專利名稱：一種低聚體原花青素及制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種低聚體原花青素和這種低聚體原花青素的生產(chǎn)工藝，以及這種低聚體原花青素在食品、保健品、飼料添加劑和獸藥中的應用。尤其是指4個聚合度以下的低聚體原花青素，是用9-10聚合度以上的高聚體原花青素降解制成，這種飼料添加劑可以有效地降低禽類動物對球蟲病的感染率和死亡率。
背景技術：
在植物化學領域中，原花青素是指一切在熱酸中處理下能產(chǎn)生花色素的物質(zhì)，它包括單體原花色素和聚合體原花色素。單體原花色素對應于黃烷-4-醇和黃烷-3，4-醇，聚合體原花色素對應于縮合單寧、紅粉和酚酸。
聚合體原花青素是近幾年來越來越受到公眾歡迎的新型保健品和藥品。它具有極強的抗氧化性，同時在抗病毒、抗癌癥等方面也顯示出突出的效果。原花青素多聚體廣泛存在于自然界植物中，是構(gòu)成植物防御系統(tǒng)的主要有效成分，同時也是我國多種中草藥中的主要活性組份，如檳榔、仙鶴草、石榴皮等中草藥都含有大量的聚合體原花青素。其中，葡萄籽單寧、茶多酚對人體心血管系統(tǒng)的保護作用和抗菌、抗病毒、抗氧化、抗癌變的特殊生理生化活性已經(jīng)得到科學上的證實。從植物中，尤其是葡萄籽和松樹皮中提取原花青素聚合物已形成大規(guī)模生產(chǎn)。
聚合體原花青素的另一主要產(chǎn)品是從樹皮中提取的各類栲膠，如楊梅栲膠、落葉松栲膠、黑荊樹栲膠、槲樹栲膠。這些被稱為縮合單寧或栲膠的聚合原花青素，是兩聚花青素再和黃烷-3，4-醇縮合的產(chǎn)物。黑荊樹皮單寧結(jié)構(gòu)單元是A環(huán)為間苯二酚型的原刺槐定，平均聚合度為4～5。落葉松單寧的結(jié)構(gòu)單元為間苯三酚性的原花青定，平均聚合度為9～10。楊梅單寧的結(jié)構(gòu)單元為原翠雀定，平均聚合度為12。落葉松單寧的結(jié)構(gòu)單元為間苯三酚性的原花青定，平均聚合度為9～10?？s合單寧或栲膠的平均聚合度高，低聚體原花青素的含量偏低，是造成蛋白質(zhì)沉淀，口感澀性的主要原因。
常見的提取原花青素的方法包括水提取，有機溶劑提取和二氧化碳超臨界提取。由于提取方法的不同，制得的原花青素聚合度不同，低聚體原花青素(2～4聚體)的生理活性遠遠大于原花青素的高聚體(5聚體以上)，在專利申請?zhí)枮?1109225.4和03117429.9的發(fā)明專利中是采用乙酸乙酯等有機溶劑萃取方法從花青素的混合物中分離原花青素的低聚體和高聚體，但萃取法所制得的低聚體原花青素的得率較低，且較難分離，同時使用大量有機溶劑易造成環(huán)境污染，所以迫切需要尋找一種可以快速轉(zhuǎn)化高聚體原花青素為低聚體原花青素的方法。
球蟲病是禽類養(yǎng)殖過程中危害極為嚴重的疾病。通常在15-50日齡的雛雞發(fā)病率最高，嚴重時的死亡率可達80％以上。病雞痊愈后生長緩慢，發(fā)育不良，日增重和產(chǎn)蛋率受到一定的影響。在本發(fā)明之前，防治球蟲病的常規(guī)方法是在飼料中或飲水里添加抗球蟲藥，常用的抗球蟲藥包括鹽霉素鈉、莫能霉素、氨丙啉、磺胺二甲氧嘧啶、氯苯胍、磺胺喹惡啉和常山酮等。這些抗球蟲藥療效明顯，價格適中，使用方便，已在禽類養(yǎng)殖行業(yè)中廣泛使用。但是，由于這些抗生素類和化學合成類的抗球蟲藥在動物體內(nèi)的殘留量比較高，對肉食產(chǎn)品的口感和風味有一定的影響，同時長期食用這些抗生素和化學合成藥品對人體的健康不利。預防球蟲病的另一種有效的方法是使用球蟲疫苗?？墒怯捎谇蛳x疫苗使用方法繁瑣，價格昂貴使球蟲疫苗在養(yǎng)殖業(yè)中推廣和應用范圍十分有限。
