專利名稱：噻吩衍生物、它們的制備以及作為藥劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的噻吩衍生物以及它們的(R)-和(S)-對映異構(gòu)體和外消旋物，涉及它們的制備方法，含有它們的藥物和它們的制備，以及這些化合物作為藥學(xué)上的活性劑的應(yīng)用。
轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)是細(xì)胞分化，增殖和編程性細(xì)胞死亡過程中的一件主要事件。一組基因的轉(zhuǎn)錄活化確定了細(xì)胞的終點(diǎn)，并且由于這個原因，轉(zhuǎn)錄被多種因子嚴(yán)格調(diào)節(jié)。在這個過程中涉及的它的一個調(diào)節(jié)機(jī)制是DNA三級結(jié)構(gòu)的改變，其通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子對它們的靶DNA片段的可接近性來影響轉(zhuǎn)錄。通過核心組蛋白的乙?；癄顩r來調(diào)節(jié)核小體的完整性。在低乙?；癄顟B(tài)下，核小體是緊密結(jié)合的，因此不允許轉(zhuǎn)錄。另一方面，通過核心組蛋白的乙?；沙诤诵◇w，結(jié)果可以進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。組蛋白的乙?；癄顟B(tài)由組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)和組蛋白脫乙?；D(zhuǎn)移酶(HDAC)的活性的平衡來控制。近來，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HDAC抑制劑在幾種類型的癌細(xì)胞，包括結(jié)腸癌、T-細(xì)胞淋巴瘤和紅白血病細(xì)胞中抑制生長和編程性細(xì)胞死亡。在編程性細(xì)胞死亡是癌癥發(fā)展的關(guān)鍵因素的條件下，作為編程性細(xì)胞死亡的有效誘導(dǎo)劑，HDAC抑制劑是治療癌癥的有前途的藥劑(Koyama，Y.，等，Blood 96(2000)1490-1495)。
已經(jīng)鑒定了幾種結(jié)構(gòu)類別的HDAC抑制劑，并且綜述于Marks，P.A.，等，J.Nat.Cancer Inst.92(2000)1210-1216。更具體地，WO98/55449，US5,369,108，WO01/38322，WO01/70675，WO02/22577，WO03/011851，WO03/066579，WO03/075929，WO03/076395，WO03/076400，WO03/076401，WO03/076421，WO03/076422，WO03/076430，WO03/076438，WO03/087066和WO2004/013130報(bào)道烷?；?、亞烷基、亞鏈烯基、芳基、雜芳基、芐基、聯(lián)芳基和異羥肟酸肉桂酯具有HDAC抑制活性。
然而，仍然需要具有改善治療性質(zhì)的新化合物，所述治療性質(zhì)如增強(qiáng)的活性、降低的毒性、更好的溶解度和改善的藥代曲線，僅舉幾個例子。
本發(fā)明涉及按照式I的噻吩衍生物以及它們的(R)-和(S)-對映異構(gòu)體和外消旋物， 式I，其中R1是烷基，其任選地被鹵素取代一次或數(shù)次；X是亞苯基或亞雜芳基；Y是飽和碳環(huán)基團(tuán)；飽和雜環(huán)基團(tuán)；雜芳基；或取代的苯基基團(tuán)，及其所有藥用鹽。
按照本發(fā)明的化合物是組蛋白脫乙酰基轉(zhuǎn)移酶(HDAC)的抑制劑并因此具有抗增殖活性。本發(fā)明的目的是式I化合物和它們的藥用鹽，非對映異構(gòu)體，外消旋物和特別是它們的對映體形式，所述化合物的制備，含有這些化合物的藥物和這些藥物的制備，以及這些化合物在控制或預(yù)防疾病或制備相應(yīng)藥物中的應(yīng)用，所述疾病特別是以下提及的疾病和病癥。
可以用這些化合物或藥物治療的腫瘤的實(shí)例有結(jié)腸癌、乳腺癌(包括晚期乳腺癌)、肺癌(例如腺癌和包括非小細(xì)胞肺癌)，前列腺癌(包括晚期疾病)、胰腺癌、淋巴樣譜系的造血腫瘤(例如，急性淋巴細(xì)胞性白血病，B-細(xì)胞淋巴瘤，伯基特淋巴瘤)，骨髓性白血病(例如，急性髓性白血病(AML))，甲狀腺濾泡癌，骨髓發(fā)育不良綜合征(MSD)，間充質(zhì)源性腫瘤，黑素瘤，畸胎癌，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，膠質(zhì)瘤，良性皮膚腫瘤(例如角化棘皮瘤)，腎癌，卵巢癌，膀胱癌和表皮癌。
在這里使用的術(shù)語“烷基”意思是一種飽和直鏈或支鏈烴基，含有從1到6，優(yōu)選從1到3個碳原子，如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，2-丁基，叔丁基。
如果所述烷基被一個或數(shù)個鹵素原子任選地取代，它優(yōu)選被氯和氟、特別是氟取代。實(shí)例有二氟甲基，三氟甲基，2，2，2-三氟乙基，全氟乙基等。
在這里使用的術(shù)語“鹵素”指氟，氯和溴，優(yōu)選氟和氯。
術(shù)語“亞雜芳基”是指具有5-10個環(huán)原子的一-或二-環(huán)芳環(huán)，其含有可達(dá)3個，優(yōu)選1或2個獨(dú)立地選自N、O或S的雜原子，其余環(huán)原子是碳原子。這些亞雜芳基可以任選地被烷基取代一次或兩次，所述烷基如上定義，優(yōu)選甲基。這些亞雜芳基的實(shí)例有噻吩二基，異噁唑二基，吡咯二基，甲基噻吩二基，呋喃二基，咪唑二基，吡啶二基，嘧啶二基，吡嗪二基，噠嗪二基，三嗪二基，吡唑二基，噁唑二基，甲基異噁唑二基，噻唑二基，異噻唑二基，噻二唑二基，噁二唑二基，三唑二基，苯并噻吩二基，吲哚二基，喹啉二基，異喹啉二基，苯并呋喃二基等，優(yōu)選噻吩二基，異噁唑二基，吡咯二基，特別是噻吩二基，或特別是異噁唑二基。
術(shù)語“飽和碳環(huán)基團(tuán)”是指具有3-7個環(huán)原子的單環(huán)飽和烴環(huán)。這些飽和碳環(huán)基團(tuán)可以任選地被如上定義的烷基(優(yōu)選甲基)取代一次或兩次。這些飽和碳環(huán)基團(tuán)的實(shí)例有環(huán)丙基，環(huán)丁基，和環(huán)庚基，優(yōu)選環(huán)戊基或環(huán)己基，特別是環(huán)己基。
術(shù)語“飽和雜環(huán)基團(tuán)”是指具有5-6個環(huán)原子的飽和的單環(huán)烴環(huán)，環(huán)原子含有可達(dá)3個，優(yōu)選1或2個獨(dú)立地選自N、O或S的雜原子，并且其余的環(huán)原子是碳原子。該飽和雜環(huán)基團(tuán)可以被如上定義的烷基、優(yōu)選被甲基任選地取代1-3次，優(yōu)選1或2次。這些飽和雜環(huán)基團(tuán)的實(shí)例有吡咯烷基，嗎啉代，哌嗪基，N-甲基-哌嗪基或(2-，3-，或4-)哌啶基，特別是嗎啉代，N-甲基-哌嗪基或(2-，3-，或4-)哌啶基。
術(shù)語“雜芳基”是指具有5-10個環(huán)原子的一-或二環(huán)的芳族環(huán)，其含有可達(dá)到3個、優(yōu)選1或2個雜原子，該雜原子獨(dú)立地選自N，O或S，并且其余的環(huán)原子是碳原子。這些雜芳基可以被鹵素，-CN，-C(O)OH，-C(O)CH3，-S-CH3，-NH2，-CH2NH2，-CH2OH或烷基，優(yōu)選被烷基任選地取代一次或兩次，其中烷基和鹵素如上定義。這些雜芳基的例子有噻吩基，甲基噻吩基，吡唑基，二甲基異噁唑基，吡啶基，苯并噻吩基，吲哚基，呋喃基，吡咯基，咪唑基，嘧啶基，吡嗪基，噠嗪基，三嗪基，噁唑基，異噁唑基，噻唑基，異噻唑基，噻二唑基，噁二唑基，三唑基，喹啉基，異喹啉基，苯并呋喃基等，優(yōu)選噻吩基，甲基噻吩基，吡唑基，二甲基異噁唑基，吡啶基，苯并噻吩基或吲哚基。
術(shù)語“取代的苯基基團(tuán)”是指被以下各項(xiàng)取代一次至三次的苯基烷基，鹵素，-O-烷基，-S(O)2-烷基，-NH(烷基)或-N(烷基)2；其中烷基和鹵素如上定義并且所述烷基基團(tuán)可以被一個或數(shù)個鹵素原子任選地取代，所述鹵素原子優(yōu)選氯和氟，特別是氟。
本發(fā)明的化合物可以以它們的藥用鹽形式存在。術(shù)語“藥用鹽”指常規(guī)的酸-加成鹽或堿-加成鹽，其保留式I化合物的生物有效性和性能，并由合適的、非毒性的有機(jī)或無機(jī)酸，或有機(jī)或無機(jī)堿形成。酸-加成鹽的例子包括源自無機(jī)酸，如氫氯酸，氫溴酸，氫碘酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸和硝酸，和那些源自有機(jī)酸，如對甲苯磺酸酸，水楊酸，甲磺酸，草酸，琥珀酸，檸檬酸，蘋果酸，乳酸，富馬酸，等等的那些。堿加成鹽例子包括源自銨，鉀，鈉和季銨氫氧化物，例如，氫氧化四甲銨的那些。藥物化合物(也就是一種藥物)的化學(xué)改性成鹽是藥物化學(xué)家公知的技術(shù)，以得到化合物改進(jìn)的物理和化學(xué)穩(wěn)定性，吸濕性，流動性和溶解性。參見，例如Stahl，P.H.，和Wermuth，G，(編輯)，Handbook of Pharmaceutical Salts，Verlag Helvetica Chimica Acta(VHCA)，Zürich(2002)，或Bastin，R.J.，等，Organic Proc.Res.Dev.4(2000)427-435。
在式I化合物中，R1優(yōu)選是甲基，乙基或三氟甲基，特別是甲基。
另一個實(shí)施方案是式I的化合物，其中X是亞苯基或噻吩二基。
另一個實(shí)施方案是式I的化合物，其中X是亞苯基，噻吩二基或異噁唑二基。
另一個實(shí)施方案是式I的化合物，其中Y是取代的苯基基團(tuán)或雜芳基。
本發(fā)明的一個實(shí)施方案是式I化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中Y是取代的苯基基團(tuán)。
本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案是式I化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中X是異噁唑二基。
