/h。測量提取液體積，并定量量取部分提取液蒸干至恒重后稱重，并分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表17。表17提取溫度對對連續(xù)逆流提取的影響提取流速(L/h)提取物總重(kg)萊鮑迪甙A含量提取轉(zhuǎn)化率13.4422.6%97.2%23.4522.6%97.3%33.2622.8%93.1%43.0723.S%90.1%以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在對甜葉菊原料進(jìn)行連續(xù)逆流提取中，當(dāng)對每千克甜葉菊原料的提取流速為l~2L/h時(shí)有最佳提取效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及水與甲醇混合溶劑對每千克甜葉菊原料的特定流速。實(shí)施例20吸附流速對極性樹脂純化效果的影響分別以2kg極性樹脂對超濾后濾液3L(萊鮑迪甙A濃度26g/L)進(jìn)行吸附洗脫，吸附流速為l、2、3、4BV/h，吸附后以40%(v/v)的甲醇與水混合溶劑進(jìn)行洗脫，洗脫流速為lBV/h。將洗脫液濃縮后，于一20'C冷凍攪拌結(jié)晶24小時(shí)，再于—20'C冷凍攪拌重結(jié)晶24小時(shí)，過濾收集晶體，80'C烘干，得萊鮑迪甙A。表18吸附流速對極性樹脂吸附效果的影響吸附流速(BV/h)晶體重量(g)萊鮑迪甙A純度產(chǎn)率168.699.65%85.3%268.299.44%84.8%366.399.52%82.5%464.199.37%79.6%以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明可以從甜葉菊原料中提取得到純度299%的萊鮑迪甙A。并且在以極性樹脂進(jìn)行純化過程中，當(dāng)吸附流速為l~2BV/h時(shí)有最佳純化效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及極性樹脂對超濾后濾液的特定吸附流速。實(shí)施例21洗脫溶劑比例對極性樹脂純化效果的影響分別以2kg極性樹脂對超濾后濾液3L(萊鮑迪甙A濃度26g/L)進(jìn)行吸附洗脫，吸附流速為1.58￥/11，吸附后以吸附后以30%、40%、50%、60%(v/v)的甲醇與水混合溶劑進(jìn)行洗脫，洗脫流速為lBV/h。將洗脫液濃縮后，于一20"C冷凍攪拌結(jié)晶24小時(shí)，再于-20t:冷凍攪拌重結(jié)晶24小時(shí)，過濾收集晶體，801C烘干，得萊鮑迪甙A。表19洗脫溶劑比例對極性樹脂純化效果的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜葉菊原料中提取得到純度^99免的萊鮑迪甙A。并且在以極性樹脂進(jìn)行純化過程中，50%~60%(v/v)的甲醇與水混合溶劑有最佳洗脫效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪甙A的特定含量以及對極性樹脂洗脫的特定溶劑比例。實(shí)施例22洗脫流速對極性樹脂純化效果的影響分別以2kg極性樹脂對超濾后濾液3L(萊鮑迪甙A濃度26g/L)進(jìn)行吸附洗脫，吸附流速為1.58￥/11，吸附后以40%(v/v)的甲醇與水混合溶劑進(jìn)行洗脫，洗脫流速為0.5、1、1.5、2BV/h。將洗脫液濃縮后，于一2(TC冷凍攪拌結(jié)晶24小時(shí)，再于一20'C冷凍攪拌重結(jié)晶24小時(shí)，過濾收集晶體，80'C烘干，得萊鮑迪甙A。表20吸附流速對極性樹脂吸附效果的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的精制工藝可以從甜葉菊原料中提取得到純度^99W的萊鮑迪甙A。并且在以極性樹脂進(jìn)行純化過程中，洗脫流速為0.5~1BV/h時(shí)有最佳洗脫效果。本發(fā)明不限于實(shí)施例中萊鮑迪武A的特定含量以及極性樹脂對超濾后濾液的特定洗脫流速。實(shí)施例23連續(xù)逆流提取與的回流提取比較按l:6(m/v)的重量體積比例，將l千克甜葉菊(SteWaw&做rfifl朋fierto似)葉和莖與7%(v/v)的水與甲醇混合溶劑在70X:進(jìn)行連續(xù)逆流提取，水與甲醇混合溶劑對每千克甜葉菊原料的流速為2L/h，連續(xù)逆流提取共進(jìn)行3小時(shí)。按l:4(m/v)的重量體積比，將l千克甜葉菊(Sfevifl/^fliwfta"aBerto似)葉和莖與7%(v/v)的水與甲醇混合溶劑進(jìn)行回餾，回餾在相應(yīng)的裝置中以約甲醇沸點(diǎn)的溫度進(jìn)行回餾約2小時(shí)?；仞s后收集提取液，并按以上條件繼續(xù)進(jìn)行回餾，回餾共進(jìn)行3次。分別測量提取液體積，并定量量取部分提取液蒸干至恒重后稱重，并分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表21。