專利名稱：二肽腈組織蛋白酶k抑制劑的制作方法
本申請(qǐng)是中國(guó)專利申請(qǐng)01804809.9的分案申請(qǐng)，該中國(guó)專利申請(qǐng)的申請(qǐng)日為2001年2月8日，發(fā)明名稱是“二肽腈組織蛋白酶K抑制劑”。
本發(fā)明涉及半胱氨酸蛋白酶抑制劑，特別是涉及二肽腈組織蛋白酶K抑制劑和它們用于治療或預(yù)防與組織蛋白酶K相關(guān)的疾病或醫(yī)療狀況的藥物用途。
組織蛋白酶K是溶酶體半胱氨酸組織蛋白酶家族中的一種，例如組織蛋白酶B、K、L和S，其與各種疾病有關(guān)，包括炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、腫瘤(特別是腫瘤侵入和腫瘤轉(zhuǎn)移)、冠狀疾病、動(dòng)脈粥樣硬化(包括動(dòng)脈粥樣硬化性血小板破裂和去穩(wěn)定作用)、自身免疫病、呼吸疾病、傳染性疾病和免疫學(xué)介導(dǎo)的疾病(包括移植排異)。
我們的共同未決國(guó)際專利申請(qǐng)WO 99/24460描述了作為半胱氨酸組織蛋白酶抑制劑的二肽腈和其在治療半胱氨酸組織蛋白酶依賴的疾病或醫(yī)療狀況中的用途。已制備新的二肽腈化合物作為組織蛋白酶K的抑制劑，而所述化合物也具有用于藥物應(yīng)用的所需性質(zhì)。
按照本發(fā)明，提供了式I的化合物或其可藥用鹽或酯 其中，R1和R2彼此獨(dú)立地為H或C1-C7低級(jí)烷基，或R1和R2和與其相連的碳原子一起形成C3-C8環(huán)烷基環(huán)，和Het為取代或未取代的含氮雜環(huán)取代基，條件是Het不是4-吡咯-1-基。
Het取代基可位于苯基環(huán)的2位或3位，當(dāng)然，優(yōu)選為4位。
在本發(fā)明中，“含氮雜環(huán)”是指包含至少1個(gè)氮原子，2-10個(gè)碳原子，優(yōu)選3-7個(gè)碳原子，最優(yōu)選4或5個(gè)碳原子，并選擇性地包含選自O(shè)、S或優(yōu)選N的一個(gè)或多個(gè)其它雜原子的雜環(huán)體系。
Het可包含不飽和雜環(huán)，如芳族含氮雜環(huán)；當(dāng)然，優(yōu)選包含飽和的含氮雜環(huán)。
特別優(yōu)選的飽和含氮雜環(huán)為哌嗪基，優(yōu)選哌嗪-1-基，或哌啶基，優(yōu)選哌啶-4-基。
Het可被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，例如，被至多5個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氨基、硝基、取代或未取代的C1-C4烷基(例如被下述基團(tuán)取代的烷基羥基、烷氧基、氨基、取代或未取代的的烷氨基、取代或未取代的二烷氨基、芳基或雜環(huán)基)、C1-C4烷氧基。
優(yōu)選Het在氮原子處被取代，最優(yōu)選在氮原子處被單取代。
Het的優(yōu)選取代基為C1-C7低級(jí)烷基、C1-C7低級(jí)烷氧基-C1-C7低級(jí)烷基、C5-C10芳基-C1-C7低級(jí)烷基或C3-C8環(huán)烷基。
R1和R2作為C1-C7低級(jí)烷基優(yōu)選相同，例如，甲基，或者R1和R2與和其相連的碳原子一起形成C3-C8環(huán)烷基環(huán)，例如環(huán)丙基環(huán)。最優(yōu)選R1和R2均為H。
因此，在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供了式II的化合物或其可藥用鹽或酯 其中，X為CH或N，和R為H、C1-C7低級(jí)烷基、C1-C7低級(jí)烷氧基-C1-C7低級(jí)烷基、C5-C10芳基-C1-C7低級(jí)烷基或C3-C8環(huán)烷基。
因此，R作為C1-C7低級(jí)烷基的具體實(shí)例為甲基、乙基、正丙基或異丙基。
R作為C1-C7低級(jí)烷氧基-C1-C7低級(jí)烷基的具體實(shí)例為甲氧基乙基。
R作為C5-C10芳基C1-C7低級(jí)烷基的具體實(shí)例為芐基。
R作為C3-C8環(huán)烷基的具體實(shí)例為環(huán)戊基。
式II的具體化合物實(shí)例為N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(哌嗪-1-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-[4-(1-丙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(1-丙基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-[1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-4-基]-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(1-異丙基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(1-環(huán)戊基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺，和N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(哌啶-4-基)-苯甲酰胺。
式I和II化合物和以上的具體化合物以下被稱之為本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的化合物可通過(guò)使相應(yīng)的Het取代的苯甲酸衍生物與1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基酰胺進(jìn)行偶聯(lián)制得。例如，使苯甲酸衍生物，優(yōu)選以其鹽酸鹽形式與1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基酰胺混合，例如，在HOBT(1-羥基苯并三唑)，WSCD和三乙胺存在下，在溶液中，例如在DMF中，并進(jìn)行攪拌，例如在室溫下攪拌過(guò)夜。可通過(guò)下述方式回收產(chǎn)物，例如可通過(guò)蒸發(fā)溶劑，再用碳酸鈉水溶液洗滌，優(yōu)選在溫和的堿性條件下，隨后例如用乙酸乙酯進(jìn)行溶劑萃取，對(duì)萃取液進(jìn)行干燥，例如用硫酸鈉干燥，將溶劑蒸發(fā)并過(guò)濾?？梢圆捎闷渌^(guò)程和試劑；例如，在以下實(shí)施例中所述的過(guò)程和試劑。
因此，另一方面，本發(fā)明提供了一種式I化合物的制備方法，該方法包括使相應(yīng)的式III的Het取代的苯甲酸衍生物 與1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺進(jìn)行偶聯(lián) 1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺可這樣制備使1-氨基-環(huán)己烷甲酸，通常為適宜的氨基保護(hù)形式，例如FMOC-1-氨基-環(huán)己烷甲酸，與2氨基乙腈進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)。例如，F(xiàn)MOC-1-氨基-環(huán)己烷甲酸，例如與HOBT和WSCD一起加至2-氨基乙腈和三乙胺的DMF溶液中，將混合物在25℃下攪拌過(guò)夜。按照實(shí)施例中所述回收1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺。可按照實(shí)施例所述制備FMOC-1-氨基-環(huán)己烷甲酸。
本發(fā)明的化合物可以游離形式或其鹽形式(當(dāng)存在成鹽基團(tuán)時(shí))獲得。
具有堿性基團(tuán)的本發(fā)明的化合物可轉(zhuǎn)化成酸加成鹽，特別是可藥用鹽。這些鹽是例如與無(wú)機(jī)酸，如礦物酸，例如硫酸、磷酸或鹽酸形成的，或者與有機(jī)羧酸形成的，如(C1-C4)烷羧酸，這些羧酸例如為未取代或被鹵素取代的，例如，乙酸，如飽和或不飽和的二元羧酸，例如草酸、琥珀酸、馬來(lái)酸或富馬酸，如羥基羧酸，例如羥基乙酸、乳酸、蘋(píng)果酸、酒石酸或檸檬酸，如氨基酸，例如天門(mén)冬氨酸或谷氨酸，或者是與有機(jī)磺酸形成的，如(C1-C4)-烷磺酸(例如甲磺酸)或來(lái)取代或取代(例如被鹵素取代)的芳基磺酸。優(yōu)選與鹽酸、甲磺酸和馬來(lái)酸形成的鹽。
考慮到游離化合物與其鹽形式的化合物的緊密關(guān)系，在本文中所指的化合物也包括其相應(yīng)的鹽，只要這種鹽是可能的或在具體情形下是適宜的。