本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案是式I化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中
X是異噁唑二基；并且Y是取代的苯基基團(tuán)。
這些化合物例如是噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(3-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-基]-乙基}-酰胺)；和噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(4-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-基]-乙基}-酰胺)。
本發(fā)明另一優(yōu)選實(shí)施方案是式Ia化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中 式I-a，其中R1是烷基，其任選地被鹵素取代一次或數(shù)次；Y是飽和碳環(huán)基團(tuán)；飽和雜環(huán)基團(tuán)；雜芳基；或取代的苯基基團(tuán)，及其所有藥用鹽。
本發(fā)明另一實(shí)施方案是式I-a化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中Y是飽和碳環(huán)基團(tuán)。
這些化合物例如是噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-環(huán)己基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺本發(fā)明還有另一個優(yōu)選實(shí)施方案是式I-a化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中Y是飽和雜環(huán)基團(tuán)。
這些化合物例如是(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-哌啶-1-基-苯基)-乙基]-酰胺}；和噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；乙酸鹽。
本發(fā)明還有另一個優(yōu)選實(shí)施方案是式I-a化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中Y是雜芳基。
這些化合物例如是(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-噻吩-2-基-苯基)-乙基]-酰胺}；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[4-(5-甲基-噻吩-2-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[4-(1H-吡唑-4-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3-噻吩-2-基-苯基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3-苯并[b]噻吩-2-基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[3-(5-甲基-噻吩-2-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[3-(1H-吡唑-4-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[3-(3，5-二甲基-異噁唑-4-基)-苯基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[3-(1H-吲哚-5-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；
噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3-吡啶-3-基-苯基)-乙基]-酰胺}；和噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-咪唑-1-基-苯基)-乙基]-酰胺}。
本發(fā)明另一個實(shí)施方案是式I-a化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中Y是取代的苯基基團(tuán)。
這些化合物例如是噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4′-二甲氨基-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3′，4′，5′-三氟-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(2′-甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(2′-甲基-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(2′-氟-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3′-氟-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3′-甲基-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3′-甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4′-氯-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(2′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(2′-甲基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4′-二甲氨基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(2′-氟-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4′-氟-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3′-氟-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4′-甲基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(2′-氯-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3′-氯-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3′-甲基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；和噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4′-甲磺酰基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}。
本發(fā)明另一個實(shí)施方案是式I-b化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中 式I-b，其中R1是烷基，其任選地被鹵素取代一次或數(shù)次；Y是飽和碳環(huán)基團(tuán)；飽和雜環(huán)基團(tuán)；雜芳基；或取代的苯基基團(tuán)，及其所有藥用鹽。
本發(fā)明另一個實(shí)施方案是式I-b化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中
Y是飽和碳環(huán)基團(tuán)。
本發(fā)明還有另一個實(shí)施方案是式I-b化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中Y是飽和雜環(huán)基團(tuán)。
本發(fā)明還有另一個實(shí)施方案是式I-b化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中Y是雜芳基。
這些化合物例如是噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(5-苯并[b]噻吩-2-基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(3，5-二甲基-異噁唑-4-基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(1H-吲哚-5-基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)；和噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(5-吡啶-3-基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}。
本發(fā)明另一個實(shí)施方案是式I-b化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其中Y是取代的苯基基團(tuán)。
這些化合物例如是噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(2-甲氧基-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(4-二甲氨基-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(5-鄰-甲苯基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(5-間-甲苯基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(5-對-甲苯基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}；
噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(2-氯-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(4-甲氧基-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(4-氟-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(3-氟-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(4-氯-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(3-氯-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(2-氟-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(3-甲氧基-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)；和噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(4-甲磺?；?苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)。
本發(fā)明還有另一個實(shí)施方案是制備式I化合物、特別是它們的(R)-和(S)對映異構(gòu)體的方法，該方法通過將式IV的化合物， 式IV，其中R2是烷基基團(tuán)；與式VII的外消旋、或?qū)τ钞悩?gòu)體純的(R)-或(S)-胺在適當(dāng)活化劑的存在下反應(yīng)，
式VII，其中X，Y和R1具有本文以上關(guān)于式I給出的含義，以獲得式VIII的化合物， 式VIII，用羥胺處理式VIII的化合物以獲得各式I化合物；并且如果需要，將所述化合物轉(zhuǎn)化為它的藥用鹽。
本發(fā)明還有另一個實(shí)施方案是制備式I化合物、特別是它們的(R)-和(S)對映異構(gòu)體的方法，該方法通過將式IV的化合物， 式IV，其中R2是烷基基團(tuán)；與式III的外消旋、或?qū)τ钞悩?gòu)體純的(R)-或(S)-胺在適當(dāng)活化劑的存在下反應(yīng)， 式III，
其中X和R1具有本文以上關(guān)于式I給出的含義，并且Fg表示適合于交叉偶聯(lián)反應(yīng)的官能團(tuán)，如鹵素、三氟甲磺酸酯、-ZnCl、硼酸、硼酸頻哪醇酯和三烷基錫烷(例如Me3Sn，Bu3Sn)。(還參見部分(3-1)，反應(yīng)路線1)。
以提供式V的化合物， 式V，其與式X的化合物反應(yīng)， 式X其中Y具有以上關(guān)于式I限定的含義，G表示適合于交叉偶聯(lián)反應(yīng)的官能團(tuán)(與Fg相容)，如鹵素、三氟甲磺酸酯、-ZnCl、硼酸、硼酸頻哪醇酯和三烷基錫烷(例如Me3Sn，Bu3Sn)。(還參見部分(3-1)，反應(yīng)路線1)，隨后用羥胺處理以提供各式I化合物；并且如果需要，將所述化合物轉(zhuǎn)化為它的藥用鹽。
本發(fā)明的式I化合物或其藥用鹽可以通過已知適合于制備化學(xué)相關(guān)化合物的任何方法來制備。這些方法，當(dāng)用于制備式I的噻吩衍生物或其藥用鹽時，通過下列代表性的實(shí)施例舉例說明，在所述實(shí)施例中，除非另外指出，Y、X和R1具有本文以上定義的任何含義。
必需的原材料可以通過有機(jī)化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)方法獲得。這些原材料的制備在后附實(shí)施例中描述。備選地，必需的原材料可以通過類似于舉例說明的那些的方法來獲得，這些方法屬于有機(jī)化學(xué)家的普通技術(shù)。
在下列反應(yīng)路線1中，舉例說明了制備式I化合物的幾種方法。
反應(yīng)路線1在反應(yīng)路線1中，R1如關(guān)于式I所定義，R3是烷基或任選地取代的芐基。Fg是指適合于交叉偶聯(lián)反應(yīng)的官能團(tuán)，如鹵素、三氟甲磺酸酯、-ZnCl、硼酸、硼酸頻哪醇酯和三烷基錫烷(例如Me3Sn，Bu3Sn)。
(1-1)可商購一些通式VII或III的胺，其中Y，X和R1具有上文定義的含義并且Fg表示如上所述的適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)。它們還可以例如通過相應(yīng)的通式VI和II的酮的還原性胺化來制備。
該還原性胺化反應(yīng)典型地作為單罐反應(yīng)進(jìn)行，亞胺的形成和它隨后還原成胺在同一反應(yīng)容器中發(fā)生。該反應(yīng)混合物通常含有氨源例如NH4OAc和還原劑例如氰基硼氫鈉，并且在適當(dāng)溶劑例如甲醇中加熱。
(1-2)未在反應(yīng)路線1中表示的制備通式VII的胺的另一個方法是將Grignard試劑R1-MgBr或有機(jī)鋰化合物L(fēng)i-R1(R1如上定義)加入通式IX的芳族腈， 式IX其中環(huán)X和Y如上定義，并隨后將亞胺還原(Synth.Commun.1998，28(21)，4067)。
(1-3)通式VII的胺，其中X＝異噁唑二基，Y＝取代的苯基基團(tuán)并且R1＝甲基，例如可以由適當(dāng)?shù)乇交〈谋揭彝?jīng)由與草酸二乙酯的混合Claisen縮合和隨后閉環(huán)與羥胺形成異噁唑環(huán)來制備(Baraldi，P.G.，等，J.雜環(huán)Chem.19(1982)557-560)。5-苯基-異噁唑-3-羧酸乙酯的酯與甲基鎂化溴反應(yīng)形成甲酮(Kikkawa，I.，等，Synthesis 11(1980)877)，其又進(jìn)行如部分(1-1)所述的還原性胺化。
可商購純的通式VII或III的胺的(R)-和(S)-對映異構(gòu)體，其中Y，X，R1和Fg具有上文定義的含義，或者可以由可商購的任選地對映異構(gòu)體純的前體通過有機(jī)化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)方法來制備。
(1-4)引入式VII或III的胺的手性中心的優(yōu)選方法例如是相應(yīng)的式VI或II的芳基烷基酮的對映體選擇性還原。該還原可以例如使用手性CBS(Corey，Bakshi，Shibata)試劑和硼烷-THF復(fù)合物、硼烷-二乙基苯胺復(fù)合物或硼烷-二甲硫的組合來完成(Corey，E.J.，等，Angew.Chemie 110(1998)2092-2118)。式VI或II的芳基烷基酮的對映體選擇性還原還有另一個優(yōu)選方法采用適當(dāng)溶劑例如THF中的二異松莰基(pinocampheyl)氯硼烷，隨后用例如H2O2/NaHCO3或二乙醇胺后處理(Brown，H.C.，等，J.Am.Chem.Soc.110(1988)1539-1546；Wiegers，A.，和Scharf，H.D.，Tetr.Asym.7(1996)2303-2312)。另一優(yōu)選方法是式VI或II的芳基烷基酮在過渡金屬催化劑的存在下與Noyori類型的手性配體的不對稱催化氫化(Noyori，R.，等，Angew.Chem.113(2001)40-75)。在式VI或II的芳基烷基酮的這些對映體選擇性還原中獲得的手性醇然后可以通過合成化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)方法轉(zhuǎn)化為式VII或III的胺，如例如Chen，C.-P.，等，Tetrahedron Lett.32(1991)7175-7178中所述用氮官能度(例如用疊氮化物或用苯鄰二甲酰亞胺)在Mitsunobu條件下(Mitsunobu，O.，Synthesis 1(1981)1-28)置換羥基基團(tuán)，隨后轉(zhuǎn)化為胺(例如用三苯膦還原疊氮化物或催化氫化(Pd/C，H2，CF3COOH)或肼解苯鄰二甲酰亞胺)。
(1-5)其中Y，X，R1，F(xiàn)g具有上文定義的含義的式VII或III的外消旋胺可以通過已知方法分離成它們的對映異構(gòu)體，例如作為與適當(dāng)手性對映異構(gòu)體純的酸形成的非對映體鹽的分級結(jié)晶(Smith，H.E.，等，J.Am.Chem.Soc.105(1983)1578；US4,983,771)。這些酸可以是可商購的，例如苦杏仁酸，酒石酸，乳酸，樟腦酸，樟腦磺酸，N-乙酰亮氨酸，二苯甲酰酒石酸，或者將它們特別設(shè)計(jì)用于1-芳基乙胺的拆分，例如2-萘基乙醇酸(Kinbara，K.，等，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.2(2000)1339-1348)或異亞丙基甘油3-羧基-2-萘甲酸酯(naphtoate)(Pallavicini，M.，等，Tetr.Asym.12(2001)2489-2495)(1-6)用于分離式VII或III的外消旋胺的兩種對映異構(gòu)體的另一優(yōu)選方法是酶催化拆分，例如用來自南極洲假絲酵母(candida Antarctica)B的脂酶(Rasor，J.P.，and Voss，E.，Applied Catalysis AGeneral 221(2001)145-195；Iglesias，L. E.，等，Tetr.Asym.8(1997)2675-2677)(1-7)用于1-(芳基)乙基胺的不對稱制備的另一方法是甲基鋰對手性肟醚的親核加成(Yamazaki，N.，等，Tetrahedron Lett.42(2001)5029-5032)并隨后轉(zhuǎn)化為胺。
(2-1)其中Y，X，F(xiàn)g和R1具有上文定義的含義的通式V的化合物可以通過式IV的化合物與式III的胺反應(yīng)而獲得，在式IV中R2是(C1-C4)烷基基團(tuán)，優(yōu)選甲基，乙基或叔丁基基團(tuán)或任選地取代的芐基，在式III中Fg，X和R1具有上文定義的含義。該反應(yīng)典型地涉及兩步一罐步驟。