近幾年來，隨著人們對食品安全問題的日益關注，中草藥提取物的抗球蟲作用越來越受到養(yǎng)殖業(yè)的青睞。和化學合成的抗球蟲藥物相比，中草藥的抗球蟲效果具有無毒，無殘留，無副作用和不易引起球蟲產(chǎn)生耐藥性等特點，是屬于綠色、環(huán)保、安全的新型飼料添加劑。常用的中草藥類抗球蟲藥包括馬鞭草、天名精、常山、黃花篙、苦參，白頭翁等。
雖然單寧預防和治療禽類動物球蟲病已有專利發(fā)表(美國專利US5135746，US6106838)，但是以上專利中發(fā)表的單寧為直接從植物中提取出的縮合單寧。此類縮合單寧的聚合度較高，從動物營養(yǎng)學角度來看，不適合加入動物飼料中使用，這主要是因為單寧和蛋白質(zhì)結(jié)合后生成不溶于水的復合物。一方面，單寧和飼料中的蛋白質(zhì)結(jié)合導致了動物體對飼料中蛋白質(zhì)的吸收和利用，另一方面，單寧和腸道消化酶結(jié)合，降低了動物腸道中酶的活性。正是因為單寧在動物營養(yǎng)過程中的負面作用，單寧一直被認為是飼料中重要的抗營養(yǎng)因子。所以，直接利用植物提取物中的縮合單寧作為抗球蟲藥物添加到飼料中將會影響動物生長和發(fā)育。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明即是為了提供一種4個聚合度以下的低聚體原花青素和這種低聚體原花青素的生產(chǎn)工藝，以及這種低聚體原花青素在食品、保健品、飼料添加劑和獸藥中的應用。
本發(fā)明為達到發(fā)明目的所采用的技術方案是一種低聚體原花青素，所述的低聚體原花青素為2～4聚體，并以縮合單寧為原料，以濃度為20～60％的雙氧水或氯酸鉀為氧化劑對所述的縮合單寧進行氧化降解，氧化反應條件為pH值調(diào)至6～7、溫度控制在30～50℃，氧化降解時間為15～120分鐘，得黃色至棕黃色半透明液體，再經(jīng)過分離純化制得。
一種制備如上所述的低聚體原花青素的方法，所述的方法是以縮合單寧為原料，以濃度為20～60％的雙氧水或氯酸鉀為氧化劑，在pH6～7、溫度30～50℃下進行氧化反應15～120分鐘，得黃色至棕黃色半透明液體，經(jīng)常規(guī)物理或生化方法除去多余氧化劑，再經(jīng)干燥制得低聚體原花青素。
上述低聚體原花青素的制備方法中，所述的縮合單寧屬黃烷醇的聚合物，分子骨架為C6·C3·C6，為2到5個黃烷醇單體的聚合體，分子量分布在500至3000MW之間。所述的縮合單寧可以是縮合單寧提取物，所述縮合單寧提取物以新鮮含有高含量單寧的植物碎片為原料，以如下順序步驟制備以極性溶劑為提取劑，在60～100℃提取0.5～6小時，過濾去除殘渣，收集提取液濃縮至相對密度為1.201～1.452，得縮合單寧提取物，所述的極性溶劑為水、或乙醇、或甲醇、或乙酸乙酯；所述的縮合單寧也可以為富含單寧的植物栲膠。
所述的低聚體原花青素制備方法的優(yōu)選條件為所述的氧化劑為雙氧水，濃度為20～60％，所述雙氧水體積為縮合單寧提取物或植物栲膠的2～4倍。