化合物(包括其鹽)也可以以其水合物形式獲得，或包括用于其結(jié)晶過(guò)程的其它溶劑。
本發(fā)明的化合物顯示出對(duì)哺乳動(dòng)物有價(jià)值的藥理學(xué)性質(zhì)，特別適用于作為組織蛋白酶K的抑制劑。
本發(fā)明化合物的組織蛋白酶K抑制作用可通過(guò)體外測(cè)量重組人體組織蛋白酶K的抑制作用來(lái)說(shuō)明。
體外試驗(yàn)按照下述進(jìn)行對(duì)組織蛋白酶K該試驗(yàn)在96個(gè)孔的微量滴定板上在室溫下進(jìn)行，采用重組人體組織蛋白酶K。組織蛋白酶K的抑制作用的測(cè)量是在恒定酶(0.16nM)和底物濃度(54mM Z-Phe-Arg-AMCA，Peptide Institute Inc.大阪，日本)，在100mM磷酸鈉緩沖液中，pH7.0，包含2mM二硫蘇糖醇，20mM吐溫80和1mMEDTA下進(jìn)行的。將組織蛋白酶K與抑制劑預(yù)培養(yǎng)30分鐘，通過(guò)加入底物引發(fā)反應(yīng)。培養(yǎng)30分鐘后，通過(guò)加入E-64(2mM)使反應(yīng)停止，分別在360和460nm的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)下在多孔板讀數(shù)器上讀取熒光強(qiáng)度。本發(fā)明的化合物通常具有的K值對(duì)組織蛋白酶K來(lái)說(shuō)低于約50nM，優(yōu)選約5nM或更低，例如約1nM。
考慮到作為組織蛋白酶K抑制劑的活性，本發(fā)明的化合物特別適用于作為治療和預(yù)防與組織蛋白酶K的水平升高有關(guān)的疾病和醫(yī)療狀況。這些疾病包括與受生物感染有關(guān)的疾病，所述生物例如卡氏肺囊蟲(chóng)、克魯氏錐蟲(chóng)、布氏錐蟲(chóng)、短膜蟲(chóng)(crithidia fusiculata)以及寄生蟲(chóng)疾病如血吸蟲(chóng)病和瘧疾，腫瘤(腫瘤侵入和腫瘤轉(zhuǎn)移)，和其它疾病，如異染性腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良、肌營(yíng)養(yǎng)不良、肌萎縮和類似的疾病。
組織蛋白酶K是與過(guò)度骨損失疾病有關(guān)聯(lián)的，因此，本發(fā)明的化合物可用于治療和預(yù)防這種疾病，包括骨質(zhì)疏松癥、齦疾病如齦炎和牙周炎、佩吉特病、惡性高鈣血癥，例如由腫瘤引起的高鈣血癥和代謝性骨疾病。本發(fā)明的化合物也可用于治療或預(yù)防過(guò)度軟骨或基質(zhì)退化疾病，包括骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及某些與高水平蛋白水解酶和基質(zhì)退化有關(guān)的腫瘤病。
本發(fā)明的化合物也顯示出可用于預(yù)防或治療冠狀疾病，動(dòng)脈粥樣硬化(包括動(dòng)脈粥樣硬化血小板破裂和去穩(wěn)定作用)，自身免疫疾病，呼吸疾病和免疫學(xué)介導(dǎo)的疾病(包括移植排異)。
本發(fā)明的化合物特別適用于預(yù)防或治療各種成因的骨質(zhì)疏松癥(例如幼態(tài)的，絕經(jīng)的，絕經(jīng)后的，創(chuàng)傷后的，老年性引起的或皮質(zhì)類固醇治療或不活動(dòng)引起的)。
有效效果采用現(xiàn)有技術(shù)中通常公知的體外和體內(nèi)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，如以下所述。
上述的性質(zhì)在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中可體現(xiàn)出來(lái)，采用有利的哺乳動(dòng)物，如小鼠、大鼠、狗、兔子、猴子或分離的器官和組織，以及哺乳動(dòng)物酶制劑，或者天然的，或者是采用重組技術(shù)制備的。本發(fā)明的化合物可以以溶液的形式用于體外實(shí)驗(yàn)中，例如，優(yōu)選為水溶液或懸浮液，和或者腸內(nèi)或非腸道如口服應(yīng)用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，例如為懸浮液或水溶液，或者以固體膠囊或片劑形式。體外試劑范圍為約10-5摩爾和10-9摩爾濃度。根據(jù)給藥方式的不同，體內(nèi)劑量范圍為約0.1和100mg/kg。
按照本發(fā)明，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物具有優(yōu)異的生物利用度，特別是優(yōu)異的口服生物利用度。因此，例如，本發(fā)明所選擇的化合物具有絕對(duì)口服生物利用度為50％或更大，例如約80％或更大。
本發(fā)明化合物在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎時(shí)的抗關(guān)節(jié)炎功效可采用在以前描述的下述文獻(xiàn)的大鼠模型或類似的模型進(jìn)行測(cè)量(R.E.Esser等，J.Rheumatology，1993，20，1176.)。
本發(fā)明化合物在治療骨關(guān)節(jié)炎時(shí)的功效可采用在以前描述的兔子部分側(cè)半月板切除術(shù)模型或類似的模型進(jìn)行測(cè)量Colombo等，Arth.Rheum.1993 26，875-886)。本發(fā)明化合物在該模型中的功效可采用組織學(xué)記分法進(jìn)行定量，如以前描述O′Byrne等，Inflamm Res 1995，44，S117-S118)。
本發(fā)明化合物在治療骨質(zhì)疏松癥時(shí)的功效可采用動(dòng)物模型如切除卵巢的大鼠或其它類似的物種如兔子或猴子進(jìn)行測(cè)量，其中，受試化合物給藥于動(dòng)物并在尿或血清中測(cè)量骨吸收的標(biāo)記的的存在(例如以下文獻(xiàn)中所述Osteoporos Int(1997)7539-543)。
因此，本發(fā)明的另一個(gè)方面是提供了本發(fā)明的化合物作為藥物的用途；一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的化合物作為活性成分；一種治療患有或可能患有與組織蛋白酶K有關(guān)的疾病或醫(yī)療狀況的方法，包括向患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物；本發(fā)明的的化合物在制備用于治療或預(yù)防與組織蛋白酶K有關(guān)的疾病或醫(yī)療狀況的藥物中的用途。
本發(fā)明也涉及采用本發(fā)明的化合物和其可藥用鹽或其藥物組合物在哺乳動(dòng)物中抑制組織蛋白酶K的方法，用于治療組織蛋白酶K依賴性疾病的方法，例如所述的組織蛋白酶K依賴性疾病，例如，炎癥、骨質(zhì)疏松癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎。
具體而言，本發(fā)明涉及在哺乳動(dòng)物中選擇性抑制組織蛋白酶K的方法，該方法包括向需要的哺乳動(dòng)物給藥有效組織蛋白酶K抑制量的本發(fā)明的化合物。
更具體地說(shuō)，這涉及治療哺乳動(dòng)物的骨質(zhì)疏松癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和炎癥(和其它如前確定的疾病)，該方法包括向需要的哺乳動(dòng)物給藥有效量的本發(fā)明的化合物。
下述實(shí)例用于說(shuō)明本發(fā)明，并非是對(duì)本發(fā)明的限制。溫度均為攝氏溫度。除非另有說(shuō)明，所有的蒸發(fā)過(guò)程均為減壓蒸發(fā)，優(yōu)選約15-100mmHg(＝20-133mbar)。最終產(chǎn)物、中間產(chǎn)物和原料的結(jié)構(gòu)采用標(biāo)準(zhǔn)分析方法確定，例如微量分析和光譜學(xué)特性(例如MS，IR，NMR)。所采用的縮寫(xiě)均為現(xiàn)有技術(shù)中常規(guī)采用的。
實(shí)施例合成1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺A.FMOC-1-氨基環(huán)己烷甲酸按照常規(guī)方法，由1-氨基環(huán)己烷甲酸(700mmol)，F(xiàn)MOC-氯化物(770mmol)，二異丙基-乙基胺(770mmol)和770ml氫氧化鈉1N在950ml二噁烷中，采用常規(guī)方法制備標(biāo)題化合物。Mp.180-182℃；Rf＝0.21(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
乙腈可用作溶劑代替二噁烷。