在第一步中，式IV的羧酸被活化。活化反應(yīng)在惰性溶劑或稀釋劑中，例如在二氯甲烷，二噁烷或四氫呋喃中，在活化劑的存在下進(jìn)行。這些活化的酸衍生物有例如，一種酰鹵，(例如?；?，由酸和一種無機(jī)酰基氯反應(yīng)形成，(例如亞硫酰氯)；一種混合酐，例如一種由酸和氯甲酸酯(如氯甲酸異丁酯)反應(yīng)形成；一種由酸和一種苯酚(例如五氟苯酚)反應(yīng)形成的活性酯類；一種由酸和N-羥基苯并三唑反應(yīng)形成的活性酯類；一種由酸和一種疊氮化物(例如二苯基磷酰疊氮化物)反應(yīng)形成的酰疊氮；一種由酸和一種氰化物(例如二乙基磷酰基氰化物)反應(yīng)形成的?；?；或酸和一種碳二亞胺(例如二環(huán)己基碳二亞胺)的反應(yīng)產(chǎn)物，或酸和雙-(2-氧代-3-噁唑烷基)-磷酰基氯的反應(yīng)產(chǎn)物。反應(yīng)在-30℃和60℃之間進(jìn)行，方便地在或低于0℃。
在第二步中，在用于活化的溫度下將其中R1具有上文定義的含義的通式III的胺加入溶液，將溫度緩慢調(diào)節(jié)到環(huán)境溫度。一種合適的清除劑堿，如三乙胺，或二異丙基乙胺可以被加到反應(yīng)混合物中。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法。原則上，也可以應(yīng)用被描述在，例如Houben-Weyl，“Methoden der organischen Chemie″，Vols.XV/1和XV/2，Georg ThiemeVerlag，Stuttgart中的肽化學(xué)中用于酰胺合成的所有方法。
式IV的化合物在文獻(xiàn)，例如US2,680,731和J.Heterocycl.Chem.28(1991)17中描述。這些單酯通常是選擇性皂化該二酯類或氧化該相應(yīng)醛而制備，但是也可以用其它本領(lǐng)域人員熟悉的其它方法。
式III(和在相應(yīng)的式II)中的官能團(tuán)Fg可以在式III的胺與式IV的化合物反應(yīng)之前攜帶保護(hù)基，并且之后必須被釋放以進(jìn)一步轉(zhuǎn)化。
(2-2)類似于部分(2-1)，其中Y，X，R1和R2具有上文定義的含義的式VIII的化合物可以由其中R2具有上文定義的含義的式IV化合物，通過與式VII的胺反應(yīng)來制備。反應(yīng)可以在如關(guān)于部分(2-1)中式IV化合物的制備所述的條件下進(jìn)行。
(3-1)一種制備式VIII的化合物的方法包括其中X，R1，R2和Fg具有以上定義的含義的式V的化合物的反應(yīng)，并且Fg表示如上所述適合于交叉偶聯(lián)反應(yīng)的官能團(tuán)。
a)Y是取代的苯基基團(tuán)或雜芳基的式VIII的化合物可以通過V和通式X的化合物之間的鈀催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)來制備，所述V中Y，R1和R2具有上文定義的含義并且Fg表示如上所述適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)， 式X其中環(huán)Y具有以上定義的含義，G表示適合于交叉偶聯(lián)反應(yīng)的官能團(tuán)，并且與如上所述的Fg相容。
該鈀催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)可以是，但不限于Suzuki類型(G是硼酸，硼酸頻哪醇酯等并且Fg是鹵素或Fg是硼酸，硼酸頻哪醇酯等，并且G是鹵素；參見例如Miyaura，N.，等，Chem.Rev.95(1995)2457-2483；Miyaura，N.，等，Synth.Commun.11(1981)513-519)，Negishi類型(G是ZnCl等并且F是鹵素或Fg是ZnCl等并且G是鹵素；參見例如Negishi，E.，等，J.Org.Chem.42(1977)1821-1823)或Stille類型(G是三烷基錫烷，例如Me3Sn，Bu3Sn并且Fg是三氟甲磺酸鹽(酯)，鹵素或Fg是三烷基錫烷，例如Me3Sn，Bu3Sn并且G是三氟甲磺酸鹽(酯)，鹵素；參見例如Stille，J.K.，Angew.Chem.98(1986)504)。
其中Fg是硼酸，硼酸頻哪醇酯或三烷基錫烷等的式V，III或II的中間體可以例如通過標(biāo)準(zhǔn)的有機(jī)化學(xué)方法獲自相應(yīng)的鹵化物(Fg是鹵素)。例如，其中Fg是硼酸頻哪醇酯的式V，III或II的化合物可以由溴化物通過鈀催化(例如PdCl2(dppf)-CH2C12-復(fù)合物)的與頻哪醇硼烷或雙(頻哪醇根合(pinacolato))二硼的偶聯(lián)來制備。例如其中Fg是三烷基錫烷的式V化合物可以由溴化物通過鈀催化(例如PdCl2(MeCN)2-Komplex)的與六烷基二錫的偶聯(lián)來制備。
b)其中Y是飽和雜環(huán)胺或含N雜芳基的式VIII的化合物可以通過式V的化合物和式XI的化合物之間的鈀催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)來制備， 式XI其中H-原子與環(huán)Y的N-原子鍵合。
該反應(yīng)可以例如是，但不限于Buchwald-Hartwig類型和相關(guān)反應(yīng)(Fg是碘化物，溴化物，三氟甲磺酸鹽(酯)或氯化物；參見例如Kwong，F(xiàn).Y.，等，Org.Lett.4(2002)581-584；Louie，J.，等，J.Org.Chem.62(1997)1268-1273；Wolfe，J.P.，等，J.Am.Chem.Soc.119(1997)6054-6058；Yin，J.，等，Org.Lett.4(2002)3481-3484；Mann，G.，等，J.Am.Chem.Soc.120(1998)827-828)。
另一優(yōu)選方法是式X的化合物和其中Fg是B(OH)2的式V的芳基硼酸之間的鈀催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)(參見例如Chan，D.M.T.，等，TetrahedronLett.39(1998)2933-2936；Lam，P.Y.S.，等，Tetrahedron Lett.39(1998)2941-2944)(4-1)一種制備式I化合物的方法涉及式VIII的化合物與羥胺在適當(dāng)堿的存在下的反應(yīng)，在式VIII中Y，X和R1具有上文定義的含義并且R2是(C1-C4)烷基基團(tuán)，優(yōu)選甲基，乙基或叔丁基基團(tuán)或任選地取代的芐基。反應(yīng)是在惰性溶劑或稀釋劑如甲醇或乙醇中，溫度0℃和100℃之間，方便地在或接近環(huán)境溫度下進(jìn)行，pH在10和12之間。一種合適的堿是，例如，一種醇化物，例如，甲醇鈉。并不是在原位產(chǎn)生羥胺，它可以被分開地釋放和可以作為有機(jī)溶劑的溶液中使用，例如醇，如甲醇或乙醇。
(4-2)另一種制備式I化合物的方法是經(jīng)由式XII的羧酸的反應(yīng)順序， 式XII其中Y，X，R1具有上文定義的含義。
這些式XII的中間體由式VIII的化合物通過水解來制備。進(jìn)行水解的條件取決于基團(tuán)R2的性質(zhì)。當(dāng)R2是甲基或乙基時，反應(yīng)在堿的存在下、在惰性溶劑或稀釋劑中、例如在甲醇或乙醇中進(jìn)行，所述堿如氫氧化鋰，氫氧化鈉或氫氧化鉀。當(dāng)R2是叔丁基基團(tuán)時，反應(yīng)在酸的存在下、在惰性溶劑中進(jìn)行，所述酸例如鹽酸溶液，所述惰性溶劑如二乙醚或二噁烷，或二氯甲烷中的三氟乙酸。當(dāng)R2是芐基時，反應(yīng)在適當(dāng)載體如活性炭上的貴金屬催化劑如鈀或鉑的存在下通過氫解來進(jìn)行。并非所有水解方法與所有基團(tuán)Y，X，或R1相容。在其中這些基團(tuán)的特征不允許使用某些水解方法的情形中，需要應(yīng)用其它制備方法。
式XII的酸隨后與羥胺反應(yīng)產(chǎn)生式I化合物。該反應(yīng)典型地涉及兩步一罐步驟。
在第一步中，式XII的羧酸被活化?；罨磻?yīng)在惰性溶劑或稀釋劑中，例如在二氯甲烷，二噁烷或四氫呋喃中，在活化劑的存在下進(jìn)行。這些活化的酸衍生物有例如例如，一種酰鹵，(例如酰基氯)，由酸和一種無機(jī)酰基氯反應(yīng)形成，(例如亞硫酰氯)；一種混合酐，例如一種由酸和氯甲酸酯(如氯甲酸異丁酯)反應(yīng)形成；一種由酸和一種苯酚(例如五氟苯酚)反應(yīng)形成的活性酯類；一種由酸和N-羥基苯并三唑反應(yīng)形成的活性酯類；一種由酸和一種疊氮化物(例如二苯基磷酰疊氮化物)反應(yīng)形成的酰疊氮；一種由酸和一種氰化物(例如二乙基磷?；杌?反應(yīng)形成的?；?；或酸和一種碳二亞胺(例如二環(huán)己基碳二亞胺)的反應(yīng)產(chǎn)物，或酸和雙-(2-氧代-3-噁唑烷基)-磷酰基氯的反應(yīng)產(chǎn)物。反應(yīng)在-30℃和60℃之間進(jìn)行，方便地在或低于0℃。
在第二步中，在用于活化的溫度下將羥胺加入溶液，將溫度緩慢調(diào)節(jié)到環(huán)境溫度。這些方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知。原則上，也可以應(yīng)用被描述在，例如Houben-Weyl，“Methoden der organischen Chemie″，Vols.XV/1和XV/2，Georg Thieme Verlag，Stuttgart中的肽化學(xué)中用于酰胺合成的所有方法。
式XII的化合物是新的并且也是本發(fā)明的主題。
下面描述在反應(yīng)路線1中未明確顯示的制備化合物I的另外的方法。
制備式I化合物的另一備選路線是對于式I化合物的異羥肟酸部分引入O-保護(hù)基Q和在最后的反應(yīng)步驟中脫保護(hù)以釋放式I化合物。
適當(dāng)?shù)腛-保護(hù)基Q可以是芐基-，對甲氧基芐基-，叔丁氧羰基-，三苯甲基，或甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基或二甲基-叔丁基甲硅烷基。
為了將這些保護(hù)基引入中間體V或VIII，可以選擇類似于如部分(4-2)中所述的反應(yīng)路線。第一步是水解成相應(yīng)的羧酸，其被活化并與Q-O-NH2反應(yīng)獲得所需的O-保護(hù)異羥肟酸酯(鹽)。