具體的，所述的制備方法按如下步驟進行(1)提取取富含單寧的植物碎片加入4～6倍重量的水、在80～100℃溫度下加熱0.5～1小時，過濾去除殘渣，殘渣再用以上同樣的提取條件重復1～2次；收集濾液，濃縮至相對密度為1.205～1.332的縮合單寧提取物；(2)氧化降解往步驟(1)所得縮合單寧提取物中加入2倍體積的27.3％至50％的雙氧水，調(diào)pH為6.7，在40℃降解30分鐘，得黃色至黃棕色半透明液體為降解產(chǎn)物；(3)分離純化將降解產(chǎn)物減壓濃縮使剩余雙氧水揮發(fā)干凈，干燥得低聚體原花青素。
上述步驟(3)中，也可以加入過氧化氫酶，分解剩余的雙氧水或是加入1～2倍體積的水，在常壓40℃下通過不斷攪拌揮發(fā)除去余下的氧化劑。
所述的低聚體原花青素具有較強的抗氧化功能和抗菌功能，可以作為食品添加劑和食品抗氧化劑添加進奶制品及各種飲料中，添加量為0.2％至0.8％。
所述的低聚體原花青素在生產(chǎn)低膽固醇含量雞蛋的產(chǎn)蛋雞飼料添加劑中的應用。在雞日糧中添加低聚體原花青素能顯著影響蛋中膽固醇的含量，低聚體原花青素使26周齡、28周齡雞產(chǎn)的蛋中的膽固醇的含量分別降低了10.4％和11.2％(P＜0.01)，而蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋黃指數(shù)和哈夫單位無顯著影響。
此外，由于所述的低聚體原花青素可以有效地降低禽類動物對球蟲病的感染率和死亡率，而對禽類動物的生長發(fā)育沒有負面影響，故可以應用于治療動物球蟲病飼料添加劑和獸藥的制備。這種飼料添加劑或獸藥可以治療球蟲感染后所引起的拉血、腸黏膜損壞等臨床癥狀，降低球蟲感染后的死亡率。所述的低聚體原花青素在全價料中的添加量為0.04％～0.06％，更好的添加量是0.02％～0.04％，作為治療藥物使用時，可在飼料中添加0.04％～0.5％本發(fā)明產(chǎn)品。
為達到低聚體原花青素的最大效果，還可在所述的飼料添加劑加入0.05％～0.1％抗壞血酸或維生素C?？箟难峄蚓S生素C的存在可以增強低聚花青素抗病原菌，抗氧化和抗球蟲的功效。上述飼料添加劑可用于下列動物①雞、②鴨、③鵪鶉、④鴿子、⑤兔，或是反芻類動物。
本發(fā)明所述的低聚體原花青素的制備方法及應用的有益效果主要體現(xiàn)在(1)采用氧化降解方法使縮合單寧中的高聚體原花青素降解為低聚體原花青素，步驟簡單，降低了成本，也減少了污染；(2)降解所得低聚體原花青素一定濃度對蛋白質(zhì)的沉降能力下降了幾乎100％，口感澀性消失，對消化道淀粉酶活性無不良影響；(3)所得低聚體原花青素具有較強的抗氧化功能和抗菌功能，應用于飼料添加劑中可以有效地降低禽類動物對球蟲病的感染率和死亡率。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但不能將方案中所涉及的方法及技術參數(shù)理解為對本發(fā)明的限制。
實施例1新鮮松科松亞科松屬馬尾松松針葉單寧的提取與分解。
10公斤新鮮松針葉剁成小段，加水50公斤至60公斤，在90～100℃溫度下加熱30分鐘。過濾去除殘渣，上清液繼續(xù)加熱濃縮至原體積的5公斤，加入20公斤27.3％含量的雙氧水，用氫氧化鈉調(diào)pH至7，加熱至50℃降解30分鐘。降解完成后繼續(xù)加熱攪拌揮發(fā)干凈雙氧水，濃縮至3公斤，得金黃或棕黃色產(chǎn)品低聚體原花青素。
實施例2落葉松栲膠的分解1公斤落葉松栲膠加水1公斤，再加入2公斤50％含量的雙氧水，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7，加熱至30℃降解30分鐘。降解完成后，繼續(xù)加熱攪拌，并加入1～2公斤的水補充，揮發(fā)干凈雙氧水，濃縮至2公斤，得金黃或棕黃色產(chǎn)品低聚體原花青素。