表21連續(xù)逆流提取與回流提取之比較<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在對甜葉菊原料進(jìn)行提取中連續(xù)逆流提取與回流提取相比,連續(xù)逆流提取具有更高的萊鮑迪甙A含量，提取轉(zhuǎn)化率以及更短的提取時(shí)間。實(shí)施例24冷凍攪拌結(jié)晶與常溫結(jié)晶比較準(zhǔn)確稱取50.00g85%萊鮑迪甙A置于500ml的三角瓶中，加入200ml含水8%(v/v)的乙醇溶劑。60°0加熱攪拌2.5小時(shí)，一20'C冷凍攪拌結(jié)晶24小時(shí)，過濾收集晶體，再按以上條件進(jìn)行重結(jié)晶。結(jié)晶于8(TC烘干至恒重后稱重，并分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，得99.37%萊鮑迪甙厶41.148，產(chǎn)率為96.2%。準(zhǔn)確稱取50.00g85%萊鮑迪甙A置于500ml的三角瓶中，加入200ml含水15%(v/v)的甲醇溶劑。60'C加熱溶解后，于25'C結(jié)晶24小時(shí)，過濾收集晶體，再按以上條件進(jìn)行重結(jié)晶。結(jié)晶于8(TC烘干至恒重后稱重，并分別取樣以HPLC方法進(jìn)行純度鑒定，得91.52%萊鮑迪甙點(diǎn)41.65^產(chǎn)率為89.79fc。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本發(fā)明的工藝可以從甜葉菊原料中提取得到純度^99%的萊鮑迪甙A。并且冷凍攪拌結(jié)晶與常溫結(jié)晶相比，冷凍攪拌結(jié)晶具有更高的萊鮑迪甙A含量和結(jié)晶產(chǎn)率。實(shí)施例23、24是分別與對比文件(專利US20060083838、專利JP07,143，860)中的關(guān)鍵步驟進(jìn)行對比，該試驗(yàn)證明采用本發(fā)明方法制備的萊鮑迪甙純度高，產(chǎn)率高，并非通過對比文件中的工藝的簡單替換，產(chǎn)生的效果對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，是非顯而易見的。權(quán)利要求1、一種萊鮑迪甙A，其特征在于其純度≥99％。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的萊鮑迪甙A，其特征在于它是由甜菊糖甙或甜葉菊Steviare6做rfianaBerroW為原料，經(jīng)提取、精制、純化而成。3、一種提取權(quán)利要求1或2所述的萊鮑迪甙A的方法，它包括如下步驟a、按1:2~1:5m/m的甜菊糖甙與硅膠重量比例對甜菊糖甙進(jìn)行硅膠柱層析；b、以20:1~20:4的乙酸乙酯、水/乙醇混合溶劑進(jìn)行洗脫，分別收集各餾分；其中7K/乙醇的重量配比為1/10;c、以薄層層析確定b步驟的萊鮑迪甙A餾分后將其合并濃縮，得萊鮑迪甙A固體；d、按l:4m/v比例向該固體加入4^10^v/v的水與乙醇混合溶劑，60'C加熱攪拌1~4小時(shí)，—20'C冷凍攪拌結(jié)晶12-24小時(shí)，過濾收集晶體，80t:烘干，得萊鮑迪甙A。4、一種提取權(quán)利要求1或2所述的萊鮑迪甙A的方法，它包括如下步驟a、按l:3~1:9m/v的重量體積比例，將甜葉菊Steviare6aiwfiana葉和莖與0%~15%v/v的水與甲醇混合溶劑在SO'C柳T:進(jìn)行連續(xù)逆流提取，水與甲醇混合溶劑對每千克甜葉菊原料的流速為l~4L/h;b、將提取溶液濃縮后得萊鮑迪甙A粗品以水分散后進(jìn)行超濾，得濾液；c、以極性樹脂對超濾后濾液進(jìn)行吸附洗脫，吸附流速為l~4BV/h，吸附后以30。X~60%v/v的甲醇與水混合溶劑進(jìn)行洗脫，洗脫流速為0.5~2BV/h;d、將洗脫液濃縮后，于一20X:冷凍攪拌結(jié)晶24小時(shí)，再于-20℃:冷凍攪拌重結(jié)晶24小時(shí)，過濾收集晶體，80℃烘干，得純度≥99%的萊鮑迪甙A。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的萊鮑迪武A的提取方法，其特征在于步驟b所述的超濾條件為超濾膜規(guī)格為1K，膜透壓為1530PSI，透過流速為10-40LMH。全文摘要本發(fā)明提供了一種萊鮑迪甙A，其純度≥99％。本發(fā)明還提供了萊鮑迪甙A的提取方法。本發(fā)明提供的高純度的萊鮑迪甙A，通過其工藝可精制得到純度≥99％的萊鮑迪甙A，萊鮑迪甙A產(chǎn)率＞85％，其在口感上無任何不良余味，可單獨(dú)作為甜味劑使用，且處理量大、成本低，適用于工業(yè)生產(chǎn)。文檔編號(hào)C07H15/20GK101200480SQ20061002250公開日2008年6月18日申請日期2006年12月15日優(yōu)先權(quán)日2006年12月15日發(fā)明者君華,嶺秦,慶許,陽明福申請人:成都華高藥業(yè)有限公司