進(jìn)行的最終脫保護(hù)反應(yīng)取決于保護(hù)基的類型。當(dāng)保護(hù)基是芐基-或?qū)籽趸S基時，進(jìn)行的反應(yīng)是在惰性溶劑如醇如甲醇或乙醇中的、在貴金屬催化劑如適當(dāng)載體上的鈀的存在下在環(huán)境溫度和壓力下的氫解，所述載體如碳，硫酸鋇，或碳酸鋇。當(dāng)保護(hù)基是叔丁氧羰基-，三苯甲基，或甲硅烷基如三甲基甲硅烷基或二甲基-叔丁基甲硅烷基時，反應(yīng)在酸的存在下，在-20℃至60℃、優(yōu)選在0℃至環(huán)境溫度下進(jìn)行。該酸可以是惰性溶劑如二乙醚或二噁烷中的鹽酸溶液，或二氯甲烷中的三氟乙酸。當(dāng)保護(hù)基是甲硅烷基基團(tuán)如三甲基甲硅烷基或二甲基-叔丁基甲硅烷基時，反應(yīng)也可以在氟化物來源如氟化鈉或氟化四丁基銨的存在下、在惰性溶劑如二氯甲烷中進(jìn)行。并非所有保護(hù)基Q與所有基團(tuán)Y，X和R1相容。在這些基團(tuán)的特征不允許使用某些保護(hù)基的情形中，需要應(yīng)用其它保護(hù)基Q或其它制備方法。
式I化合物還可以使用固相支持合成的方法制備。2，5-噻吩二羧酸與和樹脂結(jié)合的羥胺部分(-O-NH2)反應(yīng)，例如羥胺王氏樹脂或羥胺2-氯三苯甲基樹脂形成結(jié)合樹脂的異羥肟酸。第二羧酸結(jié)構(gòu)部分與其中Y，X和R1具有上文定義的含義并且Fg表示上文所述的適當(dāng)官能團(tuán)的式VII或III胺通過如Houben-Weyl，″Methoden der organischen Chemie″，Vols.XV/1和XV/2中描述的形成酰胺鍵的標(biāo)準(zhǔn)方法反應(yīng)。任選地，本官能團(tuán)Fg與通式X的化合物反應(yīng)，通式X中環(huán)Y具有上文所述的含義并且G表示如上定義的適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)。這可以如部分(3-1)所述來完成。
此后，異羥肟酸從固體載體中釋放出來。這些可以例如用TFA完成。典型地，異羥肟酸的裂解是通過環(huán)境溫度下，存在三異丙基硅烷時，在二氯甲烷中用50％TFA處理樹脂獲得。如有必要，粗產(chǎn)物可以通過LC-MS提純。
制備式I的純(R)-和(S)-對映異構(gòu)體的方法包括在部分(1-4)至(1-7)中如上所述的式I化合物的合成中采用對映異構(gòu)體純的式VII或III的胺。
還有另一個制備式I化合物的純(R)-和(S)-對映異構(gòu)體的方法是合成按照方法(1-1)至(4-2)的外消旋化合物。外消旋物可以隨后在終產(chǎn)物或式III前體階段分離成兩種對映異構(gòu)體。分離可以通過一種分析性的、半制備的或制備級的色譜法進(jìn)行，使用合適的旋光固定相和合適的洗脫劑。合適的旋光固定相包括，但不限于，硅石(如ChiraSper，Merck；Chiralpak OT/OP，Baker)，纖維素或直鏈淀粉酯或氨基甲酸酯類(例如Chiralpak AD，Daicel ChemicalIndustries Ltd.；Chiracel OD-CSP，Daicel；Chiracel OB/OY，Baker)或其它(如Crownpak，Daicel或Chiracel OJ-R，Baker)。適當(dāng)?shù)南疵搫┌ǎ幌抻诩和?，庚烷，乙醇，異丙醇，乙腈，水及其混合物。還可以應(yīng)用用于分離對映異構(gòu)體的其它方法，如由式I化合物和其它旋光化合物，例如樟腦磺酸或番木鱉堿，一起形成非對映的化合物，分離這些非對映的化合物，接著從旋光試劑中釋放。
本發(fā)明的一個目的是藥物組合物，含有藥理學(xué)有效量的一種或多種式I的對映異構(gòu)體純的化合物，其與藥學(xué)上可接受的賦形劑和/或稀釋劑混合。
本發(fā)明的另一方面是提供一種藥物，其含有一種或多種對映異構(gòu)體純的式I化合物作為活性成分和藥學(xué)上可接受的輔藥。此類藥物或藥物組合物可以以一種適合口服的形式，例如作為片劑、包衣片劑、糖錠劑、膠囊劑、溶液乳劑或混懸劑；作為無菌溶液、混懸劑或乳劑用于胃腸外的注射(包括靜脈內(nèi)，皮下的，肌內(nèi)，血管內(nèi)的或輸注)；作為一種軟膏或乳膏用于局部給藥或作為栓劑用于直腸的給藥。這些藥物制劑可以通過加工本發(fā)明化合物與藥學(xué)惰性的無機(jī)或有機(jī)載體獲得。例如，乳糖、玉米淀粉或它的衍生物、滑石、硬脂酸或它的鹽等均可被用作片劑、包衣片劑、糖錠劑、和硬明膠膠囊的載體。軟明膠膠囊的合適載體為，例如，植物油，蠟，脂肪，半固體和液體多元醇等等。然而，取決于活性物質(zhì)的性質(zhì)在軟明膠膠囊的情況下通常不需要載體。用于生產(chǎn)溶液和糖漿劑的合適載體為，例如，水，多元醇，甘油，植物油等等。栓劑的合適載體為，例如，天然的或硬化油，蠟，脂肪，半液體的或液體多元醇等等。
另外，藥物制劑可以含有防腐劑，增溶劑，穩(wěn)定劑，潤濕劑，乳化劑，甜味劑，著色劑，調(diào)味劑，用于改變滲透壓的鹽，緩沖劑，掩蔽劑或抗氧化劑。它們還可以含有其它在治療上有價值的物質(zhì)。
藥物組合物可以包含下列各項(xiàng)
步驟1、在一種合適的混合器中混合1，2和3項(xiàng)15分鐘。
2、使來自步驟1的混合物粉末與20％聚乙烯基吡咯烷酮K30溶液(項(xiàng)目4)成粒。
3、在50℃干燥來自步驟2的顆粒。
4、步驟3的顆粒通過一種合適的磨碎設(shè)備。
5、加項(xiàng)目5到步驟4中磨碎了的顆粒里并混合3分鐘。
6、在合適的壓力下，壓縮步驟5的顆粒。
另一種藥物制劑例如是式I化合物的微混懸劑。為獲得該微混懸劑，使用下列材料每注射劑(溶解，用0.45μm的孔徑過濾并高壓滅菌)的7.5％改性凝膠XF 20(Braun)的水溶液，過濾器(定做的，篩目尺寸100μm)，過濾支架，連接，洗過的一種直徑0.25mm的玻璃珠并且熱消毒Retsch磨碎機(jī)。
為制備典型批次，6244mg的式(I)化合物與30g玻璃珠被稱入兩個50ml燒瓶，用刮刀分散并渦旋。然后10ml凝膠載體被加入到每一瓶子。該瓶子被渦旋，加蓋和包裹鋁箔避光保護(hù)。在一種Retsch磨碎機(jī)中，內(nèi)容物質(zhì)以30/s被磨碎14小時。然后用過濾支架上兩層濾器(100μm)從珠粒中提取微混懸劑，連接到一個接受瓶，通過兩分鐘內(nèi)在400g下離心，并且包括六次洗滌步驟，得到最終容積為130ml。
均化后，該內(nèi)容物質(zhì)由HPLC測定為45.7mg/ml，相應(yīng)產(chǎn)率為95％。微混懸劑用18.6ml稀釋得到最終濃度為40mg/ml。獲得的球形、粒狀顆粒，通過顯微鏡測定，顯示直徑在1和5μm之間。為了儲存，將微混懸劑裝入消過毒的小瓶，加蓋，標(biāo)記并在-20℃下保存。使用前，微混懸劑必須劇烈渦旋均勻。
該噻吩衍生物通常以5-5000mg/平方米動物的體表面積，即約0.1-100mg/kg的單位劑量對溫血動物給藥，這通常提供了治療有效的劑量。單位劑量形式如片劑或膠囊通常包含例如1-250mg的活性成分。優(yōu)選地，使用1-100mg/kg的日劑量。然而，依據(jù)所治療的宿主、具體的給藥路徑和所治療的疾病的嚴(yán)重程度，必然需要改變?nèi)談┝?。因此，最佳劑量可以由治療任何具體患者的醫(yī)師來決定。
藥理活性為顯示本發(fā)明化合物的活性，使用一種標(biāo)準(zhǔn)MTT分析評價它們對人結(jié)腸癌細(xì)胞系的影響。MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物)廣泛地用于細(xì)胞毒性效應(yīng)或體外腫瘤細(xì)胞化學(xué)敏感性的定量測定。該分析基于通過代謝的活細(xì)胞將黃色四唑鎓鹽(MTT)裂解為紫色甲(formazan)晶體。詳細(xì)參見Rubinstein，L.V.，等，J.Natl.Cancer Inst.82(1990)1113-1118。
我們操作如下HT-29細(xì)胞(人結(jié)腸癌細(xì)胞系，ATCC-No.HTB-38)培養(yǎng)在RPMI 1640培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基含有GlutaMAXTMI(Invitrogen，Cat-No.61870-010)，2.5％胎牛血清(FCS，Sigma Cat-No.F4135(FBS))，2mM谷氨酰胺，100u/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素(＝Pen/Strep，來自Invitrogen Cat.No.15140)。對于測定在相同的培養(yǎng)基中將細(xì)胞接種到384孔板中，每孔900個細(xì)胞。第二天，化合物(在二甲亞砜溶解的10mM)以30μM-1.5nM的各種濃度加入。5天后，主要根據(jù)廠家(細(xì)胞增擴(kuò)增試劑盒I，MTT，來自Roche MolecularBiochemicals)說明書，做MTT分析。簡言之在37℃，5％CO2下，將MTT標(biāo)記試劑加至0.5mg/ml的終濃度，溫育4小時。在這個溫育期間，形成紫色甲晶體。在加入增溶作用的溶液(20％十二烷基磺酸鈉(SDS)溶于0.02 M HCl)后，該板在37℃，5％CO2下，溫育過夜。小心混合后，該板在550nm，用Victor 2(掃描多孔分光光度計(jì)，Wallac)測量。
在樣品中，減少活細(xì)胞數(shù)量導(dǎo)致總的代謝活性降低。該降低與由紫色甲晶體溶解作用產(chǎn)生的紫色的量直接相關(guān)。使用XL-擬合(XL擬合軟件(IDBusiness Solution Ltd.，Guilford，Surrey，UK))完成IC90的測定。
參考化合物具有下列結(jié)構(gòu)
為進(jìn)一步說明本發(fā)明的化合物作為HDAC抑制劑的活性，使用下列生物化學(xué)猝滅(quench)分析，評價它們對組蛋白脫乙?；敢种频淖饔媒M蛋白脫乙酰基酶(HDAC)的功能是賴氨酸在例如組蛋白H4中的脫乙?；饔?。一種源自組蛋白H4的17個氨基酸的肽用四甲基羅丹明(TAMRA，熒光團(tuán)，Invitrogen)在C端，和QSY-7TM(猝滅劑染料，Invitrogen)在N-末端標(biāo)記，并用作底物(組蛋白H4-QSY7的TAMRA-最初17aa)。隨著HDAC的脫乙酰作用，酶LysC能夠切割賴氨酸后的肽。這導(dǎo)致猝滅效應(yīng)的喪失和高的熒光信號?；衔锏腍DAC抑制導(dǎo)致低的信號，因?yàn)長ys C不能切割底物并且猝滅效應(yīng)持續(xù)。