實施例3黑荊樹皮單寧1公斤黑荊樹皮單寧加水1公斤，再加入2公斤50％含量的雙氧水，用氫氧化鈉調(diào)pH至6，加熱至40℃降解30分鐘。降解完成后，繼續(xù)加熱攪拌，并加入1-2公斤的水補充，揮發(fā)干凈雙氧水，濃縮至2公斤，得金黃或棕黃色產(chǎn)品低聚體原花青素。
實施例4低聚體原花青素平均分子量的測定采用國際上通用的薄層層析法(TLC)來測定低聚體原花青素的平均分子量。具體方法如下使用Merk公司生產(chǎn)的TLC60F硅膠板測定分子量。分析之前，硅膠板用異丙醇預處理，然后在130℃烘箱中干燥2個小時。低聚體原花青素經(jīng)過減壓濃縮、冷凍干燥后的固形物，40mg固形物溶解于10ml甲醇中。標準品(表兒茶素，EGCE，原花青素B-1，原花青素C-1和落葉松單寧)40mg溶解于10ml甲醇中。10ul降解物樣品和標準品在硅膠板上點樣，展開劑為丙酮∶水∶甲酸＝90∶5∶5。分離后，硅膠板用1％的4-二甲基氨基肉桂醛乙醇溶液，和37％的鹽酸溶液1∶1混合，均勻噴霧，顯現(xiàn)出灰藍色斑點的為原花青素類物質(zhì)。
經(jīng)測定，以上試驗中所生產(chǎn)出的低聚體原花青素的分子量為400MW至1000MW之間，大部分降解產(chǎn)物分子量在800MW左右。
實施例5低聚體原花青素對雞腸道蛋白質(zhì)沉淀的影響實驗步驟1.取1克實施例1制備的含50％馬尾松單寧的樣品溶于20ml水中，得到5％的深棕色溶液，為1號溶液。另取1克實施例1制備的含50％馬尾松單寧的樣品，放入500ml燒杯中，加入1ml水和2ml50％雙氧水后，攪拌均勻，調(diào)PH至7，加熱反應30min，溶液由稠變稀，色澤變淺棕紅色，無沉淀出現(xiàn)，定容至20ml，為2號溶液。
2.取七只試管，分別加上述1號溶液1ml，0.5ml，0.25ml，0.125ml，0.063ml，0.031ml，0.016ml，依次加dh2o水0ml，0.5ml，0.75ml，0.875ml，0.937ml，0.969ml，0.984ml。(即每個試管加水到為1ml)，再依次加1mg/ml的明膠溶液1ml，定容至10ml，上述試管中相當于含單寧最終濃度為5.00g/l，2.50g/l，1.25g/l，0.63g/l，0.31g/，0.16g/l，0.08g/l，震蕩均勻后，在恒溫30℃靜置24hr，測出濁度。各組對照品用1ml的dh2o替代1ml明膠溶液，其它操作與前面一樣。
3.同樣取七只試管，用2號溶液，按上述方法操作，測出濁度。
4.將各組試管經(jīng)濁度測定后，在5000r/min離心，將沉淀物烘干后，稱出重量。實驗數(shù)據(jù)見表1表1 低聚體原花青素和馬尾松單寧對蛋白質(zhì)沉淀能力的影響
從上表中，我們可以看出，低聚體原花青素和馬尾松單寧相比，對蛋白質(zhì)沉淀的能力明顯下降。
實施例6低聚體原花青素對雞腸道淀粉酶活性的影響5羽20日齡仔雞屠宰后立即取出小腸至結(jié)腸處腸內(nèi)容物，制成15％含量的磷酸緩沖液懸浮液，離心后取上清液為待測酶液。另備1％可溶性淀粉為底物。實施例1制備的低聚體原花青素和馬尾松單寧制成0.1％水溶液。測試試管中加入2ml底物，1ml酶液，和0、0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％的低聚體原花青素或馬尾松單寧溶液，混合均勻后，在37℃水浴中保溫60分鐘。在0小時，和1小時時分別取出1ml樣品，立刻在100℃水浴中加熱30分鐘使酶失活，冷卻，用3，5-二硝基水楊酸比色法測定還原糖含量。蛋白質(zhì)含量用考馬斯亮蘭G250比色法測定。淀粉酶活性(IU)計算為微摩爾還原糖/微克蛋白質(zhì).分鐘。實驗數(shù)據(jù)見表2。