B.FMOC-1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺將2-氨基乙腈鹽酸鹽(564mmol)和三乙胺(564mmol)溶解于DMF(1700ml)中。加入FMOC-1-氨基環(huán)己烷甲酸(564mmol)，HOBt(564mmol)和WSCD(564mmol)，將混合物在25℃下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物中(確保輕微堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。萃取液用水，10％檸檬酸，鹽水，碳酸氫鈉，鹽水洗滌，用碳酸鎂干燥，蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚中，濾出固體并干燥(真空)。獲得白色粉末，mp.167-169℃，Rf＝0.27(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)。
或者，THF可用作溶劑，1-氯-3，5-二甲氧基三嗪(CDMT)可用作活化劑，與N-甲基嗎啉(NMM)一起用于偶聯(lián)反應(yīng)；在此情形下，可通過(guò)以下過(guò)程回收產(chǎn)物加入乙酸異丙酯和水，分離有機(jī)相，隨后用鹽水洗滌，部分蒸發(fā)溶劑，通過(guò)過(guò)濾和干燥回收結(jié)晶出的產(chǎn)物。
C.1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺將FMOC-1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(248mmol)溶解于DMF(200ml)中，加入哌啶(248mmol)和將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入水(3000ml)中，再攪拌30分鐘。將懸浮液過(guò)濾，將濾液用4N鹽酸酸化，再用乙酸乙酯萃取。加入1N氫氧化鈉，使水相呈堿性，再用乙酸乙酯萃取混合物三次。將有機(jī)餾分用硫酸鈉干燥，將溶劑蒸發(fā)。將殘余物干燥(真空)，得到一種淺黃色油。Rf＝0.26(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
1H-NMR(d6-DMSO)1.05-1.80(m，10H)；4.0(br.s，2H)；NH非常寬的信號(hào)。
或者，在FMOC脫保護(hù)步驟中，THF可用來(lái)代替DMF和用二乙胺代替哌啶。
實(shí)施例1合成N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺A.4-哌嗪-1-基-苯甲酸甲酯將1-(4-氰基苯基)-哌嗪(11mmol)溶解于15ml濃磺酸和甲醇(5N)的混合物中，并在密封管中于110℃下攪拌3小時(shí)。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水中，用乙酸乙酯萃取。向水相中加入碳酸鈉直至pH＝9，得到白色固體沉淀，將其過(guò)濾并干燥(真空)。獲得白色粉末，Rf＝0.59(二氯甲烷/甲醇(+NH33N)＝9∶1)。
B.4-哌嗪-1-基-苯甲酸鹽酸鹽將4-哌嗪-1-基-苯甲酸甲酯(17mmol)溶解于6N鹽酸(25ml)中并加熱回流3小時(shí)。將混合物在冰浴中冷卻至0-4℃，然后濾出形成的固體，用丙酮洗滌，干燥(真空)。獲得白色粉末，mp.＞240℃。
C.4-(4-FMOC-哌嗪-1-基)-苯甲酸將4-哌嗪-1-基-苯甲酸鹽酸鹽(10.5mmol)溶解于15ml二噁烷和11.6ml氫氧化鈉(2N)中，冷卻至0℃。同時(shí)，在0℃下，在20分鐘內(nèi)滴加入在二噁烷(5ml)中的FMOC-氯化物(11.6mmol)和在二噁烷(5ml)中的二異丙基-乙基胺(11.6mmol)，將混合物攪拌15分鐘，然后使其升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。將混合物用水(50ml)稀釋，用乙醚萃取2次。在0-4℃下將水相用鹽酸(4N)酸化，濾出形成的固體物質(zhì)，用水洗滌和干燥(真空)。獲得白色粉末，Rf＝0.2(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
D.N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-FMOC-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(8.3mmol)，4-(4-FMOC-哌嗪-1-基)-苯甲酸(8.3mmol)，HOBT(8.3mmol)和WSCD(8.3mmol)溶解于DMF(20ml)中和在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物中(確保輕微堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用(乙酸乙酯/己烷＝4∶1)作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚中，濾出固體，干燥(真空)。獲得白色粉末，mp.192-194℃，Rf＝0.26(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
E.N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(哌嗪-1-基)-苯甲酰胺將N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-FMOC-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺(4.4mmol)溶解于DMF(15ml)中，加入哌啶(4.4mmol)，將混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。加入4滴哌啶，將混合物攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物倒入水和乙酸乙酯中，將懸浮液過(guò)濾，將濾液用4N鹽酸酸化，然后用乙酸乙酯萃取。加入飽和碳酸鈉溶液使水相呈堿性，將混合物用乙酸乙酯萃取三次。將水相用氯化鈉飽和，再用乙酸乙酯萃取三次。將有機(jī)餾分用硫酸鈉干燥和將溶劑蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(3NNH3)＝95∶5作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚，濾出固體，干燥(真空)。獲得白色粉末，mp.206-210℃，Rf＝0.28(二氯甲烷/甲醇(3N NH3)＝9∶1)。
1H-NMR(d6-DMSO)1.15-1.35(m，1H)；1.4-1.6(m，5H)；1.65-1.8(m，2H)；2.05-2.15(m，2H)；2.8(m，4H)；3.15(m，4H)；4.0(d，2H)，6.95(d，2H)；7.65(s，1H)；7.75(d，2H)，8.15(m，1H)。
實(shí)施例2合成N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺A.4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯甲酸甲酯將4-氟苯甲酸甲酯(34mmol)，1-甲基-哌嗪(75mmol)和碳酸鉀(34mmol)懸浮于乙腈(30ml)中，并在回流下攪拌三天。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水，用乙酸乙酯萃取三次。將萃取液用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/戊烷，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺黃色粉末，mp.117-119℃，Rf＝0.20(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
B.4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯甲酸鹽酸鹽將4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯甲酸甲酯(8.5mmol)溶解于4N鹽酸(15ml)中，加熱回流8小時(shí)。將混合物在冰浴中冷卻至0-4℃，用5ml丙酮稀釋，濾出形成的固體物質(zhì)，用丙酮洗滌和干燥(真空)。獲得白色粉末，mp.＞270℃，Rf＝0.11(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