對于劑量響應(yīng)曲線，以1∶3稀釋稀釋10個濃度，起始為30μM。10μl化合物稀釋物被加入到384孔板的每一孔中。加入10μl HDAC(重組體HDAC-1，從HEK 293細(xì)胞(腺病毒5片段轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞系，ATCC-No.CRL 1573)純化得到；酶活性必須對每個制劑分別評估)。加入10μl肽底物(1μM終濃度，源自1mM貯備溶液，在試驗(yàn)緩沖液中1∶1000稀釋)。在室溫下溫育90分鐘后，加入20μl試驗(yàn)緩沖液停止反應(yīng)，試驗(yàn)緩沖液包括3μg/ml LysC和0.075％十二烷基磺酸鈉(SDS)。過夜溫育后，TAMRA的熒光信號被測量(Victor 2，來自Wallac，吸收544nm，發(fā)射590nm)。DMSO(二甲亞砜)處理的對照孔的O.D.為100％，化合物處理的孔的抑制作用％相對于100％計(jì)算。以10個濃度為基準(zhǔn)，通過使用XLfit3(XLfit軟件(ID Business Solution Ltd.，Guilford，Surrey，UK))產(chǎn)生IC50曲線。
使用的試驗(yàn)緩沖液10mM 4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)pH8，10mM NaCl，10％甘油，0.005％Triton X100TM，0.1mM乙二胺四乙酸(EDTA)，0.1mM三(2-羧乙基)膦(TCEP)的混合物。使用的板384孔板(黑色，Greiner，781077)。
參考化合具有下列結(jié)構(gòu)。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是一種藥物，如上定義，通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中組蛋白的乙酰化用于抑制所述腫瘤細(xì)胞增殖。
本發(fā)明的另一個實(shí)施方案是一種藥物，如上定義，用于治療造血和淋巴系統(tǒng)瘤。
本發(fā)明還有另一個實(shí)施方案是一種藥物，如上定義，用于治療癌癥。
本發(fā)明還有另外的實(shí)施方案是一種藥物，如上文定義，用于治療結(jié)腸、乳腺、肺、前列腺、直腸、胃、膀胱、胰腺或卵巢癌。
本發(fā)明的又一個實(shí)施方案是一種或多種對映異構(gòu)體純的式I化合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中組蛋白的乙?；糜谝种扑瞿[瘤細(xì)胞增殖。
本發(fā)明的又一個實(shí)施方案是一種或多種對映異構(gòu)體純的式I化合物在制備用于治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的又一個實(shí)施方案是一種或多種對映異構(gòu)體純的式I化合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于治療結(jié)腸、乳腺、肺、前列腺、直腸、胃、膀胱、胰腺或卵巢癌。
本發(fā)明的又一個實(shí)施方案是一種或多種對映異構(gòu)體純的式I化合物在制備用于治療造血和淋巴系統(tǒng)瘤的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的又一個實(shí)施方案是用于抑制腫瘤細(xì)胞增殖的一種方法，該方法由于向腫瘤細(xì)胞施用有效量的一種或多種對映異構(gòu)體純的式I化合物，誘導(dǎo)所述腫瘤細(xì)胞中的組蛋白乙?；?。根據(jù)本發(fā)明這方面的另一個特征，提供一種在需要這種治療的溫血動物，例如人，中產(chǎn)生抗細(xì)胞增殖作用的方法，其包含對所述動物給藥有效量的、如上文定義的對映異構(gòu)體純的噻吩衍生物。
因此本發(fā)明還有另一個實(shí)施方案為一種方法，如上定義，其中腫瘤是結(jié)腸、乳腺、肺、前列腺、直腸、胃、膀胱、胰腺或卵巢癌。
根據(jù)本發(fā)明的一個更優(yōu)選的方面，提供一種如上定義的對映異構(gòu)體純的式I化合物，通過治療，在人或動物體的治療方法中應(yīng)用。我們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物具有抗細(xì)胞增殖性能，認(rèn)為該性能是由于它們的組蛋白脫乙酰轉(zhuǎn)移酶抑制活性而產(chǎn)生的。因此，本發(fā)明的化合物提供了一種治療惡性細(xì)胞增殖的方法。根據(jù)本發(fā)明的對映異構(gòu)體純的化合物，預(yù)計(jì)通過提供一種抗增殖作用用于治療癌癥，尤其治療乳腺、肺、結(jié)腸、直腸、胃、前列腺、膀胱、胰腺和卵巢癌。另外，預(yù)料本發(fā)明的衍生物具有抗一系列的白血病、淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤和實(shí)體瘤例如在組織如肝、腎、前列腺和胰腺組織中的癌和肉瘤的活性。
上文定義的抗細(xì)胞增殖治療可作為一種單獨(dú)的治療來應(yīng)用，或除了本發(fā)明的噻吩衍生物以外，還可包括一種或多種其它抗腫瘤物質(zhì)，例如那些選自例如有絲分裂抑制劑如長春堿；烷基化劑如順鉑，卡鉑和環(huán)磷酰胺；微管組裝抑制劑，如紫杉醇或其它紫杉烷類；抗代謝物類，如5-氟尿嘧啶，卡培他濱，阿糖胞苷和羥基脲；或，例如，插入抗生素，例如阿霉素和博來霉素；免疫刺激劑，如曲妥單抗；DNA合成抑制劑，如吉西他濱；酶，如天冬酰胺酶；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，如依托伯苷；生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物，如干擾素；和抗激素類，例如抗雌激素類，如他莫昔芬，或例如抗雄激素藥類，如(4’-氰基-3-(4-氟苯基磺酰基)-2-羥基-2-甲基-3’-(三氟甲基)-N-丙酰苯胺，或描述于例如CancerPrinciples & Practice of Oncology，Vincent T.DeVita，Jr.，Samuel Hellmann，Steven A.Rosenberg；5th ed.，Lippincott-RavenPublishers，1997的其它治療劑和原則。這種聯(lián)合治療可通過同時、順次或分別給藥治療用的單獨(dú)組分得以實(shí)現(xiàn)。依照本發(fā)明的這個方面，提供了一種藥品，其包含用于聯(lián)合治療癌癥的如上文定義的式I的噻吩衍生物和如上文定義的另外的抗腫瘤物質(zhì)。
提供下列實(shí)施例和參考文獻(xiàn)以便幫助理解本發(fā)明，本發(fā)明的真正范圍在后附權(quán)利要求書中闡明。應(yīng)當(dāng)理解，在闡明的方法中可以進(jìn)行不背離本發(fā)明精神的改進(jìn)。
實(shí)施例1步驟1(R)-5-[1-(4-溴-苯基)-乙基氨基甲酰基]-噻吩-2-羧酸甲酯向18.64g(0.100mol)噻吩-2，5-二羧酸一甲酯在450ml二氯甲烷中的溶液加入28.76g(0.150mol)N′-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，22.96g(0.150mol)1-羥基苯并三唑水合物和15.21g(0.150mol)三乙胺。在室溫下30分鐘后，加入20.00g(0.100mol)R-(+)-1-(4-溴-苯基)-乙基胺。攪拌反應(yīng)混合物5小時，然后用飽和NaHCO3水溶液和用水萃取。通過MgSO4干燥有機(jī)相并蒸發(fā)溶劑。用二異丙基醚和正庚烷研制殘余物，提供30.29g(0.082mol)(R)-5-[1-(4-溴-苯基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯。
步驟2(R)-5-[1-(4-噻吩-2-基-苯基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯向0.462g(0.0004mol)四(三苯膦)-鈀(0)在45ml無水二甲氧基乙烷中的懸浮液加入5.00g(0.0136mol)(R)-5-[1-(4-溴-苯基)-乙基氨基甲酰基]-噻吩-2-羧酸甲酯，并在氮?dú)夥障略谑覝叵聰嚢?0分鐘。加入20ml乙醇中的3.65g(0.0285mol)噻吩-2-硼酸和14.3ml(0.0286mol)的2M Cs2CO3水溶液，將混合物加熱至75-80℃ 3小時。在1.25小時后，將另外0.5當(dāng)量的噻吩-2-硼酸和Cs2CO3加入混合物。過濾溫?zé)岬姆磻?yīng)混合物，用乙酸乙酯洗滌固體，蒸發(fā)濾液中的溶劑。將殘余物溶解在二氯甲烷中，用水洗滌，通過硫酸鎂干燥，去除溶劑。從正丁醇/正庚烷1∶2中再結(jié)晶粗產(chǎn)物，真空干燥，提供2.52g(0.00678mol)(R)-5-[1-(4-噻吩-2-基-苯基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯。
類似于在實(shí)施例2，步驟3中描述的方式(微波輔助反應(yīng))，也制備了標(biāo)題化合物。
步驟3(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-噻吩-2-基-苯基)-乙基]-酰胺}(化合物1-1)向2.52g(0.00678mol)(R)-5-[1-(4-噻吩-2-基-苯基)-乙基氨基甲酰基]-噻吩-2-羧酸甲酯在100ml二氯甲烷和35ml甲醇中的溶液加入34.1ml(0.0682mol)的在甲醇中的2M羥胺溶液和10ml甲醇中的0.430g(0.00766mol)氫氧化鉀。室溫(rt)下3小時后，將反應(yīng)混合物過濾，用甲醇洗滌固體。用干冰處理濾液，將pH值降低至幾乎中性。持續(xù)攪拌15分鐘，將形成的沉淀濾去。用甲醇洗滌固體，蒸發(fā)合并的有機(jī)濾液的溶劑。通過制備反相色譜法純化殘余物。然后通過用甲苯研制和用二異丙醚洗滌進(jìn)一步純化產(chǎn)物，獲得1.75g(0.0047mol)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-噻吩-2-基-苯基)-乙基]-酰胺}(化合物1-1)，計(jì)算值MW 372.47，實(shí)驗(yàn)值MW(M+H)372.9；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝11.35(bs，1H)，9.21(bs，1H)，8.95(d，1H)，7.83(m，1H)，7.62(m，2H)，7.57(m，1H)，7.52(m，1H)，7.46(m，1H)，7.41(m，2H)，7.12(m，1H)，5.12(m，1H)，1.49(d，3H)。
類似于實(shí)施例1-1，使用適當(dāng)?shù)脑牧希苽湎铝谢衔?