表2不同濃度的低聚體原花青素和馬尾松單寧對雞腸道淀粉酶活性的影響
從表2中可以看出，低聚體原花青素和馬尾松單寧相比，對仔雞腸道淀粉酶活性的影響明顯減小。
實施例7低聚體原花青素對病原微生物生長的影響按實施例1所述工藝，選用30％、50％、60％雙氧水對落葉松栲膠單寧進行氧化降解，產(chǎn)品濃度為1.5％，使用貼濾紙方法測定對下列病原菌的抑制程度。大腸桿菌，沙門氏菌，金黃色葡萄球菌，蠟狀芽孢桿菌，銅綠假單胞菌，志賀氏痢疾桿菌生長在肉湯培養(yǎng)基，37℃條件下生長18小時后測定抑菌圈直徑。黑曲霉和黑根霉生長在PDA固體培養(yǎng)基上，于25℃的溫度培養(yǎng)10天后測定抑菌圈直徑。數(shù)據(jù)為二次實驗結(jié)果平均值見表3。
表3 落葉松栲膠及其降解產(chǎn)物抑菌圈(mm)
實施例8低聚體原花青素在植物油中抗氧化效果取已干燥好的實施例2的50％雙氧水降解的上述產(chǎn)物，在電子天平上精確稱量后，放入小燒杯中，加入適量的乙醇和乙酸乙酯的混合物，用玻璃棒攪動使其溶解，按0、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1.0％添加到菜籽油中，40℃恒溫箱保溫，在間隔時間內(nèi)測定其氧化值，比較其抗氧化效果。
表4低聚體原花青素在菜籽油中的抗氧化效果(POV) (MEQ/kg)
從表中可見，過氧化值隨著時間的延長而增加，前4天效果不明顯，但是4～11天表現(xiàn)出低聚體原花青素的抗氧化性，從數(shù)值比較，0.2％添加量對植物油的穩(wěn)定效果最好。0.6％、0.8％、1.0％次之，0.4％再次之。因此，低聚體原花青素對菜籽油的穩(wěn)定性不是隨濃度的增加而增加的。
實施例9低聚體原花青素對產(chǎn)蛋雞蛋品質(zhì)的影響選24周齡健康父母代嶺南黃種雞2212羽，隨機分為兩組，每組1106羽，分別為對照組及添加低聚體原花青素0.04％。飼養(yǎng)于同一密閉雞舍內(nèi)，三層全階梯籠養(yǎng)，采用限料飼喂方式飼養(yǎng)，其它飼養(yǎng)管理條件完全相同。
蛋品質(zhì)測定(一般質(zhì)量指標)稱蛋重后用游標卡尺測量蛋的縱徑與最大橫徑。再將蛋打開，把內(nèi)容物放在玻璃平面上，蛋殼用清水沖洗內(nèi)面，然后用濾紙吸干，剔除蛋殼膜后稱蛋殼重；取出蛋殼鈍端、中部、銳部各一小塊，再用游標卡尺測量其厚度，求其平均厚度；然后用游標卡尺測量蛋黃邊緣與濃厚蛋白邊緣的中點，避開系帶，測定三個等距離中點的平均只值，即為濃蛋白高度(H)，再測蛋黃高度和蛋黃直徑后，收集全蛋備用。蛋形指數(shù)＝橫徑/縱徑×100％；蛋殼相對重＝蛋殼重/蛋重×100％；蛋殼厚度；蛋黃指數(shù)＝蛋黃高度/蛋黃直徑×100％；哈夫單位＝100×Log(H-1.7×W0.37+7.57)，H為濃蛋白高度(mm)，W為蛋重(g)。全蛋中膽固醇含量的測定參照王惠蕓等雞蛋中膽固醇快速測定方法。
表5低聚體原花青素對蛋品質(zhì)的影響
注*表示差異顯著(P＜0.05)，**表示差異極顯著(P＜0.01)。