C.N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(1.38mmol)，4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯甲酸鹽酸鹽(1.38mmol)，HOBT(1.38mmol)，WSCD(1.38mmol)和三乙胺(1.38mmol)溶解于DMF(5ml)中，并在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物中(確保輕微堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚中，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺色粉末，mp.218-220℃，Rf＝0.19(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
1H-NMR(d6-DMSO)1.15-1.35(m，1H)；1.4-1.6(m，5H)；1.65-1.8(m，2H)；2.05-2.15(m，2H)；2.2(s，3H)；2.4(m，4H)；3.2(m，4H)；4.0(d，2H)，6.95(d，2H)；7.65(s，1H)；7.75(d，2H)，8.15(m，1H)。
實(shí)施例3合成N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺A.4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯甲酸甲酯將4-氟苯甲酸甲酯(53mmol)，1-乙基-哌嗪(44mmol)和碳酸鉀(44mmol)懸浮于二甲基乙酰胺(50ml)中和在回流下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水，用乙酸乙酯萃取三次。將萃取液用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/戊烷中，濾出固體，干燥(真空)。獲得呈褐色的粉末，mp.102-104℃，Rf＝0.22(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
B.4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯甲酸鹽酸鹽將4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯甲酸甲酯(15mmol)溶解于4N鹽酸(35ml)中，并加熱回流8小時(shí)。將混合物在冰浴中冷卻至0-4℃和濾出形成的固體物質(zhì)，用丙酮洗滌和干燥(真空)。獲得灰色粉末，mp.＞270℃，Rf＝0.08(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
C.N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(0.9mmol)，4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯甲酸鹽酸鹽(0.9mmol)，HOBT(0.9mmol)，WSCD(0.9mmol)和三乙胺(0.9mmol)溶解于DMF(5ml)中，在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物中(確保輕微堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(3N NH3)＝93∶7作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚中，濾出固體，干燥(真空)。獲得白色粉末。
1H-NMR(d6-DMSO)1.0(t，3H)，1.15-1.35(m，1H)；1.4-1.6(m，5H)；1.65-1.8(m，2H)；2.05-2.15(m，2H)；2.35(q，2H)；2.45(m，4H)；3.2(m，4H)；4.0(d，2H)，6.95(d，2H)；7.65(s，1H)；7.75(d，2H)，8.15(m，1H)。
實(shí)施例4合成N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-[4-(1-丙基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺A.4-[4-(1-丙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸甲酯將4-氟苯甲酸甲酯(165mmol)，1-(1-丙基)-哌嗪二氫溴酸鹽(138mmol)和碳酸鉀(690mmol)懸浮于二甲基乙酰胺(320ml)中和在回流下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水，用乙酸乙酯萃取三次。將萃取液用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/戊烷，濾出固體，干燥(真空)。獲得呈褐色的粉末，mp.99-101℃，Rf＝0.23(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
在以上過(guò)程中，Cs2CO3可代替K2CO3。
B.4-[4-(1-丙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸鹽酸鹽將4-[4-(1-丙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸甲酯(38mmol)溶解于4N鹽酸(60ml)中，并加熱回流7小時(shí)。將混合物在冰浴中冷卻至0-4℃和濾出形成的固體物質(zhì)，用冷水洗滌和干燥(真空)。獲得淺色粉末，mp.＞270℃，Rf＝0.19(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
或者，4-[4-(1-丙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸產(chǎn)物可作為與乙酸的內(nèi)鹽產(chǎn)生。例如在70℃下，將4-[4-(1-丙基)哌嗪-1-基]-苯甲酸甲酯懸浮于水/甲醇中，通過(guò)加入1當(dāng)量的氫氧化鈉進(jìn)行水解；將溶液澄清過(guò)濾，加入1當(dāng)量的乙酸沉淀出產(chǎn)物，過(guò)濾和干燥。
C.N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-[4-(1-丙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(22mmol)，4-[4-(1-丙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸鹽酸鹽(22mmol)，HOBT(22mmol)，WSCD(22mmol)和三乙胺(22mmol)溶解于DMF(50ml)中，和在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物中(確保輕微堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚中，濾出固體，干燥(真空)。獲得白色粉末，mp.216-218℃，Rf＝0.34(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
1H-NMR(d6-DMSO)0.85(t，3H)，1.2-1.3(m，1H)；1.4-1.6(m，7H)；1.65-1.8(m，2H)；2.05-2.15(m，2H)；2.25(t，2H)；2.45(m，4H)；3.2(m，4H)；4.0(d，2H)，6.95(d，2H)；7.65(s，1H)；7.75(d，2H)，8.15(m，1H)。
在另一種過(guò)程中，將4-[4-(1-丙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸的乙酸內(nèi)鹽在乙腈中用HOBt，NMM和二異丙基碳化二亞胺(DICI)處理，在40℃下攪拌1小時(shí)后，加入1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺的乙腈溶液。反應(yīng)完成后，通過(guò)向反應(yīng)混合物中加入水而使產(chǎn)物沉淀，過(guò)濾，再用乙醇蒸煮，干燥，得到終產(chǎn)物。
實(shí)施例5合成N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺
A.4-[4-異丙基-哌嗪-1-基]-苯甲酸甲酯在無(wú)氧氣氛下(N2)，將三-(二亞芐基-丙酮)-二鈀(0.05mmol)，(2′-二環(huán)己基phosphanyl聯(lián)苯基-2-基)-二甲基-胺(0.1mmol)和碳酸鉀(4.6mmol)懸浮于1，2-二甲氧基乙烷(10ml)中。加入4-溴-苯甲酸甲酯(3.3mmol)和1-異丙基-哌嗪(3.9mmol)，將攪拌下的混合物加熱回流28小時(shí)。冷卻后，將溶劑蒸發(fā)和向殘余物中加入水，然后用乙酸乙酯對(duì)其萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/戊烷中，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺褐色粉末，Rf＝0.23(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
B.4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯甲酸鹽酸鹽將4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯甲酸甲酯(0.9mmol)溶解于4N鹽酸(2ml)中并加熱回流7小時(shí)。將混合物在冰浴中冷卻至0-4℃和加入丙酮。濾出形成的固體物質(zhì)，用冷丙酮洗滌和干燥(真空)。獲得一種淺褐色粉末，mp.＞270℃，Rf＝0.08(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
C.N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(0.6mmol)，4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯甲酸鹽酸鹽(0.6mmol)，HOBT(0.6mmol)，WSCD(0.6mmol)和三乙胺(0.6mmol)溶解于DMF(2ml)中和在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物中(確保輕微堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙酸乙酯/乙醚中，濾出固體，干燥(真空)。獲得白色粉末，mp.218-220℃，Rf＝0.28(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
1H-NMR(d6-DMSO)1.0(d，6H)，1.2-1.3(m，1H)；1.4-1.6(m，5H)；1.65-1.8(m，2H)；2.05-2.15(m，2H)；2.45(m，4H)；2.65(m，1H)；3.2(m，4H)；4.0(d，2H)，6.95(d，2H)；7.65(s，1H)；7.75(d，2H)，8.15(m，1H)。
實(shí)施例6合成N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺A.4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯甲酸甲酯在無(wú)氧氣氛下(N2)，將三-(二亞芐基-丙酮)-二鈀(0.03mmol)，(2′-二環(huán)己基phosphanyl聯(lián)苯基-2-基)-二甲基-胺(0.9mmol)和NaOtBu(6.5mmol)懸浮于甲苯(20ml)中。加入4-溴-苯甲酸甲酯(4.65mmol)和1-(芐基)-哌嗪(5.6mmol)，將攪拌下的混合物加熱回流4小時(shí)。冷卻后，加入乙酸乙酯和乙醚，將混合物過(guò)濾。然后將溶劑蒸發(fā)和將殘余物懸浮于乙醚中，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺色粉末，mp.105-107℃，Rf＝0.67(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
B.4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯甲酸鹽酸鹽將4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯甲酸甲酯(0.84mmol)溶解于4N鹽酸(2ml)中并加熱回流8小時(shí)。將混合物在冰浴中冷卻至0-4℃和濾出形成的固體物質(zhì)，用冷丙酮洗滌和干燥(真空)。獲得一種灰色粉末，mp.＞270℃，Rf＝0.18(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
C.N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(0.84mmol)，4-[4-(2-丙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸鹽酸鹽(0.84mmol)，HOBT(0.84mmol)，WSCD(0.84mmol)和三乙胺(0.84mmol)溶解于DMF(2ml)中和在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物中(確保輕微堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于甲醇中，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺色粉末，mp.210-212℃，Rf＝0.20(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
1H-NMR(d6-DMSO)1.15-1.35(m，1H)；1.4-1.6(m，5H)；1.65-1.8(m，2H)；2.05-2.15(m，2H)；2.45(m，4H)；3.2(m，4H)；3.5(s，2H)；4.0(d，2H)，6.9(d，2H)；7.2-7.4(m，5H)，7.65(s，1H)；7.75(d，2H)，8.15(m，1H)。
實(shí)施例7合成N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-[4-(2-甲氧基-乙基-哌嗪-1-基]-苯甲酰胺
A.4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯甲酸甲酯將4-氟苯甲酸甲酯(200mmol)，1-芐基-哌嗪(300mmol)和碳酸鉀(300mmol)懸浮于乙腈(400ml)中和在回流下攪拌6天。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水中，用乙醚萃取三次。將萃取液用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用(首先二氯甲烷，然后二氯甲烷/甲醇＝15∶1)作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/戊烷中，濾出固體，干燥(真空)。獲得一種粉末，mp.105-107℃。
B.4-(哌嗪-1-基)-苯甲酸甲酯將4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯甲酸甲酯(19.4mmol)溶解于甲醇(150ml)中和加入Pd/炭(0.6g)。將混合物在氫氣氛下攪拌直至停止消耗。濾除催化劑，將濾液蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/戊烷中，濾出固體，干燥(真空)。獲得一種粉末，mp.95-97℃。
C.[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸甲酯將4-(哌嗪-1-基)-苯甲酸甲酯(19mmol)，2-溴乙基甲基醚(21mmol)和碳酸鉀(22.8mmol)懸浮于乙腈(50ml)中并在80℃下攪拌8小時(shí)。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水中，用二氯甲烷萃取三次。將萃取液用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/戊烷中，濾出固體，干燥(真空)。獲得一種粉末，mp.103-105℃。
D.[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸鹽酸鹽將[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸甲酯(17mmol)溶解于4N鹽酸(70ml)中并加熱回流5小時(shí)。冷卻后，將溶劑蒸發(fā)，將殘余物懸浮于乙醇中，濾出固體，用乙醚洗滌和干燥(真空)。獲得一種粉末，mp.＞270℃，Rf＝0.35(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