實(shí)施例2步驟11-(3-溴-苯基)-乙基胺向4.97g(0.0249mol)1-(3-溴-苯基)-乙酮和分子篩在50ml甲醇中的混合物，加入23g(0.298mol)乙酸銨和1.75g(0.0265mol)氰基硼氫化鈉，在50℃下攪拌反應(yīng)混合物2d(HPLC對照)。在冷卻至室溫后，濾去分子篩，用甲醇洗滌。蒸發(fā)合并的濾液的溶劑，將乙酸乙酯和水加入殘余物。在攪拌同時用6N HCl水溶液將混合物酸化。分離水相，用1N HCl水溶液萃取有機(jī)相兩次。加入乙酸乙酯至合并的水相中，用6N NaOH將混合物堿化。分離有機(jī)相，用乙酸乙酯萃取水相再兩次。通過MgSO4干燥有機(jī)的合并有機(jī)相，減壓蒸發(fā)溶劑，提供2.96g(0.0148mol)1-(3-溴-苯基)-乙基胺。
步驟25-[1-(3-溴-苯基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯類似于實(shí)施例1，步驟1所述方式，由1-(3-溴-苯基)-乙基胺和噻吩-2，5-二羧酸一甲酯制備標(biāo)題化合物。
步驟35-[1-(3-噻吩-2-基-苯基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯以兩種不同方式制備標(biāo)題化合物類似于實(shí)施例1，步驟2所述方式；如下所述的微波輔助反應(yīng)向10.0mg(0.0086mmol)四(三苯膦)-鈀(0)在2ml無水二甲氧基乙烷中的懸浮液，加入100mg(0.272mmol)5-[1-(3-溴-苯基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯，室溫下在氮?dú)夥障聰嚢?0分鐘。加入0.5ml乙醇中的52.5mg(0.410mmol)噻吩-2-硼酸和285μl(0.570mmol)的2M Na2CO3水溶液，將混合物在微波爐(Emrys Optimizer)中在100℃下加熱25分鐘。在冷卻至室溫后，過濾反應(yīng)混合物，用乙醇洗滌固體。蒸發(fā)合并濾液的溶劑。將殘余物溶解在乙酸乙酯中，用鹽水洗滌。通過硫酸鎂干燥有機(jī)相，蒸發(fā)溶劑，將殘余物進(jìn)行硅膠色譜法(乙酸乙酯/正庚烷1∶2)，產(chǎn)生81mg(0.218mmol)5-[1-(3-噻吩-2-基-苯基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯。
步驟4噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3-噻吩-2-基-苯基)-乙基]-酰胺}(化合物2-1)類似于實(shí)施例1，步驟3所述方式，從5-[1-(3-噻吩-2-基-苯基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯制備標(biāo)題化合物。化合物2-1計(jì)算值MW372.46，實(shí)驗(yàn)值MW(M-H)371.0；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝11.34(bs，1H)，9.22(bs，1H)，8.99(d，1H)，7.84(m，1H)，7.64(m，1H)，7.61-7.46(m，4H)，7.43-7.27(m，2H)，7.14(m，1H)，5.15(m，1H)，1.51(d，3H)類似于實(shí)施例2-1，使用適當(dāng)?shù)脑牧?，制備下列化合?
實(shí)施例3步驟11-(5-溴-噻吩-2-基)-乙基胺類似于實(shí)施例2，步驟1所述方式，由1-(5-溴-噻吩-2-基)-乙酮制備標(biāo)題化合物。
步驟25-[1-(5-溴-噻吩-2-基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯類似于實(shí)施例1，步驟1所述方式，由1-(5-溴-噻吩-2-基)-乙基胺和噻吩-2，5-二羧酸一甲酯制備標(biāo)題化合物。
步驟35-{1-[5-(2-甲氧基-苯基)-噻吩-2-基]-乙基氨基甲?；鶀-噻吩-2-羧酸甲酯類似于實(shí)施例2，步驟3所述方式，由5-[1-(5-溴-噻吩-2-基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯和2-甲氧基-苯-硼酸制備標(biāo)題化合物。
步驟4噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(2-甲氧基-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)(化合物3-1)類似于實(shí)施例1，步驟3所述方式，由5-{1-[5-(2-甲氧基-苯基)-噻吩-2-基]-乙基氨基甲酰基}-噻吩-2-羧酸甲酯制備標(biāo)題化合物。化合物3-1計(jì)算值MW 402.49，實(shí)驗(yàn)值MW(M+Na)425.12；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝11.36(bs，1H)，9.24(bs，1H)，9.08(d，1H)，7.80(m，1H)，7.65(m，1H)，7.57(m，1H)，7.41(m，1H)，7.27(m，1H)，7.12(m，1H)，7.02-6.95(m，2H)，5.38(m，1H)，3.87(s，3H)，1.60(d，3H).
類似于實(shí)施例3-1，使用適當(dāng)?shù)脑牧?，制備下列化合?
實(shí)施例4以兩種不同方式制備(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基]-酰胺}(化合物4-1)。
實(shí)施例4a經(jīng)由對映異構(gòu)體純的(R)-5-[1-(4-溴-苯基)-乙基氨基甲酰基]-噻吩-2-羧酸甲酯與嗎啉的Buchwald-Hartwig偶聯(lián)。
實(shí)施例4b經(jīng)由可商購的1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙酮的還原性胺化和經(jīng)由通過手性HPLC的對映異構(gòu)體的分離。
實(shí)施例4a步驟1(R)-5-[1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯向1.0mg(0.0045mmol)乙酸鈀(II)，4.06mg(0.0065mmol)2，2’-雙-(二苯基膦)-1，1’-聯(lián)萘(BINAP)和125mg(0.384mmol)碳酸銫在1ml無水甲苯中的懸浮液，在氬氣氣氛下加入100mg(0.272mmol)(R)-5-[1-(4-溴-苯基)-乙基氨基甲酰基]-噻吩-2-羧酸甲酯(見實(shí)施例1，步驟1)和30.0mg(0.344mmol)嗎啉。將混合物在微波爐(Emrys Optimizer)中在160℃加熱15分鐘。在冷卻至室溫后，過濾反應(yīng)混合物，用甲苯洗滌固體。蒸發(fā)合并的濾液的溶劑，通過制備HPLC純化粗產(chǎn)物，獲得7.9mg(0.021mmol)(R)-5-[1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯。
步驟2(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基]-酰胺}(化合物4-1)類似于實(shí)施例1，步驟3所述方式，由(R)-5-[1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基氨基甲酰基]-噻吩-2-羧酸甲酯制備標(biāo)題化合物。化合物4-1計(jì)算值MW375.45，實(shí)驗(yàn)值MW(M+H)376.0；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝11.33(bs，1H)，9.22(bs，1H)，8.82(d，1H)，7.80(m，1H)，7.55(m，1H)，7.23(m，2H)，6.90(m，2H)，5.04(m，1H)，3.72(m，4H)，3.05(m，4H)，1.44(d，3H).
實(shí)施例4b步驟11-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基胺Goddard，C.J.，等，J.Heterocycl.Chem.28(1991)17步驟25-[1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基氨基甲酰基]-噻吩-2-羧酸甲酯類似于實(shí)施例1，步驟1所述方式，由1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基胺和噻吩-2，5-二羧酸一甲酯制備標(biāo)題化合物。
步驟3(R)-5-[1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基氧基甲?；鵠-噻吩-2-羚酸甲酯通過手性HPLC，使用Chiralpak AD柱，Daicel Chemical Industries Ltd.(洗脫劑己烷/乙醇80∶20)，將外消旋的5-[1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基氨基甲?；鵠-噻吩-2-羧酸甲酯分離成兩種對映異構(gòu)體。
步驟4(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基]-酰胺}(化合物4-1)類似于實(shí)施例4a，步驟2，制備標(biāo)題化合物。
類似于實(shí)施例4-1，使用適當(dāng)?shù)脑牧?，制備下列化合?
實(shí)施例5步驟13-氧代-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酸乙酯將1.96g(0.0275mol)乙醇鈉(95％)和22ml乙醇的混合物在室溫下攪拌20分鐘，然后用冰浴冷卻。緩慢加入3.65g(0.025mol)草酸二乙酯，接著加入4.7g(0.025mol)1-(3-三氟甲基-苯基)-乙酮。將混合物在0-5℃攪拌30分鐘，然后使得升溫至室溫，加入另外25ml乙醇。在室溫下1天后，蒸發(fā)溶劑。加入水和二乙醚至殘余物。分離有機(jī)相，再用二乙醚萃取水相一次。用2M HCl將水相酸化至pH2，用二乙醚萃取三次。通過硫酸鎂干燥合并的有機(jī)相，蒸發(fā)溶劑，用石油醚研制殘余物，提供5.35g(0.0185mol)3-氧代-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酸乙酯。
步驟25-(3-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-羧酸乙酯將5.35g(0.0185mol)3-氧代-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酸乙酯和3.87g(0.056mol)羥胺鹽酸鹽在45ml乙醇中的混合物在回流下加熱2小時。在冷卻至室溫同時，濾去沉淀的白色固體。真空濃縮濾液，用50ml水稀釋，用二乙醚萃取三次。用鹽水和1N NaOH水溶液洗滌合并的醚萃取物并通過硫酸鎂干燥。蒸發(fā)溶劑并且將甲苯加入殘余物。濾去不溶性固體，用甲苯洗滌，蒸發(fā)合并的濾液中的溶劑，獲得2.06g(0.00723mol)5-(3-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-羧酸乙酯。
步驟31-[5-(3-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-基]-乙酮向4.6ml(0.014mol)甲基鎂化碘溶液(3M，在二乙醚中)和5.8ml(0.042mol)三乙胺在10ml甲苯中的冷卻(5-10℃)溶液，滴加2.06g(0.00723mol)5-(3-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-羧酸乙酯在20ml甲苯中的溶液。在加入完成后，在0-5℃攪拌反應(yīng)混合物2小時，然后用5.6ml 4N HCl水溶液處理。將混合物通過硅藻土過濾。分離水相，用水、5％NaHCO3水溶液洗滌有機(jī)層和用水洗滌兩次。通過硫酸鎂干燥有機(jī)相并蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶解在28ml MeOH和0.45ml 20％KOH水溶液的混合物中。將溶液加熱至45℃ 30分鐘，然后冷卻和通過加入6N HCl酸化至pH2。蒸發(fā)溶劑，將殘余物與甲苯和NaHCO3水溶液混和。將混合物通過硅藻土過濾。分離有機(jī)層，蒸發(fā)溶劑，獲得0.7g(0.00274mol)1-[5-(3-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-基]-乙酮。
步驟41-[5-(3-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-基]-乙基胺類似于實(shí)施例2，步驟1所述的方式，制備標(biāo)題化合物。
步驟55-{1-[5-(3-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-基]-乙基氨基甲?；鶀-塞吩-2-羧酸甲酯類似于實(shí)施例1，步驟1所述的方式，制備標(biāo)題化合物。
步驟6噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(3-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-基]-乙基}-酰胺)(化合物5-1)類似于實(shí)施例1，步驟3所述的方式，制備標(biāo)題化合物。
化合物5-1計(jì)算值MW 425.39，實(shí)驗(yàn)值MW(M+H)426.0；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝11.37(bs，1H)，9.23(bs，1H)，9.11(d，1H)，8.22(s，1H)，8.18(m，1H)，7.90-7.74(m，3H)，7.57(m，1H)，7.26(s，1H)，5.31(m，1H)，1.59(d，3H).