表5表明，日糧中添加低聚體原花青素顯著影響蛋中膽固醇的含量。低聚體原花青素使26周齡、28周齡雞產(chǎn)的蛋中的膽固醇的含量分別降低了10.4％和11.2％(P＜0.01)，蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋黃指數(shù)和哈夫單位無顯著影響。
實施例10低聚體原花青素對雞球蟲病的治療效果試驗動物AA肉雞(雛雞)80只，隔離平養(yǎng)至11日齡稱重分組，每組8只，隨機分組，組內(nèi)體重相近，組間誤差±10克，在試驗前檢查糞便，確定未感染球蟲雞作為試驗用雞。待測樣品與飼料混合均勻，接種前24小時開始飼喂含藥飼料，連續(xù)飼喂7天，待測樣品分別為0.13％實施例3制得的低聚體原花青素、鹽霉素66ppm。
12日齡接種柔嫩艾美耳球蟲，除了不攻擊組外，其余每組每羽雞經(jīng)口感染10×104個孢子化卵囊。在感染后每天檢查精神、食欲和糞便變化，至第7天收集糞便，進行卵囊計數(shù)，第8天稱重捕殺，觀察盲腸病變情況。實驗數(shù)據(jù)見表6。
表6
從表中可見，增重效果鹽霉素組效果最好，從血便記分、病變值、卵囊值、抗球蟲指數(shù)(ACI)來看，低聚體原花青素組最好，達到了優(yōu)秀水平。
表7生產(chǎn)性能
從表中可見，低聚體原花青素組的日增重、料肉比較不攻擊組好，而較鹽霉素差。
實施例11低聚體原花青素對雞球蟲病的治療效果“嶺南黃”肉雞(雛雞)200只，隔離平養(yǎng)至11日齡稱重分組，每組12只，組內(nèi)體重相近，組間誤差±10克，在試驗前檢查糞便，確定未感染球蟲雞作為試驗用雞。待測樣品與飼料混合均勻，接種前24小時開始飼喂含藥飼料，連續(xù)飼喂7天。待測樣品分別為不同劑量實施例2制得的低聚體原花青素、鹽霉素66ppm，各組試驗劑量見表6。
12日齡接種柔嫩艾美耳球蟲，除了不攻擊組外，其余每組每羽雞經(jīng)口感染12×104個孢子化卵囊。在感染后每天檢查精神、食欲和糞便變化，至第7天收集糞便，進行卵囊計數(shù)，第8天稱重捕殺，觀察盲腸病變情況。實驗數(shù)據(jù)見表8。
表8藥效指標
從表中血便記分、病變值、卵囊值、抗球蟲指數(shù)(ACI)來看，低聚體原花青素組中劑量組最好，比鹽霉素的抗球蟲性能有明顯提高。
表9生產(chǎn)性能
從表中可見，低聚體原花青素在飼料中添加的劑量過低(0.02％)沒有顯示出抗球蟲的效果，而劑量過高(＞0.06％)對雞的生長產(chǎn)生負面影響。在合適的劑量下，日增重、料肉比和抗球蟲指數(shù)比鹽霉素優(yōu)秀。
權利要求
1.一種低聚體原花青素，其特征在于所述的低聚體原花青素為2～4聚體，并以縮合單寧為原料，以濃度為20～60％的雙氧水或氯酸鉀為氧化劑對所述的縮合單寧進行氧化降解，氧化反應條件為pH值調(diào)至6～7、溫度控制在30～50℃，氧化降解時間為15～120分鐘，得黃色至棕黃色半透明液體，再經(jīng)過分離純化制得。
2.一種如權利要求1所述的低聚體原花青素的制備方法，其特征在于所述的方法是以縮合單寧為原料，以濃度為20～60％的雙氧水或氯酸鉀為氧化劑，在pH6～7、溫度30～50℃下進行氧化反應15～120分鐘，得黃色至棕黃色半透明液體，經(jīng)常規(guī)物理或生化方法除去多余氧化劑，再經(jīng)干燥制得低聚體原花青素。
3.如權利要求2所述的低聚體原花青素的制備方法，其特征在于所述的縮合單寧屬黃烷醇的聚合物，分子骨架為C6·C3·C6，為2到5個黃烷醇單體的聚合體，分子量分布在500至3000MW之間。