E.N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-[4-(2-甲氧基-乙基)哌嗪-1-基]-苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(1.0mmol)，[4-(2-甲氧基乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸鹽酸鹽(1.0mmol)，HOBT(1.0mmol)，WSCD(1.0mmol)和三乙胺(1.0mmol)溶解于DMF(4ml)和在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物中(確保輕微堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用二氯甲烷/甲醇＝92.5∶7.5作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺色粉末，mp.166-168℃，Rf＝0.37(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
1H-NMR(d6-DMSO)1.15-1.35(m，1H)；1.4-1.6(m，5H)；1.65-1.8(m，2H)；2.05-2.15(m，2H)；2.45(m，6H)；3.2(m，7H)；3.45(t，2H)；4.0(d，2H)，6.95(d，2H)；7.65(s，1H)；7.75(d，2H)，8.15(m，1H)。
實(shí)施例8合成N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(1-丙基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺A.1-(4-苯基-哌啶-1-基)-乙酮4-苯基哌啶(87mmol)和吡啶(96mmol)溶解于無(wú)水二氯甲烷(100ml)中和在10℃下向攪拌中的溶液中滴加入乙酰氯(96mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液。將反應(yīng)物在室溫下攪拌1小時(shí)。將混合物用水萃取三次，水相再用二氯甲烷萃取。合并后的有機(jī)相用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。獲得一種淺褐色油，Rf＝0.13(乙酸乙酯/己烷＝l∶1)。
B.4-哌啶-4-基-苯甲酸將1-(4-苯基-哌啶-1-基)-乙酮(84mmol)溶解于二氯甲烷(250ml)中，在-20至-10℃下滴加入草酰氯(336mmol)。在加完草酰氯后，在-10℃下分批加入三氯化鋁(260mmol)。將混合物在-10℃下攪拌3小時(shí)。除去冷卻浴，將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將混合物倒入冰/水(600ml)中，用二氯甲烷萃取三次。合并后的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物溶解于氫氧化鈉水溶液(2N，250ml)中，在0℃下加入6N鹽酸以酸化溶液。濾出形成的沉淀，和用水洗滌。將固體物質(zhì)懸浮于6N鹽酸(300ml)中，將混合物在回流下加熱18小時(shí)。冷卻至室溫后，將溶劑除去，再次懸浮于于乙醇中。濾出固體物質(zhì)和干燥。獲得一種褐色粉末，mp.＞270℃。
C.4-哌啶-4-基-苯甲酸甲酯將4-哌啶-4-基-苯甲酸(47mmol)溶解于甲醇(300ml)中，加入1ml濃硫酸。將混合物加熱回流過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物(確保堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。獲得一種褐色粉末，Rf＝0.18(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
D.4-(1-丙基-哌啶-4-基)-苯甲酸甲酯將4-哌啶-4-基-苯甲酸甲酯(28mmol)，乙基二異丙基胺(31mol)和1-碘丙烷(42mmol)溶解于1，2-二甲氧基乙烷(100ml)中，將混合物在70℃下加熱過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物(確保堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用二氯甲烷/甲醇＝9∶1作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺褐色粉末，Rf＝0.35(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
E.4-[1-丙基-哌啶-4-基)-苯甲酸鹽酸鹽將4-(1-丙基-哌啶-4-基)-苯甲酸甲酯(32mmol)溶解于4N鹽酸(45ml)中，并加熱回流7小時(shí)。將混合物在冰浴中冷卻至0-℃和濾出形成的固體物質(zhì)，用冷丙酮洗滌和干燥(真空)。獲得一種褐色粉末，mp.＞270℃，Rf＝0.08(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
F.N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(1-丙基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(23mmol)，4-(1-丙基-哌啶-4-基)-苯甲酸鹽酸鹽(23mmol)，HOBT(23mmol)，WSCD(23mmol)和三乙胺(23mmol)溶解于DMF(50mol)中和在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物(確保堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/戊烷中，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺色粉末，mp.198-200℃，Rf＝0.34(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
1H-NMR(d6-DMSO)0.85(t，3H)；1.2-1.3(m，1H)；1.4-1.6(m，7H)；1.6-1.8(m，6H)；1.9-2.0(m，2H)；2.05-2.15(m，2H)；2.25(t，2H)；2.55(m，1H)；2.95(d，2H)；4.0(d，2H)，7.35(d，2H)；7.8(d，2H)，7.9(s，1H)；8.15(m，1H)。
實(shí)施例9合成N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-[1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-4-基]-苯甲酰胺A.4-羧基苯硼酸甲酯將4-羧基苯硼酸(300mmol)溶解于甲醇(400ml)中，向攪拌中的溶液中加入1.5ml濃鹽酸。將反應(yīng)加熱回流30小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)，將剩余的殘余物懸浮于乙醚中，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺色粉末，mp.201-205℃，Rf＝0.28(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。該粉末為4-羧基苯硼酸甲酯與4-羧基苯硼酸甲酯二聚酸酐的混合物，不經(jīng)純化即可使用。
B.4-吡啶-4-基-苯甲酸甲酯將來(lái)自A的4-羧基苯硼酸甲酯(248mmol)，4-溴吡啶(248mmol)，四-(三苯膦)-鈀(2.5mmol)和碳酸鉀(744mmol)懸浮于1，2-二甲氧基乙烷(1100ml)中。將攪拌中的混合物加熱回流8小時(shí)。冷卻后，將溶劑蒸發(fā)和向殘余物中加入水，然后用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚中，濾出固體，干燥(真空)。獲得一種淺褐色粉末，mp.99-101℃，Rf＝0.39(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
C.4-(4-甲氧羰基-苯基)-1-(2-甲氧基-乙基)-吡啶鎓；溴化物將4-吡啶-4-基-苯甲酸甲酯(70mmol)和2-溴乙基-甲基醚(28ml)在110℃下加熱1小時(shí)。冷卻后，將反應(yīng)混合物懸浮于丙酮中，濾出固體，干燥(真空)。獲得一種淺褐色粉末，mp.170-171℃，Rf＝0.22(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