類似于實(shí)施例5-1，使用適當(dāng)?shù)脑牧?，制備下列化合?
參考文獻(xiàn)列表Baraldi，P.G.，等，J.Heterocyclic Chem.19(1982)557-560Bastin，R.J.，等，Organic Proc.Res.Dev.4(2000)427-435Brown，H.C.，等，J.Am.Chem.Soc.110(1988)1539-1546Chan，D.M.T.，等，Tetrahedron Lett.39(1998)2933-2936Chen，C.-P.，等，Tetrahedron Lett.32(1991)7175-7178Corey，E.J.，等，Angew.Chemie 110(1998)2092-2118DeVita.V.T.，Jr.，Hellmann，S.，Rosenberg，S.A.，CancerPrinciples &Practice of Oncology，5th ed.，Lippincott-RaVen Publishers，1997Goddard，C.J.，等，J.Heterocycl.Chem.28(1991)17Houben-Weyl，“Methoden der organischen Chemie″，Vols.XV/1和XV/2，Georg Thieme Verlag，StuttgartIglesias，L.E.，等，Tetr.Asym.8(1997)2675-2677J.Heterocycl.Chem.28(1991)17Kikkawa，I.，等，Synthesis 11(1980)877Kinbara，K.，等，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.2(2000)1339-1348Koyama，Y.，等，Blood 96(2000)1490-1495Kwong，F(xiàn).Y.，等，Org.Lett.4(2002)581-584Lam，P.Y.S.，等，Tetrahedron Lett.39(1998)2941-2944Louie，J.，等，J.Org.Chem.62(1997)1268-1273Mann，G.，等，J.Am.Chem.Soc.120(1998)827-828Marks，P.A.，等，J.Nat.Cancer Inst.92(2000)1210-1216Mitsunobu，O.，Synthesis 1(1981)1-28Miyaura，N.，等，Chem.ReV.95(1995)2457-2483Miyaura，N.，等，Synth.Commun.11(1981)513-519Negishi，E.，等，J.Org.Chem.42(1977)1821-1823Noyori，R.，等，Angew.Chem.113(2001)40-75Pallavicini，M.，等，Tetr.Asym.12(2001)2489-2495Rasor，J.P.，和Voss，E.，Applied Catalysis AGeneral 221(2001)145-195Rubinstein，L.V.，等，J.Natl.Cancer Inst.82(1990)1113-1118
Smith，H.E.，等，J.Am.Chem.Soc.105(1983)1578Stahl，P.H.，和Wermuth，G.，(editors)，Handbook of Pharmaceutical Salts，Verlag HelVetica Chimica Acta(VHCA)，Zürich(2002)Stille，J.K.，Angew.Chem.98(1986)504Synth.Commun.1998，28(21)，4067US4,983,771US2,680,731US5,369,108Wiegers，A.，和Scharf，H.D.，Tetr.Asym.7(1996)2303-2312WO03/011851WO03/066579WO03/075929WO03/076395WO03/076400WO03/076401WO03/076421WO03/076422WO03/076430WO03/076438WO03/087066WO2004/013130WO01/38322WO01/70675WO02/22577WO98/55449Wolfe，J.P.，等，J.Am.Chem.Soc.119(1997)6054-6058Yamazaki，N.，等，Tetrahedron Lett.42(2001)5029-5032Yin，J.，等，Org.Lett.4(2002)3481-348權(quán)利要求
1.式I化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物， 式I，其中R1是(C1-C6)烷基，其任選地被鹵素取代一次或數(shù)次；X是亞苯基或亞雜芳基；Y是飽和(C3-C7)碳環(huán)基團(tuán)；飽和雜環(huán)基團(tuán)；雜芳基；或苯基，該苯基被以下各項(xiàng)取代一至三次烷基，鹵素，-O-烷基，-S(O)2-烷基，-NH(烷基)或-N(烷基)2；其中所述烷基基團(tuán)可以被一個或數(shù)個鹵素原子任選地取代；及其所有藥用鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其特征在于X是亞苯基，噻吩二基或異噁唑二基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其特征在于X是亞苯基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物，其特征在于X是噻吩二基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的化合物，其特征在于Y是苯基，該苯基被以下各項(xiàng)取代一次至三次烷基，鹵素，-O-烷基，-S(O)2-烷基，-NH(烷基)或-N(烷基)2；其中所述烷基基團(tuán)可以被一個或數(shù)個鹵素原子任選地取代。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的化合物，其特征在于Y是雜芳基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(2-甲氧基-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(4-二甲氨基-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(5-鄰-甲苯基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(5-間-甲苯基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(5-對-甲苯基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(2-氯-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(4-甲氧基-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(4-氟-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(3-氟-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(4-氯-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(3-氯-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(2-氟-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(3-甲氧基-苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(4-甲磺?；?苯基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(5-苯并[b]噻吩-2-基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[5-(3，5-二甲基-異噁唑-4-基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(1H-吲哚-5-基)-噻吩-2-基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(5-吡啶-3-基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4′-二甲氨基-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3′，4′，5′-三氟-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(2′-甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(2′-甲基-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(2′-氟-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3′-氟-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3′-甲基-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3′-甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4′-氯-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(2′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(2′-甲基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4′-二甲氨基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(2′-氟-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4′-氟-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3′-氟-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4′-甲基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(2′-氯-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3′-氯-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3′-甲基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4′-甲磺?；?聯(lián)苯基-3-基)-乙基]-酰胺}；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-噻吩-2-基-苯基)-乙基]-酰胺}；(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[4-(5-甲基-噻吩-2-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[4-(1H-吡唑-4-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3-噻吩-2-基-苯基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3-苯并[b]噻吩-2-基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[3-(5-甲基-噻吩-2-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[3-(1H-吡唑-4-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-({1-[3-(3，5-二甲基-異噁唑-4-基)-苯基]-乙基}-酰胺)5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[3-(1H-吲哚-5-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(3-吡啶-3-基-苯基)-乙基]-酰胺}；和噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-咪唑-1-基-苯基)-乙基]-酰胺}。(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-嗎啉-4-基-苯基)-乙基]-酰胺}；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-{[1-(4-哌啶-1-基-苯基)-乙基]-酰胺}；和噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙基}-酰胺)；乙酸鹽；噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-環(huán)己基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羥基酰胺；噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(3-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-基]-乙基}-酰胺)；和噻吩-2，5-二羧酸2-羥基酰胺5-({1-[5-(4-三氟甲基-苯基)-異噁唑-3-基]-乙基}-酰胺)。
8.制備式I化合物的(R)-或(S)-對映異構(gòu)體或外消旋物的方法，該方法通過將式IV的化合物， 式IV，其中R2是烷基基團(tuán)；與式VII的外消旋或?qū)τ钞悩?gòu)體純的(R)-或(S)-胺在適當(dāng)活化劑的存在下反應(yīng)， 式VII，其中X，Y和R1具有在權(quán)利要求1中給出的含義，以獲得式VIII的化合物， 式VIII，其中X，Y和R1具有在權(quán)利要求1中給出的含義，并且R2是烷基基團(tuán)，用羥胺處理式VIII的化合物以獲得各式I化合物；并且如果需要，將所述化合物轉(zhuǎn)化為它們的藥用鹽。
9.藥物，其含有作為活性成分的根據(jù)權(quán)利要求1-7中任何一項(xiàng)的一種或多種化合物、以及藥用輔藥。
10.根據(jù)權(quán)利要求8的藥物，用于抑制腫瘤細(xì)胞增殖。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任何一項(xiàng)的一種或多種化合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物通過在腫瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)組蛋白乙?；瘉硪种扑瞿[瘤細(xì)胞增殖。
12.一種抑制腫瘤細(xì)胞增殖的方法，該方法由于向腫瘤細(xì)胞施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-7中任何一項(xiàng)的一種或多種化合物而在所述腫瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)組蛋白乙?；?。
全文摘要
本發(fā)明的目的是式(I)的化合物，它們的藥用鹽、對映異構(gòu)體形式、非對映異構(gòu)體和外消旋物，上述化合物的制備，含有它們的藥物和它們的制備，以及上述化合物在控制或預(yù)防諸如癌癥的疾病中的應(yīng)用。
文檔編號C07D413/14GK1980920SQ200580018281
公開日2007年6月13日 申請日期2005年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月14日
發(fā)明者G·費(fèi)爾蒂希, F·赫廷, M·克爾納, M·庫比斯, A·林貝格, U·賴夫, U·蒂貝斯 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司