4.如權利要求2所述的低聚體原花青素的制備方法，其特征在于所述的縮合單寧是縮合單寧提取物，所述縮合單寧提取物以新鮮含有高含量單寧的植物碎片為原料，以如下順序步驟制備以極性溶劑為提取劑，在60～100℃提取0.5～6小時，過濾去除殘渣，收集提取液濃縮至相對密度為1.201～1.452，得縮合單寧提取物，所述的極性溶劑為水、或乙醇、或甲醇、或乙酸乙酯。
5.如權利要求2所述的低聚體原花青素的制備方法，其特征在于所述的縮合單寧為富含單寧的植物栲膠。
6.如權利要求4或5所述的制備低聚體原花青素的方法，其特征在于所述的氧化劑為雙氧水，濃度為20～60％，所述雙氧水體積為縮合單寧提取物或植物栲膠的2～4倍。
7.如權利要求4所述的低聚體原花青素的制備方法，其特征在于所述的制備方法按如下步驟進行(1)提取取富含單寧的植物碎片加入4～6倍重量的水、在80～100℃溫度下加熱0.5～1小時，過濾去除殘渣，殘渣再用以上同樣的提取條件重復1～2次；收集濾液，濃縮至相對密度為1.205～1.332縮合單寧提取物；(2)氧化降解往步驟(1)所得縮合單寧提取物中加入2倍體積的27.3％至50％的雙氧水，調(diào)pH為6.7，在40℃降解30分鐘，得黃色至黃棕色半透明液體為降解產(chǎn)物；(3)分離純化將降解產(chǎn)物減壓濃縮使剩余雙氧水揮發(fā)干凈，干燥得低聚體原花青素。
8.一種如權利要求1所述的低聚體原花青素在食品抗氧化劑的應用，其特征在于應用時在食品中的用量為0.2～0.8％。
9.一種如權利要求1所述的低聚體原花青素在生產(chǎn)低膽固醇含量雞蛋的產(chǎn)蛋雞飼料添加劑中的應用。
10.一種如權利要求1所述的低聚體原花青素在制備治療動物球蟲病飼料添加劑中的應用。
11.如權利要求10所述的低聚體原花青素在制備治療動物球蟲病飼料添加劑中的應用，其特征在于所述的低聚體原花青素在全價料中的添加量為0.04％～0.06％，可預防動物球蟲病。
12.如權利要求10所述的低聚體原花青素在制備治療動物球蟲病飼料添加劑中的應用，其特征在于所述低聚體原花青素在全價料中的添加量為0.04％～0.5％。
13.如權利要求12所述的低聚體原花青素在制備治療動物球蟲病飼料添加劑中的應用，其特征在于所述的飼料添加劑還加入0.05％～0.1％抗壞血酸或維生素C。
14.如權利要求10～13之一所述的低聚體原花青素在制備預防治療動物球蟲病飼料添加劑中的應用，其特征在于所述動物為下列之一①雞、②鴨、③鵪鶉、④鴿子、⑤兔。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種低聚體原花青素和這種低聚體原花青素的生產(chǎn)工藝，以及這種低聚體原花青素在食品、保健品、飼料添加劑和獸藥中的應用。所述的低聚體原花青素為2～4聚體，并以縮合單寧為原料，以濃度為20～60％的雙氧水或氯酸鉀為氧化劑進行氧化降解，得黃色至棕黃色半透明液體，再經(jīng)過分離純化制得。本發(fā)明所述的低聚體原花青素具有較強的抗氧化功能和抗菌功能，作為抗氧化劑應用于食品中口感澀性消失，對消化道淀粉酶活性無不良影響；應用于飼料添加劑中可以有效地降低禽類動物對球蟲病的感染率和死亡率，并且在雞日糧中添加低聚體原花青素能顯著降低蛋中膽固醇的含量。
文檔編號C07D311/00GK1654463SQ20041001635
公開日2005年8月17日 申請日期2004年2月13日 優(yōu)先權日2004年2月13日
發(fā)明者王欣, 陳燕軍, 汪曼麗, 王暉 申請人:杭州利欣生物科技有限公司