D.4-[1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-4-基]-苯甲酸甲酯將4-(4-甲氧羰基-苯基)-1-(2-甲氧基-乙基)-吡啶鎓溴化物(67mmol)懸浮于甲醇(250ml)中，加入氧化亞鉑(1.2g)。將混合物在氫氣氛下在常壓下攪拌，直至消耗停止。濾出催化劑，將濾液蒸發(fā)。將殘余物溶解于二氯甲烷中，用碳酸鈉水溶液萃取。有機(jī)相用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用二氯甲烷/甲醇＝9∶1作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。獲得一種淺黃色的油，Rf＝0.22(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
E.4-1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-4-基]-苯甲酸鹽酸鹽將4-[1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-4-基]-苯甲酸甲酯(47mmol)溶解于4N鹽酸(80ml)中并加熱回流12小時(shí)。冷卻后，將溶劑蒸發(fā)，將殘余物懸浮于丙酮中，濾出固體，用丙酮洗滌和干燥(真空)。獲得白色粉末，mp.＞270℃。
F.N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-[1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-4-基]-苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(107mmol)，4-[1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-4-基]-苯甲酸鹽酸鹽(107mmol)，HOBT(107mmol)，WSCD(107mmol)和三乙胺(107mmol)溶解于DMF(250ml)中和在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物中(確保輕微堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(2N NH3)＝9∶1作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/乙酸乙酯，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺色粉末，mp.160-162℃，Rf＝0.42(二氯甲烷/甲醇(3N NH3)＝9∶1)。
1H-NMR(d6-DMSO)1.2-1.3(m，1H)；1.4-1.6(m，5H)；1.6-1.8(m，6H)；2.0-2.2(m，4H)；2.45(m，2H)；2.55(m，1H)；2.95(br.d，2H)；3.2(s，3H)；3.4(dd，2H)；4.0(d，2H)；7.35(d，2H)；7.8(d，2H)；7.9(s，1H)；8.15(m，1H)。
實(shí)施例10N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(1-異丙基哌啶-4-基)-苯甲酰胺A.1-異丙基-4-(4-甲氧羰基-苯基)-吡啶鎓；溴化物將4-吡啶-4-基-苯甲酸甲酯(2.3mmol)和2-碘丙烷(1.0ml)在90℃下加熱24小時(shí)。冷卻后，將溶劑蒸發(fā)，將殘余物懸浮于丙酮，濾出固體，干燥(真空)。獲得一種淺黃色粉末，mp.187-189℃，Rf＝0.27(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
B.4-(1-異丙基-哌啶-4-基)-苯甲酸甲酯氫碘酸鹽將1-異丙基-4-(4-甲氧羰基-苯基)-吡啶鎓；溴化物(1.9mmol)懸浮于甲醇(10ml)中和加入氧化亞鉑(80mg)。將混合物在氫氣氛下在常壓下攪拌直至停止消耗。濾除催化劑和將濾液蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/戊烷中，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺色粉末，mp.219-224℃，Rf＝0.41(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
C.4-(1-異丙基-哌啶-4-基)-苯甲酸鹽酸鹽將4-(1-異丙基-哌啶-4-基)-苯甲酸甲酯氫碘酸鹽(1.7mmol)溶解于4N鹽酸(5ml)中并加熱回流10小時(shí)。冷卻后，將溶劑蒸發(fā)，將殘余物懸浮于丙酮中，濾出固體，用丙酮洗滌和干燥(真空)。獲得一種灰褐色粉末，mp.＞270℃。
D.N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(l-異丙基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(0.95mmol)，4-(1-異丙基-哌啶-4-基)-苯甲酸鹽酸鹽(0.95mmol)，HOBT(0.95mmol)，WSCD(0.95mmol)和三乙胺(0.95mmol)溶解于DMF(5ml)中和在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物(確保堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚中，濾出固體，干燥(真空)。獲得白色粉末，mp.214-216℃，Rf＝0.38(二氯甲烷/甲醇(3NNH3)＝9∶1)。
1H-NMR(d6-DMSO)0.95(d，6H)；1.2-1.3(m，1H)；1.4-1.8(m，11H)；2.05-2.25(m，4H)；2.55(m，1H)；2.7(m，1H)；2.85(d，2H)；4.0(d，2H)，7.35(d，2H)；7.8(d，2H)，7.9(s，1H)；8.15(m，1H)。
實(shí)施例11N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(1-環(huán)戊基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺A.1-環(huán)戊基-4-(4-甲氧羰基-苯基)-吡啶鎓；溴化物將4-吡啶-4-基-苯甲酸甲酯(2.35mmol)和1-碘環(huán)戊烷(1.0ml)在110℃下加熱4小時(shí)。加入1-碘環(huán)戊烷(0.5ml)，將混合物在120℃下再加熱4小時(shí)。冷卻后，將溶劑蒸發(fā)，將殘余物懸浮于丙酮，濾出固體，干燥(真空)。將固體殘余物用硅膠快速色譜純化，用二氯甲烷/甲醇＝9∶1作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚中，濾出固體，干燥(真空)。獲得一種黃色粉末，mp.183-185℃，Rf＝0.35(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
B.4-(1-環(huán)戊基-哌啶-4-基)-苯甲酸甲酯氫碘酸鹽將1-環(huán)戊基-4-(4-甲氧羰基-苯基)-吡啶鎓；溴化物(1.27mmol)懸浮于甲醇(8ml)和加入氧化亞鉑(50mg)。將混合物在氫氣氛下在常壓下攪拌直至停止消耗。濾除催化劑和將濾液蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/戊烷中，濾出固體，干燥(真空)。獲得淺色粉末，mp.204-210℃，Rf＝0.27(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)。
C.4-(1-環(huán)戊基-哌啶-4-基)-苯甲酸鹽酸鹽將4-(1-環(huán)戊基-哌啶-4-基)-苯甲酸甲酯氫碘酸鹽(1.06mmol)溶解于4N鹽酸(5ml)中并加熱回流10小時(shí)。冷卻后，將溶劑蒸發(fā)，將殘余物懸浮于丙酮中，濾出固體，用丙酮洗滌和干燥(真空)。獲得一種灰褐色粉末，mp.＞270℃。
D.N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(1-環(huán)戊基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(0.74mmol)，4-(1-環(huán)戊基-哌啶-4-基)-苯甲酸鹽酸鹽(0.74mmol)，HOBT(0.74mmol)，WSCD(0.74mmol)和三乙胺(0.74mmol)溶解于DMF(5ml)中和在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物(確保堿性條件)，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚中，濾出固體，干燥(真空)。獲得白色粉末，mp.233-234℃，Rf＝0.34(二氯甲烷/甲醇(3NNH3)＝9∶1)。
1H-NMR(d6-DMSO)1.2-1.85(m，20H)；1.9-2.15(m，4H)；2.4-2.6(m，2H)；3.05(d，2H)；4.0(d，2H)，7.35(d，2H)；7.8(d，2H)，7.9(s，1H)；8.15(m，1H)。
實(shí)施例12N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺A.4-苯基-1-甲基-哌啶將4-苯基哌啶(12.4mmol)，低聚甲醛(24.8mmol)和四異丙氧基鈦(12.4mmol)懸浮于1，2-二甲氧基乙烷(20ml)中，并在30分鐘內(nèi)升溫至60℃，在室溫下再攪拌1小時(shí)。分批加入硼氫化鈉(12.4mmol)，將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，在60℃下攪拌3小時(shí)。冷卻后，將溶劑蒸發(fā)和將殘余物溶解于氨水(60ml)和乙酸乙酯的混合物中，小心過(guò)濾。將混合物用乙酸乙酯萃取三次，合并后的有機(jī)相用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。獲得一種淺褐色油。
B.4-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酸甲酯將4-苯基-1-甲基-哌啶(9.9mmol)溶解于二氯甲烷(60ml)中，并在-20至-10℃下滴加入草酰氯(39.6mmol)。在加完草酰氯后，在-10℃下分批加入三氯化鋁(260mmol)。將混合物在-10℃下攪拌1.5小時(shí)。除去冷卻浴，將混合物在室溫下再攪拌2小時(shí)。將混合物再冷卻至0℃，滴加入甲醇(30ml)。加完甲醇后，除去冷卻浴，再將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物倒入碳酸鈉水溶液(確保堿性條件)和乙酸乙酯的混合物中，小心地對(duì)懸浮液進(jìn)行過(guò)濾。將濾液用乙酸乙酯萃取三次和組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物用硅膠快速色譜純化，用二氯甲烷/甲醇＝9∶1作為移動(dòng)相。合并含餾分的產(chǎn)物和蒸發(fā)。獲得一種淺黃色油，Rf＝0.29(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。
C.4-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酸鹽酸鹽將4-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酸甲酯(4.55mmol)溶解于4N鹽酸(10ml)中并加熱回流8小時(shí)。冷卻后，將溶劑蒸發(fā)，將殘余物懸浮于丙酮中，濾出固體，用丙酮洗滌和干燥(真空)。獲得一種淺褐色粉末，mp.＞270℃。
D.N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺將1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺(0.98mmol)，4-(1-甲基哌啶4-基)-苯甲酸鹽酸鹽(0.98mmol)，HOBT(0.98mnol)，WSCD(0.98mmol)和三乙胺(0.98mmol)溶解于DMF(5ml)中和在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸出溶劑后，將殘余物溶解于水和碳酸鈉的混合物(確保堿性條件)中，用乙酸乙酯萃取三次。組合的萃余物用硫酸鈉干燥和蒸發(fā)。將殘余物懸浮于乙醚/戊烷中，濾出固體，干燥(真空)。獲得白色粉末，mp.215-217℃，Rf＝0.32(二氯甲烷/甲醇(3NNH3)＝9∶1)。
1H-NMR(d6-DMSO)1.2-1.3(m，1H)；1.4-1.8(m，11H)；1.85-2.0(m，2H)；2.05-2.2(m，5H)；2.55(m，1H)；2.95(d，2H)；4.0(d，2H)，7.35(d，2H)；7.8(d，2H)，7.9(s，1H)；8.15(m，1H)。
類似地，按照與如上實(shí)施例12基本相同的條件獲得N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(哌啶-4-基)-苯甲酰胺；例如，省略步驟A并在步驟B開(kāi)始合成過(guò)程，采用4-苯基哌啶作為原料。
權(quán)利要求
1.式I的化合物或其可藥用鹽或酯 其中，R1和R2彼此獨(dú)立地為H或C1-C7低級(jí)烷基，或R1和R2和與其相連的碳原子一起形成C3-C8環(huán)烷基環(huán)，和Het為取代或未取代的含氮雜環(huán)取代基，條件是，Het不是4-吡咯-1-基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式II的化合物或其可藥用鹽或酯 其中，X為CH或N，和R為C1-C7低級(jí)烷基、C1-C7低級(jí)烷氧基-C1-C7低級(jí)烷基、C5-C10芳基-C1-C7低級(jí)烷基或C3-C8環(huán)烷基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽或酯，其選自N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(哌嗪-1-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-[4-(1-丙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(4--芐基-哌嗪-1-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲酰基)-環(huán)己基]-4-(1-丙基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-[1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-4-基]-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(1-異丙基-哌啶-4-基)苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(1-環(huán)戊基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺；N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(1-甲基-哌啶-4-基)苯甲酰胺，或N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-(哌啶-4-基)-苯甲酰胺。
4.N-[1-(氰基甲基-氨基甲?；?-環(huán)己基]-4-[4-(1-丙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酰胺或其可藥用鹽或酯。
5.用作藥物的權(quán)利要求1的化合物。
6.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1的化合物作為活性成分。
7.一種治療患有或可能患有與組織蛋白酶K有關(guān)的疾病或醫(yī)療狀況的患者的方法，包括向患者給藥有效量的權(quán)利要求1的化合物。
8.權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療或預(yù)防與組織蛋白酶K有關(guān)的疾病或醫(yī)療狀況的藥物中的用途。
9.一種式I的化合物或其鹽或酯的制備方法，包括使式III的相應(yīng)的Het取代的苯甲酸衍生物與1-氨基-環(huán)己烷甲酸氰基甲基-酰胺進(jìn)行偶聯(lián)， 其中，Het如權(quán)利要求1定義。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(I)的二肽腈組織蛋白酶K抑制劑或其可藥用鹽或酯，其中R
文檔編號(hào)C07D211/26GK1636980SQ20041009094
公開(kāi)日2005年7月13日 申請(qǐng)日期2001年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月10日
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